Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследования по стандартизации и оценке качества растительных масел и масляных экстрактов, применяемых в фармации

Чечета Ольга Валерьевна

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ И ОЦЕНКЕ КАЧЕСТВА РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЕЛ И МАСЛЯНЫХ ЭКСТРАКТОВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ В ФАРМАЦИИ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Курск - 2009

003469492

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Воронежский государственный университет».

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук,

профессор Сливкин Алексей Иванович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Шорманов Владимир Камбулатович

доктор фармацевтических наук,

профессор Дорофеев Владимир Львович

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится « У » ¿^¿^¿¿Л, 2009 г. в 73 часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Автореферат разослан «Л 9» а^Хг^сЛ 2009 г.

1

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ

В последние годы существенно возрос интерес производителей лекарственных средств (ЛС) к растительным мостам (РМ) и масляным экстрактам (МЭ). Лигщцные комплексы многих растительных объектов содержат сбалансированные по составу ценные биологически активные вещества (БАВ), такие как токоферолы, каротиноццы, фитостерины, фосфо- и гликолипцды. Кроме того, природные липиды являются продуктами постоянно возобноатясмых сырьевых источников.

Масла большинства широко распространенных в природе дикорастущих и культурных сортов облепихи (Hippophae rhamnoides) и шиповника (Rosa cinnamonea) принадлежит к числу весьма ценных ЛС, давно используемых в лечебной практике. Данные масла ускоряют регенерацию поврежденных кожных покровов и потому могут служить неотъемлемой частью ЛС для лечения ожогов и ран. Они применяются как самостоятельные лекарственные препараты (ЛП), так и в качестве вспомогательных веществ дня приготовления инъекционных растворов, мазевых и суппозиторных основ. Кроме того, РМ и отходы их производства могут служить источником получения новых ЛС, обладающих уникальным комплексом фармакологических свойств. Препараты на основе лекарственного растительного сырья обладают, как правило, меньшим побочным действием и имеют более низкий процент противопоказаний. РМ являются источником каротин -токофероловых комплексов, обладающих способностью блокировать образование свободных радикалов и синглетного кислорода в процессе пероксцдного окисления липвдов (ПОЛ), и в связи с этим - уникальными природными антиоксидантами (АО). На основе каротиновдов создается новое поколение иммуномодулирующих ЛС для лечения и профилактики различных заболеваний. Внедрение ЛП с антиокевдантным действием, содержащих каротиновды и токоферолы, а также создание ЛС репаративного и противоожогового действия на основе доступного сырья, актуально и является одним из приоритетных направлений фармации.

В настоящее время на фармацевтическом рынке нашей страны наблюдается огромное многообразие РМ и МЭ, отличающихся химическим составом, свойствами и методами получения. Стандартизация этих препаратов проводится в соответствии с общей фармакопейной статьей ГФ X издания. При исследовании жирных масел предусмотрено проводить определение общих физико-химических показателей качества Однако, содержание БАВ, которые обуславливают фармакотерапевтическую эффективность масел и МЭ, в нормативной документации (НД) России не определяется.

Критерием стабильности РМ служит сохранение его качества. Снижение количественного содержания фармакологически активного вещества в масле подтверждает его нестабильность. Качество масла можно установить по внешнему виду. Тем не менее, иногда, внешний вид изменений не претерпевает, но при исследовании обнаруживаются примеси продуктов окисления, отличающиеся токсичностью или иной направленностью фармакологического действия. В связи с этим, особенно актуальны проблемы стандартизации РМ и МЭ, изучения их стабильности и сроков годности по содержанию в них основных фармакологически активных веществ.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью диссертационной работы является разработка системного подхода к комплексной оценке качества и стандартизации растительных масел и масляных экстрактов, представленных на российском фармацевгаческом рынке, по содержанию биологически акшвных веществ, а также исследование их стабильности в процессе хранения.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- исследовать и оценить физико-химические показатели качества изучаемых РМ и МЭ в соответствии с требованиями общей фармакопейной статьи ГФ X «Масла жирные», Европейской Фармакопеи 6.0 и ГОСТов на пищевые РМ;

- разработать методику экспресс-идентификации РМ и МЭ;

- определить содержание БАВ в РМ и МЭ для оценки перспективности их применения в медицинской практике;

- исследовать БАВ масел и их стабильность при хранении;

- изучить динамику изменения качества липцдного комплекса масел в процессе хранения;

- изучить зависимость регенерирующей активности масел от срока их хранения в эксперименте на лабораторных животных;

- на основании полученных данных обосновать несоответствие рекомендуемых производителями сроков годности исследуемых РМ и МЭ с позиции фармакогерапевтической эффективности.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Теоретически обоснован и экспериментально показан новый подход к стандартизации РМ и МЭ, применяемых в фармации. Впервые проведен контроль качества РМ и МЭ по всем физико-химическим показателям НД (кислотное, йодное, пе-рекисное, цветовое, эфирное числа, показатель преломления, степень чистоты, значения индексов окисленности и др.).

Экспериментально установлено снижение качества липвдного комплекса масел и МЭ в процессе хранения.

Разработаны новые методики экспресс-анализа изученных РМ и МЭ, а также присутствующих в них БАВ в основе которых лежат современные физико-химические методы анализа, такие как высокоэффективная тонкослойная хроматография, УФ- и ИК-спектроскопия.

Предложено проводить оценку качества и стабильности РМ и МЭ по содержанию основных БАВ, обусловливающих их фармакологическую активность, таких как токоферолы и каротиноиды. Проведена сравнительная оценка хроматографиче-ских и спектральных методов, позволяющих проводить контроль содержания БАВ, в частности, токоферолов и каротиноидов, в РМ и МЭ.

Установлены причинно-следственные связи между содержанием БАВ в маслах и стабильностью масел при хранении.

Показана возможность использования сорбционных и спектральных методов для определения и контроля стабильности токоферолов, каротиноидов и полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) в маслах.

Выявлена зависимость регенерирующей активности масел в эксперименте на модели ожоговой раны лабораторных животных от срока их хранения.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Изучена стабильность РМ и МЭ при хранении в режиме реального времени по таким параметрам как физико-химические показатели качества, содержание действующих БАВ и фармакологическая активность.

Полученные данные позволяют сделать вывод о несоответствии заявленных сроков годности масел (18 или 24 мес.) требованиям их эффективности и безопас-

ности. Уже через 9 мес. хранения масла становятся непригодными для использования, так как установлено, что на данный период происходит полное расходование токоферолов на ингибирование процессов окисления. Масла при этом не только теряют свои фармакотерапевтические свойства, но и приобретают негативный эффект в виду содержания в них продуктов окисления липидов и БАБ, являющихся их фармакологическими антагонистами.

Предложенные способы идентификации и количественного содержания основных БАВ масел могут быть использованы на фармацевтических и пищевых предприятиях для анализа РМ и лечебно-профилактических препаратов на их основе, а также в центрах контроля качества и сертификации ЛС для выявления недоброкачественной и/или фальсифицированной продукции.

На основании проведенных исследований, считаем, что сроки хранения изученных жирных РМ и МЭ, применяемых в фармации, должны быть пересмотрены и экспериментально установлены для каждого конкретного образца.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

Проведено внедрение разработанной методики определения каротиноидного состава РМ и МЭ на предприятии ООО «Русская Олива» (Акт внедрения от 02.02.2009 г.); методических рекомендаций по идентификации РМ и МЭ методом тонкослойной хроматографии на кафедре технологии хлебопекарного, макаронного и кондитерского производств Воронежской государственной технологической академии (Акт внедрения от 20.01.2009 г.); методических рекомендаций по определению Р-каротина в РМ и МЭ методом тонкослойной хроматографии на кафедре аналитической химии Химического факультета Воронежского Госуниверситета (Акт внедрения от 20.12.2008 г.); разработанной методики идентификации и количественного определения токоферолов в РМ и МЭ при проведении учебных и научно-исследовательских работ по стандартизации и оценке качества ЛП витамина Е в курсе «Фармацевтическая химия», в курсе «Фармакогнозия» на Фармацевтическом факультете Воронежского Госуниверситета (Акт внедрения от 10.11.2008 г.).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ НА ЗАЩИТУ

- результаты определения основных физико-химических показателей качества исследуемых РМ и МЭ при хранении в режиме реального времени;

- изучение стабильности БАВ РМ и МЭ методом ИК - спектроскопии;

- методика идентификации РМ и МЭ методом ТСХ;

- динамика изменения качества липидного комплекса масел в процессе хранения;

- выбор оптимальных параметров для определения токоферолов в тонком слое сорбента и разработка методики количественного определения токоферолов;

- определение каротиноидов в РМ и МЭ и их стабильности при хранении;

- результаты изучения зависимости регенераторных свойств РМ (на примере облепихового масла) в эксперименте в зависимости от срока его хранения.

АПРОБАЦИЯ РАБОТ

Основные результаты исследования доложены на:

- VII Международной Научно-практической конференции «Здоровье и образова-

ние в XXI веке» (г. Москва, 2006 г.);

- 3-ей Всероссийской Научно-методической конференции «Фармобразованис-

2007» (г. Воронеж);

- XIV национального конгресса «Человек и лекарство» (г. Москва, 2007 г.);

- Межрегиональной Научно-методической конференции «Проблемы здоровъяс-

бережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и

фармации» (г. Воронеж, 2008 г.);

- Международной конференции «Фармация и общественное здоровье» (г. Екате-

ринбург, 2008 г.);

- Всероссийской научно-практической конференции «Фармация из века в век.

