Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Совершенствование спектрофотометрического и хроматографического методов анализа азотсодержащих лекарственных средств

На правах рукописи

{ща/-

Илларионова Елена Анатольевна

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО И ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО МЕТОДОВ АНАЛИЗА АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук

Москва - 2004

Работа выполнена в Иркутском государственном медицинском университете

Научный консультант:

Доктор химических наук, профессор Харитонов Юрий Яковлевич

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Берлянд Александр Семенович Доктор химических наук, профессор Ершов Юрий Алексеевич Доктор фармацевтических наук, профессор Саломатин Евгений Михайлович Ведущая организация:

Курский государственный медицинский университет

Защита состоится « » Л^Н-сЛЛг^- 2005 г. в час. на заседании диссертационного совета ' Д212.203.13 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, ГСП, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, ГСП, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

Автореферат разослан « НО » ^Шх^/иу 2004 г. Ученый секретарь

диссертационного совета Д 212.203.13 кандидат фармацевтических наук, доцент

\ Т.П.Лагуткина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Обеспечение населения высококачественными лекарственными средствами - одна из важнейших задач, стоящих перед здравоохранением и фармацевтической наукой.

Одной из главных проблем современной медицины является профилактика и лечение сердечно-сосудистых заболеваний, которые во всех развитых странах мира занимают первое место среди причин смертности лиц старшего и среднего возрастов. Ухудшение эпидемиологической ситуации в стране стало одной из причин роста бактериальных и вирусных инфекций. С каждым годом привлекает все большее внимание проблема туберкулеза. Так, за 1991 - 2003 годы заболеваемость туберкулезом в Российской Федерации увеличилась более чем в 2 раза. Выросла заболеваемость туберкулезом и среди детей. Сложное финансово-экономическое состояние многих групп населения вызывает различные нервно-психические расстройства. Данные заболевания часто являются причиной инвалидности. Для лечения названных заболеваний широкое применение находят азотсодержащие лекарственные средства, обладающие сердечно-сосудистым, антибактериальным, противовирусным, психотропным и другим действием. Эффективность и безопасность лечения данными препаратами во многом зависит от уровня их качества.

На основании критического анализа данных литературы и сравнительной оценки уровня требований и методик анализа, включенных в нормативные документы и фармакопеи на лекарственные средства данной группы, установлено, что уровень требований и методы анализа указанной группы препаратов недостаточно совершенны и не позволяют объективно оценить их качество. Так, для контроля чистоты ряда препаратов используются химические методы, которые не всегда объективны, так как на результаты реакции могут влиять окислители, восстановители либо вещества, обладающие кислотно-основными свойствами В некоторых случаях для определения специфических примесей нормативная документация требует применения метода хроматографии на бумаге, который характеризуется длительностью и недостаточно высокой чувствительностью. Перспективны для контроля чистоты лекарственных средств методы высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и тонкослойной хроматографии (ТСХ), которые характеризуются высокой чувствительностью и объективностью. Вопросы хроматографического разделения лекарственных веществ и возможных примесей являются одной из основных и до сих пор еще недостаточно решенных проблем жидкостной и тонкослойной хроматографии. Поэтому исследования в этом направлении представляются актуальными.

Количественное определение лекарственных веществ исследуемой группы препаратов проводится титриметрическими методами: нитритометрически, йодометрически, ледяной

уксусной кислоты, муравьиной кислаты МИЬЛЙ^мЙ^ {ангидрида,

I ¿г

алкалиметрически в среде метанола и бензола. Указанные методы являются длительными, трудоемкими. Анализ лекарственных форм ряда препаратов исследуемой группы проводится спектрофотометрическим методом, отличающимся доступностью, сравнительной простотой методик анализа, экспрессностью, высокой чувствительностью, воспроизводимостью. Более широкому использованию данного метода для анализа субстанций препятствует отсутствие доступных образцов сравнения.

В аналитической практике для спектрофотометрического определения веществ находят применение внешние образцы сравнения, в качестве которых используются соединения органической и неорганической природы, отвечающие требованиям, предъявляемым к образцам сравнения. Применение внешних образцов сравнения в практике фармацевтического анализа, где объектами исследования являются жизненно важные соединения, требует детального изучения и обоснования. В связи с вышеотмеченным разработка научно-методологических основ замены образцов сравнения лекарственных веществ на внешние образцы сравнения и проведение систематических исследований по проблемам применения внешних образцов сравнения для оптимизации спектрофотометрического определения азотсодержащих лекарственных средств представляет собой актуальную задачу.

Цель настоящего исследования - совершенствование метода хроматографического контроля чистоты и разработка нового варианта метода спектрофотометрии для анализа азотсодержащих лекарственных средств, отличающегося применением внешних образцов сравнения.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

изучить особенности хроматографического поведения лекарственных веществ исследуемой группы и их специфических примесей в системах растворителей с различными значениями рН, определить оптимальные условия разделения для разработки методик контроля чистоты конкретных препаратов;

исследовать спектральные характеристики внешних образцов сравнения; разработать теоретическое обоснование и осуществить выбор оптимальных образцов сравнения для спектрофотометрического анализа лекарственных средств, обеспечивающих максимальные правильность, воспроизводимость и достоверность получаемых результатов;

провести изучение спектральных характеристик лекарственных средств исследуемой группы препаратов для оптимизации условий их спектрофотометрического определения с применением внешних образцов сравнения;

разработать методики количественного спектрофотометрического анализа исследуемых лекарственных средств с использованием внешнего образца сравнения, обеспечивающие правильность и воспроизводимость получаемых результатов;.

апробировать и внедрить разработанные способы определения лекарственных средств исследуемой группы препаратов на химико-фармацевтических предприятиях и в Центрах контроля качества лекарственных средств.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармацевтической и токсикологической химии ИГМУ по госбюджетной теме "Контроль качества лекарственных средств с использованием современных методов анализа" (№ Госрегистрации 01910008620), включенной в координационные планы Научного Совета по фармации.

Научная новизна

1 .Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден критерий выбора оптимальной системы растворителей для определения чистоты ряда азотсодержащих лекарственных средств на основе метода «латинского квадрата». 2.Обоснована схема проверки чистоты азотсодержащих лекарственных средств с применением тонкослойной хроматографии на основе установления зависимости хроматографического поведения исследуемых веществ и возможных примесей от их кислотно-основных свойств и состава подвижной фазы.

3. Предложен, теоретически обоснован и экспериментально подтвержден новый вариант одноволнового спектрофотометрического анализа лекарственных средств, основанный на применении внешнего образца сравнения.

4. Впервые разработан и предложен научно обоснованный методологический подход выбора оптимальных внешних образцов сравнения для количественного определения лекарственных средств в одноволновой спектрофотометрии, обеспечивающий максимальную правильность и воспроизводимость получаемых результатов.

5. Разработаны унифицированные методики спектрофотометрического определения ряда азотсодержащих лекарственных средств с применением внешних образцов сравнения, которые апробированы и внедрены в практику работы соответствующих служб.

6. Предложена, теоретически обоснована и применена на практике методика количественного определения многокомпонентной лекарственной формы - линимента синтомицина - с использованием производной спектрофотометрии.

Научная новизна исследований подтверждена шестью Патентами РФ на изобретения.

Практическая значимость работы. Разработаны методики контроля чистоты пентамина, фтивазида, метазида, ксантинола никотината, аденозина, фосфадена с использованием ТСХ. Разработаны 27 методик количественного определения субстанций исследуемой группы препаратов и 31 методика анализа лекарственных форм с использованием нового варианта спектрофотометрического метода. Разработанные методики апробированы и

внедрены в ОТК ОАО "Усолье-Сибирский химфармкомбинат", "Дальхимфарм" (г. Хабаровск), ХФК г. Белгорода, ХФК г Львова, Центрах контроля качества лекарственных средств городов Иркутска и Хабаровска, Инспекции по контролю качества лекарственных средств республики Бурятия (г. Улан-Удэ). Получено 73 акта о внедрении и использовании результатов данной работы. Утверждены 4 ФСП ОАО "Усолье-Сибирский химфармкомбинат" и "Дальхимфарм" (г. Хабаровск) на субстанции фтивазида, метазида, пентамина и раствор для инъекций пентамина. Проект ФСП на субстанцию ксантинола никотината находится на экспертизе в Институте стандартизации.

Значение методического аспекта работы заключается в том, что результаты данного исследования внедрены в лабораторный практикум ИГМУ по дисциплине "Фармацевтическая химия", включены в учебные пособия "Хроматография. Использование хроматографии в тонком слое сорбента в анализе лекарственных средств" (утверждено Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию ВУЗов России 22.03 2002 для студентов, обучающихся специальности 040500 - Фармация) и "Фотометрия. Теоретические основы метода. Спектрофотометрия. Фотоэлектроколориметрия" (утверждено Центральным Координационным методическим советом ИГМУ 16.12.2003).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на: Всесоюзной конференции "Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации" (Ленинград, 1989 г.), Межреспубликанской конференции "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств" (Москва, 1991 г.), научной конференции "Поиск биологически активных веществ и проблемы лекарственного обеспечения" (Уфа, 1991 г.), научно-практической конференции "Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики" (Курск, 1991 г.), Всесоюзной конференции "Фармацевтический анализ -науке и практике " (Москва, 1992 г), 47, 56, 58 и 59 региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1992, 2001,2003 и 2004 г.г.), Всероссийской конференции "Поиск, создание и изучение новых лекарственных средств растительного и синтетического происхождения" (Бийск, 1993 г.), Всероссийской конференции "Решение актуальных задач фармации на современном этапе" (Москва, 1994 г.), юбилейной научной конференции фармацевтического факультета, посвященной 75-летию Иркутского государственного медицинского университета (Иркутск, 1996 г.), Ш-УИ Всероссийских школах-семинарах «Люминесценция и сопутствующие явления» (Иркутск, 1997-2001 г.г.), Международной конференции "Фармация в XXI веке: инновации и традиции" (Санкт-Петербург, 1999 г.), Международной конференции молодых ученых и специалистов «Оптика-99» (Санкт-Петербург, 1999 г.), II Межрегиональной фармацевтической конференции «Сибирская фармация на рубеже XXI века» (Новосибирск, 2000 г.), Международной научной конференции «Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств

и организационных форм фармацевтической деятельности» (Томск, 2000 г.), региональной научно-практической конференции «Дальневосточная фармация на пороге третьего тысячелетия» (Хабаровск, 2000 г.), региональной конференции «Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики» (Курск, 2001 г.), региональной научной конференции "Проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Пермь, 2002 г.), VIII Международной школе-семинаре "Люминесценция и лазерная физика" (Иркутск, 2003 г.), юбилейной научно-практической конференции "Фармацевтической службе Республики Бурятия - 80 лет" (Улан-Удэ, 2004 г.).

Обоснованность научных положений и выводов. Научные положения и выводы, приведенные в диссертационной работе, являются результатом исследований, выполненных с использованием современного научно-исследовательского оборудования, применением статистических методов математической обработки результатов и компьютерной техники, что позволяет считать их достоверными. Выводы диссертации основаны на полученных экспериментальных фактах, многократно апробированы и внедрены в практику работы соответствующих служб.

Личный вклад автора в работы, выполненные в соавторстве и включенные в диссертацию, заключается в теоретическом обосновании проблемы, разработке методологической основы спектрофотометрического анализа лекарственных средств с применением внешних образцов сравнения, основополагающим участием в разработке методик количественного определения лекарственных средств на основе оригинального варианта спектрофотометрического анализа и контроля чистоты азотсодержащих лекарственных веществ с применением методов тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 58 работ, в том числе 15 статей в центральных журналах, 6 Патентов РФ на изобретения , 17 статей в сборниках научных трудов, 18 публикаций в материалах Международных и Всероссийских конференций, 2 учебных пособия.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Критерии выбора оптимальной системы растворителей для подвижных фаз в ТСХ с использованием метода "латинского квадрата " и на основе установления зависимости хроматографического поведения лекарственных веществ и возможных примесей от их кислотно-основных свойств.

2. Оптимальные схемы контроля чистоты ряда азотсодержащих лекарственных средств методом ТСХ.

3. Новый вариант одноволнового спектрофотометрического определения лекарственных средств - метод внешнего стандарта.

4. Методология выбора оптимального внешнего образца сравнения для одноволнового спектрофотометрического анализа лекарственных средств.

5. Унифицированные методики количественного спектрофотометрического анализа однокомпонентных азотсодержащих лекарственных средств.

В диссертационной работе развито новое научное направление -применение внешних образцов сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств в сочетании с хроматографическими исследованиями их чистоты.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из двух томов Первый том (379 стр.) содержит введение, обзор литературы, экспериментальную часть, состоящую из 7 глав, выводы, список цитируемой литературы. Второй том состоит из Приложения 1, содержащего таблицы экспериментальных данных, и Приложения 2, где представлены материалы по внедрению.

Работа проиллюстрирована 155 таблицами, 83 рисунками Библиографический указатель включает 465 источников, из них 59 -иностранных авторов.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и задачи исследования, охарактеризованы научная новизна и практическая значимость работы.

