Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Синтез,свойства и биологическая активность новых водорастворимых производных на основе Я-(4-гидроксиарил) галогеналканов

На правах рукописи

ои^^-----

КЛЕПИКОВА СОФЬЯ ЮРЬЕВНА 0 о 7П[}£|

СИНТЕЗ, СВОЙСТВА И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ

НОВЫХ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ПРОИЗВОДНЫХ НА ОСНОВЕ со - (4-ГИДРОКСИАРИЛ)ГАЛОГЕНАЛКАНОВ

Специальность 15.00.02. - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь - 2009

003476338

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» г. Томск

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Краснов Ефим Авраамович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Коркодинова Л.М. ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

доктор фармацевтических наук, профессор Халиуллин Ф.А. ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится «22» сентября 2009 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д.208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте ПГФА 11й11:Ау\у\у.р5Га.ги «22» августа 2009 года. Автореферат разослан «21» августа 2009 года

Ученый секретарь

диссертационного совета ^у

кандидат фармацевтических наук, доцент /7, И.А. Липатникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. В ряду проблем, стоящих перед современной фармацевтической химией, одной из наиболее важных является поиск соединений, обладающих высокой биологической активностью и малой токсичностью. Одним из перспективных классов химических соединений удобных для синтеза биологически активных веществ являются ю-(4-гидроксиарил)галогеналканы. Среди соединений, полученных на их основе, имеются вещества, проявляющие in vitro и in vivo выраженную противовоспалительную, антиканцерогенную и гепатопротекторную активность.

ВФАО по сравнению со своими липофильными аналогами (ионол, пробукол) характеризуются большей биологической доступностью и скоростью транспорта в организме, что делает их незаменимыми в качестве средств профилактики и терапии патологических состояний, сопровождающихся развитием окислительного стресса. Направленный синтез новых полифункциональных ВФАО, превосходящих по эффективности существующие аналоги, представляет особый интерес с учетом особенностей взаимосвязи структуры и АОА.

Наряду с изучением эффективности ВФАО в отношении процессов СРО органических субстратов, большое количество работ посвящено оценке иммунотропных свойств ВФАО, изучению влияния ВФАО на иммунологическую реактивность организма и улучшения обменных процессов, а также разработке высокоэффективных биостимуляторов и иммуно-модуляторов, как средств повышения общей резистентности организма. Актуальной проблемой является поиск иммуноактивных соединений с относительно селективным механизмом действия, который сдерживается отсутствием адекватных моделей. Аналогичные проблемы существуют для изучения АОА препаратов.

Таким образом, S-[ш-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонаты и тиосуль-фонаты натрия на основе ш-(4-гидроксиарил)галогеналканов, являются интересными объектами для поиска новых высокоактивных лекарственных субстанций, обладающих гидрофильными свойствами. Актуальным является также установление взаимосвязи «структура-химические свойства» и «структура-антиоксидантная и иммунотропная активность» этого ряда соединений.

Цель работы. Синтез 8-[оз-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов и тиосульфонатов натрия различного строения, изучение их АОА и иммунотропных свойств с целью выявления перспективных веществ для получения эффективных лекарственных средств.

1. Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Разработать удобные препаративные синтезы S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов и тиосульфонатов натрия различного строения из ю-(4-гидроксиарил)галогеналканов.

2. Изучить превращения синтезированных S-[w-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия под действием щелочей, кислот и пероксида водорода.

3. Провести исследование АОА синтезированных соединений и установить ее связь со структурой.

4. Выявить наиболее перспективные соединения среди S-[o-(4-гидроксиарЮ1)алкил]тиосульфонатов и их производных.

5. Провести оценку иммунотропных свойств перспективных соединений.

6. Разработать проект ФСП на лекарственную субстанцию дитретио-фенил - (3-(3,5-ди-да/>т.-бутил-4-гидроксифенил)пропилтиосульфонат натрия).

Научная новизна. Разработаны новые методики синтеза S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов и тиосульфонатов натрия, различающихся по степени пространственного экранирования фенольной ОН-гуппы, строению napa-алкильного заместителя и характеру функциональной группы, обеспечивающей АОА. Всего при выполнении данного исследования было синтезировано более 40 соединений структурно-связанных между собой, строение которых установлено на основании ИК-, ПМР- и УФ- спектров, подавляющее большинство из которых, включая все тиосульфонатные и сульфонатные производные, в соответствии с данными поиска в сети STN International являются новыми, не описанными ранее в литературе.

Установлено, что доминирующим фактором, влияющим на процесс нуклеофильного замещения в реакциях ю-(4-гидрокси-арил)галогеналканов с тиосульфатом (сульфитом) натрия является сила атакующей частицы и природа растворителя.

Выявлены условия кислотного гидролиза 8-[ш-(4-гидро-ксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия, позволяющие с достаточно высокими выходами (60-70%) получать ю-(4-гидроксиарил)алкантиолы и бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфиды.

Впервые проведено сравнительное исследование АОА для 20 синтезированных соединений во взаимосвязи со структурой в различных модельных системах. В результате обнаружены вещества с полифункциональным механизмом действия.

Показано, что соединения, содержащие в «ара-алкильном заместителе тиосульфонатный ионогенный фрагмент, превосходят по АОА свои структурные сульфонатные аналоги. Независимо от природы ионогенного

фрагмента увеличение пространственной затрудненности фенольной ОН-гуппы повышает АОА соединений в отношении окисления метило-леата в ВЭС, образования МДА при инкубации выделенных ЛНП.

Установлено, что тиосульфонатные производные, содержащие в своей структуре алкильные заместители в положениях 2,6 бензольного кольца, превышают по своей АОА, соответствующий им по строению, ФК.

Проведена оценка иммунотропной активности соединений: 3-(3,5-ди-/и/>е/я.-бутил-4-гидроксифенил)- и 3-(3,5-ди-метил-4-гидрокси-фенил)пропилтиосульфонатов натрия у интактных мышей in vitro и у мышей с аутоиммунной патологией in vivo в максимально переносимых дозах. Установлено ингибирующее влияние соединений на спонтанную и митоген-стимулированную пролиферативную активность клеток селезенки интактных мышей in vitro. Выявлена противовоспалительная и радиопротекторная активность исследуемых соединений в моделях in vivo. Разработан проект ФСП на субстанцию дитретиофенил.

Практическая значимость. Предложены эффективные методики синтеза новых ВФАО: 8-[ю-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов и тио-сульфонатов натрия. Показано, что выявленные закономерности взаимосвязи структуры и АОА в рядах синтезированных соединений, могут быть использованы при создании новых структур ВФАО.

По данным исследований, проведенных в НЦКЭМ СО РАМН (г. Новосибирска), НИИ терапии СО РАМН (г. Новосибирска) и НИИ клинической иммунологии СО РАМН (г. Новосибирска), синтезированные тиосульфонаты натрия, содержащие m-mpem-6yim и w-метил алкильные о/7/мо-заместители фенольного кольца, могут найти применение в качестве противовоспалительных, антиканцерогенных и гепатопротек-торных лекарственных средств и нетоксичных иммунодепрессантов с селективным механизмом действия.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы докладывались на III Всероссийской конференции молодых ученых "Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Саратов, 2001), на Международной конференции "Современные проблемы органической химии" (Новосибирск, 2001), на Международной научной конференции "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека" (Смоленск, 2001), на V Молодежной научной школе-конференции по органической химии (Екатеринбург, 2002), на VI Международной конференции "Биоантиоксидант" (Москва, 2002), на IV Международном симпозиуме по химии и применению фосфор- и сера- органических соединений "Петербургские встречи" (Санкт-Петербург, 2002), на ежегодной конференции молодых ученых и аспирантов "Авиценна-2007" (Новосибирск, 2007), на II Международной научной конференции "Химия,

технология и медицинские аспекты природных соединений" (Алматы, 2007), на VI Всероссийском научном семинаре " Химия и Медицина" (Уфа, 2007), на ежегодной конференции аспирантов и молодых ученых "Авиценна-2008" (Новосибирск, 2008), на II конференции с Международным участием "Фармация и общественное здоровье" (Екатеринбург, 2009), на IX Международном медицинском конгрессе "Euromedica - Hannover 2009" (Ганновер, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей, из них 3 в центральной печати и 15 тезисов докладов на конференциях различного уровня.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит го введения, обзора литературы и пяти глав собственных исследований, изложенных на 154 страницах компьютерного набора, иллюстрирована 21 рисунком, 26 таблицами, содержит 176 источника литературы, из которых 48 на иностранных языках, и Приложение I, II.

В обзоре литературы (первая глава) рассмотрены современные представления о фенольных антиоксидантах, их структуре и механизме действия. Проанализирована проблема изучения иммуноактивных свойств фенольных соединений, обладающих АОА. Вторая глава посвящена синтезу, установлению структуры и изучению физико-химических свойств S-[со-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов и сульфонатов натрия. Третья глава содержит исследование АОА 8-[ш-(4-гидрокси-арил)алкил]тиосульфонатов и сульфонатов натрия. В четвертой главе проведен анализ результатов биологических исследований и изучение иммунотропной активности. Пятая глава посвящена разработке проекта ФСП на дигретиофенил - (3- (3, 5 ди-трет.-бутил-4-гидрокси-фенил)пропилтиосульфонат натрия). Экспериментальная часть представлена в шестой главе.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Методики синтеза 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов и сульфонатов натрия взаимодействием оа-(4-гидроксиарил)галогеналканов с соответствующими нуклеофильными агентами (тиосульфатами или сульфитами щелочных металлов) в водном спирте. Установление структуры полученных соединений на основе спектральных исследований.

