Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе многокомпонентных лекарственных форм спазмолитического и анальгетического действия
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе многокомпонентных лекарственных форм спазмолитического и анальгетического действия
Ларионова Светлана Геннадьевна
На правах рукописи
РГБ ОД
7 ] АП? ГЯ
Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе многокомпонентных лекарственных форм спазмолитического и анальгетического действия
15.00.02. — фармацевтическая химия и фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
Москва • 2002
Работа выполним в НИИ фармации ММА им. И.М. Сеченова МЗ РФ.
Научный руководитель: доктор фармацевтических наук .Дементьева Н.Н.
Официальные оппоиенты: Доктор фармацевтических наук, профессор Даргаева Т.Д
Доктор фармацевтических наук Саломатан Е.М.
Ведущая организация: Ярославская Государственная Медицинская Академия. Защита состоится ь 14 часов.
на заседании диссертационного совета 006. 070. 01.при Всероссийском научно-исследователъсамш институте лекарственных и ароматических растений по адресу: 113216, Москва, ул. Грина ,7.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР (Москва, ул. Гринз, 7).
Автореферат разослан "_"_2002 г.
Ученый секретарь диссертационного
совета Д 006.070.01,
кандвдат сельскохозяйственных наук
МВ.Кирцова.
РМ-2 £2 О
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ.
Создание и внедрение новых высокочувствительных методик контроля качества лекарственных средств является одной га главных задач фармацевтической науки.
Эффективность анализа лекарственных средств непосредственно связана с использованием физико-химических методов исследования. Все большее практическое значение находят хроматографические методы, в том числе высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которая обеспечивает высокую чувствительность, специфичность и экспрессность анализа.
Этот метод вошел в нормативную документацию Российской Федерации, стран СНГ, а также используется в фармакопеях США, Британской, Немецкой и Европейской.
В современной медицинской практике применяется широкий ассортимент готовых лекарственных форм анальгетического и спазмолитического действия. Большинство из них представляют собой многокомпонентные лекарственные средства, в состав которых входят вещества, относящиеся к различным классам химических соединений -алкалоиды, барбитураты, производные п-аминофенола и др. Разработка методов оценки качества данных лекарственных средств является сложной задачей, которая может быть решена с применением метода ВЭЖХ, позволяющего совместить стадии разделения, идентификации и количественного определения.
Объектами наших исследований выбраны сложные таблетированные лекарственные формы "Спазмоспардеин" и "Глтоферал". Таблетки "Спазмоспардеин", состоящие из 8 компонентов, разработаны в ГУЛ МБА МЦ УД Президента РФ. Зарубежный аналог таблеток "Спазмоспардеин" — таблетки "Спазмовералгин", содержащие 6 компонентов и выпускаемые фирмой "Словакофарма". В НД для анализа компонентов этого препарата предлагается метод мицеллярной электрокинетической хроматограф™, который в настоящее время малодоступен, или альтернативный метод
ВЭЖХ с использованием двух различных методик, что увеличивает трудоемкость и время анализа.
Таблетки "Глюферал" выпускаются в настоящее время в Республике Грузия. По действующей НД анализ таблеток "Глюферал" проводится с помощью химических методов и спекгрофотометрии после предварительного разделения и выделения действующих веществ методом экстракции, что связано с использованием значительных количеств растворителей, реагентов и длительностью анализа. Подлинность компонентов устанавливается только на основе общегрупповых реакций. Предлагаемая для количественного определения альтернативная методика ВЭЖХ несовершенна, т.к. не позволяет получить достоверные воспроизводимые результаты и объективно оценить качество препарата.
В связи с вышеизложенным представляется актуальным провести теоретические исследования по подбору оптимальных условий анализа многокомпонентных лекарственных средств методом ВЭЖХ. На основе полученных теоретических данных появится возможность научного подхода при создании унифицированной методики оценки качества сложных лекарственных форм спазмолитического и анальгетического действия. ЦЕЛЬ И ЗАДАЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Целью работы является проведение исследований, по оптимизации условий анализа методом ВЭЖХ и созданию высокоэффективных и научно обоснованных методик качественного и количественного определения лекарственных форм сложного состава, содержащих алкалоиды, барбитураты, производные п-аминофенола и другие органические соединения различных химических классов.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Изучить и проанализировать данные литературы о физико-химических методах определения лекарственных веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин" и "Глюферал".
2. Провести исследования по изучению хроматографического поведения на различных сорбентах кофеина, натрия бензоата, кодеина фосфата,
атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромюовала и парацетамола.
3. Определить основные хроматографические характеристики изучаемых веществ при различных значениях рН подвижной фазы.
4. Исследовать зависимость между составом подвижной фазы и эффективностью разделеш1я анализируемых веществ.
5. Использовать результаты теоретических исследований для разработки высокоэффективных ВЭЖХ-методик, применимых для качественного и количественного анализа, определения показателей "Растворение" и "Однородность дозирования" многокомпонентных лекарственных форм -таблетки "Спазмоспардеин" и таблетки Тлгоферал".
6. Разработать проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" и проект "Изменения" на таблетки "Глюферал".
НАУЧНАЯ НОВИЗНА
Методом сравнительной оценки данных по изучению хроматографического разделения кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромюовала , парацетамола и натрия бензоата в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ на различных птах сорбентов (октил-, октадешш-, цианопропилсиланы), в подвижных фазах, с различным соотношением компонентов и различным значением рН выявлены факторы, влияющие на оптимальное проведение анализа в условиях изократического режима элтоирования.
Определены основные хроматографические параметры для изучаемых веществ: время удерживания, фактор удерживания, спектральные соотношения; оптимизированы условия идентификации изучаемых веществ, основанные на прямой зависимости величины удерживания от значения рН и концентрации органического компонента в подвижной фазе.
С учетом хроматографического поведения исследуемых веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин", определены оптимальные условия их разделения и разработана унифицированная ВЭЖХ-методика,
пригодная для оценки качества препарата по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение".
На основе проведенных исследований разработана унифицированная методика ВЭЖХ для анализа и стандартизации лекарственного средства таблетки "Глюферал" по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение". ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. На основе проведенных исследований разработаны и внедрены:
- унифицированная методика ВЭЖХ-анализа и стандартизации шести компонентов нового сложного лекарственного средства "Таблетки "Спазмоспардеин" (кофеина, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола) по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение" (отзыв на методику от 14. 12.2001 г).
- проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" (акт внедрения от 15.01.2002).
- унифицированная методика анализа и стандартизации лекарственного средства "Таблетки "Глюферал" (акт апробации методики от 13.12.2001).
- проект "Изменения №1 к ФС 121/96 (принят к рассмотрению Фармакопейным комитетом Республики Грузия, письмо АО "Тбилхимфарм" №01-10/117 от 13.12.2001 г).
ПУБЛИКАЦИИ.
По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.
Основные результаты исследований доложены на VI, VII Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва 1999, 2000 годы). На Международной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск 2000 г).
СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЙ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК.
Диссертационная работа выполнялась в соответствии с Государственной комплексной программой "Фундаментальные науки -медицине", № Государственной регистрации 01.9.700001593 и соответствует тематике проблемной комиссии по фармации № 36.08 РАМН МЗ РФ. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ ИА ЗАЩИТУ.
- результаты теоретических исследований по оптимизации условий ВЭЖХ-анализа кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала, парацетамола и натрия бензоата в составе многокомпонентных лекарственных форм.
- унифицированная методика анализа и стандартизации 6 компонентов нового сложного лекарственного средства таблетки "Спазмоспардеин" (кофеина, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола) по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение;
- унифицированная методика анализа и стандартизации лекарственного средства таблетки "Глюферал" (кофеин-бензоат натрия, фенобарбитал, бромизовал) по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение".
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.
Диссертационная работа изложена на 154 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы и 23 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы из 209 наименований, из них 160 на ■ иностранных языках. В приложении, представлены' материалы по внедрению.
Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.
Первая глава (обзор литературы) содержит краткие сведения по фармакологическому действию кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола. Представлен обзор литературных данных по применению физико-химических методов для определения изучаемых лекарственных средств, а также метода ВЭЖХ в анализе сложных лекарственных смесей, содержащих в своем составе кофеин, кодеина фосфат, атропина сульфат, эфедрина гидрохлорид, папаверина гидрохлорид, фенобарбитал, бромизовал и парацетамол.
Вторая глава посвящена изучению хроматографического поведения кофеина, натрия бензоата, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ па различных типах сорбентов (октил-, октадецил-, цианопропилсиланы), в подвижных фазах с различным соотношением компонентов и различным значением рН. Кроме того, представлены оптимальные условия разделения изучаемых компонентов.
В третьей главе представлены результаты исследований по разработке унифицированной ВЭЖХ-методшш, пригодной для оценки качества нового лекарственного средства "Спазмоспардеин" по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение", а также для определения срока годности.
Четвертая глава посвящена разработке унифицированной методики качественного и количественного определения действующих веществ таблеток "Глюферал" и ее применению для оценки качества препарата
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1.Материалы и методы исследования.
Объекты исследований - сложные таблетированные лекарственные формы "Спазмоспардеин" и "Глюферал" и их компоненты, которые отвечали требованиям НД.
Определение спектральных характеристик проводилось на ультрафиолетовом спектрофотометре модели "Сагу 1Е", фирмы "Varían" (США).
Исследования проводились на жидкостном хроматографе модели LC-10 А фирмы "Шимадзу" (Япония). Прибор снабжен однолучевым ультрафиолетовым детектором с диапазоном длин волн от 190 до 900 им и масштабом измерения оптической плотности до 4,00 едшшц.
Ввод анализируемой пробы проводили микрошприцем с помощью стандартного инжектора производства фирмы "Rheodine" с дозирующей петлей ввода объемом 20 мкл.
