Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Физико-химическое исследование и стандартизация нового отечественного фармакологического средства-метилового эфира N-(2-амино-5-бромбензгидрил) глицина и его лекарственной формы

Министерство здравоохранения Российской Федерации НАГЧГО-ШСЛШВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАЦИИ

На правах рукописи

АНДРШКОВА Юлия Александровна

ФИЗИЮ-ХИШЕСЮЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО ОТЕЧЕСТВЕННОГО ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО СРЕДСТВА - МЕТИЛОВОГО ЭФИРА N -(2-амино-5-бромбэнзгидрил) глицина и его лекарственной формы

Специальность

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1992

I

О

Работа выполнена в Государственном научно-исследовательском институте ш стандартизации и контроле лекарственных средств Минздрава Российской Федерации.

Научный руководитель - доктор фармацевтических наук,

профессор Н.С.Евтушенко

Официальные ошоненты - доктор фармацевтических наук,

профессор А.3.Книжник

доктор фармацевтических наук, профессор В.А.Прокофьева

Ведущая организация - Центу по химшI лекарственных

средств - БНИХФИ им.С.Орджоникидзе (Москва)

Зашта состоится « / " 1992 г."

в О часов на заседания Специализированного совета Д 074.28.01 при Научно-исследовательском институте фармации (до адресу; П?41В, Москва, ул.Красикова, 34).

С диссертацией иожто ознакомиться в библиотеке Неучно-исследовательскогэ института фармации.

Автореферат разослан У 5~" г.

Ученый секретарь Специализированного совета Д 074.23.01

кандидат фармацевтических наук,

старший научна и сотрудник Д.М.Боброва

.. г ... .V ! ОНЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ

Актуальность темы. Одним из валшейпла направлений сов-яенной фармацевтической науки является изучение сравни-льно новой гругаш лекарственных препаратов и фармакологи-ских средств - ноотропов.

В настоящее время иоследования в области ноотропных эпаратов развиваются очень активно, и эта новая группа пяла прочное место среди других лекарственных веществ, вменяемых в неврологической и психиатрической практике.

Первый препарат из группы ноотропов - пирацетам -л внедрен в медицинскую практику в начале 80-х годов, а последнее время появилось целое семейство препаратов ¡»тройного типа действия. Однако, в нашей стране успех в здании ноотрогшых препаратов пока не достигнут. Для провеса в этой области необходимо расширение исследований в ласти химии и фармакологии ноотропов.

В 1976 году в Одесском государственном университете вместно с Физико-химическим институтом иы. А.В.Богатско-АН Украины бил синтезирован метиловый эфир N -(2-амино-бромбензгидрил) глицина, получивший название беглимин. ленаправленные фармакологические исследования этого сое-нешш, проведекнне в Института фармакологии АМН Российс-Ъ. Федерации, показали его внсокую ноотропную активность, уступающую зарубежным аналогам;

Для внедрения фармакологического средства в медицине-с практику помимо фармакологических иопнтаний необходимо учить физико-химические свойства нового соединения, размотать методики его контроля и стандартизации и на осно-полученннх результатов составить нормативно-техническую кумвнтацяю на фармакологическое федство и предполагаемую карственную форму, исследовать фармакокинетику этого сознания. .

Таким образом, комплексное физико-химическое исследо-яие и стандартизация нового отечественного фармакологи-вкого средства - беглимина, изучение его фармакокинети-является актуальной проблемой.

Цель п. задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение физико-химических свойств оригинального отечественного фармакологического средства вдотропного ти па действия - беглшина, разработка методик контроля его качества, создание твердой дозированной лекарственной фор мы на основе физико-химического и биофармацевтячесного ио следования, разработка методик анализа лекарственной форм исследование стабильности беглимина и лекарственной формь стандартизации показателей качества беглшина и таблеток беглшина по 0,025 г и 0,05 г, изучение экспершэнтальког фармакокинатики таблеток беглимина, разработка проектов Временных фармакопейных статей (В®С) на фармакологическое средство и его лекарственную форм/. -

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие основное задачи:

1. Исследовать физико-химические свойства беглимина на основа полученных результатов разработать методики фа.1 иацевтического анализа беглимина:

- изучить спектральные характеристики беглшина (УФ Ж-, ЯМР-, отражательная спектрофотометрия, масс-спектро метрия); .

