Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка технологии сухого экстракта из побегов караганы колючей и лекарственных форм на его основе

На правах рукописи

ИРЕНЧИЙ ......

Анастасия Мичаелина

УЖЬЫКУГ Апаы1ак1а КИсЬаеНпа

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ПОБЕГОВ КАРАГДНЫ КОЛЮЧЕЙ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА Е1 О ОСНОВЕ

15 00.01 технология лекарств и органшация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Санкт-Петербург 2005

Диссертационная работа выполнена в лаборатории «Готовых лекарственных средств и фитопрепаратов» и на кафедре фармакологии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии Министерства Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Сусанна Александровна Минина Научный консультант

кандидат биологических наук, доцент Светлана Михайловна Бахтина

Официальные оппоненты:

докгор фармацевтических наук, профессор Виктор Абрамович Вайнппейн кандидат фармацевтических наук, Александр Николаевич Шиков

Ведущая организация: Военно-медицинская академия (г. Санкт-Петербург)

Защита диссертации состоится «28» июня 2005 г. в 14 час па заседании диссертационного совета Д 208.088.01 при Санкт-ГЫербургской государственной химико-фармацевтической академии по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Попова, д. 14.

С диссертцией можно ознакомиться в библиотеке академии по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Попова, д.4/6.

Автореферат разослан «27 » мая 2005 г.

Ученый секретарь Рыжкова М.В.

диссертационного совета, доктор фармацевтических наук

^тэ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Одним из основных направлений развития современной фармации является расширение ассортимента и поиск наиболее эффективных лекарственных препаратов из растительного сырья. Актуальной является разработка новых эффективных и безопасных средств природного происхождения для профилактики и лечения различных заболеваний, в том числе и болезней желудочно-кишечного факта.

В тибетской медицине широкое применение как противовоспалительное средство находит Сага§апа Бртова (Ь.) УаЫ. ех Ногпет, рекомендованная для лечении острых и хронических заболеваний нну гренних органов и систем, нарушений обмена веществ (Куваев, Блинова, 1965). В частности, из караган флоры Забайкалья выделены флавоноидные агликоны и гликозиды различной степени гликозилирования, принадлежащие к производным флавотта и флавонола, изофлавоноиды, кумарины, феноло- и аминокислоты и уреиды (Умаров, 1976; Бондарева, Киселева, 1988; Шпекина, Половинко, 1988; Бойник, 1989; Сафонов 2000).

Фитохимические исследования, проведенные Г. А. Белодубровской (1990) показали, что в растении содержатся флавоноидные агликоны и гликозиды. В.В. Сафоновым (2000) установлено, что сухой спиртовый экстракт побегов караганы колючей обладает выраженным противовоспалительным, бактериостатическим, умеренным анальгстическим, жаропонижающим и высоким ранозаживлякяцим действием. Разработан состав ранозаживляющей и противовоспалительной дерматологической мази с сухим экс фактом караганы, эффективность которой сравнима с действием мазей «Флуцинар» и «Календула».

Необходимо было продолжить фитохимическое исследование побегов караганы колючей и разработать технологию лекарственного средства для перорального применения при различных воспалительных заболеваниях и язве желудка, (гастрит и язва).

Целью настоящею исследования явилось усовершенствование технологии сухого спиртового экстракта из побегов караганы колючей и разработка лекарственных форм на ею основе в виде гранул и гранул в 1вердых желатшшЩЛХ" капсулах для профилактики и лечения различных воспалительных заболеваь и заболеваний желудочно-кишечного тракта, в том числе язвы желудка. ^ ¡5 ^^ |

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующш задачи:

• Определить товароведческие показатели сырья.

• Изучить качественный состав различных групп биологически активных

веществ (БАВ) в побегах караганы колючей.

• Выбрать методы и осуществить количественное определение обнаружкнльц^..'

БАВ.

• Усовершенствовать технологию сухого экстракта караганы колючей (СЭКК) и

достигнуть повышения выхода флавоноидов.

• Провести комплекс исследований по разработке технологии гранулирования

сухого экстракта карах аны колючей.

• Оптимизировать технологический режим процесса гранулирования экстракта

караганы колючей и осуществить стандар газацию препарата

• Изучить противовоспалительное, анальгетическое, жаропонижающее,

ангигипоксическое и гастропротекторное действие гранул сухого экстракта караганы калючей (ГСЭКК) при пероральном применении.

• Определить сроки годности ГСЭКК и на основании полученных резулыаюв разработать нормативно-техническую документацию на ГСЭКК и гранулы в твердых желатиновых капсулах.

Работа выполнена в лаборатории «Готовых лекарственных средств и фитопрепаратов» и на кафедре фармакологии в Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии по теме «Разработка готовых лекарственных форм и комбинированних препаратов»

Научная новизна работы. В побетах караганы колючей, дополнительно обнаружены следующие БАВ: Фитоэкдистероиды, р-ситостерин, алкалоиды (фешчные азотисше основания), липиды, стероидные сапонины, водораст -воримые полисахариды и пектиновые вещества Осуществлено количественное определение следующих БАВ: алкалоидов, дубильных веществ, стероидных сапонинов, кумаринов, липидов, экдистероидов, (3-ситостерина, полисахаридов и пектиновых веществ

Исследована кинетика экстрагирования флавопоидов меюдом перколяции из измельченных побегов караганы колючей. Выбран состав вспомо! аильных веществ для грануляции экстракта и проведена оптимизация режима грануляции по методу Бокса-Уилсона. Разработана оптимальная технология гранул сухого экстракта из побеюв караганы колючей. Исследована гигроскопичность экстракта, гранул, капсул с гранулами и расфасованного препарата. Изучено аптигипоксическое, про швовоспалительное, жаропонижающее, анальгезирующее и гастропротекторное действие гранулированного препарата в капсулах.

Научно-нрактичеекая значимость. Изучены товароведческие и технологические свойства побегов караганы колючей, экстракта и гранул. В технологии сухого экстракта караганы колючей на стадии экстрагирования использован метод перколяции, что позволило достшнуть выход суммы флавоноидов 92% и их содержания в сухом экстракте не ниже 3%. Для фармакологических исследований проведена наработка сухого экстракта караганы колючей (СЭКК) и препарата в виде гранул с использованием установки превдоожиженного слоя «Аэроматик».

На гранулы экстракта караганы колючей и гранулы в капсулах составлены проекты фармакопейной стгьи предприятия (ФСП). Установлено, что препарат обладает противовоспалительным, анальгетическим, жаропонижающим, антигипоксическим и гастропротекторным действием.

На защиту выносятся- результаты качественного и количественного фитохимического анализа побегов караганы, исследования кинетики экстрагирования флавоноидов методом перколяции и технология сухого экстракта, разработки технологии грануляции экстракта, стандартизации экстракта и гранул, гранул в капсулах, составления проектов ФСП на препараты, фармакологического изучения гранул сухого экстракта караганы колючей.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004), научной конференции «Молодые ученые - 85-летию академии» (Санкт-Петербург, 2004), научно-методической конференции «Состояние и перспективы подготовки специалистов для фармацевтической отрасли» (Санкт-Пе1ербур1, 2004), VII международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных пренараюв растительного происхождения" (Санкт-Петербург - Пушкин, 2003) и VIII международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов растительного происхождения" (Финляндия, 2004), научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (18-19.05.2005, Новосибирск).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 статей и 2 вида тезисов докладов.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 6 глав, содержащих результаты экспериментальных исследований, выводов и списка литературы. Работа изложена на 207 страницах машинописного текста, содержит 59 таблицы, 22 рисунка и приложения. Список литературы включает 238 источников, из них 44 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Обзор литературы (Глава 1)

В Обзоре литературы представлены основные сведения по ботанико-морфологической характеристике и фитохимическому составу различных видов ка-раган. Приведены данные по применению рода Caragana (I am.) в тибетской медицине и в народных медицинах Сибири и стран Юго-Восточной Азии. Рассмотрены особенности технологии экстрактов, современные методы гранулирования, ресур-сосбергающие технологии переработки сырья.

