Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследования в области химико-токсикологического анализа азотсодержащихсоединений основного характера

На правах рукописи

г о 1 10 и И

ХОМОВ ЮРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЯ В ОБЛАСТИ ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА АЗОТСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ ОСНОВНОГО ХАРАКТЕРА

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

ПЕРМЬ - 1996

Работа выполнена в Пермской государственной фармацевтической

академии

Официальные оппоненты:

- доктор фармацевтических наук, член-корреспондент РАО, профессор Попков В.А.

- доктор фармацевтических наук, профессор Сичко А.И.

- доктор фармацевтических наук, профессор Чернобровин Н.И.

Ведущая организация - Пятигорская фармацевтическая академия

часов на заседании диссертационного совета Д 084.70.01 при Пермской фармацевтической академии (614000, г. Пермь, ул. Ленина, д. 48)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Пермской фармацевтической академии.

Автореферат разослан ЛАМ^Ъл ¿^.1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Д 084.70.01, кандидат фармацевтических наук,

Защита состоится

■Л-

1996 г. в

доцент

Метелевя Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Азотсодержащие соединения основного ар актера (АССОХ) как вещества, обладающие сильным физиологическим действием находят широкое применение в современной (едицинской практике. Необходимо отметить, что АССОХ (в том 1исле амидопирин, амизил, атропин, пахикарпин, промедол, трихнин и другие, которые явились предметом нашего более де-ального рассмотрения на различных этапах химико-токсикологи-¡еского исследования) после введения в организм оказывают не олько лечебное действие, но при определенных условиях могут виться причиной аллергических состояний, острых и хронических ■травлений, нередко с летальным исходом.

В последние годы в большинстве развитых стран мира отмелется резкое увеличение количества отравлений лекарственными ¡репаратами, в том числе и АССОХ. Отмечаются комбинирование отравления АССОХ в сочетании с другими веществами. В 1ашей стране эта проблема также является актуальной. В настоящее время приходится наблюдать интоксикации, возникающие у 1аркоманов и токсикоманов. Встречаются случаи умышленного |рименения ряда сильнодействующих лекарственных веществ с |елью приведения потерпевшего в беспомощное состояние с по-ледующим применением противоправных действий. Немедицин-кое потребление сильнодействующих лекарственных ненаркотических) средств, способных вызывать состояние зави-имости,может повлечь за собой вредные последствия для обще-ггва, поскольку аналогично наркотикам приводит к деградации [ичности, к конфликтам с законом.

Диагностика отравлений представляет большие трудности, ак как клиническая, патолого-анатомическая и гистологическая

картина при интоксикации человека АССОХ, как правило, нехарактерна и не позволяет установить и дифференцировать отравления этими соединениями. В таких случаях основным доказательством причины интоксикации являются результаты химико-токсикологического исследования.

Несмотря на значительное число работ, посвященных анализу азотсодержащих соединений основного характера, до настоящего времени продолжают оставаться актуальными вопросы исследования в области разработки новых и дальнейшего совершенствования существующих методик их химико-токсикологического анализа. Успешная реализация этой проблемы может быть выполнена при применении различных скрининговых систем и широком использовании современных физико-химических методов анализа, обладающих экспрессностью, высокими разрешающими возможностями и обеспечивающими определение не только нативных токсических веществ, но и их основных метаболитов, применительно к исследованию биологических объектов, не только свежих, но и находящихся в состоянии гнилостного изменения.

Цель и задачи исследования. Теоретическое и практическое обоснование изолирования, очистки, концентрирования, определения лекарственных азотсодержащих соединений основного характера и их метаболитов для создания новых методик химико-токсикологического анализа на основе результатов микрокристаллоскопии, УФ - спектрофотометрии, экстракционной фотоколориметрии, хроматографии в тонких слоях сорбента и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- теоретически прогнозировать, экспериментально подтвердить оптимальные условия изолирования азотсодержащих веществ

основного характера и применить полученные результаты для разработки методик выделения их из биологических объектов;

- предложить эффективные способы очистки АССОХ, выделенных из биологического материала;

- провести сравнительное изучение хроматографического разделения АССОХ на различных сорбентах, в различных системах растворителей ТСХ и ВЭТСХ с целью систематизации и унифицирования;

- обосновать выбор комплекса реакций и методов обнаружения ЛССОХ, обеспечивающих чувствительность и специфичность идентификации;

- разработать чувствительные методики количественного определения АССОХ на основе УФ - спектрофотометрии, экстракционной фотоколориметрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии;

- изучить пригодность разработанных методик обнаружения и количественного определения для химико-токсикологического анализа азотсодержащих соединений основного характера.

Научная новизна. Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена возможность прогнозирования оптимальных условий экстрагирования азотсодержащих соединений в зависимости от рКа, рН среды и природы органического растворителя.

В результате проведенных систематических исследований по сравнительному хроматографическому разделению АССОХ предложена новая оригинальная система растворителей. Рассчитана ее разрешающая способность, показана возможность использования для скрининг - аиализа.

1'азработаны условия разделения и обнаружения АССОХ в тонком слое сорбента, а также на пластинах ВЭТСХ и "Сорбфил" на основе поэтапного комбинированного детектирования.

Показана эффективность предлагаемой системы растворителей для очистки АССОХ, выделенных из биологических объектов, от сопутствующих балластных веществ.

Предложены микрокристаллоскопические реакции на амидопирин с роданидными комплексами цинка, кобальта, кадмия; клофелин с кислотой золотохлористоводородной; промедол с кислотой пикролоновой и ализариновым красным.

Разработаны методики идентификации и количественного определения АССОХ, имеющих хромофорные группы, на основе методов УФ - спектроскопии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Показаны достоинства кислоты пикриновой как реагента для экстракционно-фотометрического определения АССОХ.

Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены оптимальные условия образования и экстрагирования продуктов взаимодействия АССОХ с кислотой пикриновой.

Изучены спектральные характеристики продуктов взаимодействия лекарственных азотсодержащих соединений основного характера с кислотой пикриновой. Установлено, что продукты взаимодействия АССОХ с кислотой пикриновой являются ионными ассоциатами.

Показано, что реакция взаимодействия с кислотой пикриновой в избранных условиях может быть использована для разработки унифицированной методики экстракционно-фотометрического определения многих лекарственных АССОХ.

Разработана экспрессная методика экстракционно-фотометрического количественного определения атропина сульфата, па-

хикарпина гидройодида, промедола, стрихнина нитрата, амизила, основанная на реакции взаимодействия с кислотой пикриновой, в субстанции, лекарственных формах и биологическом материале.

Р. связи с активным метаболизмом амидопирина в организме разработаны условия изолирования, доказательства и количественного определения его главных метаболитов 4-аминоантипи-рина и 4-ацетиламиноантипирина на основе ХТС, УФ - спектроскопии и ВЭЖХ.

Изучены вопросы сохраняемости отдельных АССОХ в трупном материале и моче.

Практическая ценность и внедрение результатов исследования. В рамках общего совершенствования хианхо-токсикологн-ческого анализа на основе принципов комплексного использования химических и современных физико-химических методов разработаны методики выделения и определения азотсодержащих Соединении основного характера в биологических субстратах, позволяющие сократить время проведения экспертиз и обеспечивающие более эффективное решение судебно-химических задач.

Результаты проведенных исследований рекомендованы для внедрения и используются в судебно-медицинской практике, в центрах по лечению острых отравлений и в химико-токсикологических лабораториях медико-профилактических и наркологических центров.

1(о теме диссертационного исследования подготовлено информационное письмо, которое прошло апробацию в 3-х лабораториях Министерства здравоохранения РФ (Бюро судебно-меди-цинскон экспертизы ГУЗАМО, Бюро судебно-медицинской экспертизы Липецкой и Свердловской областей), положительно оценено, рекомендовано к печати Научно-исследовательским кисти-

тутом судебной медицины, издано и разослано для внедрения в судебно-химические отделения Бюро СМЭ Российской Федерации.

Материалы исследования вошли в учебник профессора М.Д.Швайковой "Токсикологическая химия". - М.: Медицина, 1975. - С. 205 - 207; методические указания "Химико-токонкологический анализ веществ, вызывающих одурманивание". - М.: МЗ СССР, 1989. - С. 80 - 82; в учебно-методические разработки: "Группа веществ, изолируемых экстракцией полярными растворителями". - М.: 1ММИ им. И.М.Сеченова, 1987. - С. 14 - 15, 77; "Группа ядовитых и сильнодействующих веществ, изолируемых полярными растворителями. Качественные реакции". - Пермь: ПГФИ, 1993.- С. 21 - 22; в сборник "Расчетные задачи по фармакопейному анализу лекарственных веществ".- Пермь: ПГФИ, 1993. - 72 с.

