Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка и стандартизация ранозаживляющего противоязвенного средства растительного происхождения

/ч

Л-» С7-

с:; ^

г-э ^

На правах рукописи

ЦОМАЯ ИРМА ВЛАДИМИРОВНА

РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ

РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕГО ПРОТИВОЯЗВЕННОГО СРЕДСТВА РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела 15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва. 1997

Работа выполнена в Тбилисском Государственном медицинском университете.

Научные руководители: доктор фармацевтических наук профессор

Бакуридзе А.Д.,

доктор фармацевтических наук старший научный сотрудник Дементьева H.H.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук профессор

Попов Д.М.

доктор фармацевтических наук старший научный сотрудник Даргаева Т.Д.

Ведущая организация: Государственный научно-исследовательский

институт по стандартизации и контролю лекарственных средств

Защита состоится" 2,0 "¿?Я 1997г. в 15 часов на заседании диссертационного Совета Д-074.05.06 при Московской медицинской академии им.И.М.Сеченова (г.Москва, Никитский бульвар, д. 13)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им.И.М.Сеченова г.Москва, (Зубовской бульвар, д.1)

Автореферат разослан" " ¿CWrcr ¿ff Cf 1997г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фарма цев-тических наук, доцент

Садчикова Н.П.

Обшая характеристика работы

Актуальность темы. Лекарственные средства растительного происхождения находят широкое применение в медицине. Несмотря на широкое развитие синтетических лекарственных средств, биологически активные вещества(БАВ) растительного происхождения продолжают занимать значительное место в современной терапии, поэтому одним из современных направлений медицины и фармации являются всесторонее изучение и рациональное использование лекарственных растений

В настоящее время арсенал лекарственных средств, применяемых в медицине насчитывает 45% фитопрепаратов и при этом наблюдается тенденция к их росту.

Расширение ассортимента лекарственных препаратов растительного происхожления, в том числе новых эффективных средств для лечения заболевания язвы желудка, скорейшего заживления ран с противовоспалительным и стимулирующим регенерацию ткани действием, является одной из актуальных задач фармацевтической технологии.

Разработка лекарственных препаратов из растительного сырья, обладающих малой токсичностью и не оказыющих побочных действий при длительном применении во время лечения язвы желудка, и имеет большое значение. В настоящее время медицинской практике используется ряд лекарственных растений, которые, несмотря на широкое применение, не имеют объективных методов стандартизации всех групп БАВ. К таким растениям относятся листья чая.

Дальнейшее изучение сырья - грубых листьев чая создаст предпосылки для дополнения совершенствования методик и способов переработки сырья и создания на основе оригинальных препаратов лекарственных форм.

Цель и основные задачи исследования. Целью настоящего исследования являются разработка и стандартизация противоязвенного, ранозаживляющего средства из грубых листьев чая.

Для достижения поставленной цели планировалось решить следующие задачи:

- изучить химический состав сырья грубых листьев зеленого чая, экстракт-концентрата(субстапции) и готовой лекарственной формы препарата "Тиол";

- разработать методику стандартизации сырья, субстанции и препарата "Тиол";

- провести исследования по разработке способа получения экстракта-концентрата из грубых листьев чая;

разработать готовую лекарственную форму на основе экстрак-та-концентрата(субстанции) из грубых листьев чая;

- определить показатели качества субстанции и препарата "Тиол", - изучить их стабильность в процессе хранения;

разработать нормативную документацию (НД) на субстанцию и препарат "Тиол".

Научная новизна. С использованием методов хромотографии (ТСХ.ГЖХ), ионообменной спектрофотометрии, атомно-абсорбцион-ной спектроскопии в сырье, субстанции и готовой лекарственной форме установлено содержание биологически активных веществ(БАВ): каротиноидов, свободных жирных и аминокислот, токоферолов, хлорофиллов, макро и микроэлементов.

Методом ТСХ в сырье листьев чая установлено присутствие [5-каротина, ксантофиллов, лютеина, виолаксактина, неоксантина, которые являются основными представителями каротиноидов.

С учетом специфических свойств БАВ грубых листьев чая с помощью инструментальных методов подобраны условия анализа каротиноидов и разработаны методики их количественного определения в сырье, субстанции и готовой лекарственной форме в препарате "Тиол".

С использованием основного закона экстрагирования разработаны параметры экстракции БАВ из грубых листьев чая. Варьированием заданных параметров подобраны оптимальные условия, обеспечивающие их максимальное извлечение и переход в субстанцию.