2. Объекты, материалы и методы исследований (Глава 2) В качестве объекта исследования использовали сырье, заготовленное в фазу конца цветения в долине сопок на территории Республики Бурятия (Иволгинский район) во время экспедиции сотрудников кафедры фармакогнозии в 2002 г.

Таблица 1

Результаты исследованш числовых показателей побегов караганы колючей

№ Содержание минеральных примесей, % Содержание золы, % Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых 70 % этанолом, %

п/п Потеря в массе при вь: сушнвании (влага), % Содержание органически: примесей, % Общей Нерастворимой в 10% HCI

1. 5,74 0,43 1,01 6,22 0,20 21,42

2. 5,68 0,39 0,95 5,94 0,22 21,98

3. 5,71 0,41 0,89 6,23 0,25 21,86

4. 5,41 0,40 0,92 6,39 0,24 22,97

5. 6,01 0,38 0,99 6,32 0,23 21,67

Среднее значение 5,71 ±0,3 0,40±0,02 0,95±0,06 6,2Z+0,28 0,23+0,02 21,98±0,99

Таблица 2

Количественное содержание суммы флавоноидов в побегах Caragana spinosa (L )

№ Содержание суммы Содержание суммы

п/п флавоноидов в абсолютно сухом флавоноидов в воздушно сухом

сырье, % в пересчете на сырье, % в пересчете на

кверцетин, кверцегин

1 0,65 0,62

2 0,68 0,65

3 0,70 0,66

4 0,66 0,63

5 0,71 0,67

Среднее значение хс„=0,68 Хср=0,65

Meipojioj ические n=5, f(5,95)^2,78 n=5, f(5,95)=2,78

характеристики Дх=0,028, Р=95% Дх-0,026, Р-95%

хср±Дх=0,68±0,03 хср*Дх=0,65-1-0,03

Е-4 41% Е=4,62%

Сырье удовлетворяет требованиям проекта ФСН на побеги карагаиы колючей.

Описаны также методики изучения технологических показателей измельченного сырья - побегов караганы колючей (измельченность, насыпная плотность, сыпучесть, набухаемость), методы качественного и количественного анализа ЬАВ.

Статистическую обработку результатов исследования проводили в соответствии с ГФХ1 издания. В представленных таблицах указываются доверительные интервалы: y+tpSy. Данные экспериментов обрабатывали на персональном компьютере. Поиск оптимальных условий процессов грапулироваиия экстракта караганы колючей осуществляли с помощью метода математического планирования Бокса-Уилсона (крутого восхождения). Регрессионный анализ полученных результатов проводили с помощью программного средства MS Excel, входящего в состав пакета прикладных программ "MS Office". Для анализа использовали спектрофотометр СФ-56, денситометр «ДенСкан» («ЛенХром», Санкт-Петербург) и газо-жидкостно хроматограф марки Крис1алл-2000М (Россия).

Фитохимический качественный и количественный анализ содержания БАВ в побегах караганы колючей (Глава 3).

В основу количественного определения флавоноидов положен метод дифференциальной спектрофотометрии, основанный на измерении оптической плотности комплекса флавоноидных соединений с раствором хлористого алюминия. Сафонов В. В. (2000) Результаты из пяти определений приведены в таблице 2.

Содержание суммы алкалоидов устанавливали 1равиметрическим методом без восстановления и с восстановлением порошком цинка в кислой среде, т.к.

некоторые алкалоиды в растениях могут содержаться в виде N-окисей

(Мелькумова, 1975). Для определения содержания алкалоидов осуществляли многократную их очистку путем экстрагирования жидкость-жидкостью, очищенный дихлорэтановый раствор обезвоживали. Средние результаты из пяти определений приведены r таблице 3.

Состав алкалоидов изучали методом хроматографии в тонком слое сорбента "Сорбфил" (ТСХ), с использованием различных систем растворителей. После тщательного высушивания, хроматограмму опрыскивали реактивом Драгендорфа На желтом фоне проявлялись оранжевые пятна-алкалоидов. В составе смеси, полученной после восстановления цинком, установлено наличие 5 алкалоидов, а в составе нативной смеси - 4 алкалоида ( система БУВ 4: 1: 5).

Далее в разведении 1:1000 (70% этиловый спирт) сняли УФ спектр (СФ-56) для предварительного установления природы алкалоидов. Алкалоиды можно отнести к алкалоидом хинолиново! о ряда (третичные азотистые основания).

Количественное определение кумаринов проводили гравиметрическим методом, разработанным Г.Н. Никоновым (Никонов, 1965) и усовершенствованным С.А. Мининой (Минина, 1989). В состав кумаринов на основе ТСХ со свидетелями впервые найдены скополетин и умбеллиферон.

Определение дубильных веществ проводили методом перманганатометрии (ГФХ1 вып. 1, С. 286-287)

Общее содержание липидов устанавливали гравиметрическим методом путем эксгра1ирования сырья в аппарате Сокслета азеотропной смесью метиленхлорида и спирта. (Ожигова, Минина,2001].

Количественное определение суммы стероидных сапонинов осуществляли спектрофотометрическим методом (Choi et al., 1993; Минина, Легостева, 1994; Антан и др., 1995), основанным на качественной реакции стероидов с ванилином и серной кислотой. (В качестве стандарта использовали р-ситостерин).

Содержание (3-ситостерина определяли денсиюметрическим методом. Количественное определение фитоэкдистероидов осуществляли спектрофотометрическим меюдом, определение проводили при 242 нм, удельное поглощение экдистероидов (E10/VM~255±4,5).

Сумму водорастворимых полисахаридов (ВРПС) и пектиновых веществ (ПВ) выделяли по схеме, изображенной на рис. 1:

Средние результаты полученные из пяти определений при количественном анализе сырья на содержание различных ipynri БАВ, приведены в таблице 3

При гидролизе ВРПС и ПВ серной и трифторуксусной кислоты (ТФУ), а ткже пектип&зой, изучили моносахаридный состав выделенных фракций. Методом бумажной и газо-жидкостной хроматографии (БХ и ГЖХ) в составе ВРПС обнаружены арабиноза, рамноза, ксилоза, галактоза, и глюкоза, в составе ПВ-рамноза глюкоза и галактуроновая кислота.

рис. 1. Схема выделения суммы водорастворимых полисахаридов (ВРПС)

и пектиновых веществ (ИВ) из иобы ов к. колючей

Таблица 3

Результаты количественного определения БАВ в побегах Сага%апа хртоаа (Ь)

№ Наименование БАВ Содержание БАВ Содержание БАВ

п/п в абсолютно в воздушно

сухом сырье, % сухом сырье, %

1. Флавоноиды 0,68+0,03 0,65+0,03

2. Кумарины 0,250±0,016 0,210+0,015

3. Алкалоиды без иосс гановления То. 0,155±0,005 0,145±0,005

(третичные азотистые основания )

4 Алкалоиды с восстановлением /п 0,195+0,015 0,186+0,015

5. Дубильные вещества 7,10+0,22 6,70+0,22

6. Липиды 4,29±0,10 4,03+0,10

7. Экдис1ероиды 0,70+0,03 0,66+0,02

8. р-ситостерин 0,210±0,009 0,198±0,008

9. Сапонины (стероидпые) 0,122±0,004 0,114±0,004

10. Полисахариды (ВРГ1С) 9,0+0,3 8,5+0,3

11 Пектиновые вещества (ПВ) 14,1 Ю.З 13,3+0, 3

Содержание флавоноидов составляет 0,68%, что было близким к ранее установленному 0,65% (Сафонов, 2000) для сырья, заготовленного в стадии плодоношения.

Разработка технологии сухого экстракта из побегов караганы колючей САЫАСАКА БРШОвА (Ь.) УАНЬ. ЕХ ШЖНЕМ.

