Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследования по разработке и стандартизации лекарственных растительных средств для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения

На правах рукописи

003446809

Пупыкина Кира Александровна

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ И СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ [I КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Москва - 2008

2 2 СЕН 2008

003446809

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Росздрава»

Научный консультант:

доктор фармацевтических наук,

профессор Лиходед Виталий Алексеевич

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Даргаева Тамара Дарижаповна

доктор фармацевтических наук,

профессор Нестерова Ольга Владимировна

доктор химических наук,

профессор Скачилова Софья Яковлевна

Ведущая организация: Курский государственный медицинский

Защита состоится 13 октября 2008 г в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006 070 01 при Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН по адресу 117216, Москва, Грина, 7

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу 117216, Москва, Грина, 7

университет

Автореферат разослан ^ С£нтября 2Шг

Ученый секретарь диссертационного совета

Д 006 070 01 д фарм н

А И Громакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время ассортимент лекарственных средств растительного происхождения, применяемых в практическом здравоохранении, составляет более 40% Расширение исследований по изысканию источников для получения новых эффективных и безопасных лекарственных растительных средств, в том числе применяемых в гастроэнтерологической практике, является актуальной задачей медицины Одним из путей увеличения количества препаратов растительного происхождения является широкое изучение действия уже известных фармакопейных лекарственных растений, часто используемых по ограниченному числу показаний, а также составление рациональных многокомпонентных растительных композиций (сборов), которые являются наиболее популярными, доступными для населения и содержат биологически активные вещества с разносторонним фармакологическим действием для коррекции многих, связанных между собою систем организма

В последние годы во многих странах отмечается неуклонный рост гастроэнтерологических заболеваний, связанный с неблагоприятной экологической обстановкой и нерациональным питанием В России заболеваниями данной группы страдает каждый десятый житель К числу наиболее распространенных относится хронический панкреатит (8-35%), язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (8-10%), заболевания гепатобилиарной системы, в том числе гепатит (18-22%) Изучение структуры заболеваний органов пищеварения по Республике Башкортостан (РБ) показало, что они сопоставимы с данными по России и первое место среди них также занимает хронический панкреатит (38,6%), затем язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (23,5%), заболевания гепатобилиарной системы (15,2%), хронический гепатит (6,9%) и др Эти заболевания осложняются развитием дисбактериоза, который выявляется более чем у 90% больных, с острыми и хроническими гастроэнтерологическими заболеваниями и практически у всех пациентов с острыми кишечными инфекциями При этом нарушается баланс между различными видами микроорганизмов кишечника, выявляется патогенная и условно патогенная флора, развиваются общие метаболические расстройства и нейрогуморальные нарушения Кроме того, отмечается увеличение числа больных с тяжелым течением заболеваний пищеварительной системы, развитием осложнений, увеличением процента злокачественных новообразований желудка, поджелудочной железы, что ведет к повышению летальности и потере трудоспособности населения В связи с этим проблема восстановления функциональной активности органов пищеварения, профилактика сезонных обострений является актуальной и достаточно сложной

В настоящее время патология органов пищеварения имеет не только хронический, но и сочетанный характер, и в терапии широко используются разнообразные синтетические лекарственные средства Однако, при их выраженном терапевтическом эффекте они не лишены побочного действия,

имеют противопоказания и ограничения к применению, не всегда предотвращают развитие рецидива заболевания после их отмены Это определяет необходимость разработки комплексных подходов к их лечению, в том числе с применением лекарственных растительных средств, которые имеют широкий спектр лечебного и профилактического действия, обладают низкой токсичностью, мягкостью действия, способны быстро устранять симптомы обострения, предупреждать рецидивы и способствовать восстановлению нарушенных функций желудочно-кишечного тракта Возможность рационального сочетания лекарственных растений между собой и с синтетическими препаратами позволяет расширить их терапевтические возможности и снизить частоту побочных явлений медикаментозной терапии Ассортимент офининальных многокомпонентных растительных сборов, рекомендуемых в терапии заболеваний пищеварительной системы, ограничен и особенно их недостаток ощущается при лечении хронического панкреатита, гепатита, язвенной болезни желудка, дисбактериоза кишечника Все это требует более глубокого изучения принципов комбинирования лекарственного растительного сырья в сборах для обеспечения необходимого фармакологического эффекта

Перспективность развития исследований но разработке новых растительных сборов, рекомендуемых при лечении заболеваний гтищеварите тьной системы, подтверждается и тем, что в Уральском регионе, в частности Башкортостане, имеются достаточные сырьевые растительные ресурсы, которые позволяют организовать промышленное производство лекарственных растительных средств Это имеет большое значение в оздоровлении населения республики и' обеспечении его доступными лекарственными препаратами

Таким образом, поиск и создание новых лекарственных растительных средств для профилактики и комплексного лечения заболеваний пищеварительной системы представляет актуальную задачу фармацевтической науки

Целью настоящих исследований является разработка теоретически обоснованных подходов к подбору компонентов сборов для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения, их изучение, стандартизация и создание рациональных лекарственных форм

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи

- разработать научно-методологический подход к созданию многокомпонентных растительных сборов для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний органов пищеварения,

- теоретически и экспериментально обосновать оптимальный состав новых растительных сборов,

- изучить ресурсную обеспеченность основных растительных компонентов предложенных сборов в Республике Башкортостан и возможность интродукции пряно-ароматических, эфирномасличных растений для расширения сырьевой базы и ассортимента профилактических средств,

- провести комплексные фармакогносгаческие исследования многокомпонентных растительных сборов, интродуцированных растений, определить критерии подлинности и показатели качества сборов, разработать методики количественного определения основных групп биологически активных веществ и нормы их содержания,

- изучить влияние основных факторов экстракции на выход биологически активных веществ из сборов для разработки рациональной схемы получения сухих экстрактов и определить показатели их качества,

- разработать состав соотношения и способ получения лекарственных форм на основе масляного растительного экстракта,

- провести фармакологические исследования, подтверждающие эффективность предложенных растительных средств,

- разработать нормативную документацию фармакопейные статьи на сборы и технические условия на чайные напитки, экстракты

Научная новизна

Выявлены закономерности, позволяющие обосновать научно-методологический подход к созданию новых многокомпонентных растительных сборов, рекомендуемых для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний пищеварительной системы с учетом многофакторного механизма их развития и влияния на основные патогенетические механизмы

На основании скрининга фармакологической и биологической активности, теоретически и экспериментально обоснованы составы четырех новых сборов дом профилактики и комплексного лечения в стадии обострения и ремиссии хронического панкреатита и гепатита - «Гепапанкреафит - О», «Гепапан-креафит - Р», язвенной болезни желудка - «Ульцерофит», дисбактериоза - «Дис-бакфит»

Изучена обеспеченность в Республике Башкортостан сырьевой базы по основным компонентам растительных сборов и возможность интродукции в лесостепную зону Южного Предуралья пряно-ароматических и эфирномасличных растений На основе проведенных исследований установлено, что перспективными для введения в культуру являются 13 видов, для которых изучен химический состав и выявлены растения, накапливающие максимальное количество биологически активных веществ и проявляющие более выраженную анти-оксидантную активность

В ходе фармакогностических исследований разработаны «Определители» морфологических групп растительных компонентов сборов, выявлены диагностически значимые признаки лекарственного растительного сырья и сборов для установления их подлинности и стандартности С использованием современных методов анализа (УФ- и ИК-спектроскопия, высокоэффективная жидкостная хроматография, хромато-масс- и атомно-абсорбционная спектрометрия) в сборах и интродуцированных растениях установлено содержание основных групп биологически активных веществ флавоноидной природы, фенолкарбоновых кислот, кумаринов, антраценпроизводных, сапонинов, полисахаридов, эфирных масел, органических кислот, витаминов, аминокислот, макро- и микроэлементов

В результате технологических исследований разработана схема получения сухих экстрактов из сборов, установлена зависимость выхода биологически активных веществ от различных режимов экстрагирования, изучен их химический состав и предложены критерии для оценки качества Обоснованы состав, технология и целесообразность применения вспомогательных веществ для получения новых лекарственных форм (гель и карандаш) на основе масляного экстракта из разработанного и изученного ранее сбора «Экзофит» Разработан новый способ определения твердости карандаша

С учетом значимости отдельных групп биологически активных веществ сборов и лекарственных форм на их основе в обеспечении лечебных эффектов, разработаны методики их количественной оценки и предложены показатели качества, необходимые для стандартизации В сборах «Гепапанкреафит-О» и «Дисбахфит» - определение содержания суммы флавоноидов и дубильных веществ, в сборах «Гепаланкреафит-Р» и «Ульцерофит» - суммы флавоноидов и полисахаридов, в лекарственных формах на основе масляного экстракта «Экзофит» - каротиноидов

Рациональность составов и эффективность применения предложенных растительных средств подтверждены фармакологическими исследованиями

Приоритет и новизна проведенных исследований защищены 7 патентами РФ № 2271041, № 2223777, № 2178304, № 2193411, № 2232591, № 2310438, № 2315279 и получены 6 положительных решений на выдачу патента (приоритетные справки № 2007123053/15, № 2007123054/15, № 2007123051/14, № 2007130459/14, №2007130460/14, №2007130461/14)

Праетическая значимость

По результатам исследований разработаны и внедрены

♦ проекты ФС на сборы Species «Hepapancreaphytum - О» - для профилактики и комплексного лечения хронического панкреатита и гепатита в стадии обострения, Species «Hepapancreaphytum - R» - для профилактики и комплексного лечения хронического панкреатита и гепатита в стадии ремиссии, Species «Ulcerophytum» - для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка, Species «Disbacphytum» - для профилактики и комплексного лечения дисбактериоза, которые приняты к рассмотрению Фармакопейным комигетом (вход № 20099 - 20102 от 08 04 08г),

♦ в работу ООО «Травы Башкирии» технические условия «Напитки чайные «Гепапанкреафит-О», «Гепапанкреафит-Р», «Ульцерофит», «Дисбакфит»» для профилактики заболеваний пищеварительной системы (ТУ 9191-00426795008-2002, утвержденные 25 10 02г), технические условия «Экстракты из растительного сырья» (ТУ 9168-007-26795008-2003, утвержденные 28 12 ОЗг), инструктивные письма по приготовлению и использованию настоев из сборов,

♦ в работу ГУЛ «Башфармация» материалы ресурсного обследования флоры Башкортостана (акт внедрения от 10 11 2007г) на основе которых разработаны и внедрены в учебный процесс кафедры фармакогнозии Башкирского государственного медицинского университета (БГМУ) учебные пособия «Ре-сурсоведение лекарственных растений», «Учебная практика по фармакогно-

зии», которые получили гриф Учебно-методического объединения по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России (УМО-39 от 27 01 05, УМО-703 от 15 11 05) и рекомендованы для студентов фармацевтических вузов и факультетов,

♦ результаты изучения макро- и микроскопических признаков лекарственного растительного сырья использовались при разработке учебного пособия «Основы гистологии, анатомии, физиологии и морфологии растений», которое внедрено в учебный процесс кафедры фармакогнозии БГМУ, получило гриф УМО-39 от 27 01 05г и рекомендовано для студентов фармацевтических вузов и факультетов России,

♦ результаты изучения сборов для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения использовались при разработке монографии «Лекарственные растения в гастроэнтерологии»,

♦ материалы по фотохимическому изучению и определению антиоксн-дантной активности интродуцированных в лесостепную зону Южного Преду-ралья пряно-ароматических и эфирномасличных растет«!, вошли в монографию «Проблемы экологии и принципы их решения на примере Южного Урала»,

♦ материалы диссертации апробированы в Республиканском центре контроля качества и сертификации лекарственных средств Республики Башкортостан и внедрены в учебный процесс кафедр БГМУ фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии, фармацевтической технологии с курсом биотехнологии, поликлинической терапии, поликлинической медицины ИПО, инфекционных болезней ИПО (акты внедрения)

Связь задач исследований с проблемным планом

Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Башкирского государственного медицинского университета по проблеме «Фармакология и фармация» Номер госрегистрации 01200507996

Апробация работы

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на региональных, российских, международных форумах, конгрессах, съездах, научно-практических конференциях Москва - 1996, 1998, 2001, 2004, 2006, 2007, Санкт-Петербург - 2001, Чебоксары - 1996, Томск - 2002, 2006, Новосибирск -2004, 2005, Архангельск - 2004, Красноярск - 2004, Запорожье - 2007, Пущино - 2007, Пермь - 2007, Уфа - 1996-2008

Публикации

Основное содержание работы отражено в 70 научных работах, из них в журналах рецензируемых ВАК - 16, 3 учебных пособия с грифом УМО, 1 монография, 7 патентов, 6 положительных решений на выдачу патента

Основные положения, выносимые па защиту:

- результаты анализа современного состояния рынка лекарственных средств растительного происхождения в Республике Башкортостан, применяемых при заболеваниях органов пищеварения,

- результаты теоретических, экспериментальных исследований по разработке, обоснованию составов новых сборов и изучению сырьевой базы основных растительных компонентов предлагаемых сборов в Республике Башкортостан,

- результаты фармакогностических исследований сборов, определения характеристик их подлинности и показателей качества, изучения химического состава интродуцированных в лесостепную зону Южного Предуралья пряно-ароматических и эфирномасличных растений,

- результаты технологических исследований по разработке сухих экстрактов из сборов, лекарственных форм на основе масляного экстракта и определения показателей их качества,

- результаты фармакологических исследований по оценке эффективности действия разработанных сборов, лекарственных форм на их основе,

- результаты разработки нормативной документации на сборы и экстракты

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 304 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, 4 глав собственных исследований, выводов и списка используемой литературы, включающего 370 источников, из которых 37 иностранных авторов, приложений Работа иллюстрирована 39 рисунками и 98 таблицами

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и задачи исследования, представлены научная новизна и практическая значимость работы

В первой главе, на основании обзорй литературных данных, изложено современное состояние вопроса профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения с использованием лекарственных растительных средств Проанализированы и обобщены сведения о лекарственных препаратах растительного происхождения, биологически активных добавках к пище, применяемых при заболеваниях указанного профиля, состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья, возможностях использования пряно-ароматических и эфирномасличных растений в профилактике заболеваний органов пищеварения

Во второй главе приведены сведения об объектах исследования, характеристике используемых при выполнении работы приборов и методов

Третья глава посвящена изучению спроса, потребности и обоснованию необходимости создания лекарственных растительных средств, применяемых для лечения заболеваний пищеварительной системы в Республике Башкортостан, теоретическому и экспериментальному обоснованию компонентного состава сборов для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения, обеспеченности сырьевой базы лекарственных растений, входящих в состав сборов

В четвертой главе приведены результаты экспериментальных исследований по фармакогностическому и фитохимическому изучению сборов, интродуцированных пряно-ароматических, эфирномасличных растений, определению