Первая глава представляет собой обзор отечественной и зарубежной литературы, нормативных документов, касающийся использования хроматографических, химических и физико-химических методов для контроля чистоты и количественного определения лекарственных средств производных пурина, индола, пиридина, амида сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола в субстанциях и лекарственных формах. Проанализированы возможности применения различных образцов сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств, показана перспективность использования внешних образцов сравнения.

Во второй главе описаны объекты и методы исследований, используемые в диссертационной работе.

В третьей главе приведены результаты поиска оптимальных условий хроматографирования пентамина, аденозина, фосфадена с использованием метода «латинского квадрата» и ксантинола никотината, метазида, фтивазида на основе установления зависимости хроматографического поведения лекарственных веществ и возможных примесей от кислотно-основных свойств и состава подвижной фазы, изложены методики анализа.

Четвертая глава посвящена систематизации исследований по проблемам применения внешних образцов сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств. С использованием методов дифференциального исчисления и экспериментальных данных разработана методология выбора внешних образцов сравнения для одноволнового спектрофотометрического определения лекарственных средств. Приведены результаты исследования оптических характеристик возможных внешних образцов сравнения: хромата калия, дихромата калия, нитрита натрия, хлорида никеля, феррицианида калия, дигидрофосфата калия, фенолфталеина, бензойной кислоты, аденина и гуанина. С использованием метода наименьших квадратов рассчитаны уравнения градуировочных графиков и уравнения регрессии, описывающие

погрешность измерения оптической плотности внешних образцов сравнения в оптимальной области их поглощения и позволяющие прогнозировать ошибку количественного определения лекарственных средств.

В пятой главе обоснованы условия спектрофотометрического определения ксантинола никотината, теофиллина, эуфиллина пентоксифиллина, ацикловира, аденозина, рибоксина, фосфадена, пиразидола, выбраны оптимальные внешние образцы сравнения и разработаны методики количественного определения этих препаратов в субстанциях и в лекарственных формах, а также методики определения однородности дозирования и теста «растворение» их таблетированных лекарственных форм.

Шестая глава посвящена разработке методик количественного определения производных пиридина спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения. Оптимизированы условия спектрофотометрического определения изониазида, метазида, фтивазида, никотиновой кислоты и разработаны унифицированные методики их анализа в субстанциях и лекарственных формах. Показаны преимущества разработанных методик по сравнению с методиками НД и ВЭЖХ.

Седьмая глава посвящена разработке методик спектрофотометрического определения стрептоцида, стрептоцида растворимого, сульгина, сульфадимезина, норсульфазола, фталазола с применением внешних образцов сравнения в субстанциях и лекарственных формах. Проведена сравнительная оценка разработанных методик и методик НД и показаны преимущества разработанных методик по воспроизводимости, экспрессности, доступности, экологичности.

В восьмой главе проведен анализ известных методик количественного определения антибиотиков группы хлорамфеникола, обоснован выбор спектрофотометрического метода для анализа левомицетина и синтомицина. Разработана методика спектрофотометрического определения левомицетина и синтомицина с использованием хромата калия в качестве внешнего образца сравнения в субстанциях и лекарственных формах, а также методика количественного анализа линимента синтомицина методом производной спектрофотометрии.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовали следующие методы анализа и исследования: спектроскопические (УВИ, ИК - спектроскопия), электрохимические (рН-метрия), физические (определение температуры плавления), препаративные, элементный анализ, хроматографические (юнкослойная и высокоэффективная жидкостная хроматография), математический метод планирования эксперимента «План латинского квадрата», метод наименьших

квадратов, статистическую обработку результатов по методам Стьюдента и Фишера.

Электронные спектры поглощения исследуемых веществ регистрировали на спектрофотометрах СФ-26, СФ-46, СФ-56, «Бресогс) М-40». Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометрах СФ-26, СФ-46, СФ-56 в кюветах с длиной рабочего слоя 10 мм

ИК-спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре ИКС-29 с использованием методики прессования с бромидом калия (4000400 см"*).

рН растворов создавали растворами 0,1М гидроксида натрия и 0,1М хлороводородной кислоты в пределах рН от 1,1 до 13,0. Значение рН контролировали с помощью иономера ЭВ-74 со стеклянным индикаторным электродом. Электродом сравнения служил стандартный хлорсеребряный электрод.

Растворимость таблеток определяли в приборе «вращающаяся корзинка».

Температуру плавления контролировали в приборе для определения температуры плавления с диапазоном измерений в пределах от 20 до 360°С с электрическим обогревом.

Хроматографические (ТСХ) исследования проводили с использованием готовых пластинок «Силуфол УФ-254», «Сорбфил УФ-254» (ТУ 26-11-17-89 ), Мрмсорб УФ-254» (ТУ 6-09-37-918-88).

Детектирование веществ на хроматограммах проводили с использованием УФ-осветителя (длина волны 254 нм) и в парах йода.

Исследования методом ВЭЖХ проводили на микроколоночном высокоэффективном жидкостном хроматографе «Милихром - А02» с ультрафиолетовым детектором, снабженным стальной колонкой размером 2x75 мм, заполненной сорбентом БПазогЬ С18 с размерами частиц 5 мкм. Эффективность колонки - 3500 теоретических тарелок. Температура колонки 40°С.

Статистическую обработку экспериментальных данных и обработку уравнений регрессии методом наименьших квадратов проводили на компьютере. В обработке экспериментальных данных использовали коэффициенты Стьюдента и Фишера.

Исследуемые образцы сравнения, а также используемые органические растворители, неорганические кислоты и щелочи отвечали требованиям ГОСТов и при необходимости подвергались дополнительной очистке по известным методикам.

Лекарственные вещества: теофиллин, эуфиллин, ксантинола никотинат, пентоксифиллин, ацикловир, аденозин, фосфаден, рибоксин, никотиновая кислота, пиразидол, пентамин, изониазид, метазид, фтивазид, синтомицин, левомицетин, стрептоцид, стрептоцид растворимый, норсульфазол, сульгин, сульфадимезин, фталазол, а также лекарственные формы вышеперечисленных соединений отвечали требованиям НД.

2. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Одной из важнейших характеристик лекарственных препаратов является их чистота. Большое значение для повышения качества лекарственных средств имеет контроль специфических примесей, которыми, как правило, являются исходные продукты и полупродукты синтеза. Из анализируемой группы лекарственных препаратов пентамин, аденозин, фосфаден, ксантинола никотинат, метазид и фтивазид имеют недостаточно совершенные фармакопейные методы определения чистоты.

Пентамин в качестве специфических примесей может содержать диэтилентриамин (исходный продукт синтеза) и пентаметилдиэтилентриамин (промежуточный продукт синтеза). Диэтилентриамин и

пентаметилдиэтилентриамин являются токсичными соединениями, поэтому этих примесей в пентамине не должно быть. В действующей НД не предусмотрен контроль специфических примесей в данном препарате.

Аденозин и фосфаден в качестве возможных примесей могут содержать исходные или промежуточные продукты синтеза, производные пурина, близкие к действующим веществам по химической структуре и физико-химическим свойствам, такие как аденин и аденозин в фосфадене и инозин и ацетилинозин в аденозине. По НД определение указанных специфических примесей проводят методом хроматографии на бумаге, существенным недостатком которого является длительность.

Ксантинола никотинат в качестве возможных примесей может содержать теофиллин (исходный продукт синтеза) и 7-(2-окси-3 хлорпропил)-теофиллин (промежуточный продукт синтеза). Регламентируемый в НД хроматографический способ контроля чистоты ксантинола никотината позволяет определять только примесь теофиллина.

Исходя из способа получения метазида и фтивазида, установлено, что в качестве общей специфической примеси они могут содержать гидразид изоникотиновой кислоты (ГИНК); фтивазид дополнительно может содержать примесь ванилина. Наличие этих примесей по НД контролируется химическими методами. Предлагаемый НД метод является мало объективным, так как на результаты реакции могут влиять окислители, восстановители и вещества, обладающие кислотно-основными свойствами.

В связи с вышеотмеченным в диссертационной работе проведены исследования по выбору селективного, объективного и экспрессного метода для разработки методик обнаружения и разделения всех возможных примесей исследуемых препаратов.

Исследуемые лекарственные вещества и возможные примеси характеризуются наличием в молекулах различных функциональных групп и поэтому отличаются по физико-химическим свойствам. Оптимальным методом их разделения можно считать метод хроматографии в тонком слое сорбента, который характеризуется экспрессностью, селективностью и высокой чувствительностью.

На основании изучения особенностей строения лекарственных веществ и возможных примесей было установлено, что оптимальное разделение исследуемых веществ может быть достигнуто при использовании в качестве сорбента силикагеля. За счет гидроксилированной поверхности силикагель является кислым сорбентом и позволяет разделять вещества, различающиеся кислотно-основными свойствами.

Обнаружение исследуемых объектов на хроматограммах проводили в УФ свете и в парах йода. Чувствительность обнаружения веществ составила 0,5 мкг.

Выбор оптимальной системы растворителей для определения чистоты пентамина, аденозина и фосфадена проводили с помощью математического планирования эксперимента по методу «латинского квадрата». План «латинского квадрата» включал по одному варианту хроматографирования в каждом столбце и в каждой строке. Путем математического планирования эксперимента методом «латинского квадрата» изучили влияние двух факторов на хроматографическое поведение указанных веществ и возможных примесей. В качестве фактора А использовали различные органические растворители (ацетон, метанол, этанол, бутанол и изопропиловый спирт (ИПС)), а в качестве фактора В - ледяную уксусную кислоту (ЛУК), 25% раствор аммиака (в случае анализа пентамина) и буферные растворы: аммиачный, фосфатный, боратный, фталатный и ацетатный (в случае анализа аденозина и фосфадена), которые влияют на величину рН системы растворителей. Выбор данных факторов основывался на физико-химических свойствах пентамина, аденозина, фосфадена и их примесей. Схема планирования опытов по методу «латинского квадрата» на примере пентамина представлена в табл. 1.

Для разделения веществ важное значение имеет АИ^ между зонами. Поэтому в дальнейшем план «латинского квадрата» упростили, заменив значения пятен на ДИ^. Эти данные были использованы для установления влияния определенных выше факторов А и В на хроматографическое поведение пентамина, аденозина, фосфадена и их примесей методом дисперсионного анализа по известной методике. По результатам дисперсионного анализа установили, что оба фактора являются значимыми.

Меньшее влияние на хроматографическое разделение пентамина и его примесей оказывает органический растворитель, т.е. фактор А Более значимым для хроматографического разделения пентамина и его примесей является фактор В, влияющий на рН системы растворителей (СР). В связи с этим в дальнейших экспериментах варьировали этот фактор. Анализ значений между зонами показал, что наибольшее значение имеет для системы растворителей с ИПС, причем вторым компонентом хроматографической системы является 25% раствор аммиака. Была поставлена серия экспериментов с системами растворителей состава ИПС -25% раствор аммиака, в которых варьировалось количество аммиака. Результаты хроматографирования пентамина представлены на рис. 1. Из

Таблица 1

План «латинского квадрата» для пентамина и его примесей

, В

\ ЛУК ЛУК 1чН3 (25%) ЫН (25%) ЛУК1ЧН3

А\ (25%) (1 1)

\ 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3

5 м ■

1 6 ■

Н 7 ■

< 8 ■

9 ■

5 ■

ё б ■

1 7 ■

* 8 ■

9 ■

5 ■

§ 6 ? 7 ■

■

Г) 8 ■

9

5 ■

2 6 ■

Е о 10 О ■ »

■

9

5 ■

и 6 С 7 * 8 ■

■

9 п ■

рисунка видно, что хроматографическое разделение исследуемых веществ наблюдается во всех системах растворителей с ИПС. Однако в системах 3, 5 и 6 зоны веществ имеют вытянутую форму. Наибольшее значение ЛЯ* между зонами пентамина, диэтилентриамина и пентаметилдиэтилентриамина наблюдается в системе 1, которая является оптимальной для контроля чистоты пентамина.

По разработанной методике было проанализировано 10 серий пентамина. Ряд промышленных серий пентамина имел

дополнительные пятна, соответствующие образцам примесей диэтилентриамина и пентаметилдиэтилентриамина. Зоны, соответствующие специфическим примесям в образце пентамина, элюировали этиловым спиртом. Образцы примесей, полученные с хроматограммы, идентифицировали с помощью ИК-спектроскопии и элементного анализа.

Сравнительная оценка результатов элементного анализа и ИК -спектров образцов примесей, полученных с хроматограммы промышленного образца пентамина, и образцов свидетелей примесей показала, что они идентичны. Это позволяет сделать заключение о том, что примеси диэтилентриамина и пентаметилдиэтилентриамина, действительно, могут присутствовать в пентамине. В связи с тем, что рассмотренные

Зависимость значения Яг пентамина и его примесей от соотношения компонентов системы растворителей ИПС - 25% раствор аммиака

1-пентамин; 2-диэталентриамин, З-пентаметалдиэтилентриамин

Рис 1

Состав системы растворителей 1 ИПС-25% раствор аммиака(5 2,5), 2 ИПС-25% раствор аммиака (5 3,0), 3 ИПС-25% раствор аммиака {5 3 5) 4 ИПС-25% раствор аммиака (5 4,0) 5 ИПС-25% расшор аммиака (5 6,0) 6 ИПС-25%раствор аммиака (5 7,0)

примеси являются недопустимыми, предприятие-изготовитель усовершенствовало систему очистки данного препарата. Во всех образцах пентамина после дополнительной производственной очистки примеси обнаружены не были.