ЕХТИАСТиМ САИАСАМ вГССТЖ (Глава 4)

С целью выбора емкости оборудования, подбора загрузочных средств и расчета количества эксграгента было необходимо исследовать технологические показатели измельченных побегов караганы колючей, такие как фракционный состав (измельченность), насыпная плогность, сыпучесть, угол естественного откоса, коэффициент поглощения (К) и степень набухания (а)

Таблица 4

Технологические показатели измельченных побегов караганы колючей

№ п/п Насыпная масса кг/м3 Коэффициент набухаемости, К Степень набухаемости, а Средний диаметр частиц, мм Сыпучесть, г/с Угол естественного откоса, ф 0

1 270 2,70 1,70 2,28 отсутствует 45

2 250 2,50 1,50 2,27 отсутствует 47

3 260 2,40 1,40 2,29 отсутствует 43

4 240 2 35 1,35 2,26 отсутствует 46

5 250 2,30 1,30 2,29 отсутствует 44

Среднее значение 2Ч4±14 2,45+0,1 1,45+0,15 2,28+0,02 отсутствует 45±2

Установлено, что основная масса сырья соответствует требованиям по измельченное™, сырье набухает и обладает плохой сыпучестью.

Следующим этапом было определение кинетики экстрагирования флавоноидов из побегов караганы колючей. Для получения сухого экстракта из

побегов караганы колючей па основании фармакологических исследований, рекомендован 70% этиловый спирт (Сафонов 2000). Изучена кинетика экстрагирования флавоноидов при использовании 70% спирта этилового в соотношении 1:13 с учетом коэффициента поглощения. Кинетические кривые экстрагирования суммы флавоноидов из побегов караганы колючей методом настаивания и путем вытеснения представлены на рис.2. Из представленных данных установлено, что динамическое равновесие в системе т-ж по флавоноидам наступает за 6-7 часов. Выход флавоноидов при настаивании составляет 78,5%, а при вытеснении 95,3%. Изучение кинетики экстрагирования флавоноидов из побегов караганы колючей проводили, используя мегод перколяции, как наиболее часто применяемый в промышленности при производстве сухих эксгракюв.

0 1 2 3 4 5 6 7

Время,час

Рис.2. Кинетические кривые экстрагирования суммы флавоноидов и) побеюв караганы колючей 70% спиртом этиловым в процессе настаивания (1) и вытеснения (2)

Полученную вытяжку отстаивали, фильтровали, растворитель отгоняли в вакууме и остаток высушивали до получения сухого экстракта.

На рис 3. представлена технологическая схема получения сухого экстракта из побегов караганы колючей. На основании полученных результатов при получени кинетики наработано 8 серий сухих экстрактов. Результаты наработки и анализа сухих экстрактов приведены в табл. 5. Из таблицы видно, что содержание влаги в экстрактах не превышало 5%, содержание суммы флавоноидов составляет не менее 3%, выход по флавоноидам достигает 92% . Ранее (Сафонов 2000) был получен сухой экстракт методом дробной мацерации с выходом по флавоноидам 45% и содержанием флавоноидов в экстракте 1,35%.

Таблица 5

Результаты наработки и анализа сухих экстрактов караганы колючей

№ Масса Количество Масса Выход Выход от Влаж- Содержание Выход

п/п сырья, извлечения, экстракта, от количества ность, суммы флавонои-

г мл г сырья, экстрактивных % флавоноид дов, %

% веществ, % ов, %

1 500 4390(1:8,8) 68 13,6 65,61 2,33 3,16 69,1

2 500 4390 (1 8,8) 68 13,6 65,61 2,57 3,31 72,3

3 40 425 (1:10,6) 7 17,5 84,44 2,41 3,28 91,8

4 40 425 (1 10,6) 7 17,5 84,44 2,29 3,30 92,0

5 500 5150 89 17,8 85,87 2,44 3,12 89,3

(1:10,3)

6 500 5150 89 17,8 85,87 2,32 3,25 92,9

(1:10,3)

7 100 1040 17,3 17,3 83,50 2,30 3,32 91,9

(1:10,4)

8 100 1040 17,3 17,3 83,50 2,18 3,28 91,5

(1.10,4)

Таблица 6

Результаты показателей качества сухого экстракта караганы колючей

Наименование показателя Me i оды Содержание, % по данным анализа Регламентируемый показатель для проема ФСП, %

Описание Порошок коричневого цвета, слабою своеобразною запаха, вкус слабо горьковатый. Гшроскопичный.

Подлинность на флавоноидов 1 Цве1ная реакция | Малиновое окрашивание (цианидиновая проба) '

Растворимость ГФХ1, выи 1, с 175-176 Растворим в спирте 40% и 70%, очень мало растворим в хлороформе, мало растворим в воде и в 95% спирте

Тяжелые металчы ГФ XI, выл 1, с.160 Не более 0,01% Не более 0,01%

Количественное определение флавоноидов Спектрофогоме трический 3,16, 3,31,3,28; 3,30; 3,12,3,25, 3,32; 3,28 Не менее 3,0%

Потеря в массе при высушивании ГФ XI, вып 2, с. 160 2,33,2,57, 2,41,2,29, 2,44, 2,32, 2,30,2,18. Не более 5,0%

Микробиолот ическая чистота Изм №3 к ГФ XI. Утв. 19.06.03 Категория ЗБ Обшее число бактерий не более 105 в 1 г

Упаковка По 0,1 кг в банки оранжевого стекла с конусной пробкой или в банки оранжевого стекла типа БВ по ГОСТ 64-2-71-80 с крышкой навинчиваемой

Маркировка Соответствует ФСП

Хранение В сухом, защищенном о г света месте, при температуре не выше 20°С и при относительной влажности не выше 60%

Срок годности | 2 года

УМ07

Кт,Кх, Км

Фасовка и упаковка

Готовая продукция на склад

ВР1 Кг, Км Вспомогательные работы

ТП2. Кт Измельчение сырья

1

ТПЗ. Кт Кх Экстрагирование сырья

Ш4 Кт. Упаривание вытяжки в вакуум-выпарном аппарате

ТП5 Кт, Кх. Сушка остатка, измельчение (стандартизация)

ВР.1.1 Санитарная обработка производства

ВР1.2 Подготовка экстрагента

ТП3.1

ТПЗ 3.

ТП4.1,

Загрузка сырья

Потери

ТП3.2. Экстракция По I ери

шрот *

О [сшивание

Потери

ТП3.4. Фильтрование Потери

отходы

Упаривание

ТП4.2 Получение

сгущенной

ВЫ I яжки

Снирт на регенерацию

ТП5.1. Сушка в вакуум-сушильном шкафу

ТП5.2. Измельчение (стандартизация)

Влага

УМ07.1 Фасовка в банки

УМ07.2. Упаковка и маркировка

рис. 3. 'Гехпологическая схема производства сухого экстракта из побе! ов караганы колючей

Разработка технологии гранул на основе экстракта караганы колючей и в виде твердых желатиновых капсул (Глава 5)

В процессе разработки технологии лекарственного препарата на основе сухого экстракта караганы колючей в качестве лекарственной формы нами выбраны гранулы и гранул в капсулах, т.к. ранее было усыновлено, что в гранулированной форме значительно снижается гигроскопичность и повышается биодоступность экстракта (Шигарова, 1998). В целях поиска оптимальной технологии лекарственной формы, обеспечивающей большую эффективность лекарственного всщсства, мы посчитали целесообразным выбрать метод грануляции и состав вспомогательных веществ.

Первоначально были изучены такие технологические свойства экстракта, как влажность, сыпучесть, угол откоса и насыпная масса, (таблица 7).