В опытах [[а животных при клинических изучениях обнаружен стабильный фармакотерапсвтичсскии эффект субстанции и "Тиола" за счет влияния на различные звенья патогенеза заболеваний (раны и язвы желудка).

Разработаны способ получения лекарственного средства из грубых листьев чая, обладающего ранозаживляющим действием, на который от Государственного комитета по науке и технологиям Республики Грузия получено положительное решение о выдаче патента №4916 от 24.06.96 г.

Разработаны показатели качества субстанции "Тиола".

Практическое значение работы. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены: лабораторные технологические регламенты на производство чайного экстракт-концентрата "Тиола", которые рассмотрены и утверждены tia заседании Ученого совета Тбилисского Государственного медицинского университета. Регламенты апробированы в научно-техническом кооперативе (НТК) "Резон"г. Кутаиси.

Фармакопейные статьи на "Чайный экстракт-концентрат " (субстанцию) и "Тиол" утверждены фармакопейным комитетом МЗ Республики Грузия (ВФС 185/96г. и ВФС 186/96г.)

"Тиол" зарегистрирован в Республике Грузия и разрешен к медицинскому применению (№ гос.регистрации СП-00001 от 02.08.96г.)

Технология получения субстанции из грубых листьев чая и "Тпола" внедрены в НТК "Резон" в г.Кутаиси и в настоящее время осуществляется их промышленный выпуск.

Способ получения "Тиола" защищен патентом №4916 от 24.06.96 г.

На защиту выносятся;

1. Результаты исследований по химическому изучению грубых листьев чая и чайного экстракта-концентрата;

2. Способы получения экстракта-концентрата (субстанции) из грубых листьев чая и препарата "Тиол".

3. Методики стандартизации чайного экстракта-концентрата (субстанции) и "Тиола".

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на:

- научно-практической конференции "Фитотерапия и рефлексотерапия" (г.Улан-Уд», 1992 г.)

- научно-практической конференции Тбилисского государственного медицинского университета ( г. Тбилиси, 1995г.),

-51 региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров ("Пятигорск, 1996г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Тбилисского государственного медицинского университета по проблеме " Лекарственные средства".

Объсми структура диссертации. Работа изложена на 1£В страницах машинописного текста и состоит из: введения, обзора литературы, 4-х глав экспериментальной части общих выводов и приложения.

Диссертация содержит^ таблицы и проиллюстрирована// рисунками. Список литературы включает/р/источник, в том чнслсл/ипостраиных авторов.

В I главе (обзор литературы) приведены общие сведения о растениях рода чая, данные об их химическом составе и биологической активности, применение указанного сырья « народной и научной медицине.

Во II главе дана характеристика объектов и методов исследования.

В III главе приведены результаты фито-химического анализа грубых листьев чая.

IV глава содержит результаты исследовании но разработке и технологии получения экстракта-концентрата (субстанции) из грубых листьев чая.

В главе V представлены данные по разработке лекарственного препарата "Тиол".

Содержание работы. Оъектом исследования являлось сырье грубых листьев чая, отвечающие требованиям ГОСТа6207-75 "Лист чайный грубый".

В исследованиях использовали физико-химические методы аналнза:-ТСХ на "Силуфоле-УФ-254" ¡[а пластинках агликагел$г с незакрепленным слоем толщиной 0,5 мм:- спектрофотометрию, (спектрофотометрические измерения осуществляли на спектрофотометре СФ-46); спектры поглощения получали на регистрирующем спектрофотометре ЕГ-ЗТ фирмы'ЧШасЫ", ионнообменную хроматографию на автоматическом анализаторе аминокислот ААЯ 339 "Прага-4"-1981;- газожидкосрую хроматографию проводили на хроматографе "Уапа11-Мос1е1-3700" (США), атомно-абсорб^цониую спектроскопию (измерения проводили па спектрофотометре ААБ-3

Karl Zeiss с атомизациен в пламени, PerKin Elmer 305 В, С-302 и С-315.)

Идентификацию и ко-.лнчественное определение различных групг БАВ в сырье проводили методами ТСХ и спектрофотомстрин.

Определение содержания суммы фепольных соединений (¡геокне-леппые формы тапип-катехинового комплекса ТКК) сырья грубых листьев чая проводили методом Левснталя согласно ГФХ1, и ГОСТ 3483-78 " Чаи зеленый кирпичный".