Элюенты готовили на основе однозамещепного фосфата калия ("Мерк") и фильтровали через мембранный фильтр размером 0,45 мкм. В работе использовали ацетоннтрил "для ВЭЖХ" ("Реахим").
Результаты проведенных исследований представлены в таблицах. Статистическая обработка полученных данных проводилась в соответствгш с требованиями ГФ XI издания.
2.Выбор хроматографической системы и критериев оптимизации.
В работе в качестве подвижной фазы использовали смеси 0,05 М раствора однозамещепного фосфата калия и ацетонитрила.
На первом этапе наши исследования были направлены на подбор сорбентов, позволяющих провести разделение компонентов сложной лекарственной формы за короткое время и с использованием доступной подвижной фазы. Для этого было проведено изучение хроматографического поведения исследуемых веществ на различных сорбентах, содержащих октил-, октадецил-, цианопропилсиланы (Zorbax С8 5 мкм, Ultrasphere ODS 5мкм и Ultrasphere CN 5 мкм). Полученные данные представлены в табл. 1, 2,3.
На колонке с сорбентом Ultrasphere ODS достигается удовлетворительное хроматографическое разделение пиков атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, бензоата натрия и папаверина гидрохлорида. Полного разделения пиков кофеина, парацетамола и кодеина фосфата достичь не удалось. Изменение концентрации ацетонитрила в
подвижной фазе в пределах от 10 до 30% не оказывает существенного влияния на разделение пиков фенобарбитала и бромизовала. При уменьшении концентрации ацетонитрила в подвижной фазе происходит размывание пика папаверина гидрохлорида вследствие длительного его удерживания.
На колонке с сорбентом Zorbax С8 5 мкм не происходит удовлетворительного разделения компонентов. Наблюдается интерференция пиков кофеина, кодеина фосфата, эфедрина гидрохлорида и парацетамола, в то время как пики атропина сульфата, папаверина гидрохлорида и бензоата натрия имеют удовлетворительное разделение. Однако время анализа уже составляло около 30 минут и дальнейшее уменьшение концентрации ацетонитрила для полного разделения всех веществ не представлялось целесообразным.
Для дальнейших исследований нами выбрана колонка с сорбентом "Ultrasphere CN". На этой колонке при коротком времени анализа показана возможность разделения всех компонентов, путем изменения содержания ацетонитрила в подвижной фазе.
Таблица 1
Хроматографические характеристики изучаемых веществ на колонке с
Ultrasphere ODS, 5 мкм Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,05М фосфатный буфер (20:80)
Название Хроматографические характеристики
t'ü,MliH к N
Парацетамол 0,74 0,246 312
Кофеин 1,36 0,452 423
Кодеина фосфат 1,59 0,528 469
Эфедрина г\хл 2,09 0,694 576
Атропина сульфат 11,19 3,718 4468
Бензоат натрия 13,61 4,522 6121
Бромизовал 15,76 5,236 7808
Фенобарбитал 15,94 5,296 7958
Папаверина г\хл 34,29 11,430 8523
Таблица 2
Хроматографические характеристики изучаемых веществ на колонке с 7огЬах Се, 5 мкм
Название Хроматографические характеристики
¡'я мин к N
Парацетамол 2,12 0,902 1130
Кофеин 2.22 0,945 723
Эфедрина г/хл 2.24 0,953 729
Кодеина фосфат 2,27 0,966 1314
Атропина сульфат 4,70 2.000 1721
Бекзоат нагрш 6,79 2,889 1286
Фенобарбитал 14,45 6,149 1195
Бромизовал 14,68 6,247 1780
Папаверина г/хл 26,79 11,401 1332
Таблица 3
Хроматографические характеристики изучаемых веществ на колонке с ШгазрИеге СИ, 5 мкм
Название Хроматографические характеристики
1'цмин к N
Парацетамол 1.67 0,596 1230
Эфедрина г/хл 1.93 0,689 1224
Кофеин 1,990 0,711 1412
Бензоат натрия 2,140 0,764 3380
Бромизовал 2,720 0,971 1876
Фенобарбитал 3,700 1,321 1463
Кодеина фосфат 3,880 1.312 1644
Атропина сульфат 4,070 1,376 1736
Папаверина г/хл 16,650 5.946 2587
Нами было изучено влияние значения рН подвижной фазы (в пределах от 2,5 до 5,5) на хроматографическое поведение изучаемых соединений. Зависимость фактора удерживания исследуемых соединений от значен™ рН элюента, содержащего 20 % ацетонитрила, представлена на рис. 1. Как видно на рис. 1, наилучшее разделение наблюдается при значениях рН подвижной фазы от 3,5 до 4,0.
Изучено влияние содержания органического компонента в подвижной фазе, содержащей 0,05 М фосфатный буфер с рН 4 на хроматографические характеристики исследуемых соединений (рис.2).
Зависимость фактора удерживания исследуемых веществ от величины рН подвижной фазы состава: ацетонитрил - 0,05 М фосфатный буфер (20 :80).
• Папаверина гидрохиорнд
к
■5;— Кофеин —®— Фенобарбитал
•А— Кодеина фосфат —▼— Бромизовал
О— Эфедрина гидрохлорид —Ш— Парацетамол
— Атропина сульфат —^— Бензоат натрия
Зависимость фактора удерживания исследуемых веществ от содержания ацетонитрила в подвижной фазе состава: 0,05 М фосфатный буфер (рН4) - ацетонитрил
13,0 11,0 9,0 7,0 5,0 ■
3,0
10
I
15
—г-
20
Содержание ацетонитрила, %
-Папаверина гидрохлорид
—I
25
15 20
Содержание ацетонитрила, %
Кофеин
Кодеина фосфат Эфедрина г/хл Атропина сульфат
Фенобарбитал Бромнзовал Парацетамол Бензоат натрия
Рис 2.
Результаты проведенных исследовашш по оптимизации условий анализа сложной лекарственной смеси позволили получить удовлетворительное разделение кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола (рис. 3). Оптимальными условиями хроматографирования являются: сорбент ШтаБрЬег СЫ. 5мкм, подвижная фаза состава ацетонитрил - 0,05 М фосфатный буферный раствор с рН 4,0 в соотношении 15 : 85, скорость подвижной фазы - 1 мл/мин, с использованием ультрафиолетового детектора при длине волны 230 нм.
Хроматограмма модельной смеси изучаемых веществ
1
23
4 '7
I-1-1--11 мин
0 10 20 25
Колонка иНтаБрЬег СМ 250 х 4,6 мм, подвижная фаза: ацетонитрил -0,05М фосфатный буфер, рН 4 (15 : 85).
1 - парацетамол, 2 - кофеин, 3 - бромизовал, 4 - фенобарбитал, 5 - кодеина фосфат, 6 - атропина сульфат, 7 - папаверина гидрохлорид.
Однако удовлетворительного разделения парацетамола и эфедрина гидрохлорида получить не удалось. Кроме того, при подборе аналитических концентраций обнаружено, что пики эфедрина гидрохлорида и атропина сульфата практически не определяются на хроматограмме, полученной в описанных выше условиях, вследствие того, что эфедрина гидрохлорид и атропина сульфат имеют низкий удельный показатель поглощения (11,6 и 5,9 соответственно). Установлено, что предел обнаружения эфедрина гидрохлорида составляет 1 мкг/мл, атропина сульфата - 0,6 мкг/мл. Концентрации этих компонентов в аналитической пробе находятся ниже предела обнаружения. Поэтому было предложено определять эфедрина гидрохлорид методом ТСХ, и подтверждать присутствие атропина сульфата цветной химической реакцией Витали-Морена.
3.Применение ВЭЖХ для анализа и стандартизации таблеток "Спазмоспардеин".
Разработанная ВЭЖХ-методика была использована для идентификации и количественного определения действующих веществ в таблетках "Спазмоспардеин". Таблетки "Спазмоспардеин" содержат: парацетамола 0,15 г, кофеина 0,05 г, бромизовала 0,25 г, фенобарбитала 0,02 г, кодеина фосфата 0,008 г, атропина сульфата 0,00025г, эфедрина гидрохлорида 0,005 г, папаверина гидрохлорид 0,03 г.
Идентификацию компонентов проводили в выше описанных условиях по приведенному времени удерживания (IV) и фактору удерживания (1с). Относительная ошибка времени удерживания для изучаемых компонентов не превышает ±1,2%, фактора удерживания - от ± 0,2 до ±0,9%, что свидетельствует о достаточной точности разработанной методики качественного определения лекарственных веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин.
С целью определения интервала концентраций исследуемых веществ, в которых наблюдается линейная зависимость между площадью хроматографического пика и концентрацией определяемого вещества в анализируемом растворе, для каждого из определяемых веществ были построены калибровочные графики. Линейная зависимость сигнала детектора от концентрации определяемого вещества сохраняется в выбранном интервале концентраций
Хроматограмма образца таблеток "Спазмоспардеин"
23
10
20
I мин
25
Колонка иктаБрИег СЫ 250 х 4,6 мм, подвижная фаза: ацстошггрил -0,05М фосфатный буфер, рН 4 (15 : 85).
1 - парацетамол, 2 - кофеин, 3 - бромизовал, 4 - фенобарбитал, 5 - кодеина фосфат, 6 - папаверина гидрохлорид.
Рис 4
Количественное содержание лекарственных веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин" определяли по методу внешнего стандарта. Для расчетов использовали площади пиков, как наиболее объективный параметр. Воспроизводимость и точность методики подтверждена на модельных смесях. Относительные ошибки определений находятся в пределах от+1,1 до ±3,2%, что свидетельствует о достаточной точности и воспроизводимости методики анализа, изучаемых веществ при их совместном присутствии. Метрологические характеристики результатов количественного определения действующих веществ в таблетках "Спазмоспардеин" методом ВЭЖХ представлены в табл. 4.