Таблица 7

№ серии Остаточная влажность Сыпучесть, Угол откоса, Насыпная масса,

экстракта экстракта, % г/с град. г/см3

1 2,35±0,06 4,93±0,40 49,812 0,73X0,04

2. 2,45±0,20 5,27*0,31 44,2±3 0,71±0,04

3 2,38±0,06 5.42±0,33 45,7-Ы 0,70+0,02

4 2,24±0,06 4,46±0,34 50,0±2 0,73±0,04

5 2,41 ±0,20 4,84±0,40 47,5±2 0,72±0,02

По данным, представленным в таблице 7, можно сделать вывод, что экстракт обладает плохой сыпучестью и достаточной насыпной массой.

Первоначально выбирали состав вспомогательных веществ. В связи с тем, что экстракт гигроскопичен, использовали в качестве наполнителя и влагорегулятора молочный сахар в равном с экстрактом количестве. Так как экстракт не растворим в воде, в состав смсси вводили разрыхлитель - крахмал в количестве 10% к смеси. На основании сравнительных исследований различных связывающих агентов для увлажнения был выбран сахарный сироп, который вводили в количестве 20% по отношению к массе. Технологическая схема получения гранул представлена на рис. 4.Определили технологические свойства гранул: сыпучесть, прочность на истирание, фракционный состав, распадаемость и насыпную плотнос1ь.

Таблица 8

Зависимость техно погических свойств гранул от вида увлажняющего агента

№ п/п Концентрация > влажняющих агентов. % к массе % к массе Сыпучесть, г'с и л у 5 = 2 еЗ а 0 с * сз X Истираемость, в% Пылевидная фракция, в % Распадаемость, в мин Насыпная масса, г/см3

I 64% сахарный сироп 18,9 9,3-1 98,56 1,44 3,29 2,0 0,73

2. 3% раствор МЦ 16 5,6 5,03 98,37 1,63 10,9 4,0 0,60

3 20% раствор пвп 9,4 4,67 97,63 2,37 14,3 4,0 0,62

4 5% крахмальный клейстер 17,2 5,03 93,86 6,14 20,3 3,0 0,66

5 20% сироп лакточы 10,5 4,47 95,89 4,11 12,2 2,0 0,54

ВР1 Санитарная

Км обработка

производства

1

ВР2. Подготовка

сырья

Кх, Кт.

тпз

Кт

Получение влажного гранулята

УМ05 Фасовка,

Кт, Кх, упаковка и

Км маркировка

Гшовая продукция на склад

ТП4 Получение сухих

Кт, Кх гранул

Стандартизация

XI14 3

ВР2.1 Измельчение СЭКК

ВР2 2. Просеивание СЭКК

Потеои

Потеои

ВР2.3 Просеивание

стеарата кальция

ТПЗ 1 Смешение и Потеои

увлажнение

ТПЗ 2 Получение

гранулята

Потери

ТП4 1. Сушка гранул

Влага

\ ТП4.2. Сухая Потери

| грануляция

Опудриванис

Потери

УМ05 1 Фасовка гранул в Потеои

капсулы

УМ05.2 Фасовка капсул в банки

УМ05.3 Упаковка и маркировка

Потери

рис. 4. Технологическая схема производства 1 ранул сухого экстраю а караганы колючей в твердых желатиновых капсулах

Установлено (таб. 8),что наилучшие результаты были получены при использовании сахарного сиропа.

В связи с тем, что на прочность гранул большое влияние оказывает влажность,

мы исследовали зависимость прочности гранул от их остаточной влажности при

увлажнении сахарным сиропом (рис. 4).

Как видно из рис. 5, наибольшую прочность на истирание имеют гранулы с влажностью в пределах от 1,7 до 2,7%.

* V

Я

Я В" о о.

в

06 1 1,6 21 15 М 41 «

Влажность, %

Рис.5. Прочность гранул на истирание в зависимости от остаточной влажное!и

Проведена оптимизация процесса получения гранул методом влажного гранулирования. С целью выбора оптимального состава и режима гранулирования использовали математическое планирование эксперимента по методу Бокса-Уилсона. По результатам эксперимента рассчитывали математическую модель процесса. Полученные уравнения подвергали статистическому анализу, проверке значимости коэффициентов и адекватности модели реальному процессу. В качестве факторов варьирования выбраны следующие: остаточная влажность (X]), количество увлажняющего агента (Хг), количество крахмала(Х3), размер гранул (Х4), количество кальция стеарата (Х5). В качестве критериев оптимизации нами выбраны прочность на истирание (Уист), сыпучесть (Усьга) и количество пылевидной фракции (Упыл). Прочность гранул - основной показатель их качества, так как в дальнейшем гранулы подвергаются расфасовке и укупорке в установке с бункером, где подвергаются истиранию. Сыпучесть гранул - это показатель, характеризующий скорость и качество дозирования гранул в капсулы. От сыпучести гранул зависит производительность автоматов по дозированию. Пылевидная фракция оказывает отрицательное влияние на дозирование и отклонения от массы дозы. Выбраны интервалы варьирования факторов (таблица 9).

Таблица 9

Факторы и интервалы варьирования

Перемен Факторы Уровни варьирования Интервалы

ные варьирования

факторы верхний основной нижний

X! остаточная влажнос'1 ь,% 3 2,5 2 0.5

Х2 количество гранулирующего агента,% 20 15 10 5

Хз количество крахмала,% 10 7.5 5 2,5

X, размер гранул, мм 2 1,5 1 0,5

х5 количество кальция стеарата.% 1 0,5 0 0,5

Исходя из сопоставления трех полученных уравнений регрессии:

Уист-98,69-0,18Х,+0,85X2-0,16X3-^0,39X4+0,29X5,

Усып.=8,53-0,54Х,н 0,26Х2-0,04Хз-0,27Х4+0,41Х;)

Упыл.=3,97-0,91Х,+2,69Х2-0,8Хз+1,20Х4+0,12Х,,

Выбран следующий режим влажной 1рануляции сухого экстракта побегов караганы колючей. Сухой экстракт караганы смешивают с равным количеством молочного сахара и добавляют к смеси 5% крахмала, так как во всех трех уравнениях фактор Х3 имел отрицательный знак, указывающий на необходимость снижения количества крахмала. Увлажняющая смесь составляет 20% от гранулируемой массы (коэффициент при Х2 в 3-х уравнениях положительный). Влажную масс> гранулируют через сито с размером отверстий 1 мм и проводят его сушку в термостате при температуре воздуха 60°С в течение 20 минут. Высушенный гранулят подвергают сухой грануляции через сито с размером отверстий 1 мм и оп>дривают 1% кальция стеарата, так как коэффициенты 3-х уравнений при Х5 положительные. Выход при влажной грануляции составил 85,7%.

Полученные в результате оптимизации данные мы использовали для получения гранул методом структурного гранулирования в установке «Аэроматик». В аппарат «Аэроматик» загружали 100 г сухого экстракта караганы колючей, предварительно просеянного через сито с размером отверстий 0,5 мм. Туда же добавляли 100 г сахара молочного и 10 г крахмала (5% от общей массы смеси сухого экстракта и лактозы). Орошение массы, подлежащей гранулированию, увлажнителем (64% сахарный сироп, 70 мл) проводили в непрерывном режиме. Сушку гранул горячим воздухом осуществляли одновременно с орошением гранулируемой массы. Окончательную сушку гранул проводили при уменьшенном числе псевдоожижения. Выход при влажной грануляции составил 95,2%.

Гранулирование экстракта караганы колючей в псевдоожиженном слое проводили при следующих условиях:

• давление на форсунке 0,2 Ваг;

• температура псевдоожижающего воздуха 60°С;

• общее время грануляции 25 мин;

• время увлажнения 10 мин;

• время сушки 15 мин;

• объем гранулирующего агента 70 мл;

• скорость подачи воздуха (расход подачи воздуха) 40-45 мЗ/ч;

• скорость подачи увлажняющего агента 7 мл/мин;

В результате проведенного исследования были изучены следующие технологические свойства гранулята: влажность, насыпная плотность, сыпучесть, прочность на истирание и фракционный состав. Результаты определения фракционного состава !ранул, полученных методом влажной грануляции и методом структурной грануляции, представлены на рис. 6

Размер фракций,мм

Рис.6. Фракционный состав гранул

1 - график фракционного состава гранул при влажной грануляции,

2 - график фракционного состава гранул при структурной грануляции.

