Фармакогностическое исследование соплодий хмеля

Горошко, Ольга Александровна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование соплодий хмеля

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Горошко, Ольга Александровна Москва 2005 г.

Ученая степень: кандидата филологических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое исследование соплодий хмеля

На правах рукописи

ГОРОШКО ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СОПЛОДИЙ ХМЕЛЯ

15.00.02. - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

МОСКВА-2005

Работа выполнена в Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова

Научные руководители:

Доктор фармацевтических наук, профессор Ирина Александровна Самылина Кандидат химических наук Виктор Петрович Пахомов

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Вера Ивановна Прокофьева

Кандидат фармацевтических наук Ирина Анатольевна Баландина

Ведущая организация: Всероссийский Институт лекарственных и ароматических растений

Заоцгга состоится " "_2005г. в_часов на заседании

Диссертационного совета Д.208.040.09 Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова по адресу: 121998, Москва, Никитский бульвар, дЛЗ

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова (117418, Москва, Нахимовский проспект, д. 49)

Автореферат разослан " "_2005 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета Доктор фармацевтических наук, профессор Наталья Петровна Садчикова

ЦСоа

Общая характеристика работы

Актуальность темы.

В последние годы большое внимание уделяется физико-химическим и фармакологическим исследованиям тех лекарственных растений, которые используются как в официнальной, так и в народной медицине.

Одним из таких растений является хмель обыкновенный - Ншпи1и8 НириНш семейство Коноплёвые - СалпаЬасеае. В народной медицине соплодия хмеля используют уже более 2,5 тыс. лет. В настоящее время в официнальной медицине нашей страны соплодия хмеля используются весьма ограниченно. Кроме того, химический состав и вопросы стандартизации соплодий хмеля как лекарственного растительного сырья, в т.ч. отечественного происхождения, с учетом всего комплекса содержащихся, в них биологически активных веществ (БАВ) мало изучены. Между тем в мировой фармацевтической практике около 10% соплодий хмеля используется для производства лекарственных средств.

Существующий нормативный документ на соплодия хмеля (ГОСТ 21946-76) не содержит разделов оценки качества лекарственного растительного сырья для использования в фармацевтической промышленности таких как "Микроскопия", "Качественные реакции", "Микробиологический и радиационный контроль".

В связи с вышеизложенным, актуальным является расширенное комплексное изучение химического состава соплодий хмеля с использованием современных физико-химических методов, совершенствование на этой основе стандартизации и создание современной нормативной документации.

В России возделываются сорта хмеля (используемые и в фармацевтической промышленности), различающиеся по содержанию производных ацилфлороглюцидов и эфирного масла, поэтому необходимо выявить различия между соплодиями различных сортов по составу и содержанию некоторых других БАВ (флавоноидов, лейкоантоцианов и др.) для использования этих данных в стандартизации сырья.

Актуальными также являются исследования состава БАВ настоя и экстракта хмеля сухого. Кроме того, представляет интерес оценка их антиоксидантной активности (АОА).

Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований является комплексное изучение химического состава соплодий хмеля и препаратов на его основе, разработка методов их стандартизации, а также использование полученных данных для создания нормативных документов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1.Изучить литературные данные по химическому составу и фармакологической активности соплодий хмеля; использованию методов определения биологически активных веществ, стандартизации соплодий хмеля.

2. С использованием современных физико-химических методов провести углубленное изучение химического состава соплодий хмеля, и разработать методики анализа по определению содержания БАВ.

' 3. Провести сравнительное изучение химического состава соплодий хмеля различных сортов.

4. С использованием разработанных методик на основе макроскопических, микроскопических, хроматографических и др. методов установить характеристики подлинности соплодий хмеля, а также показатели качества сырья, и создать Фармакопейную статью (ФС) на соплодия хмеля.

5. Провести исследования химического состава настоя, экстракта хмеля сухого, и разработать проект ФС на экстракт хмеля сухой.

6. Провести оценку антиоксидантной активности соплодий, настоя и экстракта хмеля сухого с использованием амперометрического метода.

масла, флавоноидов, лейкоантоцианов, органических, горьких и аскорбиновой кислот, дубильных и ниягидринактивных веществ, каротиноидов, макро- и микроэлементов. Методом капиллярной ГЖХ с МС-детектором изучен компонентный состав эфирного масла. Выявлены группы БАВ для оценки качества и стандартизации соплодий хмеля - эфирное масло, производные ацилфлороглюцидов, флавоноиды.

Разработаны методики ТСХ для идентификации аминокислот, лейкоантоцианов, антоцианидинов, фенолкарбоновых и аскорбиновой кислот в соплодиях хмеля; методики определения содержания суммы флавоноидов с использованием УФ-спектрофотометрии и определения содержания аскорбиновой кислоты в соплодиях хмеля методом ВЭЖХ с амперометрическим детектором.

Проведено сравнительное изучение по содержанию БАВ в соплодиях хмеля различных сортов.

На основе полученных результатов проведена стандартизация соплодий хмеля: определены характеристики подлинности и показатели качества с использованием макро- и микроскопических, хроматографических и других физико-химических методов анализа.

Проведены исследования качественного и количественного состава БАВ настоя и экстракта хмеля сухого (определено содержание производных ацилфлороглюцидов, флавоноидов, лейкоантоцианов и др.); разработаны характеристики подлинности и показатели качества для стандартизации экстракта хмеля сухого.

Определена антиоксидантная активность соплодий хмеля различных сортов, настоя и экстракта хмеля сухого.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны:

• методики определения подлинности микроскопическим методом (порошок соплодий хмеля), с использованием ТСХ (флавоноиды, эфирное масло),

качественная реакция на лейкоантоцианы; методики определения содержания производных ацилфлороглюцидов в соплодиях хмеля, суммы флавоноидов, эфирного масла, которые включены в разработанный нами проект ФС «Хмеля соплодия», переданный на рассмотрение в Государственный Фармакопейный комитет.

• методики идентификации флавоноидов и их количественное определение в соплодиях хмеля, которые апробированы в лаборатории ОКК ОАО «Красногорсклексредства» (Заключение по результатам апробации методик от 12.12.04. №1423).

• методики определения подлинности (ТСХ) сухого экстракта и количественного определения производных ацилфлороглюцидов в сухом экстракте хмеля (заключение об апробации в ОКК ОАО «Хармс»), которые включены в разработанный нами проект ФС «Экстракт хмеля сухой».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ.

На защиту выносятся:

• Результаты изучения качественного и количественного состава БАВ соплодий хмеля.

• Результаты сравнительного изучения химического состава соплодий хмеля различных сортов.

• Результаты по разработке характеристик подлинности и показателей качества соплодий хмеля.

• Результаты исследований химического состава настоя и экстракта хмеля сухого.

• Результаты оценки антиоксидантной активности соплодий, настоя и экстракта хмеля сухого.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на

конференции "Фитотерапия в геронтологии" (Москва, 2000г.), Всероссийской

конференции "Химический анализ веществ и материалов" (Москва, 2000г.), Научно-технической конференции "Молодые ученые пищевым и перерабатывающим отраслям АПК" (Москва, 2000г.), Международной конференции "Генетические ресурсы лекарственных и ароматических растений", посвященной 50-и летию ботанического сада ВИЛАРа (Москва, 2001г.).

Связь задач и исследований с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом НИР лаборатории фармакогнозии НИИ фармации ММА им. И.М.Сеченова по теме: "Разработка новых и совершенствование существующих методов получения, оценки качества и стандартизации лекарственного растительного сырья, лекарственных средств природного, биотехнологического и синтетического происхождения" (регистрационный номер темы 01.200302927).

Объем и структура диссертация. Работа изложена на 198 страницах, содержит 46 таблиц, 27 рисунков, 13 фотографий и состоит из введения, обзора литературы, четырех глав экспериментальной части, библиографии из 183 наименований, из которых 50 на иностранных языках и приложений.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулирована научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основании литературных данных обобщены сведения о ботанико-морфологической характеристике видов хмеля, химическом составе, методах анализа основных биологически активных веществ в растительном сырье; изучении макро- и микроскопических признаков соплодий хмеля; их стандартизации; фармакологической активности и использовании соплодий хмеля в производстве лекарственных препаратов и в других отраслях народного хозяйства.

Вторая глава посвящена объектам и методам исследований, разработке методик с использованием современных физико-химических методов

анализа и комплексному изучению химического состава соплодий хмеля (эфирное масло, производные ацилфлороглюцидов, флавоноиды, лейкоантоцианы, органические кислоты и др)

В третьей главе представлены результаты сравнительного изучения содержания биологически активных веществ (эфирное масло, производные ацилфлороглюцидов, флавоноиды, лейкоантоцианы, органические кислоты и др) и физико-химических показателей (влажность, зола общая, антиоксидантная активность и др) в соплодиях хмеля различных сортов.

В четвертой главе излагаются результаты исследований состава и содержания БАВ в настое и экстракте хмеля сухом, приводятся значения их АОА и результаты по разработке показателей качества экстракта хмеля сухого.

В ПЯТОЙ главе приводятся результаты по стандартизации соплодий хмеля, которые включают идентификацию по макро-, микроскопическим признакам и методом ТСХ, а также числовые показатели по действующим веществам (содержание эфирного масла, суммы флавоноидов и производных ацилфлороглюцидов).

Результаты экспериментов обработаны статистически, обобщены и представлены в таблицах, проиллюстрированы графиками и рисунками. В приложениях приведены таблицы БАВ соплодий хмеля, препаратов на их основе, а также разработанные проекты Фармакопейных статей.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Исследование химического состава соплодий хмеля С целью стандартизации сырья и использования его в фармацевтической промышленности нами проведено комплексное исследование соплодий хмеля. Объектом исследования являлись промьшшенные образцы сортосмеси соплодий хмеля (ОАО "Красногорсклексредства", серия 122000).

Для этого был изучен качественный и количественный состав основных групп БАВ, способных переходить как в водные так и в водно-спиртовые извлечения, которые используются в качестве лекарственных средств.

В работе использованы реактивы, стандарты, растворители, фильтры отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации,

1.1. Изучение состава БАВ соплодий хмеля хроматографическими методами.