Одновременное определение содержания ТКК и кофеина в исходном сырье - грубых листьев чая проводили титримстрическими методами но ГОСТу 19885-74 "Методы определения танина и кофеина". Из соедипий липидиого характера в сырье грубых листьев чая иидептифицировали: каротилоиды, свободные высшие жирные кислоты, нейтральные липиды (стерины, триглицериды), токоферолы. Кроме того, в сырье показано присутствие свободных аминокислот, микроэлементов, хлорофиллов.

Провели фитохимическое изучение исходного сырья грубых листьев чая, экстракт-концентрата (субстанции).

Идентификацию каротиноидов в грубых листьях чая проводили методом ТСХ в слое силикагеля в системе растворителей; петролейный эфир-бензол-ацетон-уксусная кислота (80;20;2^1;). В сырье листьев чая установили наличие ß-каротина, ксантофиллов, лютеина, виолоксанпша, неоксантина, которые являются основными кароти-ноидами пластид высших растений.

В спектрах поглощения спиртовых извлечений из грубых листьев чая присутствуют две полосы поглощения с максимума при 450 и 530 НМ.

ТСХ-идентификацию нейтральных липидов проводили на пластинках "Силуфол", подвижной фазой служила смесь

растворителе» I-н-гексаи-мстилэтилкетои-уксусная кислота (43,'7;0,1) (двукратный подъем) и II-гексан-диэтиловый эфпруксусиая кислота (7;3;0,1). Установлено присутствие стсринов с RF около 0,1.7, триглицеридов с RF около 0,01, свободных жирных кислот с RF около 0,46.

Идентификацию токоферолов осуществляли методом ТСХ на силикагеле в системе растворителей хлороформ-диэтилопый эфир (99; 1). Обнаружены а, и Р -токоферолы с RF около 0,52, и 0,35, соответственно. Для p-каротина при этих условиях хроматогра-фирования значение RF равно около 0,86.

Идентификацию хлорофиллов в сырье грубых листьев чая устанавливали методом ТСХ на силшсагеле с использованием в качестве подвижной фазы смесей растворителей:1 петролейпый эфир-бензол-ацетон-уксусная кислота (80;20,'2;1) и II и-гексан-диэтиловый эфир-уксусная кислота (7:3:0,1). При хроматографировании во II систему хлорофиллов RF около 0,1, а зона липидов имеют следущие значения RF: свободные стеролы - около 0,12-0,21; свободные жирные кислоты - около 0,56.

Изучение состава жирнокислого комплекса липидной фракции грубых листьев чая проводили методом ГЖХ после метилирования жирных кислот.Сумму липидных соединений из сырья извлекали гексаном. Затем проводили метилирование. Идентификацию метиловых эфиров проводили на хроматографе "Variah-Model-3700" (США) на стеклянной колонке (1м х 0,4см), в качестве неподвижной фазы применяли цианпропилметилсиликои средней полярности SP-2330, который наносили в количестве 10% па хромосорб W-AW. Температуру колонки программировали от 150° до 220° С, газ-поситель-гелии пропускали со скоростью 20 см3/ мин. Идентификацию жирных кислот на хроматограммах проводили путем сравнения

удерживаемых объемов образца со стандартными образцами жирных кислот.

Содержание жирных кислот рассчитывали по площадям соответствующих пиков на хромДтограммах и выражали в % от общей суммы жирных кислот исследуемого образца.

Установлено, что линидная фракция грубых листьев чая имеет сложный жирнокислотный состав; наибольшее содержание отмечается для /кислот\следующих: пасыщеипых-тридекаповон, пальмитиновой, стеариновой, ненасыщенных олеиновой, линолевой, лпноленовой.

Идентификацию свободных аминокислот в сырье грубых листьев чая и экстракт-концентрате проводили методом ионообменной хроматографии на автоматическом анализаторе аминокислот ААА339 "Прага -4"!981.

Хроматографичсская колонка в литиевой форме 22см, сорбент-ионообменная смола ЛЖ-ФА, температура колонки-38°'67°С, скорость элюироиания-50мл/час. В качестве элюирующего агента использовали цитрат литиевый. Качественный состав аминокислот в исследуемых образцах сырья определяли по временам удерживания. Для идентификации использовали стандартную смесь, состоящую из 21 аминокислоты. Исследования показали, что в изучаемом объекте присутствует весь набор свободных аминокислот. Суммарное содержание свободных аминокислот - 71,9 мг%.