Предлагаемая методика контроля специфических примесей в пентамине включена в фармакопейные статьи предприятий ОАО «Усолье -Сибирский химфармкомбинат» и «Дальхимфарм» (г. Хабаровск) на субстанцию пентамина и 5% раствор пентамина для инъекций.

Методом «латинского квадрата» удалось установить, что разделяющая способность хроматографических систем для контроля чистоты аденозина и фосфадена увеличивается с возрастанием полярности растворителей. Создание узкого интервала значений рН с помощью буферных растворов позволило определить состав оптимальных подвижных фаз. Учитывая факторы А и В, влияющие на хроматографическую подвижность исследуемых веществ, а также различия в их кислотно-основных свойствах и гидрофильности, при дальнейших исследованиях хроматографического поведения аденозина и фосфадена в качестве основного компонента подвижной фазы была выбрана вода очищенная. На основании экспериментальных данных было определено, что наибольшей подвижностью в воде обладает фосфаден, а наименьшей - аденин, не имеющий в своей структуре гидроксильных групп. Аденозин мало отличается по хроматографической подвижности в воде от фосфадена, для их

разделения использовали различия в химических свойствах. В состав подвижных фаз вводили ЛУК либо 25% раствор аммиака. В результате проведенных экспериментов подобран состав подвижной фазы: вода - 25% раствор аммиака (100:0,5), позволяющей разделить фосфаден, аденозин и аденин, и две подвижные фазы: вода - ЛУК (100:1,05) и вода - 25% раствор аммиака - ЛУК (100: 0,25:0,5), позволяющие разделить аденозин, инозин и ацетилинозин. Разработанные методики, использующие экологически чистые и доступные растворители, защищены Патентом РФ на изобретение и внедрены в практику работы ОТК Усолье-Сибирского химико-фармацевтического комбината.

Для выявления состава оптимальной подвижной фазы для хроматографического контроля чистоты ксантинола никотината были изучены системы растворителей, состоящие из органического растворителя, ЛУК и (либо) 25% раствора аммиака, создающие различные значения рН среды. На основании анализа полученных результатов в качестве органической фазы выбрали ацетон, как растворитель, обладающий средней полярностью и хорошо смешивающийся с водными растворами (рис. 2).

Зависимость значения ксантинола (1), никотиновой кислоты (2), теофиллина (3),

7- (2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина (4) от состава систем растворителей

№СР

Рис.2

Состав систем растворителей I - ацетон, 2 - ацетон - ЛУК (9 0,5), 3 - ацетон - ЛУК (9 1), 4 - ацетон - ЛУК (9.2), 5 ■ ацетон-25 % раствор аммиака- ЛУК (9 И), 6 - ацетон-25 % раствор аммиака - ЛУК (9:0,5 1), 7 - ацетон-25 % раствор аммиака - ЛУК (9 0,5 0,5), 8 - ацетон - 25 % раствор аммиака (9'2), 9 - ацетон -25 % раствор аммиака (9-1), 10 - ацетон - 25 % раствор аммиака (9:0,5)

Ксантинол, никотиновая кислота, теофиллин и 7-(2-окси-3 хлорпропил)-теофиллин в ацетоне имеют соответственно 0; 0; 0,61 и 0,72. Используя различия ксантинола и никотиновой кислоты в кислотно-основных свойствах, для их разделения в состав системы растворителей вводили ЛУК, что привело к увеличению подвижности всех исследуемых веществ (рис. 2, СР №2) и получению зон разделяемых веществ вытянутой формы (рис. 2, СР №3 - 4). Добавление в систему растворителей с ЛУК 25% раствора аммиака не позволило устранить эллиптичность зон ксантинола и никотиновой кислоты (рис. 2, СР №5 - 7). Данная проблема была решена в

хроматографических системах основного характера (рис 2, СР №8 - 10). В результате проведенных экспериментов получили оптимальную подвижную фазу состава: ацетон - 25% раствор аммиака (9:0,5).

По данной методике были проанализированы 10 производственных серий ксантинола никотината. В некоторых сериях ксантинола никотината кроме примеси теофиллина было обнаружено наличие примеси 7-(2-окси-3-хлорпропил) - теофиллина; содержание примесей по совокупности величины и интенсивности окраски пятен превышало допустимое (0,5%) в препарате. Пятна примесей элюировали с хроматограммы этиловым спиртом и идентифицировали методами элементного анализа и РЖ- спектроскопии. Сравнительная оценка результатов элементного анализа и ИК-спектров образцов примесей, полученных с хроматограммы промышленного образца ксантинола никотината и образцов свидетелей примесей, показала, что они идентичны. Это говорит о том, что в ксантиноле никотинате кроме примеси теофиллина может присутствовать примесь 7-(2-окси-3-хлорпропил)-теофиллина, наличие которой также необходимо контролировать.

Разработанная методика хроматографического контроля чистоты ксантинола никотината включена в Фармакопейную статью предприятия ОАО «Усолье - Сибирский химфармкомбинат» на препарат «Ксантинола никотинат» и защищена Патентом РФ на изобретение.

Учитывая различия в физико-химических свойствах фтивазида, метазида и возможных примесей (ГИНК и ванилина), в качестве основных компонентов подвижной фазы для хроматографического контроля чистоты данных препаратов были выбраны растворители, существенно различающиеся по полярности: хлороформ и спирт 95%. Результаты хроматографирования метазида и фтивазида представлены на рис. 3. Как следует из полученных экспериментальных данных, наибольшей подвижностью в хлороформе обладает ванилин, наименее подвижны фтивазид, метазид и ГИНК. Исследования подвижности данных соединений в спирте 95% показали, что для всех веществ она увеличивается по сравнению с подвижностью в хлороформе (рис. 3, СР №2). Дальнейшее хроматографирование проводилось в двухкомпонентных системах растворителей, состоящих из хлороформа (основного растворителя) и спирта 95%. Путем варьирования количества спирта в подвижной фазе была подобрана хроматографическая система (рис. 3, СР №4), позволяющая разделить фтивазид, ванилин и ГИНК. Однако зона фтивазида в данном случае не имела правильной формы. Для получения правильно очерченной зоны фтивазида в систему растворителей добавляли 25% раствор аммиака или ЛУК. Добавление в систему растворителей 25% раствора аммиака привело к получению четко очерченной зоны фтивазида, но зоны всех других веществ сблизились и перестали делиться (рис. 3, СР №6, 7). Замена 25% раствора аммиака на ЛУК позволила достичь разделения фтивазида, ванилина, ГИНК и метазида (рис. 3, СР №8 -10). Однако подвижность

Зависимость Rf фтивазида, метазида, ГИНК, ванилина от состава подвижной фазы

№ СР

—•— Фтивазид - - Ванилин —•— 1 ИНК ■ - * • ■ Метазид Рис. 3

Состав систем растворителей:

1 - хлороформ, 2 - спирт 95%, 3 - хлороформ-спирт 95% (9 0,5), 4 - хлороформ-спирт 95% (9 I), 5 -хлорофорч-спирт 95% (9-2), 6 - Хтороформ-спирт 95%-25% раствор аммиака (9 1 '0,25), 7 - хлороформ-спирт 95%-25% раствор аммиака (9-1 0,5), 8 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК (9 1 0,25), 9 хлорофорч-спирт 95% ЛУК (9 1-0,5), 10 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК (9 11), 11 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК 25% раствор аммиака (9 1 1 0,5), 12 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК-25% раствор аммиака (9 1 0,5 1), 13 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК-25% раствор аммиака (9 1 0,25 1), 14 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК (9 2:0,25), 15 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК (9 2 1), 16 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК (9 3 1), 17 - хлороформ-спирт 95%-ЛУК (9 4-1,5)

ванилина резко увеличилась и его зона приблизилась к линии фронта. Для снижения подвижности ванилина в систему растворителей с ЛУК добавляли четвертый компонент - 25% раствор аммиака (рис. 3, СР №11 - 13). Путем варьирования количества ЛУК и 25% раствора аммиака подобрали систему растворителей состава: хлороформ- спирт 95% - ЛУК - 25% раствор аммиака (9:1:1:0,5), оптимальную для контроля чистоты фтивазида (рис. 3, СР №11).

Результаты хроматографирования метазида и ГИНК показали, что в системах с ЛУК испытуемые вещества разделяются (рис. 3, СР №8 - 10), однако целесообразно увеличить Rf для данных соединений, особенно для метазида. Это было достигнуто путем увеличения в системе растворителей количества спирта 95% (рис. 3, СР №15 - 17). В результате проведенных экспериментов оказалось, что хроматографическая система хлороформ-спирт

95%-ЛУК (9:4:1,5) является оптимальной для контроля чистоты метазида (рис. 3, СР №17).

Методики хроматографического контроля чистоты фтивазида и метазида включены в ФСП ОАО "Усолье-Сибирский химфармкомбинат" на субстанцию метазида и таблетки фтивазида по 0,5 г и защищены Патентом РФ на изобретение.

Для проверки пригодности хроматографических систем, разработанных для исследуемой группы препаратов, была проведена апробация выбранных условий хроматографического анализа на модельных смесях, состоящих из одинаковых количеств препаратов и возможных примесей с учетом чувствительности их обнаружения. Результаты хроматографирования модельных смесей препаратов с добавками примесей показали, что в разработанных условиях происходит четкое разделение зон лекарственных веществ и возможных примесей.

3. ВНЕШНИЕ ОБРАЗЦЫ СРАВНЕНИЯ В СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Как известно, спектрофотометрический метод основан на измерении оптической плотности растворов исследуемых веществ, на точность определения которой влияют следующие факторы.

1. Колебания оптической плотности вещества в пределах одного опыта. Данная величина характеризуется сходимостью результатов измерений и составляет десятые доли процента.

2. Колебания оптической плотности в разных опытах на одном и том же приборе. Данная величина характеризуется воспроизводимостью результатов на одном приборе и может достигать нескольких процентов.

3. Колебания оптической плотности на разных приборах. Данная величина характеризуется межприборной воспроизводимостью результатов измерений и может достигать 10% и более.

4. Колебания оптической плотности, связанные с изменением показателей поглощения данного вещества по отношению друг к другу в разных измерениях. Эти колебания могут быть вызваны, например, изменением температуры окружающей среды (раствора вещества). В спектрофотометрии эта величина незначительна и ею пренебрегают.

5. Колебания оптической плотности, связанные с теми же изменениями в разных опытах. Причиной этого может быть изменение температуры исследуемого раствора вещества и невоспроизводимость в экспериментальной установке длины волны. Для очень острых полос поглощения эта величина может быть заметной.

6. Кажущиеся отклонения от закона Бугера - Ламберта - Бера.

Факторы 1-3 не связаны с природой вещества, факторы 4-6 индивидуальны и зависят от природы конкретного соединения.

На практике используют преимущественно следующие методы спектрофотометрического анализа лекарственных веществ: метод показателя поглощения, разновидностью которого является метод градуировочного графика, и метод сравнения, или стандарта.

В методе показателя поглощения градуировка и собственно определение вещества проводятся в разных опытах (в фармацевтическом анализе используют удельный показатель погашения (экстинкции), называя его удельным показателем поглощения, хотя данные коэффициенты отличаются в 2,3 раза). В методе показателя поглощения относительную погрешность спектрофотометрического определения можно найти, используя выражение для дисперсии определения концентрации растворов исследуемого вещества:

.'IV (А\г

7 2 _ 1 С2 , 4г р2

где е и Ах - показатель поглощения и оптическая плотность исследуемого вещества соответственно, и дисперсии определения показателя

поглощения и оптической плотности исследуемого вещества соответственно. Дисперсия определения оптической плотности - это фактически дисперсия анализа, которая является случайной величиной и может быть уменьшена увеличением числа повторных измерений и разбавлений. Относительная дисперсия анализа зависит от конкретной методики анализа, которая обычно вызывает погрешность не более 1 %, и класса прибора, погрешность которого составляет десятые доли процента. Дисперсия определения показателя поглощения, или дисперсия градуировки, характеризует постоянную погрешность анализа и не зависит от условий его проведения. Относительная дисперсия определения показателя поглощения на одном и том же приборе (в разные дни) достигает нескольких процентов, а на разных приборах может достигать 18%. Поэтому оценка и нивелирование погрешности градуировки является одной из самых важных проблем спектрофотометрического анализа. Именно наличие значительной и неконтролируемой погрешности градуировки в методе показателя поглощения затрудняет его использование для контроля качества лекарственных средств. Аналогичные погрешности возникают и при применении метода градуировочного графика для количественного определения лекарственных средств.

Метод сравнения, или стандарта, позволяет полностью исключить погрешность градуировки путем совмещения в одном опыте анализа и градуировки. Дисперсия анализа в методе сравнения определяется из выражения:

'С.