Для идентификации БАВ с целью стандартизации сырья разработаны оптимальные методики ТСХ с использованием хроматографических пластинок фирмы «Мерк». Идентификацию БАВ осуществляли по стандартным образцам • Эфирное масло. Исследовали 1% раствор эфирного масла в гексане (рис. 1). Разделение компонентов проводили на пластинках Kieselgel G60 F254 в системе растворителей бензол-этилацетат (95:5). В эфирном масле идентифицированы гераниол, И-, ß- у-гумулен, а-гашен, терпинеол. мирцен, линалоол. Критерий разрешения ß- гумулена и близлежащей зоны более 1,2.

Кроме того, изучен компонентный состав эфирного масла соплодий хмеля, произрастающего в России с использованием капиллярной газовой хроматографии на Хромато-Масс-Спектрометре NBS 54 L с колонкой 30 м х 0,25 мм, неподвижная жидкая фаза полиметилсилоксан SE30, детектор масе-спектрометрический.

На хроматограмме эфирного масла с помощью компьютеризированных баз масс-спектрометрических данных идентифицированы следующие компоненты: 2-удеканон, а-иланген, а-копаен, а-кубебен, 2-додеканон, ß-кариофиллен, а-гумулен, (-^аристолен, ß-патчулен, 5-селинен, а-гурджунен, 2-тридеканон, ß-селинен, аллоаромадендрен, аромадецдрен, леден, а-селинен, у-селинен, у -кадинен, а-аморфен, ß-кубебен, гермакрен, а -кадинен, (+)-5-эпипарадизиол, 1,4-диметил-7-(1-метилэтил)-азулен, гвайазулен, (+)-а-ЦИПерон, бензо-^)-хинолин-6,9-дион, пальмитиновая кислота, 9н-карбазол, этилпальмитат, линолевая кислота,

а также азотсодержащее соединение, которое по масс-спектрам предположительно идентифицировано как алкалоид монтанин.

В качестве теста на подлинность соплодий хмеля мы рекомендуем использование компонентного состава эфирного масла.

Жирорастворимые витамины. В системе растворителей гексан-диэтиловый эфир (80:20) на пластинках Kieselgel G60 F254 проведено разделение жирорастворимых витаминов, экстрагированных из соплодий хмеля хлороформом. Идентифицированы ß-каротин (Rf ~0,84), а- ß- о- токоферол (Rf ~0,51, 0,17, 0,08, соответственно). Критерий разрешения а- токоферола и ближайшей зоны с Rf 0,66 равен 1,3.

• Производные ацилфлороглюцидов экстрагировали смесью метанол-вода (7:3). Разделение осуществляли на пластинках Kieselgel G60 F254 . В системе растворителей этилацетат-уксусная кислота-гексан (38:2:60) идентифицированы гумулон и лупулон Критерий разрешения зон гумулона и лупулона более 2.

• Флавоноиды идентифицировали в водно-спиртовом извлечении на пластинках Kieselgel в системе растворителей этилацетат-уксусная кислота-вода (5:1:1). Идентифицированы рутин (Rf ~0Д4), гесперидин (Rf ~0,30), мирицетин гиперозид мирицетин-рамнозид кверцетин+нарингенин кемпферол+апигенин критерий разрешения зон рутина и пшерозида 2,33.

• Лейкоантоцианы. Наличие лейкоантоцианов в водно-спиртовом извлечении соплодий хмеля устанавливали после их гидролиза в 5% растворе хлористоводородной кислоты в бутаноле. Нами было изучено влияние сорбента и подвижных фаз на качество разделения. В ходе эксперимента установлено, что оптимальное разделение происходит на пластинке со слоем целлюлозы (Cellulosa F) в системе растворителей уксусная кислота-соляная кислота-вода (50:10:50).

Идентифицированы лейкоцианидин (Rf-0,3) и лейкодельфинидин (Rf ~0,61) с критерием разрешения 7,9.

• Фенолкарбоновые кислоты идентифицировали в водно-спиртовом извлечении соплодий хмеля. Разделение фенолкарбоновых кислот проводили на пластинках Kieselgel G60 F254. Наилучшее разделение компонентов происходит в системе растворителей бензол-этилацетат-муравьиная кислота (4:4:2). Критерий разрешения зон ванилиновой и кофейной кислот при этом равен 1,6. Идентифицированы следующие кислоты с Rf: аскорбиновая (—0,30), галловая (~0,64), неохлорогеновая (-0,21), фумаровая (-0,70), кофейная (-0,75), ванилиновая коричная+салициловая бензойная+фенилантраниловая (~0,93).

• Аминокислоты изучали в водном извлечения соплодий на пластинках Kieselgel G60 F254. На основании проведенных исследований можно сделать вывод, что наиболее эффективными подвижными фазами являются смесь пропанол-вода (7:3) (критерий разрешения зон пролина и глицина 0,9), где идентифицируется 10 аминокислот (гистидин (Rf -0,04), аспарагин (Rf -0,29), серии (Rf -0,29), глицин (Rf -0,37), прояин (Rf -0,42), аланин (Rf -0,50), треонин (Rf -0,50), глутаминовая кислота (Rf -0,50), у-аминомасляная кислота (Rf -0,37), тирозин (Rf -0,75)) и двойная система бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5) и (8:3:1), где идентифицируются еще 5 аминокислот (лизин (Rf-0,09), цистеин (Rf -0,44), аспарагиновая кислота (Rf -0,20), аргинин (Rf -0,11), триптофан (Rf -0,67).

• Аскорбиновую кислоту идентифицировали в водном извлечении соплодий хмеля. В ходе эксперимента установлено, что наиболее эффективное разделение аскорбиновой кислоты от сопутствующих веществ происходит на высокоэффективной пластинке с силикагелем RP18 с использованием подвижной фазы этилацетат-уксусная кислота (80:20). Детектирование осуществляли в УФ-

свете (254км). Зона аскорбиновой кислоты (Rr-0,89) разделяется с зоной не идентифицированного компонента (Rr-0,93) с критерием разрешения 1,14.

Водорастворимые витамины в водном извлечении соплодий хмеля также определяли методом ВЭЖХ на хроматографе фирмы "Waters" с УФ-детектором, хроматографической колонкой Symmetry

В результате исследований в соплодиях хмеля идентифицированы витамины

1.2 Определение содержания БАВ в соплодиях хмеля.

Нами проведено количественное определение эфирного масла, каротиноидов, производных ацилфлороглюцидов, дубильных веществ, лейкоантоцианидинов, свободных органических кислот, нингидринактивных веществ в соплодиях хмеля, по модифицированным нами методикам, описанных в литературных источниках.

Для определения содержания флавоноидов разработана методика с использованием УФ-спектрофотометрии, основанная на использовании реакции комплексообразования флавоноидных соединений с алюминия хлоридом в кислой среде. В качестве стандартного вещества использовали рутин - на основании совпадения максимума дифференциальных спектров поглощения стандарта рутина с максимумом поглощения дифференциального спектра извлечений из соплодий хмеля при длине волны 415нм. В качестве аналитической выбрана длина волны415нм.

При выборе оптимальных условий экстракции флавоноидов изучено влияние концентрации этанола и продолжительность экстракции. Кроме того, были отработаны условия реакции комплексообразования суммы флавоноидов соплодий со спиртовым раствором алюминия хлорида. Исследовались следующие параметры: количество спиртового раствора алюминия хлорида, необходимое для полного связывания суммы флавоноидов в комплексное соединение, зависимость светопоглощения фотометрируемых соединений от времени проведения реакции

комплексообразования, а также установлена концентрация хлористоводородной кислоты, необходимая для образования устойчивого комплекса. Метрологические характеристики представлены в табл. 1.

Таблица 1

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов

В связи со сложностью определения аскорбиновой кислоты в низких концентрациях, содержащейся в растительном сырье, по существующим методикам, нами разработана высокочувствительная методика определения аскорбиновой кислоты в соплодиях хмеля. Определение проводят методом ВЭЖХ на хроматографе "ЦветЯуза", с применением амперометрического детектора, колонка «Luna С18» 5микрон, 150x4,6 мм.

Метрологические характеристики методики представлены в таблице 2.

Таблица 2

Метрологические характеристики методики определения содержания аскорбиновой кислоты

Как видно из данных таблиц 1 и 2 относительная ошибка единичного определения флавоноидов составляет ±5,0% и аскорбиновой кислоты ±2,6%, что свидетельствует о воспроизводимости предложенных методик.

Результаты содержания БАВ в соплодиях хмеля представлены в таблице 3.

Таблица 3

Содержание БАВ в соплодиях хмеля

Наименование БАВ Содержание БАВ Метрологические характеристики методики

Эфирное масло, % ОДО Дх=0,01 Е,%=5,0

Сумма производных ацилфлороглюцвдов (в пересчете на гумулон, лупулон, гулупон (средняя величина)), % 16,05 Дх=1,44 Е,%=9,0

Сумма флавоноидов (в пересчете на рупш), % 0,40 Дх=0,035 Е,%=5,0

Лейкоантоцианы (в пересчете на пеларгонидин), % 2,85 Дх=0,10 Е,%=3,6

Дубильные вещества (в пересчете на танин), % 2,60 Дх=0,14 Е,%=5,3

Сумма свободных органических кислот (в пересчете на яблочную кислоту), % 2,63 Дх=0,09 Е,%=3,5

Нингидринактивные вещества (в пересчете на аланин), % 1,68 Дх=0,04 Е,%=1,78

Аскорбиновая кислота, мг/% 035 Дх=0,0092 Е,%=2,6

Сумма каротаноидов (в пересчете на р-каротин), мг/% 7,4 Дх=0,19 Е,%=2,6

Из табл. 3 видно, что в соплодиях хмеля содержится значительное количество производных ацилфлороглюцидов, органических кислот и полифенольных соединений (дубильные вещества, лейкоантоцианы).

1.3. Определение минерального состава соплодий хмеля.