характеристик подлинности и показателей качества сборов, выделению и идентификации биологически активных веществ, разработке методик количественного определения основных групп действующих веществ Предложены критерии подлинности и нормы содержания биологически активных веществ, включенные в нормативную документацию на сборы (проекты фармакопейных статей и технические условия) Описаны условия получения водных извлечений из сборов с учетом влияния различных факторов экстракции

Пятая глава включает технологические исследования по разработке рациональных лекарственных форм сухих экстрактов из сборов и лекарственных форм на основе масляного экстракта (гель и карандаш), их биофармацевтическому изучению и определению показателей качества

В шестой главе описаны результаты фармакологических исследований разработанных растительных средств, включающие определение безопасности, экспериментальное моделирование хронического панкреатита, гепатита, язвенной болезни желудка, дисбактериоза на животных и изучение их профилактического и лечебного действия

В приложении внесены основные документы, подтверждающие внедрение результатов диссертационной работы и некоторые иллюстрационные материалы

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

Объектами исследования служило стандартное лекарственное растительное сырье (JIPC) различных морфологических групп, из которого были составлены рациональные прописи пяти многокомпонентных растительных сборов и приготовлены лабораторные и опытно-производственные образцы на базе ООО «Травы Башкирии» Исследовались также сухие экстракты, полученные на основе четырех новых сборов, и лекарственные формы (гель и карандаш), полученные на основе масляного экстракта из пятого сбора Приведены сведения о вспомогательных веществах, использованных при разработке состава и технологии геля и фитокарандаша

Фитохимические исследования проводились с использованием современных физико-химических методов хроматография колоночная, на бумаге (БХ), в тонком слое сорбента (ТСХ), высокоэффективная жидкостная (ВЭЖХ) на хроматографе «Стайер» (Аквилон, Россия) и последующей обработкой результатов исследования с помощью программы МультиХром для «Windows», УФ- и ИК-спектроскопия, спектрофотометрия, хромато-масс-спектрометрия, атомно-адсорбционная спектрометрия и др В работе использовали реактивы, растворители, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации (НД) Для хроматографического анализа и разработки методик количественного определения основных групп биологически активных веществ (БАВ) использовали хроматографически чистые вещества и стандарты

Скрининговые биологические и фармакологические исследования включали изучение антимикробной, антиоксидантной, противовоспалительной активности, острой токсичности и других видов специфической активности промежуточных и конечных продуктов

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили в соответствии с требованиями ГФ-Х1 (вып 1, с 199) «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний», с использованием критерия Стьюдента, обработку результатов фармакологических исследований, кроме того, по методу Литчфильда и Уилкоксова

Разработка подходов к составлению рецептур сборов для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний органов пищеварения и обеспеченность сырьевой базы

Сложность этиологии и патогенеза заболеваний пищеварительной системы, тяжесть их течения, возможные осложнения объясняют необходимость комплексной терапии с применением растительных средств Руководствуясь запросами практикующих врачей, работающих в стационарных и амбулаторных учреждениях, нами проведены исследования по разработке новых сборов и лекарственных форм на их основе для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения

Маркетинговые исследования потребителей рынка лекарственных препаратов, применяемых для лечения заболеваний органов пищеварения, показали, что фармацевтический рынок Республики Башкортостан (РБ) не обеспечен должным ассортиментом препаратов растительного происхождения и врачебные предпочтения в большей мере склоняются к назначению синтетических препаратов Это связано с недостаточной информированностью врачей о возможности применения лекарственных растительных препаратов и их преимуществах перед синтетическими средствами Однако, изучение спроса населения на препараты растительного происхождения показало, что потребность в них удовлетворяется не полностью, хотя является достаточно высокой и в большей степени склоняется к индивидуальным видам ЛРС и сборам Это объясняет целесообразность разработки новых лекарственных растительных средств

Основной задачей на данном этапе явилось теоретическое научно-методологическое обоснование и создание алгоритма действий по разработке составов сборов для профилактики и комплексного лечения некоторых заболеваний органов пищеварения с учетом многофакторного механизма их развития (рис 1) При этом использовали репрезентативную выборку патологических состояний с учетом дифференциации признаков различных форм заболеваний в пределах нозологической группы Главными составляющими при подборе ЛРС для формирования сборов при желудочно-кишечной патологии, являлись следующие сведения об этиологии и патогенезе заболевания, составе биологически активных веществ растений, опыте их использования в научной и народной медицине, наличие сырьевой базы Немаловажным также было знание противопоказании и предостережений при применении лекарственных растений

При составлении сборов для лечения хронического панкреатита учитывали особенности его течения в различные фазы заболевания, развитие экзок-ринной, а затем эндокринной недостаточности поджелудочной железы, поражения печени, наличие возможных осложнений Это определяло направленность действия сборов и, следовательно, необходимые виды фармакологичес-

БЛОК 1

БЛОК 2

БЛОК 3

БЛОК 4

Фитохимическое изучение биологически активных веществ сборов, разработка методик количественного определения основных групп БАВ

Установление показателей качества сборов

Разработка проектов ФС на сборы

Разработка рациональной лекарственной формы

Рис /. Алгоритм действий по разработке рецептур сборов

кой активности растительных компонентов В подострой стадии заболевания недопустимо введение в сбор растений, обладающих желчегонным действием, поскольку усиление желчеобразования в условиях спазма сфинктера Одди может привести к холепанкреатическому рефлюксу, внутрипротоковой гипертен-зии и спровоцировать обострение заболевания

При составлении сбора для профилактики и комплексного лечения хронического панкреатита в стадии ремиссии учитывали, что в этой фазе воспалительный процесс в поджелудочной железе еще не завершен, а в условиях нарушенной микроциркуляции репарация ацинарной ткани происходит медленно Поэтому на месте воспаления формируется фиброзная ткань, что приводит к недостаточности функции поджелудочной железы В фазе ремиссии показаны растения со слабым желчегонным действием (календула, девясил) При этом предпочтение отдается холекинетическому действию, особенно при дис-кинезиях желчевыводящих путей, так как желчь способствует перевариванию жиров за счет активации липазы, что улучшает внешнесекреторную функнрю поджелудочной железы

Эффективно в состав сборов, кроме растений специфического действия вводить компоненты антитоксического действия (горец птичий, пустырник, крапива), антигипоксического (сушеница, календула, шиповник, крапива и др) и, корректирующие метаболические нарушения

Течение и обострение хронического панкреатита (ХП) характеризуется сложными функциональными нарушениями в печени, изменениями биохимических показателей, что подтвердилось в результате экспериментального моделирования хронического панкреатита на животных Поэтому область применения сборов не ограничивается терапией и профилактикой хронического панкреатита в стадии обострения и ремиссии, их возможно применять и при лечении заболеваний печени, а именно хронического гепатита в разных фазах заболевания

При составлении композиции сбора для лечения язвенной болезни желудка выбор растительных компонентов осуществляли с учетом основных направлений патогенетической терапии и способности растений активно усиливать продукцию защитной слизи, восстанавливать структуру слизистой оболочки желудка, активизировать регенерацию клеток эпителия слизистой и соответственно стимулировать защитные факторы В состав сбора при лечении язвенной болезни желудка вводили компоненты улучшающие обмен веществ тканевой, жировой, углеводный, белковый, водно-солевой (девясил, крапива, пустырник, подорожник большой, солодка), антитоксические (пустырник, горец птичий, крапива), алтигипокгачсские (рябина обыкновенная, сушеница, ромашка)

При составлении сбора для лечения дисбактериоза кишечника учитывали, что фитотерапия может быть эффективно использована для санации от условно патогенной микрофлоры, так как лекарственные растения в большинстве своем являются кишечными эубиотиками, уничтожающими патогенную, сохраняющими и стимулирующими сапрофитную микрофлору БАВ растений взаимодействуют с воспаленной слизистой кишечника, способствуют восстановлению и регенерации слизистого слоя, вызывают уплотнение протоплазмы,

за счет денатурации белков, находящихся в слизи и тканевом экссудате и образование плотной пленки, защищающей нормальную и поврежденную слизистую оболочку от раздражения и внедрения патогенных бактерий При дисбак-териозах кишечника страдают процессы кишечного переваривания, поэтому оправдано включение в сбор растений, корректирующих эти процессы и растений противоположного действия вяжущего (зверобой, лапчатка, шалфей) гаи слабительного (крушина), что дает возможность регулировать деятельность кишечника в зависимости от склонности к диарее или запорам Учитывая патогенетические подходы к составлению сбора для комплексного лечения дисбак-териоза кишечника, мы предположили, что он может оказаться эффективным и при лечении острых кишечных инфекций

В состав разрабатываемых кошозиций вводили и дублирующие по действию растительные компоненты, исходя из того, что усложнение комплекса биологически активных веществ, приводит к потенцированию фармакологических эффектов за счет того, что компоненты одноименного действия имеют различные точки воздействия и повышают надежность ожидаемого лечебного эффекта При этом обеспечивается поливалентность действия и снижается возможность побочных эффектов Введете же компонентов с антитоксическим, седативным и тонизирующим эффектами приводит к созданию «круговой обороны» организма в целом Таким образом, для дальнейших исследований нами было отобрано 28 видов лекарственного растительного сырья, из которых составляли различные комбинации сборов (сбор №1 (125 вариантов), №2 (113 вариантов), сбор №3 (132 варианта), сбор №4 (123 варианта)), включающие от 2 до 15 компонентов, из них готовили водные извлечения (1 10) в разных режимах и проверяли активность Обоснование оптимальных составов сборов подтверждали экспериментально путем скрининга биологической и фармакологической активности

Поскольку в патогенезе хронического панкреатита и гепатита ведущая роль принадлежит развитию воспалительного процесса в поджелудочной железе (ПЖ) и печени, а также снижению ферментативной активности ПЖ, для скрининговых исследований было выбрано определение противовоспалительной и амилолитической активности При разработке сбора для комплексного лечения язвенной болезни желудка изучали антиоксидантную и противоязвенную активность При разработке сбора для комплексного лечения дисбактерио-за была изучена антимикробная и антигрибковая активность.

Процентное соотношение компонентов в сборах обосновывали теоретически с учетом вклада каждого компонента в оказание конечного лечебного эффекта и экспериментально, оценивая активность растительных компонентов При этом учитывалось явление взаимодействия растительных компонентов между собой (интерференции), так как наблюдалось, что некоторые виды растительного сырья, проявляющие более выраженную активность в отдельности, в смеси изменяли ее, или потенцируя или снижая действие совместно присутствующих компонентов Проведенный анализ литературных данных о химическом составе выбранных лекарственных растений, их активности, позволил

обосновать рациональность отбора растительных компонентов для составления сборов

Таким образом, по результатам исследований были разработаны оптимальные прописи четырех новых сборов для профилактики и комплексного лечения хронического панкреатита и гепатита в стадии обострения - сбор №J «Гепапанкреафит - О» кора дуба, трава донника, корни лопуха, корни солодки, трава горца птичьего по 14%, листья мать-и-мачехи, трава пустырника, трава сушеницы топяной, трава эхинацеи пурпурной по 7,5%, хронического панкреатита и гепатита в стадии ремиссии - сбор №2 «Гепапанкреафит - Р» корневища и корни девясила, цветки календулы, листья крапивы, листья подорожника большого, плоды шиповника по 15,5%, трава полыни обыкновенной, створки плодов фасоли, трава эхинацеи пурпурной по 7,5%, язвенной болезни желудка - сбор №3 «Улъцерофит» цветки ромашки, трава сушеницы топяной, корни солодки, трава горца птичьего, корневища и корни девясила, листья подорожника большого по 12,5%, трава пустырника, плоды рябины, листья крапивы, плоды фенхеля по 6,25%, дисбактериоза кишечника - сбор М4 «Дисбак-фит» корневище лапчатки, листья шалфея, листья мяты перечной, корневища с корнями девясила, трава зверобоя, трава тысячелистника, трава череды, плоды фенхеля по 11,75%, кора крушины 6% Кроме новых сборов, объектом исследования служил также разработанный и изученный ранее сбор «Экзофит», включающий траву зверобоя, цветки календулы, траву полыни горькой, соплодия хмеля, взятых поровну, и используемый для получения масляного растительного экстракта и приготовления на его основе лекарственных форм с противовоспалительной и ранозаживляющей активностью

При подборе компонентов сборов, мй ставили перед собой задачу возможной их заготовки на территории Республики Башкортостан и промышленного производства В состав разрабатываемых и изучаемых сборов вошли преимущественно виды местной флоры го 28 видов лекарственных растений произрастают или культивируются на территории Республики Башкортостан - 25, остальные (мята перечная, фенхель обыкновенный, шалфей лекарственный) культивируются на территории Российской Федерации Нами была проведена оценка запасов в некоторых районах Республики Башкортостан дикорастущих лекарственных растений, входящих в состав сборов, на основе которых были составлены практические рекомендации по их заготовке и рациональному использованию

Для решения вопроса расширения сырьевой базы составных компонентов сборов, которые не произрастают в диком виде на территории Республики Башкортостан, были проведены исследования по введению в культуру таких растений как мята перечная, фенхель обыкновенный, шалфей лекарственный и других пряно-ароматических и эфирномасличных растений, применение которых имеет большое значение для профилактики заболеваний пищеварительной системы

Исследования по интродукции пряно-ароматических и эфирномасличных растений в Республике Башкортостан проводились в г Бирске в рамках совместных исследований с биологами на базе агробиостанции БГПЙ Проводя отбор

различных видов пряно-ароматических и эфирномасличных растений из других географических пунктов для их интродукции в лесостепную зону Республики Башкортостан, учитывались продолжительность жизненного цикла растений и климатические условия произрастания, сравнивая их с таковыми в Южном Предуралье, обращалось внимание на количество атмосферных осадков, температуру воздуха, продолжительность безморозного периода Выделялись факторы, ограничивающие интродукцию новых видов в республику поздние весенние и ранние осенние заморозки, недостаток влаги в определенные сроки летнего периода, относительно шикая температура при отсутствии достаточного снежного покрова Анализируя эти данные предполагалось, что в условиях Южного Предуралья хорошо будут расти и развиваться виды растений из лесной и лесостепной зон умеренных широт, из Средиземноморья - виды, произрастающие в горах, из тропических и субтропических районов - виды, проходящие весь жизненный цикл за один вегетационный период

Таким образом, в условиях Башкортостана была изучена интродукция 50 видов пряно-ароматических и эфирномасличных растений, из которых хорошо адаптировались в условиях лесостепной зоны Южного Предуралья только 20 видов и форм растений В результате оценки успешности интродукции пряно-ароматических, эфирномасличных растений, основанной на способности растений сохранять в культуре присущие им в природе габитус и размеры, было установлено, что интродукция 13-ти из 20-ти изученных видов растений перспективна в условиях лесостепной зоны Южного Предуралья Поэтому в дальнейшем было проведено более глубокое изучение химического состава исследуемых образцов растений на содержание основных групп биологически активных веществ, что позволило бы расширить сферу их применения с профилактическими целями