А ос У

А,

\Аос;

'а С л2

Лх

А1

(2)

где Сдс и Аас - концентрация и оптическая плотность образца сравнения соответственно, и - дисперсии определения концентрации и оптической плотности образца сравнения соответственно. Если все значения оптической плотности находятся в рабочем интервале спектрофотометра, то величины и будут примерно равными. В этом случае дисперсия анализа находится из выражения:

/

+

Л

Л.-С.

'л

А,

ч-4« /

(3)

Из выражений (1) и (3) видно, что дисперсия анализа в методе сравнения имеет более сложный вид, чем в методе показателя поглощения. Однако погрешность количественного определения в методе сравнения намного меньше погрешности градуировки.

В связи с вышеизложенным метод сравнения (стандарта) находит более широкое применение при контроле качества лекарственных средств по сравнению с методами показателя поглощения и градуировочного графика.

В связи с дефицитом государственных стандартных образцов (ГСО) на большинство препаратов часто возникает необходимость замены ГСО на вещества сравнения, или внешние образцы сравнения. Такой вариант метода сравнения (стандарта), называется методом внешнего стандарта, так как в этом случае определяемое вещество и образец сравнения отличаются по химическому составу. В качестве внешних образцов сравнения можно использовать вещества органической и неорганической природы, отвечающие требованиям, предъявляемым к стандартным образцам. В связи с тем, что определяемое вещество и внешний образец сравнения различаются по составу, в выражение для количественного определения действующего вещества по методу внешнего стандарта необходимо ввести коэффициент пересчета

р

1С — вос

пер ~ Е

(4)

являющийся отношением удельных показателей поглощения внешнего Ееос и рабочего Еос образцов сравнения, что позволяет определить его на любом спектральном приборе и вводить в формулу количественного определения исследуемого вещества как постоянную величину (эмпирически установлено, что погрешность измерения коэффициента пересчета для разных спектральных приборов не превышает 0,5%.). Данные удельные показатели поглощения определяют при аналитической длине волны, соответствующей максимуму поглощения в спектре исследуемого вещества, при комнатной температуре (20±2)°С. Экспериментально установлено, что изменение температуры в пределах ±5°С не оказывает существенного влияния на значения удельных показателей поглощения исследуемых веществ, т.е. в методе внешнего стандарта нет необходимости проводить

термостатирование используемых кювет. Различия в природе матриц испытуемого вещества и внешнего образца сравнения учитываются в данном методе анализа при определении коэффициента пересчета по формуле (4), когда используется рабочий образец сравнения анализируемого вещества. Влияние на погрешность количественного определения лекарственного вещества аппаратурной ошибки, растворителей, температуры и других факторов нивелируется путем измерения оптической плотности испытуемого вещества и внешнего образца сравнения на одном приборе при одинаковых условиях анализа. Концентрации растворов определяемого вещества и внешнего образца сравнения подбираются таким образом, чтобы оптические плотности этих растворов были сопоставимы и измерялись с одинаковой относительной погрешностью.

Количественному определению лекарственных средств предшествует испытание их на специфические примеси методом хроматографии. Как правило, содержание примесей составляет не более 0,5%, поэтому их присутствие фактически не отражается на результатах количественного определения основного действующего вещества спектрофотометрическим методом, обладающим высокой чувствительностью и требующим разведения 1:100, 1:500 и более.

Все вышеотмеченное позволяет сделать вывод, что метод внешнего стандарта имеет определенные преимущества перед методом показателя поглощения и не уступает по точности методу сравнения, или стандарта Это позволяет рекомендовать метод внешнего стандарта для использования в контроле качества лекарственных средств.

Важное значение в методе внешнего стандарта имеет выбор внешнего образца сравнения. На основании теоретического рассмотрения и экспериментальных данных нами разработана методология выбора внешних образцов сравнения в одноволновом спектрофотометрическом определении лекарственных средств: оптимальным является тот внешний образец сравнения, для которого расстояние между положением его максимума поглощения Ут и аналитической длиной волны (максимумом поглощения исследуемого вещества V,) не превышает половины полуширины Д полосы поглощения внешнего образца сравнения. Из рис. 4 видно, что погрешность измерения оптической плотности изменяется незначительно в верхней части полосы поглощения, когда расстояние между используемой (аналитической) длиной волны и максимумом поглощения внешнего образца сравнения не превышает половины полуширины его полосы поглощения. Погрешность резко возрастает при удалении аналитической длины волны от максимума поглощения внешнего образца сравнения.

В качестве внешних образцов сравнения нами использованы вещества неорганической и органической природы: дихромат калия, хромат калия, феррицианид калия, нитрит натрия, хлорид никеля, дигидрофосфат калия, бензойная кислота, фенолфталеин, аденин, гуанин. Данные вещества широко

Зависимость погрешности измерения оптической плотности от соотношения (ц-у„)/А

ЬЛ_ 2 м

1,5 1

0,5 О

0 0,5 1 15 2

Рис.4

применяются в аналитической практике в качестве реактивов, выпускаются химической промышленностью квалификации хч и чда, доступны, дешевы, на них имеются ГОСТы, регламентирующие их качество, содержание в них основного вещества определено химическим методом и составляет не менее 99,9%. Изучение спектров поглощения растворов указанных соединений при вариации рН от 1,0 до 13,0 и стабильности растворов позволило установить оптимальные области рН для использования данных соединений в качестве внешних образцов сравнения в спектрофотометрическом определении лекарственных средств. В табл. 2 представлены основные оптические характеристики полос поглощения образцов сравнения при оптимальных значениях рН. Для исследуемых соединений на основании разработанной методологии выбора внешних образцов сравнения рассчитаны оптимальные области поглощения, в которых они могут быть использованы в качестве внешних образцов сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств (табл. 2). Из табл. 2 видно, что оптимальные области поглощения внешних образцов сравнения охватывают интервал от 216 до 440 нм, т.е. практически всю область для УФ-спектрофотометрии. Приведенные в таблице оптимальные области поглощения исследуемых образцов сравнения были проверены экспериментально при исследовании погрешности измерения величины оптической плотности образцов сравнения при различных длинах волн в областях, соответствующих половине полуширины их полос поглощения. Из представленных зависимостей е=/(Х) для фенолфталеина (рис. 5) (аналогичные зависимости имеются и для всех остальных изученных нами внешних образцов сравнения) следует, что в пределах оптимального интервала ошибки измерения величины оптической плотности внешних образцов сравнения составляют 0,3-1,5%. Погрешности измерения величины оптической плотности имеют наименьшее значение (0,30-0,51%) в области максимумов поглощения и наибольшее значение (0,83-1,50%) - при длинах волн, соответствующих верхнему и нижнему значениям интервала. За пределами границ оптимального интервала

Таблица 2

Оптические параметры полос поглощения внешних образцов сравнения

Образец сравнения рН опт. Растворитель ^тпах ,НМ Полуширина А, нм Область поглощения, нм

Хромат калия (ГОСТ 4459-75) хч 10,0-13,0 ОДМ№ОН (рН 13,0) 275±1 373±1 22 32 264-286 357-389

Дихромат калия (ГОСТ 4220-75) хч 1,1-3,0 0,1МНС1 (рн 1,1) 257±1 350±1 20 19 247-267 340,5-359,5

Хлорид никеля (ГОСТ 4038-61) ч 1,1-3,0 0,1МНС1 (рН 1,1) 393±1 22 382-404

Нитрит натрия (ГОСТ 4197-74) ч 10,4-13,0 0,1М ЫаОН (рН 13,0) 357±1 плечо 285-300 39 337,5-376,5 280-300

Феррицианид калия (ГОСТ 4206-75) чда 1,1-5,0 9,0-13,0 0.1МНС1 (рН 1,1) 0,1М1Ма011 (рН 13,0) 261±1 303+1 421 + 1 261 + 1 303±] 422+1 12 26 38 12 26 38 255-267 290-316 402-440 255-267 290-316 402-440

Дигидрофосфат калия (ГОСТ 4198-75) хч 10,0-12,0 0,1М КОН (рН 12,0) 225±1 «плечо» 245-255 17 216,5-233,5 245-255

Бензойная кислота (ГОСТ 10521-78) чда 1,1-5,75 0,1МНС1 (рн 1,1) этиловый спирт 273+1 27311 14 14 266-280 266-280

Фенолфталеин (ГОСТ 5850-72) чда 1,1-5,5 0ДМНС1 (РН 1,1) этиловый спирт 27511 276±1 14 14 268-282 269-283

Аденин хч 1,1-3,3 0,1 МНС! (РН 1,1) 26212 32 247-277

Гуанин хч 1,1-2,7 11,3-13,0 0ДМНС1 (рН 1,1) 0,1М ЫаОН (рН 13,0) 24611 27611 27411 28 12 17 234-262 270 282 265,5-282,5

Зависимость погрешности измерения оптической плотности фенолфталеина от длины волны

о 4---. . I ----,-,-.

256260266 270 276 280 286 290 295 Х,НМ

Рис 5

погрешность измерения величины оптической плотности возрастает до 1,8% и выше. Таким образом, экспериментально подтверждено, что ошибки измерения величины оптической плотности внешних образцов сравнения в пределах оптимального интервала укладываются в допустимую для спектрофотометрического анализа лекарственных средств погрешность.

Для последующего прогнозирования ошибок количественного определения лекарственных средств спектрофотометрическим методом по внешнему образцу сравнения установлены методом наименьших квадратов функциональные зависимости погрешности измерения е оптической плотности внешних образцов сравнения от длины волны Л, находящейся в оптимальной области поглощения (табл. 3).

Iаблица 3

Функциональные зависимости погрешности измерения оптической плотности внешних образцов сравнения от длины волны

Внешний образец сравнения Оптимальная область поглощения, нм Интервал длин волн,нм Уравнение регрессии

1 2 3 4

Дихромат калия I 247-267 242<*<2б2 262<Ш67 e=0,0088A«2-0,3417V3,7807; S' =0,0478 6=0,0518Х02-2,7466?щ+37,1265,S" =0,0433 \<i= л - 237

Хромат калия 264-286 264<а<286 s=0,004X(/-0,2012^+3,0377, S'=0,0180 Xo=\ - 250

Нитрит натрия 337,5-376,5 330<Х <357,6 357,6<\5385,5 8=0,0024^-0,1568J.0+2,9779, S" =0,0280 E=0,0015Xo2-0,1094V2,3961, S" =0,0311 Xn=X - 320

Хлорид никеля 382-404 375<Х <395 395<Х<420 e=-0,0847+11,5686/Xo, S'=0,0100 e=-0,8507+0,0492i.0, S' =0,0129 X^X - 370

Дигидрофосфа т калия 216,5 255 2\й<Х<22Ь 225<\<245 t'0,154+7,7518/^o, S'-0,0492 e=l ,631nXo-4,4498, S" =0,0141 - 205

Феррицианид калия 255-26'' 250<?. <270 270<Х<275 e=0,0114X02-0,4562?0+5,0780, S*=0,019? e=0,0842Ào-0,8940, S'=0,0010 k0=X - 240

Феррицианид калия 290-316 285<Х <320 t=0,0042V-0,1984Ào+2,9519, S'=0,0180 ko=X - 280

Феррицианид калия 402-440 395<А<425 425<Я.<450 6=0,0022Xo2-0,1265^+2,4709, S =0,0181 e=0,0055^2-0,4718X<,+10,9836; S'=0,0462 Xo=l - 390

Фенолфталеин 268-282 265<1<215 275<A<<290 e-0,0139ХДО,5524Xo+5,828, S'=0,0041 s=0,1006X0-l,7048, S'=0,0282 h,=X - 255

Бензойная кислота 266-280 2655Х.<280 e=0,0202^-0,7115^+6,8285, S'=0,0128 hrX - 255

1 2 3 4

Аденин 247-277 245SXS260 260<Я.<285 е=0,0015Х<,2-0,0923М 1,5765, S'=0,0497 8=0,0002Хо2+0,0572Хо-0,9578; S'=0,0395 Хо=А. - 240

Гуанин 265,5-282,5 260sa. <275 275äX<290 е=-0,1398/10+2,378, S»-0,051ü 6=0,1138X0-1,4456, S»=0,0456 Х0=Х - 260

4. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Для ряда широко применяемых в медицинской практике азотсодержащих лекарственных средств производных пурина, пиридина, индола, амида сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола были разработаны методики количественного определения действующих веществ в субстанциях и лекарственных формах заводского приготовления спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения.