Методом ААС на спектрометре "Hitachi 180-80" по стандартным аналитическим программам в соплодиях хмеля проведено определение содержания макро- и микроэлементов (табл.4). Проведенные исследования показали, что среди макроэлементов преобладают калий, кальций, магний, а среди микроэлементов - марганец и железо. Содержание свинца и кадмия в соплодиях

хмеля значительно ниже, чем допустимые нормы тяжелых металлов, регламентированные СанПином.

Таблица 4

Содержание макро- и микроэлементов в соплодиях хмеля

Определяемые элементы Содержание элементов, мг/г

Калий 19,3±0,5800

Кальций 9,35±0,2800

Натрий 0,183±0,0055

Магний 6,46±0,1900

Железо 0,122±0,0024

Марганец 0,074±0,0014

Цинк 0,013±0,13-Ю*

Медь 0,003±0,36-10'4

Свинец О.ОООШ.И-Ю"1

Кадмий 0,00006±0,66-10'<>

2. Исследование содержания биологически активных веществ в соплодиях хмеля различных сортов

Сравнительные исследования проводили на опытных образцах сортов полученных от НИИ Проектно-технического института хмелеводства (г. Цивильск, Чувашия): Смолистый, Истринский, Ранний, Михайловский, Крылатский, Сумерь, Подвязный, также использовали соплодия сорта Челенджер (Бельгия) и дикорастущего хмеля, собранного в Московской области.

По литературным данным содержание производных ацилфлороглюцидов в соплодиях хмеля значительно колеблется в зависимости от сорта, поэтому для определения показателей качества сырья хмеля, проведены сравнительные исследования по содержанию и других БАВ в соплодиях хмеля различных сортов.

Поскольку соплодия хмеля являются эфиромасличным сырьем, мы провели сравнение компонентного состава его эфирного масла методом ТСХ, позволяющим выявить различия в исследованных образцах наиболее

распространенных сортов хмеля: Ранний, Сумерь, Смолистый. Хроматограммы представлены на рис. 1.

Хроматограммы эфирного масла соплодий хмеля сорта: 1- Сумерь, 2-Ранний, 3- Смолистый

090 «ш»

086

0.84

073 «п» 4

057 ■а»

0« СЖ> * «и»

0» ШЖ 7

040 8

0,27 ___ 9 «зг»

о ъ «Я» 10

йл 11 «а»

017

013 13

1- о-гумрвв+мирщен+лимонен,

2- а-пинен, 5- уиумулея, 7-р-гумулещ, 11-терпинеол, 12-

гераниол, 3,4,6,8,9,10,13 -нендентифицированы

Оарт

Рис.1.

В эфирном масле вдентифицированы. гераниол - в сорте Ранний; у-гумулен, а-пинен - в сортах Ранний, Сумерь; тертшеол, а-, Р-гумулен, мирцен, линалоол - во всех исследуемых сортах. Состав эфирного масла по сортам варьирует, что немаловажно при использовании определенного сорта для изготовления лекарственных средств

С использованием метода ТСХ нами установлено, что по качественному составу (наличие флавоноидов, лейкоантоцианов, аминокислот, органических кислот) сорта хмеля между собой не различаются.

Методом ВЭЖХ с УФ-детектором в соплодиях дикорастущего хмеля и сорта Ранний идентифицирован идентичный набор водорастворимых витаминов: пиридоксин, пиридоксаль, рибофлавин, тиамин, никотинамид, аскорбиновая кислота.

В результате исследований соплодий хмеля различных сортов установлено содержание БАВ и физико-химических показателей (табл.5).

Таблица 5

Результаты сравнительного изучения соплодий хмеля различных сортов

Определяемые показатели Исследуемые сорта хмеля

Истринский Крылат-ский Под- вяз- ный Ранний Челен-джер Михай лов-ский Су- мерь Дикорастущий

Эфирное масло,% 0,28 0,29 0,35 0,35 0,33 0,35 0,40 0,20

Производные ацилфлороглю цидов, % 14 ,20 14,90 24,40 15,90 16,30 11,60 16,70 10,0

Флавоноиды,% 0,60 0,79 0,62 0,69 0,45 0,68 0,61 0,40

Лейкоантоцианы, % 1,90 1,97 2,89 2,84 2,50 2,50 1,90 2,20

Дубильные веще-ства,% 1,84 1,28 2,51 2,61 1,60 1,94 1,26 1,19

Аскорбиновая кислота,мг/% 0,22 0,31 0,30 0,14 0,22 0,17 0,23 0,10

Органические кислоты,% 1,56 1,38 2,03 1,69 2,74 1,32 2,14 1,32

Каротиноиды, мг/% 8,20 6,80 8,80 7,40 7,90 8,50 6,40 6,0

Нингидринактив-ные вещества,% 1,86 2,24 2,6 1,62 3,2 1,63 2,50 1,10

Суммарная антиоксидантная активность,мг/г 12,20 15,20 14,10 11,70 13,20 14,50 11,60 11,70

Зола общая,% 7,20 7,0 5,60 8,30 7,80 6,40 7,50 6,70

Зола не растворимая в 10% НС1,% 1,15 1,60 1,29 2,70 0,50 2,10 1,25 1,03

Влажность,% 7,60 7,50 7,80 7,10 10,0 7,80 7,30 6,90

Для оценки качества соплодий хмеля различных сортов нами проведено определение их суммарной антиоксидантной активности (табл.5) с использованием прибора «Яуза-ААА-01» при следующих условиях: амперометрический детектор со стеклянноугольным электродом который имеет высокую селективность в отношении соединений, у которых имеются функциональные группы, способные окисляться или восстанавливаться

(полифенольные или оксифенольные кислоты, витамины, аминокислоты и др.); напряжение на электроде +1,ЗВ; элюент - бидистиллированная вода. Расчет антиоксидантной активности соплодий хмеля проводили в пересчете на ГСО дигидрокверцетина (ФС 42-3853-99).

Анализ данных табл. 5 показал, что наибольшее различие сортов наблюдается по содержанию производных ацилфлороглюцидов, где выделяется сорт Подвязный. Такие сорта с повышенным содержанием производных ацилфлороглюцйдов можно рекомендовать для создания лекарственных средств обогащенных этими БАВ. В целом для производства лекарственных препаратов правомерно использовать все сорта хмеля, включая сырье от дикорастущих растений.

3. Исследование препаратов соплодий хмеля

Настой соплодий хмеля. Соплодия хмеля используются в основном для приготовления настоя. Настой готовили в соотношении 1:20 по методике ГФ XI изд. Он представлял собой раствор зеленовато-желтого цвета, горького вкуса с рН=3,9, со своеобразным ароматным запахом. В ходе исследований был определен коэффициент водопоглощения (К„) соплодий, который составил 1,3 ±0,06%.

Нами проведено изучение содержания БАВ в полученном настое из соплодий хмеля. Проведенные исследования показали, что в настой из соплодий хмеля переходят следующие группы соединений: производные ацилфлороглюцйдов 0,22±0,02%, свободные органические кислоты 0,1+0,01%, дубильные вещества 0,08±0,005%, сумма флавоноидов 0,023±0,002%, лейкоантоцианы 0,03±0,004%, нингидринактивные вещества 0,099±0,006%. Сухой остаток настоя составил 0,85±0,009%.

Экстракт соплодий хмеля сухой. В настоящее время из соплодий хмеля налажено производство экстракта хмеля сухого, который является перспективной субстанцией для создания различных лекарственных препаратов.

Для исследования были взяты образцы сухого экстракта, произведенные и представленные ООО «Хармс» (г. Санкт-Петербург). Для разработки проекта ФСП и стандартизации экстракта хмеля сухого, были проведены исследования его химического состава.

Экстракт хмеля сухой представляет собой аморфный порошок от светло-коричневого до темно-коричневого цвета со специфическим запахом, горького вкуса, потеря в массе при высушивании- не более 12%, зола общая не более 15%, содержание тяжелых металлов не более 0,001 %.

Изучение качественного состава сухого экстракта показало присутствие в нем производных ацилфлороглюцидов, дубильных веществ, флавоноидов, лейкоантоцианов, аминокислот.

Определение содержания БАВ в сухом экстракте проводилось на 3-х образцах (среднее из 3-х измерений) по разработанным нами и отдельным модифицированным методикам описанным в литературе.

Проведенные исследования показали, что в экстракте хмеля сухом содержатся следующие группы соединений: производные ацилфлороглюцидов 5,0±0,2%, свободные органические кислоты 8,4±0,45%, дубильные вещества 7,2±0,40%, сумма флавоноидов 1,5±0,07%, нингидринактивные вещества 3,2±0,07%, аскорбиновая кислота 0,50±0,0023 мг/%. Антиоксидантная активность (в пересчете на дигидрокверцетин) составила 38,5±1,95мг/г.

Стандартизацию экстракта хмеля сухого проводили по группам веществ наиболее характерным для соплодий хмеля: сумме производных ацилфлороглюцидов и дубильным веществам.

Разработанные показатели качества экстракта хмеля сухого: описание внешнего вида, подлинность, потеря в массе при высушивании, зола общая, содержание суммы производных ацилфлороглюцидов в пересчете на лупулон, гумулон, гулупон (средняя величина) и дубильных веществ в пересчете на танин включены в проект ФСП на сухой экстракт.

Проведена также оценка антиоксидантной активности в пересчете на ГСО дигидрокверцетина раствора сухого экстракта 1:20, которая составила ПО мкг/мл и настоя 1:20 полученного из соплодий хмеля, которая составила 36 мкг/мл. Учитывая содержание БАВ в настое, полученном из соплодий хмеля, получили раствор сухого экстракта с такой же концентрацией БАВ в растворе. Антиоксидантная активность обоих растворов оказалась близкой: 31 и 36 мкг/мл соответственно.

Проведенные исследования показали, что данные извлечения практически не отличаются между собой по качественному составу, что позволяет использовать экстракт в качестве субстанции для приготовления различных лекарственных препаратов, в том числе настоя.