- изучить хроматографическое поведение беглимина и его возможннх примесных соединений с помощью ТСХ и ВЭХХ, разработать методики хроматоденситометрического и В32£Х-олределания чистоты беглимина;

- идентифицировать "посторонние примеси" в беглшиш методами ТСХ, В32Х и установить их структуру методами т и хроматочлаос-спектрометрии;

- разработать методики количественного определения беглимина (тигрдаетрические, ВЖХ);

- изучить стабильность фармакологического средства уотановить срок годности;

- составить проект ШС на беглшин.

2. Разработать оптимальный состав и рациональную г нологию таблеток беглимина до 0,025 г в 0,05 г;

- провеста сравнительное исследование фармацевтиче кой доступности и степени чистоты таблеток беглшина с

зннм составом вспомогательных веществ для выбора опти-иьного состава таблеток;

- рекомендовать технологию изготовления таблеток отамина и рациональный вид упаковки на основании резуль-гов изучения физико-химических свойств лекарственной рмы в процессе хранения.

3. Разработать методики контроля и стандартизации дарственной формы беглимина:

- разработать ТСХ- и ВЗЗЕХ- методики определения стеки чистоты лекарственной формы;

- разработать методики количественного определения глимина в лекарственной форме (спектрофотометрическую и И);

- составить проект ВФС на таблетки беглимина по 025 г и 0,05 г.

4. Изучить фармакокинетику лекарственной формы бегли-яа в экспериментах на животных:

- подобрать оптимальные условия выделения беглимина и 'о возможных метаболитов из плазмы крова, идентифициро-яь метаболиты, разработать методику количественного оп-щеления беглимина и продуктов его метаболизма в плазме юви;

- провести изучение экспериментальной фармакокинети-! беглимина. . .

Научная новизна. В результате изучения хроматографа-зских свойств беглимина и трех его возможных примесных >единаний по отношению к различным сорбентам, системам ютворителей, способам детектщ)ованил выбраны оптимально условия анализа беглимина методом ТСХ (сорбент "Ки-зльгаль 60 Р254я юга "Силуфол УФ-254", система раствори-злей ацетон \ - гексан (2:3), детектирующий агент УФ^р.

На основе сопоставления результатов ТС.Х и В32Х-анали-а, а также масс- и. хромато-масс-сяектрометрических иссло-педований с использованием стандартных образцов вещаств-видэталей проведена идентификация и установлена структура римесей беглимина. Показано, что основными примеснши оединениями в бегдимине являются промежуточные и побочные

продукты синтеза или продукты разложения: N -(2-амино-5-бром-бензгвдрил) глицин; 5-фенил-?-броы-1,3,4,5-тетрагидро-1,4 -бензодиазепинон-2; 5-фенил-7-бром-1,3-дигидро-(2Н)-I,4-бензо-диазелинон - 2.

С использованием метода дериватографии проведен анализ г, мической устойчивости беглимина, в результате установлен инт< вал температуры плавления и определен его характер, показано, увеличение суммарного содержания примесей вызывает снижение I терзала температуры плавления беглимина.

Комплексное использование термических методов (деривато-графил, высушивание в изотермическом режиме при Ю5°С, высуш: вание в условиях вакуума при 70°С и остаточном давлении I ш рт.ст.), титрования реактивом К.Фишера, газовой хроматографи позволило четко и объективно установить величину показателя "потеря в массе" и доказать наличие в субстанции воды, а не остаточных количеств органических растворителей.

Разработана ВЗЖХ-ыетодика количественного определения беглимина и примесей. Условия хроматографичёского разделения исследуемых веществ были подобраны на основании сравнительно оценки значений коэффициентов емкости и селективности (колон " |_1сЬто»ог6 С^з", 5 ыкм; эшоедт - ацетонитрил-вода-диэтилаы (40:60:1).