Таблица 4.
Данные статистической обработки результатов количественного определения опытно-промышленных партий таблеток "Спазмоспардеин" (п = 5, Р= 95%, 1=2,78)
Компонент Серия Найдено (Хер) Метрологические характеристики
г % Б Дх А хер. +Еср, %
Кофеин 0,0500 100,08 1,5659 4,353 1,947 1,95
Парацетамол 0,1502 100,13 1,2824 3,565 1,594 1,59
Кодеина фосфат 01 0,0081 101,10 2,1404 5,950 2,661 2,63
Фенобарбитал 0,0197 98,50 1,8028 5,012 2,241 2,28
Бромизовал Папаверина г/хл 0,2478 0,0301 99,12 100,27 0,9550 1,8166 2,655 5,050 1,187 2,258 1,20 2,25
Кофеин 0,0496 99,24 1,6087 4,472 2,000 2,02
Парацетамол 0,1521 101,43 1,1639 3,236 1,447 1,43.
Кодеина фосфат 02 0,0080 100,40 2,1694 6,031 2,697 2,69
'енобарбитал 0,0203 101,70 1,5248 4,239 1,896 1,86
Бромизовал Папаверина г/хл 0,2552 0,0296 102,08 98,73 0,9550 1,7544 2,655 4,877 1,187 2,181 1,16 2,21
ВЭЖХ-методика, разработанная для идентификации и количественного определения действующих веществ таблеток "Спазмоспардеин" была использована для оценки качества таблеток по показателям "Растворение" и "Однородность дозирования".
В результате исследований были подобраны условия для определения полноты высвобождения действующих веществ из таблеток на приборе типа "вращающаяся корзинка". В качестве среды растворения использовали воду дистиллированную. Объем среды растворения 1 ООО мл, температура - 37 ± 1° С. Скорость вращения корзинки 100 об/мин. Проведены исследования динамики высвобождения исследуемых компонентов из таблеток (рис. 5). Полученные результаты позволили включить в раздел "Растворение" проекта ФСП следующие нормы: за 45 минут в раствор должно перейти не менее 75% действующих веществ.
График высвобождения действующих веществ из таблеток "Спазмоспардеин"
100
I I I I I I I I 1 1 мин
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
ТТ I I I I 1 I* мин О 5 10 15 20 25 30 35 40 45
• Фенобарбитал
■ Бромизовал
■ Папаверина гидрохлорид
■ Кофеин
• Парацетамол
• Кодеина фосфат
В связи с тем, что в состав таблеток "Спазмоспардеин" входят активные компоненты в количестве 0,05 г и менее (кофеин, кодеина фосфат, фенобарбитал, папаверина гидрохлорид), необходимо было провести определение однородности дозирования. Количественную оценку проводили методом ВЭЖХ в условиях, аналогичных условиям количественного определения.
Установлено, что представленные таблетки отвечают требованиям ГФ XI по показателю "Однородность дозирования". Содержание кофеина колеблется в интервале от - 7% до +6%, папаверина гидрохлорида - от - 9% до + 1 %, фенобарбитала - от - 10,6% до + 4,2%, кодеина фосфата - от - 9% до +4,6%.
Разработанная ВЭЖХ-методика была использована для определения срока годности таблеток. Хранившиеся в естественных условиях таблетки сохраняли стабильность в течение 1 года (срок наблюдения).
По результатам исследований разработан проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" (акт внедрения от 15.01.2002). Разработанная методика апробирована в Центральной Лаборатории контроля качества лекарственных средств МЦ УД Президента РФ (отзыв на методику от 14.12.2001).
4. Анализ и стандартизация таблеток "Глюферал"
В состав таблеток "Глюферал" входят: кофеин-бензоат натрия 0,005 г, бромизовал 0,07 г, фенобарбитал 0,025 г, кальция глюконат 0,2 г.
Исходя из проведенных теоретических исследований, для анализа лекарственной формы "Глюферал" нами использована разработанная ранее методика с небольшой модификацией подвижной фазы. Хроматографическое разделение проводили на колонке, заполненной сорбентом с привитыми ншрильными группами (8ире1созП СМ) размером 250 х 4,6 мм. Для элюирования использовали подвижную фазу состава: ацетонитрил — 0,05М фосфатный буфер (рН 4) (20 : 80). Скорость потока подвижной фазы - 1 мл/мин. УФ-детектирование проводили при длине волны 230 нм. Полученная хроматограмма
разделения компонентов таблеток "Глюферал" представлена на рис. 6. Время одного анализа составляет 10 минут.
Хроматограмма модельной смеси лекарственных веществ, входящих в состав таблеток "Глюферал".
3
Т
о
8
-1 t мин 10
Колонка Supelcosil CN 250 х 4,6 мм, подвижная фаза: ацетонитрил 0,05М фосфатный буфер (рН 4) (20 : 80).
1-Кофеин; 2- бензоат натрия; 3 - бромизовал; 4-фенобарбитал.
Рис.6
В описанных условиях проводили идентификацию и количественное определение действующих веществ. Относительная ошибка -времени удерживания для кофеина составила + 0,16%, для фенобарбитала ± 0,11%, для бромизовала+0,1%. Относительная ошибка фактора удерживания составляет от + 0,17 до ± 0,34%.
Представленные в табл. 5 данные количественного определения свидетельствуют о том, что относительная ошибка анализа не превышает +3%. Результаты количественного анализа действующих веществ по
разработанной ВЭЖХ методике практически незначительно отличаются от результатов, полученных по методике ФС 121/96.
Таблица 5
Данные статистической обработки результатов количественного определения модельной смеси компонентов, входящих в состав таблеток "Глюферал" по разработанной методике и методике НД (п = 6, Р = 95%, г = 2,45)
Состав Найдено
модельной По разработанной методике По методике НД
смеси, г. г. % Метрологические характеристики г. % Метрологаческие характеристики
Кофеин- 0,00503 98,63 0,00514 100,78
бензоат натрия, 0,00512 100,39 Хср = 100,16 0,00528 103,53 Хср = 100,29
0,0051 0,00524 102,75 Б= 2,907 0,00498 97,65 3,112
0,00487 95,49 Дхср. = 2,907 0,00518 101,57 ДХср.= 3,113
0,00528 103,53 Еср%=± 2,90 0,00487 95,49 Еср%=± 3,1
0,00511 100,20 0,00524 102,75
Бромизовал 0,0686 99,42 0,0708 102,61
0,0690 0,0713 103,33 Хер = 100,77 0,0714 103,19 Хср = 100,65
0,0703 101,88 1,587 0,0683 98,99 Б = 2,1275
0,0694 100,58 Дхер.= 1,587 0,0685 99,28 ДХср.= 2,128
0,0684 99,13 1,57 0,0678 98,26 2,11
0,0692 100,29 0,0699 101,30
Фенобарбитал 0,0253 0,0258 0,0244 101,98 96,44 Хер = 98,88 0,0266 0,0259 105,14 102,37 Хср = 100,26
0,0242 95,65 2,530 0,0247 97,63 3,017
0,0252 99,60 Дхер.= 2,530 0,0254 100,40 ДХср.= 3,02
0,0249 98,42 ^/0=+ 2,56 0,0247 97,63 Еср%=± 3,01
0,0256 101,19 0,0249 98,42
Однако предлагаемая научно обоснованная методика имеет ряд преимуществ, т.к. она позволяет:
- -проводить одновременно идентификацию и количественное определение трех действующих веществ, сокращая время анализа в 3 раза;
- определять высвобождение одновременно трех компонентов;
- повысить точность определения компонентов за счет использования оптимальной длины волны детектирования, при которой вещества имеют максимальное поглощение для расчета по отношению к стандартным веществам;
- увеличить срок использования колонки за счет уменьшения нагрузки в процессе хроматографирования;
- ввести в НД тест пригодности хроматографической системы.
Разработанная методика была применена для определения тестов "Однородность дозирования" и "Растворение" таблеток "Глюферал".
Тест "Растворение" проводили на приборе типа "вращающаяся корзинка" в следующих условиях: среда растворения - вода, объем растворения — 1000 мл, скорость вращения корзинки - 100 об/мин.
Исследование динамики высвобождения веществ (рис. 7) показало, что наибольшая скорость высвобождения наблюдается для кофеин-бензоата натрия. Уже в первые 10 минут его содержание в растворе достигает 72%. Содержание фенобарбитала и бромизовала в растворе через 20 минут достигает 70% и более. Это позволило ввести в тест "Растворение" следующие нормы: за 45 минут в раствор должно перейти не менее 75% действующих веществ.
Разработанная нами ВЭЖХ-методика была применена для одновременного определения однородности дозирования кофеин-бензоата натрия и фенобарбитала, содержание которых в таблетках "Глюферал" значительно меньше 0,05 г. Исследования показали, что для кофеин-бензоата натрия этот показатель находится в пределах 92,5 — 105,34%, а для фенобарбитала в пределах 90,89 - 103,12%. Таким
образом образцы таблеток "Глюферал" соответствуют требованиям ГФ XI.
График высвобождения действующих веществ из таблеток "Глюферал"
%
—А—Кофеин-бензоат натрия —Фенобарбитал —■—Бромизовал Рис.7
Разработанная методика включена в проект "Изменения №1 к ФС 121/96 " на таблетки "Глюферал" для определения подлинности, однородности дозирования, растворения и количественного содержания кофеин-бензоата натрия, бромизовала и фенобарбитала (акт апробации методики от 13.12.2001, письмо АО "Тбилхимфарм" № 01-10/117 от 13.12.2001).
ВЫВОДЫ
1. Проведены исследования по развитию и совершенствованию метода ВЭЖХ в анализе многокомпонентных лекарственных форм, содержащих алкалоиды, барбитураты и производные п-аминофенола.