4. Стандартизация соплодий хмеля

Нами были изучены требования к стандартизации соплодий хмеля в различных НД на соплодия хмеля. Сравнительный их анализ позволил установить, что в фармакопеях Европы, Великобритании, Германии соплодия хмеля стандартизуют по количеству экстрактивных веществ, в ГОСТе 21946-76 - по содержанию альфа-кислоты. В отечественных фармакопеях X и XI издания, а также в фармакопях США, Франции, Польши, и некоторых других стран отсутствуют ФС на соплодия хмеля. Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что уровень контроля качества соплодий в зарубежных и отечественных НД не соответствует современным требованиям к соплодиям хмеля как лекарственному растительному сырью, поэтому возникла необходимость создания общей ФС.

С целью стандартизации сырья было впервые проведено сравнительное изучение внешних признаков и микроскопии цельных, измельченных и порошка соплодий хмеля.

Выявлены диагностические признаки, позволяющие идентифицировать соплодия хмеля по наличию железок, различных типов волосков, друзам оксалата

кальция в паренхиме, частиц плодов с извилистыми утолщенными клетками экзокарпия. Результаты исследований представлены в виде микрофотографий.

Исследование химического состава соплодий хмеля позволило обосновать подход к анализу и стандартизации сырья. Для определения подлинности и качества соплодий разработаны методики на основе качественных реакций, методов ТСХ, УФ-спектрофотометрии и титриметрии.

Соплодия хмеля являются эфиромасличным сырьем, а также содержат значительное количество полифенольных соединений. Поэтому для идентификации соплодий по разработанным нами методикам введены ТСХ-тесты на эфирное масло и флавоноиды, а также цветная реакция на лейкоантоцианы.

Стандартизацию соплодий хмеля по биологически активным веществам проводили по содержанию эфирного масла, суммы производных ацилфлороглюцидов (в пересчете на лупулон, гумулон, - гулупон — средняя величина) и суммы флавоноидов {в пересчете на рутин). Содержание эфирного масла определяли перегонкой с водяным паром, производных ацилфлороглюцидов методом неводного титрования, флавоноидов спектрофотометрически. Полученные результаты использовали при разработке норм количественных показателей, вошедшие в проект ФС на соплодия хмеля.

Таким образом, в результате исследований для соплодий хмеля были определены характеристики подлинности (внешние признаки, микроскопия, качественные реакции и ТСХ) и числовые показатели (содержание эфирного масла, суммы производных ацилфлороглюцидов и флавоноидов, влажность, зола общая, не растворимая в 10% HCL, измельченность и др.), включенные в проект ФС на хмеля соплодия (табл. 6).

Таблица 6

Числовые показатели и нормы, включенные в проект ФС на соплодия

хмеля

Показатели качества Нормы содержания, %

Цельные Измельчен Порошок

соплодия ные соплодия (5мм) соплодии (2мм)

Эфирного масла,не менее 0,2 0,2 0,2

Суммы производных ацилфлороглюцидов 10,0 10,0 10,0

(в пересчете на гумулон, лупулон. ,гулупон

(средняя величина)), не менее

Суммы флавоноидов (в пересчете на 0,3 0,3 0,3

рутин),не менее

Влажность.не более 13,0 13,0 13,0

Золы общей,не более 10,0 10,0 10,0

Золы не раств. в 10% НСЬ,не более 3,0 3,0 3,0

Других частей растения„не более 10,0 10,0 —

Осыпавшихся чешуй,не более 25,0 — —

Органической примесите более 1,0 1,0 —

Минеральной примесите более 0,5 0,5 —

Частиц, не проходящих сквозь сито с отв. — 5,0 —

разм. 5 мм,не более

Частиц, не проходящих сквозь сито с отв. — — 2,0

разм. 2 мм,не более

Частиц, ие проходящих сквозь сито с отв. — 15,0 —

разм. 0,5 мм ,не более

Частиц, не проходящих сквозь сито с отв. — — 15,0

разм. 0,18 мм.не более

выводы

1. С использованием современных физико-химических методов (ГЖХ, ВЭЖХ, ТСХ, ВЭТСХ, ААС) проведено комплексное изучение химического состава соплодий хмеля. С использованием ТСХ и ВЭТСХ разработаны методики и идентифицированы флавоноиды, лейкоантоцианы, фенолкарбоновые и аминокислоты, гумулон, лупулон, аскорбиновая кислота,

токоферолы. Методом ВЭЖХ установлено наличие водорастворимых витаминов: РР, С, В1, Вз, Вб.

2. Методом капиллярной ГЖХ с МС-детектором определен качественный состав эфирного масла хмеля. Идентифицированы 2-тридеканон, р-кариофинлен, Я-

гумулен, гвайазулен, пальмитиновая кислота, этилпальмитат,

линолевая кислота и др.

3. Разработаны методики количественного определения в соплодиях хмеля: суммы флавоноидов в пересчете на рутин, основанная на использовании реакции комллексообразования флавоноидных соединений с алюминия хлоридом в кислой среде методом УФ-спектроскопии и аскорбиновой кислоты методом ВЭЖХ с амперометрическим детектором. Ошибка методики определения флавоноидов составила 5%, а аскорбиновой кислоты - 2,6%.

4. Определено содержание основных групп БАВ в соплодиях хмеля: эфирного масла 0,20±0,01,- производных ацилфлороглюцидов 16,05±1,44, дубильных веществ 2,60±0,14, флавоноидов 0,40±0,035, лейкоантоцианов 2,85±0,10, органических 2,63±0,09 и аскорбиновой кислот 0,35±0,0092, каротиноидов 7,4±0,19, нингидринактивных веществ 1,68±0,04, установлено содержание ряда макро- и микроэлементов.

5. Проведены сравнительные исследования различных сортов хмеля по содержанию БАВ. В исследуемых сортах установлено различие компонентного состава эфирного масла, а также наличие идентичных БАВ, различающихся по количественному содержанию. На основании проведенных исследований обоснована возможность использования для получения лекарственных препаратов всех исследуемых сортов.

6. Для стандартизации соплодий хмеля цельных, измельченных и порошка разработаны и включены в созданный проект ФС на соплодия хмеля характеристики подлинности (внешние признаки, микроскопия, качественные реакции, тонкослойная хроматография) и показатели качества соплодий хмеля (сумма производных ацилфлороглюцидов; сумма флавоноидов; содержание эфирного масла; влажность; содержание золы общей; содержание золы не растворимой в растворе 10% хлористоводородной кислоты и др.).

7. Проведенные исследования показали, что в настой и экстракт хмеля сухой переходят одни и те же группы БАВ, причем в сухом экстракте содержание БАВ в 2,5 раза больше, за исключением производных ацилфлороглюцидов; разработаны показатели качества но содержанию БАВ (содержание суммы производных ацилфлороглюцидов и флавоноидов) для сухого экстракта, которые включены в проект ФСП на экстракт хмеля сухой.

8. С использованием электрохимического метода установлена АОА соплодий хмеля в пересчете на дигидрокверцетин -11,7-15,2 мг/г в зависимости от сорта и экстракта хмеля сухого - 38,5 мг/г (среднее значение из трех определений).

Основное содержание диссертационной работы отражено в публикациях:

1.Горошко О.А., Пахомов В.П., Самылина И.А, Никулина И.Н. Хмель-эффективное и перспективное лекарственное растение // Ежег. сб. научных работ каф. клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней, ММА им. И.М. Сеченова, Института традиционных методов лечения МЗ РФ (под. ред. академика РАМН проф. В.Г. Кукеса).-М.,1999.-с.31-33.

2. Горошко О.А., Пахомов В.П., Самылина И А, Никулина И.Н. Биологически активные вещества хмеля, используемого в лекарственных препаратах и пищевых добавках // Тезисы научно-практ. конф. "Биологически активные добавки к питанию и лекарственные препараты на натуральной основе в профилактике, лечении и реабилитации",-М.,2000.-с.85-87.

3. Горошко ОА, Пахомов В.П., Самылина ИА, Никулина И.Н. Использование хмеля в фитотерапии // Практическая фитотерапия.-2000.-№ 1.-с.39-44.

4. Горошко О.А., Пахомов В.П., Самылина И.А., Никулина И.Н. Анализ шишек хмеля методом спектрофотометрии // Тез. докл. Всероссийской конференции "Химический анализ веществ и материалов".-М., 2000.-С.46-47.

5. Горошко ОА, Пахомов В.П., Самылина ИА, Никулина И.Н. Исследование состава шишек хмеля // Фармация.-2000.-№4.-с.48-50.

6. Горошко ОА, Пахомов В.П., Самылина ИА, Никулина И.Н. Определение суммы фенольных соединений в шишках хмеля // Материалы итоговой научной работы Института клинической фармакологии за 2000г.-М.,2001.-с.24-25.

7. Горошко ОА Исследование флавоноидов и лейкоантоцианов в шишках хмеля методом тонкослойной хроматографии и спектрофотометрии // Тез. докл. Научно-технической конференции "Молодые ученые пищевым и перерабатывающим отраслям АПК".-М.,2000.-с. 191-192.

8. Горошко ОА, Пахомов В.П., Самылина ИА Разработка методов анализа для стандартизации лекарственного растительного сырья "шишки хмеля" // Тез. докл. VIII Российского национального конгресса "Человек и лекарство".-М.,2001.-с.702.

9. Горошко ОА, Пахомов В.П., Самылина ИА Определение содержания биологически активных веществ в шишках хмеля различных сортов // Сб. научн. трудов международной конф. "Генетические ресурсы лекарственных и ароматических растений", посвященной 50-и летию ботанического сада ВИЛАРа.-М.,2001.-с.372-373.

10. Горошко ОА, Пахомов В.П., Самылина ИА. Соплодия хмеля в производстве лекарственных препаратов // Тез. докл. X Российского национального конгресса "Человек и лекарство". - М.,2003.-с.708.

11. Горошко О А., Пахомов В.П., Самылина И А. Хмель в традиционной медицине // Перспективы традиционной медицины.-2003.-№ 2,-с.ЗО-ЗЗ.

12. О А Goroshko, V.P. Pakhomov, and IA Samylma Planar Chromatography in the studies of biologically active compounds in hop cones // Program abstracts of 3rd Int. Symposium on Separetion in BioSciencies «100 years of Chromatography». -Moscow,20G3.-p.205.