Для разработки методик анализа необходимо было провести оптимизацию условий спектрофотометрического определения исследуемой группы препаратов. С этой целью были изучены спектры поглощения их растворов в интервале рН 1,1 - 13,0 в области от 220 до 400 нм и стабильность растворов при хранении. Установлено, что спектры поглощения исследуемых веществ изменяются в зависимости от рН, поэтому важно было обосновать выбор оптимальных условий их спектрофотометрического определения (табл. 4). Выбор внешних образцов

Таблица 4

Оптимальные условия и внешние образцы сравнения для спектрофотометрического определения некоторых азотсодержащих лекарственных средств

Лекарственное вещество P^UT Растворитель ^max, HM Образец сравнения Оптимальная область поглощения, нм

1 2 3 4 5 6

Теофиллин 9,413,0 0,1М NaOH 274 Хромат калия Гуанин 264-286 265,5-282,5

Ксантинола никотинат 1,737,73 0,IM HCl 263 Дихромат калия Феррицианид калия 247-267 255-267

Пентоксифил-лин 1,1 13,0 0,IM HCl 0,IM NaOH 274 274 Бензойная кислота Фенолфталеин Хромат калия Гуанин 266-280 268-282 264-286 265,5-282,5

Ацикловир 13,0 0,IM NaOH 261 Феррицианид калия 255-267

Аденозин 1,1 0,IM HCl 258 Дихромат калия Аденин 247-267 247-277

Фосфаден 1,1 0,IM HCl 258 Дихромат калия Аденин 247-267 247-277

Рибоксин 1,1 0,IM HCl 249 Дихромат калия Гуанин 247-267 234-262

Фтивазид 13,0 0,IM NaOH 360 Хромат калия 357-389

1 2 3 4 5 6

Метазид 1,1 0,1M HCl 266 Дихромат калия 247-267

Изониазид 1,1 ОДМ HCl 266 Дихромат калия 247-267

Пиразидол 1,6 0,IM HCl 276 Бензойная кислота 266-280

Фенолфталеин 268-282

6,5 этанол 276 Бензойная кислота 266-280

Фенолфталеин 269-283

Никотиновая 1,1 0,1M HCl 260 Дихромат калия 247-267

кислота

Сулыин 13,0 0 IMNaOH 260 Феррицианид калия 255-267

Стрептоцид 1,68 0,1M HCl 260 Дихромат калия 247-267

12,87 0, IMNaOH 250 Феррицианид калия 255-267

Стрептоцид 6,1 этанол 269 Фенолфталеин 269-283

растворимый Бензойная кислотз 266-280

Синтомицин 13,0 0, IMNaOH 280 Хромат калия 264-286

Левомицетин 13,0 0, IMNaOH 280 Хромат калия 264-286

Норсульфазол 1,1 0,IM HCl 280 Фенолфталеин 268-282

13,0 0, IMNaOH 257 Бензойная кислота 266-280

Феррицианид калия 255-267

Фталазол 13,0 0, IMNaOH 263 Хромат калия 264-286

Феррицианид калия 255-267

Сульфадиме- 1,1 0,IM HCl 305 Феррицианид калия 290-316

зин 13,0 0, IMNaOH 258 Феррицианид калия 255-267

сравнения осуществляли, исходя из аналитической длины волны лекарственного вещества, подбора оптимального растворителя и оптимальной области поглощения образца сравнения. Из табл. 4 видно, что для определения одного лекарственного вещества можно предложить несколько внешних образцов сравнения.

На основании найденных оптимальных условий спектрофотометрического определения исследуемой группы препаратов были разработаны унифицированные методики количественного определения по внешним образцам сравнения в субстанциях и ютовых лекарственных формах. Сравнительные результаты

спектрофотометрического определения исследуемых лекарственных веществ и их готовых лекарственных форм по внешним образцам сравнения и рабочим образцам сравнения представлены в табл. 5-6. Результаты, полученные по различным внешним образцам сравнения и по PCO,

Таблица 5

Спектрофотометричсское определение некоторых азотсодержащих лекарст венных

веществ

Лекарственное вещество Образец сравнения Метрологические характеристики (п=10, Р=95%)

X ±дх,% Е,% S,

1 2 3 4 5

Никотиновая кислота Дихромат калия PCO 100,40*0,51 100,10*0,44 0,51 0,44 0,005 0,005

Ксантинола никотинат Дихромат калия Феррицианид калия PCO 99,96*0,29 99,72*0,41 99,45*0,24 0,29 0,42 0,24 0,004 0,006 0,003

Теофиллин Хромат калия Гуанин PCO 99,95*0,44 100,14*0,36 100,02*0,33 0,44 0,36 0,33 0,006 0,005 0,005

1 2 3 4 5

Эуфишшн Хромат калия 84,88*0,30 0,35 0,005

Гуанин 85,21*0,43 0,50 0,007

PCO 84,68±0,48 0,57 0,008

Ацикловир Феррицианид калия 99,81*0,47 0,47 0,005

PCO 99,73*0,46 0,46 0,005

Пентоксифшшин Хромат калия 99,73±0,43 0,46 0,005

Гуанин 99,99±0,38 0,37 0,005

Бензойная кислота 99,94±0,34 0,34 0,005

Фенолфталеин 99,80*0,36 0,36 0,005

PCO 99,78*0,42 0,42 0,006

Аденозин Дихромат калия 100,30±0,98 0,93 0,010

Аденин 100,50±0,93 0,93 0,004

PCO 100,50*1,01 1,00 0,011

Фосфаден Дихромат калия 99,60*1,03 1,03 0,011

Аденин 100,10±1,03 1,03 0,011

PCO 99,80±1,05 1,05 0,011

Рибоксин Дихромат калия 100,40*0,34 0,34 0,004

Гуанин 99,80*0,34 0,34 0,004

PCO 100,10*0,42 0,42 0,004

Пиразидол Бензойная кислота 99,86*0,35 0,35 0,005

Фенолфталеин 100,05*0,32 0,32 0,004

PCO 99,71*0,39 0,39 0,006

Изониазид Дихромат калия 99,87*0,88 0,88 0,010

PCO 99,93±0,67 0,67 0,007

Метазнд Дихромат калия 99,69*0,87 0,87 0,00 9

PCO 99,71*0,90 0,91 0,010

Фтивазид Хромат калия 99,01*0,95 0,96 0,010

PCO 98,86*0,74 0,75 0,008

Левомицетин Хромат калия 99,75*0,69 0,70 0,007

PCO 99,70*0,71 0,71 0,008

Синтомицин Хромат калия 99,93*0,65 0,65 0,007

PCO 99,93*0,78 0,78 0,008

Стрептоцид Дихромат калия 99,92*0,43 0,43 0,006

Феррицианид калия 99,90*0,38 0,38 0,005

PCO 99,84*0,38 0,38 0,005

Стрептоцид Бензойная кислота 99,86*0,48 0,48 0,007

растворимый Фенолфталеин 100,03*0,33 0,33 0,004

PCO 99,76*0,29 0,29 0,004

Сульгин Феррицианид калия 100,12*0,23 0,23 0,003

PCO 99,64*0,49 0,49 0,007

Норсульфазол Бензойная кислота 99,98*0,19 0,19 0,003

Фенолфталеин 99,73*0,34 0,34 0,005

Феррицианид калия 99,67*0,36 0,36 0,005

PCO 99,99*0,27 0,27 0,004

Фталазол Хромат калия 99,91*0,46 0,46 0,006

Феррицианид калия 99,97*0,37 0,37 0,005

PCO 99,51*0,33 0,34 0,005

Сульфадимезин Феррицианид калия 99,86*0,39 0,39 0,005

PCO 99,87*0,32 0,32 0,004

Таблица 6

Спектрофотометрическое определение некоторых азотсодержащих лекарственных веществ в лекарственных формах

Лекарственная форма Образец сравнения Метрологические характеристики (п=10, Р-95%)

Х±ДХ,г Е,% S,

1 2 3 4 5

Таблетки никотиновой кислоты по 0,05 г Дихромат калия PCO 0,0455*0,0005 0,0495*0,0005 1,10 1,09 0,011 0,012

1 2 3 4 5

Раствор никотиновой кислоты для инъекций 1 % Дихромат калия PCO 0,0099*0,0001 0,0099*0,0001 0,67 0,78 0,006 0,007

Таблетки ксантинола никотината по 0,15 г Дихромат калия Феррицианид калия PCO 0,1489*0,0014 0,1443*0,0010 0,1440*0,0012 0,99 0,66 0,87 0,014 0,009 0,012

Раствор ксантинола никотината для инъекций 15 % Дихромат калия Феррицианид калия PCO 0,1546*0,0013 0,1545*0,0015 0,1540*0,0014 0,84 0,99 0,89 0,012 0,014 0,013

Таблетки эуфиллина по 0,15 г Хромат калия Гуанин PCO 0,1530*0,0021 0,1534*0,0014 0,1530*0,0016 1,39 0,93 1,04 0,019 0,013 0,015

Таблетки ацикловира по 0,2 г Феррицианид калия PCO 0,2000*0,0013 0,1987*0,0015 0,65 0,74 0,009 0,010

Таблетки пентоксифиллина по 0,1 г Хромат калия Гуанин Бензойная кислота Фенолфталеин PCO 0,0994*0,0008 0,0995*0,0007 0,1000*0,0007 0,0999*0,0007 0,0995*0,0006 0,77 0,66 0,74 0,65 0,57 0,011 0,009 0,010 0,009 0,008

Раствор пентоксифиллина для инъекций 2% Хромат калия Гуанин Ьензойная кислота Фенолфталеин PCO 0,019310,0002 0,0194x0,0001 0,0191*0,0001 0,0193*0,0001 0,0192*0,0001 0,77 0,54 0,67 0,49 0,68 0,011 0,007 0,009 0,007 0,009

Таблетки пиразидола по 0,025 г Бензойная кислота Фенолфталеин PCO 0,02519*0,00024 0,02513*0,00023 0,02521*0,00020 0,96 0,90 0,80 0,013 0,013 0,011

Таблетки фосфадена по 0,05 г Дихромат калия Аденин PCO 0,0497*0,0004 0,0497*0,0003 0,0499^0,0004 0,82 0,64 0,73 0,011 0,013 0,010

Раствор фосфадена для инъекций 2 % Дихромат калия Аденин PCO 0,0206*0,0002 0,0203*0,0002 0,0204*0,0002 0,97 0,99 0,98 0,009 0,010 0,010

Таблетки рибоксина по 0,05 г Дихромат калия Гуанин PCO 0,0501*0,0005 0,0499*0,0004 0,0501*0,0003 0,93 0,84 0,64 0,012 0,014 0,011

Раствор рибоксина для инъекций 2 % Дихромат калия Гуанин PCO 0,0205*0,0002 0,0209*0,0002 0,0207*0,0002 0, 98 0,96 0,97 0,010 0,010 0,010

Таблетки изониазида по 0,3 г Дихромат калия PCO 0,301*0,005 0,303+0,004 1,77 1,38 0,019 0,015

Раствор изониазида для инъекций 10 % Дихромат калия PCO 0,1003*0,0010 0,1001*0,0010 1,01 1,15 0,011 0,012

Таблетки метазида по 0,5 г Дихромат калия PCO 0,511*0,004 0,510*0,004 0,86 0,80 0,009 0,009

Таблетки фтивазида по 0,5 г Хромат калия PCO 0,504*0,005 0,502*0,006 1,00 1,16 0,011 0,012

Таблетки левомицетина по 0,25 г Хромат калия PCO 0,250J-0,003 0,25 ЬО, 004 1,19 1,69 0,013 0,018

Глазные капли левомицетина 0,25 % Хромат калия PCO 0,250*0,004 0,249*0,005 1,55 1,84 0,017 0,020

Слиртовый раствор левомицетина 3 % Хромат калия PCO 2,970*0,036 2,983*0,037 1,22 1,23 0,013 0,013

Суппозитории синтомицина по 0,25 г Хромат калия PCO 0,249*0,002 0,249*0,003 0,95 1,08 0,010 0,012

Таблетки стрептоцида по 0,5 г Дихромат калия Феррицианид калия PCO 0,5021*0,0041 0,5075*0,0059 0,4941*0,0051 0,82 1,18 1,03 0,010 0,020 0,010

Таблетки сульгина по 0,5 г Феррицианид калия PCO 0,5123*0,0074 0,5008*0,0057 1,44 1,14 0,020 0,020

1 2 3 4 5

Таблетки норсульфазола по 0,5 г Бензойная кислота 0,5022±0,0065 1,30 0,020

Фенолфталеин 0,5004±0,0048 0,96 0,010

Феррицианид калия 0,4984±0,0053 1,07 0,010

PCO 0,5050±0,0043 0,85 0,010

Габлепси фталазола по 0,5 г Хромат калия 0,5026±0,0059 1,19 0,020

Феррицианид калия 0,5011*0,0051 1,02 0,010

PCO 0,5039±0,0052 1,07 0,020

Таблетки сульфадимезина по 0,5 г Феррицианид калия 0,5004+0,0049 0,99 0,010

PCO 0,5040±0,0065 1,29 0,020

сопоставимы. Относительное стандартное отклонение не превышает 0,011 для субстанций и 0,020 для готовых лекарственных форм. Результаты количественного определения одного лекарственного вещества по различным внешним образцам сравнения практически не отличаются, поэтому в условиях заводских лабораторий и Центров контроля качества лекарственных средств можно применять наиболее доступный внешний образец сравнения.