В результате проведенного экспериментального исследования установлено, что большая часть гранул, полученных методом структурной грануляции, состояла из частиц размером от 0,5 до 1мм. Основная масса гранул, полученных путем влажной грануляции, состояла из частиц размером от 1,0 до 2,0 мм.

Таблица 10

Технологические свойства гранул, полученных методом структурной

№ Остаточная Сыпучее 1ь, Прочность Насыпная

опыта влажностъ, % г/с па истирание, % масса в 1/смЗ

1 2,76 9,12 99,45 0,70

2 2,82 9,73 99,84 0,75

3 2,43 9,52 99,68 0,73

4 2,45 9,44 99,40 0,76

5 2,51 9,69 99,52 0,72

Среднее 2,59±0,16 9,50±0,38 99,58±0,18 0,73±0,03

значение 1

Таблица 11

Технологические свойства гранул, полученных методом влажной грануляции из экстракта караганы колючей

№ Остаточная Сыпучесхь, Прочность на Насыпная

опыта влажность, % т/с истирание, % масса в г/смЗ

1 2,51 9,27 98,42 0,70

2 2,70 9,34 98,56 0,73

3 2,44 9,12 98,25 0,72

4 2,47 9,22 98,39 0.73

5 2,50 9,29 98,48 0,71

Среднее 2,52±0,08 9,25+0,13 98,42±0,17 0,72±0,02

значение

Из таблиц результатов анализа видно, что гранулы, полученные методом псевдоожижения- методом струтаурной грануляции, состоят из более мелких фракций, имеют лучшую сыпучесть и большую прочность на истирание.

Несмотря на незначительную разницу во фракционном составе, гранулы, полученные каждым из этих двух методов, соответствуют требованиям, предъявляемым к гранулам (ГФ XI, вып.2, ст. Гранулы).

На основании насыпной плотности и массы гранул выбран размер капсул №4 для их фасовки.

Наработанные серии капсул с гранулами экстракта караганы колючей были проанализированы нами по таким показателям как подлинность, количественное содержание суммы флавоноидов, средняя масса наполненных капсул и содержимою, отклонения от средней массы, распадаемость, растворение.

Найдено, что время распадаемости капсул составляет 7-8 мин, за 45 мин в раствор переходит 85,5% массы транул экстракта.

Изучена гигроскопичность 1ранул в капсулах при относительной влажности воздуха 100%, 80,2% и 59,2% и установлено, что лекарственные препараты необходимо хранить в сухом помещении при относительной влажности воздуха не

выше 59,2%.

Рис.7. Кинетика сорбции влаги препаратам при относительной влажности 59,2%.

1 - капсулы; 2 - Г ранулы сухого экстракта караганы колючей (ГСТКК); 3 - Капсулы с гранулями сухого экстракта караганы колючей (КГСЭКК); 4 - КГСЭКК в упаковке.

Изучена стабильность лекарственной формы при хранении. Установлено, ч-ш препарат при естественном и ускоренном старении выдерживает срок годности не менее 2 лет. ("Приложение 1и 2)

6. И »учение фармакологических свойств гранул сухого экстракта караганы (Глава 6)

6.1. Объекты исследования Фармакологическому изучению были подвергнуты: Сухой экстракт караганы колючей, полученный методом перколяции (СЭКК). Гранулы с сухим экс фактом караганы колючей, полученные методом структурной грануляции (ГСЭКК).

6.2. Материалы, методы и результаты фармакологического исследования 6.2.1.Оценка осфой токсичности

Острую токсичность СЭКК и ГСЭКК оценивали на белых нелинейных мьппах-самцах массой тела 18-22 г. Для определения средней токсической дозы (LD50) объектов исследования использовали метод Миллера-Тейнтера. Установлено, что сухой экстракт караганы колючей, полученный методом перколяции, и фанулы с сухим экстрактом караганы колючей, малотоксичены. Средняя смертельная доза СЭКК составляет 2200±105 мг/кг. Среднюю летальную дозу ГСЭКК установить не удалось. Гибели живошых при введении максимально вводимого количества ГСЭКК не отмечали.

6.2.2.Оценка антш ипоксической активности

Исследование противогипоксической акшвности СЭКК и ГСЭКК проводили на модели острой гипобарической гипоксии (ОГБГ). СЭКК и ГСЭКК вводили перорально в диапазоне доз: СЭКК - от 22 мг/кг до 88 мг/кг, ГСЭКК - от 50 мг/кг до 200 мг/кг (в пересчете па сухой экстракт караганы - от 22 мг/кг до 88 мг/кг). Установлено, что СЭКК и ГСЭКК обладают выраженным противогипоксическим действием в широком диапазоне доз. В минимальных исследованных дозах (СЭКК - 22 мг/кг, ГСЭКК - 50 мг/кг) их антигипоксический эффект был сравним с активностью препарата сравнения - гутимина 50 мг/ki . Максимальный эффект СЭКК и ГСЭКК наблюдали при введении их в дозах 88 мг/кг и 200 мг/кг соответственно. Выживаемость их на «предельной высоте» составляла 40%. Зависимость «доза-эффект» СЭКК и ГСЭКК в исследованном диапазоне доз носила линейный характер.

6.2.3.Оценка апальгезирующего действия

Оценку обезболивающей активности гранул с сухим экстрактом караганы колючей проводили по моделях: «tail flick» и «уксуснокислой корчи». В качестве препарата сравнения использовазти ненаркотический анальгетик - метамизол натрия (100 мг/кг).

Установлено, чю СЭКК и ГСЭКК обладают умеренным болеутоляющим действием в тестах: «tail-flik» и «уксуснокислые корчи». Максимальную, сравнимую с действием npenapaia сравнения метамизола нафия, анальгезирующую активность СЭКК и ГСЭКК наблюдали в дозах 44 мг/кг и 100 мг/кг. Результаты исследований представлены на рис. 8.

Препараты

Рис. 8. Оценка анальгезирующего действия СЭКК и ГСЭКК на модели <^аН-Шк» при пероральном введепии 1 - Контроль - Вода очищенная 2мл'кг; 2- Метамизол 100 мг/кг; 3 - Плацебо ; 4 - СЭКК 22 чг/кг; 5 - СЭКК 44 *п/кг; 6 - СЭКК 88 м!/к!; 7 - ГСЭКК 50 М1/К1; 8 - ГСЭКК 100 мг/кг; 9 -

ГСЭКК 200 мг/кг

Поскольку СЭКК и ГСЭКК подавляют болевую реакцию в генезе которой ведущую роль играют эндогенные кинины и простагландины (тесты «укуснокислых корчей» и <ЛаП-А1к»), целесообразно было оценить жаропонижающее и противовоспалительное действия этих растительных средств

6.2.4.0ценка жаропонижающего действия

Жаропонижающие свойства СЭКК и ГСЭКК оценивали по способности их оказывать гипотермический эффект у крыс с иирогеналовой лихорадкой. Результаты экспериментов представлены на Рис. 9.

Установлено, что СЭКК (44 мг/кг) и ГСЭКК (100 мг/кг) обладают жаропонижающим действием на модели пирогеналовой лихорадки. Выраженность I ипотермического эффекта исследуемых растительных средств близка к активности ненаркотического анальгетика-аншниретика метамизола натрия.(100 мг/кг)

Время, чаоы

Рис. 9. Опенка жаропонижающего действия сухого экстракта караганы колючей (СЭКК) и гранул с сухим экстрактом (ГСЭКК)иа модели иирогеиалевой лихорадки пероральном введении, ♦ - Контроль; А - Метамизол натрия (100 мг/кг) ; • - СЭКК (44 мг/кг); СЭКЩ100 мг/кг)

6.2.5. Оценка противовоспалительного действия

Оценка антиальтеративных свойств

Антиальтеративную активность препарата оценивали по его гастропротекторному действию на модели бутадионовой язвы желудка у крыс. Исследуемые растительные средства вводили профилактически перорально однократно. СЭКК в диапазоне доз от 22 мг/к1 до 88 мг/кг, ГСЭКК - от 50 м1/кг до 200 мг/кг. В качестве препаратов сравнения использовали широко применяющиеся в медицинской практике I асгропротекюры: «Ромазулан» - 2 мл/кг и «Сукральфат» -1000 мг/кг.