Подписано к печати 22.02.2005 г.

Отпечатано в типографии ГУ НИИ Биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН Печать ризографическая DD 25

Тираж 100 экз. Москва, ул. Погодинская 10.

í afm

r /

Оглавление диссертации Горошко, Ольга Александровна :: 2005 :: Москва

Введение

Глава1 Обзор литературы

1.1 .Ботанико- морфологические характеристики хмеля

1 ^.Распространение и сорта хмеля

1.3. Химический состав, методы идентификации и количественного определения действующих веществ соплодий хмеля

1.4.Современное состояние стандартизации соплодий хмеля

1.5. Фармакологическое действие БАВ соплодий хмеля, а также препаратов на его основе

1.6. Хмель в других отраслях народного хозяйства

Экспериментальная часть

Глава II. Объекты и методы исследования

2.1 .Исследование химического состава соплодий хмеля

2.2. Исследование эфирного масла и идентификация компонентного состава

2.3. Идентификация и количественное определение производных ацилфлороглюцидов (горьких кислот) в соплодиях хмеля

2.4.Идентификация и количественное определение флавоноидов в соплодиях хмеля 58 2.4.1 .Идентификация флавоноидов в соплодиях хмеля 58 2.4.2.Выбор условий и разработка методики количественного определения флавоноидов 62 2.4.2.1. Исследование влияния концентрации кислоты на оптическую плотность комплекса флавоноидов с алюминия хлоридом

2.4.2.2. Изучение условий проведения реакции флавоноидов с алюминия хлоридом

2.4.2.3. Исследование количества экстрагируемых флавоноидов в зависимости от концентрации экстрагента и времени экстракции.

2.4.3. Методика определения суммы флавоноидов в соплодиях хмеля

2.5. Идентификация и количественное определение лейкоантоцианов в соплодиях хмеля

2.6. Определение содержания дубильных веществ в соплодиях хмеля

2.7. Идентификация и определение содержания водорастворимых витаминов в соплодиях хмеля

2.8. Идентификация и определение содержания жирорастворимых витаминов в соплодиях хмеля

2.9. Идентификация и определение содержания органических кислот в соплодиях хмеля

2.10. Идентификация и определение содержания аминокислот в соплодиях хмеля

2.11. Обнаружение алкалоидов в соплодиях хмеля

2.12. Изучение минерального состава соплодий хмеля 131 Выводы к главе II

Глава III. Исследование содержания биологически активных веществ в соплодиях хмеля различных сортов

3.1. Сравнительный анализ эфирного масла сортов хмеля методом ТСХ

3.2. Сравнительный анализ содержания водорастворимых витаминов в сортах хмеля

3.3. Сравнительная характеристика сортов хмеля по содержанию некоторых групп Б AB и физико-химическим показателям

3.4. Сравнительная характеристика сортов хмеля по суммарной антиоксидантной активности 146 Выводы к главе III

Глава IV. Исследование препаратов соплодий хмеля

4.1. Исследование водного извлечения

4.2. Исследование экстракта хмеля сухого 153 4.2.1 Качественный анализ экстракта хмеля сухого 154 4.2.2. Количественное определение содержания Б AB в экстракте хмеля сухом

Выводы к главе IV

Глава V. Стандартизация соплодий хмеля

5.1. Разработка характеристик подлинности соплодий хмеля

5.1.1. Макроскопический анализ

5.1.2. Микроскопический анализ

5.1.3. ТСХ-тесты и качественные реакции

5.2.Разработка показателей качества соплодий хмеля

5.2.1. Определение содержания эфирного масла

5.2.2. Определение содержания суммы флавоноидов

5.2.3. Определение содержания суммы производных ацилфлороглюцидов

5.2.4. Определение содержания влажности

5.2.5. Определение содержания золы общей

5.2.6. Определение содержания золы не растворимой в растворе 10% хлористоводородной кислоты

5.2.7. Определение содержания осыпавшихся чешуй

5.2.8. Определение содержания примесей и измельченности

5.2.9. Изучение стабильности соплодий хмеля при хранении 182 Выводы к главе V 184 Общие выводы 186 Литература 188 Приложения

Общая характеристика работы

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Горошко, Ольга Александровна, автореферат

Одним из таких растений является хмель обыкновенный - НшшЦш 1ири1из (Ь.), семейство Коноплёвые - СаппаЬасеае. В народной медицине соплодия хмеля используют уже более 2,5 тыс. лет. В настоящее время в официнальной медицине нашей страны соплодия хмеля используются весьма ограниченно. Кроме того, химический состав и вопросы стандартизации соплодий хмеля как лекарственного растительного сырья, в т.ч. отечественного происхождения, с учетом всего комплекса содержащихся в них биологически активных веществ (БАВ) мало изучены. Между тем в мировой фармацевтической практике около 10% соплодий хмеля используется для производства лекарственных средств.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

3. Провести сравнительное изучение химического состава соплодий хмеля различных сортов.

Научная новизна. С использованием современных физико-химических методов (ГЖХ, ВЭЖХ, ТСХ, ВЭТСХ, УФ-спектрофотометрия, ААС) проведено комплексное изучение состава соплодий хмеля. Определено содержание эфирного масла, флавоноидов, лейкоантоцианов, органических, горьких и аскорбиновой кислот, дубильных и нингидринактивных веществ, каротиноидов, макро- и микроэлементов. Методом капиллярной ГЖХ с МС-детектором изучен компонентный состав эфирного масла. Выявлены группы БАВ для оценки качества и стандартизации соплодий хмеля - эфирное масло, производные ацилфлороглюцидов, флавоноиды.

Проведено сравнительное изучение по содержанию БАВ в соплодиях хмеля различных сортов.

Определена антиоксидантная активность соплодий хмеля различных сортов, настоя и экстракта хмеля сухого.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны:

• методики определения подлинности микроскопическим методом (порошок соплодий хмеля), с использованием ТСХ (флавоноиды, эфирное масло), качественная реакция на лейкоантоцианы; методики определения содержания производных ацилфлороглюцидов в соплодиях хмеля, суммы флавоноидов, эфирного масла, которые включены в разработанный нами проект ФС «Хмеля соплодия», переданный на рассмотрение в Государственный Фармакопейный комитет.

• методики определения подлинности (ТСХ) сухого экстракта и количественного определения производных ацилфлороглюцидов в сухом экстракте хмеля (заключение об апробации в ОКК ОАО «Хармс» от 18.02.2005. ), которые включены в разработанный нами проект ФС «Экстракт хмеля сухой».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ.

На защиту выносятся:

• Результаты изучения качественного и количественного состава БАВ соплодий хмеля.

• Результаты сравнительного изучения химического состава соплодий хмеля различных сортов.

• Результаты по разработке характеристик подлинности и показателей качества соплодий хмеля.

• Результаты исследований химического состава настоя и экстракта хмеля сухого.

• Результаты оценки антиоксидантной активности соплодий, настоя и экстракта хмеля сухого.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на конференции "Фитотерапия в геронтологии" (Москва, 2000г.), Всероссийской конференции "Химический анализ веществ и материалов" (Москва, 2000г.), Научно-технической конференции "Молодые ученые пищевым и перерабатывающим отраслям АПК" (Москва, 2000г.), Международной конференции "Генетические ресурсы лекарственных и ароматических растений", посвященной 50-и летию ботанического сада ВИЛАРа (Москва, 2001г.).

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 200 страницах, содержит 46 таблиц, 27 рисунков, 13 фотографий и состоит из введения, обзора литературы, четырех глав экспериментальной части, библиографии из 183 наименований, из которых 50 на иностранных языках и приложений.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое исследование соплодий хмеля"

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ V.

1. Разработаны характеристики подлинности соплодий хмеля (внешние признаки, микроскопия, качественные реакции, ТСХ), которые включены в проект ФС «Хмеля соплодия».

2. На основании анализа 5 различных образцов цельных соплодий хмеля разработаны следующие показатели качества: эфирного масла не менее 0,2%; суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 0,3%; суммы производных ацилфлороглюцидов в пересчете на лупулон, гумулон, гулупон (среднее значение) не менее 10,0%; влажность не более 13,0%; золы общей не более 10,0%; золы не растворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной не более 3,0%; содержание осыпавшихся чешуй не более 25%; содержание органической примеси не более 1%, содержание минеральной примеси не более 0,5%, содержание других частей растения не более 10%. Числовые показатели включены в проект ФС «Хмеля соплодия».

3. На основании анализа 5 различных образцов измельченных соплодий хмеля разработаны следующие показатели качества: эфирного масла не менее 0,2%; суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 0,3%; суммы производных ацилфлороглюцидов в пересчете на лупулон, гумулон, гулупон (среднее значение) не менее 10,0%; влажность не более 13,0%; золы общей не более 10,0%; золы не растворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной не более 3,0%; частиц не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 5мм не более 5,0%, частиц проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5мм не более 15%. Числовые показатели включены в проект ФС «Хмеля соплодия».

4. На основании анализа 5 различных образцов порошка соплодий хмеля разработаны следующие показатели качества: эфирного масла не менее 0,2%; суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 0,3%; суммы производных ацилфлороглюцидов в пересчете на лупулон, гумулон, гулупон (среднее значение) не менее 10,0%; влажность не более 13,0%; золы общей не более 10,0%; золы не растворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной не более 3,0%; частиц не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2мм не более 2,0%, частиц проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,18 мм не более 15%. Числовые показатели включены в проект ФС «Хмеля соплодия».

5. На основании результатов анализа соплодий хмеля при хранении в течение 2,3 лет предложено установить срок годности соплодий хмеля -2 года. Данный срок годности включен в проект ФС «Хмеля соплодия».

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2005 года, Горошко, Ольга Александровна

1. Аксенова З.И. Определение физико-химических показателей качества хмеля и продуктов его переработки. - Харьков, 1989.-150 с.

2. Александров Ю.А. Хмелевое сырье для использования в лечебно-профилактических и лекарственных целях // Тр. IV междунар. симпозиума «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования».-М.,2001 .-Т.2.-С.25-26.