Анализ и стандартизация лекарственных средств» (г. Санкт-Петербург, 2008

г.);

- IX Международной Научно-практической конференции «Здоровье и образова-

ние в XXI веке» (г. Москва, 2008 г.).

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 16 работ, в том числе 7 статей, из них 5 в журналах, входящих в список ВАК, а также 9 тезисов докладов.

Диссертация изложена на 200 страницах машинописного текста, содержит 51 рисунок, 54 таблицы и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, общих выводов, библиографического указателя, включающего 240 источников и 3 Приложений.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования явились образцы жирных масел плодов облепихи (Hip-pophae rhamnoides), плодов шиповника (Rosa cinnamonea) и масла виноградной косточки (Vitis vinifera); а также масляные экстракты цветков ромашки (Matricaria Cham от ilia), календулы (Calendula officinalis), листьев крапивы (Urtica dioica), травы череды (Bidens triportita) и тысячелистника (Achillia Millifolium) различных отечественных производителей.

В качестве стандартов использовали спиртовые и хлороформенные растворы а-токоферола и Р-каротина фирмы «ICN Biomedical» (США), степень чистоты более 97%.

Физико-химические показатели качества и степени чистоты исследуемых объектов определяли по методикам ГФ XI изд., Европейской Фармакопеи 6.0 и ГОСТам, регламентирующим качество пищевых РМ. Определение запаха, цвета и прозрачности проводилось по ГОСТ 5472-50; кислотное число (КЧ) - ГФ XI изд. и ГОСТ 5476-80; цветное число (ЦЧ) — ГОСТ 5477-93; содержание влаги и летучих веществ - ГФ XI и ГОСТ 11812-66; показатель преломления (ПП) - ГОСТ 5482-90; перекисное число (ПЧ) - ГОСТ 26593-85; йодное число (ЙЧ) - ГФ XI и ГОСТ Р 51.487-99; число омыления (ЧО) - ГФ XI и ГОСТ 5478-90; эфирное число (ЭЧ) - ГФ XI. Наличие мыла, воска, парафина и смоляных кислот определяли по ГФ X изд. и ГОСТ 5480-59.

Определение качества липидного комплекса РМ и МЭ в процессе хранения проводили методом СФ в УФ-области спектра с помощью расчета индексов окис-ленности и удельных показателей поглощения.

Изучение БАВ РМ и МЭ методом ИКС осуществляли на ИК — спектрометре с Фурье-преобразованием «Vertex 70» (Германия) с приставкой полного отражения и

последующей обработкой программой OMNIC или GRAMS 4/32 в диапазоне средних частот 400 - 4000 см"1, используя методику «раздавленной капли» образца между двумя монокристаллическими кремниевыми пластинами. ИК-спектры экспериментально полученного токоферилхинона и токоферилхинона, выделенного из масел после 9 мес. их хранения снимали, используя методику получения тонких пленок на монокристаллических кремниевых пластинках из легколетучих растворителей (CHCL3).

Количественное определение а-токоферола методом ТСХ проводили денси-тометрическим сканированием на сканере EPSON PERFECTION 2480 PHOTO фирмы Cannon (Китай) и компьютерным сканированием на ПК с использованием программы «Sorbfil Videodensitometer» (РФ).

Определение содержания каротиноидов. Содержание суммы каротиноидов в пересчете на ß-каротин проводили методом СФ в видимой области спектра по ФС 423873-99. Изучение каротиноидного состава проводили методом ТСХ.

Лабораторные исследования зависимости регенераторных свойств облепихо-вого масла в эксперименте от срока его хранения проведены на белых беспородных крысах самцах и самках общим количеством 28 голов массой тела 250-300 г.

Статистическую обработку результатов проводили по программе «Statistica 6.0» и ГФ XI

изд.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В ходе экспериментальных исследований, показан новый подход к стандартизации РМ и МЭ, применяемых в фармации. Проведена оценка качества РМ и МЭ по всем физико-химическим показателям, рекомендованным НД. Предложено контролировать качество и стабильность РМ и МЭ по содержанию основных БАВ, обусловливающих их фармакологическую активность.

Исследование качества, а также стабильности масел и МЭ проводилось по следующим параметрам: определение органолептических характеристик, физических констант, химических показателей качества; установление степени чистоты; содержание БАВ; а также оценка регенераторных свойств масел.

1. Определение общих физико-химических показателей качества РМ и МЭ при хранении.

К основным физико-химическим показателям качества масел относятся такие параметры как pH среды, КЧ, ЙЧ, ПЧ, ЦЧ, ЧО, ЭЧ и значение ПП. Данные показатели регламентируются действующей НД - ГФ X, XI изд., Европейской Фармакопеей 6.0 и соответствующими ГОСТами на пищевые РМ.

Установлено, что органолептические показатели РМ и МЭ в течение 9 мес. хранения соответствуют требованиям НД. Данный факт говорит о необходимости контролировать качество РМ и МЭ по содержанию действующих БАВ, обусловливающих их фармакотерапевтическую активность. Только через 18 мес. хранения у исследуемых объектов отмечался горьковатый вкус и неприятный запах (время истечения срока годности по данным информации на упаковке).

Физико-химические показатели качества исследуемых РМ и МЭ оценивались через 3, 6 и 9 мес. хранения исследуемых объектов. Результаты представлены в табл. 1-3.

КЧ с течением времени незначительно увеличивается, но значение данного показателя при хранении до 9 мес. соответствует требованиям НД Значение рН остается в пределах 6,07,0.40 и взаимосвязанное с ним ЭЧ постепенно снижаются. Эти показатели на данном этапе хранения также соответствуют требованиям НД.

Величина ИЧ в настоящее время практически не нормируется в соответствующих ФС, ФСП, ТУ и ГОСТах на изучаемые масла Это связано с тем, что ИЧ является условной величиной, характеризующей содержание непредельных соединений в 100 г РМ, и определяется качеством и количеством ПНЖК для каждого конкретного образца масла. По величине ИЧ можно легко установить, к какой группе по степени высыхаемосги относится то или иное масло. Из значений полученных показателей (табл 1), в соответствии с данными литературы, можно сделать вывод о том, что исследуемые РМ и МЭ относятся к невысыхающим маслам (тип олеиновой кислоты), а значит, они могут быть использованы в качестве вспомогательных веществ для приготовления инъекционных расгвороа Они содержат, в основном, насыщенные ЖК или ЖК с мальм количеством двойных связей, таких как лауриловая, стеариновая, пальмитиновая и олеиновая.

Таблица 1

Физико-химические показатели качества исследуемых

Физико-химические показатели качества

№ Исследуемое ПЧ йч; г/100г ЦЧ, мг I

п/п РМилиМЭ ПП ммоль/кг 'АО %1

1 Облепиховое масло 1,4750 ±0,0001 7,05 0,09±0,002 45,57±0,2 Более 100

2 Масло шиповника 1,4765 ±0,0002 33,63 0,43±0,01 54,28*1,09 Более 100

3 Масло виноградной косточки 1,4750 ±0,0001 31,41 0,40±0,008 46,24±0,19 -

4 МЭ цветков ромашки 1,4753 ±0,0001 22,57 0,29±0,006 66,50±2,73 20

5 МЭ цветков календулы 1,4749 ±0,0001 16,35 0,21±0,004 53,45±0,3 30

6 МЭ листьев крапивы 1,4750 ±0,0001 18,26 0,23±0,005 47,38*1,94 30

7 МЭ травы тысячелистника 1,4746 ±0,0002 13,01 0,17±0,003 48,00*1,97 10

8 МЭ травы череды 1,4754 ±0,0001 15,91 0,21±0,004 51,41*2,11 15

ПЧ характеризует содержание перекисных соединений (активного кислорода). Обнаружено, что содержание первичных продуктов окисления — гцдропероксидов через 3 мес. хранения не превышает установленные нормы для пищевых масел (не более 0,5 % I).