Для определения макро и микроэлементного состава сырья листьев чая и субстанции применяли метод атомно-абсорбционной

спектроскопии па спектрофотометрах ААБ-3 с атомизацией в пламени

£

РегКш-Е1тег 305В. Количественное содержание обнаруженных элемнтов Насчитывали в пересчете на абсолютно-сухое сырье. Исследуемое сырье-грубые листья чая и субстанция характеризуется широким

набором макро и микроэлементов: медь, цинк, кальций, калий, натрий.

В процессе разработки технологической схемы изготовления фитопрепарата изучали факторы: степень измельчения сырья, тип экстрагента, соотношение жидкой и твердой фаз, температура экстракции, продолжительность экстрагирования. Экспериментально подобраны оптимальные значения факторов, способствующие наибольшему выходу экстрактивных веществ -БАВ лииидного характера и в первую очередь каротипоидов.

Исследования по подбору оптимальной степени измельчения сырья позволили установить размер частиц являющийся оитимальным-3-5мм.

Поскольку в производственных условиях для экстракции (5-каротина из растительного сырья используются экстрагепты (этанол 96%, дихлорэтан, трихлорэтилеп), мы остановились на трихлорэти-лене. Этот экстрагент обладает высокими экстративными свойствами по отношению к соединениям липофильного характера, негорюч и доступен.

Для определения остаточного растворителя в субстанции использовали метод ГЖХ по методике фармакопеи США 23 издания, стр 1746-1747.

Изучено влияние температуры на процесс экстракции БАВ из грубых листьев чая, в результате чего установили следующие параметры + 80°С при экстракции трихлорэтиленом.

Экспериментально установлено соотношение фаз: твердой - сырья и жидкой - экстрагента. Это соотношение составило 1:6. Дальнейшее увеличение объема экстрагента нецелесообразно, так как при этом не происходит увеличение выхода извлекаемых веществ. С целью

внешнего сопротивления, обновления поверхности контактирующих фаз экстракцию исследуемого сырья ведут при перемешивании.

С целью определения продолжительности экстрагирования было изучено время наступления равновесной концентрации в системе сырье-экстрагснт. Экспериментально установлено, что это время составляет й часов.

Установленные нами параметры извлечения БАВ из сырья листьев чая являются приемлемыми в производственных условиях и позволяют обеспечить достаточно высокую рентабельность производства новых терапевтически активных фитопрепаратов, изготавливаемых из растительного сырья, непригодного к использованию промышленности.

На основании проведенных исследовании разработана схема, которая положена в основу технологического регламента чайного экстрат-концентрата. (Рис. 1)

Лабораторный технологический регламент разрабатывался на образцах растительного сырья - грубый чайный лист осеннего и весеннего сбора (ГОСТ 6207-75). Получено 5 опытных серий фитопрепарата " чайный экстракт-концентрат".

По разработанной нами технологической схеме получен новый фитопрепарат в виде густой окрашенной массы, легко растворимой в растительных маслах. Препарат представляет собой растительный экстрат, содержащий комплекс БАВ основными из которых являются липидные соединения. В качестве главных фармакологически активных из них выделяются каротиноиды, что было подтверждено фармакологическими исследованиями.

Технологическая схема производства чайного экстракт-концентрата (субстанции)

Рис.1.

ВР - стадии вспомогательных работ,

ТП - стадии основного технологического процесса

С целью разработки методик стандартизации препарата "Чайный к

экстрат-концентрат" провели исследования по идентификации и количествнному определению БАВ, содержащихся в этом препарате.

При проведении этих исследований использовали хромотаграфичес-кис и спектрофотомстрические методики, разработанные нами для сырья листьев чая, с изменениями, внесенными в стадии подготовки проб.

При ТСХ - идентификации каротиноидов установили, что в препарате "Чайный экстрат-концентрат" присутствуют тс же, что и в растительном сырье, зоны адсорбции каротиноидов, что свидетельствуют о том, что разработанные технологические условия позволяют выделять весь комплекс каротиноидов грубых листьев чая.

Методом ТСХ в препарате идентифицировали жирные кислоты, триглицериды, стерипы, хлорофиллы, токоферолы. Идентификацию проводили сравнением значений зон адсорбиции при

хроматографировании препарата и стандартных веществ.