3. Ахрем A.A., Кузнецов А.И. Тонкослойная хроматография .-М., 1964.-174с.

4. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений.-Киев: Наукова думка, 1976.-260 с.

5. Биологически активные вещества растительного происхождения. Головкин Б.И., Руденская Р.Н., Трофимова И.А., Шредер А.И.- М.: Наука, 2001.- Т.2.-762 с.

6. Бленда В.Ф. Определение лейкоантоцианов методом колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте // Физиология и биохимия культурных растений.-Киев,1976.-№8.-Вып.6.-С.649-653.

7. Бочко Г.М. Использование растений для коррекции иммунодефицитов // Актуальные вопросы фитотерапии / Материалы юбил. Конф. РОО «Фитотерапевтическое общество».-М.,2002.-С. 178

8. Бреднева Н.Д. Методические подходы к созданию многокомпонентных лекарственных средств и биологически активных веществ. // Новая аптека. Аптека и рынок. -2001.-№ 9.-С.63-70.

9. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов мембран и г природные антиоксиданты// Успехи химии.-1985.-Вып. 9.-С. 1540-1558.

10. Ю.Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии.-М.,1990.-Т.2.-348с.11 .Герасимчук В.И., Рейтман И.Т., Ежов И.С. Хмель в медицине, быту и народном хозяйстве.-Киев:Урожай, 1994.-352с

11. Годованный A.A. Хмель и его использование.-Киев, 1990.-330с.

12. Горелова А.Г. Эстрогенная активность экстракта хмеля // Материалы X научной конференции по фармакологии. М., 1966.-Ч.2.-С.114-116.

13. Горошко O.A., Пахомов В.П., Самылина И.А., Никулина И.Н. Использование хмеля в фитотерапии // Практическая фитотерапия.-2000,-№ 1.-С.39-44.

14. Гороппсо O.A., Пахомов В.П., Самылина И.А., Никулина И.Н. Анализ шишек хмеля методом спектрофотометрии // Тез. докл. Всероссийской конференции "Химический анализ веществ и материалов".-М., 2000.-С.46-47.

15. Горошко O.A., Пахомов В.П., Самылина И.А., Никулина И.Н. Исследование состава шишек хмеля // Фармация.-2000.-№4.-С.48-50.

16. Горошко O.A., Пахомов В.П., Самылина И.А., Никулина И.Н. Определение суммы фенольных соединений в шишках хмеля // Материалы итоговой научной работы Института клинической фармакологии за 2000г.-М., 20Ö1.-C.24-25.

17. Горошко O.A. Исследование флавоноидов и лейкоантоцианов в шишках хмеля методом тонкослойной хроматографии и спектрофотометрии // Тез. Докл. Научно-технической конференции "Молодые ученые пищевым и перерабатывающим отраслям АПК".-М., 2000.-С. 191-192.

18. Горошко O.A., Пахомов В.П., Самылина И.А. Разработка методов анализа для стандартизации лекарственного растительного сырья "шишки хмеля" // Тез. докл. УШ Российского национального конгресса "Человек и лекарство".-М., 2001.-С.702.

19. Госреестр лекарственных средств.-М., 2002.-Т. 1.-1297 с.

20. Государственная фармакопея CCCP.-10-e издание.-М.: Медицина, 1968.1088 с.

21. Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа. / МЗ СССР.-11-е изд., доп.-М.Медицина,1987.-333 с.

22. Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР,- 11-е изд-е , доп.-М.: Медицина, 1990.-397 с.

23. Гринкевич Н.И., Сафронович Л.Н. и др. Химический анализ лекарственных растений. М.Д983-С.133.

24. Гурецкая В.Ф., Ежов И.С. Поляриметрический метод определения а. кислот в хмеле // Сб. тр. НИЛ СПб комбината пивоварения ибезалкогольной промышленности им. С.Разина.- СПб., 1994.-Т.2.-С.192-195.

25. Демидова O.A. Оценка содержания водорастворимых витаминов в лекарственных препаратах и биологических жидкостях методом ВЭЖХ: Автореф.дисс.канд. фармац. наук.- М.,2002.-26с.

26. Демина Т.Г. Антоцианы зрелых плодов некоторых дикорастущих кустарников Горного Алтая: Автореф. дисс. . канд. биол. наук.-Новосибирск, 1968,- 18 с.

27. Дикорастущие полезные растения России / Отв. ред. Буданцев A.A., Лесковская Е.Е. СПб: Изд-во СПХФА, 2001.-663с.

28. Димитрова М., Хрусавов Д., Диннов Н. Качественные показатели хлебопекарных дрожжей из хмеля и изменения в микрофлоре при их хранении // Известия вузов пищ. технологии.-1999.-№4.-С. 16-17.

29. Егоров В.Ю., Карашков С.А. Исследование дикорастущих лекарственных растений как потенциальных источников для пищевых и липидных препаратов // Тез. докл. IV конф. «Биоантиоксидант». М., 1993. - T.I. - С. 174.

30. Егорова Е.И. Влияние времени и способов хранения на качество хмеля // Культура хмеля. Труды. -М.: Пищепромиздат, 1954.-Вып.1.-С.109-114.

31. Ежов И.С., Турецкая В.Ф. Влияние токоферолов на стабильность альфа-кислот в процессе хранения пива//Ферментная и спиртовая промышленность.-1977.-№4.- С. 15-17.

32. Ермакова В.А. Фармакогностическое изучение и стандартизация сборов, брикетов и растительных порошков: Дисс. . доктора фарм.наук.-М., 1999.-313с.

33. Есысин А.П., Левдаеский В.А., Полежаева Н.И. Метод количественного фотометрического определения дигидрокверцетина // Химия растит. сырья.-1998.-№3.-С. 14-17.

34. Ефремов А.П., Шретер А.Н. Травник для мужчин.-М., 1996.-349 с.40.3апрометов М.Н. Фенольные соединения: распространение, метаболизм ифункции в растениях,- М.: Наука, 1993,- 271с.

35. Зыкова Н.Я., Бондаренко A.C. Изучение хладонового экстракта шишек хмеля обыкновенного // Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации: тез. докл. Всесоюзн. конф,- Л.,1989.-С.135-136.

36. Зыкова Н.Я., Лещинюк И.И. Влияние хладонового экстракта хмеля на сердечно-сосудистую систему // Науч.-технический прогресс в кардиологии:тез конф.-Харьков, 1986.- С. 156-157.

37. Изменение №4 ГФ XI изд., вып. 2 к ст.38.- "Плоды шиповника".

38. Кагановский Б.М., Рейтман Н.Г. Хмель, его лечебные свойства и перспектива использования // Растительные ресурсы.-Л.:Наука, 1980,-Т.16,- С.459-465.

39. Калунянц К.А. Химия солода и пива.-М.: Агропромиздат, 1990.-357с.

40. Карабанов Ю.В. Аскорб1нова кислота i глютатюн у молодого хмелю // HoBi дошпження галуз1 хмелярства.-1961.- Вып.5.-С.25-27.

41. Клобунова-Алисова E.H. Дикорастущие полезные и вредные растения Башкирии.-М.: Изд-во Академии наук СССР.- 1958.- Т.1.-219 с.

42. Кожанова Л.А., Бараш Г.И., Федорова Г.А. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в премиксах методом ВЭЖХ // Химический анализ веществ и материалов / Тез. докладов Всероссийской конференции.- М., 2000.-С.70

43. Кондаков М.С. О методике определения горьких веществ в воздушно-сухом хмеле // Труды. Культура хмеля.-М: ПищепромиздатД954.- Вып.1.-С.100-109.

44. Коробкина З.В. Использование антисептических веществ при хранении плодов и овощей //Науч. труды Самарканд, кооп. ин-та. -1964.-С.13-19.

45. Корсун В.Ф., Коваленко В.В. Аптекарский огород.-М.: Крон-пресс, 1997.-432с.

46. Корсун В.Ф., Ситкевич А.Е., Ефимов В.В. Лечение кожных бактерий препаратами растительного происхождения. -Минск, 1995.-383с.

47. Косминский Г.И. Технология солода, пива и безалкогольных напитков. Лабораторный практикум по технологическому контролю производства.-Минск: Дизайн ПРО, 1998.-352 с.

48. Кукес В.Г., Ребров В.Г., Сулейманов С.Ш. Конструирование сбора лекарственных растений.- Хабаровск, 1999.-319 с.

49. Купчак Т.В. Фотохимические характеристики гибридной формы кукурузы Zea mays L. и технология антоциановых красящих препаратов: Автореф. дисс. . канд. фармац. наук.- СПб.:ГФХА, 1998.-23 с.

50. Ладынина Е.А., Морозова P.C. Фитотерапия. -Л., 1990.- 69 с.

51. Лекарственное растительное сырье, применяемое в медицинской практике в СССР / Под общ. ред. К.Ф.Блиновой.-Л., 1991.-53 с.

52. Лекарственные растения. Изучение и рациональное использование. Хайретдинов С.С., Галиахметов Х.З., Минибаев Р.Г., Кутлуева Г.Г.- Уфа, 2002,- 102с.

53. Ликинс С., Никерсон Б. Идентификация сортов хмеля на основе результатов анализа эфирного масла методом газовой хроматографии // Новое в возделывании за рубежом / Сб. переводов,- М.,1970,- С.22-25.

54. Лобанчикова Н.В. Разработка и стандартизация седативных растительных сборов: Дисс. . канд.фарм.наук.-М., 1991.-146 с.

55. Лозовская Е.Л., Сапежинский И.И. Сравнительная эффективность некоторых лекарственных препаратов как акцепторов супероксидных радикалов //Биофизика. -1993.-Т. 38.-№1.-С. 31-36.

56. Лукина Д.И. Экспресс метод определения золы в хмеле // Селекция, питомниководство и сортовая агротехника хмеля / Труды,- М.,1985.-С.132-138.

57. ЛутцеваА.И., Маслов Л.Г. Методы контроля и стандартизации лекарственных препаратов, содержащих водорастворимые витамины // Хим.- фарм. журнал.-1999.-№9.-С.32-37.

