Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследование биологически активных флавоноидных компонентов хмеля обыкновенного Humulus lupulus
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Оглавление диссертации Алексеева, Мария Александровна :: 2005 :: Москва
Список сокращений.
Введение.
Обзор литературы.
Глава I. Классификация флавоноидов. Фармакогностические и фармакологические аспекты.
1.1. Основные положения биосинтеза фенилпропаноидных соединений, классификация и распространение флавоноидов.
1.1.1. Общий биосинтез фенилпропаноидных соединений.
1.1.2. Классификация, биосинтез и распространение флавоноидов.
1.1.3. Классификация пренилированных флавоноидов и их распространение.
1.2. Фармакогностическая и фармакологическая характеристика' растения Humulus lupulus.
1.2.1 .Ботаническая характеристика семейства Cannabinaceae.
1.2.2. Морфологические характеристики растения Humulus lupulus Хмель обыкновенный.
1.2.3. Фармакогностическая характеристика растения Humulus lupulus.
1.2.3.1. Внешние признаки.
1.2.3.2. Микроскопия.
1.2.4. Химический состав хмеля обыкновенного.
1.2.4.1. Флавоноиды хмеля обыкновенного.
1.2.4.1.1. Флавонолгликозиды.
1.2.4.1.2. Пренилфлавоноиды.
1.2.5. Фармакологическая характеристика флавоноидов хмеля.
Г лава 11 Физико-химические методы разделения, идентификация и количественное определение фенольных соединений.
2.1. Выделение, качественная и количественное определение фенольных соединений.
2.1.1. Физические свойства фенольных соединений.
2.1.2. Химические свойства фенольных соединений.
2.1.3. Выделение растительных фенолов.
2.1.4. Идентификация фенольных соединений по цветным реакциям.
2.1.5. Физико-химические методы идентификации фенольных соединений.
2.1.6. Количественное определение фенольных соединений.
2.2. Методы анализа растительных компонентов хмеля по действующим нормативным документациям (НД) в сырье и лекарственных препаратах.
2.3. Анализ пренилированных флавоноидов.
Экспериментальная часть Определение полифенольного состава хмеля обыкновенного Humulus lupulus.
1.1: Материалы и методы, исследования.
1.1.1. Объекты анализа.
1.1.2. Оборудование и реактивы.
1.1.3. Определение суммы полифенольных соединений (по галловой кислоте) методом Фолина-Чокальтеу.
1.1.4. Определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин.
1.1.5. Определение состава и концентрации флавонолов и дигидрофлавонолов в хмеле обыкновенном.
1.1.6. Определение пренилированных флавоноидов (ксантогумол и изоксан-тогумол) в хмеле, БАД, лекарственных препаратах и пиве.
1.1.7. Проведение твердофазного концентрирования образцов пива.
1.1.8. Определение производных дигидроксикоричной кислоты.
1.2. Результаты и их обсуждение.
1.2.1. Установление полифенольного состава хмеля в различных сортах и экстракте.
1.2.2. Выбор оптимальных условий экстракции пренилированных флавонои-дов.
1.2.3. Оптимизация условий ВЭЖХ для пренилированных флавоноидов.
1.2.3.1. Выбор оптимальных условий разделения пренилированных флавоноидов.
1.2.3.2. Выбор оптимальных условий детектирования пренилированных флавоноидов.
1.2.3.3. Количественное определение пренилированных флавоноидов в растительном сырье и БАД на основе хмеля обыкновенного.
1.2.3.4. Результаты анализа пренилированных флавоноидов в образцах хмеля.
1.2.4. Определение пренилированных флавоноидов в образцах пива.