Отдельные разработанные методики включены в практику судебно-медицинских лабораторий через постоянно действующие курсы усовершенствования судебно-медицинских экспертов-химиков страны при кафедре токсикологической химии ММА им, И.М.Сеченова н циклы специализации "Химико-токсикологический анализ наркотических и одурманивающих веществ в биологических жидкостях" при кафедре токсикологической химии Пермской фармацевтической академии.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на съездах, конференциях, совещаниях с опубликованием тезисов: на Всесоюзном совещании по аналитическому контролю производства лекарственных и фармацевтически* препаратов, Пермь, 1974 г.; на Втором Всесоюзном съезде фармацевтов, Рига, 1974 г.; на Республиканском совещании "Актуальные вопросы судебно-медицинской экспертизы", посвященном 50-летию образования Узбекской ССР, Нукус, 1974 г.; на семинарс

преподавателей кафедр токсикологической химии, Москва, 1974 г.; на Первом Всесоюзном съезде судебных медиков, Киев, 1976 г.; аа Республиканской конференции "Хроматографические и элек-грофоретические методы исследования биологически активных соединений", Свердловск, 1976 г.; на научно-практической конференции "Вопросы охраны окружающей среды", Пермь, 1978 г.; 1а 7-ой областной научно-технической конференции по химии и симической технологии, Пермь, 1979 г.; на III Всесоюзном съезде фармацевтов, Кишинев, 1980 г.; на научио-практической конфе->енцни "Совершенствование методов анализа лекарственных :редств", Тюмень, 1984 г.; на Всесоюзном симпозиуме Современные проблемы антидопингового контроля в спорте", Москва, 1985 г.; на научно-практической конференции Вьентьян-жого медицинского института, Лаос, 1987 г.; на Всесоюзной :онференции, посвященной 20-летию создания Государственного [аучно-исследовательского института по стандартизации и кон-ролю качества лекарственных средств Минздрава СССР Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных редств", Москва, 1991 г.; на международной научно-практиче-кой конференции "Фармация и фармакология", Пермь, 1993 г.; на 'еспубликанской научно-практической конференции

Биоповреждения в промышленности", Пенза, 1994 г.; на межву-овской научной конференции, посвященной 30-летию Тюменско-о Государственного медицинского института "Актуальные про-лемы фармации", Тюмень, 1994 г.; на юбилейной научной конвенции, посвященной 60-летию Курского Государственного 1едицинского университета "Актуальные вопросы эксперимен-альной и клинической медицины и фармации", Курск, 1995 г.; на [ Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство",

-к-

Москва, 1995 г.; иа научных конференциях Пермского Государственного фармацевтического института, 1974 - 1995 г.г.

В полном объеме результаты диссертационного исследования доложены на межкафедральной конференции Пермской фармацевтической академии, 1996 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 37 работ, информационное письмо, учебное пособие для студентов и слушателей факультета усовершенствования провизоров, получено 4 рационализаторских предложения.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 275 страницах машинописного текста, содержит 60 таблиц, 35 рисунков. Работа состоит из введения, 6 глав, выводов, списка литературы, включающего 394 источника, из них 115 иа иностранных языках и приложения.

Основные положения, выдвигаемые на защиту. На защиту диссертации выносятся следующие результаты теоретических и экспериментальных исследований:

- теоретическое обоснование и экспериментальное подтверждение оптимальных условий изолирования АССОХ из биологического материала в зависимости от показателя ионизации и рН среды,

- методологические принципы разработки метода очистки, разделения и идентификации АССОХ на основе хроматографии в тонких слоях сорбентов, оригинальная система растворителей для "скрининг" - анализа, способы детектирования и элюирования;

- результаты экспериментальных исследований по разработке хромогенных и микрокристаллоскопических реакций, спектроскопии в УФ - области, ХТС и ВЭЖХ нативных исследуемых АССОХ и некоторых метаболитов;

-У- теоретическое прогнозирование оптимальных условий фотометрических реакций АССОХ с кислотой пикриновой;

- экстракционно-фотометрические, спектрофотометрические и ВЭЖХ методики количественного определения ряда АССОХ и некоторых метаболитов, разработанные применительно к целям и задачам фармацевтической, токсикологической и судебной химии;

- экспериментальные и экспертные результаты химико-токсикологических и судебно-химических исследований биологического материала при интоксикациях азотсодержащими веществами основного характера.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Методы обнаружения АССОХ Обнаружение азотсодержащих соединений строили на основе сочетания современных физико-химических методов анализа с традиционными химическими реакциями с целью выявления наиболее чувствительных и специфичных применительно к задачам токсикологической и судебной химии, позволяющих использовать их при анализе микрограммовых количеств АССОХ, изолированных из биологического материала.

Хроматография в тонких слоях сорбента Основным вопросом в разработке методики исследования ХТС является правильный выбор хроматографической системы. Выбор условий хроматографирования во многом определяется физико-химическими свойствами исследуемых соединений, а также свойствами сорбента и растворителей, применяемых для хромато-графического разделения.

В работе нами был использован силикагель КСК, Н, Ьб, а также готовые пластинки "Силуфол", "Сорбфил" н ВЭТСХ.

Для обнаружения зон локализации АССОХ на хромато-17>аммах применяли реактив Драгендорфа, модифицированный по Мунье и по Молдаверу, при отрицательном судебно-химическом значении этой реакции.

При экспериментальном поиске системы растворителей, пригодной для разделения исследуемых АССОХ, нами рекомендована система растворителей хлороформ - 25% раствор аммиака 25:3 и 25:15, при этом раствор аммиака помещается в хроматографиче-скую камеру отдельно в бюксе.

Предложенная система растворителей изучена нами на возможность применения ее при ХТС - скрининге азотсодержащих соединений основного характера, так как при выборе растворителя немаловажное значение имеет и его доступность. Было проведено сравнительное исследование хроматографического разделения АССОХ на пластинах ВЭТСХ в трех системах растворителей хлороформ - 25% раствор аммиака 25:15 (I); толуол - ацетон -этанол - 25% раствор аммиака 45:45:7,5:2,5 (II); диоксан - хлороформ - ацетон - 25% раствор аммиака 47,5:45:5:2,5 (III). Системы II и III используются в ХТС скрининге при химико-токсикологических анализах.

Хроматографирование проводили восходящим способом при насыщении камеры парами растворителей в течение 30 минут.

Для оценки эффективности хроматографического разделения вычисляли величины разделяющей способности систем растворителей. Приведенные в таблице 1 сравнительные данные значений ЯГ и (по аминазину) для веществ основного характера, имеющих токсикологическое значение, свидетельствуют о достаточно высокой разделяющей способности всех систем, в том числе и рекомендованной нами системы I и подтверждают возможность

Таблица 1.

Сравнительные данные разделяющей способности систем

на пластинах ВЭТСХ (фактор ошибки Е = 0,05)

Ме Анализируемые вещества Система растворителей

I II III

ИГ ЯГ ЯГ

1 2 3 4 5 6 7 8

1 Морфин 0,04 0,04 0,20 0,25 0,12 0,15

Л ¿. 3 Цитизин 0,21 0,28 0,20 0,25 0,18 0,23

Эфедрин 0,27 0,30 0,23 0,29 0,20 0,26

4 Атропин 0,30 0,34 0,27 0,34 0,17 0,22

5 Хинин 0,42 0,47 0.43 0,54 0.35 0,45

6 Кодеин 0,44 0.49 0.42 0,53 0.32 0,41

7 Этилморфин 0,47 0,53 0,45 0,57 0,34 0,44

8 Азафен 0,48 0,54 0,30 0,38 0,29 0,37

9 Пахикарпин 0,50 0,57 0,41 0,52 0,36 0,46

10 Хлозепид 0,51 0,57 0,56 0,71 0,48 0,62

11 Нозепам 0,53 0,60 0,49 0,62 0,36 0,46

12 Вератрин 0,54 0,61 0,68 0,86 0,60 0,77

(3 Стрихнин 0,55 0,62 0,47 0,59 0,50 0,64

14 Феназепам 0,65 0,73 0,66 0,84 0,62 0,79

15 Антипирин 0,67 0,75 0,54 0,68 0,51 0,65

16 Фенацетин 0,69 0,78 0,63 0,80 0,60 0,77

17 Кофеин 0,69 0,78 0,56 0,66 0,48 0,62

л 19 Клофелин 0,70 0,79 0,68 0,86 0,68 0,87

Супрастин 0.73 0,82 0,70 0,89 0,67 0,86

20 Амидопирин 0,75 0,84 0,68 0,86 0,62 0,79

21 Триоксазин 0,78 0,88 0,68 0,86 0,70 0,90

22 Циклодол 0,80 0,90 0.82 1,04 0,80 1,03

23 Но- шпа 0,81 0,90 0,78 0,99 0,79 0,95 0,83

24 Димедрол 0,82 0,92 0,72 0,91 0,65

25 Амигритилин 0,83 0,93 0,78 0,99 0,63 0,87

26 Промедол 0,83 0,93 0,76 0,96 0,68 0,87

27 Амизил 0,85 0,96 0,82 1,04 0,74 1,03

28 Дипразин 0,88 0,99 0,74 0,94 0,86 1,10

29 Аминазин 0,89 1,00 0,80 1,00 0,78 1,00

30 Папаверин 0,89 1,00 0,79 1,00 0,78 1,00

31 Кокаин 0,91 1,02 0,84 1,03 0,81 1,01

Разделяющая способность систем 0,849 0,841 0,839

использовання ее при ХТС - скрининге азотсодержащих соединений основного Характера.

Но кроме разделения исследуемых соединений, нас интересовала проблема отделения их от посторонних балластных веществ.

Для выяснения возможности применения рекомендованной системы растворителей для очистки от балластных веществ, попадающих в извлечения в ходе химико-токсикологического анализа, было изучено их хроматографичеекое поведение в экстрактах при изолировании водой, подкисленной кислотой щавелевой, из свежей печени трупа и с месячным сроком хранения, а также в извлечениях из биологических жидкостей (кровь, моча) с различными сроками хранения. Как показали экспериментальные данные при хроматографировании в системе хлороформ - 25% раствор аммиака 25:3, 25:15 соэкстрактивные балластные вещества локализуются в основном около стартовой линии хроматографи-ческой пластинки, находятся вне зоны расположения анализируемых веществ и не мешают обнаружению. Система дает возможность получить вполне удовлетворительное разделение АССОХ и очистку их от балластных веществ.

Метод ХТС использован нами с целью очистки, разделения и первичной идентификации АССОХ, изолированных из 1рупного материала и биологических жидкостей.

При скрининге АССОХ, особенно выделенных из биожид-костен (моча),возникает необходимость очистки и разделения не только токсикологически важных веществ, но и их метаболитов.