Таблица2

Физико-химические показатели качества исследуемых

Физико-химические показатели качества

№ Исследуемое ПЧ ЙЧ, г/100г ЦЧ, мг I

п/п РМилиМЭ ПП ммоль/кг 'АО %1

1 Облепиховое масло 1,4746 ±0,0001 34,02 0,44±0,003 44,13±0,22 Более 100

2 Масло шиповника 1,4759 ±0,0002 64,58 0,83±0,021 53,01±1,06 Более 100

3 Масло виноградной косточки 1,4749 ±0,0001 35,124 0,45±0,019 45,73±0,183 -

4 МЭ цветков ромашки 1,4752 ±0,0001 45,62 0,585±0,014 52,80±0,21 20

5 МЭ цветков календулы 1,4744 ±0,0001 43,92 0,565±0,021 45,75±0,29 30

6 МЭ листьев крапивы 1,4749 ±0,0001 43,95 0,563±0,014 44,09±0,19 30

7 МЭ травы тысячелистника 1,4744 ±0,0002 64,59 0,83±0,04 44,07±0,176 10

8 МЭ травы череды 1,4754 ±0,0001 40,30 0,52±0,026 49,54±1,06 15

Физико-химические показатели качества исследуемых РМ и МЭ через 9 мес. хранения

Таблица 3

Физико-химические показатели качества

№ Исследуемое ПЧ ЙЧ, г/100г ЦЧ, мг I

п/п РМилиМЭ ПП ммоль/кг 'АО %1

1 2 3 4 5 6 7

1 Облепиховое масло 1,4740 ±0,0001 52,00 0,67±0,005 42,68±0,19 Более 100

2 Масло шиповника 1,4751 ±0,0002 85,21 1,09±0,027 51,73±0,21 Более 100

3 Масло виноградной косточки 1,4749 ±0,0001 37,60 0,48±0,02 45Д2±0,12 -

4 МЭ цветков ромашки 1,4752 ±0,0001 60,98 0,78±0,019 39,09±0,16 15

5 МЭ цветков календулы 1,4739 ±0,0001 62,30 0,80±0,03 38,04±0,15 20

1 2 3 4 5 6 7

6 МЭ листьев крапивы 1,4749 ±0,0001 61,07 0,78±0,02 40,80±0,16 25

7 МЭ травы тысячелистника 1,4741 ±0,0002 98,98 1,27±0,06 40,14±0,16 10

8 МЭ травы череды 1,4754 ±0,0001 56,56 0,73±0,036 47,67±0,19 10

Величина ПЧ значительно возрастает в процессе хранения РМ и МЭ свыше 3 мес. Интенсивные процессы перекисного окисления могут приводить к снижению содержания основных БАВ масел, таких как токоферолы, каротиноиды, фосфолипцды и др. Такое количество перекисей может не только снизить фармакотерапевтический эффект исследуемых РМ и МЭ, но и служить причиной возникновения негативных побочных явлений от их применения.

Установлено, что ЦЧ исследуемых объектов при хранении до 9 мес. снижается. Следовательно, снижение качества пигментного комплекса изучаемых объектов связано с уменьшением содержания БАВ, обусловливающих их окраску (каротиноиды, хлорофиллы и др.), что происходит вследствие окислительных процессов, протекающих в маслах при хранении.

В результате установлено, что изучаемые РМ и МЭ через 3 мес. хранения по основным физико-химическим показателям соответствует требованиям ГФ X изд. и другим НД, регламентирующим качество жирных РМ. Через 6 мес. хранения по величине ПЧ только облепиховое масло и масло виноградной косточки соответствовали требованиям НД (не более 0,5 % I, табл. 2), а через 9 мес. — значение ПЧ (табл. 3) всех изучаемых объектов превышало допустимый предел для пищевых масел (кроме масла виноградной косточки).

2. Изучение стабильности растительных масел и масляных экстрактов методом УФ-спектрофотометрии.

УФ-спектр РМ позволяет рассчитать очень важный параметр - индекс окисленности (ИО), который характеризует качество липидного комплекса масла Данный параметр отражает накопление суммы продуктов перекисного окисления жирнокислотных остатков липи-дов. Спектральные характеристики спиртовых растворов изучаемых РМ и МЭ были проанализированы через 3, 6 и 9 мес. хранения в режиме реального времени. Результаты расчета ИО через 3,6 и 9 мес. хранения приведены в табл. 4.

Для оценки накопления конъюгагов гидропероксидов рассчитывали показатель удельного поглощения (Е 1%1СМ) веществ при >„=232 нм. Для оценки накопления продуктов более глубокого окисления липидов - кетодиенов проводили определение Е 1%1„, при А.=270 нм. Результаты расчета Е 1%1а, через 3,6 и 9 мес. хранения представлены в табл. 5.

Наибольшая интенсивность процессов ПОЛ (9 мес. хранения) характерна для МЭ травы тысячелистника (табл. 4-5). Наименьшее накопление гидропероксидов ЖК наблюдается для РМ виноградной косточки и МЭ травы череды. Данный факт может быть связан со значительным количеством в РМ и МЭ токоферолов (Змее, хранения, табл. 10).

Молекулы витамина Е способны образовывать устойчивые свободные радикалы в результате отщепления протона от ОН-группы, нейтрализуя разрушающее действие органических пероксидов.

Таблица 4

Значение ИО для исследуемых РМ и МЭ через 3,6 и 9 мес. хранения

№ п/п РМилиМЭ ИО А232/ Агю ИО А233/ А215 ИО А232 / А270

3 мес. 6 мес. 9 мес. 3 мес. 6 мес. 9 мес. 3 мес. 6 мес. 9 мес.

1 Облепиховое масло 0,48 0,685 0,89 0,54 0,72 0,9 2,753 3,61 4,46

2 Масло шиповника 0,64 0,78 0,91 0,53 0,75 0,93 2,310 4,0 5,6

3 Масло виноградной косточки 0,63 0,68 0,78 0,413 0,60 0,78 1,826 2,21 2,59

4 МЭ цветков ромашки 0,485 0,60 0,70 0,49 0,63 0,77 1,720 3,12 4,52

5 МЭ листьев крапивы 0,47 0,62 0,74 0,434 0,61 0,78 1,727 2,73 3,72

6 МЭ травы тысячелистника 0,54 0,80 0,94 0,43 0,80 1,03 2,842 5,30 9,49

7 МЭ травы череды 0,486 0,583 0,68 0,385 0,60 0,8 1,844 3,0 4,15

8 МЭ цветков календулы 0,442 0,57 0,68 0,49 0,64 0,78 1,930 3,15 4,33

Таблица 5

Значение Е 1%1о, для изучаемых РМ и МЭ через 3,6 и 9 мес. хранения

№ п/п Изучаемое РМилиМЭ Е "1см при >„=232 нм Е 1%1а< при Х.=270 нм

3 мес. 6 мес. 9 мес. 3 мес. 6 мес. 9 мес.

1 2 3 4 5 6 7 8

1 Облепиховое масло 6,80 11,56 16,35 2,47 3,07 3,67

2 Масло шиповника 6,00 10,00 14,12 2,60 2,56 2,52

3 Масло виноградной косточки 4,20 8,60 13,01 2,30 3,42 4,53

4 МЭ цветков ромашки 4,30 6,53 8,36 2,50 2,18 1,85

5 МЭ листьев крапивы 3,80 6,26 8,71 2,20 2,27 2,34

6 МЭ травы тысячелистника 5,40 11,18 16,95 1,90 1,79 1,68

1 2 3 4 5 6 7 8

7 МЭ травы 5,90 6,69 7,48 3,20 2,51 1,81

череды

8 МЭ цветков 5,50 7,80 10,1 2,85 2,60 2,33

календулы

Кроме того, возможное присутствие в данных объектах каротиноидов, обладающих антиоксидантной активностью, действуя в синергизме с витамином Е, препятствует развитию цепочки каскадных свободнорадикальных реакций ПОЛ.

Из данных табл. 4 и 5 следует, что через 9 мес. хранения исследуемые масла накапливают значительное количество продуктов ПОЛ. Интенсивнее протекают процессы первичного окисления липидов. Содержание кетодиенов в изучаемых маслах практически не увеличивается. Более наглядно данные процессы отражены на диаграммах изменения спектральных характеристик спиртовых растворов РМ и МЭ при хранении (рис. 1, 2).

Таким образом, в результате проведенных исследований, было изучено изменение спектральных характеристик спиртовых растворов исследуемых РМ и МЭ при хранении, и установлено, что в режиме реального времени, качество липидного комплекса масел снижается. Вышеперечисленные параметры РМ и МЭ значительно увеличиваются при хранении до 9 мес., что свидетельствует о накоплении продуктов первичного и вторичного окисления липидов.

а> <ч

£25

?я

(О < I •—'

о о

С <и ■- 5 =г = О "

«в >х го

^ о ^

х X X

А г сс X X

00 н го ас со

ГО о. т о

о. О с

н с о X

О О) У X X о о 3

г в; о ш 2

3 г о_

н О-

] 3 месяца хранения

19 месяцев хранения

Е " £

Объект исследования

Рис. 1. Диаграмма изменения значений ИО (А233/А215) РМ и МЭ при хранении

□ 3 месяца хранения

■ 9 месяцев хранения

Рис. 2. Диаграмма изменения значений ИО (А2з2/А270) РМ и МЭ при хранении

3. Определение БАВ и их стабильности в РМ и МЭ при хранении.

Согласно действующей НД, содержание в маслах основных БАВ таких, как токоферолы и каротиноиды в настоящее время не нормируется. Однако, именно они обусловливают их пищевую ценность и терапевтическую эффективность. Следовательно, чрезвычайно актуальной задачей в фармации является разработка и внедрение методов стандартизации РМ и МЭ по содержанию БАВ. Важной проблемой является также сохранение качества и количества БАВ в маслах при хранении.

3.1. Определение содержания каротиноидов и изучение их стабильности при хранении в РМ и МЭ методом спектрофотометрии в видимой области.