Таким образом, производство сборов может осуществляться как в результате заготовки дикорастущих лекарственных растений местной флоры, так и путем закупки в других регионах страны или введения в культуру отдельных видов растений в Республике Башкортостан, что способствует сохранению природных растительных сообществ и биоразнообразия ценных местных видов

Фармакогностическис исследования, стандартизация разработанных растительных сборов н фитохпмическое изучение интродуцировапных растений

Для внедрения в медицинскую практику новых лекарственных средств, в том числе сборов, необходимо проведение исследований по разработке критериев подлинности, качества, норм их содержания, гарантирующих эффективность, безопасность, воспроизводимость действия, и на основе полученных результатов, проектов ФС

Отбор проб для анализа, изучение характеристик подлинности и показателей качества четырех разработанных сборов, рекомендуемых для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения осуществляли, руководствуясь общими статьями ГФ-Х1 издания

Макроскопический анализ проводили при осмотре составных

компонентов аналитической пробы сборов визуально и с помощью лупы (10х), обращая внимание на структуру растительной смеси, цвет, запах, и вкус водного извлечения, в результате чего были выделены характерные внешние признаки В связи с тем, что разработанные сборы являются многокомпонентными, мы дифференцировали их составляющие по принадлежности к определенной морфологической группе Затем из каждой морфологической группы выделяли отдельные растительные компоненты и их характерные диагностические признаки, необходимые для установления подлинности, на основе которых были разработаны «Определители» для морфологических групп плоды, коры, подземные органы, листья и травы, цветки, входящие в состав сборов, и цветки, составляющие элементы трав

При проведении микроскопического анализа предварительно были выделены диагностически значимые признаки отдельных растительных компонентов сборов, и их проявляемость в пробах порошков сборов Микроскопия всех изученных образцов проиллюстрирована фотографиями Исследуемые сборы включают сырье различных морфологических групп и при их описании важно определение диагностичности компонентов при совместном присутствии Это связано с тем, что сборы могут выпускаться не только в измельченном виде, фасованные в пачки, но и в порошкованном в фильтр-пакетах, что изменяет характер микродиагностических признаков Поэтому следующим этапом работы являлась сравнительная количественная оценка проявления диагностически значимых признаков в образцах ЛРС и сборов для определения их стандартности и качества Результаты исследований представлены в таблице 1

Таблица 1

Проявляемость микродиагпостически значимых признаков

Диагностически значимые признаки, %

м Наименование сырья в отдельных видах ЛРС в сборах

СБОР №1

1 Кора дуба 40,0±0,8 33,1±1,5

2 Трава дошшка 35,3±0,5 23,7±0,7

3 Корень солодки 39,2±0,8 24,4±1,1

4 Трава горца птичьего 41,5±1,1 28,0±1,4

5 Корни лопуха 36,4±0,7 25,7±0,8

6 Листья мать-и-мачехи 37,5±0,4 28,1±1,5

7 Трава пустырника 46,4±0,9 26,2±1,2

8 Трава сушеницы 26,2±0,8 22,6±0,9

9 Трава эхинацеи 38,3±0,6 21,7±0,6

СБОР №2

1 Корневища и корни девясила 40,5±0,6 31,0±1,6

2 Цветки календулы 42,6±1,1 35,3±1,2

3 Листья крапивы 60,0±1,5 38,5±1,7

4 Листья подорожника 53,4±1,2 36,7±1,2

5 Плоды шиповника 46,3±1.2 38,5±0,8

6 Трава польши обыкновенной 40,8±1,3 36,7±1,1

Продолжение таблицы 1

7 Створки фасоли 33,8±0,4 31,5±1,0

8 Трава эхинацеи 38,3±0,6 24 <4±0,5

СБОР №3

1 Трава сушеницы 26,2±0,8 20,4±0,8

2 Трава горца птичьего 41,5±1,1 30,6±1,7

3 Плоды фенхеля 38,1±1,0 23,4±0,9

4 Цветки ромашки 35,3±0,6 26,9±1,6

5 Корни солодки 39,2±0,8 34,7±1,2

6 Плоды рябины обыкновенной 36,7±0,5 25,5±1,3

7 Листья подорожника 53,4±1,2 42,5±2,8

8 Трава пустырника 46,4±0,9 28,5±1,5

9 Корневища и корни девясила 40,5±0,6 31,8±1,4

10 Листья крапивы 60,0±1,5 36,5±2,5

СБОР №4

1 Корневища лапчатки 36,6±0,6 29,4±1,6

2 Листья шалфея 46,3±1,0 34,8±1,5

3 Листья мяты перечной 47,2±1,3 36,4±1,4

4 Корневища и корни девясила 40,5±0,6 30,7±1,3

5 Трава зверобоя 39,7±0,7 27,8±1,0

6 Трава тысячелистника 35,3±0,6 21,б±1 2

7 Трава череды 39,3±0,5 32,4±1,7

8 Плоды фенхеля 38,1±1,0 24,7±1,1

9 Кора крушины 36,2±0,8 21,6±0,5

Таким образом, процент проявления диагностически значимых частиц компонентов в сборах снижается, по сравнению с проявлением этих признаков для отдельных растительных компонентов сборов, что объясняется снижением частоты встречаемости значимых частиц при анализе многокомпонентных смесей

Для разработки дополнительных характеристик подлинности сборов мы провели изучение химического состава и определение числовых показателей качества

В сборах определяли показатели влажности, золы общей, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, измельченность сырья, содержание примесей (органических и минеральных), суммы экстрактивных веществ При этом, максимальное извлечение экстрактивных веществ из сборов наблюдалось при использовании в качестве экстрагента спирта этилового 40% -в сборах №1, №4, 50% - в сборе №2, 70%- в сборе №3 Извлечение водой, также показало достаточно высокие результаты, что имеет значение при использовании сборов в качестве водных извлечений для приема внутрь

Биологически активные вещества в изучаемых сборах представлены веществами разнообразной химической природы, которые обеспечивают совокупное профилактическое и лечебное действие Для обнаружения

отдельных групп БАВ были проведены качественные реакции с 10% водным извлечением из сборов В результате были обнаружены следующие группы веществ в сборах №№ 1-4 полисахариды, дубильные вещества, флавоноиды, сапонины, аминокислоты, в сборе №4 - дополнительно антраценпроизводные

Обнаружение и идентификацию БАВ осуществляли также с использованием хроматографических и спектральных методов исследований в сравнении со стандартными образцами Методом ТСХ установлено присутствие в сборах №№ 1 - 4 аскорбиновой кислоты, каротиноидов (присутствие а и ß - каротина подтверждено спектральными характеристиками), в сборах №2, №3, №4 - витамина Кь в сборе №4 -антраценпроизводных

С целью разделения фенольных соединений проводили избирательную экстракцию последовательно хлороформом, зтияацетатом и бутанолом Для анализа агликонов флавоноидов спиртовые извлечения сборов подвергали гидролизу и экстрагировали диэтиловым эфиром

Флавоноиды обнаруживали в этилацетатной фракции сборов Наилучшее их разделение методом одномерной БХ наблюдалось в системах I - н-бутанол -уксусная кислота - вода (4 1,2), И-15% уксусная кислота, III - муравьиная кислота - уксусная кислота - вода (4 1 3), методом двумерной - в системах I и II Детектирование зон флавоноидов проводили как по собственной флюоресценции веществ в УФ-свете (при X = 254 и 366 нм), так и с помощью проявителей 5% спиртовый раствор алюминия хлорида, пары аммиака Для сравнения использовали достоверные образцы свидетелей флавоноидов Результаты хрома-тографического анализа флавоноидов сборов №№ 1 - 4 свидетельствовали, что зоны адсорбции соединений данной группы' в видимом свете имели бледно-желтую окраску, в УФ-свете обладали собственной флюоресценцией - от желтой, желто-зеленой до коричневой, которая усиливалась после проявления хро-могенными реактивами В системах растворителей I и II обнаружено 12 зон адсорбции в сборе №1,9 зон адсорбции в сборе №2,14 зон адсорбции в сборе №3 и 11 зон адсорбции в сборе №4, из которых к веществам флавоноидной природы можно отнести 9 зон в сборе №1,6 зон в сборе №2, 11 зон в сборе №3 и 9 зон в сборе №4

Обнаружение флавоноидов с помощью ТСХ проводили в системах «н-бутанол - уксусная кислота - вода (4 1 5)» и «этилацетат - уксусная кислота -вода (5 1 1)», при этом наилучшее разделение наблюдалось в системе «этилацетат - уксусная кислота - вода» В этилацетатной фракции установлено присутствие рутина в сборах №№ 1 - 4 (Rp-0,28), гиперозида в сборах №1 и №3 (Rr-0,42), лютеолин-7-глюкозида в сборах №№ 1-4 (Rf~0,57), авикулярина в сборах №1 и №3 (Rj~0,70), ликуразида в сборах №1 и №3 (Rp-0 45) Обнаружение агликонов флавоноидов проводили после кислотного гидролиза В эфирной фракции обнаружили кверцетин в сборах №№ 1 - 4 (Rf—0,98), мирицетин в сборе №4 (Rf~0,87), апигенин в сборах №№ 1 - 4 (Rf~0,46), кемпферол в сборе №1 (Rr0,88)

Обнаружение оксикоричньгх и фенолкарбоновых кислот проводили методом БХ в этилацетатной фракции При этом наилучшее разделение наблюда-

лось в системе I и IV - 2% раствор уксусной кислоты Методом ТСХ хорошее разделение наблюдалось в системе «хлороформ - метанол - вода (62 32 7)» Детектирование зон оксикоричных и фенолкарбоновых кислот проводили также по собственной флюоресценции в УФ-свете и после обработки хромогашыми реактивами (пары аммиака, 3% спиртовый раствор треххлористого железа, раствор диазотированной судьфаниловой кислоты), сравнивая с аутентичными образцами свидетелей Оксикоричные и фенолкарбоновые кислоты обнаруживали по ярко-голубой, зеленовато-голубой, фиолетовой флюоресценщш, которая становилась интенсивнее после обработки проявляющими реактивами Методом ТСХ установлено присутствие в сборах №№ 1 - 4 кофейной (Rf—0,73), хло-рогеновой (Rr-0,36), галловой (Rf-0,64) кислот

Обнаружение кумаринов проводили в хлороформной фракции методом ТСХ в системах «этилацетат - бензол (1 2)» и «хлороформ - петролейный эфир (1 2)» Наилучшее разделение наблюдалось в системе «этилаиетат - бензол» Кумарины обнаруживали по ярко-голубой флюоресценции в УФ-свете до обработки хромогенными реактивами, а после обработки пятна приобретал! флюоресценцию от кирпично-красного до сине-фиолетового цвета Наблюдали появление 7 зон адсорбции в сборе №1, 6 зон адсорбции в сборе №2, 8 зон адсорбции в сборе №3 и 5 зон адсорбции в сборе №4, из которых к соединениям кума-риновой природы можно отнести 5 зон в сборе №1, 4 зоны в сборе №2 и №3, 3 зоны в сборе №4

Для получения более объективной информации изучения фенольного комплекса наиболее интенсивные зоны флавоноидов и оксикоричных кислот счищали с пластинок и элюировали 96% этиловым спиртом при нагревании на водяной бане с обратным холодильником Контроль за составом элюированных фракций осуществляли хроматографически Операцию повторяли до получения достаточного количества исследуемых веществ

Для идентификации выделенных веществ использовали спектральные методы УФ- и ИК-спектроскопию, которые в комплексе позволяют установить наличие, положение и характер заместителей Спиртовые растворы выделенных веществ анализировали при аналитически значимых интервалах оптической плотности и вещества идентифицировали по спектрам их поглощения в ультрафиолетовой области, которые характеризовались наличием двух максимумов поглощения для флавоноидов - рутин (при 361 и 258 нм), кверцетин (при 374 и 258 нм), кемпферол (при 368 и 258 нм), люгеолин-7-глюкозид (при 352 и 266 нм), апигенин (при 338 и 270 нм), гшерозид (при 359 и 254 нм), для оксикоричных кислот - галловой (при 276 и 222 нм), хлорогеновой (при 324 и 300 нм) и кофейной (при 324 и 292 нм), а также характерным сдвигам максимумов поглощения при использовании соответствующих диагностических добавок (этилата или метилата натрия, алюминия хлорида) Данные ТСХ анализа (значения Rf) и спектральных исследований сопоставляли друг с другом Для идентификации препаративно выделенных индивидуальных веществ в инфракрасной области готовили гомогенизированные суспензии в вазелиновом масле Отмечали наличие интенсивной широкой полосы с максимумом при 3370 см'1 для рутина, который

обусловлен валентными колебаниями спиртовых и фенолышх групп, полоса 1654 см'1 принадлежит карбонильной группе у-пирона, ряд полос 1610, 1584, 1510, 1456 см"1 дают ароматические связи (>С=С<) У кверцетина в ИК-спектре были обнаружены полосы валентных колебаний при 3300-3500 см1, соответствующие гидроксильным группам, 1660 см'1 (>С=О), 1612, 1558, 1522, 1462 см'1 (>С=С<) ИК-спектр кемпферола характеризуется полосами валентных колебаний при 3274-3520 см"1 (пвдроксильные группы), 1654-1665 см'1 (карбонильная группа у- пирона), 1610, 1510, 1462 см"1 (>С=С<) В ИК-спекгре апигенина наблюдались полосы при 3286-3410 см"' (фенольные ОН-группы), 1648-1660 см1 (карбонильная группа у- пирона), 1580, 1492 и 1450 см" 1 (>С=С<) Для ИК-спектров изолированных оксикоричных кислот характерны валентные колебания при 1252-1300 см"1 (>С=С<), 1640-1705 см1 (коричный фрагмент), 3280-3430 см'1 (наличие гндроксильных групп)

Для достоверного подтверждения качественного и количественного анализа фенольного комплекса сборов применяли метод ВЭЖХ Анализ проводили на хроматографе с УФ-детектором при длине волны 360 нм В качестве неподвижной фазы использовали обращено-фазную металлическую колонку Luna С18 длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненную адсорбентом Phenomenex (США) с диаметром частиц 5 мкм Анализ проводили методом градиентного эдюирования при комнатной температуре Градиентная подача ацетонитрила проходила с 0 до 70% в 0,2% водном растворе трифторуксусной кислоты за 30 минут с объемной скоростью 1 мл/мин Ввод пробы осуществлялся с помощью инжектора с дозирующей петлей 20 мкл Для анализа получали спиртовые извлечения с экспериментально подобранными условиями Параллельно готовили серию 0,05% спиртовых растворов сравнения флавоноид-ных соединений и оксикоричных кислот

Идентификацию проводили путем сопоставления времен удерживания компонентов смеси и растворов сравнения Результаты исследований представлены на рис 2-5

В сборе №1 (рис 2) установлено присутствие 34 веществ, из которых 8 идентифицированы как флавоноиды (рутин, авикулярин, лютеолин-7-глюкозид, кверцетия, изокверцетин, гиперозид, ликуразид, апигенин) и 3, как оксикоричные кислоты (галловая, хлорогеновая и кофейная)

No Время Высота Высота Площадь Площадь ТТ Название

мин mV % mV*ceK %

1 0.1117 С.20 0.00 2 .80 0, .00 2

2 1.418 0.24 0.00 1 .58 0. .00 1086

3 2.706 1357.69 12.26 17713 .47 11, .55 973

4 2.997 2213.6S 19.99 47725. .65 31. .11 432

5 3.899 1052.83 9.51 7552 .90 4, ,32 6342 Галловая кислота

6 4.437 806.21 7.28 14146 .64 9, .22 1444

7 4.644 292.23 2.64 1647 .41 1, .07 15320

S 5.193 12.30 0.11 143 .00 0, .09 4639 Хлорогеновая кислота

9 5.915 25.76 0.23 299 .32 0. 20 5955 Кофейная кислота

10 6.484 876.55 7.91 9653 .23 6 ,29 7833 рутин

11 6.805 31.83 0.29 146 .79 0, ,10 47557 Лютеолкн- 7~ГЛ2)К05ВД

12 6.973 1858.68 16. 78 22444 .06 14. ,63 7544 Изокверцетин

13 7.473 В 32.92 7.52 16786.85 10. 94 3119 Авихулярин

14 7.705 272.59 2.46 1441 .33 0, .94 45933

15 8.179 29.19 0.26 135 .77 0 .09 68330

16 8.311 50.72 0.46 362 .22 0, .24 30140

17 8.537 18.94 0.17 221 .60 0. ,14 11107

1S 8.873 270.86 2.45 1581 .50 1. ,03 52131 Кверцетин

19 9.035 404.01 3.65 3692 .78 2. ,41 22069

20 S.555 33.65 0.30 199 .85 0. .13 58330

21 9.824 127.09 1.15 2148 .33 1. 40 7501 Гилерозид

22 10.14 16.21 0.15 101, .26 0. 07 59617

23 10.63 45.58 0.41 609. .63 0. 40 13988 Ликуразид

24 11.11 37. 60 0.34 291. .38 0, .19 46389

25 11.37 189.74 1.71 1842 .00 1, .20 31016 Апигенин

26- 34..............