ХТС использована нами для предварительной идентификации амидопирина и его главных метаболитов. В организме большая часть амидопирина метаболизирует и выделяется с мочой.

Разрушение амидопирина идет прежде всего по пути окисли-

тельного N-деметилирования, окислительного дезаминирования. Главными метаболитами амидопирина в моче являются 4-амино-антипирин и 4-ацетиламиноантипирин. Продукты биотрансформации (рубазоновая и метилрубазоновая кислоты) придают моче темножелтую и красную окраску.

При изучении хроматографического поведения амидопирина и его главных метаболитов показано,, что в условиях хроматографического скрининга наблюдается надежное разделение амидопирина, 4-аминоантипирина, 4-ацетиламиноантипирнна в системах I - III. Применение пластин ВЭТСХ и сорбфил для идентификации предпочтительно в связи с их высокой разделяющей способностью и стандартностью слоя. Предел обнаружения амидопирина и его главных метаболитов на хроматограмме реактивом Драгендорфа, 5% раствором железа (III) хлорида, раствором натрия нафтохинон-сульфоната (для 4-аминоантипирина) в избранных условиях составляет 0,2 - 0,8 мкг.

При изучении хроматографического поведения компонентов лекарственных форм с амидопирином (теофедрин, пенталгин, пи-рамеин, пиркофен, анапирин, пиранал) на пластинах ВЭТСХ, сорбфил в условиях ХТС - скрининга предложена схема идентификации по следующим направлениям: 1) экстракционное разделение; 2) хроматографическое разделение; 3) обнаружение на хроматограммах иа основе поэтапного комбинированного использования реагентов общегруппового назначения в сочетании с применением специфических реагентов.

Исследуемые компоненты были разделены на 2 подгруппы, исходя из их кислотно-основных свойств, при экстрагировании хлороформом из кислого раствора pH 2 и щелочного аммиачного раствора pH 10. Хлороформные экстракты раздельно после концентрирования исследовались хроматографически в универсаль-

ной системе толуол - ацетон - этанол - 25% раствор аммиака 45:45:7,5:2,5 параллельно метчикам - стандартным растворам анализируемых веществ с концентрацией 1 мг/мл в хлороформе. Обнаружение на хроматограммах при исследовании извлечения I -реактивом Драгендорфа (по Молдаверу) и 0,1 моль/л раствором йода, 0,2% раствором дифенилкарбазона в хлороформе и раствором ртути (II) сульфата (для фенобарбитала после экранирования); при исследовании извлечения II - реактивом Драгендорфа, 10% раствором железа (III) хлорида (для анальгина, амидопирина и его главных метаболитов), 0,2% раствором нннгидрина в ацетоне (для эфедрина после экранирования); реактивом Марки (для кодеина).

Предложенная схема идентификации использована для исследования мочи живых лиц после принятия таблеток сложного состава с амидопирином после изолирования прямой дробной экстракцией хлороформом при рН 2 и 10.

Исследовалась моча добровольцев (через 2, 4, 9, 14 и 24 часа) после приема терапевтических доз теофедрина, пенталгина, пиркофена, пирамеина, анапирина, пиранала. Анализ показал, что кофеин, фенобарбитал и эфедрин обнаруживаются в любом интервале времени во всех извлечениях мочи после принятия 1 и 2 таблеток.

Фенацетин, теофиллин, теобромин, кодеин, анальгии обнаруживаются во всех извлечениях после приема 2 таблеток теофедрина, пенталгина, анапирина, пиранала, пиркофена. После приема 1 таблетки через 24 часа не были найдены.

Амидопирин во всех исследованных формах после принятия 1 таблетки обнаруживался в извлечениях мочи: через 2 и 4 часа в виде нативного вещества и 4-аминоантипирина; в извлечениях мочи через 9, 14 часов в виде нативного, 4-аминоантнпирина и 4-ацетиламиноантипирина. Через 24 часа амидопирин не обнаружи-

вался, выделяясь только в виде его главных метаболитов. После принятия двух таблеток амидопирин обнаруживается в виде на-тивного вещества и его метаболитов во всех извлечениях, в том числе и через 24 часа.

Атропин найден только через 4 часа после приема двух таблеток теофедрина. Цитизин не был найден совсем, что связано очевидно с его незначительной дозировкой в теофедрине.

Соэкстрактивные балластные вещества, извлекаемые из мочи, существенно не влияли на воспроизводимость результатов хроматографического исследования.

УФ - спектроскопия Представляет определенный интерес и идентификация АССОХ по УФ - спектрам абсорбции. В дополнение к методу ХТС, для доказательства АССОХ, имеющих в своей структуре хромофорные группы, мы применили метод УФ - спектроскопии. Были экспериментально изучены спектральные характеристики амизила, амидопирина и двух его главных метаболитов 4-амино-антипирина и 4-ацетиламиноантипирина. Исследования показали, что амизил обладает избирательной абсорбцией в гексане, хлороформе, 96% спирте, 0,1 моль/л растворе кислоты хлористоводородной с характерными максимумами поглощения при 252, 258 и 265 нм и минимумами абсорбции при 250, 255 и 263 ни.

В качестве растворителей амидопирина и его метаболитов были использованы вода, 0,1 моль/л раствор кислоты хлористоводородной и хлороформ. Как свидетельствуют полученные данные, амидопирин, 4-аминоантипирин и 4-ацетиламиноантипирин имеют характерные спектры в изученных растворителях, с наиболее выраженной абсорбцией в 0,1 моль/л растворе кислоты хлористоводородной для амидопирина при 256 нм (X min 230 нм); 4-аминоан-

типирина при 260 им (X min 227 нм); 4-ацетиламиноантипирина при 259 нм {X min 248 нм).

Нами изучена возможность применения метода УФ - спектроскопии для доказательства рассмотренных соединений, выделенных из биологического материала. Исследования показали, что мешающее влияние соэкстрактнвных балластных веществ может быть устранено при использовании экстракционной очистки в сочетании с хроматографической. Оптическая плотность экстрактов, полученных из незатравленной печени трупа, и абсорбция элюатов из зоны амидопирина (в крови) практически равны нулю. Оптическая плотность элюатов. полученных из контрольных образцов мочи, в зоне амидопирина варьировала от 0,0012 до 0,0042; в зоне 4-аминоантипирина от 0,0015 до 0,0021; в зоне 4-ацетиламиноантипирина от 0,0019 до 0,0038. Таким образом, фон, создаваемый соэкстрактивными веществами в избранных условиях, весьма незначителен, что дает возможность проводить достоверное спектрофотометрическое исследование названных соединений после их изолирования и очистке.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Среди инструментальных методов исследования в современной практике фармацевтического и химико-токсикологического анализа довольно перспективным является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, соединивший в себе достоинства спектральных и хроматографических методов и пользующийся значительной популярностью для аналитического определения малых концентраций, в том числе в лекарственных формах и биологических жидкостях.

Нами разработана методика доказательства амидопирина по нативному веществу и двум его главным метаболитам с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изучена

возможность использования метода ВЭЖХ для идентификации биологически активных компонентов в таблетках сложных композиций с амидопирином (в том числе и зарубежного производства), которые находят широкое применение в медицинской практике.

Исследования проводили на микроколоночном хроматографе "Милихром - 4" с УФ - детектором, аналитической колонкой 64 х 2 мм с сорбентом Сепарон С - 18. Объем вводимой пробы на анализ 6 мкл (содержание вещества 5 мкг).

В качестве оптимальной подвижной фазы избран элюент состава: ацетонитрил - 0,01 моль/л водный раствор калия дигидро-фосфата 50:50; скорость потока этоента 75 мкл/мин обеспечивала приемлемое время хроматографирования при удовлетворительных параметрах разделения. Для изучения максимумов поглощения исследуемых соединений были сняты спектры в режиме работы прибора "Спектр". Однако, вследствие значительных различий изучаемых соединений в физико-химических свойствах и их спектральных характеристик, выбор для идентификации рабочей аналитической длины волны 220 нм обусловлен необходимостью унификации исследования.

Для определения параметров удерживания исследуемых соединений изучено хроматографическое поведение компонентов сложных лекарственных форм (теофедрин, пентальгин, анапирин, пирамеин, пиркофен, пиранал, реопирин), а также 4-аминоантипи-рина и 4- ацетиланиноантипирина (как главных метаболитов амидопирина) в виде индивидуальных веществ и в составе модельных смесей.

На основании полученных абсолютных времен удерживания рассчитывали параметры хроматографического разделения: удерживаемый объем, коэффициент емкости. Из результатов про-

веденных исследований (таблица 2) видно, что в выбранных условиях хроматографировання можно достичь разделения исследуемых соединений при достаточной селективности обнаружения (таблица 3).

Таблица 2.

Хроматографические параметры удерживания _исследуемых соединений _

Название Абсол. время Удерживав - А, шах

соединения удерживания мый объем

Анальгин 1,64 123,00 230, 245, 260

Теобромин 1,83 137,25 210, 275

Теофиллин 1,87 140,25 205, 270

4-ацетиламино- 2,00 150,00 245, 265

антипирин

Кофеин 2,08 156,00 208, 279

Бутадион 2,25 168,75 227, 258

Фенобарбитал 2,44 183,00 205, 238

4-аыиноантипирин 2,53 189,75 248, 270

Фенацетин 2,94 220,50 225, 246

Амидопирин 3,34 ' 250,50 230, 268

Цитизин 4,50 337,50 242, 264

Кодеин 4,72 354,00 215, 240, 280

Эфедрин 12,70 952,50 210

Полученные данные были использованы для идентификации

лекарственных соединений в таблетках сложного состава с амидопирином. Идентификация веществ в исследуемой пробе проводилась сопоставлением времени (объема) удерживания и коэффициентов емкости определяемого компонента с хроматографиче-скими параметрами индивидуальных стандартных соединений. При необходимости сравниваются УФ - спектры предполагаемого компонента и образца сравнения, что позволяет увеличить надежность идентификации и разделить вещества с близкими параметрами удерживания. Выявлено, что исследованию не мешают наполнители, присутствующие в лекарственных формах и соэкстрахтивиые эндогенные вещества мочи.