Анализ свободных жирных кислот проводили методом ГЖХ в

к

фитопрепарате "Чайный экстрат-концентрат". Установили присутствие жирных кислот: пальмитиновой стеариновой,олеиновой, линолевой и линоленовой, которые в свободном виде в наибольшем количестве содержатся и в сырье листьев чая.

По методике, разработанной нами для анализа сырья листьев чая проводили идентификацию в препарате "Чайный экстрат-концентрат" аминокислот. Установлено, что аминокислотный комплекс препарата по качественному составу близок к исходному растительному сырью: аспаргиновая кислота , треонин, глютаминовая кислота, глицин, аланин, валин, пистон, лейцин, фенилаланин, аминомасляиая кислота. Однако свободные аминокислоты в препарате содержатся в значительно меньших количествах, чем в сырье.

п

По методике разработанной нами для сырья грубых листьев чая, изучали макро-микроэлементиьш состав фитопрепарата. Установлено присутствие ряда элементов: магний, калин, кальций, цинк, медь.

В чайном экстракт-концентрате установили содержание язвозажпв-ляющего агента - цинка до 12 мг/кг.

Таким образом установлено, что разработанный нами фитопрепарат "Чайный экстракт-концентрат" содержит сумму БАВ - каротпноиды, жирные кислоты, нейтральные лиииды, хлорофиллы и др. Из этой суммы БАВ выделяется группа каротиноидов, которая может рассматриваться как группа веществ,оказывающих ранозаживляющее и противоязвенное действие.

Поэтому нами проводилась оценка качества препарата на отдельных стадиях производства и конечного продукта именно по содержанию каротиноидов.

Для полученного фитопрепарата "Чайный экстракт-концентрат" были разработаны показатели качества и методики стандартизации, установлены сроки хранения вид упаковки.

По материалам исследования подготовлена фармакопейная статья, утвержденная фармакопейным комитетом Министерства здравоохранения Республики Грузия №186/96.

Для характеристики препарата использованы физико-химические показатели, определяемые для масел, согласно ГФХ1, вып.1, а также количественное содержание основной группы фармакологически активных веществ-каротипоидов.

Разработка показателей качества препарата проводилась на 5 сериях, полученных по лабораторному технологическому регламенту на базе НТК объединения "Резон" (г.Кутаиси).

Для характеристики препарата нами предложены следующие показатели: описание внешнего вида, растворимость, плотность,

показатель преломления, кислотное число, число омыления, йодное число, подлинность содержания каротиноидов. В табл.1 приведены результаты определений этих показателей.

Для определения подлинности препарата использовали метод сиектрофотометрии: раствор этанольного экстракта из препарата, используемый для количественного определения каротиноидов, при измерении па спектрофотометре в области от 400 до 600 нм имеет максимумы поглощения при длинах волн 450 нм± 2пм и 530 нм±2нм, которые принадлежат каротиноидам, (Рис.2) В основу методики анализа кротипоидов в препарате положена способность каротиноидов и поглощению при длинах волн 400-600 нм.

Поскольку в каротиноидном комплексе листьев чая в большем количестве присутствует (3-каротин, определение поглощения вели при длине волны 450 им, максимум поглощения р-каротина.

Пересчет содержания суммы каротиноидов также вели на (3-каротин.

В качестве рабочего стандартного образца служил калия бихромат, .. О.

водный рствор который имеет максимум полосы поглощения при длине волны 450нм. В расчетную формулу вводили коэффициент пропорциональности показателей поглощения р-каротина и рабочего стадартного образца.

Разработаны методики количественного определения суммы каротиноидов в исходном растительном сырье грубых листьях чая, в фитопрепарате "Чайный экстракт-концентрат".

Спектры поглощения каротиноидов

Б

Рис2.

1-спиртовое извлечение каротипоидов из грубых листьев чая,

2-спиртовое извлечение каротиноидов из чайного экстракт-концентрата,

3-раствор р-каротина в 96% этаноле,

4- спиртовое извлечение каротиноидов из "Тиола"

Таблица 1.

Определение показателей качества чайного экстракт-концентрата (субстанции)

серия плотность 1', СМ'1 показатель преломления МД20' Кислотное число число омыления йодное число содержание суммы каротпнои-дои мг%.

1 0,911 1,171 0,-12 188 79 1071,8

2 0,912 1,473 0,39 190 82 1073,2

3 0,913 1,470 0,45 192 86 1170,2

А 0,912 1,-172 0,40 190 92 1150,0

5 0,914 1,173 0,40 190 89 1150,5

Таблица 2.