Контроль над суммарным содержанием каротиноидов принято осуществлять с использованием спектрофотометрии в видимой области спектра. В целях изучения стабильности каротиноидов в исследуемых РМ и МЭ, определение р-каротина проводили через 3, 6 и 9 мес. хранения. В МЭ травы тысячелистника и цветков ромашки через 3 мес. хранения каротиноиды не обнаружены. Результаты определения представлены в табл. 6. Через 6 мес. хранения содержание суммы каротиноидов в РМ облепихи и шиповника снизилось (табл. 6), а в РМ виноградной косточки обнаружено не было. Только в МЭ цветков календулы через 6 мес. хранения присутствовали данные соединения.

Установлено, что по прошествии 9 мес. во всех МЭ, а также в РМ виноградной косточки Р-каротин не обнаружен. Как видно из табл. 6, количество каротиноидов в маслах облепихи и шиповника уменьшилось через 9 мес. хранения. Установлено, что более интенсивное снижение Р-каротина за 6 мес. хранения (с 3 до 9 мес.) происходит в масле шиповника (на 29,2 мг %), чем в масле облепихи (на 16,62 мг %). Ранее было показано (табл. 3), что, для данных двух масел, большее накопление пере-

а.

Объект исследования

кисных соединений за изучаемый период времени характерно для масла шиповника (85,21 ммоль/кг Уг О), чем для масла облепихи (52,0 ммоль/кг '/г О).

Таблица 6

Содержание суммы каротиноидов (мг%) в пересчете на р-каротин

№ п/п РМ или МЭ 3 мес. 6 мес. 9 мес.

1 Масло виноградной косточки 3,93±0,02 - -

2 Облепиховое масло 213,72±3,57 205,41±2,70 197,1±1,92

3 Масло шиповника 85,ЗОЙ),55 78,43±1,03 56,1±1,91

4 МЭ листьев крапивы 5,99±0,03 - -

5 МЭ цветков календулы 8,56±1,12 3,89±0,54 -

6 МЭ травы череды 4,20±0,64 - -

Снижение содержания БАВ связано с накоплением агрессивных форм кислорода в маслах. В частности, система сопряженных двойных связей в молекуле Р-каротина разрушается в результате свободнорадикального окисления, вследствие чего происходит потеря его фармакологической активности.

3.2. Разработка методики определения каротиноидов методом ТСХ.

Спектрофотометрия в видимой области позволяет установить только суммарное содержание каротиноидов без достоверной информации о присутствии индивидуальных веществ данной группы БАВ. Актуальным является разработка методик определения Р-каротина, как наиболее фармакологически активного вещества группы каротиноидов, присутствующих в маслах. В ВГУ разработана экспресс-методика определения Р-каротина методом ТСХ на стандартном растворе Р-каротина в хлороформе (1 мг/мл).

Было проведено исследование нескольких элюирующих систем в широком диапазоне полярности элюента. Для каждой подвижной фазы были рассчитаны полярность (Р'); относительная скорость перемещения Р-каротина (величина Яг); коэффициенты распределения (К); высота, эквивалентная теоретической тарелке (Н); число теоретических тарелок (N1). Полученные результаты представлены в табл. 7, из которых следует, что оптимальные величины Яг (0,3 — 0,6) получены в системах № 6 и 7; N - в системах № 4 и 5; Н - в системах № 4 и 5. Эффективность хроматографиче-ского процесса достигается при использовании упомянутых выше составов элюен-тов. Однако, только в системе № 7 зоны имели округлую форму, что свидетельствует о линейной изотерме сорбции Р-каротина в данных условиях. В результате, по совокупности полученных параметров и качеству хроматографической картины для определения Р-каротина в тонком слое сорбента была выбрана система № 7.

Таблица 7

Хроматографические параметры Р-каротина в различных

№ п/п Элюент Кг Н, мм N К Р'

1 Хлороформ 0,98±0,01 0,95 103,2 0,01 4,40

2 Гексан — хлороформ (2:1) 0,98±0,01 1,15 76,5 0,01 1,47

3 Гексан - бензол (1:1) 0,95±0,01 1,513 55,54 0,05 1,50

4 Гексан - бензол (9:1) 0,74±0,02 0,28 275 0,35 0,3

5 Гексан - бензол (14:1) 0,69±0,02 0,43 193,02 0,45 0,20

6 Гексан — бензол (19:1) 0,575±0,01 0,783 102,17 0,754 0,15

7 Гексан - бензол (29:1) 0,376±0,01 0,78 108,97 1,703 0,10

8 Гексан 0,193±0,01 0,94 93,62 4,58 0

При детальном изучении влияния полярности системы на величину был выбран интервал значений полярности элюента (от 0 до 0,2 ед.), в котором наблюдалась линейная зависимость (|г| = 0,9864) относительной скорости перемещения вещества от величины полярности подвижной фазы (рис. 3). Уравнения линейной зависимости приведено на рис. 3.

С помощью предложенной зависимости можно подбирать различные системы для определения Р-каротина в тонком слое сорбента, чтобы величина Г^ укладывалась в оптимальные значения. Таким образом, интервал полярностей элюента может варьировать от 0,05 до 0,168.

Р' системы

Рис. 3. Линейная зависимость величины Ясот значения полярности элюента (Р')

Разработанная методика экспресс идентификации Р-каротина была апробирована на РМ, богатых каротиноидами, таких как масло шиповника и масло облепихи.

15

В описанных выше условиях осуществляли хроматографирование растворов изучаемых объектов объемом 5 мкл в хроматографической системе № 7 (табл. 7). Полученная хроматограмма представлена на рис. 4.

I

1 2 3

Рис. 4. Вид хроматограммы растворов РМ: точка 1 - РМ плодов облепихи; точка 2 - РМ шиповника; точка 3 - раствор р-каротина с содержанием 1 мг/мл.

Данные хроматограммы показывают, что кроме зоны (3-каротина, идентифицированной по величине Г^, обнаружены и другие хроматографические зоны каро-тиноидов (табл. 8).

Полученные результаты дают основание утверждать, что изучаемые РМ имеют различный каротиноидный состав. В использованной элюирующей системе наблюдается удовлетворительное разделение хроматографических зон каротиноидов, так как значение селективности сорбции (Ь) больше единицы (табл. 8).

Таблица 8

Идентификация (3-каротина и параметры хроматографического

№ пятна | Величина | К | Ь = К^/Кг

Облепиховое масло (точка 1)

-каротин 0,37±0,01 1,703 2,35 1,86 2,6

2 0,58±0,01 0,724

о -Э 0,72±0,01 0,39

4 0,87±0,001 0,15

Масло шиповника (точка 2)

1 - Р-каротин 0,36±0,005 1,78 1,78 4,00

2 0,5±0,02 1,00

-> 0,8±0,02 0,25

Разработанный способ определения каротиноидов методом ТСХ имеет преимущества по сравнению с методикой идентификации этих веществ, рекомендованной существующей НД, с использованием спектрофотометрии в видимой области, которая позволяет определять только суммарное содержание каротиноидов в маслах. Предложенная методика, позволяет установить количество отдельных веществ этого класса (рис. 4). Разработанная методика может найти применение для анализа РМ на предмет фальсификации и каротиноидного состава.

3.3. Определение токоферолов и их стабильности в РМ и МЭ при хранении.

Практически все жирные РМ и МЭ содержат токоферолы. Учитывая полезные фармакологические свойства токоферолов, весьма аюуальной является задача выделения и анализа этой группы веществ. Значительные трудности в решении данного вопроса сопряжены со сложностью структуры и состава витамина Е и его малым содержанием в исследуемых объектах. При определении токоферолов методом ТСХ, оптимальные условия хроматографирования подбирались экспериментально. Наибольшее влияние на поведение веществ в тонком слое сорбента оказывает растворитель, в связи, с чем была проведена работа по подбору элюентов для определения токоферолов (табл. 9).

Таблица 9

Хроматографические параметры а-токоферола в различных элюирующих системах

№ п/п Элюент й Н, мм N К Р'

1 Хлороформ-этанол (3:1) 0,97±0,01 0,37 192 0,03 4,15

2 Хлороформ-этанол (2:1) 0,95±0,01 0,23 330 0,05 4,16

3 Хлороформ-этанол (1:1) 0,94±0,01 0,32 256 0,06 4,2

4 Хлороформ 0,59±0,02 0,55 156 0,69 4,1

5 Бензол-этил ацетат (8:2) 0,85±0,02 0,98 80 0,18 3,26

6 Бензол-петролейный эфир (1 : 1) 0,80±0,02 0,78 106 0,25 3,36

7 Гексан-этилацетат (37:3) 0,29±0,02 0,34 253 2,45 0,48

8 Октан-диэтиловый эфир (7:1) 0,30±0,02 0,59 140 2,33 0,44

На хроматограммах для каждой элюирующей системы были рассчитаны полярность; величины Я/; коэффициенты распределения; высота, эквивалентная теоретической тарелке; число теоретических тарелок. Полученные результаты представлены в табл. 9, из данных которой следует, что самые высокие величины Ы, а, следовательно, наибольшая эффективность наблюдается в системах № 2,3 и 7, а наименьшая эффективность - в системе № 5. Оптимальные величины достигнуты в

системах № 4,7 и 8. В системах № 2,3 и 7, хотя величины N имеют большее значение, чем в № 4 и № 8, качество зон на хроматограммах значительно хуже, и, следовательно, затруднена их обработка.