2. Результаты изучения химических свойств S-[o-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия.

3. Связь структуры полученных соединений с их АОА на модели термического окисления метилолеата в ВЭС.

4. Результаты исследования иммунотропной активности наиболее перспективных синтезированных соединений.

5. Результаты разработки проекта ФСП на субстанцию дитретиофенил.

Работа была поддержана Российским фондом фундаментальных исследований (гранты 01-04-49306 и 02-04-07560).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Синтез 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия Нами было установлено, что структурно-связанные между собой Б-[(о-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты натрия (1а-1Ха), могут быть получены на основе ю-(4-гидроксиарил)галогеналканов (ИХ) различного строения: но

но

PHIgj

ДМФА

(СНг)„ОН

(CHj)„Hlg

где R'=R4-Bu, n=2-4 (II - IV); Rl=Me, R4-Bu, n=3 (V); R'= R^Me, n=3 (VI); Hlg=Cl, Br.

НО —¿ i-(CII2)„— SjOjNa

n=l (la); n=2 (lía); n=3 (Illa); n=4 (IVa) Полученные нами (I-IX), предварительно очищали от сопутствующих примесей посредством вакуумной перегонки и перекристаллизации из этилового спирта. Структура соединений (I-JX) установлена на основании данных ИК-, ПМР- и УФ-спектров.

VIII

•<CH,)j— SjO,Na

Варьированием состава реакционной среды, мольного отношения реагентов (Я-Н^^агБгОз), температуры и длительности синтеза нами был изучен процесс нуклеофильного замещения атома галогена исходных <я-(4-гидроксиарил)галогеналканов (1-1Х) частицей 82032'.

Таблица I

Условия и результаты взаимодействия

ф-(4 - гидроксирил)галогеналканов с натрия тиосульфатом

№ п/п R-Hlg Молярное отношение №25203 Растворитель Температура, °С Длительность реакции, ч Выход соли, %

Iх Вг 1:1 Этанол 96% 76 5-7 -

2х Вг 1:1,2 Этанол 96% 76 5-7 10

Зу Вг 1:1,3 Этанол 96% 100 5-7 13

4х Вг 1:1,4 Этанол 96% 76 5-7 15

5У Вг 1:1,4 Этанол 96% 100 5-7 14

6х Вг 1:1,3 2-Пропанол 82 6-7 -

7х Вг 1:1,4 2-Пропанол 82 5-7 -

8У Вг 1:1,4 Бутанол 93 6-7 -

9х Вг 1:1,2 Этанол 80% 80 5-7 45

10х Вг 1:1,3 Этанол 80% 80 5-7 60

11х Вг 1:1,4 Этанол 80% 80 5-7 90

12у Вг 1:1,4 Этанол 80% 100 8 85

13х Вг 1:1,3 Этанол 70% 78 7 40

14х Вг 1:1,4 Этанол 70% 78 7 55

15у Вг 1:1,4 Этанол 70% 100 8 57

16у С1 1:1,3 Этанол 80% 100 10 10

17" С1 1:1,4 Этанол 80% 115 9 12

18" Вг 1:1,3 Ацетон/этанол 100 8 10

19у Вг 1:1,4 Ацетон/этанол 100 8 12

20у С1 1:1,3 Ацетон/этанол 105 9 9

21у С1 1:1,4 Ацетон/этанол 100 7-8 14

22у Вг 1:1,4 ДМФА/вода НО 8 12

23у Вг 1:1,5 ДМФА/вода 110 9 15

Примечание:

-"-реакция проводилась в открытой системе; -реакция проводилась в ампуле.

Проведенные исследования показали, что в молярном отношении реагентов (Я- Вг:Ка28203- 1:1,4), в среде водного этанола (табл. 1), при температуре кипения растворителя и длительности синтеза 7 ч образуются новые 8-[ш-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты натрия (1а-1Ха) с выходом 75-95% (табл. 3).

Синтез 8-[ш-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов натрия

Нами было установлено, что наиболее целесообразным синтез 8-[ш-4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов натрия (16-1X6) проводить с использованием повышенного давления (ампулы) при 120°С и длительности реакции 7ч, в среде 50% изопропилового спирта в молярном отношении (II-Вг: Из^Оз- 1,6:1) (табл. 2).

В результате, в зависимости от природы исходных со-(4-гидроксифенил)бромалканов (ИХ), нами были получены (16-1X6) различающиеся степенью экранированности фенольной ОН-группы и длиной иора-алкильного заместителя с выходом 74-90% (табл. 3).

Таблица 2

Условия и результаты взаимодействия са-(4 - гидроксирил)галогеналканов

с натрия сульфитом

№ п/п Молярное отношение N82803 Растворитель Температура °С Длительность реакции, ч Выход соли, %

Г Вг 1:1 Метанол 96% 76 7-8 —

2х Вг 1:1 2-Пропанол 95% 82 7 5

3х Вг 1:1 Бутанол 110 6-7 -

4х Вг 1:1 - Этанол 80% 80 5-7 4

5х Вг 1:1 Этанол 96% 78 5-7 -

6х Вг 1:1,2 Этанол 80% 80 5-7 15

7х Вг 1:1,2 2-Пропанол 80% 84 7 12

8х Вг 1:1,2 Бутанол 80% 115 5-7 3

9У Вг 1:1,4 Этанол 80% 95 10 20

10у Вг 1:1,4 2-Пропанол 80% 95 6 30

11у Вг 1:1,4 Этанол 70% 100 7-8 34

12у Вг 1:1,4 Этанол 60% 100 6 48

13у Вг 1:1,4 2-Пропанол 70% 100 7-8 52

14 у Вг 1:1,6 Этанол 60% 100 6 52

15у Вг 1:1,6 2-Пропанол 60% 100 8 68

16у Вг 1:1,6 2-Пропанол 50% 120 8 90

17у Вг 1:1,6 Этанол 50% 110 8 62

18" Вг 1:1,7 2-пропанол 50% 120 7-8 83

Примечание:

-х - реакция проводилась в открытой системе; - у-реакция проводилась в ампуле.

Таблица 3

Выход структурно-связанных 2- R1-4-^-6 R2 - замещенных фенолов

Антиоксвдант Т.пл.,°С Выход, %

Наименование Бругго-формула R1 R3 R2

1а C,5H2304S2Na /-Bu CH2S203Na /-Bu 167-169 75

Па C,6H2;04S2Na /-Bu (CH2)2S203Na /-Bu 145-148 84

Ша Ci7H2704S2Na /-Bu (CH2)3S203Na /-Bu 155-157 95

IVa C„H2904S2Na /-Bu (CH2)4S203Na /-Bu 135-138 89

Va C|4H2104S2Na /-Bu (CH2)3S20,Na Me 170-172 78

Via C,,Hls04S2Na Me (CH2)3S203Na Me 215-217 87

Vila C|3Hi904S2Na /-Bu (CH2)3S203Na H 190-193 82

Villa C9H,|04S2Na H (C^bSjOjNa H 250-252 94

IXa C,0Hi404S2Na H (CH2)3S203Na H 232-234 79

16 Ci5H2304SNa f-Bu CH2S03Na /-Bu 238-240 78

116 C16H2504SNa /-Bu (CH2)2S03Na /-Bu 260-262 85

1116 CI7H2704SNa /-Bu (CH2)3S03Na /-Bu 305-308 90

IVG C,8H2904SNa /-Bu (CH2)4S03Na /-Bu 255-257 83

V6 Ci4H2,04SNa /-Bu (CH2)3S03Na Me 245-247 74

VI6 C|iH1504SNa Me (CH2)3S03Na Me 235-237 79

VII6 CnHi904SNa i-Bu (CH2)3S03Na H 225-227 80

VIII6 C9H„04SNa H (CH2)3S03Na H 282-285 75

1X6 C10H,4O4SNa H (CH2)3S03Na H 274-276 85

Очистку полученных соединений (1а,б-1Ха,б) осуществляли кристаллизацией из ацетона и этанола. (1а,б-1Ха,б) - белые мелкокристаллические порошки без запаха, горьковатого вкуса, плавящиеся без разложения в достаточно широком интервале температур (табл. 3). Легко растворяются в воде и ацетоне; растворимы в спиртах и простых эфирах; мало растворимы в бензоле и хлороформе; не растворимы в предельных углеводородах (определение проводили согласно методикам ГФ XI).

Строение 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов и сульфонатов

По данным поиска в базах данных STN-International (грант 00-0332721) через Новосибирский центр STN в НИОХ СО РАН все соединения (1а,б-1Ха,б) являются новыми, не описанными ранее в литературе.

Анализируя абсорбционные спектры (1а,б-1Ха,б), записанные на спектрометре Specord НР-8453 (фирма "Hewlett Packard", США), растворитель Н20, в диапазоне длин волн 190-350 нм, можно сделать следующее заключение, что все спектры имеют одинаковую форму и характеризуются одним максимумом в УФ области при длине волны 275±2 нм, обусловленный наличием фенольного фрагмента синтезированных соединений (1а,б -1Ха,б).