34 16 11036.22 100.18 153402. ,05 100.00 28234

Рис. 2. Хромапгограмма спиртового извлечения сбора №1

В сборе №2 (рис.3) установлено присутствие 24 веществ, из которых 4 идентифицированы как флавоноиды (рутин, кверцетин, изокверцетин, лютеолин-7-глюкозид) и 3, как оксикоричные кислоты (галловая, хлорогеновая и кофейная).

О 1 2 3 4 7 8 9 10 11 12 13 1Г 15~ 16,

РЕЗУЛЬТАТЫ РАСЧЕТА

N0 Время Высота Высота Площадь Площадь тт Название

ьсин ИУ % щу*сек %

1 0.099 0. ,59 0. .01 9.49 0. ,01 1

2 2.658 2251. .62 33 .67 47800.66 55. ,15 349

а 3.018 1094 .50 16 .37 7835.00 9 .04 4007

4 3.998 610. ,00 9, .12 5660.88 6, .53 4062 Галловая кислота

5 4.191 61. 19 0, .92 227.72 0.26 28670

6 4.432 309. 29 4, ,63 5348.12 6. 17 1485

7 4.584 65. ,01 0, .97 721.90 0. 83 385.1

8 5.299 182 .14 2. .72 2305.00 2. .66 4070 Хлорогеновая колота

9 5.942 118. .10 1, .77 1279.90 1, .48 6951 Кофейная кислота

10 6.451 391 .79 5 .86 3074.46 3. .55 , 15203 Рутин

11 6.796 232 ,02 3. .47 1364.21 1, .57 29200 Лютеолин-7-глюкозид

12 6.915 1127 .11 16 .85 6906.52 7, .97 28765 Изокверцетин

13 7.275 136, .69 2. .04 1195.75 1, .38 15596

14 7.587 3. ,65 0. ,05 -832.14 -0. 96 25

15 8.158 13, .61 0, .20 134.98 0. .16 15127

16 Э.б28 2. ,15 0. ,03 23.51 0. ,03 14034

17 8.871 21 .62 0, ,32 159.04 0. .18 32725 кверцетин

18 9.029 28 .60 0. .43 336.90 0. .39 13244

19 9.798 10. .93 0, .16 93.96 0, .11 29412

20 9.906 12 .14 0, .18 132.15 0 .15 18711

21 10.12 1. .84 0, .03 11.72 0, .01 57297

22 10.44 1. ,90 0. .03 -12.93 -0. .01 51030

23 10.74 2 ,91 0 .04 29.64 0, ,03 24569

24 11.16 1. ,36 0, ,02 19 .86 0. ,02 13389

24 16 6711. ,26 100. .36 86669.09 100 .00 15987

Рис.3. Хроматограмма спиртового извлечения сбора №2

В сборе №3 (рис.4) установлено наличие 25 веществ, ю которых 7 идентифицированы как флавоноиды (рутин, кверцетин, изокверцетин, авикулярин, гшероздд, лютеолин-7-глюкозид, ликуразнд) и 3, как оксикоричные кислоты (галловая, хлорогеновая и кофейная).

16 мин

ВЕЗУЛЬ'ЕХ'Ш РАСЧЕТА

N0 Врем* 1 Высота Высота Площадь Площадь ТТ Название

мин ШУ % тУ*сек %

1 1.561 0.00 0. ,00 -0. ,01 -0. .оо 4351

2 2.773 888.56 10. .44 12567. .71 13. .69 865

3 3.04 1254.23 14.74 14606. .26 15 .91 1541

4 4.023 821. 52 9. .65 11484. .41 12 .51 1892 Галловая кислота

5 4 .357 431.11 5. .06 9225. .61 10.05 948

6 5.126 51.04 0. 60 606. .88 0. .66 4042 Хлорогеновая кислота

^ 5.711 85.05 1. 00 1С28. .84 1, ,12 5030

8 6.005 118.37 1. 39 1879. 69 2, .05 3284 Кофейная кислота

9 6,544 194.30 2. ,28 1719, .21 1 .87 12744 Рутин

10 6.808 786.19 9. 24 5423. .85 5. ,91 21994 Лютеолин-7-глж>козид

И 7.049 1127.52 13, .25 10071. .83 10. .97 14065 Изокверцетин

12 7.391 518.49 6. .09 3153. .69 3. .44 33393

13 7.505 1740.17 20. 44 15454. ,70 16. 84 16136 АВИКУЛЯрИН

14 7.711 66.66 0. .78 288. .35 0. .31 72795

15 8.06 68 .63 0, ,81 372. ,17 0 .41 49312

16 8.302 9.41 0. .11 49. .91 0. .05 55487

17 8.545 20.46 0. ,24 139, .10 0. .15 35097

18 8.878 20.37 0. .24 153. ,03 0, .17 31584 Кверцетин

19 9.046 26.97 0. .32 279. .66 0 .30 17182

20 9.635 20.05 0. .24 109 .90 0 .12 70896

21 9.822 33.83 0. ,40 481. .59 0. .52 10707 Гиперозид

22 10.12 12.27 0. 14 98. .14 0, 11 36211

23 10.54 4.83 0. ,06 35. .88 0. .04 45500

24 10.67 36.27 0. .43 395. ,71 0 .42 22762 Лмкураэид

25 11.10 8.46 0. .44 42, .28 0. .05 10104

25 16 8516.26 100. .05 91791. .37 100. .00 31080

Рис. 4. Хроматограмма спиртового извлечения сбора №3

В сборе №4 (рис.5) обнаружено 29 веществ, из которых 7 идентифицированы как флавоноиды (рутин, кверцетин, изокверцетин, гесперидин, лютеолин-7-глюкозид, гиперозид, апигенин) и 3, как оксикоричные кислоты (галловая, хлорогеновая и кофейная).

По отдельным флавоноидам строили градуировочные графики и определяли количественное содержание идентифицированных компонентов, чтобы выявить вещества, доминирующие в сумме, на которые затем вести пересчет.

тУ

2500

2000

1500

1000

500

..и-........1. -

......>--

21. 12 2627 2829 |

спг г ! I г

0 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12 13 14

РЕЗУЛЬТАТЫ РАСЧЕТА

N0 Время Высота Зысота Площадь Площадь ТТ Название

шн тУ % тУ*сек %

1 1.515 8.61 0 10 50.17 0.04 1526

2 2.566 2403.47 27 89 58372.15 42.25 251

3 3.002 582.34 6 76 2342.98 1.70 12561

4 3.344 29.36 0 34 251.78 0.18 3441

5 4.025 2381.90 27 64 40222.73 29.11 1281 Галловая яисмота

б 4 .792 46.49 0 54 508.34 0.37 4344

7 5.155 281.12 3 26 6190.64 4.48 1237 Хяорогеноеая ккслота

а 5.852 97 .88 1 14 1143.89 0.83 5084 Кофейная кислояа

9 6.439 413.39 4 80 7095.25 5.14 3156 £утин

10 6.635 126.08 1 46 807.6" 0.58 23782

11 6.803 87 .54 1 02 396.91 0.29 ' 51697 зтюф ео лин- 7-глюко зид

12 6.984 60.38 0 93 444.59 0.32 35996

13 7.071 33.29 0 39 105.20 0.08 113180 Изокверцетин

14 7.205 45.71 0 53 537.63 0.39 8112

15 7.441 123.94 1 44 786.12 0.57 31105

16 7.675 1206.ЭЗ 14 01 11901.18 8.61 13340 Гесяеридан

1? 8.305 19.30 0 22 105.46 0.08 52175

18 8. «77 68.67 0 80 472.77 0.34 35882

19 8.864 118.66 1 38 1229.37 0.89 16548 кверцетин

20 9.41 в 17.67 О 21 99.54 0.07 62825

21 9.808 85.71 0 99 970.75 0.70 16217 Гиперозид

22 10.33 6.75 0 08 132.20 0.10 5799

23 11.14 106.09 1 23 916.74 0.66 37504

24 11.35 148.14 1 72 1810.22 1.31 19482 Апигенин

25 -29............

29 13.91 8632.56 100 19 138162.11 100.00 25225

Рис. 5. Хроматограмма спиртового извлечения сбора №4

Согласно литературным данным, химический состав растений, входящих в состав сборов, изучен достаточно подробно, но поскольку мы предлагаем новые композиции из этих растений, для нас представляло интерес определить количественное содержание основных групп БАВ, чтобы среди них выбрать приоритетные, по которым в дальнейшем проводить стандартизацию сборов.

Нами проведено количественное определение различных груш БАВ по модифицированным методикам. Результаты содержания некоторых из них представлены в таблице 2.

Таблица 2

Содержание БАВ в сборах

Труппа БАВ Метод определения Числовые показатели, %

СборМ Сбор №2 Сбор №3 Сбор №4

Аскорбиновая кислота Спектрофо-тометрия 3,55±0,07 6,26±0,14 5,08±0,10 4,31±0,14

Органические кислоты Прямое титрование 0,37±0,01 0,50±0,02 0,45±0,02 1,07±0,04

Каротиноиды Спектрофо-тометрия 0,021± 0,001 0,063± 0,003 0,041± 0,002 0,035± 0,001

Эфирные масла Перегонка с вод паром 0,728± 0,023 0,437± 0,010 0,956± 0,025 1,140± 0,025

Содержание алантолактона Обратное титрование - 1,03±0,03 1,40±0,04 2,03±0,05

Сапонины Спектрофо-тометрия 1,37±0,03 1,20±0,04 1,45±0,03 1,18±0,03

Фенолкарбоно-вые кислоты Хромато-спектрофо-тометрия 1,85±0,08 1,06±0,03 1,75±0,06 1,24±0,05

Кумарины Спектрофо-тометрия 0,40±0,02 0,27±0,01 0,45±0,02 0,31±0,01

Антраценпро-изводные Спекгрофо-тометрия - - - 0,95± 0,02

Определен также качественный и количественный аминокислотный состав сборов (табл 3) Полученные данные позволили установить присутствие 14 аминокислот, из которых восемь незаменимых, шесть заменимых и среди них преобладают - пролин, глицин, валин, цистеин и аргинин

Таблица 3

Содержание свободных аминокислот в сборах

Аминокислоты Содержание аминокислот, %

Сбор №1 Сбор N¡2 СборИгЗ Сбор т

Лшин* 0,33±0,01 0,112±0,004 0,21±0,01 0,26±0,01

Метионин* 0,110±0,0 05 0,160±0,006 0,13±0,005 0,133±0,002

Цистеин 0,63±0,03 0,60±0,01 0,53±0,02 0,54±0,02

Гистидин* 0,102±0,004 0,073±0,001 0,08Ш,001 0,094±0,003

Аргинин 0,55±0,02 0,71±0,02 0,51±0,02 0,51 ±0,02

Треонин* 0,28±0,01 0,37±0,01 0,31±0,01 0,28±0,01

Серин 0,44±0,02 0,55±0,01 0,48±0,01 ОДЫ),01

Пролин 1,41±0,06 1,60±0,08 1,40±0,05 1,29±0,05

Глицин 0,86±0,04 0,93±0,05 0,96±0,03 0,85±0,01

Валин* 0,63±0,03 0,73±0,03 1,16±0,04 0,83±0,02

Изолейцин* 0,36±0,01 0,28±0,01 0,19±0,04 0,27±0,01

Лейцин* 0,180±0,008 0,024±0,001 0,091±0,004 0,160±0,008

Продолжение таблицы 3

Тирозин 0,170±0,005 0,22±0,01 0,34±0,01 0,21±0,01

Фенилаланин* 0,31±0,01 0,45±0,02 0,37±0,01 0,32±0,01

У содержание 6,36±0,14 6,80±0,22 6,76±0,18 б,15±0,15

Примечание * - незаменимые аминокислоты

Методом атомно-абсорбционной спектрометрии проведено определение макро- и микроэлементов в растительных сборах, поскольку они играют важную роль в обмене веществ, активизируют ферментные системы и проявляют фармакологическую активность (табл 4)

Таблица 4

Элементный состав сборов__

Наименование элементов Количественное содержание элементов

Сбор Ж Сбор №2 | Сбор №3 Сбор т

Макроэлементы, %

Калий 1,30±0,05 1,20±0,03 1,38±0,06 1,14±0,03

Натрий 0,191±0,008 0,21±0,01 0,24±0,01 0,20±0,01

Кальций 1,26±0,04 1,17±0,03 1,12±0,04 1,29±0,05

Фосфор 0,21±0,01 0,26±0,01 0,21±0,01 0,182±0,006

Микроэлементы, мг/кг

Цинк 78,48±2,14 96,80±4,05 129,90±4,11 76,31±3,15

Железо 233,74±5,14 309,56±7,18 798,06±9,14 298,34±6,24

Медь 2,40±0,11 1,54±0,05 2,20±0,05 2,38±0,08

Марганец 534,70±11,65 543,71±10,14 620,76±15,10 526,36±12,47

Иод 0,150±0,006 0,18±0,01 0,22±0,01 0,161±0,008

В сборах не были обнаружены свинец, ртуть, алюминий, кадмий, что характеризует экологическую чистоту ДРС, входящего в состав сборов В тоже время, наличие и относительно высокое содержание некоторых макро- (К, На, Са, Р) и микроэлементов (Хп, Те, Мл, Си, I), расширяет диапазон применения сборов и область рекомендуемых заболеваний для их профилактического и лечебного использования