2. Изучены особенности хроматографического поведения на различных типах сорбентов (октил-, октадецил-, цианопропилсиланы) кофеина, натрия бензоата, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола.
3. Определены основные хроматографические характеристики исследуемых веществ при различных значениях рН подвижной фазы.
4. Проведены теоретические исследования по изучению влияния состава подвижной фазы на эффективность разделения анализируемых веществ.
5. Оптимизированы условия идентификации исследуемых веществ, основанные на прямой зависимости величины удерживания от значения рН и концентрации органического компонента в подвижной фазе.
6. На основе проведенных исследований разработана унифицированная ВЭЖХ-методика оценки качества нового многокомпонентного лекарственного средства "Спазмоспардеин" по показателям "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования" и "Количественное определение". Относительные ошибки определения не превышают для кофеина + 2,0%, для парацетамола + 1,5%, для кодеина фосфата + 2,7%, для фенобарбитала 2,3%, для бромизовала ± 1,16%, для папаверина гидрохлорида + 2,25%.
7. Разработана унифицированная ВЭЖХ-методика для оценки качества препарата "Глюферал" по показателям "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования" и "Количественное определение". Относительная ошибка измерения составляет для кофеин-бензоата натрия + 2,9 %, для бромизовала + 1,57 %, для фенобарбитала ± 2,56%.".
8. Проведено сравнительное определите количественного содержания действующих веществ в таблетках "Глюферал" по разработанной ВЭЖХ методике и по методике описанной в НД. Установлено, что результаты определений веществ близки между собой, однако предложенная методика унифицирована, менее трудоемка, позволяет сократить время проведения анализа в 3 раза
9. По результатам исследований подготовлены проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" и проект "Изменения к ФС 121/96" на таблетки "Глюферал".
По теме диссертации опубликованы следующие работы:
1. Ларионова С.Г., Дементьева H.H. Применение метода ВЭЖХ в анализе сложных лекарственных смесей, содержащих кофеин-бензоат натрия, фенобарбитал и бромизовал // VI Росс, национальный Конгресс "Человек и лекарство": Тез. докл. - М., 19-21 апр. 1999. -С.432 - 433.
2. Ларионова С'.Г., Дементьева H.H. Оптимизация условий анализа многокомпонентных лекарственных форм седативного действия с применением метода ВЭЖХ // Фармация на современном этапе -проблемы и достижения (Сборник научных трудов НИИФ), М., 2000, - Т.39,4.2. - С.64 — 67.
5. Ларионова С.Г., Дементьева H.H. Применение метода ВЭЖХ в анализе сложных лекарственных смесей, содержащих алкалоиды различных групп //VII Росс, национальный Конгресс "Человек и лекарство": Тез. докл. -М., 10- 14 апр. 2000. - С.614.
к Ларионова С.Г., Дементьева H.H. Изучение хроматографического поведения некоторых алкалоидов в сложных лекарственных смесях// Междунар. конф. "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности": М-лы Междунар. науч. конф,- Томск, 2000.- С. 96 - 97
Оглавление диссертации Ларионова, Светлана Геннадьевна :: 2002 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. Обзор литературы.
1.1. Фармакологические свойства компонентов, входящих в состав анальгезирующих и спазмолитических лекарственных средств.
1.2.Применение физико-химических методов в анализе многокомпонентных лекарственных средств.
1.2.1.ВЭЖХ-анализ кофеина в сложных лекарственных смесях.
1.2.2.ВЭЖХ-анализ парацетамола в сложных лекарственных смесях.
1.2.3.ВЭЖХ-анализ кодеина и папаверина в сложных лекарственных смесях.
1.2.4.ВЭЖХ-анализ эфедрина и атропина в сложных лекарственных смесях.
1.2.5.ВЭЖХ-анализ фенобарбитала и бромизовала в сложныхлекарственных смесях.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Ларионова, Светлана Геннадьевна, автореферат
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Создание и внедрение новых высокочувствительных методик контроля качества лекарственных средств является одной из главных задач фармацевтической науки.
Эффективность анализа лекарственных средств непосредственно связана с использованием физико-химических методов исследования. Все большее практическое значение находят хроматографические методы, в том числе высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которая обеспечивает высокую чувствительность, специфичность и экспрессность анализа.
Этот метод вошел в нормативную документацию Российской Федерации, стран СНГ, а также используется в фармакопеях США, Британской, Немецкой и Европейской.
В современной медицинской практике применяется широкий ассортимент готовых лекарственных форм анальгетического и спазмолитического действия. Большинство из них представляют собой многокомпонентные лекарственные средства, в состав которых входят вещества, относящиеся к различным классам химических соединений - алкалоиды, барбитураты, производные п-аминофенола и др. Разработка методов оценки качества данных лекарственных средств является сложной задачей, которая может быть решена с применением метода ВЭЖХ, позволяющим совместить стадии разделения, идентификации и количественного определения.
Объектами наших исследований выбраны сложные таблетированные лекарственные формы "Спазмоспардеин" и "Глюферал". Таблетки "Спазмоспардеин", состоящие из 8 компонентов, разработаны в ГУП МБА МЦ УД Президента РФ. Зарубежный аналог таблеток "Спазмоспардеин " -близкие по составу таблетки "Спазмовералгин", содержащие 6 компонентов и выпускаемые фирмой "Словакофарма". В НД для оценки качества таблеток "Спазмовералгин" предлагается метод мицеллярной электрокинетической хроматографии, который в настоящее время малодоступен, или альтернативный метод ВЭЖХ с использованием двух различных методик для определения 4 компонентов и метод ТСХ для двух компонентов, что увеличивает трудоемкость и время анализа.
Таблетки Тлюферал" выпускаются в настоящее время в Республике Грузия. По действующей НД анализ таблеток Тлюферал" проводится с помощью химических методов и спектрофотометрии после предварительного разделения и выделения действующих веществ методом экстракции, что связано с использованием значительных количеств растворителей, реагентов и длительностью анализа. Подлинность компонентов устанавливается только на основе общегрупповых реакций. Предлагаемая для количественного определения альтернативная методика ВЭЖХ несовершенна, т.к. не позволяет получить достоверные воспроизводимые результаты и объективно оценить качество препарата. Условия хроматографирования подобраны эмпирически и не имеют теоретических обоснований.
В связи с вышеизложенным представляется актуальным провести теоретические исследования по подбору оптимальных условий анализа многокомпонентных лекарственных средств спазмолитического и анальгетического действия методом ВЭЖХ. На основе полученных теоретических данных появится возможность научного подхода при создании унифицированной методики оценки качества сложных лекарственных форм.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью работы является проведение исследований, по оптимизации условий анализа методом ВЭЖХ и созданию высокоэффективных и научно обоснованых методик качественного и количественного определения лекарственных форм сложного состава, содержащих алкалоиды, барбитураты, производные п-аминофенола и другие органические соединения различных химических классов
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Изучить и проанализировать данные литературы о физико-химических методах определения лекарственных веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин" и Тлюферал".
2. Провести исследования по изучению хроматографического поведения на различных сорбентах кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала, парацетамола и бензоата натрия.
3. Определить основные хроматографические характеристики изучаемых веществ при различных значениях рН подвижной фазы.
4. Исследовать зависимость между составом подвижной фазы и эффективностью разделения анализируемых веществ.
5. Использовать результаты теоретических иследований для разработки высокоэффективных ВЭЖХ-методик, применимых для качественного и количественного анализа, определения показателей "Растворение" и "Однородность дозирования" многокомпонентных лекарственных форм -таблетки "Спазмоспардеин" и таблетки "Глюферал".
6. Разработать проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" и проект "Изменения" на таблетки "Глюферал".
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Методом сравнительной оценки даных по изучению хроматографического разделения кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала, парацетамола и бензоата натрия в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ на различных типах сорбентов (октил-, октадецил-, цианопропил-силаны), в подвижных фазах с различным соотношением компонентов и различным значением рН выявлены факторы, влияющие на оптимальное проведение анализа в условиях изократического режима элюирования.
Определены основные хроматографические параметры для изучаемых веществ: время удерживания, фактор удерживания, спектральные соотношения; оптимизированы условия идентификации изучаемых веществ, которые основаны на прямой зависимости величины удерживания от значения рН и концентрации органического компонента в подвижной фазе.
С учетом хроматографического поведения исследуемых веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин", определены оптимальные условия их разделения, и разработана унифицированная ВЭЖХ-методика, пригодная для оценки качества препарата по показателям: "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования", "Количественное определение".
На основе проведенных исследований разработана унифицированная ВЭЖХ-методика для анализа и стандартизации лекарственного средства таблетки "Глюферал" по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение1.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. На основе проведенных исследований разработаны и внедрены:
- унифицированная методика ВЭЖХ-анализа и стандартизации шести компонентов нового с южного лекарственного средства "Таблетки "Спазмоспардеин" (кофеина, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола) по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дотирования", "Количественное определение" (отзыв на методику от П 12.2001 г).
- проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" (акт внедрения от 15. 01.2002).
-8- унифицированная методика анализа и стандартизации лекарственного средства "Таблетки "Глюферал" (акт апробации методики от 13.12.2001).
- проект "Изменения №1 к ФС 121/96" на таблетки "Глюферал" (принят к рассмотрению Фармакопейным комитетом Республики Грузия, письмо АО "Тбилхимфарм" №01-10/117 от 13.12.2001 г).
ПУБЛИКАЦИИ.
По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.
Основные результаты исследований доложены на VI, VII Российских национальных Конгрессах "Человек и лекарство" (Москва 1999, 2000 годы). На Международной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск 2000 г).
СВЯЗЬ ЗАДАЧ И ИССЛЕДОВАНИЙ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК.