Лучшее качество хроматографических зон было достигнуто в однокомпонентной системе № 4. В данной системе хроматографические зоны имеют округлую форму, что . свидетельствует о линейной изотерме сорбции. В результате проведенного исследова- 1 ния были выбраны и обоснованы условия определения а-токоферола в тонком слое j сорбента. Хроматографирование можно проводить в системах № 4,7 и 8. Для коли- I чественной обработки хроматограмм методом компьютерного сканирования целесообразно применять систему № 4.

В описанных выше условиях были прохроматографированы стандартные растворы а-токоферола (рис. 5) в элюирующей системе № 4.

Сразу после проявления, хроматографические зоны сканировались с помощью планшетного сканера EPSON PERFECTION 2480 PHOTO, а полученные изображения (рис. 5) об-работывались с использованием компьютерной программы «Sorbfil Videodensitometer». В результате получена линейная зависимость между концентрацией а-токоферола и интенсивностью окраски хроматографической зоны в изучаемом диапазоне концентраций (0,03 - 5,0 %). Уравнение градуировочного графика S = 47,99с + 8,6422, где С = S — 8,6422 / 47,99. С помощью полученной зависимости определялось содержание а-токоферола в изучаемых объектах. Результаты представлены в табл. 10.

1 2 3 4 5 6

Рис. 5. Калибровочная хроматограмма с серией стандартных растворов а-токоферола (с = 0,3 - 5%). 1 - 0,3%; 2 - 0,5%; 3 - 0,75%; 4 - 1,5%; 5 - 3%; 6 - 5%.

МЭ травы тысячелистника содержит незначительное количество токоферолов (0,047 % - 3 мес. хранения), а каротиноиды в нем не обнаружены (табл. 6), в результате чего перекисное окисление жирнокислотных остатков липидов в данном МЭ протекает с большей интенсивностью (табл. 4, 5).

С помощью разработанной методики установлено, что через 6 мес. хранения в МЭ цветков календулы, листьев крапивы и травы тысячелистника витамин Е обна-

18

ружен не был, что может быть связано с окислительными процессами, происходящими в маслах при хранении.

Таблица 10

Содержание токоферолов в РМ и МЭ через 3 и 6 мес. хранения

№ п/п РМ или МЭ Содержание токоферолов в РМ и МЭ, %

3 мес. 6 мес.

1 Масло виноградной косточки 0,383±0,027 0,192±0,014

2 МЭ цветков календулы менее 0,030 -

3 МЭ листьев крапивы менее 0,030 -

4 Облепиховое масло 0,086±0,006 0,034±0,002

5 МЭ цветков ромашки 0,223±0,016 0,090±0,006

6 МЭ трава тысячелистника 0,047±0,003 -

7 МЭ трава череды 0,255±0,018 0,102±0,007

8 Масло шиповника 0,450±0,032 0,135±0,010

Таким образом, разработана экономичная и экспрессная методика количественной интерпретации данных ВЭТСХ на офисном компьютере.

Экспериментально было установлено снижение содержания токоферолов в РМ и МЭ через 6 мес. хранения или их отсутствие в некоторых изучаемых объектах (табл. 10). С учетом наличия большого количества литературных источников, свидетельствующих о высокой лабильности витамина Е, необходимо было оценить стабильность токоферолов в РМ и МЭ при хранении. Изучаемые объекты хранились в течении 9 мес. в режиме реального времени. Параллельно в аналогичных условиях хранили стандартный раствор а-токоферола По истечении указанного срока были получены хроматограм-мы стандартного раствора а-токоферола и исследуемых РМ и МЭ. В результате установлено, что значение Яг изменилось с 0,59±0,02 до 0,83±0,02. Было сделано предположение о том, что исследуемые объекты с течением времени подверглись окислительным реакциям, в результате чего образовался о-токоферилхинон. Затем проводили хроматографиро-вание раствора токоферилхинона, экспериментально полученного из стандартного образца а-токоферола. Полученные хроматограммы свидетельствуют о том, что при хранении в маслах образуется о-токоферилхинон.

Таким образом несмотря на то, что заявленные сроки хранения исследуемых РМ и МЭ составляют от 12 до 24 мес., уже через 9 мес. хранения они становятся непригодными для использования, так как после полного расходования токоферола на ингибирова-ние процессов окисления, масла теряют свои биологические свойства. Более того, они не только не обладают фармакологической активностью, но и приобретают негативный эффект, обусловленный образованием »-токоферилхинона, являющегося биологическим антагонистом а-токоферола

4. Изучение БАВ РМ и МЭ методом ИК - спектроскопии.

Изучение структуры БАВ в РМ и МЭ проводилось с использованием ИК-спектроскопии в диапазоне средних частот 4000 — 400 см'1.

В ИК-спектрах наибольшей интенсивностью характеризуются полосы различных триглицеридов РМ, имеющих в своем составе хромофорные группы, способные поглощать электромагнитное излучение света инфракрасного диапазона длин волн. Наличие таких связей, как -С-Н, -С=С-, =С - Н, -С=0, -О-Н и СОО- приводит к появлению соответствующих полос поглощения.

Большой интерес, на наш взгляд, представляет наличие на всех полученных ИК-спектрах изучаемых РМ и МЭ полос поглощения в диапазоне 3505-3472 см"1, характерных для колебаний —ОН групп в межмолекулярных водородных связях. Результаты расчета термодинамических характеристик Н-связи (Ен - энергия связи; R, А - длина связи) в маслах приведены в табл. 11.

Таблица 11

Термодинамические характеристики межмолекулярных водородных

связей в РМ и МЭ по данным ИКС

№ п/п РМ или МЭ Частота, см"1 Д у*** е„; r, а**

кДж/ моль ккал/ моль

1 МЭ листьев крапивы 3476 224 15,84 3,78 2,789

2 МЭ травы тысячелистника 3484 216 15,28 3,65 2,791

3 Облепиховое масло 3489 211 14,92 3,56 2,792

4 Масло шиповника 3491 209 14,78 3,53 2,793

5 МЭ травы череды 3505 195 13,79 3,29 2,80

6 Масло виноградной косточки 3505 195 13,79 3,29 2,80

7 МЭ цветков ромашки 3484 216 15,28 3,65 2,791

8 МЭ цветков календулы 3484 216 15,28 3,65 2,791

д v* * * - смещение частоты поглощения

Данные межмолекулярные водородные связи относятся к типу слабых, так как энергия их не превышает 5 ккал/моль, а длина более 2,7 А.

Нами было высказано предположение о том, что ассоциаты в РМ образуются за счет фенольных - ОН групп молекул а-токоферола. Для подтверждения этого был получен ИК-спектр стандартного образца а-токоферола в диапазоне средних частот 4000 - 400 см"1. Полоса поглощения при 3482 см"1 на ИК-спектре а-токоферола обусловлена валентными колебаниями фенольного гидроксила в межмолекулярных водородных связях. В случае фенолов, данные связи могут приводить к образованию цепей, димеров, колец или пространственных сеток. По данным ИКС, структурными единицами а-токоферола являются димеры с характерными частотами поглощения при 3650-3450 см"1, тогда как формирование полиассоциатов с участием фенольных

гидроксилов а-токоферола приводит к появлению широкой полосы в диапазоне 3400-3200 см'1. Модель взаимодействия двух молекул а-токоферола при образовании межмолекулярной водородной связи представлена на рис. 6.

HjC

енз

I

Н(НгС—ЕС—HjO—НгС)з—НгС HjC-

СНз

-СН,

С H2-(CHi-CH2-CH-CHj)jH СНз

Рис. 6. Модель взаимодействия двух молекул а-токоферола при образовании межмолекулярной водородной связи

С целью изучения стабильности витамина Е в РМ и МЭ при хранении и идентификации продукта его окислительного превращения, методом ИКС были изучены структурные изменения молекулы токоферола, выделенного из исследуемых РМ и МЭ через 9 мес. хранения. Для этого проводили сравнение полученного спектра то-коферилхинона, выделенного из масла, и о-токоферилхинона, экспериментально полученного из стандарта а-токоферола.

При сравнении ИК-спектров двух токоферилхинонов, наблюдается хорошее совпадение характеристических частот поглощения экспериментально полученного токоферилхинона из стандарта а-токоферола и токоферилхинона, выделенного из масла. Валентные колебания связи С=С ароматического ядра в диапазоне 1610-1580 см"1, характерные для всех гомологов витамина Е, отсутствуют в ИК-спектре токоферилхинона, выделенного из масел после 9 мес. их хранения. Небольшие различия в ИК-спектрах при 1171 и 1059 см"1 можно объяснить тем, что в маслах, как и в других биологических объектах, присутствует сумма гомологов витамина Е (а-,р-,у-,й-токоферолы и токотриенолы), которые окисляются с разрывом тетрагидропираново-го цикла и без, в результате чего образуются соответствующие о- и п-токоферилхиноны. Токоферилхинон, экспериментально полученный из стандартного образца а-токоферола, относится к о-изомеру (продукт окисления а-токоферола конц. азотной кислотой).