ИК-спектры, записанные на Фурье-спектрометре Vector 22 (фирма "Broker", Германия) в КВг (150:1), в интервале значений частоты от 500 до 4000 см"1, имеют высокую степень подобия - основные характеристические для синтезированных соединений (1а,б - 1Ха,б) максимумы поглощения обнаруживаются во всех образцах, это указывает на близость их химической структуры. Максимальная интенсивность полос поглощения в ИК - спектрах (1а,б - 1Ха,б), обусловлена валентными колебаниями гидроксильной группой ароматического фрагмента при 3640.2 см'1, алифатическими фрагментами при 2875 см"1, тиосульфонатной группой при 1215.2 см"1 и 1043 см'1 и сульфонатной группой при 1184.7 см"1. ПМР-спектры записывались на спектрометре Broker DR500 фирмы "Broker" (Германия), с рабочей частотой 500 МГц, растворитель D20, внешний стандарт-Si(CH3 )4 В наблюдаемых сигналах, 5, м.д. можно выделить основные области: первая область, определяется сигналами протонов ал-кильных заместителей фенольного фрагмента: 1.438-1.58 м.д.; вторую - от 2.2 м.д. до 3.3 м.д. можно отнести к сигналам алифатических протонов в пара-алкильном заместителе, при этом присутствует мультиплет 2.18-2.25м (2Н; -СНГ), два триплета протонов 2.83-2.9т (2Н; Аг-СНг); 3.13.15т (2Н; -CHrS); третья область характеризуется сигналами ароматических протонов в области 6.901 м.д. - 7.224 м.д.

Кислотный гидролиз 8-[ш-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов Нами установлено, что при подкислении водных растворов (Ia-VIlIa) неорганическими кислотами при эквимолярном отношении соли и кислоты, при 20°С происходит образование ю-(4-гидроксиарил)алкилтиола (1в-VIIIb) соответствующего строению гидролизуемой соли. Выход (Ib-VIIIb) в расчете на исходное соединение через 1 ч составил ~ 23%, через 4 ч ~ 53% (рис.1).

При использовании 5-кратного избытка кислоты в реакционной среде было отмечено образование двух продуктов реакции: ш-(4-гидроксиарил)алкилтиола (1в-УШв) и бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфида (1г-УШг). При этом соотношение тиола и дисульфида в ходе реакции

ео.

Рисунок 1 - Соотношение продуктов кислотного гидролиза в присутствии (Ia-VIIIa)

fli^VUIr)

менялось: если на начальной стадии в среде преобладал тиол, то с течением времени концентрация дисульфида возрастала, и конечный выход через 5ч гидролиза составил 60%. Структура соединений: И^ЯЧ-Ви, п=1-4 (1в,г-1Ув,г); Я'=Ме, ЯЧ-Ви О/в,г); К'=Я2=Ме (У1в,г); Я'=Н, ЯЧ-Ви (УНв,г); К'=К2=Н (УШв,г) установлена на основании данных ИК- и ПМР-спектров.

Окисление 8-[©-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфоиатов гидропероксидами

Окисление водных растворов (1а-УШа) пероксидом водорода в соотношении 1:4, при 20-65°С, приводит к образованию соответствующих по строению бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфидам (1г-УШг). Через 2 ч выход дисульфида составляет ~ 25%, через 4 ч ~ 48%, а через 6 ч - 61%. Окислительный гидролиз (1а-УШа), действием раствора пероксида водорода в кислой среде при 20°С, приводит к образованию дисульфида, минуя стадию образования тиола. Наряду с процессом окисления, при нагревании, под действием Н4 возможен процесс де-трет-бутилирования, что приводит к образованию смеси дисульфида и продуктов конденсации производных ПЗФ. Процесс гидролиза (1а-УШа) можно представить схемой на рис. 2:

—<СН,).5-5-0-М"

(Ia-VIIIa)

{Ib-VIIIB) (Ir-VIIIr)

Рисунок 2 - Схема гидролитического окисления (Ia-VIIIa) Гидролиз 8-[ю-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов в присутствии оснований Щелочной гидролиз синтезированных соединений (Ia-VIIIa) происходит сложно. Нами было установлено, что при эквимолярном соотношении (la-Villa) и щелочи при при 20°С происходит образование дисульфидов. Выход дисульфида через 5 ч составляет 10%. При увеличении содержания щелочи в среде в 2 раза выход достигает 23%, а в 4 раза ~ 46%. Нагревание реакционной смеси до 60°С приводит к образования (1г-Vlllr), однако их выход не превысил 50%. Выделенные со-(4-гидроксиарил)алкилтиолы (Ib-VIIIb) и бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфиды (Ir-VIIIr) могут выступать промежуточными синтонами в ходе синтеза новых форм АО.

Исследование антиоксидантной активности 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил] тиосульфонатов и сульфонатов натрия АОА полученных соединений (1а,б-1Ха,б) определяли манометрическим методом. На модели Си2+ индуцированного окисления метилолеата при 60±0,2*С в ВЭС (вычисляли период индукции (т, мин)). В качестве эталона сравнения использовали ФК.

В результате проведенных исследований нами установлено (табл. 4), что все синтезированные соединения, за исключением анизольных производных (1Ха,б), проявляют АОА. Для соединений (1Ха,б) выявлена про-оксидантная активность.

Таблица 4

Значения периодов индукции(т± Д? мин) при окислении метилолеата в ВЭС

при 60°С в присутствии ВФАО

Антиоксид ант Концентрации АО, 1мМ Концентрации АО, 2мМ

Си 2+3-10"3М Си^б-Ю^М Си 2+3-10"3М Си^бЮ^М

Контроль 23,17±0,68 27,67±0,94 23,17±0,68 27,67±0,94

ФК 45,66±0,94* 161,83±0,57* 92,81±0,71* 300,00±0,84*

C12H25SS03Na 25,22±0,40 30,81±0,54** 42,31±0,48** 54,23±0,56

IXa 17,82±0,85** 22,95±0,91 13,28±0,49 24,80±0,71**

1X6 11,23±0,35 19,92±0,78** 10,30±0,54 17,61±0,78

Villa 41,2±0,44 42,52±0,92* 53,11±0,28** 55,60±0,63

VIII6 29,83±0,62** 34,35±0,78* 38,28±0,91 64,30±0,68*

Vila 53,54±0,71* 88,4±1,02* 64,52±0,89* 112,22±0,59*

VII6 45Д5±0,64* 54,13±0,68 59,28±0,46 83,12±0,84

Illa 113,10±0,67* 275,12±0,85* 258,41±0,71* 400,00±0,88*

Шб 83,54±0,40** 216,3±0,62* 200,31±0,54* 350,00±0,26*

Примечание'.

* -достоверное различие (р<0,05) по сравнению с контролем;

**- достоверное различие (р<0,05) по сравнению с препаратом сравнения.

Соединения, в оряго-положениях которых не содержатся алкильные заместители (Villa,б), имеют близкие значения периодов индукции с соединениями, в структуре которых присутствует одна »у?е»Н5утильная группа (Vila,б) и существенно уступают по АОА соединениям (Ша,б), содержащим две /ярет-бутильные группы в орто-положении.

Для соединений (VIIa,6 - Villa,б) и ФК установлена близкая АОА в тестируемых условия, при этом соединения (Illa,б) превосходили в несколько раз известный АО ФК (табл. 4).

Тиосульфонатные производные в сравнении с соответствующими им по строению сульфонатными обладают большей АОА. Так, значение периода индукции в присутствии ДТС свидетельствует об активности

тиосульфонатного фрагмента.

Снижение АОА с уменьшением пространственной затрудненности ОН-группы (рис. 3) в ряду тиосульфонатов (Уа-УШа) и сульфонатов (Уб-УШб) хорошо согласуется с общепринятым механизмом действия ВФАО, чем и объясняется снижение АОА в ряду соединений (УНа,б - УШа,б).

Рисунок 3 - Кинетика окисления метилолеата в присутствии добавок Ша-б, УНа-б 1мМ при 60*С в сравнении с ФК

Время, мин

При этом различия в АОА о/?/ио-замещенных соединений были выражены в меньшей степени, тем не менее, их ингибирующее действие усиливалось при увеличении числа орюо-заместителей и при замене метальных ор/яо-заместителей на /яреда-бутильные. По своей способности ингибировать процесс инициированного окисления метилолеата в ВЭС синтезированные соединения расположились следующим образом: Illa ~ Vía > Va >VIIa > Шб = VI6 > V6 > VII6.

Характер изменения АОА от строения шра-алкильной цепи, разделяющей фенольный и ионогенный фрагменты, рассмотрено нами на примере (Ila-IVa) и их структурных аналогов (II6-IV6).

Таблица 5

Значения т (мин) при окислении метилолеата в ВЭС при 60°С в присутствии

Соединение Яоро-алкильный заместитель, R (t ± Дт), мин

Контроль 94,89±0,65

На (CH2)2SS03Na 253,52±0,58*

Illa (CH2)3SS03Na 325,67±0,59*

IVa (CH2)4SS03Na 278,53±0,92*

116 (CH2)2S03Na 187,53±0,67*

Шб (CH2)jS03Na 190,5±0,53*

IV6 (CH2)4S03Na 189,69±0,78*

Примечание: *- достоверное различие (р<0,05) по сравнению с контролем.