Таблица 3.

Хроматографические параметры разделения ингредиентов _ в исследуемых таблетках__

Название Лекарст. вещества, Абсол. вре- Коэфф. Селективность

таблеток входящие в состав мя удержив. емкости 2/1 3/2 4/3 5/4 6/5 7/6

1 3 4 5 6 7 8 9 10

Пиранал Анальгин 1,64 0,07 _ _ » »

Амидопирин 3,34 1,18 16,86 _

Пирамеш Кофеин 2,08 0,36 _ „ »

Амидопирин 3,34 1,18 3,28 _ „ „ »

Реопирин Бутадион 2,25 0,47 _ _

Амидопирин 3,34 1,18 2.51 _ „ „ „

Анапирин Анальгин 1,64 0.07 _ „ _

Кофеин 2,08 0.36 5.14 « _

Амидопирин 3,34 1,18 3,28 - - -

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Пиркофен Кофеин 2,08 0,36 „ „ _ „

Фенацетин 2,94 0,92 2,56 „

Амидопирин 3,34 1,18 1,28 _ „ _

Пенталган Анальгин 1,64 0,07 _

Кофеин 2,08 0,36 5,14 „

Фенобарбитал 2,44 0,59 1,64

Амидопирин 3,34 1,18 • _ 2,00

Кодеин 4,72 2,0В _ 1,76 _

Теофсдрин Теобромин 1,83 0,20 _ _ „

Теофиллин 1,87 0,22 1.10 _ _

Кофеин 2,08 0,36 „ 1,64 _ _

Фенобарбитал 2,44 0,59 1,64 _

Фенацетин 2,94 0,92 „ 1,56 „

Амидопирин 3,34 1,18 „ „ _ 1,20

Эфедрин 12,70 7,30 _ _ - 6,19

Микрокристаллоскопические реакции н реакции окрашивания

При химико-токсикологических исследованиях иикрокри-сталлоскопические реакции являются ценным дополнением результатов анализа.

В поисках надежных и доказательных микрокристаллоско-пических реакций, с выявлением оптимальных условий кристаллизации АССОХ с соответствующими реактивами и пригодности их для судебно-химических и токсикологических целей из числа описанных в литературе, избрали реакцию взаимодействия про-медола с ализариновым красным. Открываемый минимум 4 мкг.

В результате экспериментальных исследований нами было найдено, что:

- промедол с насыщенным раствором кислоты пйкролоновой образует специфической формы кристаллы, состоящие из желтых сферояитов; при стоянии темнеющих. Открываемый минимум 3 мкг;

- клофелин с 5% раствором кислоты золотохлористоводо-родной дает желтые перистые дендриты в сростках. Открываемый минимум 5 мкг;

- амидопирин образует а) с роданидным комплексом кобальта голубые призмы, собранные в друзы. Открываемый минимум 9 мкг; б) с роданидным комплексом цинка бесцветные призмы, собранные в пучки. Открываемый минимум 4 мкг; в) с роданидным комплексом кадмия бесцветные ветвистые кристаллы, собранные в пучки. Открываемый минимум 400 мкг.

Предложенные микрокристаллоскопические реакции могут быть использованы дополнительно в качестве подтверждающих при химико-токсикологических исследованиях названных АССОХ.

Пределы обнаружения анализируемых соединений иикро-кристаллоскопическими реакциями в хлороформных извлечениях,

полученных при изолировании из биологического материала

с.

(печень),составляют для промедола 0,6 мг, клофелина 1 мг, амидопирина соответственно 1,5, 1,0, 9,0 мг.

При изучении возможности образования кристаллических осадков исследовано отношение амизила к 52 реактивам, в той числе к 9 общеалкалоидным осадительным. Наиболее чувствительными для обнаружения амизила являются реакции с кислотой фосфорномолибденовой - открываемый минимум 0,25 мкг, с раствором висмута йодида в калия йодиде - открываемый минимум 0,5 мкг, с раствором йода в калия йодиде - открываемый минимум 0,5 мкг. Со многими реактивами амизил дает обильные аморфные осадки. Осадков с характерным кристаллическим строением получено не было.

Изучалась возможность применения для обнаружения амизила реакций окрашивания.

Наиболее чувствительными реактивами для обнаружения амизила являются:

- кислота серная концентрированная, содержащая формальдегид (реактив Марки) - изумрудно-зеленое окрашивание. Открываемый минимум 0,25 мкг;

- кислота серная концентрированная, содержащая кислоту ванадиевую (реактив Манделина) - травянисто-зеленое окрашивание. Открываемый минимум 0,25 мкг;

- кислота серная концентрированная - оранжевое окрашивание, быстро переходящее в малиновое. Открываемый минимум I мкг;

- кислота серная концентрированная, содержащая кислоту молибденовую (реактив Фреде) - аналогично кислоте серной концентрированной. Открываемый минимум 1 мкг.

Из предлагаемых реакций наиболее наглядной и чувствительной является реакция амизила с кислотой серной концентрированной, содержащей формальдегид. В отличие от азотсодержащих соединений основного характера, имеющих токсикологическое значение и реагирующих с реактивом Марки (морфин, кодеин, героин, папаверин, наркотин, промедол, этилморфин), дает специфическое окрашивание. Реактив Марки был использован и для обнаружения зон локализации амизила при хроматографиче-ском исследовании:

- на силуфоле (способ пипетирования). Открываемый минимум 2 мкг;

- на силикагеле КСК (пипетированием). Открываемый минимум 5 мкг.

Амизил на хроматографических пластинках может быть обнаружен по желто-зеленой флуоресценции в УФ - свете. Открываемый минимум - 20 мкг.

Показана возможность использования предлагаемых реакций обнаружения амизила для доказательства его в извлечениях, полученных из биологических объектов (печень трупа) при изолировании водой, подкисленной кислотой щавелевой, после хрома-тографической очистки. Предел обнаружения 0,25 мг/100 г.

2. Количественное определение АССОХ

Лекарственные АССОХ в субстанции по ГФ - X определяются титриметрическими методами. Расчеты результатов анализа отличаются многообразием и не унифицированы. Нами составлен сборник задач, где приведена систематизация приемов расчетов, необходимых для оценки качества лекарственных препаратов по

количественному определению с учетом вариантов титриметриче-ских методов и особенностей фармацевтического анализа. На основании сборника разработана программа для IBM совместимого компьютера, которая позволяет проводить расчеты количественного содержания вещества по всем методикам Государственной фармакопеи. Для расчета в зависимости от ситуации фармакопейного анализа используется одна из 30 формул. Возможен промежуточный расчет титра определяемого вещества по титранту. Программа имеет стандартный интерфейс, реализованный с помощью библиотеки Turbo Vision 2. Выбор методики происходит в интерактивном режиме. Использование программы значительно облегчает проведение расчетов. Однако для количественного определения АССОХ по ГФ - X применяются в основном титримет-рические методы неводного титрования.

Одним из путей разработки быстрых и надежных методов количественного определения АССОХ является широкое использование физико-химических методов анализа.

Из числа методов, описанных в литературе, наиболее подходящими для целей химико-фармацевтического и химико-токсикологического анализа АССОХ являются фотометрические методы. Эти методы предусматривают качественно-количественное исследование лекарственных веществ, обладают достаточной чувствительностью, хорошей воспроизводимостью, требуют незначительной затраты рабочего времени, исследуемых веществ и реактивов. Их легко можно сочетать с другими методами, например, хроматографическими.

Наибольшей простотой аналитических операций обладает метод УФ - спектрофотометрии непосредственно по определяемому веществу, без проведения дополнительных реакций. Ограничением же метода является невозможность его применения для

анапиза соединений, не содержащих хромофорных структур, обеспечивающих абсорбцию в УФ - области спектра. Широкое распространение в области фармации и токсикологии получил и вариант определения АССОХ с помощью экстракционной- фотометрии, где сочетается фотометрия с экстракцией.

Экстракционно-фотометрический метод В качестве реагента для разработки методики экстракцион-но-фотометрического определения АССОХ мы избрали кислоту пикриновую, так как в отличие от многих других красителей она имеет достаточно кислые свойства (рКа 0,8). Растворы кислоты пикриновой устойчивы при хранении и удобны в работе. Продукты взаимодействия АССОХ с кислотой пикриновой экстрагируются органическими растворителями, окрашивая их в интенсивно желтый цвет. Кривые светопоглощения продуктов реакций АССОХ с кислотой пикриновой сходны со спектром поглощения ге водного раствора (А, шах. 358), но имеет место, как видно из ¡же. I, гипсо- и батохромное смещение.

Продукты взаимодействия азотсодержащих соединений ос-ювного характера с кислотой пикриновой следует считать 'ионными ассоциатами". Важно поэтому было определить опти-«альное значение рН, при котором продукты взаимодействия бу-(ут находиться в максимально ионизированном состоянии.

Степень ионизации кислот и оснований может быть рассчи-ана с помощью уравнений Гендерсена:

степень ионизации (%) для кислоты =

__100_

1+антилогарифм{рКа-рН)

степень ионизации (%) для основания =

__100_.

1 + аятклогарифи(рН - рКа)'

Гипсохромное смещение

358 Батохромное смещение

338

амидопирин

хинин

:альсолидин

зрпенал дабазол альсолнн

1

ыетацин

кокаин

sc-та пикриновая

пахикарпин

365

прозернн

динезин

пилокарпин

амизил

кодеин

папаверин

платифишшн

про мед о л

говкаин

гпазмолитин

гтрихнин

этилморфин

эфедрин

атропин

Рис 1. Лиагпамма максимумов светопоглощения кислоты пикриновой и пикратов АССОХ.