58. Любушкин A.A. О седативных свойствах хмеля / В кн.: реф. докладов XIV научной сессии Чкаловского Медицинского Института.-Чкалов, 1955.-С.48-49.

59. Ляшенко Н.И. Количественное определение горьких веществ хмеля // Физиология и биохимия культурных растений.-1978,- Т.10.- №1.-СЛ00-104.

60. Ляшенко Н.И. Фенольные соединения в различных органах хмеля // Физиология и биохимия культурных растений.- 1977.-№9,- Вып.3.-С.316-321.

61. Ляшенко Н.И. Химический состав эфирных масел хмеля // Хмелеводство,-Киев:Урожай, 1975.- С.73-79.

62. Ляшенко Н.И., Кулинич М.А. Хемосистематика хмеля по составу эфирных масел и горьких веществ // Хмелеводство.- Киев:Урожай, 1986.-Вып.8.-С.9

63. Ляшенко Н.И., Солодюк Г.Д. Методы количественного определения полифенолов в хмеле // Хмелеводство. Киев:Урожай , 1980.- Вып.2.-С.57-66.

64. Ляшенко Н.И., Солодюк Г.Д., Романенко Л.В. Определение отдельных групп фенольных соединений в хмеле // Хмелеводство.- Киев:Урожай, 1982.- Вып.4.-С.44-49.

65. ЛяшенкоН.И. Изучение содержания горьких веществ в лупулине хмеля и эффективности их использования // Прикладная биохимия и микробиология.- М.: Наука, 1978.-T.XIV.- Вып.1.-С.144-149.

66. Мальцев П.Н. Технология солода и пива.- М.:Пищ.-промД964.-858 с.

67. Маннфрид Палов Энциклопедия лекарственных растений / Под ред. И.Н Губанова (пер. с нем.). -М., 1998. 467 с.

68. Минина С.А. Общая характеристика гликозидов, химическая структура, свойства и технология флавоновых гликозидов и сапонинов.-СПб, 1992.49 с.

69. Мирзосян С.А., Акопян В.П. Влияние ГАМК на мозговое кровообращение и кислородное напряжение в мозге // Фармакология и токсикология.-1967.-№ 5.- С.572-574.

70. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / Под ред. проф. В.Л.Багировой, проф. В.А.Северцева.- СПб.: СпецЛит, 2001.-223с.

71. Никитин A.A., Панкова И.А. Анатомический атлас.полезных и.некоторых ядовитых растений. -Ленинград:Наука, 1982.- 768 с.

72. Никитина Т.И. Фармакогностическое исследование по разработке лекарственных растительных средств противовоспалительного, ранозаживляющего и антиаллергического действия: Дисс. . д-ра фарм. наук.- Уфа, 1996.-335 с.

73. Никитина Т.И., Пупыкина К.А., Ардамова С.Н. Стандартизация соплодий хмеля обыкновенного. // Современные аспекты изучения лекарственных растений: Сб. статей.-М., 1995.-С.74-77.

74. Николаев С.М. Сухие экстракты из растений основа создания современных лекарственных форм // Физико-биохимические аспекты изучения лекарственных растений: Мат. межд. совещ.- Новосибирск, 1998.-С.142-143.

75. Николаева С.М., Даргаева Т.Д., Российская Г.И. О рациональном подходе и разработке многокомпонентных сборов.- Улан-удэ, 1986,- 47 с

76. Николаевский В.В.,Еременко А.Е. Биологическая активность эфирных масел. -М.:Медицина, 1987.-144 с.

77. Новрузов Э.Н. Антоцианы некоторых видов рода Berberís L., произрастающих в Азербайджане // Растительные ресурсы.- СПб.,1994.-Т.30.-Вып.1-2.-С.73-77.

78. Пастушенков Л.В., Пастушенков А.Л., Пастушенков В.Л. Лекарственные растения: Использование в народной медицине и быту. -Л.Лениздат, 1990.- 384 с.

79. Пат. № 14808, кл. 3072. Антисептическое средство для предотвращения порчи плодов. Кавамури Киёси, Окомото Иосюки (Япония), опубл. 18.08.67.

80. Пат. № 2238554 "Способ определения суммарной антиоксидантной активности биологически активных веществ" Пахомов В.П., Яшин Я.И. и др., опубл. 20.10.2004.

81. Пат.№ 5286506 США кл. А23 L3/3508/ Inhibition of food pathogens by hop acids (Millis James R.,Shendel Mark J), опубл. 15.02.94.

82. Пахомов В.П., Максимова T.B., Никулина И.Н., Цыганков В.В., Хромова

83. Л.В. Стандартизация рогов и пантов северного оленя. 1 .Количественное определение нингидринактивных веществ в порошке рогов северного оленя // Хим.-фармац. журн,- 1997.- №4. -С.53-54.

84. Плескачева Л.В. Использование местных нетрадиционных видов сырья при производстве пищевых изделий. Киев: Пшц. пром., 1966.-№4.-58с.

85. Производство и потребление хмелевого сырья в Российской Федерации (под ред. Рупошева А.Р., Титовой E.H. и др.). М., 1999.-56с.

86. Прокопенко О.П. Фармацевтическое и химическое изучение хмеля обыкновенного // Фармацевтический журнал.-1986.- №1.- С.28-30.

87. Пронченко Г.Е. Лекарственные растительные средства / Под ред. А.П.Арзамасцева, И.А.Самылиной.-М.:ГЭОТАР-МЕД, 2002.-288 с.

88. Рабинович A.M. Лекарственные травы и рецепты древних времен. -М., 1991.- 175 с.

89. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; семейство Rutaceae-Eleagnaceae.- Л., 1988,- 357с.

90. Рахимханов З.Б. Антоцианы некоторых растений семейства Мальвовых.: Автореф. дисс. . канд. хим. наук.-Таппсент, 1973.-36 с.

91. Рацек Я., Голечек В., Пруха П. Влияние пива на здоровье человека с точки зрения свободных радикалов и антиоксидантов // Пиво и жизнь.-2002,- №5.- С.9-11.

92. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств.- М.: ООО «РЛС-2004», 2004. -11 изд.- 1504 с.

93. Рейтман И.Г. Роль эфирных масел и дубильных веществ в пивоварении //Хмелеводство.-Киев:Урожай.- 1975.- С.69-73.

94. Рейтман Н.Г. Особенности качества нового препарата несушеного хмеля // Хмелеводство. -Киев:Урожай,1990.- Вып.12.-С.12-18.

95. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободно-радикальному окислению: Аналит. обзор. Сорокина И. В., Крысин А.П., Хлебникова Т.Б и др. / Сер. «Экология». Новосибирск, 1997.- Вып. 46.- 68 с.

96. Рыжикова М.А., Фархутдинов P.P., Загидуллин Ш.З. и др. Сравнительная оценка антиокислительной активности некоторых лекарственных растений in vitro и in vivo. // Тез. междунар. симп. «Биоантиоксидант». Тюмень,1997. - С. 47-49.

97. Рудольф В.В., Грум-Гржимайло М.А. Основы и безалкогольные напитки с их использованием / Пищ. пром-тъ: реф. сб. сер.10.-М.: ЦНИИТЭ Пищепром, 1983.-Вып.9.-21с.

98. Скорикова Ю.Г., Шафтан Э.А. О флавоноидах северо-кавказских вишен и черешен // Труды Ш Всесоюзного семинара по БАВ плодов и ягод.- Свердловск, 1996,- С.113-118.

99. Смирнова Л.П., Первых Л.Н. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного // Хим.-фармац. журн,-1998.-№6.-С.35-36.

100. Сортовой контроль в хмелеводстве. Практическое руководство (под. ред. Рупошева А.Р., Рупошевой Г.В.).- М.,2000,- 50 с.

101. Стренковская А.Г. Общее действие и токсичность экстракта хмеля Humulus lupulus и его фракций // Труды Моск. НИИ косметологии.-М.Д968.-С. 108-112.

102. Стренковская А.Г. Описание изобретения к авторскому свидет. № 1152128/31-16, Моск.НИИ косметологии, заяв. 28.04.67.

103. Сур C.B. Методы выделения, идентификации и определения терпеновых соединений // Хим.-фармац. журн.-1990.-Т.24.-№5.-С.42-45.

104. Талашова C.B. Фармакогностическое изучение, стандартизация и комплексная переработка валерианы лекарственной: Дисс. канд.фармац.наук.-М., 1996.-204с.

105. Танчев С.С. Антоцианы в плодах и овощах,- М.:Пищ.-пром, 1980.-302с.

106. Торосян A.A. Хмель обыкновенный и его применение при хронических гипосекреторных гастритах // Биологический журнал Армении.-1974.- Т.27.-ЖЗ.-С.87-92.

107. Трускавецкий Е.С., Вержбицкий В.И. Глутаминовая, аспарагиновая и у-масляная кислоты шишек хмеля // Хмелеводство. -Киев:Урожай,1980.-Вып.2.-С.65-66.

108. Ульянова C.B., Щавлинский А.И., Морев С.Н. и др Использование физико-химических методов в анализе поливитаминных препаратов, содержащих водорастворимые витамины Bi В2 Вб С и никотинамид // Фармация.- 1983.-№3.-С.60-62.

109. Фотохимический анализ лекарственного растительного сырья / Под общ. ред. К.Ф.Блиновой. -СПб,2000.-58 с.

110. Хайн Ю.М. Применение тонкослойной хроматографии для анализа горьких веществ хмеля // Культура хмеля. Труды.-Чебоксары,1976.-Вып.б.-С. 100-103.

111. Химико-технологический контроль производства солода и пива / Под ред. П.М.Мальцев.- М.: Пищепром, 1976.-158 с.

112. Химический анализ лекарственных растений. Гринкевич Н.И., Сафронович Л.Н. и др. М.,1983. - С.133.

113. Хоед И. Культура хмеля в Бельгии // Новое в возделывании за рубежом / Сб. переводов,- М.-1970.- С. 16-22.

114. Хроматография. Основные понятия. Терминология / Сб. научно-нормативной терминологии.- М.,1997.-Вып 114.- 48 с.