Разработаны принципы методологического подхода к акали: беглимина в плазме крови, заключающиеся в комплексной оценке значений коэффициентов распределения исследуемых веществ ыея органической и водной фазами, изучения влияния рН среды, об! ма экстрагента, кратности и времени экстракции. На основ! нии полученных результатов выбраны оптимальные условия извлечения беглимина и его возможных метаболитов из плазм] крови (двукратная экстракция в течение 15' мин. 10 - крат ным объемом дюймового эфира с добавлением к плазме гл; цинового буфера рй=2,2 при повторной экстракции).

В процессе изучения фардакокинетики таблеток беглимина в эксперименте на кроликах установлен факт быстрого метаболизма беглимина., С использованием комплекса методов ТСК, ВЭЖХ, масс-спектрометрии определено, что основным ме

болотом является N -(2-ашш6~5-бромбензгадрил) глицин, в значительных количествах обнаруживается 5-фенил-7-бром-1,3-гидро-(2Ю-1,4-бензодйазепшон-2.

Практическая значимость работы. На основании результатов юведенных исследований разработаны и внедрены:

- методики контроля качества и стандартизации беглимина включены в проект ВФС на "Беглимин", направленный в Фармако-»гический комитет Минздрава Российской Федерации; письмо 3025а от II ноября 1991 г.);

. - оптимальный состав и рациональная технология получения клеток беглимина по 0,025 г и 0,05 г, методики контроля ка-¡ства и стандартизации таблеток (включены в проект В$С на Таблетки беглимина 0,025 г и 0,05 г", направленный в Фармаколо-гаеский комитет Минздрава Российской Федерации для получения »зрешения на клинические испытания; письмо № 3025а от II нояб-I 1991 г.).

На защиту выносятся следующие положения:

- результаты комплексного изучения физико-химических зойств фармакологического средства "беглимин", полученные использованием термических, спектральных, хроматографичес-их методов анализа;

- методики контроля качества и стандартизации бегли -

ина;

- данные комплексных исследований по созданию табле-ированной лекарственной формы беглимина;

- методики контроля качества и стандартизации лекарст-енной формы беглимина;

- результаты фармакокинетических исследований таблеток еглимина.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены а конференции молодых ученых Гос.НШСКЛС МЗ Российской 5е-ерации (Москва - 1989, 1990 гг.), на итоговой научной онференции НИИ фармакологии АМН Российской Федерации.

Связь задач исследования с проблемным планом фарма-евтической науки. Диссертационная работа выполнена в оответствии с планом научно-исследовательских работ Гос.

НИИ по стандартизации а контролю лекарственных средств Ми здрава Российской Федерации и соответствует тематике науч ного направления "Фармацевтическая химия" союзной проблем "Фармация" Научного совете К 48 АМН Российской Федерации тематика научных исследований сошной проблемы "Раэработк ■ средств регуляции психических процессов на основе структурно--функциональных модуляторов биоыембран" (номер государственной регистрации 01.86.000.4510).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная рабе та изложена на 227 страницах машинописного текста, содер лит 33 таблицы и ЭО рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы (I глава), 4 глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы, приложения. Списо литературы включает 112 источников отечественной и 139 за рубежной литературы..

Во введении раскрыта актуальность теш, определены цели и задачи исследования, сформулированы научная новиз! и практическая значимость работы.

В первой главе на основании анализа литературных да* ных рассмотрены особенности фармакологического действия лекарственных средств, относящихся к группе ноотропов; критически оценены физико-химичеокиэ методы исследования препаратов, производных бензодиазепина.

Вторая глава посвящена изучению физико-химических свойств фармакологического средства "беглимин".

В третьей главе приводятся разработанные ВЗ&Х-метод! ки для анализа беглимина.

В четвертой главе представлены результаты комплекснс го исследования по созданию таблетированной лекарственно! формы беглшина.

В пятой главе изложены материалы по изучению фармакс кинетики беглимина.