Таблнца 4.

Степень ионизации кислоты пикриновой (%) при _заданных значениях рН, рКа 0,8._

рН рКа-рН Концентрация анионной формы, % •

1 -0,2 61,32

2 -1,2 94,07

3 -2,2 99,37

4 -3,2 99,94

5 - 14 В области рН 5-14 кислота пикриновая практически полностью ионизирована

Из данных, представленных'в таблице 4, видно, что кислота пикриновая может быть использована для экстракционио-фото-иетрического определения при рН выше 4, так как она полностью ионизирована и не экстрагируется органическими растворителями, а при рН 1 - 4 кроме ионизированной присутствует и молекулярная форма, которая может переходить в органическую фазу, что было подтверждено экспериментально.

Слабые основания, каковыми являются АССОХ, полностью ионизированы только в сильно кислой среде. В условиях изучаемой реакции с кислотой пикриновой мы имеем возможность создавать кислую среду только рН 4,5.

Степень ионизации АССОХ при рН 4,5 приведена в таблице

5.

Из данных таблицы 5 видно, что при рН 4,5 пахикарпин, гоматропин, фенамин, эфедрин, атропин, амитриптилин, анаприлин, аминазин, имеющие показатель ионизации 9,30 и выше,полностью ионизированы. Новокаин, амизил, дикаин, кокаин, промедол, стрихнин, димедрол, клофелин, платифиллин, кодеин, хинин, этилморфин, бруцин, физостигмин, морфин, скополамин, героин, апоморфин, пилокарпин, резерпин, папаверин имеют степень ио-

Таблица 5.

Степень ионизации (%) азотсодержащих соединений _основного характера при рН 4,5_

№ Соединение Показатель Концентрация ка-

ионизации тионной формы

1 Пахикарпин 11,80 100,00

2 Гоматропин 9,98 100,00

3 Фенамин 9,80 100,00

4 Эфедрин 9,70 100,00

5 Атропин 9,60 100,00

6 Амигриптилин 9,40 100,00

7 Анаприлин 9,40 100,00

8 Аминазин 9.30 100,00

9 Новокаин 8,80 99,99

10 Амизил 8,75 99.99

11 Дикаин 8,50 99,99

12 Кокаин 8,41 99,99

13 Промедол 8,40 99,99

¡4 Стрихнин 8,30 99,98

15 Димедрол 8,20 99,98

16 Клофелин 8,20 99,98

17 Платифиллин 8,10 99,97

18 Кодеин 8,00 99.97

19 Хинин 8,00 99,97

20 Этилморфин 7,90 99,96

21 Бруцин 7.90 99,96

22 Физостигмин 7,88 99,96

23 Морфин 7,80 99,95

24 Героин 7,60 99,92

25 Скополамин 7,60 99,92

26 Апоморфин 7,00 99,68

27 Пилокарпин 6,80 99,50

28 Резерпин 6,60 99,21

29 Папаверин 5,90 96,17

30 Амидопирин 4,80 66,61

31 Дибазол 4,20 33,39

32 Фенацетин 2,20 0,50

33 Антипирин 1,51 0,10

34 Кофеин 0,60 0,01

35 Теобромин 0,10 0,00

низации близкую к 100% и также могут определяться экстракци-онно-фотометрическим методом. Для амидопирина при степени ионизации 66,31% и дибазола 33,39% определение проблематично. Фенацетин, антипирин, кофеин, теобромин при степени ионизации близкой к нулю данной фотометрической реакцией не могут быть определены.

Было изучено при оптимальном значении рН и оптимальном экстр агенте количество красителя и буферного раствора для реакции, соотношение объемов водной и органической фаз, зависимость экстрагирования ионных ассоциатов от времени и кратности, их устойчивость.

Установлено, что избыток кислоты пикриновой не оказывает влияние на определение АССОХ; оптимальное количество буферного раствора 0,5 мл; соотношение объемов фаз водной и хлороформной 2,5:10; время экстрагирования 30 секунд. Ионные ас-социаты устойчивы во времени (окраска стабильна в течение суток). При однократном экстрагировании удается извлечь более 98% ионных ассоциатов.

Экстракциоино-фотометрическая реакция АССОХ с кислотой пикриновой обладает достаточно высокой чувствительностью (см. данные таблицы 6).

Оптимальные условия образования и экстрагирования продуктов взаимодействия АССОХ с кислотой пикриновой положены в основу экстракционно-фотометрического метода количественного определения.

Оптическую плотность окрашенных экстрактов измеряли на фотоэлектроколориметре ФЭК-56 для атропина сульфата, проме-дола, стрихнина нитрата в кювете с рабочей длиной 5 мм, для па-хикарпина гидройодида 3 мм при светофильтре № 2 (максимум пропускания 364 ни) в интервале концентраций 0,1-1 мг/10 мл

Таблица 6.

Фотометрические параметры продуктов реакции некоторых

_ АССОХ с кислотой пикриновой___(

№ Соединение М.м. В ЕГ4 Чувствительность реакций

М мкг/мл

1 2 3 4 5 6 7 8

1 Атропина сульфат 694,80 0,84 33,6 2335 1,7 • 10-5 11,9

2 Платифиллина гияротартрат 487,50 0,57 22,8 1112 3,6 • 10-5 17,5

3 Тиопроперазнн 446,64 0,72 28,8 1286 3,1 • 10-5 13,9

4 Метацин 441,30 1,06 42,4 1871 2,1 ■ 10-5 9,4

5 Эргометрина малеат 441,20 0,48 19,2 847 4,7 • 10-5 20,8

б Скополамнна гидробромид 438,30 0,50 20,0 877 4,6 • 10-5 20,0

7 Кодеина фосфат 424,40 0,81 34,2 1375 2,9 • 10-5 12,3

8 Стрихнина нитрат 397,43 0,74 , 29,6 1176 9,3 • 10-5 36,8

9 Хинина гидрохлорнд 396,92 0,71 28,4 1127 3,5 • 10-5 14,1

10 Эгилморфина гидрохлорид 385,89 0,73 29,2 1127 3,5 • 10-5 13,7

и Совканн 379,93 0,63 25,2 957 4,2 ■ 10-5 15,9

12 Папаверина гидрохлорид 375,86 0.88 35,2 1323 3,0 • 10-5 11,4

13 Морфнна гидрохлорнд 375,85 0,52 20,8 782 5,1 • 10-5 19,2

14 Ашпил 363,90 0,64 25,6 929 4,3 • 10-5 15,6

15 Пахикарпина гидройодид 362,30 1,16 46,4 1681 2,4-10-5 8,6

16 Арпенал 361,92 ' 1,18 47,2 1708 2,3 • 10-5 8,5

17 Апрофен 361.92 1,03 41,2 1491 2,7 • 10-5 9,7

1 2 3 4 5 6 7 8

18 Гоматропина гидробромнд 356,27 0,83 33,2 1183 3,4 • 10-5 12,0

19 Спазмолитин 347,87 1,12 44,8 1558 2,6 • 10-5 8,9

20 Фенадон 345,92 1,05 42,0 1453 2,8 • 10-5 9,5

21 Кокаина гидрохлорид 339,82 1,01 40,4 1373 ^ 2,9 • 10-5 9,9

22 Динезнн 334,92 0,94 37,6 1259 3,2 • 10-5 10,6

23 Прозерин 334,39 1,40 56,0 1873 2,1 • 10-5 7,1

24 Амитриптилин 313,90 0,82 32,8 1030 3,9 ■ 10-5 12,2

25 Промедол 311,85 0,91 36,4 1135 3,5 ■ 10-5 11,0

26 Диканн 300,83 0,92 36,8 1107 3,6-10-5 10,9

27 Димедрол 291,82 1,19 47,6 1389 2,9 • 10-5 8,4

28 Секуринина нитрат 280,28 0,63 25,2 706 5,7 • 10-5 15,9

29 Сальсолидина гидрохлорнд 279,77 1 1,08 43,2 1209 8,3-10-5 23,1

30 Сальсолина гидрохлорид 247,72 0,85 34,0 842 4,8 • 10-5 11,8

31 Дибазол 244,73 1,02 40,8 998 4,0 • 10-5 9,8

32 Пилокарпина гидрохлорид 244,72 0,57 22,8 558 7,2-10-5 17,5

33 Амидопирин 231,30 0,24 9,6 222 18,0 -10-5 41,7

34 Эфедрина гидрохлорид 201,70 0,77 30,8 621 6,4 • 10-5 13,0

экстракта, а для аиизипа на спектрофотометре СФ - 16 в 10 мм кварцевой кювете при длине волны 345 нм в интервале концентрации 0,01 - 0,1 мг/10 мл экстракта, относительно хлороформа. При статистической обработке результатов количественного определения исследуемых АССОХ в лекарственных формах установлено, что ошибка определения находится в допустимых пределах НТД.

Предложенная реакция количественного определения АССОХ с кислотой пикриновой проверена нами на специфичность по отношению к исследованию трупного материала (печень), в том числе гнилостно измененного.

УФ - спектрофотометрический метод В связи с невозможностью использования реакции с кислотой пикриновой , нами для количественного определения амидопирина и его главных метаболитов применен вариант УФ -спектрофотометрического анализа, в 0,1 моль/л растворе кислоты хлористоводородной. Определение амидопирина при 256 нм (Е1^ 389), 4-аминоантипирина" при 260 нм (Е^ 460), 4-ацетил-аминоантипирина при 259 им 335) возможно в интервале концентраций 4- 20 мкг/мл. Методика УФ - спектрофотометрического определения использована для количественного определения . амидопирина и его главных метаболитов, выделенных из биологических жидкостей при различных сроках хранения.