На примере сульфаниламидных лекарственных средств в табл. 7 представлены результаты сравнительной оценки количественного определения лекарственных веществ, полученные по разработанным методикам и методикам НД. Из таблицы видно, что нитритометрический метод количественного определения сульфаниламидных препаратов уступает

Таблица 7

Сравнительная оценка методик количественного определения

сульфаниламидных препаратов (п-10, К?, 0(таВл)=2,45; Р=95%; Р(Р, Р=99%)

Лекарственное вещество Наименование метода Ц х,% S2 S е,% tun F 1 ВЫЧ Продол жтель-ность анализа в мин. Число операций

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Стрептоцид Спектро-фотометрия 100 99,92 0,3593 0,5994 0,43 0,35 24,75 П 6

Нитрито-метрия (НД) 100 99,40 8,8923 2,9820 2,77 0,53 25 5

Стрептоцид растворимый Спектро-фотометрия 100 99,86 0,4525 0,6727 0,48 0,55 19,62 17 6

Нитрито-метрия (НД) 100 99,32 8,8780 2,9796 2,77 0,60 25 5

Сульгин Спектро-фотометрия 100 100,10 0,1897 0,4356 0,31 0,61 46,85 17 6

Нитрито-метрия (НД) 100 99,37 8,8870 2,9811 2,77 0,56 25 5

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Норсульфазол Спекгро-фотометрия 100 99,84 0,2100 0,4582 0,33 0,92 18,73 17 6

Нжрито-метрия (НД) 100 99,16 3,9331 1,9832 1,85 1,12 25 5

Фталазол Спектро-фотометрия 100 99,99 0,3186 0,5644 0,40 0,05 1,12 17 6

Алкали-мегрия (НД) 100 99,74 0,3581 0,5984 0,55 1,02 12 4

Сульфадимезин Спектро-фотометрия 100 99,97 0,2371 0,4870 0,35 0,16 16,80 17 6

Нитриго-метрия (НД) 100 99,79 3,9832 1,9958 1,85 0,28 25 5

1 Таблетки стрептоцида по 0,5 г Спектро-фотометрия 100 100,41 1,3398 1,1578 0,82 0,94 6,71 20 7

Нитрито-метрия (НД) 100 99,96 8,9928 2,9988 2,77 0,04 28 6

Таблетки сульгина по 0,5 г Спектро-фотометрия 100 100,16 2,5682 1,6026 1,14 0,26 3,52 20 7

Нитрито-метрия (НД) 100 100,28 9,0505 3,0084 2,77 0,63 28 6

Таблетки норсульфазола по 0,5 г Спектро-фотометрия 100 100,69 3,6507 1,9107 1,36 0,96 1,85 20 7

Нитрито-метрия (НД) 100 99,89 6,7451 2,5971 2,40 0,11 28 6

Таблетки фталазола по 0,5 г Сцектро-фотометрия 100 100,18 1,9651 1,4019 1,00 0,34 1,43 20 7

Спектрофотометра (НД) 100 100,51 2,8104 1,6764 1,19 0,80 28 6

Таблетки сульфадимезина по 0,5 г Спектрофотометра 100 100,25 2,9136 1,7069 1,22 0,39 2,69 20 7

Нтрито-мстрия (НД) 100 99,93 7,8290 2,7980 2,59 0,07 28 6

по воспроизводимости предложенному спектрофотометрическому методу (Рвыч">Рта5.1). Разработанные методики менее длительны, не требуют токсичных и дорогостоящих реактивов.

В табл. 8 приведена сравнительная оценка результатов количественного определения противотуберкулезных лекарственных средств спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения и методом ВЭЖХ. Результаты, полученные данными методами,

Таблица 8

Сравнительная оценка методик количественного определения изониазида, метазида и

фтивазида в субстанциях (п=7,1 (Р, 0 (тавл )=2,45, Р=95%; Р(Р, П, Ъ)(та&1 »=8,47, Р=99%)

Лекарственное вещество Наименование метода И х,% в Е,% ^■ЫЧ р 1 мл

Изониазид Спектрофотометрия 100 99,79 0,8651 0,9301 0,86 0,60 1,65

вэжх 100 99,58 0,5250 0,7250 0,67 1,53

Метазид Спектрофотометрия 100 99,85 0,4412 0,6643 0,62 0,60 1,36

ВЭЖХ 100 99,59 0,5989 0,7740 0,72 1,40

Фтивазид Спектрофотометрия 100 99,51 0,3403 0,5834 0,54 2,22 1,34

вэжх 100 99,71 0,4570 0,6760 0,63 1,14

хорошо согласуются. Специфические примеси, присутствующие в препаратах в количестве менее 0,5%, практически не оказывают влияния на результаты спектрофотометрического определения. Оба метода дают правильные результаты и не отличаются по воспроизводимости. Предложенный нами метод более доступен для заводских лабораторий и Центров контроля качества лекарственных средств.

Методики спектрофотометрического анализа с использованием внешних образцов сравнения позволили с достаточной точностью провести определение однородности дозирования и теста «растворение» таблетированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов.

Разработанные методики апробированы и внедрены в практику работы ОТК ряда химико-фармацевтических комбинатов и Центров контроля качества лекарственных средств Методики количественного определения метазида, фтивазида и ксантинола никотината включены в ФСП ОАО "Усолье - Сибирский химфармкомбинат". Их научная новизна подтверждена тремя Патентами РФ на изобретение.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Впервые на основании изучения хроматографической подвижности пентамина, аденозина и фосфадена с помощью математического планирования эксперимента методом «латинского квадрата» оптимизированы системы растворителей для хроматографического контроля чистоты методом ТСХ.

2. На основании проведенных экспериментов с учетом физико-химических свойств ксантинола никотината, фтивазида, метазида, аденозина и фосфадена определены оптимальные условия их хроматографирования методом ТСХ.

3. Разработана методология выбора внешних образцов сравнения для одноволнового спектрофотометрического определения лекарственных средств. Оптимальным является тот внешний образец сравнения, для которого расстояние между максимумом поглощения в его спектре и максимумом поглощения в спектре анализируемого вещества (аналитической длиной волны) не превышает половины полуширины спектральной полосы поглощения внешнего образца сравнения.

4. Найдены оптимальные условия для использования внешних образцов сравнения в одноволновой спектрофотометрии лекарственных средств: оптимальное значение рН, оптимальный растворитель, оптимальная концентрация, оптимальная область поглощения.

5. Методом наименьших квадратов рассчитаны уравнения градуировочных графиков для внешних образцов сравнения, позволяющие находить интервалы оптимальных концентраций, и уравнения, описывающие погрешность измерения оптической плотности внешнего образца сравнения в оптимальной области его поглощения, позволяющие прогнозировать ошибку количественного определения лекарственных средств.

6. Разработаны оптимальные условия спектрофотометрического определения азотсодержащих лекарственных средств производных пурина, индола, пиридина, амидов сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола. Установлено, что для количественного определения методом одноволновой спектрофотометрии некоторых лекарственных веществ существует несколько внешних образцов сравнения из числа изученных нами, что позволяет аналитическим лабораториям осуществлять выбор образцов сравнения.

7. Впервые разработаны методики спектрофотометрического количественного определения лекарственных средств производных пурина, индола, пиридина, амидов сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола в субстанциях и лекарственных формах с использованием внешних образцов сравнения. Погрешность определения для субстанций не превышает 1,1 %, для лекарственных форм -2%.

8. Проведена сравнительная оценка методик количественного определения лекарственных средств производных пурина, индола, пиридина, амидов сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола, рекомендуемых НД, разработанных нами и методом ВЭЖХ. Показано, что методики спектрофотометрического определения по внешним образцам сравнения не уступают по точности и воспроизводимости, отличаются доступностью, экспрессностью, отсутствием высокотоксичных реактивов.

9. Впервые разработаны методики определения теста «растворение» и однородности дозирования таблетированных лекарственных форм исследуемой группы _ препаратов методом одноволновой спектрофотометрии с использованием бнешних образцов сравнения

Ю.Разработанные методики количественного определения, определения теста «растворение» и однородности дозирования спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения и контроля чистоты методом ТСХ апробированы и внедрены на ряде химико-фармацевтических предприятий; некоторые из них включены в ФСП и защищены Патентами РФ на изобретение.

По теме диссертации опубликованы следующие работы

1. Ловцева Е.А., Беликов В.Г., Саушкина A.C. Использование ТСХ в контроле качества фосфадена // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: Матер, докл. науч. конф. - М., 1991. - Т. 2, ч. 1,-С. 48-49.

2. Ловцева Е.А., Беликов В.Г. Разработка унифицированной методики анализа аденозина, фосфадена и рибоксина // Поиск биологически активных веществ и проблемы лекарственного обеспечения: Матер докл. науч. конф. -Уфа, 1991.-С. 28 -33.

3. Ловцева Е.А., Вергейчик E.H., Саушкина A.C., Соловей Н.В. Использование внешнего стандарта для спектрофотометрического определения аденозина // Фармацевтический анализ - науке и практике: Науч. труды. - М., 1992. - Т. XXX. - С. 60 - 64.

4. Ловцева Е.А., Беликов В.Г., Саушкина A.C. Спектрофотометрическое определение фосфадена по стандартному образцу // 47-я регион, конф по фармации и фармакологии: Матер, науч. конф. - Пятигорск, 1992. - С. 53

5. Беликов В.Г., Ловцева Е.А., Саушкина A.C. Оптимизация условий хроматографирования аденозина методом планирования эксперимента // Фармация. - 1992. - №3. - С. 31 - 34.

6. Ловцева Е.А., Беликов В.Г., Саушкина A.C. Спектрофотометрический анализ аденозина // Фармация. - 1992. - № 5. - С. 40-41.

7. Саушкина A.C., Ловцева Е.А. Идентификация лекарственной формы, содержащей "кальция глюконата 0,2, фенобарбитала 0,025, кофеина -бензоата натрия 0,0056, бромизовала 0,07", методом ТСХ // Контроль качества лекарств. Информационно - методический бюллетень. - М., 1992. -№2. - С. 71 - 72.

8. Соловей Н.В., Максименко Т.И., Ловцева Е.А., Козлова Л.Н. Использование ТСХ для идентификации инградиентов трехкомпонентной лекарственной формы // Контроль качества лекарств. Информационно -методический бюллетень. - М., 1992. - №2. - С. 81

9. Вергейчик E.H., Саушкина A.C., Ловцева Е.А., Кочановская С.А. Выбор и унификация спектрофотометрических методик анализа лекарственных форм, содержащих производные пурина // Изв. ВУЗов. Северо-кавказский регион. -1993. - №1 - 2. - С.32-38.

10. Ловцева Е.А., Вергейчик E.H., Беликов В.Г. Условия выбора стандартных

образцов свойств для спектрофрт{Й(£твй»юечвгв ^анализа лекарственных

I вявЛИвТЬКД i ■ СЯи«р1)|1 I

веществ II Решение актуальных задач фармации на современном этапе. - ML,

1994.-С. 201.

11. Ловцева Е.А. Спектрофотометрическое определение лекарственных форм, содержащих производные пурина N-гликозидной структуры // Охрана окружающей среды. Вопросы экологии и контроля качества продукции. - М.,

1995.-Выпуск 1.-С. 8- 10.

12. Ловцева Е.А. Контроль теста «растворения» твердых дозированных лекарственных форм // Охрана окружающей среды. Вопросы экологии и контроля качества продукции. - М., 1996. - Выпуск 3. - С. 1 - 3.

13. Ловцева Е.А., Беликов В.Г., Саушкина A.C. Определение рибоксина методом дифференциальной спектрофотометрии // Матер, юбилейной науч. конф. фарм. факультета, посвященной 75-летию Иркутского медицинского университета. - Иркутск, 1996. - С. 79 - 80.

14. Слепова Л.Н., Ловцева Е.А., Филиппова С.Ю. Анализ андипала хроматофотометрическим методом // Матер, юбилейной науч. конф. фарм. факультета, посвященной 75-летию Иркутского медицинского университета. - Иркутск, 1996. - С. 87 - 88.

15. Пахолков Г.В., Ловцева Е.А, Сыроватский И.П. Использование различных вариантов спектрофотометрического анализа в контроле качества лекарственных средств // Достижения современной фармацевтической науки и практики на рубеже XI века: Сб. науч. трудов. - Курск: КГМУ, 1997 - С. 104- 105.

16. Ловцева Е.А. Спектрофотометрический анализ лекарственных средств производных ароматического и гетероциклического рядов // Люминесценция и сопутствующие явления: Труды шк. - сем. - Иркутск: ИГУ, 1997. - С. 48 -53.

17. Ловцева Е. А., Илларионов А.И, Малых Н.Ю. Оценка качества кислоты никотиновой в лекарственных формах спектрофотометрическим методом // Люминесценция и сопутствующие явления: Труды IV Всерос. шк. - сем. -Иркутск: ИГУ, 1999.- С. 128 -131.

18. Илларионова Е.А., Беликов В.Г. Хроматографический анализ аденозина и фосфадена // Фармация. - 1999. - № 4. - С. 28 - 29.

19. Илларионова Е. А., Абрамова Л.В., Илларионов А.И. Исследование оптических свойств левомицетина для анализа его лекарственных средств // Люминесценция и сопутствующие явления: Труды V Всерос шк. - сем,-Иркутск: ИГУ, 2000. - С. 225 - 228.

20. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П. Определение однородности дозирования таблетированных лекарственных форм, содержащих лекарственные вещества производные пурина и пиридина // Люминесценция и сопутствующие явления: Труды V Всерос. шк.-сем.- Иркутск: ИГУ, 2000. -С. 223 - 224.