Таким образом, методом ИКС, подтверждено присутствие в маслах после 9 мес. хранения токоферилхинонов — антагонистов природного витамина Е. В результате проведенных исследований, впервые предлагаются критерии оценки качества РМ и МЭ по наличию в ИК-спектре полос поглощения в диапазонах частот 1 Hill 65 см"1 характерных для деформационных колебаний свободной ОН-группы фенола; и 3505-3476 см"1, обусловленных валентными колебаниями -ОН групп в межмолекулярных водородных связях, что объясняется присутствием токоферолов в маслах. При окислении витамина Е, происходит разрушение ассоциатов БАВ в маслах, так как токоферилхиноны в силу своей структуры не способны образовывать водородные связи.

Таким образом, было установлено, что химический состав масел претерпевает изменения в процессе хранения, что может сопровождаться потерей их фармакологической активности.

5. Изучение зависимости регенераторных свойств РМ на примере облепихового масла в эксперименте от срока его хранения.

Лабораторные исследования проводились на белых беспородных крысах общим количеством 28 голов массой тела 250-300 г. Исследования осуществлялись в 2 этапа.

С целью облегчения сравнения эффективности облепихового масла с различным сроком хранения, полученные данные представлены в виде сводной таблицы и графика (табл. 12, рис. 7).

На первом этапе исследований изучалась регенераторная активность облепихового масла (3 мес. хранения). Через две недели наблюдений выявлена положительная динамика заживления ожоговой раны, смоделированной по стандартной методике, на фоне применения облепихового масла (3 мес. хранения) - площадь контрольных участков сократилась на 45,8%, тогда как опытных на 54,7 % по отношению к исходным значениям, что на 9 % лучше по сравнению с контролем. При сравнении абсолютных величин на 14-й день площадь участков, обрабатываемых обле-пиховым маслом, являлась на 14,9 % меньшей (112,5±16,5мм2), чем участков заживающих самостоятельно (132,2±26,1мм2), что соответственно сопровождалось повышением степени заживления на 8,9 %.

Таким образом, установлено наличие регенераторных свойств облепихового масла (срок хранения 3 мес.).

На втором этапе исследований изучалась регенераторная активность облепихового масла (9 мес. хранения). Через 5 дней площадь контрольных участков сократилась на 17,5 %, тогда как поверхность повреждения в зоне опытных участков увеличилась на 9,0 % по отношению к исходным значениям, кроме того, площадь опытных участков превышала контрольные на 21,5 %. Те же тенденции сохранялись и на 9-й день исследования, площадь опытных участков превышала контроль на 18,8 %. Начиная с 5-го по 10 день наблюдений у 50,0 % животных в зоне ожогового некроза опытных участков были выявлены признаки воспаления - краевая гиперемия, отечность подлежащих тканей, глубокие трещины, гнойный экссудат. В области контрольных участков за данный период не было выявлено указанных патологических изменений. В связи с отсутствием положительной динамики заживления ожоговой раны на опытных участках эксперимент был прекращен на 14 день.

Таким образом, местное нанесение облепихового масла (9 мес. хранения) на поверхность экспериментального ожога приводит к ухудшению течения процессов регенерации в первые 10 дней, что сопровождается прогрессированием воспалительного процесса.

Анализ результатов свидетельствует, что применение облепихового масла (срок хранения 9 мес.) приводит к ухудшению заживления ожоговой раны на 22,0 % (5-7 день) и 21,6 % (9-12 день) при сравнении с маслом, срок хранения которого не превышает 3 мес.

Таблица 12

Сравнительная оценка регенераторных свойств облепихового масла в зависимости от срока хранения_

Показатель, группа Площадь ожога, %

1* 5* 9* 14* 21* 28*

Контрольная группа, степень заживления по разнице с исходным, % - +5,3 -24,3 -52,4 -83,0 -97,8

Облспнховое масло (3 мес. хранения)

Контрольные участки, степень заживления по разнице с исходным, % - -5,4 -23,7 -45,8 -84,3 -96,6

Опытные участки, степень заживления по разнице с исходным, % -0,9 -21,7 -54,7 -85,4 -95,9

Разница площади 01:чтные/контролы1ые участки, % +1,8 +2,9 +0,8 -14,9 -5,2 +22,9

Повышение (+) или снижение (-) степени заживления, разница опытные/контрольные по отношению к исходному, %

Опытные участки - ^.5 -2,0 +8,9 +0,7 -0,7

Облспиховое масло (9 мес. хранения)

Контрольные участки, степень заживления по разнице с исходным, % - -17,5 -18,9 -28,0 - -

Опытные участки, степень заживления по разнице с исходным, % - +9,0 +4,7 -38,5 - -

Разница площади опытные/ контрольные участки, % -8,0 +21,5 +18,8 -21,5 - -

Повышение (+) или снижение (-) степени заживления, разница опытные/контрольные по отношению к исходному, %

Опытные участки - -26,5 -23,6 +10,5 — —

Ухудшение процессов регенерации, разница по степени заживления с маслом 3 мес. - 22,0 21,6 - - -

* - время наблюдения, сутки.

В целом, при проведении экспериментальных исследований на лабораторных животных доказано наличие взаимосвязи клинической эффективности облепихового масла со сроками его хранения. Установлено, что отсутствие токоферолов, снижение содержания каротиноидов и наличие большого количества продуктов окисления липидов приводит к тому, что применение изучаемого масла после 9 мес. хранения практически не способствует ранозаживлению.

£ 140%

о

1 120%

X

и 5 100%

а

55 80%

С о 60%

X

О Л 40%

3 20%

о

с; С 0%

5 9 14 21 28 время наблюдения, суши

- площадь ожога, % к исходному (лечение облепиховым маслом: 9 мес. хранения).

- площадь ожога, % к исходному

(контрольные участки).

• площадь ожога % к исходному (лечение облепиховым маслом: 3 мес. хранения).

Рис. 7. Динамика процесса регенерации экспериментальной ожоговой раны при лечении облепиховым маслом на разных сроках его хранения.

Таким образом, на основании совокупности проведенных исследований, впервые предлагается комплексный подход к оценке содержания и стабильности основных БАВ масел, обусловливающих их фармакологическую активность. Применение предложенных в данной работе параметров, характеризующих стабильность и качество РМ и МЭ, может быть использовано для стандартизации изученных объектов.

ВЫВОДЫ

1. Исследованы физико-химические показатели качества изучаемых растительных масел и масляных экстрактов во времени до 9 мес. хранения. Установлено, что основные физико-химические параметры масел претерпевают значительные изменения с течением времени при хранении.

2. Методом спектрофотометрии в УФ-, видимой и ИКС-областях изучены свойства и состав каротиноидов и токоферолов растительных масел и масляных экстрактов.

3. Для оценки качества растительных масел и масляных экстрактов, предложено использовать значения индексов окисленности и удельного показателя поглощения, рассчитанных различными способами. Установлено изменение этих параметров с течением времени.

4. Впервые разработана методика экспресс-анализа растительных масел и масляных экстрактов для идентификации и оценки степени чистоты с помощью ТСХ.

5. Изучены особенности хроматографии а-токоферола в тонком слое сорбента. Впервые разработана унифицированная экспресс методика количественной оценки данных ТСХ токоферолов с применением компьютерного сканирования. Данная методика были апробирована на исследуемых растительных маслах и масляных экстрактах. Изучена стабильность токоферолов в растительных маслах и масляных экстрактах при хранении в течении 9 мес. Установлен продукт окислительного превращения токоферолов, образующийся в маслах с течением времени.

. Определено содержание суммы каротиноидов в пересчете на ß-каротин в иссле-уемых растительных маслах и масляных экстрактах. Установлено, что при хранении в режиме реального времени происходит постепенное снижение содержания анных биологически активных веществ.

7. Изучены особенности хроматографии ß-каротина в тонком слое сорбента. Вы-раны и обоснованы оптимальные условия хроматографирования. Впервые предло-ена методика экспресс-анализа ß-каротина с применением ВЭТСХ.

8. Выявлена зависимость противоожоговой активности масел в эксперименте на лабораторных животных (на примере облепихового) от срока их хранения.

9. На основании проведенных исследований, считаем, что сроки хранения изученных жирных растительных масел и масляных экстрактов, применяемых в фармации,

олжны быть пересмотрены и экспериментально установлены для каждого конкретного образца.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Рыбакова (Чечета), О. В. Изучение стабильности токоферолов в растительных маслах и масляных экстрактах при хранении / О.В. Рыбакова (Чечета), Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Материалы VII Междунар. науч.-практич. конф. «Здоровье и образование в XXI веке». - М., 2006. - С. 598 - 600.

2. Определение суммы каротиноидов в растительных маслах и масляных экстрактах О.В. Рыбакова (Чечета), Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин, Г.А. Оголь // Тез. докл. 3-й

Всерос. науч.-метод. конф. «Фармобразование-2007». - Воронеж, 2007. - 4.1. - С. 306-308.

3. Оценка качества растительных масел и масляных экстрактов, применяемых в фармации / О.В. Рыбакова (Чечета), Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин, О.В. Фролова // Вест-н. ВГУ. Сер.: Химия, Биология, Фармация. - 2007. - № 2. - С. 174 - 177.