Выводы.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Алексеева, Мария Александровна, автореферат
Актуальность темы
Хмель (Humulus lupulus, Cannabinaceae) - двудомное многолетнее растение, являющееся источником целого ряда биологически активных соединений, таких как эфирные масла, горечи и флавоноиды. Одними из наиболее интересных с фармакологической точки зрения являются флавоноиды хмеля, представленные флавонолгликозидами и пренилированными флавоноида-ми[90]. В то время как флавонолгликозиды повсеместно встречаются в зеленых растениях, распространенность пренилированных флавоноидов ограничивается незначительным числом видов, в первую очередь порядка крапиво-цветных Urticaceae, семейства тутовых Могасеае и коноплевых Caimabinaceae (последнее семейство включает растение хмель). Хмель является практически единственным существенным источником таких пренилированных флавоноидов, как ксантогумол и изоксантогумол.
Интерес к природным флавоноидам связан с их выраженными анти-оксидантными свойствами, ряду типов флавоноидов присущи антиаллергенные, противовоспалительные, антивирусные, антибактериальные свойства и другие типы биологической активности [69]. Кроме того, ксантогумол и изоксантогумол хмеля проявляют антипролиферативные и антиканцерогенные свойства [49]. По экспериментальным данным многих ученых, наличие изо-преноидных цепей приводит к разнообразным модификациям биологической активности, которая связана, в основном, с выраженным сродством с биологическими мембранами и более выраженными взаимодействиями с белками.
Хмель входит в состав ряда известных лекарственных препаратов и многих зарегистрированных биологически активных добавок (БАД) к пище.
В настоящее время становится все более актуальной проблема оценки качества сборов лекарственных трав и комплексных БАД, а также разработки достоверных критериев их идентификации.
Необходимость определения незначительных концентраций действующих веществ на фоне сложного матрикса БАД обуславливает высокие требования к селективности и чувствительности методов анализа.
Решение этих задач тормозится отсутствием в большинстве случаев достоверных методов контроля действующих веществ в составе комплексных лекарственных препаратов и Б АД. Большинство существующих традиционных нехроматографических методов определения индикаторных компонентов растительных Б АД неселективны, трудоёмки и могут в отдельных случаях приводить к получению как ложноположительных результатов, так и к искажению количественных данных.
Одними из наиболее перспективных методов для решения этих задач являются хроматографические методы, сочетающие высокую эффективность разделения компонентов Б АД с избирательностью и чувствительностью детектирования.
Цель и задачи исследования
Целью настоящего исследования являлась разработка методики идентификации и количественного определения индикаторных флавоноидных компонентов хмеля, пригодных для рутинного контроля качества БАД и лекарственных препаратов на основе соплодий и экстрактов хмеля.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
- изучение физико-химических свойств флавоноидных компонентов хмеля с целью разработки новых методов анализа;
- изучение индикаторных флавоноидных компонентов хмеля различных сортов, в том числе и пренилированных флавоноидов;
- разработка доступного, достоверного и воспроизводимого метода количественного определения флавоноидных компонентов хмеля.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук
Диссертационная работа выполнена в рамках НИР кафедры фармацевтической химии ММА им. И.М. Сеченова «Совершенствование контроля качества лекарственных средств», № госрегистрации 01.200.110545.
Научная новизна результатов исследования
Разработана оригинальная методика идентификации и количественного определения индикаторных пренилированных флавоноидов (ксантогумол и изоксантогумол) в лекарственных препаратах и БАД. Экспериментально установлен полифенольный состав хмеля обыкновенного в нескольких сортах.
Практическое значение работы
Разработанные методики использовались при гигиенической экспертизе более 20 БАД к пище в ГУ НИИ Питания РАМН.
Разработанная методика внесена в проект второго издания «Руководства по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище» (Р4.1.1672-03, Минздрав РФ).
Публикации
По теме диссертации опубликованы 4 печатные работы.
Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование биологически активных флавоноидных компонентов хмеля обыкновенного Humulus lupulus"
Выводы:
1. Изучены физико-химические свойства пренилированных флавонои-дов: ксантогумола и изоксантогумола.
2. Исследованы флуоресцентные свойства изоксантогумола. Изучены спектры возбуждения и эмиссии, которые составляют 290 и 440 нм соответственно. Данные свойства использованы для качественного и количественного определения изоксантогумола с помощью флуоресцентного детектора, что существенно увеличило селективность и снизило предел обнаружения методики.