Эфирные масла из сборов были получены методом перегонки с водяным паром с подбором оптимальных условий количественного определения Установлено, что максимальный выход эфирных масел наблюдался при использовании навески 30,0 г для сборов №1 и №3, 25,0 г - для сборов №2 и №4, измельченности сырья 2 мм для сбора №2 и 3 мм для сборов №1, № 3 и №4, время перегонки 2 часа для всех сборов Полученные эфирные масла были подвергнуты качественному анализу хромато-масс-спектрометрическим методом Масло растворяли в гексане и раствор с помощью микрошприца дозировали в газовый хроматограф НР 6890 с масс-селективным детектором НР 5973 Разделение компонентов осуществляли на кварцевой капиллярной колонке (30 м х 0,25 мм х 0,25 цм) на метилфенилсиликоне Скорость газа носителя (гелия) 1 мл/мин Температура инжектора 280°С, температура интерфейса 290°С, температура масс-селективного детектора 230°С

Температурная программа: начальная температура колонки 70 С (выдержка 4,5 мин); подъем температуры в диапазоне 70 - 170°С со скоростью 30°С в мин; в диапазоне 170-280°С со скоростью 10°С в мин. Время выдержки при конечной температуре 10 мин; объем вводимой пробы с помощью автосамплера 1 мкл. Давление в инжекторе с 8,8 psi до 22,0 psi. Диапазон масс 39 - 350 а.е.м. Идентификацию компонентов проводили по масс-спектрам электронного удара, фиксируя: названия соединений; времена удерживания; величины количественного вклада в смесь; индекс сходства (Match qulity) библиотечного и полученного спектров, а также учитывая аналитические параметры компонентов эфирных масел (И.Г. Зенкевич, 1997) для идентификации моно- и сесквитерпеновых углеводородов. При этом, индекс сходства с величиной более 90% свидетельствовал об очень хорошем совпадении. В остальных случаях обращали внимание на такие показатели, как коэффициент тождественности, различие «идеального совпадения» и коэффициента тождественности, меру чистоты спектра, коэффициент загрязненности, величину надежности, взаимную корреляцию. Опираясь на наилучшие значения вышеперечисленных показателей и, учитывая результаты масс-спектрометрического изучения процессов диссоциации сесквитерпенов, нам удалось однозначно идентифицировать компонентный состав эфирных масел, выделенных из сборов 1 - 4 (рис.6 - 9). Хроматограммы могут служить дополнительной характеристикой подлинности сборов.

Pile iCi \MSDChem\r\n>«TA\raRPEN ТО - D

2008 16:50

using AeqM«chod

TIC: TERPEN TOX>

Рис. 6 Хроматограмма компонентного состава эфирного масла сбора №I

Анализируя результаты изучения компонентного состава эфирного масла сбора №1 (рис.6) можно отметить, что среди 28 веществ, к монотерпеновым и сесквитерпеновым углеводородам относится 18 и в максимальном количестве содержатся: [1]-а-мууролен (17,99%); [2]-6,10,14-триметил-2-пентадеканон (10,96%); [3]-а-кадинол (8,99%); [4]-про-изводные азулена (4,42%); [5]-эудесма-5,11(13)-диен-8,12-олид (3,59%); [6]-п-мент-1(7)-ен-9-ол (3,23%); [7]-ледол

(2,33%), в меньшем количестве: [8]-а-бисаболол (1,68%), [9]-кариофиллен оксид £1,61%) и [10^-9г1£-дегвд^о-изолонгифолен (1,09%).

Vlal Nuinbez

using AcqMethod GEXANE.t

TIC: TERPEN PR.D

Q

0

0

Q

Рис. 7 Хроматограмма компонентного состава эфирного масла "с6'ора№2

В результате исследования эфирного масла из сбора №2 (рис.7) обнаружено 14 веществ, среди которых к монотерпеновым и сесквитерпеновым углеводородам относятся 10 и преобладают: [1]-эудесма-5Д1(13)-диен-8Д2-олид (27,27%); [2]-а-мууролен (17,04%); [3]-производные нафтофуран-2[ЗН]-он (17,9%); [4]-а-кадинол (7,51%); [5]-2,4-диметил-З-пентанол (5,25%); [6]-производные азулеиа (2,23%); [7]-6,10,14-триметил-2-пентадеканон (2,05%) и [8]-изоборнштанетат (1,96%).

operatoj Acquired Instrument S <»mple Name

ViAl Numbtr

,ap»Viot\TERPE'N JBG.D X7-.08 u&lng AcqMethod OKXANS.I

TERPCN JBQ.O

Рис.8 Хроматограмма компонентного состава эфирного масла сбора №3

В результате исследования эфирного масла, полученного из сбора №3 (рис.8) было обнаружено 36 соединений, среди которых углеводороды моно-терпеновой и сесквитерпеновой природы представлены 26 веществами. В максимальном количестве обнаружены: [1]-п-аллил-анизол (29,52%); [2]-эудесма-5,11(13)-диен-8,12-олид (18,54%); [3]-проюводные нафтофуран-2[ЗН]-он (15,46%); [4]-а-мууролен (7,08%); [5]-производные циклогексена (5,31%); [6]-санталол (2,42%); [7]-а-кадинол (1,86%); [8]-производные азулена (1,57%); [9]-спатуленол (1,41%), в меньшем количестве: а-бисаболол, кариофиллен, ледол, а-калакорен, эвкалиптол. изолонгифолен.

Пт»-> 4.59 ÎJ» 5.

_ 2.09 7.90 ЛОЗ. . &50. .900 9.» 10.00 10.60 11.00 11.60 12,00 11$0_ _>3,й_ J&SP 14 00

Рис. 9 Хроматограмма компонентного состава эфирного масла сбора №4

В сборе №4 компонентный состав эфирного масла представлен 33 веществами, среди которых к монотерпеновыми и сесквитерпеновыми углеводородами относятся 27 (рис.9). В максимальном количестве содержатся: [1]-п-аллил-анизол (30,68%), [2]-эудесма-5,11(13)-диен-8,52-олид (8,36%), [3]-цис-5-метил-2-(1-метилэтил)-циклогексанон (7,33%), [4]-производные нафтофуран-2[ЗН]-он (5,56%), [5]-азулен (4,71%), [6]-метол (3,41%), [7]-а-1-нафталенпропанол (3,60%), [8]-пулегон (2,78%), [9]-камфора (2,74%), [10]-1,5-циклодекадиен (2,92%), [11]-туйон (2,04%), [12]- эвкалиптол (1,73%), в меньшем количестве: кариофиллен, кадинол, копаен, спатуленол, а-бисаболен.

В сборах №1 и №3 проводили также количественное определение гли-цирризиновой кислоты методом ВЭЖХ, в связи с наличием ее в корнях солодки, входящей в их состав. Анализ проводили на хроматографе с УФ-детектором при длине волны 254 нм. Градиентная подача ацетонитрила (растворитель Б) и воды бидистиллированной (растворитель А) с объемной скоростью 1 мл/мин. Для анализа получали спиртовые извлечения с экспериментально подобранными условиями экстракции. Глицирризиновая кислота идентифицировалась по времени удерживания стандартного образца. Расчет количественного содержа-

ния глицирризиновой кислоты производили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной программы и по формуле В результате содержание глицирризиновой кислоты составило в сборе №1 - 1,75±0,03%, в сборе №3 -1,24±0,02%

Учитывая значение отдельных груш БАВ в оказании конечного лечебного эффекта сборов были выделены три группы, представляющие наибольший интерес

- флавоноиды, оказывающие разностороннее влияние на желудочно-кишечный тракт спазмолитическое действие на гладкие мышцы кишечника, желчных путей, желчного пузыря, кровеносных сосудов, противовоспалительное, антисекреторное, гастропротекторное, противоязвенное, капилляроукреп-ляющее и др,

- дубильные вещества, которые при взаимодействии с раздраженной и воспаленной слизистой поверхностью желудка, кишечника образуют защитную пленку, предохраняющую от воздействия раздражающих агентов и микроорганизмов,

- полисахариды, проявляющие иммуномодулирующее, гипогликемиче-ское действие, принимающие участие в общем ггротивоязвенном эффекте, так как повышают резистентность слизистой оболочки желудка, оказывая противовоспалительное, ранозаживляющее и обволакивающее действие

Для разработки методик количественного определения выбранных групп БАВ в сборах нами были подобраны оптимальные условия их проведения выбор экстрагента, соотношение сырья и экстрагента, измельченность сырья, время, кратность экстракции, аналитическая длина волны

Для количественного определения флавоноидов в сборах №№ 1-4 был использован метод дифференциальной спекгрофотометрии При этом, чтобы исключить влияние сопутствующих веществ, к спиртовым растворам извлечений из сборов и растворов-стандартов флавоноидов добавляли комплексообра-зующую добавку (алюминия хлорид (III)), с которым флавоноиды образуют комплексы, устойчивые в кислой среде и наблюдается батохромный сдвиг УФ-спектра по отношению к исходным флавоноидам При сравнении дифференциальных УФ-спектров сборов и стандартных образцов ГСО рутина и кверцетина, присутствующих в большем числе компонентов сборов, установили, что максимум поглощения комплекса флавоноидов наблюдается для сбора №1 и №3 при длине волны 405 нм, сбора №2 - 395 нм, сбора №4 - 400 нм, а для стандартных образцов ГСО рутина - 410 нм, кверцетина - 430 нм (рис 10) Спектры поглощения сборов имеют более близкие максимумы к спектру рутина, поэтому этот флавоноид был выбран в качестве доминирующего в сумме, на который в дальнейшем вели пересчет В качестве аналитических длин волн, полученных путем сопоставления максимумов поглощения вещества-стандарта рутина и флавоноидов сборов, были выбраны точки, располагающихся между их максимальными значениями 408 нм (для сбора №1 и №3), 405 нм (для сбора №4) и 403 нм (для сбора №2)

0,45" 0,4" 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15-" 0,1

0,05"

373нм

л,п"" 430нм

350 355 360 365 370 375 380 385 390 395 400 405 410 415 420 425 430 435 440 445 450

Длина волны, нм

Рис, 10. Спектры поглощения: 1 -рутина, 2 - кверцетина, 3 - сбора №1, 4 - сбора №2, 5 - сбора №3, 6 - сбора №4

В ходе эксперимента было изучено влияние различных факторов на выход флавоноидов из сборов, что позволило подобрать оптимальные условия, при которых необходимо проводить их количественное определение (табл.5).

Таблица 5

Оптимальные условия количественного определения флавоноидов

Условия количественного определения Сбор Же] Сбор №2 Сбор №.5 Сбор №4

Экстрагент (этиловый спирт) 70% 60% 60% 70%

Измельченность сырья 5 мм Змм j 5 мм 3 мм

Соотношение сырье - экстрагент 1:100 (1), 1:50 (II и Ш)

Время и кратность экстракции Трехкратная экстракция по 30 мин

Длина волны 408 нм | 403 нм [ 408 нм j 405 нм j

Концентрация комплексообразователя 5% спиртовый раствор А1С13

Количество комплексообразователя 3 мл 2 мл 2 мл 1 мл

Время комплексообразования ; ЗОмин и комплексы стабильны в течение 1ч

Метрологические характеристики методики количественного определения флавоноидов в сборах отражены в таблице 6.

Таблица 6

Метрологические характеристики методики количественного

определения флавоноидов в сборах___

Объект исследов / X 5 & Р 1 Ах е,%

Сбор №1 9 1,75 0,0221 0,00690 95 2,26 0,05 2,86

Сбор №2 9 1Д4 0,0195 0,00617 95 2,26 0,04 3,51

Сбор №3 9 1,31 0,0164 0,00519 95 2,26 0,04 3,05

Сбор №4 9 1,43 0,0197 0,01028 95 2,26 0,04 2,80

Отсутствие систематической ошибки методики подтверждено «опытами с добавками» ГСО рутина Результаты определения представлены в таблице 7

Таблица 7

Определение флавоноидов с добавками стандартного вещества

Содержание флавоноидов мг Добавлено 1 Должно рутина, мг быть фла-1 воноидов, мг Найдено флавоноидов, мг Ах, мг £, %

Сбор № 1

17,235 0,25 17,485 18,015 0,53 2,94

17,338 0,50 17,838 18,408 0,57 3,10

17,514 0,75 18,264 17,764 -0,50 2,81

Сбор №2

11,435 0,25 11,685 • 12,015 0,33 2,75

11,387 0,50 11,887 12,287 0,40 3,25

11,506 0,75 12,256 11,956 -0,30 2,51

Сбор № 3

13,243 0,25 13,493 13,173 -0,32 2,43

13,347 0,50 13,847 14,257 0,41 2,87

13,186 0,75 13,936 14,286 0,35 2,45

Сбор №4

14,346 0,25 14,596 14,176 -0,42 2,96

14,538 0,50 15,038 15,428 0,39 2,53

14,305 0,75 15,055 15,495 0,44 2,84

Количественное определение дубильных веществ проводили спектрофотометрическим методом с подбором оптимальных условий экстракции в пересчете на галловую кислоту (среда боратного буферного раствора при длине волны 277 нм) и на (+) - катехин (подкисленное извлечение при длине волны 279 нм) Данный метод, в отличие от фармакопейного метода окислительцо-восстановительного титрования, при котором определяется вся сумма окисляемых веществ, позволяет определять дубильные вещества гидролизуемой и конденсированной природы (табл 8)

Таблица 8

Выбор оптимальных условий экстракции дубильных веществ

Концентрация этилового спирта Содержание дубильных веществ, %

Сбор N° 1 Сбор №2 Сбор № 3 1 Сбор ЛЬ 4

в пересчете на галловую кислоту

40% 3,05 ±0,04 1,68 ±0,02 2,17 ±0,03 2,44 ±0,05

50% 3,82 ±0,11 2,03 ±0,08 3,11 ±0,10 3,34 ± 0,09

60% 3,25 ± 0,08 1,18 ±0,03 1,37 ±0,02 2,66 ± 0,04

70% 2,94 ±0,06 1,02 ±0,01 1,21 ±0,03 2,20 ±0,03

в пересчете на (+) - катехин

40% 7,86 ±0,20 4,78 ± 0,06 4,92 ±0,11 8,85 ±0,18

50% 13,24 ±0,34 6,26 ±0,18 7,14 ±0,26 14.05 ±0,35

60% 6,22 ±0,12 3,81 ± 0,07 4,05 ±0,14 7,41 ±0,16

70% 4,68 ±0,08 2,64 ± 0,05 2,71 ±0,16 5,35 ±0,12

В ходе эксперимента было установлено, что максимальный выход дубильных веществ наблюдался в сборах №1 и №4 при использоватш в качестве экстрагента спирта этилового 50% и пересчете на (+)-катехин, что свидетельствовало о преобладании в них дубильных веществ конденсированной природы