Согласно полученным результатам (табл. 5) четкой корреляции между строением иара-алкильного заместителя и АОА не наблюдалось: наиболее выгодным удалением функциональной группы от фенольного фрагмента является наличие в иара-алкильном заместителе пропильного хвоста. В случае соединений (На,б и IVa,6) возможно наличие стериче-ских эффектов, определяющих данным соединениям более низкие значения периодов индукции в сравнении с соединениями (Ша,б) в изучаемых условиях окисления метилолеата.

Наряду с тестированием АОА синтезированных соединений на модели Си2+индуцированного окисления метилолеата при 60°С в ВЭС, АОА (1а,б-1Ха,б) оценивали на модели Си2+ (5мкМ CuS04) и Fe2+ (25мкМ FeS04) индуцированного окисления ЛНП при 37°С в течении 30 мин. Эксперимент проводили совместно с Н.К. Зенковым на базе ГУ Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (г.Новосибирска) и сотрудниками лаборатории экспериментальных моделей атерогенеза НИИ терапии СО РАМН (рук. д.м.н. М.И. Душкин). Установлено, что соединения (Illa,б) по АОА близки к ионолу на модели Си2+индуцированного окисления ЛНП и превышают эффективность ио-нола в случае Ре2+индуцированного окисления. При этом соединение Ша превосходило соответствующий по строению ФК.

Таким образом, полученные нами результаты показывают, что анти-оксидантные свойства исследованных ВФАО в модельных условиях существенно зависят как от характера экранирования фенольной ОН-группы, так и от природы ионогенного фрагмента в пара-алкильном заместителе. Введение тиосульфонатной группы в иоря-алкильный заместитель ВФАО усиливает их АОА в различных экспериментальных системах, что делает данный класс соединений перспективным в плане создания новых лекарственных препаратов.

Исследование иммунотропной активности

Исследование иммунотропной активности проводили совместно с О.П. Колесниковой на базе ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН (г. Новосибирска). Исследование пролиферативной активности проводили в ряду соединений (Ша, Via) в дозах 2 мкг/мл, 20 мкг/мл и 200 мкг/мл на спонтанную и стимулированную митогенами ConA, PWM, LPS пролиферацию Т- и В- клеток селезенки интактных мышей. Полученные результаты представлены на (рис. 4).

В результате проведенных исследований нами установлено, что (Via) в дозе 20 мкг/мл дозозависимо подавляет спонтанную пролиферацию на 47%, a ConA, PWM и LPS- стимулированную пролиферацию клеток селезенки соответственно на 43%, 45% и 39%, а в дозе 200 мкг/мл - спонтанную на 58%, ConA - на 75%, PWM - на 72% и LPS - на 69%.

(Illa) в двух дозах подавляет спонтанную пролиферацию соответственно на 62% и 80%. В дозе 20 мкг/мл ингибиция митоген-индуцированной пролиферации равна: СопА - на 55%, PWM - на 53%, LPS - на 56%.

О VI а (20 мкг/мл) о VI а (200 мкг/мл) Dill а (20 мкг/мл) О III а (200 мкг/Мл)

Рисунок 4 - Влияние ВФАО на спонтанную и митоген-стимулированную пролиферацию клеток селезенки in vitro

S 80

1

2

3

4

Примечание: достоверно по отношению к контролю *- р < 0,05; ** - р < 0,01; *♦* -р <0,001.

1-спонтанная; 2-ConA; 3-PWM; 4-LPS

При этом подавление СопА, PWM и LPS-стимулированной пролиферации клеток селезенки в дозе 200 мкг/мл сводится практически до нуля. Показано, что соединения (Vía и Ша) в дозе 2 мкг/мл не проявляют значительного эффекта на ингибицию спонтанной и митоген-индуцированной пролиферации.

Эффективность соединений (Via и Ша) в дозе 200 мкг/мл, была показана нами при исследование эффекта соединений (Via и Ша) в указанной дозе на спонтанную и стимулированную митогенами СопА, PWM пролиферацию лимфоцитов периферической крови больной ревматоидным артритом. Установлено, что оба соединения резко и достоверно подавляют спонтанную и митогенстимулированную пролиферацию. (Via) подавляет спонтанную - на 77%, СопА - на 96%, PWM - на 57%; (Illa) соответственно спонтанную - на 91%, СопА - на 98%, PWM - на 98%. Полученные результаты совпадают с данными предыдущих опытов, проведенных на клетках селезенки интактных мышей in vitro.

Исследование максимально переносимой дозы соединений (Illa и Via) у интактных мышей гибридов (СВА х C57B1/6)F1 оценивали изменением в лейкоцитарной формуле в пределах ± 20% после в/б введения соединений (Ша и Via) в максимально переносимой дозе, соответственно 35 мг/кг и 200 мг/кг в течение 7 дней. Результаты опытов in vivo представлены в табл. 6. Установлено, что (Ша) не оказывает эффекта на массу тела, селезенки, тимуса, при этом незначительно снижая массу лимфоузла на 13 %. Об этом свидетельствует отсутствие статистически достоверных отличий между показателями опытной и контрольной групп мышей. При этом, (Via) статистически достоверно увеличивает массу тела на

9%, также увеличивает массу лимфоузла на 27%, снижает массу тимуса на 16% и не оказывает существенного влияния на массу селезенки.

Таблица 6

Влияние максимально переносимой дозы Ша и Via на массу тела и органов

Масса

Группа Тело (г) % Селезенка (мг) % Тимус (мг) % Лимфоузел (мг) %

Контроль PBS 24,5±0,46 100 83,5±3,85 100 35,7±3,3 100 3,0±0,24 100

Ша (35мг/кг) 25,1 ±0,53 +2 85,8±2,66 +3 35,0±2,92 -2 2,6±0,22 * -13

Via (200мг/кг) 26,6±0,55 * +9 87,5±2,17 +5 30,0±2,10* -16 3,8±0,32** +27

Примечание: достоверно по отношению к контролю *- р <0,05; ** - р <0,01; *** - р < 0,001.

При изучении влияние максимально переносимой дозы соединений (Ша, Via) на клеточность органов было обнаружено, что оба соединения не оказывают эффект на клеточность селезенки, незначительно снижают количество клеток костного мозга. (Ша) статистически достоверно снижает количество клеток тимуса на 39%, лейкоцитов - на 29%. (Via) достоверно снижает количество клеток тимуса на 45%, лейкоцитоз снижает на 22%, что позволило нам сделать вывод об миелодепрессивных свойствах у исследованных соединений..

Исследование эффекта соединений (Ша и Via) на первичный гуморальный иммунный ответ (IgM) у интактных мышей (СВА х C57B1/6)F, оценивали in vivo по абсолютному и относительному количеству антите-лообразующих клеток (АОК) в селезенке.

Начиная со дня в/в иммунизации 0,1% эритроцитами барана в течение четырех дней животным в/б вводились исследуемые соединения в двух дозах: (Illa) - 2 мг/кг и 10 мг/кг, (Via) - 10 мг/кг и 100 мг/кг. На следующий день после последней инъекции оценивали влияние соединений, введенных на фоне иммунизации Т-зависимым антигеном на число клеток в селезенке и количество АОК. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 7.

Выявлено, что 4-х кратное введение (Illa) в дозе 2 мг/кг и (Via) в дозе 10 мг/кг на фоне иммунизации не влияют на количество клеток в селезенке по сравнению с контролем и, практически не влияет на количество абсолютного IgM АОК. При этом для (Illa) в дозе 10 мг/кг и (Via) в дозе 100 мг/кг наблюдается достоверное снижение абсолютного количества IgM АОК на 40% и 29%, а относительного количества IgM АОК на 27% и 23%, оба соединения (Ша и Via) в указанных дозах практически не влияют на число клеток в селезенке.

Таблица 7

Влияние Illa и Via на первичный гуморальный иммунитет_

Количество

Группа АОК/селезенка % КС X 10 6/селезенка % АОК /106КС %

Контроль (PBS) 6191±2174"» 100 128±15,0 100 61 ±29 100

Illa (2 мг/кг) 6904±2133 +12 119±17,0 -2 82±30,8* +34

Ша(10мг/кг) 3667±640*** -40 117±16,0 -5 39±12,0* -27

Via (10 мг/кг) 5536±865* -И 120±12,0 +1 52±11,0* -15

Via (100 мг/кг) 3797±1283*** -29 109±13,0* -11 41±16,7* -23

Примечание: —**♦» АОК/селезенку в норме -10®

—достоверно по отношению к контролю *- р < 0,05; ** - р < 0,01; *** -р< 0,001.

Таким образом, введение ВФАО на фоне иммунизации (Т-зависимая активация В-клеток, синтезирующих IgM АОК) выявляет иммунодепрессивные свойства соединений (Illa и Vía).

Исследование противовоспалительной активности проводили по способности соединений подавлять развитие аутоиммунного заболевания

- иммунокомплексный гломерулонефрит. Введение тестируемых соединений осуществляли в два этапа в/б через день в дозах: Ша - 35мг/кг, Vía

- 200мг/кг. Перерыв между курсами составил 3 дня. После первого и второго курса на следующий день измеряли протеинурию. Содержание белка в моче определяли колориметрически при длины волны X 570нм.