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии Для разработки способа ВЭЖХ количественного определения амидопирина и двух его главных метаболитов, использовали метод абсолютной калибровки. Выбор аналитической длины 230 нм (X шах. амидопирина) обусловлен необходимостью унификации определения и достаточно высоким поглощением амидопирина, 4-амнноантипирина, 4-ацетиламиноантипирина в - данной области.

ОБУСЛОВИЛ хроматографировання приведены при описании способа идентификации АССОХ.

Установлено, что линейная зависимость наблюдается в интервале концентраций для: амидопирина 10 - 100 мкг/мл, 4-амино-антипирина 8 - 80 мкг/ мл, 4-ацетиламиноантипирииа 12 - 120 мкг/мл, при взятии 6 мкл на анализ из пробы в 1 мл.

Методика ВЭЖХ использована для анализа амидопирина в таблетках сложных композиций и амидопирина и его главных метаболитов в моче живых лиц. Применение метода ВЭЖХ при химико-токсикологических анализах выгодно отличают его возможностью сокращения количества объекта на исследование в связи с высокой чувствительностью метода, отсутствием необходимости дополнительной очистки экстрактов, исследуемых на наличие АССОХ.

3. Изолирование АССОХ из биологических объектов

Изолирование АССОХ, имеющих токсикологическое значение, из объектов исследования имеет решающее значение для результатов химико-токсикологического анализа. Успех исследования во многом зависит от эффективности изолирования, то есть от количества вещества, выделяемого данным методом, его разрешающей способности, от степени чистоты получаемых остатков. Имеет значение и время, затрачиваемое на изолирование.

Несмотря на появление в последние годы отдельных частных методик изолирования в практике отечественных судебно-химических лабораторий наиболее широкое применение имеют методы изолирования азотсодержащих веществ, основанные на извлечении их подкисленной водой.

Необходимость учета при экстракции рН среды, природы органического растворителя признается исследователями и находит практическое применение. Однако, выбор условий экстрак-

ции, как показывают литературные данные, до сих пор осуществляется эмпирически, постановкой большого количества опытов при различных значениях рН среды, с различными органическими растворителями. Такой важнейший показатель, как показатель ионизации (рКа) анализируемого соединения, не используется совсем или крайне недостаточно.

Возможность теоретического прогнозирования оптимальных условий экстракции с учетом рКа и рН среды была показана нами в 1974 г. на примере атропина и пахикарпина. Так как большинство азотсодержащих оснований экстрагируется органическими растворителями в виде молекулярной формы, то при известном рКа вещества можно вычислить степень ионизации при различных значениях рН с помощью уравнения Гендерсена.

Нами составлена программа для IBM совместимого компьютера, которая в значительной степени облегчает расчеты, обеспечивает точность и экономит время. Программа позволяет получить значения степени ионизации в процентах при рН 1-14. Информация хранится в базе данных. При добавлении вещества запрашивается его имя и значение рКа. Возможно удаление веществ из базы, просмотр списка хранящихся веществ. Основной формой отчета является текстовый файл, содержащий полную информацию о степени ионизации. Данные о степени ионизации наиболее важных в токсикологическом отношении АССОХ, при известных показателях ионизации представлены в таблице 7.

Как видно из данных таблицы 7, азотсодержащие соединения, имеющие рКа в интервале 11,8 - 4,2 при рН 2 и ниже, практически полностью ионизированы и поэтому на I этапе изолирования должны переходить в водное извлечение. Эти же значения рН будут оптимальными и для экстракционной очистки АССОХ.

Таблица 7.

Степень ионизации АССОХ (%) при различных рН_____

№ Соединение рКа Конценп эацня ионизированной формы в процентах при рН !

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 II 12 13 14

1 2 3 4 5 б • 7 8 9 10 И 12 13 14 15 16 17

1 Пахлкарпин 11,80 100.00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 99,98 99,84 98,44 86,32 38,69 '5,94 0,63

2 Гоматропин 9,98 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 99,99 99,90 98,96 90,52 48,85 8,72 0,95 0,10 | 0.01

3 Фенамин 9,80 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 99,98 99,84 98,44 86,32 38,69 5,94 0.63 0.06 0.01

4 Эфедрин 9,70 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 99,98 99,80 98,04 83,37 33,39 4.77 0,50 0,05 | 0,01

5 Атропин 9,60 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 99,97 99,75 97,55 79.92 28,47 3,83 0.40 0,04 0,00

6 Аннгриптилнн 9,40 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 99,96 99,60 96,17 71,53 20,08 2.45 0,25 0,03 1 0,00

7 Аиаприлнн 9,40 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 99,96 99,60 96,17 71,53 20,08 2,45 0,25 0.03 \ 0,00

8 Аккказин 9,30 100,00 100,00 100,00 100,00 99,99 99,95 99,50 95,23 66,61 16.63 1,96 0,20 0,02 0,00

9 Новокаин 8,80 100.00 100,00 100,00 100,00 99,98 99,84 98,44 86,32 38,69 5,94 0,63 0,06 0,«1 0,00

10 Амизнл 8,75 100,00 100,00 100,00 100,00 99,98 99,82 98,25 84.90 35,99 5,32 0.56 0.06 0,01 0,00

II Дюсаин 8,50 100,00 100,00 100,00 100,00 99,97 99,68 96,93 75,97 24,03 3,07 0,32 0.05 0.00 0,00

12 Кокаин 8,41 100,00 100,00 100,00 100.00 99,96 99,61 96,26 71,99 20.45 2,51 0,26 0.03 0.00 ' 0,00

13 Промедол 8,40 100,00 100,00 100,00 100,00 99,96 99,60 96,17 71,53 20.08 2,45 0,25 0.03 0,00 о,уо

14 Стрихнин 8,30 100,00 100,00 100,00 99,99 99,95 99,50 95,23 66.61 16,63 1,96 0,20 0 02 0.00 0,00

15 Димедрол 8,20 100,00 100,00 100,00 99,99 99.94 99,37 94,06 61,31 13,68 1.56 0,16 0 02 0,00 0,00

16 Клофелин 8,20 100.00 100,00 100,00 99,99 99,94 99,37 94,06 61.3.1 13,68 1,56 0,16 0.01 0.00 0,00

17 Платифиллин 8,10 100.00 100,00 100,00 99,99 99,92 99,21 92,64 55,73 11,18 1.24 0,13 0,00 1 0,0(1

18 Кодеин 8,00 100,00 100.00 100,00 99,99 99,90 99,01 90,91 50,00 9,09 0,99 <1.10 0,111 1 0,00 0,1'п

I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 и 12 13 14 15 16 17

19 Хинин 8,00 100,00 100,00 100,00 99,99 99,90 99,01 90,91 50,00 9,09 0,99 0,10 0,01 0,00 0,00

20 Эгилыорфин 7,90 100,00 100,00 100,00 99,99 99,87 98,76 88,82 44,27 7,36 0,79 0,08 0,01 0.00' 0,00

21 Бруцин 7,90 100,00 100,00 100,00 99,99 99,87 98,76 83,82 44,27 7,36 0,79 0,08 0,01 0.00 0,00

22 Фюостнгмин 7,88 100,00 100,00 100,00 99,99 99,87 98,70 88,35 43,14 7,05 0,75 0,08 0,0! 0,00 0,00

23 Морфин 7,80 100,00 100,00 100,00 99,98 99,84 98,44 86,32 38,69 5,94 0,63 0,06 0,01 0,00 0,00

24 Скополаиин 7,60 100,00 100,00 100,00 99,97 99,75 97,55 79,92 28,47 3,83 0,40 0,04 0,00 0,00 0,00

25 Героин 7,60 100,00 100,00 100,00 99,97 99,75 97,55 79,92 28,47 3,83 0,40 0,04 0,00 0,00 0,00

26 Аломорфин 7,00 100,00 100,00 99,99 99,90 99,01 90,91 50,00 9,09 0,99 0,10 0,01 0,00 0.00 0,00

27 Пилокарпин 6,80 100,00 100,00 99,98 99,84 98,44 86,32 38,69 5,94 0,63 0,06 0,01 0.00 0,00 0,00

28 Резерпин 6,60 100,00 100,00 99,97 99,75 97,55 79,92 28,47 3,83 0,40 0,04 0,00 0.00 0.00 0,00

29 Папаверин 5,90 100.00 99,99 99,87 98,76 88,82 44,27 7,36 0,79 0,08 0,01 0,00 0 00 0.00 0,00

30 Амидопирин 4,80 99,98 99,84 98,44 86,32 38,69 5,94 0,63 0,06 0,01 0,00 0,00 0 00 0,00 о.оо

31 Дибазол 4,20 99,94 99,37 94,06 61,31 13,68 1,56 0,16 0.02 0,00 0,00 0,00 0.00 0,00 0,00

32 Фенацетин 2,20 94,06 61,31 13,68 1,56 0,16 0,02 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0.00 0,00

33 Антипирин 1,51 76,39 24.45 3,13 0,32 0,03 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0.00 1 0,00

34 Кофеин 0,60 28,47 3,83 0,40 0,04 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0.00 о.оо ! о.оо

35 Теобромин 0,10 11,18 1,24 0,13 0,01 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0.00 I 0.00 ! 0.00

ы

СЛ

Полнота же экстракции АССОХ органическими растворителями будет достигаться при рН 10 и выше, так как анализируемые соединения при этих значениях рН находятся в максимально неионизированной (молекулярной) форме.

Степень выделения АССОХ из биологических объектов характеризуется не только рКа, рН и их растворимостью в тех или иных растворителях, но необходимо также учитывать присутствие и прочность связи АССОХ с белками и другими соэкстрактивны-ми веществами.