Метрологические характеристики методик определения содержания суммы каротиноидов в сырье грубых листьев чая и чайном экстракт-

концентрате

Р X 8 5х Р X Е%.

сырье

6 16,1 0,64 0,80 95 2,447 0,74 4,61

чайный экстракт-концентрат

6 1150 4,4 1,6 95 2,247 3,92 ±4,90

"Тиол"

85,0 3,8 1,9 95 2,447 4,02 ±4,93

В таблице 2 приведены метрологические характеристики методик определения содержания каротиноидов в сырье грубых листьев чая и препарате "Чайный экстракт-копцснтраг". Из данных таблицы видно, что относительная ошибка методик количественного определения суммы каротинопдов в пересчете на р-каротпп в сырье и препарате с 95% вероятностью составляет ±4,61% и ±4,9 % соответственно. Оценку достоверности разработанных методик проводили методом добавок, что показало отсутствие систематической ошибки.

По разработанным методикам проведен количественный анализ Л партий сырья и 5 серии опытных серий препарата. На основании проведенных анализов установили нормы содержания суммы каротипоидов в сырье и препарате: не менее 10 мг% и 1000 мг% соответственно.

Исследования по установлению сроков годности 5 серий препарата, регламентируемого ВФС 186-96, показало, что препарат стабилен в течение. 2-х лет, хранения в прохладном, защищенном от света месте. Срок годности установлен 1 год 6 месяцев.

Дальнейшие наши иследования были направлены на разработку новой стабильной лекарственной формы раствора, чайного экстракт-концентрата в масле. Учитывая растворимость липндных веществ, в том числе и каротиноидов, мы остановили свой выбор на пищевых растительных маслах в качестве растворителей липидного комплекса, извлекаемого из листьев чая. Основываясь на том, что минимальная концентрация каротиноидов, обеспечивающая специфическую активность лекарственной формы (ранозаживлягощее, противоязвенное действие ) составляет 60 мг%, остановились на концентрации суммы каротиноидов в лекарственной форме, равной 5%.

Полученный нами "Чайный экстракт-концентрат", кроме веществ липидного характера содержит некоторые более полярные соединения.

Поэтому для получения стабильной лекарственной формы необходимо учитывать различную растворимость БАВ, извлекаемых трихлорэти-леиом согласно технологической схеме получения чанного экстракта-концентрата. В связи с этим, растворение чайного экстракта в растительном масле рекомендовано проводить при комнатной температуре (+25НС) при перемешивании в течение 30 минут.

Нами изучена возможность использования в качестве растворителя вспомогательного вещества применяемые в медицинской промышленности пищевых растительных масел: масла подсолнечного растительного рафинированного, масла соевого рафинированного, масла оливкового рафинированного. Установлено, что эти масла в равной мере могут служить растворителем (вспомогательным веществом) в лекарственной форме на основе чайного экстракта-концентрата.

В результате проведенных исследований разработана технологическая схема изготовления лекарственной формы 5% раствора чайного экстракта-концентрата в растительном масле ("Тиол"). Технологическая схема изготовления "Тиола" включает в себя ВР-1 и ТП1 технологической схемы изготовления чайного экстракта-концентрата. После стадии ТП-1 следует стадия ТП-2, растворение чайного экстракта-концентрата в растительном масле, затем стадия расфасовки, упаковки и маркировки. В процессе производства "Тиола" проводится стандартизация качества. Конечный продукт стандартизуется по нормам, регламентированным разработанной нами фармакопейной статьей, которая утверждена фармакопейным комитетом Министерства здравоохранения Республики Грузия (ФС 185/96).

Для характеристики "Тиола" использованы физико-химические показатели, определяемые для масел, согласно ГФХ1, вып.1, а также

количественное содержание каротиноидов. Разработка показателен качества препарата проводилась на 5 опытных сериях, полученных по лг1бораторпому технологическому регламенту на базе Научно-технического кооперативного объединения "Резон" (г.Кутаиси). Для характеристики препарата "Тиол" нами предложены следующие показатели: описание, растворимость, плотность, показатель преломления, кислотное число, число омыления, йодное число, подлинность, содержание суммы каротиноидов. В табл. 3. приведены результаты определения этих показателен.

Таблица 3.