Установлено, что (Ша) после 1-го курса лечения не оказывало эффекта, a (Via) снижало уровень белка в моче на 17% (табл. 8). После 2-го курса, наблюдается достоверный эффект действия обоих соединений: (Ша) снижало протеинурию на 32%, a (Via) - на 43%.

Таблица 8

Влияние курсового в/б введения Illa и Via на протеинурию_

Белок в моче (мг/мл)

Группы До лечения % После 5-кратного введения % После 10-кратного введения %

Ша (35 мг/кг) 6,32±0,30 100 6,47±0,44 102 4,31±0,35» 68

Via (200 мг/кг) 6,65±0,75 100 5,53±0,27* 83 3,82±0,82» 57

Примечание: Достоверно по отношению к контролю *- р < 0,05; - р < 0,01;

*♦* -р<0,001.

Оценивая в целом эффекты соединений (Illa и Via) in vivo в подавлении развития аутоиммунного заболевания, можно отметить, что соединения, являющиеся ВФАО, содержащие ди - метил, ди - трет-бутт орто-чшъстители обладают выраженными противовоспалительными свойствами.

Существующие в настоящее время иммунодепрессанты (циклофос-фамид, азатиоприн) токсичны. По результатам проведенных исследовании первичной оценки токсичности, проведенной под рук. д.м.н., А.В. Копанева в НИИ гигиены питания СО РАН (г. Новосибирска), соединение (Via) можно отнести к малотоксичным (LD50 - 1000 мг/кг в/б мыши), a (Illa) - к среднетоксичным (LD50 - 175мг/кг в/б мыши).

Исследование радиопротекторной активности. После 4-дневного курса в/б введения тестируемых соединений (Ша и Via) в двух дозах в объеме 0,5 мл, мышей самок (СВА х C57B1/6)F1 летально облучали (в дозе 850R). На 10, 20 и 30 сутки после облучения проводили подсчет выживших мышей. Установлено, что при низких концентрациях соединений (Ша и Via) в дозах 2 мг/кг и 10 мг/кг, наблюдается лишь незначительное увеличение продолжительности жизни, однако не превышающее 10 суток. При увеличении дозы (Illa) до 20 мг/кг, (Via) -100 мг/кг, наблюдается стойкое увеличение до 90% выживаемости животных, подверженных острому летальному облучению.

Исследование эффекта соединений (Illa и Via) на образование эндогенных колоний. Мышей самок (СВА * C57B1/6)F1) подвергали острому летальному облучению в дозе 600R, после чего животных разделили на 8 групп по 10 голов. Мышам в/б по 0,5 мл вводились (Ша) в дозах 2 и" 20 мг/кг, (Va) -10 и 100 мг/кг. Курс введения соединений составил 4-кратное ежедневное введение. На 8-е сутки после облучения проводили подсчет колониеобразующих единиц селезенки (КОЕс-8). Результаты исследования показали, что (Illa) в дозе 10 мг/кг и (Via) - 100 мг/кг существенно не влияют на пролиферацию стволовых кроветворных клеток. При этом показано, что в дозе 2 мг/кг (Illa) достоверно влияет на гемопоэз уменьшая его в 1,8 раза (1,9±0,6) по сравнению с группой контрольных животных (3,5±0,9).

Исследование эффекта соединений (Illa и Via) на образование экзогенных колоний. Мышей самцов (СВА * C57B1/6)F1) подвергали летальному облучению в дозе 850R. В этот же день, облученным мышам в/в переносили клетки костного мозга в дозе (5х 104) от мышей-доноров, которым за сутки до опыта однократно в/б вводили в объеме 0,5 мл (Illa) в дозе 2мг/кг, (Va) - 10 мг/кг. В качестве контроля использовались клетки костного мозга животных, которым в том же объеме вводили растворитель. На 8-е сутки после облучения проводили подсчет колоний в селезенке. Установлено, что число экзогенных колоний в селезенках опытных мышей в присутствии (Illa) составляет (8,7±0,9), что в 1,7 раза меньше, чем (КОЕс-8) в селезенке контрольных мышей (14,9+1,2). При в/б введении опытным мышам (Via) в дозе 10 мг/кг за сутки до летального облучения число (КОЕс-8) экзогенных колоний в селезенке

опытных мышей составило (11,3+1,0), что в 1,3 раза меньше по отношению к контролю. Отмечено стойкое, статистически достоверное подавление процесса гемопоэза (тестируемое по количеству КОЕс-8).

При обработке результатов исследования использовали параметрический (t-критерий Стьюдента) метод с определением средней арифметической (х) и ее стандартной ошибки (Дх). Значимость различий считали достоверной при Р, < 0,05. Достоверность различий оценивали по критерию U (Манна-Уитни) и с применением многомерного дисперсионного анализа MANOVA. Расчеты проводили с использованием программы "Statistica for для Windows 7,0".

Проект ФСПразработан на дитретиофенил - 3- (3, 5 ¡щ-трет-бутш-4-гидроксифенил)пропилтиосульфонат натрия (Ilia) в качестве фармакологически активной субстанции, обладающей гидрофильными свойствами и выраженной АОА. Оформление проекта ФСП проведено в соответствии с ОСТ № 91500.05.001-00 "Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения". Проект ФСП разработан кафедрой фармацевтической химии Сибирского государственного медицинского университета (зав. кафедрой, профессор Е.А. Краснов), совместно с Новосибирским НИИ химии антиоксидантов (зав. кафедрой, доцент А.Е. Просенко).

Для характеристики дитретиофенила предложены: международное непатентованное название (МНН) на русском языке, химическое название в соответствии с требованиями ИЮПАК, структурная формула и молекулярная масса, описание внешнего вида, растворимость, подлинность, температура плавления, прозрачность и цветность, определение остаточных органических растворителей, потеря в массе при высушивании, микробиологическая чистота, количественное определение, которые определены по ГФ XI изд. С учетом выявленных нормативов методом "ускоренного старения" установлено, что срок годности дитретиофенила составляет 3 года.

Разработка методики количественного определения дитретиофенила Для установления количественного определения дитретиофенила был использован метод спектрофотометрии в УФ-области. Измерение величины оптической плотности растворов дитретиофенила проводили на спектрофотометре СФ-56 в кварцевых кюветах с толщиной поглощающегося слоя 1 см при длинноволновом максимуме поглощения (275±2 нм). Подчинение основному закону светопоглощения соблюдалось в области концентраций 1,9-10"3 - 1,910"2%. Вычисление среднего значения оптической плотности (D) проводили в результате трехкратной повторяемости эксперимента. На основе полученных данных строили градуировочный график D = f(C). Установлено, что зависимость величины оптической

плотности от концентрации спиртового раствора дитретиофенила носит линейный характер. Результаты расчета величины удельного показателя поглощения (Е1см10") представлены в таблице 9.

Таблица 9

Расчет величины Е1% ¡^дитретиофенила при X = 275±2нм

№ п/п Навеска вещества, г Концентрация раствора,! О"2 % 1 Оптическая плотность (Б) Удельный показатель поглощения Е1%]см Среднее значение удельного показателя поглощения Е,%1см (Р=95%)

1 0,0013 0,19 0,078 41,17 41,2±0,06

2 0,0019 0,38 0,161 41,22

3 0,0029 0,57 0,212 41,22

4 0,0038 0,76 0,315 41,17

5 0,0048 0,95 0,351 41,25

6 0,0057 1,1 0,473 41,25

7 0,0069 1,3 0,568 41,30

8 0,0076 1,5 0,617 41,25

9 0,0086 1,7 0,651 41,25

10 0,0096 1,9 0,737 41,12

Примечание: Объем мерной колбы 50 мл.

Методика количественного определения дитретиофенила. 0,0096 г дитретиофенила (точная навеска) помещают в мерную колбу со шлифом вместимостью 50 мл, при 20°С добавляют 95% этанол и доводят этанолом 95% до метки. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре через 10 мин, при X 275±2 нм. Параллельно измеряют оптическую плотность контрольного раствора (этанол 95%). Количественное содержание дитретиофенила в процентах (X) в субстанции вычисляют по формуле:

X = Б ■ 50 • п / т-Е1см1'/\

где О - оптическая плотность испытуемого раствора; 41,2 - удельный показатель поглощения (Е1см1%) спиртового раствора дитретиофенила при длине волны 275 ± 2нм (табл. 9); ш - навеска препарата, г; V - объем этанола, мл; п - разведение.

Разработанная методика отличается хорошей воспроизводимостью (в2 = 0,007) и небольшой погрешностью (е = 1,34%), что дало основание включить ее в проект ФСП.

выводы

1. Впервые осуществлен синтез новых серосодержащих водорастворимых антиоксидантов различного строения, оптимизированы условия взаимодействия со- (4-гидроксиарил)галогеналканов с солями щелочных металлов и разработаны эффективные методики получения 5-[со-(4-гидрокси-арил)алкил]тиосульфонатов и сульфонатов натрия.

2. Изучено взаимодействие S- [со- (4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия с кислотами. Установлено, что в кислой среде S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты натрия подвергаются окислению с образованием соответствующих со-(4-гидроксиарил)алкил]тиолов с выходами 5065%.