Об активности исследуемых средств судили по величине индекса Паулса (ИП). Противоязвенную активность (ПА) рассчитывали как отношение ИП контрольной группы животных к ИП опытной группы животных. Объекты исследования считали активными, если ПА для его терапевтической дозы равнялась 2,0 и более единицам. Результаты экспериментов представлены в таблице 12.

Таблица 12

Влияние сухого экстракта караганы колючей (СЭКК) и гранул с экстрактом караганы колючей (ГСЭКК) на развитие деструкции слизистой оболочки желудка у крыс после введения бутадиона (в каждой группе по 10 животных, пероральное введение)

Препарат Доза В мг/к1 Кол-во животных с Деструкции слизистой ИП ПА

язвами (%) всего М Ы, мг % к контролю

Контроль(вода 2 мл/кг 10(100) 44,7±3,6 100 44,7 -

очищен)

Ромазулен 2 мл/кг 6(60) 11,8±2,1 26,4 7,1 6,3

Сукральфат 1000 6(60) 4,2±0,4 9,4 2,5 17,9

СЭКК 22 8(80) 32,4±4,7 72,5 25,9 1,7

СЭКК 44 6(60) 5,3±2,3 11,9 3,2 14,0

СЭКК 88 8(80) 22,3±4,0 49,9 17,8 2,5

ГСЭКК 50 8(80) 34,1±5,2 76,3 27,3 1,6

ГСЭКК 100 6(60) 5,6±2,7 12,5 3,4 13,1

ГСЭКК 200 8(80) 24,5±4,4 54,8 19,6 2,3

Установлено, что СЭКК и ГСЭКК обладаю гастропротективным действием. Выраженность эффекта СЭКК - 44 мг/кг и ГСЭКК - 100 мг/кг максимальна и несколько уступает активности "Сукральфата", но превосходит действие "Ромазулена".

Оценка антиэкссудативной активности

Изучение антиэкссудативной активности СЭКК и ГСЭКК проводили на «жесткой» модели воспаления, какой является отек конечности, вызванный субплантарным введением 2% раствора формалина. Исследуемые раегшельные средства вводили однократно перорально в дозах, обеспечивающих максимальное подавление патофизиологических процессов, в основе которых ведущую роль играют эндогенные кинины и простагландины: СЭКК - 44 мг/кг, ГСЭКК - 100 мг/кг.

Установлено, СЭКК и ГСЭКК подавляют выраженность фазы экссудации процесса воспаления. Антиэкссудативная активность СЭКК и ГСЭКК уступает действию препарата сравнения диклофенака натрия .

Оценка антиггролифератовной активности

Изучение влияния СЭКК и ГСЭКК на пролиферативный компонент воспаления оценивали в опытах на модели «ватной гранулемы». Установлено, что антипролиферативный эффект СЭКК и ГСЭКК сравним с действием диклофенака. СЭКК угнетал рост грануляционной ткани на 73,9%, ГСЭКК - на 73,4%.

Таким образом, исследуемые растительные средства караганы колючей обладают выраженным противовоспалительным действием. Они проявляют близкие к диклофенаку антиэкссудативпый и антипролиферативный эффекты. СЭКК и ГСЭКК не только не вызываю 1 раздражения слизистой оболочки желудка, но и обладают антиульцерогенным действием, сравнимым по активности с широко используемым в медицинской практике гастропротектором - «Сукральфат».

Доказана целесообразность использования растительных средств караганы колючей в качестве гасфопротектора, жаропонижающего, анальгезирующсго средства, с антигипоксическими свойствами.

ВЫВОДЫ

1. Определены числовые показахели высушенных побегов караганы колючей, заюювленных в период конца цветения. Установлено, что заготовленное сырье соогвстствует требованиям ГФХ1 и проекту фармакопейной статьи предприятия на побеги караганы колючей. Количественное содержание флавоноидов в сырье, заготовленном в конце цветения, составляет 0,68% (на абс. сух. м.).

2. На основании фитохимического анализа побегов караганы колючей в сырье дополнительно обнаружены алкалоиды, стероидные сапонины, липиды, [1-ситостерин, экдистероиды, полисахариды и пектиновые вещества. Определено их количественное содержание В составе кумаринов на основе ТСХ со свидетелями найдены умбеллиферон и скополетин. Методами БХ и ГЖХ в составе ВР11С и ПВ моносахариды: арабиноза, рамноза, ксилоза, галактоза, глюкоза и галактуроновая кислота.

3. Определены 1ехнологические показатели измельченных побегов караганы колючей. Установлено, что сырье набухает и не обладает сыпучестью, по измельчетшости соответствует требованиям ГФ. Изучена кинетика экстрагирования суммы флавоноидов методом перколяции. Обнаружено, что динамическое равновесие в системе т-ж устанавливается за 6-7 часов. Выбрана скорость вытеснения извлечения. Выход суммы флавоноидов при наслаивании составляв! 78,5%, при перколяции 95,3%.

4. Наработано восемь серий сухою эксфакта для разрабо1ки технологи лекарственной формы. Выход по экстрактивным веществам при наработке экстракта достигнут в пределах 83-85%, а по флавоноидам 91,5-92,9%, содержание суммы флавоноидов в экстракте должно быть не менее 3,0%.Технологические свойства экстракта сухою показывают, что экстракт обладает плохой сыпучестью и высокой насыпной массой. Экстракт гифоскопичен.

5. Для получения I ранул определен состав вспомогательных веществ. В качестве разрыхлителя использовали крахмал, влагорегулятора - молочный сахар Для улучшения сыпучести гранул предложен 1% кальция стеарата. Установлено,

что из пяти изученных связывающих агентов лучшие результаты при грануляции показал сахарный сироп.

6. Определены технологические свойства гранул экстракта караганы, полученных методом влажной грануляции. Они обладают хорошей сыпучестью (>9 г/с), достаточной насыпной массой (>0,7 г/смЗ), высокой прочностью на истирание (98,56%), содержат мало пылевидной фракции, преимущественно состоят из частиц размером от 1 мм до 2 мм. Установлено, что наибольшую прочность на истирание имеют гранулы с влажностью в пределах от 1,7 до 2,7%.

7. Проведена оптимизация режима влажного гранулирования методом математического планирования эксперимента Бокса - Уилсона. Грануляцию целесообразно проводить при использовании 5% крахмала, увлажнении 20% сиропа к гранулируемой массе опудривать гранулы 1% кальция стеарата,, размер частиц должен составляет около 1 мм. Общий выход гранул составляет 85,7%. Проведена наработка гранул методом структурной грануляции в установке с псевдоожиженным слоем. Доказано, что полученные гранулы в основном состоят из частиц размером от 0,5 до 1,0 мм и имеют повышенную прочность на истирание (99,58%). Выход при грануляции составляет 95,2%.

8. На основании результатов определения насыпной плотности и массы гранул определен размер капсул N 4 для их фасовки. Найдено, что время распадаемости капсул с гранулами составляет 7-8 мин, за 45 мин в раствор переходит 85,5% гранул экстракта. Лекарственный препарат необходимо хранить в сухом помещении при относительной влажности воздуха не выше 60%. Методом ускоренного старения изучена стабильность лекарственных препаратов при хранении. Срок наблюдения - 2 года.