в

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ I. Изучешэ физико-химических свойств баглимнна. Разработка методик анализа

БеГлимин .

Беглимин - метиловый эфир Ц-(2-амино-5-бромбензгид-ш) глицина представляет собой достаточно сложный анали-гческий объект вследствие оригинальности химической струк-грн, а также возможности присутствия в нем примесных сое-шений. .

Исходя из условий синтеза беглшина и его химических юйств, основании примесями в фармакологическом средстве )гут бнть ' М -(2-апшо-5-бромб9нзгидрил) Глицин (примесь I), -фенпл-7-бром- 1,3,4,5- тетрагщро- 1,4- бекзодиазепинон-2 1римесь П) и 5-фвнкл-?-бром- 1,3- дигидро-(2Н)- 1,4- бензо-шзепинон-2 (пршесь И).

На основании изложенного все исследования беглшина • доводили о учетом теоретической возможности присутствия в зм примесных соединений."

Одной из основных физико-химических характеристик'ле-арствэнного средства является "цветность", так как даже эзначитальнне изменения в структура молекулы, а таютэ нате примесных соединений, может быть причиной изменения того показателя.

Оценку степени белизны беглимина проводили методом гражательной спектрофотометрии. 'Спектра отражения иссле-¡гемых образцов 6 серий беглимина, полученные на спектро-алориметре "Спекгротоя* цри длинах волн от 380 до 720 мм врез 10 нм, позволили охарактеризовать субстанцию бэгля-ина как белый или белый о крвмоватым оттенком крйсталли-

ческий порошок.

Для выбора оптимального способа и режима сушки бегли-мина, а также стандартизации таких показателей качества фармакологического средства, как "потеря в массе щ>и высушивании" и "температура плавления", были определены термические характеристики беглимина с использованием метода дернватографии. Исследования проводили на приборе "Дерива-тограф-1050" фирмы "МОМ"(Венгрия).

Анализ образцов 6 серий беглимина показал, что при нагревании до 250°С наблюдаетйя эндотермический эффект в интервала температур 124-128°С. Термический эффект соотнесен нами с плавлением образцов, что подтверждается изменением агрегатного состояния вещества. Термической деструкции образцов на происходит, что доказано методом инфракрасной спектроскопии (ИК-спектры исходных и расплавленных образцов идентичны), данными ТСХ, неизменностью массы и отсутствием внешних изменений анализируемых проб.

Для определения возможности использования показателя "температура плавления" не только для подтверждения подлик ности беглимина, но и дая определения степени его чистоты, были исследованы модельные смеси изучаемого вещества о известными количествами смеси возможных примесей: 1%, 2$, 3% Полученные результаты показали, что увеличение количественного содержания сумма примесей в образцах приводит к заметному снижению границ интервала температуры плавлвни Определение показателей: "растворимость", "црозрач- • ность", "цветность", "хлорида", "сульфаты", "железо", "сул фагная зола и тяжелые металлы", проводили в соответствии с требованиями ГФ XI. На основании экспериментальных данных, полученных при анализе образцов 6 серий беглимина, установлены норда для этих показателей, которые включены в проект НЕС на фармакологической средство.

В качестве химических реакций подлинности на беглимю предложена реакция на первичную ароматическую аминогруппу (образование окрашенного азоооединения) и реакция на ион брома (после переведения брома в ароматическом кольце в данное состояние).

Количественное определение новых лекарственных препаратов рекомендуется проводить не менее, чем двумя методами.

Исходя из химической структуры беглимина, нами подобраны,; Условия для его количественного определения методом ^вводного титрования и методом нитритометрии. Относитель-щгк ошибки определения дня указанных методов составляют ф,5% и ±1,3?! соответственно.

На основании фактических данных, полученных при коли-чАзтвенном определении 6 серий баглшина этими методами, установлено, что содержание действующего вещества в бегли-иине колеблется от 98,5? до 99,В проект ВФО рекомендовано введение метода неводного титрования, как более точного и экспрессного.