3. Показано, что пренилированные флавоноиды наиболее полно экстрагируются смесями на основе хлороформа или ацетона и в аппарате Сокслета.
4. Предложены оптимальные условия разделения и идентификации пренилированных флавоноидов с использованием ОФ-ВЭЖХ в изократическом режиме элюирования с УФ-спектрофотометрическим и флуориметрическим детекторами.
5. Разработана ВЭЖХ-методика количественного определения основных пренилированных флавоноидов (ксантогумол и изоксантогумол) в соплодиях хмеля Humulus lupulus.
6. Проведено качественное и количественное определение пренилированных флавоноидов в различных сортах хмеля Humulus lupulus, в ряде БАД и лекарственных препаратах на основе хмеля обыкновенного. Установлен диапазон концентраций для ксантогумола (0,17-,27%) и изоксантогумола (0,003-0,01%) в соплодиях хмеля.
7. Изучен качественный и количественный состав основных полифе-нольных соединений хмеля. Основными полифенольными компонентами хмеля являются пренилированный халкон — ксантогумол (до 0,2 %) и дигид-рофлавонол —дигидрокверцетин (до 0,6%);
8. Разработанная методика идентификации и количественного определения индикаторных пренилированных флавоноидов (ксантогумол и изоксантогумол) предлагается для контроля качества лекарственных средств и БАД на основе хмеля.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Алексеева М.А., Эллер К.И., Арзамасцев А.П. Определение пренилированных флавоноидов хмеля и фитопрепаратов на его основе с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - Москва, 2004. - № 3 — С. 45-48.
2. Алексеева М.А., Эллер К.И., Арзамасцев А.П. Определение полифе-нольных компонентов хмеля с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ // Химико-фармацевтический журнал. — Москва, 2004. — том 38 — №12 — С. 82-85.
3. Алексеева М.А., Эллер К.И. Анализ полифенольных соединений хмеля обыкновенного в различных сортах хмеля обыкновенного // Человек и лекарство: Тез. докл. XII Российского национального конгресса. — Москва, 2005.-С.732.
4. Алексеева М.А., Эллер К.И. Хмель обыкновенный — источник пренилированных флавоноидов // Человек и лекарство: Тез. докл. XII Российского национального конгресса. — Москва, 2005. — С.732.
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2005 года, Алексеева, Мария Александровна
1. Александров Н.А., Крылов М.И., Иванов В.И./ Практикум по хмелеводству. М: ВО «Агропромиздат», 1989. - 318 С.
2. Алексеев Ю.Е., Вехов В.Н., Гапочка Г.П., Дундин Ю.К., Павлов В.Н., Тихомиров В.Н., Филин В.Р. Травянистые растения СССР. — Москва: «Мысль», 1971.-Т. 1.С. 317.
3. Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Шупинская М.Д., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения. М: «Высшая школа», 2-ое издание, 1975. С. 130131.
4. Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. — Новосибирск: «Наука», 1990. С. 333.
5. ГОСТ 21946-76. Хмель-сырец и хмель прессованный. Методы испытаний. — Москва: «ИПК издательство стандартов».
6. Горошко О.А., Пахомов В.П., Самылина И.А., Никулина И.Н. / Использование хмеля в фитотерапии. // Практическая фитотерапия. 2000. - №1. — С. , 39-44.
7. Запрометов М.Н. Фенольные соединения. Распространение, метаболизм и функции в растениях. М: «Наука», 1993. - С. 271.
8. Замятина Н.В. Энциклопедия Природы России. Лекарственные Растения. — Москва, 1998.-С. 361.
9. Карабанов И.А. Флавоноиды в мире растений. — Минск: «Ураджай», 1981. С.-3-14.
10. Кузнецова М.А., Рыбачук И.З. Фармакогнозия. — Москва: «Медицина», 2-ое издание, 1993. С. 312-314.
11. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Авдеева Е.В., Браславский В.Б., Сенцов М.Ф., Смольянова И.Б. Современные аспекты изучения лекарственных растений.-Москва, 1995.-С. 151-157.
12. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи. Фармакогнозия. Под редакцией И.А. Самылиной, В.А Северцева. — Москва: АНМИ, 2003. С. 534.
13. Лобанчикова Н.В. Разработка и стандартизация седативных растительных сборов. // Диссертация к.м.н. Москва, 1991. — С. 146 56].
14. Манфрид Палов. Энциклопедия лекарственных растений. — Москва: «Мир», 1998. С. 299-300.
15. Муравьева Д.А. Тропические и субтропические лекарственные растения. -Москва: «Медицина», издание третье, 1997. С. 304-312.
16. Органическая химия. В.Л. Белобородов, С.Э. Зубарян, А.П. Лузин, Н.А. Тюкавкина. Под редакцией Н.А. Тюкавкиной. М.: Дрофа, 2002. - С 640.
17. Оценка загрязнения пищевых продуктов микотоксинами. Сборник учебно-методических материалов под редакцией В.А. Тутельяна. — Москва: Центр Международных Проектов ГКНТ, 1985. Т. 3. - С. 152-177.
18. Приступа А.А. Основные сырьевые растения и их использование. — Ленинград: «Наука», 1973. —С. 78-79.
19. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство Р4.1.1672-03. — Москва: Минздрав России, 2004.-С. 112.
20. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии. Под редакцией А.П. Арзамасцева. — Москва: «Медицина», 2001. С. 379.
21. Советский Энциклопедический Словарь. Под редакцией Прохорова A.M. Москва: «Советская Энциклопедия», четвертое издание, 1989. — С. 1381.
22. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. — Москва: «Медицина», издание второе, 1988. С. 59-60.
23. Середа А.В., Моисеева Г. Ф. / Биологически активные вещества и стандартизация лекарственных растений рода Echinacea // Фармакон. — 1998 . № 3 . — С. 13-23.
24. Фармакогнозия. Атлас. Под редакцией Гринкевич Н.И., Ладыгина Е.Я. -Москва: «Медицина», 1989.-С. 173-176.
25. Флора СССР. Москва: Академия Наук СССР, 1936. - Т. - 5. - С. 382383.
26. Юрьев Д.В. Оценка качества лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище на основе эхинацеи пурпурной и гинкго билоба с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии: // Диссертация к.м.н. Москва 2003. 120 стр.
27. ФС предприятия «Галичфарм» на препарат «Уролесан», капли для.приема внутрь. № 42-7759-03.
28. ФС предприятия «Айвекс-ЧР» на препарат «Новопассит», таблетки покрытые оболочкой. № 42-10729-02.
29. ФС предприятия «Айвекс-ЧР» на препарат «Новопассит», раствор для приема внутрь. № 42-7945-02.
30. ФС предприятия «Кревель Мойзельбах ГмбХ» на препарат «Валокордин», капли для приема внутрь. № 42-238-01.
31. Яковлев Г.П:, Челомбитько В:А. Ботаника. — М: «Высшая школа», 1990. С. 262.
32. Arin M.J., Diez М.Т. and Resines J.A. / High-performance liquid chromatography combined with ultraviolet and mass spectrometric detection. // J: Chromatogr. — A 849(2): 341-348,1995.
33. Barron, D., and Ibrahim, R.K. / Isoprenylated flavonoids — a survey. // Phyto-chemistry 43:921-982, 1996.
34. Bhandari, P.R. / Identification of flavonoids in hops (Humulus Lupulus Linne) by thin-layer chromatography. // J. Chromatogr. 16:130-135, 1964.
35. Bhatia, I.S. and Bajaj K.L. / Chemical constituents of the seeds and barks of Syzygium cumini. // Planta Med. 28(4): 346-352. 1975.
36. Bjergegaard, C., Michaelsen S. and Sorensen H. / Determination of fenolic car-boxylic acids by micellar electrokinetic capillary chromatography and evaluation of factors affecting the method: // J. Chromatogr. -608(1-2): 403-411. 1992.