Метрологические характеристики методики количественного определения дубильных веществ в сборах отражены в таблице 9

Таблица 9

Метрологические характеристики методики количественного

Объект исследов / X S Sx Р t (PJ) Ах е,%

Сбор №1 9 12,15 0,1549 0,04902 95 2,26 0,35 2,88

Сбор №4 9 13,76 0,1637 0,05176 95 2,26 0,37 2,69

Количественное определение содержания суммы полисахаридов проводили спектрофотометрическим методом после предварительного гидролиза и способности моносахаров восстанавливать в щелочной среде пикриновую кислоту до пикрамовой, с подбором оптимальных условий Данный метод, в отличие от фармакопейного гравиметрического метода, дает представление о содержание в сборах всей суммы Сахаров в свободном и связанном состоянии, переходящих в водное извлечение В результате эксперимента было установлено, что наибольшее их количество содержится в сборах №2 и №3 Оптимальным режимом для проведения количественного определения полисахаридов явились измельченность 2 мм - для сбора №2 и 3 мм для сбора №3, соотношение сырья и экстрагента 1 25 - для сбора №2, 1 50 для сбора №3, соотношение извлечения и 95% этилового спирта, необходимого

для осаждения полисахаридов, в обоих сборах 13 и количество хлористоводородной кислоты, необходимой для гидролиза - 20 мл, аналитическая длина волны 460 нм Метрологические характеристики методики количественного определения полисахаридов отражены в таблице 10

Таблица 10

Метрологические характеристики методики количественного определения _ полисахаридов в сборах _1_____

Объект исследов / X S Р t (PJ) Ах е,%

Сбор №2 9 5,94 0,0841 0,02661 95 2,26 0,19 3,19

Сбор №3 9 4,78 0,0558 0,02082 95 2,26 0,13 2,72

В результате подробного изучения химического состава сборов №№ 1-4 и определения количественного содержания в них различных групп биологически активных веществ, выбраны приоритетные маркеры, по которым предлагается проводить стандартизацию для сборов №1 и №4 - это флавоноиды и дубильные вещества, сборов №2 и №3 - флавоноиды и полисахариды, имеющие не только значение в общем эффекте сборов, но содержащиеся в большем числе компонентов и преобладающие в процентном отношении

Для разработанных сборов было проведено определение микробиологической и радиологической чистоты и установлено, что они удовлетворяют требованиям изменения №3 от 19 06 ОЗг к ГФ-Х1, вып 2 «Методы микробиологического контроля лекарственных средств», а содержание радионуклидов не превышает уровня, установленного требованиями СанПиН 2 3 2 1078-01 и ОФС 42-0013-03 (а, р и у загрязнители отсутствуют)

Результаты проведенных товароведческих, морфолого-анатомических и фотохимических исследований легли в основу разработки проектов фармакопейных статей (ФС) на сборы «Гепапашсреафит - О» - сбор №1, «Гепапан-креафит - Р» - сбор №2, «Ульцерофиг» - сбор №3, «Дисбакфит» - сбор №4, а также технических условий (ТУ 9191-004-26795008-2002) для приготовления чайных напитков из сборов, предназначенных для профилактики заболеваний пищеварительной системы

Таким образом, предложены критерии для оценки качества сборов, выбраны группы БАВ, необходимые для стандартизации и установлены нормы их содержания (табл 11) Для разработанных сборов определяли срок годности в естественных условиях при температуре +20±3,0°С через каждые 6 месяцев и методом «ускоренного старения» Было изучено состояние показателей качества, регламентируемых проектами ФС, и определен срок годности, который составил 2 года при хранении сборов в бумажных пакетах, уложенных в пачки из бумаги или картона, в помещении с относительной влажностью воздуха от 60 до 80%, влажностью сырья от 8% до 12% При этом содержание действующих веществ оставалось на уровне, удовлетворяющем требованиям разработанных проектов ФС

Таблица 11

Числовые показатели качества сборов

Наименование Сбор №1 Сбор №2 Сбор .Ш Сбор №4

показателей

Влажность Не более Не более Не более Не более

14% 14% 14% 14%

Золы общей Не более Не более Не более Не более

13% 11% 13% 11%

Золы, нерастворимой в 10% НС1 Не более 5% Не более 4% Не более 4% Не более 3%

Частиц, не проходящих сквозь сито с от- Не более Не более Не более Не более

верстиями размером 5 мм (сборы №1, №2, №4) и 7 мм (сбор №3) 10% 10% 10% 10%

Частиц, проходящих сквозь сито с отвер- Не более 7% Не более 5% Не более 7% Не более 8%

стиями 0,18 мм

Органической примеси Не более 2% Не более 2% Не более 2% Не более 2%

Минеральной Не более Не более Не более Не более

примеси 1% 1% 1% 1%

Содержание суммы флавоноидов в пере- Не менее 1,5% Не менее 1,0% Не менее 1,2% Не менее 1,3%

счете на рутин

Содержание дубильных веществ в пере- Не менее 10,0% - - Не менее 13,0%

счете на (+)-катехин

Содержание - Не менее Не менее

полисахаридов 5,0% 4,0%

На практике растительные сборы применяются в виде водных извлечений, изготавливаемых в домашних условиях, особенности которых зависят от морфологических групп сырья, входящих в их состав Мы провели исследования влияния на качество водных извлечений режима нагревания и настаивания, гомельченности сырья, соотношение сырья и экстрагента, коэффициента водо-поглощения, температуры экстрагента Для оценки эффективности экстракции проводили качественный анализ водных извлечений с использованием качественных реакций, применяемых для сборов, и хроматографического анализа В результате было доказано присутствие в них тех же групп БАВ, что и в сборах Сравнительный анализ выхода сухого остатка и водорастворимых действующих веществ, по которым предлагалась стандартизация сборов, а именно дубильных веществ, флавоноидов и полисахаридов, позволил установить оптимальные условия для приготовления водных извлечений из сборов режим на-

стоя (15 мин нагревания и 45 мин охлаждения) на кипящей водяной бане (80°С), при соотношении сырья и экстрагента 110, измельченности сырья 5 мм для сборов №1, №2, №4 и 7 мм - для сбора №3 и с учетом коэффициента водо-даглощения

Фитохимическое изучение интродуцированных пряно-ароматических,

эфирномасличных растений Изучен химический состав интродуцированных пряно-ароматических растений и эфирномасличных растений и выделены виды, накапливающие максимальное количество эфирных масел Mentha piperita L (3,05%), Foemculum vulgare Mill (2,48%), Lavandula angustifoha Mill (2,01%), флавоноидов - Ruta graveolens L (3,372%), Thymus serpyllum L (2,856%), Satureja hortensis L (2 417%), аскорбиновой кислоты - Остит menthaefohum H (0,812%), Artemisia dracmculus L (0,789%), Mentha piperita L (0,283%), каротиноидов - Ruta graveolens L (0,313 мг%), Artemisia dracunculus L (0,265 мг%), Mentha piperita L (0,148 мг%), дубильных веществ - Salvia officinalis L (5,400%), Apium graveolens L (5,180%), Satureja hortensis L (5,100%), а также в достаточном количестве аминокислоты, макро- и микроэлементы

Определена ангиоксидантная активность перспективных образцов пряно-ароматических и эфирномасличных растений и установлена прямая зависимость между показателем ангиоксидантной активности интродуцированных растений и содержанием в них биологически активных веществ Виды, накапливающие большее количество БАВ, проявляют высокую антиоксидантную активность полынь эстрагоновая (68,10%), чабер садовый (55,32%), шалфей лекарственный (53,15%) Несколько меньше этот показатель у мяты перечной (52,10%), базилика священного (51,12%), фенхеля обыкновенного (35,10%) Наименьшее значение ангиоксидантной активности наблюдалось у пажитника голубого - 5,33%, у которого и содержание БАВ по сравнению с другими образцами сравнительно ниже

Среди изученных интродуцированных растеши целый ряд объектов относится к лекарственным и разрешены для применения в медицине Например, фенхель обыкновенный, мята перечная, шалфей лекарственный, которые являются составными компонентами разработанных сборов, а также тимьян ползучий, лаванда узколистная, сельдерей пахучий и др Многие из них широко используются, как в качестве индивидуальных видов сырья, так и в составе комплексных растительных препаратов и композиций, как противовоспалительные, антибактериальные, спазмолитические, желчегонные, репаративные средства, для улучшения пищеварения, благодаря своим ценным фармакологическим свойствам Все это имеет большое значение для профилактики различных заболеваний, в том числе пищеварительной системы

Технологические исследования по разработке лекарственных форм на основе сборов

Изучение оптимальных условий получения сухих экстрактов из сборов Многокомпонентные лекарственные растительные сборы являются наиболее популярной и широко используемой формой переработки лекарственного

растительного сырья Однако, неудобство применения сборов, связанные с их дозироваиием, приготовлением водных извлечений в соответствующем режиме, короткий срок хранения, ставят актуальным вопрос о разработке рациональной лекарственной формы на их основе - сухих экстрактов, которые являются наиболее приемлемым вариантом для увеличения срока годности и точности дозирования

Основными факторами, влияющими на скорость и полноту экстракции биологически активных веществ га растительного сырья, являются тип экстра-reirra, температура, гомельченность сырья, продолжительность экстрагирования, гидродинамические условия На основании полученных результатов исследований выбраны оптимальные условия для получения сухих экстрактов из сборов экстрагент - вода очищенная, температура (80-85°С), соотношение сырье - экстрагент 1 10, время экстракции 120 минут и трехкратная экстракция обеспечивала истощение сырья по основным компонентам в среднем на 80-90% от исходного содержания в сборах Таким образом, была разработана схема получения сухих экстрактов из сборов, которая включает следующие основные стадии экстрагирование, очистку водного извлечения, упаривание, сушку, фасовку готовой продукции

Получение опытных серии сухих экстрактов проводилось на оборудовании предприятия ООО «Травы Башкирии» в экстракторе из нержавеющей стали с ложным дном, вместимостью 150 л, с мешалкой лопастного типа, делающей 60 о б/мин, боковым загрузочным люком, паровой рубашкой и гильзой для термометра Объединенные водные извлечения фильтровали через друк-фильтр, затем давали экстракту отстояться 2-3 часа и сепарировали Упаривание водных извлечений из сборов проводили при температуре 50°С, давлении 0,6 Мпа до 1/10 первоначального объема, на вакуумном ротационном испарителе производительностью 20 л/ч, температуре греющего пара 60°С, охлаждающей жидкости 50°С, скорость упаривания 2 л/час Полученные густые экстракты сушили с помощью распылительной сушилки при давлении 0,5 Мпа, температуре на входе 160°С, на выходе 80°С Скорость подачи жидкости - 2,0 л/г Процент выхода готовых экстрактов из сборов составил для сбора №1 - 20,43 ± 0,21%, сбора №2 -21,71 ± 0,15%, сбора №3 - 20,52 ± 0,08% и сбора №4 - 21,27 ± 0,02%

Сухие экстракты представляли собой аморфные порошки от зеленовато-до буровато-коричневого цвета, специфического запаха, гигроскопичные, растворимые в горячей воде и в 20-40% этиловом спирте

Результаты качественного анализа (качественные реакции, методы БХ, ТСХ и ВЭЖХ-анализа), количественного определения основных действующих веществ по методикам, разработанным для исходных растительных сборов, подтвердили присутствие в экстрактах веществ, обнаруженных в сборах

Для полученных сухих экстрактов были определены основные технологические показатели их качества (табл 12)

Таблица 12

Показатели качества сухих экстрактов из сборов

Показатели качества Исследуемый объект

Сбор Кв1 Сбор №2 Сбор №3 Сбор №4

Влажность, % 2,75±0,08 2,46±0,05 3,28±0,10 3,41±0,12

Объемная плотность,г/см3 0,45 ± 0,02 0,53 ±0,02 0,52 ±0,01 0,55 ± 0,02

Сыпучесть, г/с 0,74 ±0,03 0,81 ±0,04 0,80 ±0,03 0,76 ± 0,02

Угол естественного откоса,0 34,0 ±1,2 36,0 ±1,5 37,0 ±1,8 35,0 ±1,3

Насыпная масса, г/см3 0,64 ±0,02 0,73 ± 0,03 0,54 ±0,01 0,64 ±0,03

Содержание суммы флавоноидов 4,98±0,21 3,02±0,14 3,96±0,18 4,47±0,20

Содержание дубильных веществ 24,80±0,58 17,03±0,46 19,55±0,52 27,43±0,64

Содержание полисахаридов 10,23±0,34 15,7610,64 12,22±0,45 8,68±0,26

Таким образом, используемая схема получения сухих экстрактов позволяет добиться извлечения основных веществ, присутствующих в исходных сборах и обусловливающих лечебное действие На экстракты из сборов №№ 1-4 совместно с ООО «Травы Башкирии» разработаны технические условия (ТУ 9168-007-26795008-2003)

Разработка лекарственных форм на основе масляного растительного 'экстракта Масляный экстракт получали из изученного ранее сбора «Экзофит» по разработанной нами технологии (патент № 17523957) Стандартизацию вели по следующим показателям внешние признаки, плотность, показатель преломления, кислотное число, число омыления, йодное число и содержанию основных действующих веществ - каротиноидов

Разработка и изучение геля с масляным растительным экстрактом В настоящее время полимеры приобретают все большее значение в технологии, ввиду возможности получения лекарственных форм с заданными технологическими параметрами В качестве основы использовали сополимер стирола с малеиновым ангидридом (ССМА), который обладает выраженными противовирусными свойствами и за счет своей структуры может улучшить технологические свойства новой разрабатываемой лекарственной формы Выбор оптимального состава гидрофильной основы проводили путем переменного изменения процентного содержания ингредиентов ССМА и воды (0,5 - 4%) У геле-вых композиций исследовались технологические показатели - однородность, намазываемость и консистенция Учитывая эти характеристики, для дальнейших исследований была выбрана гидрофильная основа, содержащая 2% ССМА В подобранную основу вводили растительный масляный экстракт в разных соотношениях Оценку стабильности полученных гелей с растительным масляным экстрактом и способности к выделению жидкой фазы (масла, воды и дру-

rax компонентов) проводили, применяя центрифугирование исследуемых образцов в сочетании с изменяющимися температурными воздействиями На основании полученных результатов был подобран оптимальный состав гелевой композиции, содержащий 20% растительного масляного экстракта и 80% гидрофильной основы (2% ССМА) («Экзофитогель»)