115. Цепалов В.Ф. Метод количественного анализа антиоксидаятов с помощью модельной реакции инициированного окисления // В сб.: Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo. M.: Наука,1992. - С. 16-26.

116. Шалашвили А.Г. Катехины, лейкоантоцианидины и флавонолы рододендронов Кавказского и Понтийского и их изменения при вегетации: Автореф. дисс. . канд. биол. наук.-Тбилиси, 1970.- 22 с.

117. Шарфунова И.Б., Кичаева Т.Г., Сафонова Н.В. Исследования возможности использования хмеля при производстве ржано-пшеничного хлеба // Переработка с/х сырья,- Кемерово, 1999.-С.З-4.

118. Шаршунова А., Шварц 3., Михалец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии.- М.: Мир, 1980,- Т.1,2.-291,619с.

119. Шкарина Е.И. Изучение антиоксидантных свойств препаратов на основе лекарственного растительного сырья: Дисс. .канд. фарм. наук.-М., 2001.- 160с.

120. Шмидт Л.Г. Горькие вещества хмеля и методы их анализа. -М., 1964.-64с.

121. Шмидт Л.Г. Спектрофотометрические и кондуктометрические методы определения альфа-кислот в хмеле // Труды ВНИИПБП,- 1963.- Вып. 11.-С.96.

122. Шредер Р.И. Хмель и его разведение в России и за границей.- СПб, 1888,- 148 с.

123. Biende Martin. Determination of hop oil content by steam distillation according to JOB method 6.3. // Monatsschr. Brauwiss.-2002.-Vol.55.-№11-12.-S.234.

124. Biende Martin. Gruñes gold anticancerogene activitat-ein neuer aspekt bei hopfeninhaltsstoffen // Brauindustie.-1999.-Vol. 84.- №9.-P.502-507.

125. British Pharmacopoeia. London: The Stationery Office, 2001,- Vol.1.- 855p.

126. Burgess A.N. Hops. -London, 1964. 300 p.

127. Callebaut A., G. Hendrickx. Antocyanins in cell cultures of Ajuga reptans // Phytochemistry.-1990.- Vol.29.-№2.- P.2153-2158.

128. Celestino Santos-Buelga, Augustin Sealbert. Proanthocyanidins and tanninlike compounds-nature, occurece, dietary intake and effects on nutrition and health // J. Scientific Food Agricultural.-2000.- Vol.80.-1.7.- P. 1094-1117.

129. Cos P., De Bruyne Т., Apers S., Berghe D.V. Phytoestrogens: recent developments // Planta Med. 2003. - Vol.69.- P.589-599.

130. Deutsches Arzneibuch. 10 Ausgabe. Amtliche Ausgabe.- Stuttgart: Deutsher Apotheker verlag, 1991.-850 p.

131. Dilckmann R., Palamand S. Antioxidation of some constituens of hops // J.Agr. and Food Chem.-1974.-Vol.22.-№3.-P.58-60.

132. E.Merck. Dyeing Reagents for Thin Layer and Paper Chromatography.-Darmstadt, 1980.-114 p.

133. Economic Botany.- New York, 1962.- Vol. 16.-P. 221

134. Eri S., Kroob K., Lech J. Direct thermal desorption-gas chromatography-mass spectrometry profiling of hop (Humulus lupulus L.) essential oils in support of varietal characterization // J. agr. Food Chem. -2000.-Vol.48.- №4.-P.1140-1149.

135. European Pharmacopoeia, 3rd edition.- Paris: Maisonneuve S.A., 2001.-948p.

136. Glasby J.S. Encyclopedia of the alkaloids. London, 1975. - Vol.3 - 519p.

137. Gunter H.O. Determination and differentation of the essential ingredients in hops with TLC, HPTLC and IK // MERCK Spectrum 1.-1988.- P.54-56. (168)

138. Gunter H.O. HPTLC of hop constituens // MERCK Spectrum.-1989.- P. 2022.

139. Halliwell B.A., Gutteridge M.C. Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease // Biochem. J. -1984. Vol. 219. - P. 1-14.

140. Hann J.T. Fast LC analyses of the a-acid content of "fresh" and "aged" hops // Lab. Pract.-1989.-Vol.38.-№10.-P.59-61.

141. Haraguchi H., Saito T., Ishikawa H. et al. Antiperoxidative components in Thymus vulgaris // Planta Med. 1996. - Vol. 62. - P. 217-221.

142. Hisayuki Tanizanva, Yasuyuki Sazuka, Akiko Komatsu. A new efficacy test of antioxidants based on air-oxidation on linoleic acid // Chem. Pharm. Bull.-1983.-Vol.31. -№ 11.-P.4139-4143.

143. J. F. Stevens, Monica Ivancic, V.L.Hsu. Prenilflavonoids from Humulus lupulus //Phytochemistry.- 1997,- Vol.44.- №8.-P.1575-1585.

144. J. Ganzand H. Jork, University of Saarlandes, FRG Communication. Courtesy Hinditron Services (PVt) Ltd.- India.

145. J.M.Ricardo-da-Silva, A.P.Belchior, V.Bourzeix. Oligomeric procyanidins of three grapevine varieties and wines from Portugal // Scences des Aliments.-1992.-Vol.l2.-№2.-P.223-237.

146. Jorge M. Ricardo da Silva, Jacques Rigaud, Veronique Cheynier. Procyanidin dimers and trimers from grape seeds // Phytochemistry.-1991.-Vol.30.-№4.-P.1259-1264.

147. Josel Tekel, Denis de Keukeleire, Haojibg Rong. Determination of the hop-derived phytoestrogen, 8-prenylnaringenin, in beer by gas chromatography/mass spektrometry // J.Agric. Food Chemistry.- 1999.-Vol.47.-№2.-P.5059-5063.

148. Kac M, Kovacevic M. Presentation and determination of hop (Humulus lupulus L.) cultivars by a min-max model on composition of hop essential oil // Mschr. Brauwiss.- 2000.-Jg.53.- № 9/10.- S.180-184.

149. Karel Krofta. Chmelove a-horke kyseliny a problematika jejich analytickehj stanoveni // Chmelarstvi.-1997.- №1.- C.5-8.

150. Koloman Farkas Veber die phisiologiische Wirkuns liniger Bestandarteile des Hopfens // Archiv fur die gesamte Phisiologie. Bonn,1902. - P.66. (24)

151. Larson R.A. The antioxidants of higher plants // Phytochemistry. 1988. -Vol. 27.-N.4.-P. 969-978.

152. Lermusieau G., Liegeois C., Colli S. Reducing power of various hop varieties // Cerevisia.-2001.-Vol.26.- №1,- P. 33-41.

153. M.El.Sadek, A.E1. Shanawany and A. Abdul Khier // Analyst.- 1990.-Vol.115.-P. 1181-1184.

154. Mabry TJ.,Thomas M.B., Markham K.R. Systematic identification of flavonoids.- Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg-New York, 1970.- 123 p.

155. Marcuse R. Antioxidative effect of amino-acids // Nature. 1960. - Vol. 186. -P. 886-887.

156. Marczal G., Verzar-Petri G. Essential oil and composition during the ontogeny in Matricaria chamomilla L. // Herba Hungarica.-1979.-T.18.-№3.-P.325-329.

157. Marica Medic-Saric, Zeljan Males. Application of numerical methods to the TLC analysis of flavonoids and Phenolic acids of Rosmarini folium // J. of Planar Chromatogr.- 1997.-Vol.10,- P. 182-186.

158. Marinov B.S., Evtodienko Ju.V. Estimation of redox properties of chemical compounds by their reactions with free radicals// Anal. Biochem.-1994-Vol.220.-P. 154-159.

159. Mersedes M. Pedrosa, M. Murquis, C. Cuardo. Determination of caffeic and chlorogenic acids and their derivatives in different sunflower seeds // J.Science of Food and Agricultural.-2000.- Vol.80.-P.459-464.

160. Milligan S R., Kalita J.C., Heyeric K.A., Rong H. Identification of a potent phytoestrogen in hops (Humulus lupulus L.) and beer II J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999.- Vol.84. -P.2249-2259.

161. Milligan S.R., Kalita J.C., Pocock K.V., Van De Kauter V. The endocrine activities of 8-prenilnaringenin and related hop (Humulus lupulus L.) flavonoids // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2000,- Vol.85. - P.4912-4915.

162. Pharmacopée Française, X édition.- Paris: Maisonneuve S.A.,1990.

163. Rezac J., Cepicka J., Viden I. The influence of the main terpen components of hop oil on the beer aroma // Czech J. Food Sc. -1998.-Vol.16,- №l.-P.19-24

164. Roberts J.B. Composition and Biogenesis of essential oils of hop // J.Inst.Brew.-l 962.-№5.-P.420-427.

165. Rong H., Boterberg T., Maubach J., Stove C., Depyper H. 8-prenylnaringenin, the phytoestrogen in hops and beer, upregulates the function of the E-cadherin/catenin complex in human mammary carcinoma cells // Eur. Cell Biol. 2001. - Vol.80. - P.580-585.

166. Stevens J.F., Taylor A.W. Quantitative analysis of xantogumol and related prenylflavonoids in hops and beer liquid chromatography-tandem mass spectrometry//J. Chromatogr.-1999.- Feb. 5.-T.832.-№-l-2.-P.97-107.

167. Umegaki K. Inouek, Takeuchi N., Higuchi M. Improved method for analysis of ascorbic acid implasma by hiqh perforamance chromatography with electrochemical detection // J.Nutz .Sei.- 1994,- Vol. 40.- P. 73-10.

168. Vent L. Scupiny odrud chmel a jejich vyuziti v pivovarskem pumyslu // Chmelarstvi.-1999.-№11/12.-S. 173-175.

169. Verma Krishna K., Palok Sandnya. Determination of ascorbic acid in fruits and pharmaceuticals by titration with thallium (HI) // Mikrochim. Fcta.-1983.-Vol.2.-№5,6-P.361-367.

170. Zbigniew T. Nowak. Chmiel roslina o wszechstroknum zastosowaniw // Wiadomosci zielarskie.-1988.-№ 2.-S.11-12.