37. Boudet AM, Lapierre С and Grima-Pettenati J. Tansley. / Biochemistry and Molecular Biology of Lignification. Review // New Phytol No. 80. 129: 203-236. 1995.
38. Britsch L. / Purification and Characterization of Flavone Synthase 1, a 2-oxoglutarate-dependent Desaturase. // Arch Biochem Biophys 282: 152-160. 1990.
39. Bronz M.R., Boas, L.F.V. and Belchior, A.P. / Analysis of old brandy and oak extracts by capillary electrophoresis. // J. Chromatogr. 768(1): 143-152. 1997.
40. Bronz M.R. and Boas, L.F.V. / Characterisation of brandies and wood extracts by capillary electrophoresis. // Analusis 26(1): 40-47. 1998.
41. Dick, A.J., Redden, P.R., de Marco A.C., Lidster, P.D: and Grindley. / Flavon-oid glycosides of Spartan apple peel. // J. Agric. Food Chem. 35(4): 529-531. 1987.
42. Dixon R.A., Harrison MJ. and Paiva N.L. / The Isoflavonoid Phytoalexin Pathway: From Enzymes to Genes to Transcription Factors. // Physiol Plant — 93: 385-392. 1995.
43. Dolan J.W. / Starting out right, Part I Selecting the tools. // LC GC-Mag. Sep. Sci. - 13(1): 12-15. 2000.
44. Dooner HK and Robbins TP. / Genetic and developmental Control of Antho-cyanin Biosynthesis. // Ann Rev Genet 25: 173-199. 1991.
45. Ebel J'and Hahlbrock K. / The Flavonoids. Advances in Research. // Biosynthesis. Harborne-JB and Mabiy TJ (eds), Chapman and Hall, London, 641-679. 1982.
46. European Pharmacopoeia 2004. — Council of Europe, Strasbourg Cedex, France -2003. P. 61-66.
47. Feng Zhao, Hajime Nozawa, Akihiro Daikonnya, Keiji Kondo, and Susumu Ki-tanaka. / Inhibitors of nitric oxide production from hops. // Biol. Pharm. Bull. -26(1) 61-65. 2003.
48. Forster A., Beck B. and Schmidt. R. / Hop polyphenols. // Hopfenrundschau International 68-74. 1999.I
49. Grotewold E and Peterson T. / Isolation and Characterization of a Maize Gene Encoding Chalcone Flavonone Isomerase. // Mol Gen Genet — 242:1-8. 1994.
50. Hahlbrock К and Scheel D. / Physiology and Molecular Biology of Phenylpro-panoid Metabolism. // Ann Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 40: 347-369. 1989.
51. Harborne J.B. / Chromatography of phenolic compounds. // Chromatography — A laboratory handbook of chromatographic and electrophoretic methods — pp. 759780. 1975.
52. Heller W and Forkman G. / Biosynthesis of Flavonoids. // The Flavonoids, Advances in Research Since 1986. Harborne JB (ed), Chapman and Hall, London — 1993.
53. Heywood V.H., Ribereau-Gayon P. / Plant Phenolics. 254 pp, Paris. 1968.
54. Hiermann A. and Radl B. / Analysis of aromaticplant acids by capillary zone electrophoresis. // J. Chromatogr. -A 803(1+2): 311-314. 1998.
55. Hansel, R., and Schulz, J. / Hopfen und Hopfenpraparata. // Dtsch. Apoth. Ztg. 126:2033-2037, 1986.
56. Jussi-Pekka Rauha. / The search for biological activity in Finnish plant extracts containing phenolic compounds. // Academic dissertation. Helsinki 2001. pp.72.
57. Kato H, Kodama О and Akatsuka T. Oryzalexin E. / A diterpene phytoalexin from UV-irradiated rice leaves. // Phytochemistry 33:79-81, 1993.
58. Kevin Robards, Paul D. Prenzler, Greg Tucker, Prasan Swatsitang, William Glover. / Phenolic compounds and their role in oxidative processes in fruits. // Food Chemistry 66 (1999) 401-436.