Определены реологические свойства гидрофильной основы и «Экзофито-геля» (динамическая вязкость, напряжение сдвига, скорость деформации) Сравнивая зависимости величин динамической вязкости от скорости сдвига, как для основы, так и для «Экзофитогеля», следует отметить, что при возрастании скорости сдвига величины динамической вязкости обоих образцов резко падают Такая зависимость свидетельствует о наличии структуры в изучаемых системах Введение масляного экстракта в гидрофильную основу несколько снижало его упруго-пластичные свойства, что способствует получению лекарственной формы с необходимыми технологическими параметрами - легкость нанесения и хорошее распределение по поверхности кожи и слизистой

Для разработанной лекарственной формы и гидрофильной основы определена осмотическая активность Исследования показали, что введение в гидрофильную основу масляного растительного экстракта приводит к снижению осмотической активности, что связано с гидрофобными свойствами добавляемого масляного экстракта Определены показатели рН лекарственной формы и гидрофильной основы и установлено, что «Экзофитогель» имеет нейтральную реакцию, а незначительное смещение рН в кислую сторону при хранении, не приведет к нарушению естественной кислой реакции слизистой, что может препятствовать размножению микроорганизмов

При разработке метода стандартизации «Экзофитогеля» использовали грушу каротиноидов, для количественного определения которых проводился подбор условий, позволяющих разрушить гель, представляющий гидрофильную систему и максимально извлечь липофильные вещества (табл 13)

Таблица 13

Подбор условий экстракции каротииоидов из гслевых основ

М

Навеска

Условия

Разрушения геля

Экстракция гексаном (25 мл)

Оптич плотя D

15,0

25%НС1, рН =5,5

Однократная экстракция, 1ч

0,016

20,0

25% НС1, рН =5,5

Однократная экстракция, 2ч

0,018

20,0

25% НС1, рН =5,5

Однократная экстракция, Зч

0,038

20,0

развед НС1

Однократная экстракция, 1ч

0,127

20,0

нагревание (30-40 С)

Однократная экстракция, 1ч

0,015

20,0

этанол, 30 мл

Однократная экстракция, 1ч

0,151

20,0

этанол, 30 мл

Двухкратная экстракция, 1ч

0,249

Важным показателем лекарственной формы является способность обеспечивать оптимальную биологическую доступность лекарственного вещества В качестве модельной среды, характеризующей гидрофильно-лииофильный баланс структур организма, оптимально приближающейся по своим свойствам к

живой ткани, использовали экспериментально установленную среду, состоящую из равных частей эмульсий прямого и обратного типа. Результаты исследований показали, что степень высвобождения каротиноидов из гидрофильной основы достаточно высокая (70,19%) Это может свидетельствовать о выраженности ожидаемого терапевтического эффекта В качестве консерванта использовалась смесь нипагина и нипазола в соотношении 7 3 0,2% Изучение стабильности геля в процессе хранения позволило установить срок годности - 2 года при хранении в алюминиевых тубах с лаковым покрытием в прохладном, защищенном от света месте

Разработанная лекарственная форма имеет перспективы использования в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства при лечении воспалительных процессов слизистой оболочки желудка, что было подтверждено фармакологическими исследованиями

Разработка состава и изучение фитокарандашей с масляным растительным экстрактом

В задачи исследования входило создание рациональной лекарственной формы, содержащей масляный растительный экстракт, рекомендуемой для профилактики и лечения воспалительных заболеваний полости рта как первичного звена пищеварительного тракта, имеющей хорошую фиксацию, равномерное распределение на поверхности слизистых оболочек, приятный запах, вкусовые качества и удобство применения В качестве лекарственной формы, для которой планировалось подобрать оптимальный состав и разработать технологию получения были выбраны карандаши Нами были составлены разные варианты составов основ, с различным количественным содержанием масляного экстракта и вспомогательных веществ, для 'которых проведены испытания по определению намазываемости и температуры плавления В результате исследований были выбраны три оптимальных состава, отвечающие всем технологическим требованиям

♦ основа 1 масло какао 2,0 + эмульгатор Т-2 0,02 + пентол 0,14 + масляный экстракт «Экзофит» 0,2,

♦ основа 2 масло какао 2,0 + эмульгатор Т-2 0,02 + эмульсионный воск 0,2 + масляный экстракт «Экзофит» 0,12,

♦ основа 3 масло какао 2,0 + эмульгатор Т-2 0,02 + эмульгатор №1 0,1+ масляный экстракт «Экзофит» 0,12

Для изучения взаимного влияния компонентов основообразующих составов и для выбора оптимальной основы, в исследуемых композициях были определены значения биодоступности и высвобождаемости действующих веществ т vitro методом диффузии в агаровый гель Доминирующей группой действующих веществ являлись каротиноиды, высвобождаемость которых определяли путем экстракции петролейным эфиром с разрушением системы основы, содержащей экстракт, путем добавления 96% этилового спирта На основании проведенных исследований установлено, что максимальный выход каротиноидов наблюдался из состава основы №1 (рис 11)

Рис II Высвобождение каротиноидов из различных основ карандаша

Для всех композиционных составов основ были определены значения твердости по разработанной нами методике Установлено, что на твердость карандашей влияет содержание таких ингредиентов как эмульгатор №1 и эмульсионный воск Оптимальным составом с хорошей намазываемостью и равномерным распределением на поверхности слизистой оболочки полости рта явилась основа №1, которая была выбрана для дальнейших исследований

Для коррекции вкусовых качеств карандаша было изучено введение нового вспомогательного вещества коллидона CL - М, который обладает выраженными свойствами гелеобразования и маскировкой вкуса Установлено, что полное корригирование вкуса обеспечивает введение 8% коллидона от массы карандаша Определение биодоступности показало, что при 8%-ном содержании коллидона увеличиваются значения биодоступности и улучшается намазы-ваемость С учетом изученных технологических параметров различных составов основ карандашей была разработана схема их приготовления, включающая следующие стадии сплавление компонентов основы (80-90°С) по мере убывания их температур плавления, добавление рассчитанного количества поверхностно-активных веществ и пластификатора, перемешивание, добавление необходимого количества экстракта до получения однородной массы, фасовка готового продукта

Изучена стабильность карандашей в процессе хранения и определен срок годности - 1,5 года при хранении в пластмассовых пеналах с завинчивающейся крышкой в прохладном, защищенном от света месте

Фармакологические исследования сборов н лекарственных форм

на их основе

Исследования безопасности разработанных растительных средств показали что, они относятся к группе практически нетоксических веществ, так как при однократном введении в желудок в максимально возможных дозах они не вызывали гибели животных в течение двух недель наблюдения Изучение эффективности применения растительных сборов и лекарственных форм на их основе проводили при моделировании хронического панкреатита, гепатита, язвенной

болезни желудка, дисбактериоза кишечника на животных и исследовании их профилактического и лечебного действия

Активность действия сборов для лечения хронического панкреатита и гепатита в стадии обострения (сбор №1) и ремиссии (сбор №2) оценивали по результатам определения уровня ферментов ACT, АЛТ, ЛДГ, а-амилазы в крови, копрологического анализа кала животных и гистологическим исследованиям ПЖ и печени Проведенные исследования показали, что применение сборов уменьшает дегенеративно-деструктивные процессы в поджелудочной железе, печени и постепенно восстанавливают их функциональную активность

Фармакологические исследования растительных средств, предлагаемых для лечения язвенной болезни желудка, проводили, оценивая состояние слизистой оболочки пилорического и функционального отделов желудка, характеру и количеству эрозивных, язвенных повреждений, и, по результатам гистологических исследований желудка экспериментальных животных Установлено, что сбор №3 и сухой экстракт на его основе обладают отчетливым гастрозащитным действием на моделях острых язв желудка и проявляет выраженный гастропро-текторный эффект на развитие хронического язвенного процесса у животных Применение «Экзофитогеля» на основе масляного экстракта показало наибольшую его активность на ранних сроках лечения язвы желудка, проявляющуюся в восстановлении покровного эпителия, сохранении слизистого барьера и активном образовании грануляционной ткани

Эффективность местного применения разработанного фитокарандаша, предлагаемого для лечения воспалительных заболеваний полости рта как первичного звена пищеварительного тракта, подтверждена микробиологическими исследованиями

Изучение профилактического и лечебного действия сбора №4 и сухого экстракта на его основе на животных с моделированным дисбактериозом кишечника показало, что при их применении патологические дисбиотические изменения кишечника быстрее приходах в норму и восстанавливаются нормальные показатели микробиоценоза

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

1 Изучено современное состояние фармацевтического рынка лекарственных растительных препаратов в Республики Башкортостан, применяемых при лечении заболеваний органов пищеварения, определены показатели потребности и спроса на них и обоснована целесообразность разработки новых растительных средств

2 Предложен научно-методологический подход и алгоритм действий к созданию новых многокомпонентных растительных сборов для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения.

3 На основе литературных данных, результатов скрининга биологической и фармакологической активности, разработаны и обоснованы составы четырех новых растительных сборов для профилактики и комплексного лечения в стадии обострения и ремиссии хронического панкреатита и гепатита, язвенной болезни желудка, дисбактериоза кишечника и новые лекарственные формы (гель

и карандаш) на основе масляного экстракта из разработанного ранее пятого сбора для комплексного лечения воспалительных заболеваний слизистых оболочек желудка и полости рта, как первичного звена пищеварительного тракта

4 Определена ресурсная обеспеченность составных растительных компонентов сборов и установлено, что они имеют достаточные для промышленной заготовки в условиях Республики Башкортостан запасы, изучена возможность интродукции в лесостепную зону Южного Предуралья пряно-ароматических и эфирномасличных растений и выявлено 13 видов, являющихся перспективными для введения в культуру

5 Разработаны «Определители» морфологических групп растительных компонентов сборов, выявлены диагностически значимые микроскопические признаки лекарственного растотельного сырья и сборов, необходимые для установления их подлинности и стандартности

6 Изучен качественный и количественный состав сборов, шпродуцированных пряно-ароматических, эфирномасличных растений с использованием современных методов анализа, выделены и идентифицированы БАВ из группы фла-воноидов и оксикоричных кислот, с использованием метода ВЭЖХ изучен фе-нольный комплекс сборов и определено содержание глицирризиновой кнелоты, методом хромато-масс-спектрометрии щучен компонентный состав эфирных масел из сборов и определен процент их содержания в смеси, разработаны методики количественного определения основных групп БАВ суммы флавонои-дов в пересчете на рутин в сборах №1 - №4, суммы полисахаридов в сборах №2, №3, суммы дубильных веществ в пересчете на (+) - катехин в сборах №1, №4

7 Разработаны критерии для оценки качества и нормы содержания биологически активных веществ, которые включены в проекты ФС на сборы Species «Hepapancreaphytum - О», Species «Hepapancreaphytum - R», Species «Ulcero-phytum», Species «Disbacphytum»

8 Установлено влияние основных факторов на выход биологически активных веществ тип экстрагента, степень измельченности, соотношение сырья и экстр агент а, температура, длительность, кратность экстракции и предложена схема получения сухих экстрактов из сборов, определены показатели их качества

9 Разработаны состав, технология получения и методы стандартизации лекарственных форм на основе масляного растительного экстракта (гель и карандаш)

10 Экспериментально доказано специфическое профилактическое и лечебное действие разработанных сборов, сухих экстрактов при хроническом панкреатите, гепатите, язвенной болезни желудка, дисбактериозе кишечника и перспективность использования лекарственных форм на основе масляного экстракта в качестве противовоспалительных и ранозаживляющих средств

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Исследования по созданию новых лекарственных растительных средств //Российский национальный конгресс «Формирование приоритетной лекарственной политики» Материалы конгресса - Москва, 1995 - С 182-184 (Соавт Т И Никитина, Н В Кудашкина, Ю Г Афанасьева)

2 Обоснование составления и стандартизации сборов //II Научный конгресс «Традиционная медицина теоретические и практические аспекты» Материалы конгресса - Чебоксары, 1996 - С 90 (Соавт Т И Никитина, ФАЗарудий, H В Кудашкина)

3 Разработка методов стандартизации многокомпонентных сборов // Всероссийская конференция «Теоретические и практические аспекты изучения лекарственных растений» Материалы конференции - Томск, 1996 - С 117-119 (Соавт Т И Никитина, Ю Г Афанасьева, С Р Хасанова)

4 Оценка активности препаратов из сбора экзофита // V Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Тезисы докладов - Москва, 1998 - С 398 (Т И Никитина, CP Хасанова)

5 Меры профилактики рецидивов хронического панкреатита у больных с сопутствующей гастродуоденальной патологией //Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии - Москва, 2001 -Т 11, №5, Прил №15 - С 64 (Соавт Э Р Валитова, Р Р Газизова, Т И Никитина и др )

6 Внешнесекреторная функция поджелудочной железы у больных хроническим панкреатитом // Ш Российский форум «Гастро-2001» Гастробюллетень №2-3 - Санкт-Петербург, 2001 - С 19 (Соавт ЭР Валитова, Р Р Газизова, Т И Никитина и др )

7 Пути реабилитации больных хроническим панкреатитом /Я Всероссийском форуме «III тысячелетие Пути к здоровью нации» Материалы форума -Москва, 2001 - С 25-26 (Соавт ЭР Валитова, РР Газизова, АР Газизова и

др)

8 Разработка сборов для комплексного лечения хронического панкреатита // «Разработка и внедрение новых методов и средств традиционной медицины Труды научно-практического центра традиционой медицины и гомеопатиии МЗ РФ - Москва, 2001 - С 102-103 (Соавт Э.Р Валитова, РР Газизова, А Р Газизова и др )

9 Патология гастродуоденальной зоны у больных хроническим панкреатитом // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии -Москва, 2001 -Т 11, №5, Прил №15 - С 64 (Соавт Э Р Валитова, Р Р Газизова, А Р Газизова и др )

10 Фармакогностическое исследование сборов для лечения хронического панкреатита // Здравоохранение Башкортостана - Уфа, 2002 - №2 - С 89 (Соавт Т И Плеханова, Ч А Петрова)

11 Гистологические изменения поджелудочной железы белых крыс при интоксикации совтолом // Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология» - Санкт-Петербург, 2002 - Т121, 2-3 - С123 (Соавт Ч А Петрова, Т И Плеханова, X M Насыров и др )

12 Применение фитосбора в комплексном лечении хронического панкреатита с целью коррекции экскреторной недостаточности поджелу-дочной железы // Конференция, посвященная 25-летию со дня открытия в Москве ЦНИИ рефлексотерапии Материалы конференции - Москва,2002 - С155-157 (Соавт Э Р Валитова, Р Р Газизова, Т И Плеханова и др )

13 Профилактическое и лечебное действие растительных сборов при хроническом панкреатите у крыс // Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология» - Санкт-Петербург, 2002 - Т121, 2-3 -С 123-124 (Соавт Ч А Петрова, Т И Плеханова, X М Насыров и др )

14 Изучение растительных сборов, предлагаемых для лечения хроническо-го панкреатита //111 конгресс молодых ученых «Науки о человеке» Мате-риалы конгресса ~Томск,2002 -С 231 (Соавт Ч А Петрова, Э Р Валитова)