Диссертационная работа выполнялась в соответствии с Государственной комплексной программой "Фундаментальные науки - медицине", № Государственной регистрации 01.9.700001593 и соответствует тематике проблемной комиссии по фармации № 36.08 РАМН МЗ РФ.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
- результаты теоретических исследований по оптимизации условий ВЭЖХ-анализа кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола в составе многокомпонентных лекарственных форм.
-9- унифицированная методика анализа и стандартизации 6 компонентов нового сложного лекарственного средства таблетки "Спазмоспардеин" (кофеина, кодеина фосфата, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола) по показателям: "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования", "Количественное определение;
- унифицированная методика анализа и стандартизации лекарственного средства таблетки "Глюферал" (кофеин-бензоат натрия, фенобарбитал, бромизовал) по показателям: "Подлинность", "Растворение" "Однородность дозирования", "Количественное определение".
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.
Диссертационная работа изложена на 154 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы и 23 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы 209 наименований, из них 160 на иностранных языках. В приложении представлены материалы по внедрению.
Заключение диссертационного исследования на тему "Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе многокомпонентных лекарственных форм спазмолитического и анальгетического действия"
общие вывода
1. Проведены исследования по развитию и совершенствованию метода ВЭЖХ в анализе многокомпонентных лекарственных форм, содержащих алкалоиды, барбитураты и производные п-аминофенола.
2. Изучены особенности хроматографического поведения на различных типах сорбентов (октил-, октадецил-, цианопропилсиланы) кофеина, бензоата натрия, кодеина фосфата, атропина сульфата, эфедрина гидрохлорида, папаверина гидрохлорида, фенобарбитала, бромизовала и парацетамола.
3. Определены основные хроматографические характеристики исследуемых веществ при различных значениях рН подвижной фазы.
4. Проведены теоретические исследования по изучению влияния состава подвижной фазы на эффективность разделения анализируемых веществ.
5. Разработаны оптимальные условия идентификации исследуемых веществ, основанные на зависимости величины удерживания от значения рН и концентрации органического компонента в подвижной фазе.
6. На основе проведенных исследований разработана унифицированная ВЭЖХ-методика оценки качества нового многокомпонентного лекарственного средства "Спазмоспардеин" по показателям "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования" и "Количественное определение". Относительные ошибки определения не превышают для кофеина + 2,0%, для парацетамола + 1,5%, для кодеина фосфата + 2,7%, для фенобарбитала 2,3%, для бромизовала + 1,16%, для папаверина гидрохлорида + 2,25%.
7. Разработана унифицированная ВЭЖХ-методика для оценки качества препарата "Глюферал" по показателям "Подлинность", "Растворение", "Однородность дозирования" и "Количественное определение". Относительная ошибка измерения составляет для кофеин-бензоата натрия + 2,9 %, для бромизовала + 1,57 %, для фенобарбитала + 2,56%.".
8. Проведено сравнительное определение количественного содержания действующих веществ в таблетках "Глюферал" по разработанной ВЭЖХ методике и по методике описанной в НД. Установлено, что результаты определений веществ близки между собой, однако предложенная методика унифицирована, менее трудоемка, позволяет сократить время проведения анализа в 3 раза
9. По результатам исследований подготовлены проект ФСП на таблетки "Спазмоспардеин" и проект "Изменения к ФС 121/96" на таблетки "Глюферал".
Заключение
Приведенные в обзоре литературы краткие сведения о физико-химических методах анализа многокомпонентных лекарственных средств спазмолитического и анальгезирующего действия позволяют сделать вывод о том, что метод ВЭЖХ является наиболее актуальным и перспективным для оценки их качества.
К сожалению, отечественных работ по использованию ВЭЖХ в фармацевтическом анализе указанных групп препаратов недостаточно. Следует отметить, что большинство методик идентификации и количественного определения носят в основном аналитический характер. Условия хроматографирования подбираются эмпирически и не имеют теоретических обоснований. В связи с этим возникает необходимость проведения теоретических исследований при подборе оптимальных условий анализа многокомпонентных лекарственных смесей анальгетического и спазмолитического действия. На основе полученных теоретических данных появится возможность научного подхода к подбору оптимальных условий разделения и созданию унифицированных методик контроля качества сложных лекарственных средств анальгетического и спазмолитического действия.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ИЗУЧЕНИЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ПОВЕДЕНИЯ КОМПОНЕНТОВ, ВХОДЯЩИХ В СОСТАВ СЛОЖНЫХ ТАБЛЕТИРОВАННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ
Как было показано в обзоре литературы, актуальной проблемой является стандартизация сложных лекарственных средств, содержащих компоненты различных химических классов.
Как правило, в таблетках сложного состава качественный и количественный анализ, а также испытание на однородность дозирования и биодоступность проводятся различными методами. Характеризующие метод ВЭЖХ универсальность, простота исполнения, экспрессивность и четкость разделения делают его весьма удобным для целей фармацевтического анализа. В связи с этим, мы применили ВЭЖХ для разработки селективных и унифицированных методик анализа сложных таблетированных лекарственных форм "Спазмоспардеин" и "Глюферал" по показателям: "Подлинность", "Однородность дозирования", "Растворение" и "Количественное определение". Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить спектральные и хроматографические характеристики анализируемых соединений в различных условиях.
2. Разработать оптимальные условия хроматографического разделения компонентов, входящих в состав сложных таблетированных лекарственных форм.
2.1. Объекты исследования
Объектами исследования являлись многокомпонентные лекарственные средства: таблетки "Спазмоспардеин" и "Глюферал", а также субстанции парацетамола, кофеина, кодеина фосфата, атропина сульфата, папаверина гидрохлорида, бромизовала и фенобарбитала. Серийные образцы таблеток "Спазмоспардеин" были произведены на фармацевтическом производстве МБ А Медицинского Центра Управления делами Президента. Образцы таблеток Тлюферал" были предоставлены Тбилисским ХФЗ. Все использованные в работе лекарственные формы и субстанции отвечали требованиям действующих НД. Таблетки "Спазмоспардеин" имеют следующий состав:
Парацетамол 0,15 г,
Кофеин 0,05 г,
Бромизовал 0,25 г,
Фенобарбитал 0,02 г,
Кодеина фосфат 0,008 г,
Атропина сульфат 0,00025г, Эфедрина гидрохлорид 0,005 г, Папаверина гидрохлорид 0,03 г
Вспомогательных веществ до получения таблетки массой 0,65 г. Описание: таблетки от белого с желтоватым оттенком до светло-желтого цвета, с мраморными вкраплениями, с плоской поверхностью, с фаской. Таблетки " Глюферал " имеют следующий состав:
Кофеин-бензоат натрия 0,005 г, Бромизовал 0,07 г,
Фенобарбитал 0,025 г,
Кальция глюконат 0,2 г
Вспомогательных веществ до получения таблетки массой 0,33 г.
Описание: таблетки белого цвета с плоской поверхностью и риской. Все используемые в работе лекарственные средства отвечали требованиям утвержденной нормативной документации.
-49В табл. 1.2 приведены сведения по молекулярным массам, структурным и брутто-формулам изучаемых веществ, входящих в состав таблеток "Спазмоспардеин" и "Глюферал".
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2002 года, Ларионова, Светлана Геннадьевна
1. Аналитическая хроматография / Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А., Зельвенский В.Ю., Ганкина Э.С., Шатц В.Д. М.: Химия, 1993.-466 с.
2. Андерсон А.А. Жидкостная хроматография аминосоединений. Рига : Зинатне, 1984. - 239 с.
3. Бабаев И.А Комплексонометрическое определение фенобарбитала, бензонала и гексамидина // Азерб. мед. журн. 1991. - № 8. - С.47 - 50.
4. Батурина О.А. Использование ВЭЖХ в анализе сиропа, содержащего парацетамол // VI Росс. Национальный Конгресс "Человек и лекарство": Тез докл. М., 19-21 апр. 1999. - С.386.
5. Беликов В.Г., Вергейчик Е.Н. Использование производной спектрофотометрии для определения теофиллина и эуфиллина в лекарственных смесях // Материалы 2-го съезда фармацевтов Азербайджана 1983г. Баку, 1983. - С.51 - 52.
6. Березкин В.Г., Ретунский В.Н. Состояние и тенденции развития аналитической хгтроматографии (научнометрическое исследование) // Журн. Аналит. химии. 1988. - Т.43, №1. - С. 166 - 174.
7. Берштейн И. Я., Калинский Ю.Л. Спектрофотометрический анализ в органической химии. Л.: Химия, 1988. - 200 с.
8. Блинникова А.А., Краснов Е.А., Великанова В.И. Определение папаверина гидрохлорида в многокомпонентных таблетках // Фармация. 1990.-Т. 59, №1. - С.73 - 75.
9. Бражников В.В. Детекторы для хроматографии. М.: Машиностроение, 1992.-317 с.
10. Будников Г.К., Каргина О.Ю., Каргина Н.М. Применение полярографии в сочетании с ТСХ в анализе лекарственных смесей, содержащих папаверин. // Фармация. 1990. - Т.59, № 4.- С. 60.
11. Ванькова Н.А., Чекрышкина JI.A. Экстракционно-титриметрическое определение папаверина гидрохлорида в лекарственных формах. //Фармацевтич. журн. 1988. - №6. - С.44 - 47.
12. Вергейчик Е.Н. Разработка методов производной и дифференциальной спектрофотометрии для анализа лекарственных средств: Дис. . докт. фарм. наук,- Пятигорск, 1988. 260 с.
13. Вигдергауз М.С., Ланге П.К. Хроматография как спектральный метод исследования // Журн. Физич. химии. 1993. - Т.67, №4. - С. 815-816.
14. Государственная Фармакопея СССР XI издания. М.: Медицина, 1987, вып. 1.
15. Государственная Фармакопея СССР XI издания. М.: Медицина, 1990, вып.2.