59. Kodama O, Suzuki T, Miyakawaand J and Akatsuka T. / Ultraviolet Induced Accumulation of Phytoalexins in Rice Leaves. // Agric Biol Chem 52 — 2469-2473. 1988.
60. Kodama О, Miyakawa J, Akatsuka T and Kiyosawa S. Sakuranetin. / A Fla-vanone Phytoalexin from Ultraviolet-irradiated Rice Leaves. // Phytochemistry 11: 3807-3809. 1992.
61. Liang, H.-R., Siren, H., and et al. / Characterization of flavonoids in extracts from four species of Epimedium by micellar electrokinetic capillary chromatography with diode-array detection. // J. Chromatogr. Sci. -35(3): 117-125. 1997.
62. Majors, R.E. / New chromatography columns and accessories at the 2001 Pittsburgh conference. // Part I. LG GC Eur. 14(5): 284-301. 2001.
63. Markham, K.R. and et al. / Separation of flavones by capillary electrophoresis: The influence of pKa on electrophoretic mobility. // Phytochem. Anal. 7(6): 300304. 1996.
64. Markham K.R. and Bloor S.J. / Analysis and'identification of flavonoids in practice. // In: Flavonoids in health and disease. Pp. 1-34. 1998.
65. McMurrough, I. / High-performance liquid chromatography of flavonoids in barley and hops. // J. Chromatogr. -218: 683-693. 1981.
66. Mizobuchi, S., and-Sato, Y. / A new flavanone with antifungal activity isolated from hops. // Agric. Biol. Chem. 48:2771-2775. 1984.
67. Nicholson R.L. and Hammerschmidt R. / Phenolic Compounds and their Role in Disease Resistance. // Ann Rev Phytopathol 30: 369-389. 1992.
68. Niessen W.M.A. / Advances in instrumentation in liquid chromatography-mass spectrometry and related liquid introduction techniques. // J. Chromatogr. A 794(1+2): 407-435. (1998).
69. Noriko Tabata, Minako Ito, Hiroshi Tomoda and Satoshi Omura. / Xanthohu-mols, Diacylglycerol acyltransferase ingibitors, from Humulus lupulus. // Phyto-chemistry. Vol. 46, No. 4, pp. 683-687. 1997.
70. Paris M. / Contribution a l'etude biochimique de la Salicaire et en particulier de ses polyphenols. // Trav. Lab. Matiere Med. Pharm. Galenique Fac. Pharm. Paris 52 1/1-111. 1967.
71. Phippen W.B. and Simon J.E. / Anthocyanins in Basiln. // J. Agric. Food Chem. 46(5): 1734-1738. 1998.
72. Pietta P.G., Mauri, P.L., Rava, A. and Sabbatini, G. / Application of micellar electrokinetic capillary chromatography to the determination of flavonoids drugs. // J. Chromatogr. 549(1-2): 367-373. 1991.
73. Power, F.B., Tutin, F., and Rogerson, H. / The constituents of hops. // J. Chem. Soc.- 103: 1267-1292. 1913.
74. Ramachandraiah, P. and Adinarayana, D. / Indian J. Nat. Prod. 5,3. 1989.
75. Rhodes MJ.S. / The Physiological^ Significance of Plant Phenolic Compounds. // Ann Proc Phytochem Soc Europe 25: 99-117. 1985.
76. Rhodes MJ.S. / The Physiological Roles for Secondary Metabolites in Plants: Some Progress, many outstanding Problems. // Plant Mol Biol -24: 1-20. 1994.
77. Richard Hampton, Gail Nickerson, Peggy Whitney, Alfred Haunold. / Comparative chemical attributes of native North American hop, Humulus lupulus var. lu-puloides E. Small. // Phytochemistry 61, 855-862. 2002.
78. Robards K., Li, X., Antolovich, M. and Boyd, S. / Characterisation of citrus by chromatographic analysis of flavonoids. // J. Sci. Food Agric. — 75(1): 87-101. 1997.