Для изолирования АССОХ из трупного материала использовали методику настаивания с водой, подкисленной кислотой щавелевой, учитывая значение рН при изолировании и при экстрагировании как из кислого (рН ниже 2), так и из щелочного растворов (рН выше 10), а из биологических жидкостей использовали прямую экстракцию органическим растворителем с учетом тех же значений рН.

4. Очистка и определение АССОХ при химико-токсикологических исследованиях

Выделить токсические вещества в достаточно чистом виде практически невозможно без дополнительной очистки.

Вопросы очистки АССОХ от соэкстрактивных балластных веществ решались нами применением различных аналитических приемов и методов: фильтрование через безводный натрия сульфат на мелкопористом стеклянном фильтре, высаливание элек-гролитом, там где это возможно; замена фильтрования центрифугированием; экстракционная очистка (экстрагирование неполяр-1ым растворителем из кислого раствора) там, где это необходимо I обязательное хроматографическое исследование в тонких фик-;ированных слоях сорбентов. Хроматографический прием позво-[яет сочетать очистку с концентрированием, разделением и пред-

варителыюй идентификацией, и делает последующее обнаружение и количественное определение АССОХ специфичным.

В связи с необходимостью элюирования АССОХ с хромато-граммы для последующего аналитического исследования, решался вопрос выбора элюирующего растворителя. При экспериментальной проверке оптимальным элюентом оказалась смесь метанола и 25% раствора аммиака в соотношении 10:1.

При спектрофотометрическом определении амидопирина, 4-аминоантипирина, 4-ацетиламииоантипирина количественный выход при элюировании их с хроматограммы достигался при использовании 0,1 моль/л раствора кислоты хлористоводородной. Потери при хроматографировании АССОХ не превышали 12%, то есть хроматографический прием не может в значительной степени снизить выход вещества в процессе выделения (учитывая общие значительные потери при изолировании).

При решении вопроса о возможности использования разработанных методик количественного определения АССОХ в судеб-но-химических и химико-токсикологических анализах доказано, что балластные вещества, сопровождающие АССОХ в процессе изолирования после экстракционной очистки и хроматографиче-ского выделения не оказывают заметного влияния на результаты определения (в печени), а оптическая плотность экстрактов, полученных из биологических жидкостей, не содержащих АССОХ, практически равна нулю.

Разработанные методики УФ - спектрофотометрического количественного определения амидопирина и экстракционно-фо-тометрического определения промедола, пахикарпина, стрихнина на основе реакции с кислотой пикриновой применены нами при исследовании биологического материала. Исследованию подвергались аликвоты 1/5 часть извлечений при затравке по 10 и 2 мг на

100 г печени трупа человека, Результаты приведены в таблицах 8, 9.

Методика УФ - спектрофотометрического анализа использована для количественного определения амидопирина и его главных метаболитов в биологических жидкостях в алнквоте 1/2 часть извлечения при затравке по 1 мг на 25 мл мочи (см. таблицу 10).

Для исследования амидопирина и его главных метаболитов в моче живых лиц применили метод ВЭЖХ. Удавалось определить до 85% амидопирина. 68% 4-аминоаитипирина и до 77% 4-ацети-ламиноантипирина из 80 мкг, добавленных к 3 мл мочи. Методика ВЭЖХ позволяет надежно идентифицировать и определять терапевтические дозы амидопирина (0,25 г) в моче живых лиц как по нативному веществу, так и по его главным метаболитам в одной пробе одновременно.

Приведенные данные обосновывают научно-практическую значимость и перспективность использования физико-химических методов анализа при количественном определении АССОХ в биологическом материале.

На основании проведенных экспериментов, нами предлагается схема анализа на наличие азотсодержащих соединений основного характера, применимая для целей судебно-химического и химико-токсикологического исследования, базирующаяся на экстракционном и хроматографическом разделении, выделенных из биологических объектов АССОХ, и использовании комплекса методов и реакций для их идентификации и количественного определения, который осуществим при сочетании физико-химических методов ХТС, фотометрии, ВЭЖХ с реакциями окрашивания и микрокристаллоскопией.

Таблица 8.

Данные статистической обработки результатов количественного определения АССОХ в свежей печени трупа

Вещество Добавлено мг Метрологические характеристики

к 100 г п X Б 8х еа а Е

Амидопирин 10 5 40,72 1,09 0,49 1,36 40,72 ±1.36 ±3,33

2 5 38,84 1,56 0,70 1,93 38,84 ± 1,93 ±4,98

Пахикаргшн 10 5 44,02 1,25 0,56 1,55 44,02 ± 1.55 ± 3,52

2 5 44,39 1.72 0,77 2.14 44,39 ± 2,14 ±4,81

Промедол 10 5 31,99 0,55 0,25 0,68 31,99 + 0,68 ±2.13

2 5 33,72 1.30 0,58 1.62 33,72 + 1,62 ±4,79

Стрихнин 10 5 30,50 0,95 0,42 1,18 30,50 + 1,18 + 3,86 —

2 5 32,14 1,20 0,54 1,49 32.14 ±1,49 ±4,62

Таблица 9.

Данные статистической обработки результатов'количественного определения АССОХ в печени трупа с месячным сроком хранения

Вещество Добавлено мг Метрологические характеристики

к 100 г п X 8 Бх Ба а Е

Амидопирин 10 5 36,67 1,41 10,63 1,75 36,67 + 1,75 ±4,76

2 5 35,25 1,66 - 0,74 2,06 35,25 ± 2,06 + 5,84

Пахнкарпин 10 5 43,93 1,48 0,66 1,84 43,93 ± 1,84 ±4,19

2 5 42,59. 1.71 0,77 2,12 42,59 + 2,12 ±4,99

Промедол 10 5 . 30,14 0,92 0,41 1.14 30,14 + 1.14 ±3,79

2 5 32,80 1,39 0,62 1,73 32,80 + 1,73 ±5,28

Стрихнин 10 5 28,95 1,13 0,50 1.41 28,95 + 1,41 ±4,87

2 5 27,49 1,31 0,59 1,63 27,49 + 1,63 ±5,92

Таблица 10.

Данные статистической обработки результатов количественного определения амидопирина и

'_его главных метаболитов ~в моче при различных сроках хранения_

Бремя Добавлено мг Метрологические характеристики

исследования к 25 мл мочи п X Б Бх £а а Е

Амидопирин

1 - 3 дня 1,0 5 70,60 2,07 0,93 2,57 70,60 ± 2,57 ±3,65

1 месяц 1,0 5 67,60 2,30 1,03 2,86 67,60 ± 2,86 ±4,23

3 месяца 1.0 . 5 51,20 1,92 • 0,86 2,39 51,20 + 2,39 ±4,66

4-аминоантипирнн

1 -3 дня 1,0 5 60,40 2,41 1,08 2,99 60,40 + 2,99 ±4,95

1 месяц 1,0 5 55,80 2,17 0,97 2,69 55,80 + 2,69 ±4,82

3 месяца 1,0 5 46,60 2,07 0,93 2,57 46,60 + 2,57 ±5,52

4-ацетш1аминоантипирин

1 -Здня 1,0 5 67,80 ' 2,28 1,02 2,83 67,80 ± 2,83 ±4,18

1 месяц 1,0 5 56,60 2,30 1,03 2,86 56,60 + 2,86 ± 5,054'

3 месяца 1,0 5 51,80 2,39 1,07 2,96 51,80 ±2,96 ±5,72

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Исследовано отношение некоторых АССОХ к реактивам осаждения и окрашивания. Предложены новые микрокристалло-скопические реакции на промедол с насыщенным раствором кислоты пикролоиовой, на клофелин с кислотой золотохлористово-дородной, на амидопирин с комплексными роданидами кобальта, цинка, кадмия; реакции окрашивания на амизил с реактивами Марки, Манделина, кислотой серной концентрированной. Показана возможность использования предлагаемых реакций для химико-токсикологического анализа.

2. Для идентификации АССОХ использована хроматография в тонких слоях сорбента. Разработана и рекомендована для химико-токсикологического анализа АССОХ оригинальная система растворителей хлороформ - 25% раствор аммиака. Изучена разделяющая способность и возможность ее применения для ХТС -скрининга АССОХ. Показана перспективность использования для хроматографического исследования АССОХ сорбентов на основе силикагеля КСК, Н, Ьэ; пластин "Силуфол", "Сорбфил", ВЭТСХ. Для детектирования зон локализации АССОХ на хроматограммах рекомендовано сочетание общегруппового обнаружения со специфическими реакциями.

3. Показана возможность применения для идентификации АССОХ при химико-токсикологических исследованиях методов УФ - спектроскопии и ВЭЖХ как по нативному веществу, так и по метаболитам.

4. Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены оптимальные условия образования продуктов взаимодействия АССОХ с кислотой пикриновой, исключающие влияние самого красителя. Показана перспективность реакции в избранных условиях для разработки унифицированной методики эхстракци-

онно-фотометрического определения многих лекарственных АССОХ.

5. Разработаны экспрессные методики экстракционно-фото-метрического количественного определения некоторых АССОХ (амизила, атропина сульфата, пахикарпина гидройодида, проме-дола, стрихнина нитрата) в субстанции и лекарственных формах. Для определения амидопирина и его главных метаболитов 4-ами-ноантипирина и 4-ацетиламиноантипирина предложены методики УФ - спектрофотометрии и ВЭЖХ.

6. Прогнозированы оптимальные условия выделения АССОХ с учетом рКа и рН среды. Составлена программа для IBM совместимого компьютера для расчетов степени ионизации АССОХ при рН I - 14, а также программа,позволяющая проводить расчеты количественного содержания АССОХ по всем методикам Государственной фармакопеи.