16. Гусель В.А., Маркова И В. Справочник педиатора по клинической фармакологии. J1.: Медицина, 1989. - 320 с.
17. Дементьева Н.Н., Камаев А В., Семкин Е.П. Определение смеси, содержащей теобромин, фенобарбитал, дибазол и папаверина гидрохлорид методом высокоэффективной ж'*дкостной хроматографии. //Фармация. 1983. - Т. 32, №1. -С.31-33.
18. Еремин С.К., Изотов Б.Н. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в химико-токсикологическом анализе лекарственных соединений // Журн. аналит. химии. 1988 - Т. 43, № 1. - С.5-19.
19. Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.В. Анализ наркотических средств. // М: Мысль. 1993 - 262 с.
20. Иванов В. Е., Барсуков И. И. Одновременное определение кофеина, фенацетина, амидопирина в многокомпонентных препаратах.// Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации. Тез. докл. Всесоюзная конференция 1989. С.77 - 78.
21. Исследование многокомпонентных лекарственных средств методом ВЭЖХ. / Крылов Ю.Ф., Крыпецкий Е.Ю., Прохоров Б.С. и соавт. //Хим.-фармац. журн. 1986. -Т.20, №12. - С. 1504-1508.
22. Киселев А.В., Пошкус Д.П., Яшин Я.И. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии. М: Химия, 1986. - 272 с.
23. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т.1. 13-е изд. - Харьков "Торсинг", 1998.-544 с.
24. Метрологические аспекты применения высокоэффективной жидкостной хроматографии / Гризодуб А.И., Левин М.Г., Леонтьева Д.А. и соавт.// Фармаком. 1995. -№ 7. -С.8-19.
25. Митькина Л.И., Зайцева И.И., Курмашева О.Б. Разработка метода количественного анализа раствора "Диксафен" для инъекций // Хим.-фармац. журн. 1992,- Т.26, №7. - С.99- 101.
26. Михеева М.Н., Брутко Л.И. Идентификация димедрола, кофеина, кофеин-бензоата натрия и барбитал- натрия в жидких лекарственных формах.// Фармация 1983 - Т. 32, №1. - С.58 - 59.
27. Окуджава В.М., Чанкветадзе Б.Г, Рогава М.М. Одновременное количественное определение галодифа, бензонала, фенобарбитала и карбамазепина методом ВЭЖХ // Фармация. 1989. - Т.38, №5. - С.44 -47.
28. Окуджава В.М., Чанкветадзе Б.Г. , Рухадзе М.Д. Одновременное количественное определение гексамидина, фенобарбитала, карбамазепина и дифенина методом микроколоночной ВЭЖХ. // Хим-фармац. журн. 1991. - Т.24, №4. - С. 79 - 80.
29. Приборы для хроматографии . Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А., Зельвенский В.Ю. 2-е изд., перераб. и доп. - М: Машиностроение, 1987.
30. Сегуру Н.В. Качественное и количественное определение компонентов, входящих в состав таблеток "Паглюферал" методом ВЭЖХ // VI Росс. Национальный Конгресс "Человек и лекарство" М., 19-21 апр. 1999. -С.468.
31. Серегина Е.В., Лайпанов А.Х. Применение ВЭЖХ в контроле качества алкалоидов из группы тропана. // Фармация. 1994. - № 1. - С.44-47.
32. Серегина Е.В., Назанский А.С. Применение ВЭЖХ для анализа сложных лекарственных смесей из группы тропана и имидазола. // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: М-лы конф. ГНИИСКЛС. 1992. - Т. 2, ч. 1. - С.25.
33. Слепова Л.Н., Саливанова Л В., Рахимова Т.Х. Количественное определение кофеина и фенобарбитала в смесях с другими лекарственными веществами. Фармация. 1983. - Т.32, №1. - С. 56 -58.
34. Стронова Л.А., Суранова А.В., Садчикова Н.П. Количественное определение папаверина гидрохлорида, дибазола и фенобарбитала в таблетках "Дивенал" Научные труды НИИФ, 1988., - Т.26. - С. 32 -35.
35. Стыскин Е.Л., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М. : Химия, 1986. -288 с.
36. Фармакопея США 23 изд. 1995.
37. Фатова Е.Ю., Евтушенко Н.С., Пахомова И.В. Одновременное определение анальгина, амидопирина, фенобарбитала, кодеина, кофеина в таблетках "Пенталгин" методом ТСХ со спектрофотометрической денситометрией // Фармация 1991 - № 6. - С. 31-35.
38. Физиология / под ред. Георгиевой С.А. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1986 - 400 с.
39. Шатц В.Д., Сахартова О.В Высокоэффективная жидкостная хроматография Рига: "Зинатне", 1988. - 390 с.
40. Энгельгардт X. Жидкостная хроматография при высоких давлениях. Под ред. Чмутова К.В. М.: Мир, 1980. - 237 с.
41. Addy D.P. Cold comfort for hot children // Brit. Med. J. 1983., № 28. -p. 1163- 1164.
42. Ahmed A.N., El-Gizawy S.M. Use of chemically-bonded cyclodextrin stationary phase for high performance liquid chromatographic determination of feldene capsules // J. Chromatogr. Sci. 1987. - Vol. 25, № 9. - p. 424426.
43. Akhtar M.J., Khan S., Hafiz M. High Performance Liquid Chromatographic assay for the determination of paracetamol, pseudoepl.jdrine hydrochloride and triprolidine hydrochloride // J. Pharm. Biomed. Anal. 1994. - Vol.12, № 3. - p. 379-382.
44. Analysis of opiates in human hair by high-performance liquid-chromatography / Pichini S., Altieri I., Pellegrini M. et al. // J. Liquid Chromatogr. & Related Technol. 1999. - Vol.22, № 6. - P.873-884.
45. Anderson B.S. Pharmacokinetics of paracetamol after major surgery in children // Paediatric anaesthesiology -1995. Vol.5, № 4. - p. 237 - 242.
46. Atay O., Oztop F. Quantitative determination for cocaine HC1 in synthetic binary mixtures by using spectrophotometric methods // Anal. Lett. 1998. -Vol. 31, № 15.-P. 2663-2678.
47. Atay O., Oztop F. Quantitative determination by using HPLC and GLC methods for cocaine HC1 in synthetic binary mixtures with procaine HCl, lidocaine HCl and caffeine // Anal. Lett. 1997. - Vol. 30, № 3. - p. 565584
48. Baranowska I., Kapinos J. High Performance Liquid Chromatography in the analysis of methylxanthines in the presence of tobacco alkaloids // Chem. Anal. 2000. - Vol. 45, № 1. - p. 53-58.
49. Barnes A.R. Determination of caffeine and potassium sorbate in a neonatal oral solution by HPLC // Int. J. Pharm. 1992. - Vol. 80, № 2-3. - p. 267270.
50. Bona E. The effect of long term caffeine treatment on hipoxic-ischemic brain damage in the neonate // Pediatric research. 1995. - Vol. 38, № 3. - p. 312318.
51. Buch U., Isenberg E., Buch H.P. HPLC assay for atropine in serum and protein solutions after in-vitro addition of the tropane alkaloid // Methods and Findings in Experimental and clinical pharmacology. 1994. - Vol. 16, № 5. -p. 361-365.
52. Budvaribarany Z., Szasz G., Gyimesiforras K. Optimized and validated HPLC methods for compendial quality assessment .2. Opium Alkaloids // J. Liquid Chromatogr. & Related. Technol. 1997. - Vol. 20, № 19. - P. 32573268.
53. Carey R.J., Depalma G. A simplified method for the measurement of caffeine in plasma and brain evidence for a cortical-subcortical caffeine concentration differential in brain // J. Neuroscience Methods. - 1994. - Vol. 53, №1.- P. 19-22.
54. Carlson M., Thompson R.D. Liquid-chromatographic determination of methylxanthines and catechus in herbal preparations containing Guarana // J.AOAC Int. 1998. - Vol.81, № 4 - P. 691-701.
55. Casal S., Oliveira M.B., Ferreira M.A. HPLC/Diode-Array applied to the thermal-degradation of trigonelline, nicotinic acid and caffeine in coffee // Food Chem. 2000. - Vol. 68, № 4. - P. 481-485.
56. Celma C., Allue J. Simultaneous determination paracetamol and chlorfeniramin in human plasma by liquid chromatography tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. 2000. - Vol. 870, - P. 77-86.
57. Chollet D.F., Ruols C., Arnera V. Determination of noscapine in human plasma using solid-phase extraction and High Performance Liquid Chromatography // J. Cromatogr. В 1997. - Vol. 701, № 1. - P. 81-85.
58. Chu K.O., Tin K.C Analysis of antihistamines in cough syrup // Anal. Lett. 1998. - Vol. 31,№ 11.-P. 1879-1890.
59. Crump K.L., Mcintyre I.M., Drummer O.H. Simultaneous determination of morphine and codeine in blood and bile using dual ultraviolet andfluorescence High Performance Liquid Chromatography // J. Anal. Toxicol. -1994. Vol.18, № 4 - P. 208-212.
60. Delbeke F.T., Debacker P. Threshold level for theophylline in doping analysis // J. Cromatogr. В 1996. - Vol. 687, № 1. - P. 247-252.
61. Demunoz D.M., Arenas R., Gonzalez O.C. Liquid chromatographic assay in plasma of one of the members of a new series of anticonvulsants D,L-3-hydroxy-3-ethyl-3-phenylpropionamide // J. Cromatogr. Biomed. Appl. -1996. - Vol. 678, № 2. - P. 377-383.
62. Determination of atropine in pharmaceutical preparations by liquid-chromatography with fluorescence detection /' Takahashi M., Nagashima M., Shigeoka S. et al. // J. Chromatogr. A 1997. - Vol.775, № 1-2. - P. 137141.