21. Абрамова Л.В., Илларионова Е.А., Илларионов А.И. Новый способ количественного определения субстанции синтомицина // Актуальные проблемы теории и практики фармации: Сб. науч. статей. - Барнаул: АГМУ, 2000. - С. 59 - 60. *4-"*' '

22. Сыроватский И.П., Илларионова Е.А., Илларионов А.И. Разработка новой методики количественного определения ксантинола никотината // Актуальные проблемы теории и практики фармации: Сб. науч. статей -Барнаул: АГМУ, 2000. - С. 60 - 63.

23. Илларионова Е. А., Сыроватский И.П., Абрамова Л.В. Поиск внешних стандартных образцов для спектрофотометрического анализа // Сибирская фармация на рубеже ХХТ века: Матер. II межрегион, фарм. конф-Новосибирск, 2000 - С. 74 - 75.

24. Илларионова Е. А., Абрамова Л.В., Сыроватский И.П. Совершенствование фармацевтического анализа некоторых лекарственных средств с использованием спектрофотометрии // Материалы межрегион, фарм. конф.- Новосибирск, 2000 - С. 74.

25. Илларионова Е. А., Абрамова Л.В., Сыроватский И.П. Применение спектрофотометрии для количественного определения лекарственных средств производных ароматического и гетероциклического рядов // Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности: Матер, межд. науч. конф - Томск, 2000,- С. 90-91.

26. Илларионова Е.А., Абрамова Л.В., Илларионов А.И. Спектрофотометрический анализ синтомицина и левомицетина по хромату калия // Дальневосточный медицинский журн- 2000 - №1.- С. 131 -132.

27. Илларионова Е.А., Илларионов А.И., Сыроватский И.П. Анализ рибоксина и кислоты никотиновой с применением дихромата калия // Дальневосточный медицинский журн. - 2000. - №1 - С. 134 - 137.

28. Илларионова Е.А., Абрамова Л.В. Совершенствование оптических методов анализа противотуберкулезных лекарственных средств // Люминесценция и сопутствующие явления: Труды VI Всерос. шк. - сем-Иркутск: ИГУ, 2001.-С. 117-119.

29. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Абрамова Л.В. Спектрофотометрическое определение 7-[2-окси-3(Ы-метил-р-оксиэтиламино)-пропил]-теофиллина никотината с применением дихромата калия Ч Изв. ВУЗов. Сер «Химия и хим. технология» - 2001.- Т. 44, вып. 4 -С. 7- 10.

30. Илларионова Е. А., Абрамова Л.В. Спектрофотометрический анализ изониазида // Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики: Матер, науч. - практич. конф., посвященной 35-летию фармацевтического факультета. - Курск: КГМУ, 2001 -С. 166-167.

31. Илларионова Е. А., Сыроватский И.П. Определение примеси теофиллина в ксантиноле никотинате методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки: Матер, науч. - практич. конф., посвященной 35-летию фармацевтического факультета. - Курск: КГМУ, 2001 -С. 167- 168.

32. Илларионова Е.А., Абрамова 71.В. Стандартизация противотуберкулезных лекарственных средств производных гидразида изоникотиновой кислоты // 56-я регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров: Матер, науч. конф. - Пятигорск, 2001. - С. 96 - 98.

33. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П. Пептиды как перспективная группа лекарственных средств // 56-я регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров: Матер, науч. конф. - Пятигорск, 2001. - С. 196 - 197.

34. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П. Новый вариант аналитического контроля производных пиридина спектрофотометрическим методом // Проблемы теоретической и экспериментальной химии: Матер, докл. регион, науч. конф. - Пермь, 2002. - С. 105 - 106.

35. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Абрамова JI.B. Новый вариант спектрофотометрического определения слабоокрашенных производных пиридина // Завод, лаб. Диагностика материалов.- 2002 - Т. 68, № 2 - С 9 -13.

36. Илларионова Е.А., Абрамова JI.B., Илларионов А.И. Хроматографический анализ производных гидразида изоникотиновой кислоты // Журнал прикладной химии. - 2002. - Т.75, вып. 5. - С. 786 - 788.

37. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П. Исследование оптических свойств салицилата и бензоата натрия // Люминесценция и сопутствующие явления: Труды VII Всерос. шк. - сем.- Иркутск: ИГУ, 2002. - С. 80 - 82.

38. Илларионова Е.А., Артасюк Е.М Спектрофотометрическое определение атенолола // Люминесценция и сопутствующие явления: Труды VIT Всерос шк. - сем,- Иркутск, 2002. - С. 254 - 255.

39. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П. Исследование качества ксантинола никотината с использованием тонкослойной хроматографии // Завод, лаб. Диагностика материалов. - 2003. - Т.69, № 4. - С. 16 - 18.

40. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Артасюк Е М. Внешние образцы сравнения лекарственных средств в спектрофотометрическом анализе // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Материалы 58-й межрег. конф. по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2003. - С. 206 - 208.

41. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Артасюк Е.М. Оптические характеристики внешних образцов сравнения для спектрофотометрии // Люминесценция и лазерная физика: Труды VIII Межд. шк.-сем. - Иркутск: ИГУ, 2003. - С. 87 - 93.

42. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Илларионов А.И. Спектрофотометрическое определение фталилсульфатиазола // Завод, лаб. Диагностика материалов. - 2003. - Т.69, № 12. - С. 7 - 10.

43. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Плетенева Т.В. Модифицированный метод сравнения в спектрофотометрическом методе анализа лекарственных средств // Вестник РУДН. Серия медицина. - 2003. -№5 (24).-С. 66-70.

44. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П. Использование метода внешнего стандарта в анализе некоторых азотсодержащих лекарственных средств //

Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции' Сб. науч. тр. - Пятигорск, 2004. - Выпуск 59. - С. 167 - 170

45. Илларионова Е.А., Сыроватский ИП Спектрофотометрический анализ лекарственных средств производных амидов сульфаниловой кислоты // Фармацевтической службе республике Бурятия - 80 лет: Матер, юб. научно -практ. конф. - Улан-Удэ, 2004. - С. 77 - 79.

46. Илларионова Е.А., Артасюк Е.М. Разработка методики однородности дозирования таблеток пиразидола по 0,025 г // Фармацевтической службе республике Бурятия - 80 лет: Матер, юб. научно - практ. конф. - Улан-Удэ, 2004.-С. 79-81.

47. Илларионова Е.А., Илларионов А.И. Количественное определение синтомицина в 5% линименте методом производной спектрофотометрии // Изв. ВУЗов. Сер. «Химия. Хим. технология». - 2004. - Т.47, вып.2. - С. 50 -52.

48. Илларионова Е.А., Сыроватский ИП Оптимизация условий хроматографического анализа пентамина методом «латинского квадрата» // Завод, лаб. Диагностика материалов. - 2004. - Т.70, № 1,- С. 13 - 15.

49. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Плетенева Т.В. Спектрофотометрический анализ лекарственных средств производных изоникотиновой кислоты // Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии: Сб - г работ. - Томск, 2004. - Т.З, № 2. - С. 273 - 275.

50. Илла| лова Е.А., Сыроватский И.П., Артасюк Е.М. Спектрофотометрическое определение пиразидола // Журн. аналит. химии -2004. - № 6. - С. 3 - 6.

51. Патент РФ на изобретение № 2154825. Способ определения чистоты аденозина и фосфадена / Е.А. Ловцева, В.Г. Беликов. - Бюлл. №23 от 20.08.2000.

52. Патент РФ на изобретение № 2146524. Способ определения лекарственных средств производных пурина N-гликозидной структуры с использованием стандартного образца свойств / Е А. Ловцева, Е Н. Вергейчик, В.Г. Беликов. - Бюлл. № 8 от 20.03.2000.

53. Патент РФ на изобретение № 2187802. Способ определения антибиотиков группы хлорамфеникола с использованием стандартного образца свойств / Е.А. Илларионова, Л.В. Абрамова, А.И. Илларионов. - Бюлл. № 23 от 20.08.2002.

54. Патент РФ на изобретение № 2193191. Способ количественного определения кислоты никотиновой и ксантинола никотината / Е.А Илларионова, И.П. Сыроватский, А.И. Илларионов. - Бюлл. № 32 от 20.11.2002.

55. Патент РФ на изобретение № 2225205. Способ определения чистоты фтивазида и метазида / Е.А. Илларионова, Л.В. Абрамова, А.И. Илларионов. -Бюлл. №7 от 10.03.2004.

56. Патент на изобретение № 2226274. Способ определения подлинности и чистоты ксантинола никотината/Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский , А.И Илларионов. - Бюлл. № 9 от 27.03.2004.

57. Илларионова Е.А., Пахолков Г.В. Хроматография. Использование хроматографии в тонком слое сорбента в анализе лекарственных средств (учебное пособие). - Иркутск: ИГМУ, 2002. - 97 с.

58. Илларионова Е.А., Пахолков Г.В. Фотометрия. Теоретические основы метода. Спектрофотометрия. Фотоэлектроколориметрия (учебное пособие). -Иркутск: ИГМУ, 2003. - 83 с.

Илларионова Елена Анатольевна (Россия)

Совершенствование спектрофотометрического и хроматографического методов анализа азотсодержащих лекарственных средств

Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены критерии выбора оптимальной системы растворителей для определения чистоты ряда азотсодержащих лекарственных средств с применением ТСХ на основе метода «латинского квадрата» и установления зависимости их хроматографического поведения от кислотно-основных свойств и состава подвижной фазы. Сформулированы научно-методологические основы применения внешних образцов сравнения для одноволнового спектрофотометрического определения лекарственных средств. Найдены оптимальные условия использования внешних образцов сравнения в спектрофотометрии лекарственных средств. Установлены функциональные зависимости, описывающие погрешность измерения оптической плотности внешнего образца сравнения в оптимальной области его поглощения, позволяющие прогнозировать ошибку количественного определения лекарственных средств. Разработаны методики количественного определения лекарственных средств в субстанциях и лекарственных формах с использованием внешних образцов сравнения. Погрешность определения для субстанций не превышает 1,1%, для лекарственных форм - 2%.

Illarionova Elena Anatolievna (Russia)

Improvement of spectrophotometrical and chromatographica! of the methods of the analysis containing nitrogen drugs

Theoretically motivated and experimentally is confirmed criteria of the choice of the optimum system of the solvents for determination of the purity of the row containing nitrogen drugs with using TLC on base of the method «latin square» and determinations to dependencies their chromatographical behaviours from acid-main characteristic and composition of the rolling phase. The scientific - methodical of application of external sample comparisons for spectrophotometrical determinations of the drugs were formulated. The optimum conditions of the use external sample comparisons are found in spectrophotometrical drugs. Were ¡stalled functional dependencies, describing inaccuracy of the measurement to absorbances external sample comparisons in optimum area of its absorption, allowing to forecast the mistake of the quantitative determination of the drugs. The designed methods of the quantitative determination of the medical substance and medicinal forms with the use of external sample comparisons. Inaccuracy of the determination for substance does not exceed 1,1%, for medicinal forms - 2%.

Подписано в печать 21 09.2004. Формат 60x84'/, Бумага офсетная. Печать трафаретная. Гарнитура Times. Усл. печ. л. 2,3 Уч.-изд. л. 2,2. Тираж 100 экз. Заказ № 1661.

Отпечатано в Глазковской типографии. 664039, г.Иркутск, ул. Гоголя, 53.Тел. 38-78-40.

\ )

I

» 2 ? 1 3 1

РНБ Русский фонд

2006-4 499

Актуальность темы. Обеспечение населения высококачественными лекарственными средствами — одна из важнейших задач, стоящих перед здравоохранением и фармацевтической наукой.

Одной из главных проблем современной медицины является профилактика и лечение сердечно - сосудистых заболеваний, которые во всех развитых странах мира занимают первое место среди причин смертности лиц старшего и среднего возраста. Ухудшение эпидемиологической ситуации в стране стало одной из причин роста бактериальных и вирусных инфекций. С каждым годом привлекает все большее внимание проблема туберкулеза. Так, за 1991 - 2003 годы заболеваемость туберкулезом в Российской Федерации увеличилась более, чем в 2 раза. Выросла заболеваемость туберкулезом и среди детей. Сложное финансово-экономическое состояние многих групп населения вызывает различные нервно-психические расстройства. Данные заболевания часто являются причиной инвалидизации. Для лечения названных заболеваний широкое применение находят азотсодержащие лекарственные> средства, обладающие сердечно-сосудистым, антибактериальным, противовирусным, психотропным и другими действиями. Эффективность и безопасность лечения данными препаратами во многом зависит от уровня их качества.

На основании критического анализа данных литературы и сравнительной оценки уровня требований и методик анализа, включенных в нормативные документы и зарубежные фармакопеи на лекарственные средства данной группы, установлено, что уровень требований и методы анализа указанной группы препаратов несовершенны и не позволяют объективно оценить их качество. Так, для контроля чистоты ряда препаратов используется химический метод, который является необъективным, так как на результаты реакции могут влиять окислители, восстановители либо вещества, обладающие кислотно-основными свойствами. В некоторых случаях для определения специфических примесей нормативная документация требует применения метода хроматографии на бумаге, который характеризуется длительностью и низкой чувствительностью. Перспективными для контроля чистоты лекарственных средств являются методы жидкостной и тонкослойной хроматографии, которые характеризуются высокой чувствительностью и объективностью. Вопросы хроматографического разделения лекарственных веществ и возможных примесей являются одной из основных и до сих пор еще недостаточно решенных проблем жидкостной и тонкослойной хроматографии. Поэтому исследования в этом направлении в настоящее время являются актуальными.