3. Разработаны условия щелочного гидролиза S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия, позволяющие гладко с хорошими выходами получать бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфиды.

4. Исследован химизм окисления 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]-тиосульфонатов натрия под действием пероксида водорода; выявлено, что при нагревании водных растворов, происходит образование соответствующего бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфида, а окислительный гидролиз в присутствии кислоты приводит к выделению бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфидов, минуя стадию образования ш-(4-гидроксиарил)алкил]тиолов.

5. Впервые установлено, что синтезированные соединения S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты натрия и соответствующие им сульфона-ты натрия проявляют свойства водорастворимых антиоксидантов. В исследованных модельных реакциях in vitro проявляют ингибирующую активность, степень выраженности которой зависит от строения молекулы антиоксиданта и от условий окисления.

6. Среди 20 синтезированных соединений выявлены некоторые закономерности между строением и иммунной активностью. Установлено, что наиболее выраженным влиянием на пролиферативную активность иммунокомпетент-ных клеток in vitro и на пролиферацию лимфоцитов периферической крови человека, больного ревматоидным артритом обладают 3-(3,5-ди-трет.-бутил-4-гидроксифенил)- и 3-(3,5-ди-меггил-4-гидроксифенил)пропил-тиосульфонаты натрия.

7. Оценивая в целом эффект максимально переносимой дозы 3-(3,5-ди-трет. -бутил-4-гидроксифенил)- и 3-(3,5-ди-метил-4-гидроксифенил)-пропилтиосульфонатов натрия in vivo, обнаружено, что оба соединения обладают иммунодепрессивным действием, проявляя дозозависимое снижение первичного гуморального иммунного ответа и достоверное подавление пролиферации стволовых кроветворных клеток костного мозга.

8. На экспериментальных моделях in vivo установлено, что S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты натрия проявляют выраженную противовоспалительную и радиопротекторную активность.

9. По результатам исследования разработан проект ФСП на дитретиофенил - (3-(3,5-ди-мрет.-бутил-4-гидроксифенил)пропилтиосульфонат натрия).

22

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Клепикова, С. Ю. Синтез водорастворимых биологически активных веществ на основе со-(4-оксиарил)галогеналканов / С. Ю. Клепикова// Сб. науч. трудов. - Новосиб. гос. пед. ун-та. - Новосибирск, 2000. - Вып. II. - С. 116121.

2. Клепикова, С. Ю. Исследование антиоксидантной активности сульфонатов и тиосульфонатов ю-(4-оксиарил)пропильного ряда / С. Ю. Клепикова, А. Е. Просенко // Сб. науч. трудов. - Новосиб. гос. пед. ун-та. - Новосибирск, 2000. -ВыпЛ.-С. 116-119.

3. Влияние антиоксидантов на функциональную активность мононуклеарных клеток периферической крови больных вирусным гепатитом С / И. Ф. Фрид-лянд, А. Е. Просенко, С. Ю. Клепикова [и др.] // Мед. иммунология. - СПб., 2001.-Т. 3,№ 2.-С. 243.

4. Синтез и исследование антиоксидантных свойств новых водорастворимых серосодержащих фенольных соединений / А. Е. Просенко, С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева [и др.] // Бюл. СО РАМН. - Новосибирск, 2001. - № 1. -С. 133-134.

5. Синтез и исследование антиокислительной активности новых водорастворимых производных на основе апкилированных фенолов : Тез. докл. III Все-рос. конф. молодых ученых "Современные проблемы теорет. и эксперимент, химии" / С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко [и др.]. -Саратов: Изд-во Сарат. гос. ун-та, 2001. - С. 110-111.

6. Синтез полифункциональных водорастворимых антиоксидантов на основе со-(4-оксиарил)галогеналканов : Тез. докл. III Междунар. конф. "Современные проблемы органической химии"/ Н. В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко, С. Ю. Клепикова [и др.]. - Новосибирск: Изд-во СО РАН, 2001. - С. 95.

7. Исследование защитного действия новых полифункциональных водорастворимых фенольных антиоксидантов на развитие ССЦ,-индуцированного токсического гепатита : Тез. докл. национ. науч.-практич. конф. с междунар. участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека"/ Е. И. Терах, С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева [и др.]. - Смоленск: Изд-во Смолен, город, тип., 2001. - С. 160-162.

8. Исследование антиокислительной активности новых полифункциональных водорастворимых антиоксидантов фенольного типа: Тез. докл. национ. науч.-практич. конф. с междунар. участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека"/ С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко [и др.]. - Смоленск: Изд-во Смолен, город, тип., 2001. - С. 35-37.

9. Направленный синтез водорастворимых антиоксидантов с бифункциональным механизмом противоокислительного действия : Матер. VI Междунар. конф. " Биоантиоксидант" / Н. В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко, С. Ю. Клепикова [и др.]. - М., 2002. - С. 232-234.

10. Сульфонатные и тиосульфонатные соли на основе ю-(4-гидроксиарил)-алкилгалогенидов как водорастворимые антиоксиданты: Матер. V Молодеж. науч. школы-конф. по орг. химии / С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко [и др.]. - Екатеринбург: Изд-во УрО РАН, 2002. - С. 229.

23

11. Сеньшина, Е. С. Взаимодействие тиосульфонатных и изотиурониевых производных га-(3,5-ди-трет-бугил-4-гидроксифенил)апкильного типа с гид-ропероксвдами : Матер. XL Междунар. науч. конф. "Науч.-технич. прогресс. Химия" I Е. С. Сеньшина, Н. В. Кандалинцева, С. Ю. Клепикова. - Новосибирск, 2002. - С. 161-162.

12. Применение антиоксидантов на основе экранированных фенолов в качестве модуляторов воспалительных процессов : Матер. Всерос. конф. компенсаторных приспособ, процесс.: Фундамент, и клинич. аспекты / Н. К. Зенков, Е. Б. Меньшикова, А. Е. Просенко А.Е. [и др.]. - Новосибирск, 2002. - С. 177179.

13. Изучение антиокислительных свойств серосодержащих фенольных соединений : Матер. VI Междунар. конф. "Биоантиоксидант" / Н. К. Зенков, Е. Б. Меньшикова, А. Е. Просенко [и др.]. - М., 2002. - С. 201-202.

14. Клепикова, С.Ю. Анализ взаимосвязи иммунной и антиоксидантной защиты водорастворимых препаратов синтетического происхождения : Матер, ежегод. конф. аспирантов и молодых ученых "Авиценна-2007" / С. Ю. Клепикова.- Новосибирск : Сибмедиздат НГМУ, 2007. - С. 457-458.

15. Изучение иммунотропности полифункциональных водорастворимых антиоксидантов in vitro / С. Ю. Клепикова, О. П. Колесникова, А. Е. Просенко [и др.] // Мед. иммунология. - СПб., 2008. - Т. 10, № 2-3. - С. 269-272.

16. Биологическая активность соединений серы на основе экранированных фенолов : Тез. докл. И Междунар. науч. конф. "Химия, технология и мед. аспекты природ, соединений" / С. Ю.Клепикова, О. П. Колесникова, А. Е. Просенко [и др.]. - Алматы, Казахстан, 2007. - С. 95.

17. Синтез и иммунотропная активность серосодержащих фенольных соединений : Тез. докл. VI Всерос. науч. семинара "Химия и медицина" / С. Ю. Клепикова, Е. А. Краснов, А. Е. Просенко [и др.]. - Уфа, 2007. - С. 57-58.

18. Клепикова, С. Ю. Иммунокоррекция водорастворимыми антиоксидантами : Матер, ежегод. конф. аспирантов и молодых ученых "Авиценна - 2008" / С. Ю. Клепикова. - Новосибирск: Сибмедиздат НГМУ, 2008. - С. 394-395.

19. Клепикова, С. Ю. Количественное определения дитретиофенила методом спекгрофотометрии в УФ-области : Тез. докл. II конф. с междунар. участием "Фармация и общественное здоровье" / С. Ю. Клепикова, Е. А. Краснов, А. Е. Просенко. - Екатеринбург, 2009. - С. 105-107.

20. Ditretiophenyl a new water-soluble antioxidant with immunodepression activity : Material IX Internation. Congress of medicine «Euromedica - Hannover 2009» / S. U. Klepikova, E. A. Krasnov, O. P. Kolesnikova et al. - Hannover, 2009. - P. 41. - ISBN 978-3-00-025967-8.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АОА - антиоксидантная активность

АО - антиоксидант

ВЭС - водно-эмульсионная среда

ВФАО - водорастворимый фенольный антиоксидант

ДТС - додецилтиосульфоната натрия

ЛНП - липопротеины низкой плотности

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПЗФ - пространственно-затрудненные фенолы

СРО - свободно-радикальное окисление

ФК - 3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропионат калия

Отпечатано в типографии Новосибирского государственного технического университета 630092, г. Новосибирск, пр. К. Маркса, 20, тел./факс (383) 346-08-57 формат 60X84/16 объем 1.75 п.л., тираж 100 экз.. заказ № 300 подписано в печать 15.06.09 г.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В ряду проблем, стоящих перед современной фармацевтической химией, одной из наиболее важных является поиск соединений, обладающих высокой биологической активностью и малой токсичностью. Одним из перспективных классов химических соединений, удобных для синтеза биологически активных веществ являются (о-(4-гидроксиарил)галогеналканы. Среди соединений, полученных на их основе, имеются вещества, проявляющие in vitro и in vivo выраженную противовоспалительную, антиканцерогенную и гепатопротекторную активность [85].