9 Доказано, что гранулы сухого экстракта караганы колючей оказываю! противовоспалительное, жаропонижающее, обезболивающее, антигипоксическое и гастропротективное действие. Разработаны проекты ФСП на новые лекаре I венные формы -гранулы сухого экстракта караганы колючей и гранулы в твердых желатиновых капсулах.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Иренчий A.M., Минина С. А. Определение количественного содержания алкалоидов в побегах караганы колючей // Материалы научно-методической конференции «Состояние и перспективы подготовки специалистов для фармацевтической отрасли».- СПб, 2004.С 116-117.

2. Иренчий А., Минина С.А. Совершенствование технологии экстракта караганы колючей// Тезисы доклада «Человек и лекарство» Москва 2004.

С. 872-873.

3. Иренчий А.М, Минина С.А. Выбор состава и способа гранулирования экстракта карашны колючей // Материалы междун. научно-пракш ческой конференции, посвященной 85-летию академии,- СПб.: Изд-во СПХФА, 2004.-С 174-176.

4. Иренчий A.M., Минина С Л Суммарное содержание биологически активных веществ различных групп в побегах Caragana spinosa (L.) Vahl. ex Hörnern. // Pací, ресурсы, 2004, вып. 3, С 95-100.

5 Иренчий A M , Минина С.А., Чижиков Д.В. Разработка способа получения сухого экстракта из побегов караганы колючей // VII Мсжд. Съезд "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препарат ов растительного происхождения" - СПб-Пушкин: Материалы съезда, 2003. - С.42-44.

6. Yirenkyi А М., Minina S.A., Berezina V.S. The study of carbohydrate derivatives in Caragana spinosa (L.) Vahl. ex Homem Cormus // Proceedings of the Int. Congress "Actual problems of creation of new medicinal preparations of natural origin". - Finland, 2004. -P 327-329

7 Иренчий A.M., Вожева А.Б., Минина С.А. Денситометричсский метод определения ß-ситостерипа в побегах караганы колючей // Сборник Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации», 18-19.05.2005, Новосибирск: Изд-во: ООО Югос, 2005. - С.378-379.

Приложение I

Резу чьтаты наблюдений за стабильностью грануч СЭККв твердых же ватиновых капсупах в естественных \cnoeiuix

V Средняя мае-л, г Отклонение от Реакция Количест зенное содержание Распаааемость, ■'астворгние, % Срокхрчкенкя,

серии Общая Содержи* ого средней массы % подлинности ф 1авояолдов в г мин гпл

Требования по проекту ФСК 0219+0,02 [рану! Не оолее 10 щшщдиновая проба Не ченее0,0015 Не более 20 Не менее 75 Не менее 2 лет

0,224 0 136 4,0 По южительная 0 00185-0,00001 8- 1 8\7+4 .

ВГ1/2 80.04 0215 0 127 3,9 П* тож»гтельная 0,0.1174^0,00004 8-1 85,5+3 05

0218 0 130 1.» Положительная 0 00178+0,00004 7+1 8^ 7+4 1

0,221 0,13< 0,8 Положитеяьная 0,00182±0,00003 7± 1 85,5+5

ВГ2/280104 0,222 0,134 1 5 Положительная 0 00183+0,00002 6+ 1 85,5+3 05

0,221 0 13' 08 Положительная 0,00171.0 00004 7+ 1 85,7±3 1

0,215 0,127 \9 По южигетьная 0,00174+0,00005 8± 1 8<,7+4

ВГЗ/100204 0,218 0,130 1,5 Положительная 0 00178+0,00003 7± 1 0 5

0,222 0,134 1,5 Положите!! ная 0,001794.0,000« 71 1 85,3-3 1

0,218 0,130 1,5 Положительная 0 00178*0,00003 7-1 8*,8-5 -

ВГ4/100204 0,221 0,133 0 8 Положительная 0,00182+0,00005 1 85,3»4 0,5

0 222 0 131 1,5 Положительная 0 001834-0 0000ч 7- 1 85 4+3 1

0 222 0 134 1,5 Положительная 0 00183±0 00002 7_ 1 85,8+3

СГ3.210504 0,224 0 136 3,9 По южительная 0 00170+0,00003 £-1 85,7+3 о-.

0,222 0,134 1 5 По южительная 0 00181+0,00005 7+ 1 85,4+4 1

Приложение 2

Результаты наблюден ий за стабильностью Г СЭКК в твердых же чатиновых капсулах методом ус коренного старения

№ Средняя масса, г Отклонение 01 Реакция Количестьеннос юдержанне Распадтемость Растворение, % Срок

серии Общая Содержичого средней массы, % подлинное™ флавоноидов в дозе г мин Хранения,

Требования по проекту ФСП 0,219±0,02 гранул Не более 10 ци анилиновая проба Не менее 0,0015 Не более 20 Не менее 75 Не менее 2 лет

0,224 0,П6 3.0 По южительная 0,00180+0,00002 7=1 85,7+4 1,5

ВГ1/280104 0,2 И 0,127 39 Положительная 0,00168+0 0001)3 8-1 85,1x3 2

0,221 0,133 0,8 Положительная 0 00176+0 00004 8- 1 853+5 1,5

ВГ2/280104 0,222 0,134 1,5 Положительная 0,00174+0,00002 6+ 1 85,7-15 21

0,215 0,127 3,9 Положите ььная 0,00168+0,0000^ 6+1 85 4+4 1,5

ВГЗ'100204 0,218 0,130 1,5 Потох,И1етьная 0 00169+0,00005 7+ 1 85 5+3 2г

0,218 0,130 По южи^чьнля 0 00172-0,00004 8+ 1 85,7+4 1.5г

ВГ4/100204 0 221 0,133 0,8 Пояожшельная 0 00171 10"002 6+ 1 85 3+5 2г

0 222 0.134 1,5 Положительная 0 00176+0,00003 ■*+ 1 85 5+3 1,5

СГЗ/210504 0 224 . 0,136 3,9 Положиге |ьная 0 00177+0 00004 7+1 85 Ш 2

Ирсичий Лнас1асия Мичаелина

Разработка технологии сухою экстракта из побегов караганы колючей и лекарственных форм на его основе

15 00 01-техноло1ия лекарегв и организация фармацев!тескою дела

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 25 05 2005 Формат 60 х 90/16 Бумага тип Печа] ь ризограф Гарнитура «Т аймс» Печ л 1,5 Тираж 100 экз Заказ 550 Санкг Петербургская государственная химики фармацевтическая академия

197376, С анкт-Петербург, ут Профессора Попова, 14

05-14059

РНБ Русский фонд

2006-4 9588

Актуальность работы. Одним из основных направлений развития современной фармации является расширение ассортимента и поиск наиболее эффективных лекарственных препаратов из растительного сырья. Актуальной является разработка новых эффективных и безопасных средств природного происхождения для профилактики и лечения различных заболеваний, в том числе и болезней желудочно-кишечного тракта.

В тибетской медицине широкое применение как противовоспалительное средство находит Caragana spinosa (L.) Vahl. ex Hornem, рекомендованная для лечении острых и хронических заболеваний внутренних органов и систем, нарушений обмена веществ (Куваев, Блинова, 1965). В частности, из караган флоры Забайкалья выделены флавоноидные агликоны и гликозиды различной степени гликозилирования, принадлежащие к производным флавона и флавонола, изофлавоноиды, кумарины, феноло- и аминокислоты и уреиды (Умаров, 1976; Бондарева, Киселева, 1988; Шпекина, Половинко, 1988; Бойник, 1989; Сафонов 2000).

Фитохимические исследования, проведенные Г. А. Белодубровской (1990) показали, что в растении содержатся флавоноидные агликоны и гликозиды. В.В. Сафоновым (2000) установлено, что сухой спиртовый экстракт побегов караганы колючей обладает выраженным противовоспалительным, бакгериостатическим, умеренным анальгетическим, жаропонижающим и высоким ранозаживляющим действием. Разработан состав ранозаживляющей и противовоспалительной дерматологической мази с сухим экстрактом караганы, эффективность которой сравнима с действием мазей «Флуцинар» и «Календула».