4. Рыбакова (Чечета), О.В. Выделение токоферолов из растительных масел и масляных экстрактов / О.В. Рыбакова (Чечета), Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Тез. докл. 3-й Всерос. науч.-метод. конф. «Фармобразование-2007». — Воронеж, 2007. - 4.1. -С. 304-305.

5. Рыбакова (Чечета), О. В. Определение спектральных характеристик спиртовых растворов растительных масел и масляных экстрактов методом УФ-спектрофотометрии / О.В. Рыбакова (Чечета), Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Вестн. ВГУ. Сер.: Химия, Биология, Фармация. - 2007. - № 2. - С. 171 - 173.

6. Рыбакова (Чечета), О. В. Определение а-токоферола в жирных растительных маслах и масляных экстрактах методом хроматографии в тонком слое сорбента / О.В. Рыбакова (Чечета), Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Тез. докл. XIV нац. конгр. «Человек и лекарство». - М., 2007. - С. 778.

7. Изучение стабильности биологически активных веществ в растительных маслах и масляных экстрактах при хранении / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин, Н.С. Медведева // Тр. науч.-практ. конф. «Фармация из века в век. Анализ и стандартизация лекарственных средств». - СПб., 2008. - Ч. III.- С. 190- 195.

8. Оценка изменения поведенческой активности лабораторных животных с экспериментальной ожоговой раной при лечении облепиховым маслом / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, A.B. Бузлама, А.И. Сливкин // Тез. докл. межрегион, науч.-метод. конф.

«Проблемы здоровъясбережения школьников и студентов. Новые научные тенден ции в медицине и фармации». - Воронеж, 2008. - С. 484 - 487.

9. Рыбакова (Чечета), О. В. Методы контроля качества витаминов группы D (обзор) О.В. Рыбакова (Чечета), Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Хим.-фармац. журн. - 2008 -Т. 42, №7.-С. 38-44.

10. Рыбакова (Чечета), О.В. Определение токоферолов методом хроматографии тонком слое сорбента / О.В. Рыбакова (Чечета), Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин / Хим.-фармац. журн. - 2008. - Т. 42, № 8. - С. 31-34.

11. Чечета, О.В. Идентификация растительных масел и масляных экстрактов методо ТСХ / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Сорбционные и хроматографиче ские процессы. - Воронеж, 2008. - Вып. 4. - С. 646 - 653.

12. Чечета, О.В. Изучение растительных масел с помощью спектрофотометрии в ви димой области / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Тез. докл. Междунар конф. «Фармация и общественное здоровье». - Екатеринбург, 2008. - С. 313 - 316.

13. Чечета, О.В. Изучение степени чистоты растительных масел и масляных экстрак tob / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Тез. докл. межрегион, науч.-метод конф. «Проблемы здоровъясбережения школьников и студентов. Новые научны тенденции в медицине и фармации». - Воронеж, 2008. - С. 482 - 483.

14. Чечета, О.В. Методика определения каротиноидов методом хроматографии тонком слое сорбента / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Сорбционные хроматографические процессы. - Воронеж, 2008. - Вып. 2. - С. 320 - 326.

15. Чечета, О.В. Стабильность каротиноидов в растительных маслах при хранении О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Фармация. - 2008. - № 2. - С. 12 - 14.

16. Чечета, О.В. Экспресс-анализ в оценке качества растительных масел и маслянь экстрактов / О.В. Чечета, Е.Ф. Сафонова, А.И. Сливкин // Материалы IX Междунар науч.-практ. конф. «Здоровье и образование в XXI веке». - М., 2008. - С. 199-200.

Чечета Ольга Валерьевна (Россия)

Исследования по стандартизации и оценке качества растительных масел и масляных экстрактов, применяемых в фармации.

В последние годы существенно возрос интерес производителей лекарственных средств к растительным маслам (РМ) и масляным экстрактам (МЭ). В настоящей работе теоретически обоснован и экспериментально показан новый подход к стандартизации РМ и МЭ, применяемых в фармации. Впервые проведен контроль качества РМ и МЭ по всем физико-химическим показателям, регламентируемым нормативной документацией, во времени до 9 мес. хранения. Установлено, что основные физико-химические параметры качества масел претерпевают значительные изменения с течением времени при хранении. Экспериментально установлено снижение качества липцдного комплекса РМ и МЭ в процессе хранения. Предложено контролировать качество и стабильность РМ и МЭ по содержанию основных биологически активных веществ (БАВ), обусловливающих их фармакологическую активность. Изучены особенности хроматографии а-токоферола и ß-каротина в тонком слое сорбента. Впервые разработана унифицированная экспресс-методика количественной оценки данных ТСХ токоферолов с применением компьютерного сканирования. Изучена стабильность токоферолов в РМ и МЭ при хранении в до 9 мес. Установлен продукт окислительного превращения токоферолов, образующийся в РМ и МЭ с течением времени. Опреде-

leiro содержание суммы каротиноидов в исследуемых РМ и МЭ. Установлено, что в фоцессе хранения происходит постепенное снижение содержания данных БАВ. первые предложена методика определения каротиноидного состава РМ с примене-ием ТСХ. Доказано наличие взаимосвязи клинической эффективности РМ со сро-ами их хранения.

hecheta V. Olga (Russia)

esearches on standardization and the estimation of quality of vegetable oils and the il extracts applied in pharmacy.

st years interest of manufacturers of medical products to vegetable oils (VO) and to oil extracts (OE) has sentially increased. In the present work the new approach to standardization VO and OE, ap-lied in pharmacy is theoretically proved and experimentally shown. For the first time uality assurance VO and OE on all physical and chemical parameters regulated by the ormative documentation, in time up to 9 months of storage is lead. It is established, that he basic physical and chemical parameters of quality of oils undergo significant changes ventually at storage. Decrease in quality lipids complex VO and OE during storage is experi-entally established. It is offered to supervise quality and stability VO and OE under the naintenance of basic biologically active substances (BAS), causing their pharmacological ctivity. Features of a chromatography of a-tocopherol and ß-carotin in a thin layer of a orbent are studied. For the first time it is developed unified the express train-technique of quantitative estimation of data TLC of tocopherols with application of computer scan-ing. Stability of tocopherols in VO is studied and OE at storage in up to 9 months the roduct of oxidizing transformation of tocopherols, formed in VO and OE eventually Is es-ablished. The maintenance of the sum Carotinoides in investigated VO and OEis certain. It s established, that during storage there is a gradual decrease in the maintenance of data AS. For the first time the technique of definition of Carotinoides structure VO with appli-ation TLC is offered. Presence of interrelation of clinical efficiency VO with terms of heir storage is proved.

Подписано в печать 27.04.09. Формат 60x84 1/16. Усл. печ. л. 1,0, Тираж 100 экз. Заказ 675

Отпечатано с готового оригинала-макета в типографии Изд ателье ко- по литр афического центра Воронежского государственного университета. 394000, Воронеж, ул. Пушкинская, 3.

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ.

В последние годы существенно возрос интерес производителей лекарственных средств (ЛС) к растительным маслам (РМ) и масляным экстрактам (МЭ). Липидные комплексы многих растительных объектов содержат сбалансированные по составу ценные биологически активные вещества (БАВ), такие как токоферолы, карогиноиды, фитостери-ны, фосфо- и гликолипиды. Кроме того, природные липиды являются продуктами постоянно возобновляемых сырьевых источников [88].

Масла большинства широко распространенных в природе дикорастущих и культурных сортов облепихи (Hippophae rhamnoides) и шиповника (Rosa cinnamonea) принадлежит к числу ценных ЛС, давно используемых в лечебной практике. Данные масла ускоряют регенерацию поврежденных кожных покровов и потому могут служить неотъемлемой частью ЛС для лечения ожогов и ран [109,147]. Они применяются как самостоятельные лекарственные препараты (ЛП), так и в качестве вспомогательных веществ для приготовления инъекционных растворов, мазевых и суппозиторных основ [163]. Кроме того, РМ'и отходы их производства могут служить источником получения новых ЛС, обладающих уникальным комплексом фармакологических свойств [119]. Препараты на основе лекарственного растительного сырья обладают, как правило, меньшим побочным действием и имеют более низкий процент противопоказаний. РМ являются источником каротин - токофероловых комплексов, обладающих способностью блокировать образование свободных радикалов и синглетного кислорода в процессе пероксидного окисления липидов (ПОЛ), и в связи с этим - уникальными природными антиоксидантами (АО) [3]. На основе каротиноидов создается новое поколение иммуномодулирующих ЛС для лечения и профилактики различных заболеваний. Внедрение ЛП с антиоксидантным действием, содержащих карогиноиды и токоферолы, а также создание ЛС репаративного и противоожогового действия на основе доступного сырья, актуально и является одним из приоритетных направлений фармации. у •

Использование новых растительных объектов в производстве ЛП на основе РМ'и МЭ обуславливает необходимость подробного изучения их состава с последующей разработкой современных методов стандартизации, охватывающих исходное лекарственное сырье, полученную на его основе субстанцию, и, наконец, ЛП, являющийся конечным продуктом фармацевтического производства [119,163].