Определение показателей качества препарата "Тиол"

серия плотность Показатель кислотное число йодное Содержание

г/СМ'' преломления Пд20 число омыления число суммы каротимоидон

1 0,92.5 1,472 2,28 188 120 70,2

2 0,913 1,471 2,30 192 143 70,3

3 0,914 1,469 2,60 189 140 71,1

1 0,938 1,473 2,27 190 122 70,3

2 0,916 1,470 2,20 189 120 70,2

3 0,915 1,470 2,40 197 143 71,2

1 0,936 1,472 2,29 186 143 70,1

2 0,914 1,470 2,10 190 122 70,2

3 0,917 1,469 2,45 194 122 69,9

4 0,939 1,472 2,28 187 140 73,2

0,917 1,469 2,15 191 140 72,1

0,917 1,469 2,45 194 122 73,1

5 0,935 1,472 2,28 185 144 69,8

0,916 1,471 2,20 193 122 76,1

0,916 1,468 2,56 190 140 70,2

В основу методики стандартизации "Тиола" положена как и в случае чайного экстракта-концентрата, способность каротиноидов к поглощению при длинах волн 400-500нм. Пересчет суммы каротиноидов в "Тиоле" вели также на р-каротип. Оптическую плотность раствора 96% этапольного извлечения каратиноидов из исследуемых образцов "Тиола" измеряли при длине волны 450 им. В качестве рабочего стандартного образца использовали калии бихромат. Относительная ошибка разработанной методики спектрофотомст-рического определения суммы каротиноидов в "Тиоле" с 95% вероятностью составил^±4,93% (табл.2). Для проверки достоверности методики проводили опыты с добавками р-каротина.

По разработанной методике проведен количественный анализ 5 опытных серий препарата, на основании чего регламентировано содержание каротиноидов не менее 50 мг%.

Проведенные исследования по установлению сроков годности пяти опытных серий препарата, регламентируемых разработанной нами ВФС 185-96. Установлено, что при хранении в прохладном и защищенном от света месте препарат стабилен в течение 2 лет по всем показателям качества. На основании этих исследований установлен срок годности препарата "Тиол" -1 год 6 месяцев.

Проведено изучение фармокологического действия чайного экстракта-концентрата и его 5% раствора в подсолнечном масле ("Тиола").

Терапевтическая активность разработанных нами препаратов подтверждена фармокологическими испытаниями б Бурятском филиале СОАНРФ.

Проведены исследования по определению острой токсичности и специфического (ранозаживляющего, противоязвенного ) действия разработанных нами фитопрепаратов "чайного экстракта-концентрата" и "Тиола".

„

показатель преломления, кислотное число, число омыления, йодное число, подлинность содержание суммы каротиноидов в пересчете на р-каротин.

8. Установлен срок годности препаратов :"Чайный экстракт-концентрат" и "Тиол" при хранении в прохладном и защищеном от света

г

месте, равныЫ! год, 6 месяцев.

9. Подготовлены проекты ВФС на "Чайный экстракт-концентрат " и "Тиол"^ которые рассмотрены и утверждены МЗ РеспубликиГрузия №№185/96,186/96 от 18 июня 1996 года.

Препарат "Тиол" используется в медицинской практике.

(

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Ранозаживляющее действие чайного экстракта (Багайников И.А., Убашеев И.О., Бакуридзе А.Д., Цомая И.В./Фитотерапия и рефлексотерапия заболеваний, -сб. материалов научно-практической конференции. Улан-Удэ, 1992.-С.29-30.

2. Цомая И.В., Бакуридзе А.Д., Дементьева H.H. Стандартизация "Тиола"/ Сб.научных трудов Тбилисского государственного медицинского университета. Тбилиси. 1995.-(ХХХ)-С.213-215.

3. Цомая И.В., Бакуридзе А.Д., Дементьева H.H. Создание нового фармакологического средства "Тиол" из липидной фракции чайного экстракта-концентрата/Научные труды Пятигорской медицинской Академии. "Материалы 51-й региональной конференции по фармации и подготовке кадров. "-Пятигорск, 1996.-С.23-24.

4. Цомая И.В. Патент на способ получения чайного экстракта-концентрата номер: 4916 от 24.06.1996г.

Подписано в печать 25.07.97 г. Тораж 100 экз. Заказ N«69

Типография ЛТД "ТОНИ"

380012, Тбилиси, просп. Давида Агмашенебели 150