Необходимо было продолжить фитохимическое исследование побегов караганы колючей и разработать технологию лекарственного средства для перорального применения при различных воспалительных заболеваниях и язве желудка, (гастрит и язва).

Целью настоящего исследования явилось усовершенствование технологии сухого спиртового экстракта из побегов караганы колючей и разработка лекарственных форм на его основе в виде гранул и гранул в твердых желатиновых капсулах для профилактики и лечения различных воспалительных заболеваний и заболеваний желудочно-кишечного тракта, в том числе язвы желудка.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие: задачи:

• Определить товароведческие показатели сырья.

• Изучить качественный состав различных групп биологически активных веществ (БАВ) в побегах караганы колючей.

• Выбрать методы и осуществить количественное определение обнаруженных БАВ.

• Усовершенствовать технологию сухого экстракта караганы колючей (СЭКК) и достигнуть повышения выхода флавоноидов.

• Провести комплекс исследований по разработке технологии гранулирования сухого экстракта караганы колючей.

• Оптимизировать технологический режим процесса гранулирования экстракта караганы колючей и осуществить стандартизацию препарата.

• Изучить противовоспалительное, анальгетическое, жаропонижающее, антигипоксическое и гастропротекторное действие гранул сухого экстракта караганы калючей (ГСЭКК) при пероральном применении.

• Определить сроки годности ГСЭКК и на основании полученных результатов разработать нормативно-техническую документацию на ГСЭКК и гранулы в твердых желатиновых капсулах.

Научная новизна работы. В побегах караганы колючей, дополнительно обнаружены следующие БАВ: Фитоэкдистероиды, р-ситостерин, алкалоиды (третичные азотистые основания), липиды, стероидные сапонины, водорастворимые полисахариды и пектиновые вещества. Осуществлено количественное определение следующих БЛВ: алкалоидов, дубильных веществ, стероидных сапонинов, кумаринов, липидов, экдистероидов, [5-ситостерина, полисахаридов и пектиновых веществ.

Исследована кинетика экстрагирования флавоноидов методом перколяции из измельченных побегов караганы колючей. Выбран состав вспомогательных веществ для грануляции экстракта и проведена оптимизация режима грануляции по методу Бокса-Уилсона. Разработана оптимальная технология гранул сухого экстракта из побегов караганы колючей. Исследована гигроскопичность экстракта, гранул, капсул с гранулами и расфасованного препарата. Изучено антигипоксическое, противовоспалительное, жаропонижающее, анальгезирующее и гастропротекторное действие гранулированного препарата в капсулах.

Научно-ирактическая значимость. Изучены товароведческие и технологические свойства побегов караганы колючей, экстракта и гранул. В технологии сухого экстракта караганы колючей на стадии экстрагирования использован метод перколяции, что позволило достигнуть выход суммы флавоноидов 92% и их содержания в сухом экстракте не ниже 3%. Для фармакологических исследований проведена наработка сухого экстракта караганы колючей (СЭКК) и препарата в виде гранул с использованием установки псевдоожиженного слоя «Аэроматик».

На гранулы экстракта караганы колючей н гранулы в капсулах составлены проекты фармакопейной статьи предприятия (ФСП). Установлено, что препарат обладает противовоспалительным, анальгетическим, жаропонижающим, антигипоксическим и гастропротекторным действием.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004), научной конференции «Молодые ученые - 85-летию академии» (Санкт-Петербург, 2004), научно-методической конференции «Состояние и перспективы подготовки специалистов для фармацевтической отрасли» (Санкт-Петербург, 2004), VII международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов растительного происхождения" (Санкт-Петербург - Пушкин, 2003) и VIII международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов растительного происхождения" (Финляндия, 2004), научно-практической конференции «Современные проблемы фармакологии и фармации» (18-19.05.2005, Новосибирск).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 статей и 2 вида тезисов докладов.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Санкт-Петербургской государственной Химико-фармацевтической академии по теме «Разработка готовых лекарственных форм и комбинированных препаратов».

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Определены числовые показатели высушенных побегов караганы колючей, заготовленных в период конца цветения. Установлено, что заготовленное сырье соответствует требованиям ГФХ1 и проекту фармакопейной статьи предприятия на побеги караганы колючей. Количественное содержание флавоноидов в сырье, заготовленном в конце цветения, составляет 0,68% (на абс. сух. м.).

2. На основании фитохимического анализа побегов караганы колючей в сырье дополнительно обнаружены алкалоиды, стероидные сапонины,липиды, Р-ситостерин, экдистероиды, полисахариды и пектиновые вещества. Определено их количественное содержание. В составе кумаринов на основе ТСХ со свидетелями найдены умбеллиферон и скополетин. Методами БХ и ГЖХ в составе ВРПС и ПВ моносахариды: арабиноза, рамноза, ксилоза, галактоза, глюкоза и галактуроновая кислота.

3. Определены технологические показатели измельченных побегов караганы колючей. Установлено, что сырье набухает и не обладает сыпучестью, по измельчепностн соответствует требованиям ГФ. Изучена кинетика экстрагирования суммы флавоноидов методом перколяции. Обнаружено, что динамическое равновесие в системе т-ж устанавливается за 6-7 часов. Выбрана скорость вытеснения извлечения. Выход суммы флавоноидов при настаивании составляет 78,5%, при перколяции 95,3%.

4. Наработано восемь серий сухого экстракта для разработки технологии лекарственной формы. Выход по экстрактивным веществам при наработке экстракта достигнут в пределах 83-85%, а по флавоноидам 91,592,9%, содержание суммы флавоноидов в экстракте должно быть не менее 3,0%.Технологические свойства экстракта сухого показывают, что экстракт обладает плохой сыпучестью и высокой насыпной массой. Экстракт гигроскопичен.

5. Для получения гранул определен состав вспомогательных веществ. В качестве разрыхлителя использовали крахмал, влагорегулятора - молочный сахар Для улучшения сыпучести гранул предложен 1% кальция стеарата. Установлено, что из пяти изученных связывающих агентов лучшие результаты при грануляции показал сахарный сироп.

6. Определены технологические свойства гранул экстракта караганы, полученных методом влажной грануляции. Они обладают хорошей сыпучестью (>9 г/с), достаточной насыпной массой (>0,7 г/смЗ), высокой прочностью на истирание

98,56%), содержат мало пылевидной фракции, преимущественно состоят из частиц размером от 1 мм до 2 мм. Установлено, что наибольшую прочность на истирание имеют гранулы с влажностью в пределах от 1,7 до 2,7%.

7. Проведена оптимизация режима влажного гранулирования методом математического планирования эксперимента Бокса - Уилсона. Грануляцию целесообразно проводить при использовании 5% крахмала, увлажнении 20% сиропа к гранулируемой массе опудривать гранулы 1% кальция стеарата,, размер частиц должен составляет около 1 мм. Общий выход гранул составляет 85,7%.

Проведена наработка гранул методом структурной грануляции в установке с псевдоожиженным слоем. Доказано, что полученные гранулы в основном состоят из частиц размером от 0,5 до 1,0 мм и имеют повышенную прочность на истирание (99,58%). Выход при грануляции составляет 95,2%.

8. На основании насыпной плотности и массы гранул определен размер капсул N 4 для их фасовки. .Найдено, что время распадаемости капсул с гранулами составляет 7-8 мин, за 45 мин в раствор переходит 85,5% гранул экстракта. Лекарственный препарат необходимо хранить в сухом помещении при относительной влажности воздуха не выше 60%. Методом ускоренного старения изучена стабильность лекарственных препаратов при хранении. Срок наблюдения - 2 года.

9. Доказано, что гранулы сухого экстракта караганы колючей оказывают противовоспалительное, жаропонижающее, обезболивающее, антигипоксическое и гастропротективное действие. Разработаны проекты ФСП на новые лекарственные формы -гранулы сухого экстракта караганы колючей и гранулы в твердых желатиновых капсулах.