Водорастворимые фенольные антиоксиданты (ВФАО) по сравнению со своими липофильными аналогами характеризуются большей биологической доступностью и скоростью транспорта в организме, что делает их незаменимыми в качестве средств профилактики и терапии патологических состояний, сопровождающихся развитием- окислительного стресса [38, 54, 61]. Направленный синтез* новых. полифункциональных ВФАО, превосходящих по эффективности существующие аналоги, представляет особый, интерес с учетом особенностей взаимосвязи структуры и антиоксидантной.активности (АОА).

Наряду с изучением эффективности ВФАО в отношении процессов свободнорадикального окисления (СРО) в реакциях перекисного окисления липидов (ПОЛ), большое- количество работ посвящено оценке иммунотропных свойств ВФАО, изучению влияния ВФАО на иммунологическую реактивность организма и улучшения обменных процессов, а также разработке высокоэффективных биостимуляторов и иммуномодуляторов, как средств повышения общей резистентности организма [44, 77, 147-149].

Актуальной-проблемой является поиск иммуноактивных соединений с относительно селективным механизмом действия, который сдерживается отсутствием адекватных моделей. Аналогичные проблемы существуют для изучения антиоксидантных свойств препаратов [117].

Актуальность синтеза ВФАО, имеющих в своей структуре серосодержащие ионогенные фрагменты, обусловлена не только исторически сложившимся интересом к синтезу и биологической активности органических производных тиосульфонатов,, но и тем, что структурные природные аналоги этих соединений - 2,3-диметил-1,4-бутадиен тиосульфонаты, выделенные из растения Allium сера — обладают анальгетическим, фунгицидным и фунгистатическим действием [107].

Таким образом, 8-[о>-(41гидроксиарил)алкил]сульфонаты и S-[a>-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты на основе со-(4-гидроксиарил)-галогеналканов, являются интересными объектами для поиска новых высокоактивных лекарственных субстанций, обладающих гидрофильными свойствами. Актуальным является также установление взаимосвязи . «структура — химические свойства» и «структура — антиоксидантная и иммунотропная активность» этого ряда соединений.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Синтез 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов натрия и 8-[ш-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия различного строения, изучение их АОА и иммунотропных свойств с целью выявления " перспективных веществ для получения эффективных лекарственных средств.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Разработать удобные препаративные синтезы S-[a>-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов и 8-[о>-(4-гидроксиарил)алкил]тио-сульфонатов натрия различного строения из со-(4-гидроксиарил)галогеналканов.

2. Изучить превращения синтезированных S-[a>-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия под действием щелочей, кислот и пероксида водорода.

3. Провести исследование АОА синтезированных соединений и установить ее связь со структурой.

4. Выявить наиболее перспективные соединения среди S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов и их производных.

5. Провести оценку иммунотропных свойств перспективных соединений.

6. Разработать проект ФСП на лекарственную субстанцию дитретиофенил - (3-(3,5-ди-т/?ет.-бутил-4-гидроксифенил)пропилтио-сульфонат натрия).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Разработаны новые методики синтеза 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов и* S-[co-(4гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия, различающихся по степени пространственного экранирования фенольной ОН-группы, строению пара-алкильного заместителя и характеру функциональной группы, t обеспечивающей АОА. Всего при выполнении данного исследования было синтезировано более 40 соединений1 структурно-связанных между собой, , строение которых установлено на основании ИК—, ПМР— и УФ— спектров, подавляющее большинство из которых, включая все тиосульфонатные и сульфонатные производные, в соответствии с данными поиска в сети STN International являются новыми, не описанными ранее в литературе.

Установлено, что доминирующим фактором, влияющим на процесс нуклеофильного замещения в реакциях со-(4-гидроксиарил)галогеналканов с тиосульфатом (сульфитом) натрия является сила атакующей частицы и природа растворителя.

Выявлены условия кислотного гидролиза S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия, позволяющие с достаточно высокими выходами (60-70%) получать со-(4-гидроксиарил)алкантиолы и бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфиды.

Впервые проведено! сравнительное исследование АОА для 20 синтезированных соединений во взаимосвязи со структурой в различных модельных системах. В результате обнаружены вещества с полифункциональным механизмом действия.

Показано, что соединения, содержащие в яа/?я-алкильном заместителе тиосульфонатный ионогенный фрагмент, превосходят по АОА свои структурные сульфонатные аналоги. Независимо от природы ионогенного фрагмента увеличение пространственной затрудненности PhOH повышает АОА соединений в отношении окисления метилолеата в водно-эмульсионной среде (ВЭС), образования малонового диальдегида (МДА) при инкубации выделенных липопротеинов низкой плотности (ЛНП).

Установлено, что тиосульфонатные производные, содержащие в своей структуре алкильные заместители в положениях 2,6 бензольного кольца, превышают по своей АОА, соответствующий им по строению фенозан калия (ФК).

Проведена оценка иммунотропной активности соединений: 3-(3,5-ди-; »7/?ет.-бутил-4-гидроксифенил)- и 3-(3,5-ди-метил-4-гидроксифенил)пропил-тиосульфонатов натрия у интактных мышей in vitro и у мышей в экспериментальной модели аутоиммунной патологии in vivo. Установлено ингибирующее влияние соединений на спонтанную и митоген-стимулированную пролиферативную активность клеток селезенки интактных мышей in vitro. Выявлена противовоспалительная и радиопротекторная активность исследуемых соединений в моделях in vivo.

Разработан проект ФСП на субстанцию дитретиофенил.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ. Предложены эффективные методики синтеза новых ВФАО: S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов и 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]-тиосульфонатов натрия.

Показано, что выявленные закономерности взаимосвязи структуры и АОА в рядах синтезированных соединений, могут быть использованы- при создании новых структур ВФАО.

По данным исследований, проведенных в НЦКЭМ СО РАМН (г. Новосибирска), НИИ терапии СО РАМН (г. Новосибирска) и НИИ клинической иммунологии СО РАМН (г. Новосибирска), синтезированные тиосульфонаты натрия, содержащие ди-трет-бушп и ди-лштгш алкильные opmo-заместители фенольного кольца, могут найти применение в качестве противовоспалительных, антиканцерогенных и гепатопротекторных лекарственных средств и нетоксичных иммунодепрессантов с селективным механизмом действия.

ПОЛОЖЕНИЯ; ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Методики- синтеза' 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]сульфонатов и тиосульфонатов натрия взаимодействием ю-(4-гидроксиарил)галогеналканов с соответствующими нуклеофильными агентами (тиосульфатами или сульфитами-щелочных металлов) в водно-спиртовом растворе. Установление структуры полученных соединений на основе спектральных исследований.

2. Результаты изучения химических свойств S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов. 4

3. Связь структуры полученных соединений с их антиоксидантной активностью на модели термического окисления метилолеата в ВЭС.

4. Результаты фармакологических исследований наиболее перспективных синтезированных соединений на иммунотропную активность in vivo и in vitro.

5. Результаты разработки проекта ФСП на субстанцию дитретиофенил. Работа была поддержана Российским фондом фундаментальных исследований (гранты 01-04-49306 и 02-04-07560).

АБРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертационной работы докладывались на III Всероссийской конференции молодых ученых "Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии" (Саратов, 2001), на Международной конференции "Современные проблемы органической химии" (Новосибирск, 2001), на Международной научной конференции "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека" (Смоленск, 2001), на V Молодежной научной школе-конференции по органической химии (Екатеринбург, 2002), на VI Международной конференции "Биоантиоксидант" (Москва, 2002), на IV Международном симпозиуме по химии и применению фосфор-, сера- и кремнийорганических соединений "Петербургские встречи" (Санкт-Петербург, 2002), на ежегодной конференции молодых ученых и аспирантов "Авиценна-2007" (Новосибирск, 2007), на II Международной научной конференции "Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений" (Алматы, 2007), на VI Всероссийском научном семинаре " Химия и Медицина" (Уфа, 2007), на ежегодной конференции аспирантов, и молодых ученых "Авиценна-2008" (Новосибирск, 2008), на II конференции с Международным участием* "Фармация и общественное здоровье" (Екатеринбург, 2009), на IX Международном медицинском конгрессе "Euromedica - Hannover 2009" (Ганновер, 2009).

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам, диссертации- опубликовано 20 печатных работ (5 статей, из них 3 в центральной печати и 15 тезисов докладов).

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Представленная диссертация состоит из введения, шести глав, выводов, списка цитируемой литературы, и приложений. Глава 1 посвящена обзору литературных данных по направлениям диссертационного исследования, в главах 2-5 обобщены результаты собственных исследований в области синтеза, изучения химических, АОА и иммунотропных свойств S-[w-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов и сульфонатов. Экспериментальная, часть представлена-в 6-й главе. Работа объемом 154 страниц машинописного текста, включая 21 рисунок и 26- таблиц. Приложение I (Проект ФСП). Приложение И. Список литературы содержит 176 библиографических названий работ российских и зарубежных авторов.