7. Разработаны условия очистки и отделения азотсодержащих соединений основного характера друг от друга, продуктов их биотрансформации и соэкстрактивных балластных веществ.

8. Продемонстрирована возможность использования разработанных методик для определения АССОХ при химико-токсикологических исследованиях.

9. Показано, что предложенные методики анализа биологического материала на наличие АССОХ применимы для исследования объектов, подвергшихся гнилостному разложению (со сроком хранения 1 и 3 месяца).

10. Установлено, что при исследовании гнилостноизменен-ных объектов только сочетание экстракционной очистки с хроматографией в тонком слое дает возможность достичь необходимой степени чистоты вещества для получения достоверных результатов определения АССОХ.

11. Надежность идентификации и определения АССОХ при химико-токсикологических анализах может быть обеспечена комплексным использованием современных физико-химических методов с традиционными химическими реакциями.

12. Разработанные методики внедрены в практику химических лабораторий Бюро судебно-медицинских экспертиз Российской Федерации и в учебный процесс фармацевтических факультетов и институтов.

Основное содерясанис диссертации изложено в следующих публикациях

1. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Экстракционно-фотомет-рическое определение атропина сульфата в фармакопейных препаратах.// Химико-фармацевтический журнал. - 1973. - № 5. - С. 52 - 54.

2. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Пикриновая кислота как реагент для экстракционно-фотометрического определения азотсодержащих соединений основного характера.// Всес. совещание по аналитическому контролю производства лекарственных и фармацевтических препаратов.: Тез. докл. - Пермь, 1974. - С. 211 -212.

3. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Экстракционно-фотоиет-рическое определение стрихнина нитрата в фармакопейных препаратах.// Там же. - С. 212 - 213.

4. Кокшарова Н.В., Курдина JI.H., Хомов Ю.А. К идентификации аыизила.// Там же. - С. 146 - 147.

5. Швайкова М.Д., Изотов Б.Н., Кокшарова Н.В., Метелева Е.В., Хомов Ю.А. О сохраняемости производных барбитуровой кислоты в печени трупа.// Судебно-медицинская экспертиза. -1974. -Мв 4. - С,-33 - 36.

6. Хомов Ю.А., Курдина Л.Н., Кокшарова Н.В. ■ Хроматография амизипа в тонком слое сорбента.// Матер. II Всес. съезда фармацевтов. - Рига, 1974. - С. 173 - 174.

7. Швайкова М.Д., Изотов Б.Н., Кокшарова Н.В., Метелева Е.В., Хомов Ю.А. Определение барбитуратов в гнилостном биологическом материале.// Труды судебно-медицинских экспертов Узбекистана. - Ташкент, 1975. - Т. 3. - С. 114 - 115.

8. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Экстракционно-фотонет-рическое определение проыедола.// Фармация. - 1975. - № 1. - С. 76 - 77.

9. Хонов Ю.А. Условия образования и экстрагирования продукта реакции атропина с пикриновой кислотой.// Фармация. -1975.6. - С. 31-33.

10. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Булыгина Т.Г. К доказательству амидопирина при химико-токсикологических исследованиях.// I Всес. съезд судебных медиков.: Тез. докл. - Киев, 1976. -535 - 536.

11. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А. Возможности применения хроматографии в тонком слое сорбента при хиыико-токсикологн-ческих анализах барбитуратов и некоторых азотсодержащих веществ основного характера.// Хроматографические и электрофо-ретические методы исследования биологически активных соединений.: Сб. науч. тр. - Свердловск, 1976. - С. 96 - 97.

12. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А. К вопросу определения 1-фенил-2,3-диметил-4-диметиламинопиразолона-5 в биологических субстратах.// Вопросы охраны окружающей среды.: Тез. докл. -Пермь, 1978. - С. 138 - 139.

13. Хонов Ю.А., Кокшарова Н.В. К хиыико-токсикояогиче-скону исследованию стрихнина.// Определение' физиологически

активных веществ и их метаболитов в биологических объектах.: Сб. науч. тр. - М. - 1978. - С. 55 - 58.

14. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А. Определение амидопирина в моче.// Развитие химической и нефтехимической промышленности Западного Урала и задачи по повышению качества и эффективности производства.: Тез. VII обл. науч.-технич. конф. по химии и химической технологии. - Пермь, 1979. - С. 152 - 154.

15. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А. Определение амидопирина и 4-аминоантипирина в моче.// III Всес. съезд фармацевтов.: Тез. докл. - Кишинев, 1980. - С. 283.

16. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Хорошкова Н.В. К метаболизму амидопирина. Анализ на 4-аминоантипирин. - Деп. ВИНИТИ Ms 946-81. - М., 1981. - 6 с.

¡7. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Костина И.А. Сравнительное изучение методов изолирования амидопирина из биологического материала. - Деп. ВИНИТИ № 3042-82. - М., 1982. - 9 с.

18. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А. К метаболизму амидопирина. Анализ на 4-ацетиламиноантипирин. - Деп. ВНИИМИ Мс 6515-83. - М., 1983. - 6 с.

19. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Анализ главных метаболитов амидопирина.// Совершенствование методов анализа лекарственных средств и организации лекарственного обеспечения, населения.: Тез. докл обл. науч.-практ. конф. - Тюмень, 1984. - С. 19 -20.

20. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А. Обнаружение и определение амидопирина и его главных метаболитов в одной пробе мочи.// Современные проблемы допинг - контроля.: Сб. науч. тр. -М., 1985. С. 193 - 196.

21. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Биотрансформация лекарственных веществ в живом организме.// Матер, науч.-практ. конф. Вьентьянского мед. ин-та. - Лаос. - Вьентьян, 1987. - С. 15 - 16.

22. Хомов Ю.А. Промедол - наркотический анальгетик./ Химико-токсикологический анализ веществ, вызывающих одурманивание. - М.: МЗ СССР, 1989. - С. 80 - 82.

23. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Сметанина Н.И., Габова У.В. Определение теофедрина в моче на основе ХТС - скрининга. -Деп. ВНИИМИ № 1048-В-91. - М., 1991. - 4 с.

24. Хомов Ю.А., Арефина Н.Ф., Кокшарова Н.В. Номографическое определение содержания компонентов бинарных лекарственных смесей в титриметрин.// Проблемы стандартизации и контроля лекарственных средств.: Сб. науч. тр. - М., 1991. - Т. 2. -С. 88 - 89.

25. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Завалий Н.К., Мельникова С.М. Динамика выделения компонентов теофедрина и их определение в моче живых лиц на основе ХТС - скрининга. - Деп. ВИНИТИ № 281-В-92. - М., 1992. - 5 с.

26. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Осинцева Ю.В. Обнаружение компонентов теофедрина в моче методом ВЭТСХ.// Фармация и фармакология.: Тез. докл. Междунар. науч.-практ. конф. -Пермь, 1993. - С. 48 - 49.

27. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Грачева Н.С. К доказательству пенталгина в моче методом ВЭТСХ. - Деп. ВИНИТИ Кз 1106-В-93. - М., 1993, 4 с.

28. Хоыов Ю.А., Арефина Н.Ф. Сборник расчетных задач по фармакопейному анализу лекарственных веществ титрииетрн-ческныи методами.: Пермь, 1993. - 72 с.

29. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Слободянюк С.А. Доказательство компонентов пенталгина и динамика их выделения в моче живых лиц. - Деп. ВИНИТИ № 323-В-94. - М., 1994. - 4 с.

30. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Определение амидопирина при химико-токсикологических анализах.// Информационное письмо НИИ судебной медицины МЗ и МП РФ. - М., 1994. - 12 с.

31. Хомов К>.А., Кокшарова Н.В. Сравнительное изучение ВЭТСХ разделения лекарственных веществ основного характера, имеющих токсикологическое значение.// Матер, докл. 50-ой науч.-практ. конф. профессорско-преподавательского состава. - Пермь, 1994. - С. 65 - 66.

32. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В., Ионкала О.С. Идентификация биологически активных компонентов в лекарственных формах с амидопирином с использованием высокоэффективной тонкослойной хроматографии.// Там же. - С. 67 - 68.

33. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Пикриновая кислота как реактив для фармацевтического и химико-токсикологического анализа. - Деп. ВИНИТИ № 2354-В-94. - М„ - 5 с.

34. Хомов Ю.А., Арефина Н.Ф., Кокшарова Н.В. Использование хроматографии в тонком слое для установления нестандартности глазных капель с левомицетином.// Биоповреждения в промышленности.: Тез. докл. Республ. науч.-практ. конф. - Пенза, 1994. - С. 57 - 58.

35. Хомов Ю.А., Курдина Л.Н., Кокшарова Н.В. Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе лекарственных форм с амидопирином.// Актуальные проблемы фармации.: Межвузовский сб. науч. тр. - Тюмень, 1994. - С. 86 - 87.

36. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Определение амидопирина и его главных метаболитов методом высокоэффективной жид-

костной хроматографии в моче.// II Российский национальный конгресс "Человек и лекарство".: Тез. докл. - М., 1995. - С. 322 -

37. Хомов К.Ю., Хомов Д.Ю., Хомов Ю.А. Программа для расчета содержания лекарственных веществ в субстанции в зависимости от ситуации фармацевтического анализа на персональном компьютере.// Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины и фармации.: Матер, юбилейной конф. - Курск. 1995. - С. 120.

38. Кокшарова Н.В., Хомов Ю.А., Пепеляева И.В. Микро-кристаллоскопические реакции при химико-токсикологических исследованиях (промедол, клофелин).// Актуальные вопросы фармации.: Межвузовский сб. науч. тр. - Пермь, 1995. - С. 55.

39. Хомов Ю.А., Хомов Д.Ю. Теоретические предпосылки изолирования азотсодержащих соединений основного характера из биологического материала.// Там же. - С. 66 - 67.

323.

J