Количественное определение лекарственных веществ исследуемой группы препаратов проводится титриметрическими методами: нитритометрией, йодометрией, ацидиметрией в среде ледяной уксусной кислоты, муравьиной кислоты или уксусного ангидрида, алкалиметрией в среде метанола и бензола. Указанные методы являются длительными, трудоемкими, токсичными, в некоторых случаях определение ведется по фармакологически неактивной части молекулы. Анализ лекарственных форм ряда препаратов исследуемой группы проводится спектрофотометрическим методом, отличающимся доступностью, простотой методик анализа, экспрессностью, высокой чувствительностью, воспроизводимостью, низкой токсичностью. Более широкому использованию данного метода для анализа субстанций препятствует отсутствие образцов сравнения.

В аналитической практике для спектрофотометрического определения веществ находят применение внешние образцы сравнения, в качестве которых используются химические соединения органической и неорганической природы, отвечающие требованиям, предъявляемым к образцам сравнения. Применение внешних образцов сравнения в практике фармацевтического анализа, где объектами исследования являются жизненно важные соединения, требует детального изучения и обоснования. В связи с вышеотмеченным разработка научно-методологических основ замены образцов сравнения лекарственных веществ на внешние образцы сравнения и проведение систематических исследований по проблемам применения внешних образцов сравнения для оптимизации спектрофотометрического определения азотсодержащих лекарственных средств представляет собой актуальную задачу.

Цель настоящего исследования - совершенствование метода хроматографического контроля чистоты и разработка нового варианта метода спектрофотометрии для анализа азотсодержащих лекарственных средств.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: изучить закономерности хроматографического поведения лекарственных веществ исследуемой группы и их специфических примесей в системах растворителей с различными значениями рН, определить оптимальные условия разделения для разработки методик контроля чистоты конкретных препаратов; исследовать спектральные характеристики внешних образцов сравнения, разработать теоретическое обоснование и осуществить выбор оптимальных образцов сравнения для спектрофотометрического анализа лекарственных средств, обеспечивающих максимальные точность, воспроизводимость и достоверность получаемых результатов; провести изучение спектральных характеристик лекарственных средств исследуемой группы препаратов для оптимизации условий их спектрофотометрического определения с применением внешних образцов сравнения; разработать методики количественного спектрофотометрического анализа исследуемых лекарственных средств с использованием внешнего образца сравнения, обеспечивающие правильность и воспроизводимость получаемых результатов; апробировать и внедрить разработанные способы определения лекарственных средств исследуемой группы препаратов на химико-фармацевтических предприятиях и в Центрах контроля качества лекарственных средств.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармацевтической и токсикологической химии ИГМУ по госбюджетной теме "Контроль качества лекарственных средств с использованием современных методов анализа" (№ Госрегистрации 01910008620), включенной в координационные планы Научного Совета по фармации.

Научная новизна:

1. Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден критерий выбора оптимальной системы растворителей для определения чистоты ряда азотсодержащих лекарственных средств на основе метода "латинского квадрата".

2. Обоснована схема проверки чистоты азотсодержащих лекарственных средств с применением тонкослойной хроматографии на основе установления зависимости хроматографического поведения исследуемых веществ и возможных примесей от их кислотно-основных свойств и состава подвижной фазы.

3. Предложен, теоретически обоснован и экспериментально подтвержден новый вариант одноволнового спектрофотометрического анализа лекарственных средств, основанный на применении внешнего образца сравнения.

4. Впервые разработан и предложен научно обоснованный методологический подход выбора оптимальных внешних образцов сравнения для количественного определения лекарственных средств в одноволновой спектрофотометрии, обеспечивающий максимальную правильность и воспроизводимость получаемых результатов.

5. Разработаны унифицированные методики спектрофотометрического определения азотсодержащих лекарственных средств с применением внешних образцов сравнения, которые апробированы и внедрены в практику работы соответствующих служб.

6. Предложена, теоретически обоснована и применена методика количественного определения многокомпонентной лекарственной формы -линимента синтомицина — с использованием производной спектрофотометрии.

Новизна исследований подтверждена 6 Патентами РФ на изобретения.

Практическая значимость работы. Разработаны методики контроля чистоты пентамина, фтивазида, метазида, ксантинола никотината, аденозина, фосфадена. Разработано 27 методик количественного определения субстанций исследуемой группы препаратов и 31 методика анализа лекарственных форм с использованием нового варианта спектрофотометрического метода. Разработанные методики апробированы и внедрены в ОТК ОАО "Усолье-Сибирский химфармкомбинат", "Дальхимфарм" г. Хабаровска, ХФК г. Белгорода, ХФК г. Львова, Центрах контроля качества лекарственных средств городов Иркутска и Хабаровска, Инспекции по контролю качества лекарственных средств республики Бурятия (г. Улан-Удэ). Получено 73 акта о внедрении и использовании результатов данной работы. Утверждено 4 ФСП ОАО "Усолье-Сибирский химфармкомбинат" и "Дальхимфарм" г. Хабаровска на субстанции фтивазида, метазида, пентамина и раствор для инъекций пентамина. Проект ФСП на субстанцию ксантинола никотината находится на экспертизе в Институте стандартизации. Разработанные методики защищены патентно-лицензионными документами: получено 6 Патентов РФ на изобретения.

Значение методического аспекта работы заключается в том, что результаты данного исследования внедрены в лабораторный практикум ИГМУ по дисциплине "Фармацевтическая химия", включены в учебные пособия "Хроматография. Использование хроматографии в тонком слое сорбента в анализе лекарственных средств" (утверждено Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию ВУЗов России 22.03.2002 для студентов, обучающихся специальности 040500 - Фармация) и "Фотометрия. Теоретические основы метода. Спектрофотометрия. Фотоэлектроколориметрия." (утверждено Центральным Координационным методическим советом ИГМУ 16.12.2003).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены и доложены на: Всесоюзной конференции "Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации" (Ленинград, 1989 г.), Межреспубликанской конференции "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств" (Москва, 1991 г.), научной конференции "Поиск биологически активных веществ и проблемы лекарственного обеспечения" (Уфа, 1991 г.), научно-практической конференции "Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики" (Курск, 1991 г.), Всесоюзной конференции "Фармацевтический анализ -науке и практике " (Москва, 1992 г.), 47, 56, 58 и 59 региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1992, 2001, 2003 и 2004 г.г.), Всероссийской конференции "Поиск, создание и изучение новых лекарственных средств растительного и синтетического происхождения" (Бийск, 1993 г.), Всероссийской конференции "Решение актуальных задач фармации на современном этапе" (Москва, 1994 г.), юбилейной научной конференции фармацевтического факультета, посвященной 75-летию Иркутского государственного медицинского университета (Иркутск, 1996 г.), Ill-VII Всероссийской школе-семинаре «Люминесценция и сопутствующие явления» (Иркутск, 1997-2001 г.г.), Международной конференции "Фармация в XXI веке: инновации и традиции" (Санкт-Петербург, 1999 г.), Международной конференции молодых ученых и специалистов «Оптика-99» (Санкт-Петербург, 1999 г.), II Межрегиональной фармацевтической конференции «Сибирская фармация на рубеже XXI века» (Новосибирск, 2000 г.), Международной научной конференции «Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности» (Томск, 2000 г.), региональной научно-практической конференции «Дальневосточная фармация на пороге третьего тысячелетия» (Хабаровск, 2000 г.), региональной конференции «Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики» (Курск, 2001 г.), региональной научной конференции "Проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Пермь, 2002 г.), VIII Международной школе-семинаре "Люминесценция и лазерная физика" (Иркутск, 2003 г.), юбилейной научно-практической конференции "Фармацевтической службе Республики Бурятия - 80 лет" (Улан-Удэ, 2004 г.).

Обоснованность научных положений и выводов. Научные положения и выводы, приведенные в диссертационной работе, являются результатом исследований, выполненных с использованием современного научно-исследовательского оборудования, применением статистических методов математической обработки результатов и компьютерной техники, что позволяет считать их достоверными. Выводы диссертации основаны на полученных экспериментальных фактах, многократно апробированы и внедрены в практику работы соответствующих служб.

Личный вклад автора в работы, выполненные в соавторстве и включенные в диссертацию, заключается в теоретическом обосновании проблемы, разработке методологической основы спектрофотометрического анализа лекарственных средств с применением внешних образцов сравнения, основополагающим участием в разработке методик количественного определения лекарственных средств на основе оригинального варианта спектрофотометрического анализа и контроля чистоты азотсодержащих лекарственных веществ с применением методов тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 56 работ, в том числе 15 статей в центральных журналах, 6 Патентов РФ на изобретения , 17 статей в сборниках научных трудов, 18 публикаций в материалах Международных и Всероссийских конференций.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Критерии выбора оптимальной системы растворителей для подвижных фаз с использованием метода "латинского квадрата " и установления зависимости кислотно-основных свойств лекарственных средств и состава подвижной фазы в тонкослойной хроматографии.

2. Оптимальные схемы контроля чистоты ряда азотсодержащих лекарственных средств в тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

3. Новый вариант одноволнового спектрофотометрического определения лекарственных средств - метод внешнего стандарта.

4. Методология выбора оптимального внешнего образца сравнения для одноволнового спектрофотометрического анализа лекарственных средств.

5. Унифицированные методики количественного спектрофотометрического анализа однокомпонентных азотсодержащих лекарственных средств.

В диссертационной работе развивается новое научное направление -применение внешних образцов сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств в сочетании с хроматографическими исследованиями их чистоты.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из двух томов. Первый том (379 стр.) содержит введение, обзор литературы, экспериментальную часть, состоящую из 7 глав, выводы, список цитируемой литературы. Второй том состоит из Приложения 1, содержащего таблицы экспериментальных данных, и Приложения 2, где представлены материалы по внедрению.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

На основании теоретических разработок и экспериментальных исследований, проведенных в диссертационной работе, можно сделать следующие выводы:

1. Впервые на основании изучения хроматографической подвижности пентамина, аденозина и фосфадена с помощью математического планирования эксперимента методом «латинского квадрата» оптимизированы системы растворителей для хроматографического контроля их чистоты.

2. На основании проведенных экспериментов с учетом физико-химических свойств ксантинола никотината, фтивазида, метазида, аденозина и фосфадена определены оптимальные условия их хроматографирования методом ТСХ.

3. Используя методы дифференциального исчисления и экспериментальные данные, разработана методология выбора внешних образцов сравнения для одноволнового спектрофотометрического определения лекарственных средств: оптимальным является тот внешний образец сравнения, для которого расстояние между его максимумом поглощения и максимумом поглощения анализируемого вещества (аналитической длиной волны) не превышает половины полуширины спектральной полосы поглощения внешнего образца сравнения. Данная методология позволяет осуществлять прогноз погрешности спектрофотометрического количественного определения азотсодержащих лекарственных средств.

4. Найдены оптимальные условия для использования внешних образцов сравнения в одноволновой спектрофотометрии лекарственных средств: оптимальное значение рН, растворитель, оптимальная концентрация, оптимальная область поглощения.

5. Методом наименьших квадратов рассчитаны уравнения градуировочных графиков для внешних образцов сравнения, позволяющие находить интервалы оптимальных концентраций, и уравнения, описывающие погрешность измерения оптической плотности внешнего образца сравнения в оптимальной области его поглощения, позволяющие прогнозировать ошибку количественного определения лекарственных средств.

6. Разработаны оптимальные условия спектрофотометрического определения азотсодержащих лекарственных средств производных пурина, индола, пиридина, амидов сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола. Установлено, что для количественного определения методом одноволновой спектрофотометрии некоторых лекарственных веществ существует несколько внешних образцов сравнения из числа изученных нами, что позволяет аналитическим лабораториям осуществлять выбор образцов сравнения.

7.Впервые разработаны методики спектрофотометрического количественного определения лекарственных средств производных пурина, индола, пиридина, амидов сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола в субстанциях и лекарственных формах с использованием внешних образцов сравнения. Погрешность определения для субстанций не превышает 1,1%, для лекарственных форм - 2%.

8. Проведена сравнительная оценка методик количественного определения лекарственных средств производных пурина, индола, пиридина, амидов сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола, рекомендуемых НД, разработанных нами и методом ВЭЖХ. Показано, что методики спектрофотометрического определения по внешним образцам сравнения не уступают по точности и воспроизводимости, отличаются доступностью, экспрессностью, отсутствием высокотоксичных реактивов.

9. Впервые разработаны методики определения теста «растворение» и однородности дозирования таблетированных лекарственных форм исследуемой группы препаратов методом одноволновой спектрофотометрии с использованием внешних образцов сравнения.

10. Разработанные методики количественного определения, определения теста «растворение» и однородности дозирования спектрофотометрическим методом с использованием внешних образцов сравнения и контроля чистоты методом ТСХ апробированы и внедрены на ряде химико-фармацевтических предприятий, некоторые из них включены в ФСП и защищены Патентами РФ на изобретения.