15 Новые сборы из лекарственного растительного сырья // Новая аптека -2003 -№11 - С 75-76 (Соавт Т И Плеханова, Н В Кудашкина, Ю Г Афанасьева и др)

16 Разработка сбора для комплексного лечения дисбактериоза // IV Межрегиональная научно-практическая конференция «Фармация XXI века» Материалы конференции - Новосибирск, 2004 - С 120-122 (Соавт ТИ Плеханова, Д С Валеева)

17 Морфофункциональные особенности печени при воздействии совтола и в процессе лечения растительными сборами //Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология» - Санкт-Петербург, 2002 - Т 121, 2-3 -С 130 (Соавт Ч А Петрова, Т И Плеханова, X М Насыров и др)

18 О структуре и объеме предложения отечественных фитосредств, применяемых в гастроэнтерологии IIIV Межрегиональная конференция с международным участием «Клиническая фармакология в России достижения и перспективы за 30 лет Материалы конференции - Москва, 2004 - С 185-186 (Соавт В В Петров, Ч А Петрова)

19 Разработка, доклинические и клинические исследования растительных сборов для лечения хронического панкреатита //Конференция молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» Материалы конференции - Санкт-Петербург, 2004 - С 139-140 (Соавт ЧА Петрова, В В Петров, Э Р Валитова)

20 Использование лекарственных растений и препаратов из них для экопротективной помощи населению //Экология человека спец вып - 2004 - № 4 - С 29-32 (Соавт Т И Плеханова, Н В Кудашкина, Г Г Шайдуллина)

21 Разработка рецептуры сборов для лечения панкреатита // III региональная конференции с международным участием «Комплексное использование растительных ресурсов лесных экосистем» Материалы конференции -Красноярск, 2004 - С 157-161 (Соавт Т И Плеханова)

22 Изучение сборов для лечения панкреатита и гепатита // Фармация - 2005 -№3 - С 25-27 (Соавт ТИ Плеханова, Ч А Петрова)

23 Исследование токсичности сборов для лечения панкреатита и гепатита // Всероссийская конференция «Современные проблемы фармаколопш и фармации» Материалы конференции - Новосибирск, 2005 - С 62-64 (Соавт Т И Плеханова, Ч А Петрова)

24 Изучение возможности использования растительного сбора для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки//Практическая фитотерапия -2006 -№3 -С 18-20 (Соавт JIB Рогачева)

25 Учебное пособие с грифом УМО-39 от 27 01 05 «Учебная практика по фармакогнозии» - изд-во ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» - Уфа, 2005 - 86 с (Соавт ТИ Плеханова)

26 Особенности использования растительного сбора в комплексном лечении хронического вирусного гепатита // Медицинский вестник Башкортостана -Уфа, 2006 - Т 3, №1 - С 60-61 (Соавт ДА Валишин, ДН Шокуров, Л В Мурзагалеева и др)

27 Профилактическое действие противоязвенного сбора // Фармация - 2006 -№2 - С 32-34 (Соавт Л А Валеева, Е Л Булыгина, Э Г Яфаева и др)

28 Изучение качественного и количественного состава сбора для комплексного лечения дисбактериоза // Заочная международная конференция «Приоритеты фармацевтической науки и практики» Материалы конференции -Москва,2006 - С 317-319 (Соавт Д С Валеева)

29 О возможности использования растительных средств для профилактики и комплексного лечения воспалительных заболеваний пародонта //Медицинский вестник Башкортостана - Уфа, 2006 - Т. 3, №1 - С 65-66 (Соавт В А Лиходед, Р Р Кутушева, А Н Мингазова и др)

30 Фитотерапия в комплексном лечении хронического панкреатита в стадии обострения и ремиссии // Практическая фитотерапия - 2006 - №3 - С 20-22 (Соавт ЭР Валитова)

31 Фотохимическое изучение сбора для комплексного лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки // Заочная мевдународная конференция «Приоритеты фармацевтической науки и практики» Материалы конференции -Москва,2006 -С 319-321 (Соавт ГР Сафина)

32 Лечебное действие противоязвенного сбора // Фармация - 2006 - №3 -С 37-38 (Соавт Н Ж Басченко, Н С Макара)

33 Фитотерапия в комплексном лечении хронического вирусного гепатита //Практическая фитотерапия - 2006 - №3 - С 25-28 (Соавт Д А Валишин, Д Н Шокуров, Л В Мурзагалеева и др)

34 Основные подходы к разработке новых рецептур лекарственных сборов для лечения некоторых заболеваний желудочно-кишечного тракта // Медицинский вестник Башкортостана - Уфа, 2006 -№1, Т4 - С 155-159

35 Фитотерапия в комплексном лечении дисбактериоза кишечника // Практическая фитотерапия - 2006 - №3-С 22-25 (Соавт Г А Павлова, О В Позолотина, Е В Клыш)

36 Изучение острой токсичности сборов для комплексного лечения язвенной болезни желудка, двенадцатиперстной кишки и дисбактериоза // Всероссийская конференция «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» Материалы конференции- Томск, 2006 -С 287-288 (Соавт НЖ Басченко, Л В Рогачева, Е А Клыш и др)

37 Применение фитотерапии в комплексном лечении дисбактериоза кишечника //Медицинский вестник Башкортостана - Уфа,2006 - Т 3, №1 - С 62-64 (Соавт Г А Павлова, О В Позолотина, Е А Клыш и др)

38 Фотохимическое изучение и ангиоксидантные свойства некоторых растений, ингродуцированных в Республике Башкортостан //Вестник ВГУ

Серия Химия Биология Фармация - 2006 - №2 - С 357-360 39, Фотохимическое изучение масляного растительного экстракта и лекарственной формы на его основе для применения в стоматологии //Медицинский вестник Башкортостана - Уфа, 2006 - Т4, №1 - С 150-151 (Соавт В А Лиходед, А Н Мингазова)

40 Учебное пособие с грифом УМО-703 от 15 11 05 «Ресурсоведение лекарственных растений» - изд-во ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» - Уфа,2006 -115с (Соавт ТИ Плеханова,ЮГ Афанасьева,ГП Яковлев)

41 Исследования растительного сбора для комплексного лечения дисбакте-риоза на содержание макро- и микроэлементов //Медицинский вестник Башкортостана - Уфа, 2006 - Т 4, №1 - С 135-136 (Соавт Е А Клыш)

42 Учебное пособие с грифом УМО-39 от 27 01 05 «Избранный цикл лекций по ботанике раздел «Основы гистологии, анатомии, физиологии и морфологии растений» - изд-во ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» - Уфа, 2006-130 с (Соавт Т И Плеханова, Г Г Шайдуллина)

43 Разработка оптимальных условий получения экстрактов из растительных сборов при заболеваниях желудочно-кишечного тракта //Медицинский вестник Башкортостана - Уфа, 2006 - Т4, №1 - С 160-162 (Соавт Е А Клыш, Л В Рогачева, Л С Глухова)

44 Микробиологические исследования фитокарандашей с масляным растительным экстрактом //Медицинский вестник Башкортостана - Уфа, 2006 - Т 4, №1 -С 162-164 (Соавт Р Р Кутушева, В А Лиходед, С Н Чуйкин и др)

45 Комплексное лечение дисбактериоза кишечника с использованием растительного сбора //Конгресс «Традиционная медицина-2007» Труды конгр -Москва,2007 -С 81-82 (Соавт Е А Клыш, Г А Павлова, О В Позолотина)

46 Фармакологическое изучение растительного сбора для комплексного лечения дисбактериоза // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология -Москва, 2007 -№5 -С 68-70

47 Фармакогностическое изучение сборов для комплексного лечения язвенной болезни желудка, двенадцатиперстной кишки и дисбактериоза //Запорожский медицинский журнал - 2007 - №2 - С 134-136 (Соавт В А Лиходед, Е А Клыш, Л В Рогачева)

48 Разработка основных подходов к комплексному лечению беременных женщин с хроническими вирусными гепатитами/Жонгресс «Традиционная медицина-2007» Труды конгресса - Москва, 2007 - С 145-147 (Соавт СМ Фархутдинова, А Я Крюкова, В А Кулавский)

49 Применение сорбента и фитотерапии в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта у женщин с ранним гестозом // Уральский медицинский журнал - 2007 - № 3 (31) - С 61-66 (Соавт В А Лиходед, У Р Хамадьянов, С В Чуйкин)

50 К вопросу изучения интродуцированных в Башкортостане пряно-ароматических растений, рекомендуемых для профилактики заболеваний ЖКТ // УП-й международный симпозиум «Новые и нетрадиционные растеши и перспективы их использования» Труды симпозиума - Т I - Пущино, 2007 -С 174-177(Соавт ИВ Черных)

51 Особенности комплексного лечения воспалительных заболеваний пародонта с использованием растительных средств //Конгресс «Традиционная медицина-2007» Труды конгресса - Москва, 2007 - С 79-81 (Соавт В А Лиходед, Р Р Кутушева,АН Мингазова)

52 Влияние растительного сбора на дисбакгериоз кишечника //Фармация -2007 -№ 6 -С 37-39 (Соавт Н Ж Басченко, Г А Павлова, Е А Клыш и др)

53 Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в сборах //Российская конференция «Достижения и перспективы в области создания новых лекартвенных средств» Материалы конференции - Пермь, 2007 - С 455—458 (Соавт С А Меще-рякова, Л В Старцева, Е А Клыш)

54 Пути переработки растительных сборов, разработанных для профилактики и комплексного лечения заболеваний ЖКТ // VII-й международный симпозиум «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования» Труды симпозиума - Т I - Пущино, 2007 - Т1П - С 399-401 (Соавт Л В Старцева, ЕА Клыш)

55 Разработка стоматологических карандашей с растительным масляным экстрактом // Фармация - 2008 - №1 - С 28-30 (Соавт В А Лиходед, А Н Мингазова, РР Кугушева)

56 Изучение растительного сбора для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки Конгресс «Традиционная медицина-2007» Труды конгресса - Москва, 2007 - С 78-79 (Соавт • Н Ж Басченко, Л В Рогачева)

57 Патент РФ № 2193411 на изобретение «Способ комплексного лечения панкреатита» А 61 К 35/78, А 61 Р 1/18 С1 Бюл №2 от 20 01 2002г (Соавт Э Р Валитова, Р Р Газизова, Т И Никитина и др)'

58 Патент РФ № 2178304 на изобретение «Способ лечения хронического панкреатита в фазе ремиссии» А 61 К 35/78, А 61 Р 5/48 С1 Бюл №33 от 27 11 2002г (Соавт Э Р Валитова, Р Р Газизова, Т И Никитина и др)

59 Патент РФ № 2223777 на изобретение «Способ профилактики и лечения хронического панкреатита и гепатита в эксперименте» А 61 К 35/78, А 61 Р 1/16, 1/18 С2 Бюл № 5 от 20 02 2004г (Соавт ХМНасыров, ТИ Плеханова, Петрова Ч А идр)

60 Патент РФ № 2232591 на изобретение «Мазь «Экзофитогель» для лечения воспалительных заболеваний» А 61 К 35/78, 9/06 С1 Бюл №20 от 20 07 2004г (Соавт Ю В Шикова, В А Лиходед, Т А Лиходед)

61 Патент РФ № 2271041 на изобретение «Способ одновременного моделирования хронического панкреатита и гепатита» G09B С2 Бюл №6 от 27 02 2006г (Соавт X М Насыров, Т И Плеханова, Петрова Ч А и др )

62 Патент РФ № 2310438 на изобретение «Стоматологический карандаш для лечения воспалительных заболеваний полости рта» А 61 К 8/97, 8/92, 8/37, А61 Q 11/00, А 61 Р 1/02 С1 Бюл №32 от 20 11 2007г (Соавт Ю В Шикова, В А Лиходед, А Н Мингазова и др )

63 Патент РФ № 2315279 на изобретение «Способ определения твердости мягких лекарственных форм» G01N 3/42 С1 Бюл №2 от 20 01 2008г (Соавт А Н Мингазова, В А Лиходед, Ю В Шикова и др)

64 Положительное решение о выдаче патента на изобретение «Сбор лекарственных растений для профилактики и комплексного лечения язвенной болезни желудка» заявка № 2007123053/15(025101) от 06 03 2008г А 61 К 36/73, 36/28, 36/704, 36/484, 36/ 533, 36/185, 36/235, А 61 Р 1/04 (Соавт Л В Старцева, В А Лиходед, Г А Павлова)

65 Положительное решение о выдаче патента на изобретение «Сбор лекарственных растений для профилактики и комплексного лечения дисбактериоза кишечника» заявка № 2007123054/15(025102) от 06 03 2008г А 61 К 36/73, 36/537, 36/28, 36/38, 36/534, 36/235, 36/72, А 61 Р 1/14 (Соавт Е А Клыш, В А Лиходед, Г А Павлова)

66 Положительное решение о выдаче патента на изобретение «Способ комплексного лечения дисбактериоза кишечника» заявка № 2007123051/14(025099) от 22 05 2008г А 61 К 35/74, 38/54, 36/28, 36/38, 36/53, 36/72, 36/73, 39/12, А 61 Р 1/14 (Соавт Г А Павлова, ЕА Клыш, О В Позолотина)

67 Положительное решение о выдаче патента на изобретение «Способ комплексного лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки» заявка №2007130459/15(033178) от 02 07 2008г А 61 К 31/4439, 31/472, 31/7048, 31/29, 36/28, 36/00, А 61 Р 1/04 (Соавт Л В Старцева, ФЗ Асфандияров)

68 Положительное решение о выдаче патента на изобретение «Способ комплексного лечения хронических вирусных гепатитов В и С» заявка № 2007130461/14(033180) от 03 07 2008г А 61 К 33/14, 31/197, 31/7004, 31/472, 36/70, 36/00, А 61 Р 1/16, 31/12 (Соавт ДА Валишин, НЕ Муслимова, ДН Шокуров и др)

69 Положительное решение о выдаче патента на изобретение «Способ комплексного лечения острых кишечных инфекций» заявка № 2007130460/14(033179) от 02 07 2008г А 61 К 31/4709, 31/472, 31/52, 31/695, 31/4152, 31135, 31/63, 33/14, 36/72, 36/73, 31/53, 36/28, А 61 Р 31/04 (Соавт Д А Валишин, Д Н Шокуров, Г А Павлова и др )

70 Корсун, В Ф Лекарственные растения в гастроэнтерологии /В Ф Корсун, К А Пупыкина, ЕВ Корсун - изд-во «Практическая медицина» - Москва, 2008 - 464 с

ПУПЫКИНА КИРА АЛЕКСАНДРОВНА

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ И СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Подписано в печать 25 08 2008г Бумага офсетная Отпечатано на ризографе Формат 60x84Усл-печ л 3,1 Уч-изд л 3,4 Тираж 100 экз Заказ № 443

450000, г Уфа ул Ленина, 3, ГОУ ВПО «Башгосмедуниверситет РОСЗДРАВА»