выводы

1. Впервые осуществлен синтез новых серосодержащих водорастворимых антиоксидантов различного строения, оптимизированы условия взаимодействия со- (4-гидроксиарил)галогеналканов с солями щелочных металлов и разработаны эффективные методики получения S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов и сульфонатов натрия.

2. Изучено взаимодействие S- [со- (4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия с кислотами. Установлено, что в кислой среде S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты натрия подвергаются' окислению с образованием соответствующих со-(4-гидроксиарил)алкил]тиолов с выходами 50-65%.

3. Разработаны условия щелочного гидролиза S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонатов натрия, позволяющие гладко с хорошими выходами получать бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфиды.

4. Исследован химизм окисления 8-[со-(4-гидроксиарил)алкил]-тиосульфонатов натрия под действием пероксида водорода; выявлено, что при нагревании водных растворов, происходит образование соответствующего бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфида, а окислительный гидролиз в присутствии кислоты приводит к выделению бис-[(4-оксиарил)алкил]сульфидов, минуя стадию образования со-(4-гидроксиарил)алкил]тиолов.

5. Впервые установлено, что синтезированные соединения S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты натрия и соответствующие им сульфонаты натрия проявляют свойства водорастворимых антиоксидантов. В исследованных модельных реакциях in vitro проявляют ингибирующую активность, степень выраженности^ которой зависит от строения молекулы антиоксиданта и от условий окисления.

6. Среди 20 синтезированных соединений выявлены некоторые закономерности между строением и иммунной активностью. Установлено, что наиболее выраженным влиянием на пролиферативную активность иммунокомпетентных клеток in vitro и на пролиферацию лимфоцитов периферической крови человека, больного ревматоидным артритом обладают 3 -(3,5 -ди-трет, -бутил-4-гидроксифенил)- и 3 -(3,5 -ди-метил-4-гидрокси-фенил)пропилтиосульфонаты натрия.

7. Оценивая в целом эффект максимально переносимой дозы 3-(3,5-ди-трет. -бутил-4-гидроксифенил)- и 3-(3,5-ди-метил-4-гидроксифенил)про-пилтиосульфонатов натрия in vivo, показано, что оба соединения обладают иммунодепрессивным действием, проявляя дозозависимое снижение первичного гуморального иммунного ответа и достоверное подавление пролиферации стволовых кроветворных клеток костного мозга.

8. На экспериментальных моделях in vivo установлено, что S-[co-(4-гидроксиарил)алкил]тиосульфонаты натрия проявляют выраженную противовоспалительную и радиопротекторную активность.

9. По результатам исследования разработан проект ФСП на дитретиофенил - (3-(3,5-ди-трега.-бутил-4-гидрокси-фенил)пропилтиосульфонат натрия).

Список опубликованных работ

1. Клепикова, С. Ю. Синтез водорастворимых биологически активных веществ на основе со-(4-оксиарил)галогеналканов / С. Ю. Клепикова // Сб. науч. трудов. — Новосиб. гос. пед. ун-та. — Новосибирск, 2000. — Вып. II. — С. 116-121.

2. Клепикова, С. Ю. Исследование антиоксидантной активности сульфонатов и тиосульфонатов со-(4-оксиарил)пропильного ряда / С. Ю. Клепикова, А. Е. Просенко // Сб. науч. трудов. - Новосиб. гос.' пед. ун-та. — Новосибирск, 2000. - Вып. I. - С. 116-119.

3. Влияние антиоксидантов на функциональную активность мононуклеарных клеток периферической крови больных вирусным гепатитом С / И. Ф. Фридлянд, А. Е. Просенко, С. Ю. Клепикова'[и др.] // Мед. иммунология. -СПб., 2001. - Т. 3, № 2. - С. 243.

4. Синтез и исследование антиоксидантных свойств новых водорастворимых серосодержащих фенольных соединений / А. Е. Просенко, С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева [и др.] // Бюл. СО РАМН. - Новосибирск, 2001. - № 1. -С. 133-134'.

5. Синтез и исследование антиокислительной активности новых водорастворимых производных на основе алкилированных фенолов : Тез. докл. III Всерос. конф. молодых ученых "Современные проблемы теорет. и эксперимент, химии"/ С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко [и др.]. — Саратов: Изд-во Сарат. гос. ун-та, 2001. - С. 110-111.

6. Синтез полифункциональных водорастворимых антиоксидантов на основе со-(4-оксиарил)галогеналканов : Тез. докл. III Междунар. конф. "Современные проблемы органической химии" / Н. В. Кандалинцева, О* И. Дюбченко, С. Ю. Клепикова [и др.]. — Новосибирск: Изд-во СО РАН, 2001. -С. 95.

7. Исследование защитного действия новых полифункциональных водорастворимых фенольных антиоксидантов на развит: ие CCL4-индуцированного токсического гепатита : Тез. докл. национ. науч.-практич. конф. с междунар. участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека" / Е. И. Терах, С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева [и др.]. — Смоленск: Изд-во Смолен, город, тип., 2001. — С. 160-162.

8. Исследование антиокислительной активности новых полифункциональных водорастворимых антиоксидантов фенольного типа : Тез. докл. национ. науч.-практич. конф. с междунар. участием "Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека" / С. Ю. Клепикова, Н. В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко [и др.]. - Смоленск: Изд-во Смолен, город, тип., 2001. - С. 35-37.

9. Направленный синтез водорастворимых антиоксидантов с бифункциональным механизмом противоокислительного действия : Матер. VI Междунар. конф. "Биоантиоксидант"/ Н. В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко, С. Ю. Клепикова [и др.]. - М., 2002. - С. 232-234.

10. Сульфонатные и тиосульфонатные соли на основе со-(4- < гидроксиарил)алкилгалогенидов как водорастворимые антиоксиданты : Матер. V Молодеж. науч. школы-конф. по орг. химии / С. Ю. Клепикова, Н. ^ В. Кандалинцева, О. И. Дюбченко [и др.]. - Екатеринбург: Изд-во УрО РАН, 2002. - С. 229.

11. Сеньшина, Е. С. Взаимодействие тиосульфонатных и изотиурониевых производных со-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)алкильного типа с гидропероксидами : Матер. XL Междунар. науч. конф. "Науч.-технич. прогресс. Химия" / Е. С. Сеньшина, Н. В. Кандалинцева, С. Ю. Клепикова. -Новосибирск, 2002. - С. 161-162.

12. Применение антиоксидантов на основе экранированных фенолов в качестве модуляторов воспалительных процессов : Матер. Всерос. конф. компенсаторных приспособ, процесс. :Фундамент. и клинич. аспекты / Н. К. Зенков, Е. Б. Меныцикова, А. Е. Просенко А.Е. [и др.]. - Новосибирск, 2002. -С. 177-179.

13. Изучение антиокислительных свойств серосодержащих фенольных соединений : Матер. VI Междунар. конф. "Биоантиоксидант" / Н. К. Зенков, Е. Б. Меныцикова, А. Е. Просенко [и др.]. - М., 2002. - С. 201-202.

14. Клепикова, С.Ю. Анализ взаимосвязи иммунной и антиоксидантной защиты водорастворимых препаратов синтетического происхождения : Матер, ежегод. конф. аспирантов и молодых ученых "Авиценна-2007" / С. Ю. Клепикова-Новосибирск : Сибмедиздат НГМУ, 2007. - С. 457-458.

15. Изучение иммунотропности полифункциональных водорастворимых антиоксидантов in vitro / С. Ю. Клепикова, О. П. Колесникова, А. Е. Просенко [и др.] // Мед. иммунология. - СПб., 2008. - Т. 10, № 2-3. - С. 269272.

16. Биологическая* активность соединений серы на основе экранированных фенолов : Тез. докл. II Междунар. науч. конф. "Химия, технология и мед. аспекты природ, соединений" / С. Ю.Клепикова, О. П. Колесникова, А. Е. , Просенко [и др.]. - Алматы, Казахстан, 2007. - С. 95.

17. Синтез и иммунотропная активность серосодержащих фенольных ( соединений : Тез. докл. VI Всерос. науч. семинара "Химия и медицина" / С. Ю. Клепикова, Е. А. Краснов, А. Е. Просенко [и др.]. — Уфа, 2007. — С. 57-58.

18. Клепикова, С. Ю. Иммунокоррекция водорастворимыми антиоксидантами : Матер, ежегод. конф. аспирантов и молодых ученых "Авиценна - 2008"/ С. Ю. Клепикова. - Новосибирск : Сибмедиздат НГМУ,

2008. - С. 394-395.

19. Клепикова, С. Ю. Количественное определения дитретиофенила методом спектрофотометрии в УФ-области : Тез. докл. II конф. с междунар. участием "Фармация и общественное здоровье" / С. Ю. Клепикова, Е. А. Краснов, А. Е. Просенко. - Екатеринбург, 2009. — С. 105-107.

20. Ditretiophenyl a new water-soluble antioxidant? with immunodepression activity : Material IX Internation. Congress of medicine «Euromedica - Hannover 2009» / S. U. Klepikova, E. A. Krasnov, O. P. Kolesnikova et al. - Hannover,

2009. - P. 41. - ISBN 978-3-00-025967-8.