79. Salminen J.-P., Ossipov V., Loponen J., Haukioja E. and Pihlaja K. / Characterisation of hydrolysable tannins from leaves of Betula pubescens by high-performance liquid chromatography-mass spectrometry. // J. Chromatogr. A 846(2): 283-291. 1999.
80. Schroder J and Schroder G. / Stilbene and Chalcone Synthases: Related Enzymes with Key Functions in Plant-specific Pathways. // Z Naturforsch — 45c: 1-8. 1990.
81. Seitz, U., Bonn, G., Oefiier P. and Popp M. / Isotachophoretic analysis of flavonoids and phenolcarboxylic acids of relevance to phytopharmaceutical industry. // J. Chromatogr. 559(l-2):499-504. 1991.
82. Small, E. / A numerical and nomenclatyral analysis of morpho-geographic taxa of Humulus. II Systematic Botany, 3, 37-76. 1978..V
83. Stapleton A.E. and Walbot V. / Flavonoids can protect Maize DNA from the Induction of Ultraviolet Radiation Damage. //Plant Physiol 105: 881-889. 1994.
84. Stevens Jan F., Monika Ivancic, Victor L. and Max L. Deinzer. / Prenylflavon-oids from Humulus lupulus. // Phytochemistry, Vol. 44, No. 8, pp. 1575-1585. 1997.
85. Stevens Jan. F., Cristobal L. Miranda, Donald R. Buhler, Max L. Deinzer. / Chemistry and Biology of Hop Flavonoids. // American Society of Brewing Chemists 56(4):136-145. 1998.
86. Stevens Jan F., Alan W. Taylor, Jeff E. Clawson, and Max L. Deinzer. / Fate of Xanthohumol and Related Prenylflavonoids from Hops to Beer. // J. Agric. Food Chem. 47. 2421-2428, 1999.
87. Stevens Jan. F., Alan W. Taylor, Max L. Deinzer. / Quantitative analysis of xanthohumol and related prenylflavonoids in hops and beer by liquid chromatogra-phy-tandem mass spectrometry. // Journal of Chromatography A, 832, 97-107. 1999.
88. Stobiecki M. / Application of mass spectrometry for identification and structural studies of flavonoid glycosides. // Phytochemistry 54(3): 237-256. 2000.
89. Sagesser, M., and Deinzer, M. / HPLC-ion spray-tandem mass spectrometry of flavonol glycosides in hops. // J. Am. Soc. Brew. Chem. — 54:129-134. 1996.
90. Strid A, Chow W.S. and Anderson J.M. / UV-B Damage and Protection At the Molecular Level in Plants. // Photosynthesis Research 39: 475-489. 1994.
91. The United States Pharmacopoeia. 27-d revision. Rockville, 2003. - P. 19221924.
92. Van Sumere C.F. and Lea P J. / Annual proceedings of the phytochemical society of Europe. // The Biochemistry of plant phenolics. Vol. 25. 1985.
93. Takayama, M., Fukai, Т., Hano, Y., and Nomura, T. / Mass spectrometry of prenylated flavonoids. // Heterocycles 33:405-434. 1992.
94. Waksmundzka-Hajnos, M. / Chromatographic separations of atomic carbox-ylic acids. // J. Chromatogr. В 717(1+2): 93-118. 1998.
95. Walter M.H. / Regulation of Lignification in Defens. // In: Genes Involved in Plant Defens. Boiler T and Meins F (eds), Springer Verlag Wien, New York 327352. 1991.
96. Whetten R. and Sederoff R. / Lignin Biosynthesis. // The plant Cell. 7: 10011013. 1995.
97. Zuurbier, K.W.M., Fung, S. Y., Scheffer, J.J.C., and Verpoorte, R. / Formation of aromatic intermediates in the biosynthesis of bitter acids in Humulus Lupulus. II Phytochemistry. 38: 77-82. 1995.
98. The United States Pharmacopoeia. 27-d revision. Rockville, 2003. - P. 1070 -1072.