В настоящее время на фармацевтическом рынке нашей страны наблюдается огромное многообразие масел и МЭ, отличающихся химическим составом, свойствами и методами получения. Стандартизация этих препаратов провод ится в соответствии с общей фармакопейной статьей ГФ X изд. [49]. При исследовании жирных масел предусмотрено проводить определение общих физико-химических показателей качества. Однако, содержание БАВ, которые обуславливают фармакотерапевтическую эффективность РМ и МЭ, в России не определяется [142].

Критерием стабильности РМ служит сохранение его качества. Снижение количественного содержания фармакологически активного вещества в масле подтверждает его нестабильность. Качество масла можно установить по внешнему виду. Тем не менее, иногда, внешний вид изменений не претерпевает, но при исследовании обнаруживаются примеси продуктов окисления, отличающиеся токсичностью или иной'направленностью фармакологического действия. В связи с этим, особенно актуальны вопросы научных исследований стандартизации РМ и МЭ, изучения их стабильности и сроков годности по содержанию в них основных фармакологически активных веществ.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью диссертационной работы является разработка системного подхода к комплексной оценке качества и стандартизации растительных масел и масляных экстрактов, представленных на российском фармацевтическом рынке, по содержанию биологически активных веществ, а также исследование их стабильности в процессе хранения.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- исследовать и оценить физико-химические показатели качества изучаемых РМ и МЭ в соответствии с требованиями общей фармакопейной статьи ГФ X изд. «Масла жирные», Европейской Фармакопеи 6.0 и ГОСТов на пищевые РМ;

- разработать методику экспресс-анализа РМ и МЭ;

- определить содержание БАВ в РМ и МЭ для оценки перспективности их применения в медицинской практике;

- исследовать БАВ масел и их стабильность при хранении;

- изучить динамику изменения качества липидного комплекса масел в процессе хранения;

- изучить зависимость регенерирующей активности масел от срока их хранения в эксперименте на лабораторных животных;

- на основании полученных данных обосновать несоответствие рекомендуемых производителями сроков годности исследуемых РМ и МЭ с позиции фармакотерапевтической эффективности.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Теоретически обоснован и экспериментально показан новый подход к стандартизации РМ и МЭ, применяемых в фармации. Впервые проведен контроль качества РМ и МЭ по всем физико-химическим показателям нормативной документации^ (НД) (кислотное, йодное, перекисное, цветовое, эфирное числа, показатель преломления, степень чистоты, значения индексов окислен-ности и др.).

Экспериментально установлено снижение качества липидного комплекса масел и МЭ в процессе хранения.

Разработаны новые методики экспресс-идентификации изученных РМ и МЭ, а также присутствующих в них БАВ, в основе которых лежат современные физико-химические методы анализа, такие как высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ), УФ- и РЖ-спектроскопия.

Предложено проводить оценку качества и стабильности РМ и МЭ по содержанию основных БАВ, обусловливающих их фармакологическую активность, таких как токоферолы и каротиноиды. Проведена сравнительная оценка хроматографических и спектральных методов, позволяющих проводить контроль содержания ценных БАВ, в частности, токоферолов и каротиноидов, в РМ и МЭ.

Установлены причинно-следственные связи между содержанием БАВ в маслах и стабильностью масел при хранении.

Показана возможность использования сорбционных и спектральных методов для определения и контроля стабильности токоферолов, каротиноидов и полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) в маслах.

Выявлена зависимость регенерирующей активности масел в эксперименте от срока их хранения на модели ожоговой раны лабораторных животных.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Изучена стабильность РМ и МЭ при хранении в режиме реального времени по таким параметрам как физико-химические показатели качества, содержание действующих БАВ и фармакологическая активность.

Полученные данные позволяют сделать вывод о несоответствии заявленных сроков годности масел (18 или 24 мес.) требованиям их эффективности и безопасности. Через 9 мес. хранения масла становятся непригодными,для использования, так как установлено, что за данный период' происходит полное расходование токоферолов на ингибирование процессов окисления. Масла при этом теряют свои фармакотерапевтические свойства, приобретают негативный эффект в виду содержания в них продуктов окисления липидов и БАВ, являющихся их фармакологическими антагонистами.

Предложенные способы идентификации и количественного содержания основных БАВ масел могут быть использованы на фармацевтических и пищевых предприятиях для анализа РМ и лечебно-профилактических препаратов на их основе, а также в центрах контроля качества и сертификации ЛС для выявления недоброкачественной и/или фальсифицированной продукции.

На основании проведенных исследований, считаем, что сроки хранения изученных жирных РМ и МЭ, применяемых в фармации, должны быть пересмотрены и экспериментально установлены для каждого конкретного образца.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ Проведено внедрение разработанной методики определения каротиноид-ного состава РМ и МЭ на предприятии ООО «Русская Олива» (Акт внедрения от 02.02.2009 г.); методических рекомендаций по идентификации РМ и МЭ методом тонкослойной хроматографии на кафедре технологии хлебопекарного, макаронного и кондитерского производств Воронежской государственной технологической академии (Акт внедрения от 20.01.2009 г.); методических рекомендаций по определению (3-каротина в РМ и МЭ методом тонкослойной хроматографии на кафедре аналитической химии Химического факультета Воронежского Госуниверситета (Акт внедрения от 20.12.2008 г.); разработанной методики идентификации и количественного определения токоферолов в РМ и МЭ при проведении учебных и научно-исследовательских работ по стандартизации и оценке качества ЛП витамина Е в курсе- «Фармацевтическая химия», в курсе «Фармакогнозия» на Фармацевтическом факультете Воронежского1 Госуниверситета (Акт внедрения от 10.11.2008 г.).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ НА ЗАЩИТУ

- результаты определения основных физико-химических показателей качества исследуемых РМ и МЭ при хранении в режиме реального времени;

- изучение стабильности БАВ РМ и МЭ методом ИК — спектроскопии;

- методика идентификации масел и МЭ методом ТСХ;

- динамика изменения качества липидного комплекса масел в процессе хранения;

- выбор оптимальных параметров для определения токоферолов в тонком слое сорбента и разработанная на основе этих данных методика количественного определения токоферолов;

- определение каротиноидов в РМ и МЭ и их стабильности при хранении;

- результаты изучения зависимости регенераторных свойств РМ (на примере облепихового масла) в эксперименте в зависимости от срока его хранения.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные результаты исследования доложены на:

- VII Международной Научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (г. Москва, 2006 г.);

- 3-ей Всероссийской Научно-методической конференции «Фармобразование-2007» (г. Воронеж);

- XIV национального конгресса «Человек и лекарство» (г. Москва, 2007 г.);

- Межрегиональной Научно-методической конференции «Проблемы здоровъ-ясбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации» (г. Воронеж, 2008 г.);

- Международной конференции «Фармация и общественное здоровье» (г. Екатеринбург, 2008 г.);

- Всероссийской научно-практической конференции «Фармация из века в век. Анализ и стандартизация лекарственных средств» (г. Санкт-Петербург, 2008 г.);

- IX Международной Научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (г. Москва, 2008 г.).

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 16 работ, в том числе статей 7, из них 5 в журналах, входящих в список ВАК, а также 9 тезисов.

Диссертация изложена на 202 страницах машинописного текста, содержит 51 рисунок, 54 таблицы и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, общих выводов, библиографического указателя, включающего 240 источников и Приложений.

Общие выводы

1. Исследованы физико-химические показатели качества изучаемых РМ и МЭ во времени до 9 мес. хранения. Установлено, что основные физико-химические параметры масел претерпевают значительные изменения с течением времени при хранении.

2. Изучены свойства и состав каротиноидов и токоферолов с применением методов спектрофотометрии в УФ-, видимой и ИКС-областях.

3. Предложено использовать значение ИО и Е10/о1См Для оценки качества РМ и МЭ различными способами. Установлено изменение этих параметров с течением времени.

4. Впервые разработана методика экспресс-анализа РМ и МЭ для оценки их подлинности и степени чистоты с применением ТСХ.

5. Изучены особенности хроматографии а-токоферола в тонком слое сорбента. Впервые разработана унифицированная экспресс-методика количественной оценки данных ТСХ токоферолов с применением компьютерного сканирования. Данная методика были апробирована на исследуемых РМ и МЭ.

6. Изучена стабильность токоферолов в РМ и МЭ при хранении до 9 мес. Установлен продукт окислительного превращения токоферолов, образующийся в РМ и МЭ с течением времени.

7. Определено содержание суммы каротиноидов в пересчете на р-каротин в исследуемых РМ и МЭ. Установлено, что в процессе хранения в режиме реального времени происходит постепенное снижение содержания данных БАВ.

8. Изучены особенности хроматографии Р-каротина в тонком слое сорбента. Выбраны и обоснованы оптимальные условия хроматографирования. Впервые предложена методика экспресс-анализа Р-каротина, как одного из наиболее фармакологически активных веществ группы каротиноидов, присутствующих в маслах методом ТСХ.

9. Выявлена зависимость противоожоговой активности масел в эксперименте на лабораторных животных (на примере облепихового) от срока их хранения.

10. На основании проведенных исследований, можно сделать заключение, что сроки хранения изученных жирных РМ и МЭ, применяемых в фармации, должны быть пересмотрены и экспериментально установлены для каждого конкретного образца.