63. Determination of atropine sulfate and benzalkonium chloride in eye drops by HPLC / Santoni G., Tonsini A., Gratteri P. et al. // Int. J. Pharmaceutics -1993. Vol.93, № 1-3. - P.239-243.
64. Determination of ephedrines in urine by high-performance liquid-chromatography / Imaz C., Carreras D., Navajas R et al. // J. Chromatogr. -1993. Vol.631, № 1-2. - P. 201-205.
65. Determination of plasma phenobarbital concentration by high-performance liquid-chromatography in rat offspring / Moriyama M., Yamashita S., Domoto H.et al. // J. Chromatogr. B. 1999. - Vol.723, № 1-2. - P.301-305.
66. Dobrocky P., Bennett P.N., Notarianni L.J. Rapid method for the routine determination of caffeine and its metabolites by high performance liquid chromatography //J. Cromatogr. Biomed. Appl. 1994. - Vol.652, № 1. - P. 104-108.
67. Dogan H.N., Duran A. Simultaneous spectrophotometric determination of aspirin, acetaminophen and ascorbic acid in pharmaceutical preparations // Pharmazie- 1998. Bd. 53, № 11. -S. 781-784.
68. Erk N., Kartal M. Simultaneous high performance liquid chromatographic and derivative ratio spectra spectrophotometry determination of chlorpheniramine maleate and phenylephrine hydrochloride // Farmaco -1998. Vol.53, № 8-9 - P. 617-622.
69. Fast screening method for diuretics, probenecid and other compounds of doping interest / Ventura R., Nadal Т., Alcalde P. et al. // J. Chromatogr. A -1993. Vol.655, №2. - P.233-242.
70. Ferguson G.K. Quantitative HPLC analysis of an analgesic caffeine formulation determination of caffeine // J. Chemical Education. - 1998. -Vol. 75, № 4. - P. 467-469.
71. Fourier-transform infrared spectrometric determination of paracetamol and ibuprofen in tablets / Tantishaiyakul V., Phadoongsombut N., Kamaung S. et al. // Pharmazie 1999. - Bd.54, № 2. - P. 111-114.
72. Gascolopez A.I., Izquierdohornillos R., Jiminez A. Development and validation of a high performance liquid chromatography method for the determination of cold relief ingredients in chewing gum // J. Cromatogr. A -1997.-Vol. 775, №1-2.-P. 179-185.
73. Gawdzik B. Retention of basic drugs on porous polymers in High Performance Liquid Chromatography //J. Cromatogr. 1992. - Vol. 600, № l.-P. 115-121.
74. Ghosh M.K. HPLC methods on drug analysis. //Berlin etc Springer, 1992. -Vol.XV 585 p.
75. Gilar M. HPLC determination of paracetamol in serum with dialytic sample pretreatment // Chemicke Listy. 1995. - Vol. 89, № 4. - P. 246-250.
76. Gumieniczek A., Przyborowski L., Plizga J. Determination of dilazep dihydrochloride in yablets by HPLC // Pharmazie 1995. - Bd. 50, № 8. - S. 541-542.
77. Hayashi Y., Matsuda R. Information theory of precision and analytical efficiency in short-column chromatographic assays // Anal. Sci 1991. -Vol.7, № 2. - P.329-331.
78. He J., Shibukawa A., Nakagawa T. Direct injection analysis of carbamazepine and its active 10,11-epoxide metabolite in plasma by use of a semipermeable surface (SPS) silica column in LC // J. Pharm. Biomed. Analysis 1992. - Vol. 10, № 4. - P. 289-294.
79. He L.-Y., Zhang G., Sagara K. Reversed-phase ion-pair high performance liquid chromatographic separation and determination of tropane alkaloids in Chinese solanaceous plant //J. Chromatogr. 1989. - Vol. 481, № 1-2. - P. 428-432.
80. Herraezhernandez R., Campinsfalco P., Tortajadagenaro L.A. Chiral determination of amphetamine and related compounds using chloroformates for derivatization and high performance liquid chromatography // Analyst -1998.-Vol. 123, № 10.-P. 2131-2137.
81. High-performance liquid-chromatographic electrospray mass-spectrometric determination of morphine and its 3-glucoronides and 6-glucuronides
82. Application to pharmacokinetic studies / Pacifici R., Pichini S., Altieri I. et al. // J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1995. - Vol.664, № 2. - P.329-334.
83. Holmalahti J. Simultaneous HPLC determination of noscapine with ephedrine or guaifenesin in cough preparations // Pharmazie 1997, - Bd.52, №8.-S. 640-641.
84. Horie H, Kohata K. Analysis of tea components by high-performance liquid-chromatography and high-performance capillary-electrophoresis // J. Chromatogr. A 2000. - Vol.881, № 1-2. - P. 425-438.
85. HPLC determination of catechins and caffeine in tea differentiation of green, black and instant teas / Fernandez P.L., Martin M.J., Gonzalez A.G. et al. // Analyst. - 2000. - Vol. 125, № 3. - P. 421-425.
86. HPLC method for the simultaneous analysis of valproic acid and other common anticonvulsant drugs in human plasma or serum / Lucarelli C., Villa P., Lombaradi E.et al. // Chromatographia 1992. - Vol.33, № 1-2. - P.37-40.
87. HPLC separation of opium-alkaloids on porous and nonporous stationary phases / Krenn L., Boros В., Ohmacht R. et al. // Chromatographia 2000. -Vol.51, №5. - P. 175-178.
88. Huttner A., Eigendorf H. Zum simultannachweis von propyphenazon, coffein und codein in wirkstoffgemischen mittels umkehrphasen-HPLC // Pharmazie. 1986. - Bd.41, № I - S.59.
89. Indrayanto G., Sunarto A., Adriani Y. Simultaneous assay of phenylpropanolamine hydrochloride, caffeine, paracetamol, glycerylguaiacolate and chlorpheniramine maleate in silabat(TM) tablet using
90. HPLC with diode-array detection 11 J. Pharm. Biomed. Anal. 1995. -Vol.13, № 12. - P. 1555-1559.
91. Jira Т., Beyrich T. Ionenpaar-HPLC eines pharmazeutischen mehrkomponentsystems // Pharmazie. 1988. - Bd.43, № 11 - S.768-771.
92. Krenn L., Glantschnig S., Sorgner U. Determination of the 5 major opium-alkaloids by reversed-phase high-performance liquid-chromatography on a base-deactivated stationary-phase // Chromatographia 1998. - Vol.47, № 1-2.-P.21-24.
93. Krul C., Hageman G. Analysis of urinary caffeine metabolites to assess biotransformation enzyme-activities by reversed-phase high-performance liquid-chromatography // J. Cromatography 1998. - Vol.709, № 1. - P.27-34.
94. Lau G.S.N., Critchley J.A.J.H. The estimation of paracetamol and its major metabolites in both plasma and urine by a single high-performance liquid-chromatography assay // J. Pharm. Biomed. Anal. 1994. - Vol.12, № 12. -P.1563-1572.
95. Lau O.W., Мок C.S. High-performance liquid-chromatographic determination of active ingredients in cough cold syrups with indirect conductometric detection // J. Chromatogr. A. 1995. - Vol.693, № 1. -P.45-54.
96. Lau O.W., Мок C.S. High-performance liquid-chromatographic determination of atropine and atropine-like alkaloids in pharmaceutical preparations with indirect conductometric detection // J. Chromatogr. A -1997. Vol.766, № 1-2. - P.270-276.
97. Liquid-chromatographic determination of 6 antiepileptic drugs and 2 metabolites in microsamples of human plasma / Matar K.M., Nicholls P.J, Tekle A.et al. // Therap. drug monitoring 1999. - Vol.21, № 5. - P.559-566.
98. Logan B.K., Stafford D.T. Increasing the discrimating power of HPLC through the use of selective detection and complimentary analysis. // Anal. Chem. and appl. Spectrosc. 1988 - P. 665.
99. M. De Smet, Massart D.L. Retention behaviour of acidic, neutral and basic drugs on a CN column using phosphate buffers in the mobile phase // J. Chromatogr. 1987. - Vol. 410, № 1. - P.77-94.
100. Mandal S., Nagvi A. A., Thakur R.S. Analysis of some tropane alkaloids in plants by mixed-column high performance liquid chromatography //J. Chromatogr. 1991. - Vol.547, № 1-2. - P 468-471.
101. Meyler M., Kelly M.T., Smyth M.R. New method for the determination of 4 antiepileptic drugs in human plasma by high-performance liquid-chromatography // Chromatographia- 1993. Vol.36. - P.27-32.
102. Modified high-performance liquid-chromatographic method for analysis of drotaverine in human plasma / Lalla J.K., Shah M.U., Jain M.B.et al. // J. Pharm. Biomed. Anal. 1993. - Vol. 11, № 4-5. - P.385-388.
103. Moriasu M., Hashimoto Y., Endo M. HPLC determination of organic substances by metal chelate derivatisation. 1. Dithiocarbamate chelates of aliphatic amines. // Bull. Chem. Soc. Jap. 1981. - Vol. 54, № 11. - P. 3369 -3373.
104. Naik J.P., Nagalakshmi S. Determination of caffeine in tea products by an improved high-performance liquid-chromatography method // J. of Agricultural and food chemistry 1997. - Vol.45, № 10. - P.3973-3975.
105. Netal I. The effect of caffeine on the pharmacokinetics of acetaminophen in man //Biopharm. Drag Dispos. -1995. Vol.16, № 6. P.481-487.
106. On the assessment of drug metabolism by assays of codeine and its main metabolites / Haffen E., Paintaud G., Berard M.et al. // Therap. Drug Monitor. 2000. - Vol. 22, № 3. - P. 258-265.
107. PaibirS.G., Soine W.H. High-performance liquid-chromatographic analysis of phenobarbital and phenobarbital metabolites in human urine // J. Chromatogr. В 1997. - Vol.691, № 1 - P. 111-117.
108. Papadoyannis I.N. Instrumental analytical techniques used for datura alkaloid analyses // Instrument.Sci. & Technol 1994. - Vol.22, № 3 -P.241-258.
109. Papadoyannis I.N., Samanidou V.F. The use of theobromine as internal standard in the rapid HPLC analysis of theophylline in small blood rum volume // Analyt. Lett. - 1993. - Vol.26, № 5. - P.851-866.
110. Papadoyannis I.N., Samanidou V.F., Georga K.A. Solid-phase extraction study and photodiode-array RP-HPLC analysis of xanthine derivatives in human biological-fluids // J. Liquid Chromatogr. & Related Technol.- 1996. -Vol. 19, № 16. P.2559-2578.
111. Parra P., Limon A. High-performance liquid chromatography separation of caffeine, th < ;>»iylline, theobromine and paraxantine in rat brain and serum. // J. Chromatogr. -1991. - Vol.570, N 1,-P. 185-190.
112. Patil S T., Sundaresan M., Bhoir I.C. Packed-column supercritical-fluid chromatographic separation and estimation of acetaminophen, diclofenac sodium and methocarbamol in pharmaceutical dosage forms // Talanta -1998.-Vol.47, № I P.3-10.
113. Patsi J., Malkki L., Tammilehto S. Simultaneous determination of caffeine, propyphenazone and salicylamide by Kalman filter spectrophotometry and high-performance liquid-chromatography // Acta Pharmaceutica Nordica -1992. Vol.4, №2. - P.69-72.
114. Pawula M., Shaw P.N., Barrett D.A. Determination of codeine and its metabolites in microsomal incubates by high-performance liquid-chromatography // J. Chromatogr. В -Biomed. Appl. 1994. - Vol.653, № 1. -P. 106-111.
115. Perezmartinez 1., Sagrado S., Medinahernandez M.J. Chromatographic determination of caffeine in pharmaceutical formulations using micellar mobile phases // Chromatographia 1996. - Vol.43, № 3-4. - P. 149-152.
116. Rapid determination of theophylline and antiepiletic drugs in serum by column-switching HPLC / Chiba R., Yamazaki H, Umino M.et al.// Bunseki kagaku 2000. - Vol. 49, № 3. - P. 195-199.
117. Rapid liquid-chromatographic determination of paracetamol and diclofenac sodium from a combined pharmaceutical dosage / Nayak V.G., Bhate V.R., Purandare S.M. et al. // Drug Development and Industrial Pharmacy 1992. -Vol.18, №3. -P.369-374.
118. Rapid, highly sensitive method for the determination of morphine and its metabolites in body-fluids by liquid chromatography mass-spectrometry / Schanzle G„ Li S.X., Mikus G. et al. // J. Chromatogr. В 1999. -Vol.721, № 1. - P.55-65.
119. Schreiberdeturmeny E., Bruguerolle B. Simultaneous high-performance liquid-chromatographic determination of caffeine and theophylline for routine drug-monitoring in human plasma // J. Chromatogr. B-Biomcd. Appl. 1996. - Vol.677, № 2. - P.305-312.
120. Scott R.P.W. Modern liquid chromatography // Chem. Soc. Rev. 1992. -Vol.21, №2,- P.137-145- 154.
121. Sensitive and selective determination of bromisovalum by high-performance liquid-chromatography particle-beam mass-spectrometry / Nagata Т., Kudo K., Imamura T. et al. // Forensic Sci. Int. 1995. - Vol.74, № 3. - P.205-211.
122. Separation and determination of (l)-ephedrine and (D)-pseudoephedrine in plasma by high-performance liquid-chromatography with fluorescence detection / Shao G., Wang D.S., Wu F. et al. // J. Liquid Chromatogr. 1995. -Vol. 18, № П. - P.2133-2145.
123. Separation and identification of drugs of abuse in drug cottons by high-performance liquid-chromatography coupled with electrochemical array detectors / Huettl P., Koester S., Hoffer L.et al. // Electroanalysis 1999. -Vol.11, №5. - P. 313-319.
124. Separation and simultaneous determination of the components in an ^algesic tablet formulation by micellar electrokinetic chromatography / Boonkerd S.,1.uwers M., Detaeverniers M.et al. // J. Chromatogr. 1995. - Vol. 695, № l.-P. 97-102.
125. Simple and accurate high-performance liquid-chromatographic method for the measurement of 3 antiepileptics in therapeutic drug-monitoring / Kouno Y., Ishikura C., Homma M. et al. // J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1993. -Vol.622, № 1. -P.47-52.
126. Simple and fast determination of some phenethylamines in illicit tablets by base-deactivated reversed-phase HPLC / Longo M., Martines C., Rolandi L.et al. // J. Liquid Chromatogr. 1994. - Vol. 17, № 3. - P.649-658.
127. Simultaneous analysis of individual catechins and caffeine in green tea / Goto Т., Yoshida Y„ Kiso M. et al. // J. Chromatogr. A 1996. - Vol. 749, № 12. - P. 295-299.
128. Simultaneous determination of aspirin, codeine phosphate and propyphenazone in tablets by reversed-phase high-performance liquid-chromatography / Santoni G., Fabbri L., Gratteri P. et al. // Int. J. Pharmaceutics 1992. - Vol.80, № 2-3. - P.263-266.
129. Simultaneous determination of caffeine, theobromine and theophylline in foods and pharmaceutical preparations by using ion chromatography / Chen Q„ Мои S., Нои X., et al. // Anal. Chim. Acta. 1998. - Vol. 371, № 2-3. -P. 287-296.
130. Simultaneous determination of ephedrine and 2-imidazolines in pharmaceutical formulations by reversed phase HPLC / Deorsi D., Gagliardi L„ Cavazzutti G.et al. //J. Liquid Cromatogr. 1995. - Vol.18, № 16. - P. 3233-3242.
131. Simultaneous determination of the components in an anti-cold drug by gradient HPLC / Masuda M., Satoh Т., Handa M.et al. // Bunseki kagaku -1997. Vol.46, № 10. - P.777-783.
132. Simultaneous determination of triprolidine, pseudoephedrine, paracetamol and dextromethorphan by HPLC / Deorsi D., Gagliardi L., Bolasco A. et al. // Chromatographia 1996. - Vol. 43, № 9-10. - P. 496-500.
133. Simultaneous high-performance liquid chromatographic assay of acetaminophen, acetylsalicylic acid, caffeine and d-propoxyphene hydrochloride / Abuirjeie M.A., Abdel-Hamid M I. et al. // Anal. Lett. -1989. Vol. 22, № 2. - P.365-375.
134. Spell J.C., Stewart J.T. Analysis of an analgesic mixture utilizing a nonporous octadecylsilane stationary-phase for reversed-phase fast HPLC // J. Liquid. Chromatogr. & Related Technol. 1999. - Vol.22, № 2. - P.297-305.
135. Surface improvement of glassy-carbon electrode anodized in methylene glycol and its application to electrochemical HPLC analysis of proteincontaining samples / Maeda H., Katayama K., Matsui R. et al. 11 Anal. Sci. -2000. Vol.16, № 3. - P.293-298.
136. Suzen S., Akay C., Cevheroglu S. Simultaneous determination of guaiphenesin and codeine phosphate in tablets by high-performance liquid-chromatography // Farmaco 1999. - Vol.54, № 10. - P.705-709.
137. Svensson J.O., Yue Q.Y., Sawe J. Determination of codeine and metabolites in plasma and urine using ion-pair high-performance liquid-chromatography // J. Chromatogr. B- Biomed. Appl. 1995. - Vol.674, № 1. - P.49-55.
138. Synthesis of polymer-coated mixed-functional packing materials for direct analysis of drug-containing serum and plasma by high-performance liquid chromatography / Kanda Т., Kutsuna H., Otsu Y. et al. // J Chromatogr. A -1994,-Vol.672.-P. 51-57.
139. Ting S. Liquid-chromatographic determination of scopolamine, hyoscyamine, and phenobarbital in tablets // J. AO AC Int. 1997. - Vol.80, № 2. - P.331-333.
140. Toshiyoki О., Kazuhiko S., Fusayoshi H. Combination of ion-pair and high performance liquid chromatography of tropane alkaloids // J. Chromatogr. 1991.-Vol.547 -P.175-183.
141. Trace analysis of phenylpropanolamine in human serum using reversed-phase HPLC / Zaater M.F., Najib N., Tahboub Y. et al. // J. Analyt. Chemistry -1999. Vol.54, № 12. - P. 1158-1162.
142. Trenerry V.C., Wells R.J., Robertson J. Determination of morphine and related alkaloids in crude morphine, poppy straw and opium preparations by micellar electrokinetic capillary chromatography // J. Chromatogr. 1995. -Vol.718, № 1 -P.217-225.
143. Tuomi Т., Johnsson Т., Reijula K. Analysis of nicotine, 3-hydroxycotinine, cotinine, and caffeine in urine of passive smokers by HPLC tandem mass-spectrometry // Clinical Chemistry - 1999. - Vol.45, № 12. - P.2164-2172.
144. Vasoactive cocktails for erectile dysfunction Chemical stability of PGE1, papaverine and phentolamine / Soli M., Bertaccini A., Carparelli F., et al. // J. Urology - 1998. - Vol. 160, №2. -P.551-555.
145. Wang H.F., Helliwell K., You X.Q. Isocratic elution system for the determination of catechins, caffeine and gallic acid in green tea using HPLC // Food Chemistry 2000. - Vol.68, № 1. - P.l 15-121.§ М
146. Weingarten В., Wang H.Y., Roberts D.M. 1 Determination of codeine in human plasma by high-performance liquid-chromatography with fluorescence detection//J. Chromatogr. A 1995. - Vol.696, № 1. - P. 8392.