Дня разработки методик контроля качества и стандартизации беглимина нами исследованы спектральные характеристики препарата с использованием УФ-, Ж- спектрофотометр®!, ШР*Н- спектроскопии.

УФ-спектр 0,001$ раствора изучаемой субстанции в'спирте этиловом 9535 регистрировали в области длин волн от 200 до 400 нм в юовете о толщиной слоя 10 мм на спектрофотометре. "С ее г б "(Великобритания). УФ-спектр беглимина характеризуется четко выраженными максимумами поглощения при длинах волн (248±2) нм и (Э02±2) нм.

Для определения возможности использования УФ-спектро-фотометрии при идентификации беглимина были исследованы УФ-спектры возможных примесей беглимина (рис. I).

Некоторое сходство УФ-спектров беглимина и примеси 'I дает основание считать, что спектрофотометряя в УФ-области может быть использована дм подтверядэния подлинности беглимина в сочетании с друг или физико-химическими методами.

Поскольку Ж-спектр специфичен даш каждого соединения и даже близкие структурные аналога могут иметь некоторые отличия в ИК-спектрах, были изучены ИК-спектрн беглимина и примесных соединений. Запись спектров проводили на ИК-спектрофотомвтре ЗРЗ-ЭОО двухпучевом фирмы *Ру£ ишеат » (Великобритания) в дисках о бромидом калия в диапазоне частот 200 - 4000 см"1.

УФ-слектры поглощения беглимина и его возможных примесей

А

I - бэглимин; 2 - примесь I;

3 - примесь П; 4 - примесь Ш.

. Рио. I

При сравнительной оценка Щ-спектров беглимина п примесей 1,П,Ш выявлены существенные отличия, обусловленные структурой каждого из.этих соединений. Таким образом, показано, что характеристика ИК-спектра может служить надеж-нкм методом идентификации беглимина.

Для подтверждения структурных особенностей молекулы беглимина проведено исследование образцов беглимина методом ЯМР-спвктросхопаи. Спектр ЯГЛР^Н 0 раствора беглимина в дейтерохлороформе был записан на спектрометре И/Н-90 (вгике% ,фрт) 0 рабочей частотой 90 при 30°0. Химические сдвиги измерены относительно внутреннего эталона тетраметилсилана. Установлены характерные для беглимина сигналы в млн. долях протона при <Г 3,41-3,72; 4,90; 6,505 7,05; 7,14; 7,20-7,50.

По характеру цепления и положению сигналов спектр полностью соответствует структуре молекула беглимина. Таким • 10

>аэом, спектроскопия ядерного магнитного резонанса явля-¡я существенным аналитическим методом для идентификации 'лшиа.

Для разделения и идентификации беглимина и его возмож-с примесных соединений были изучены хроматографическиа >йства этих соединений в тонких слоях сорбента на плао-шах "Сияуфсш УФ-254" и "Кизельгель 60 Р^" в Различных зтемах растворителей, а также способы их детектирования. I этом показано, что самая высокая чувствительность достается при проявления хроматограмм УФ-светом (при длине шы 254 нм). В качестве наиболее селективной системы рас-эрителей (по величине дискриминирующей способности) нами Зрана система состава: ацетон - гексан (2:3).

В выбранных условиях происходит четкое разделение бег-, дина и возможных яршеоей (Г,П,Ш) (рис. 2).

Хроматограмма беглимина и его возможных примесей;

I - беглимин (100 мкг); 2 - модельная смесь беглимина и соединений 1,П,Ш (по 10 мкг); 3 - соединение I (10 мкг); . 4 - соединение Л (10 мкг); .5 - соединение Ш (Ю мкг).

Рио. 2

Идентификацию содержащихся в образцах беглимина примесей проводили с использованием синтезированных стандартных образцов веществ - свидетелей возможных примесных соединений.

Для количественного определения примесей в беглимине ваш использован метод хроматоденсптометрии с применением абсолютной калибровки. Сканирование пятен проводили на денситометре "Сатад,ТьС ЗсаплехП" фирмы "Сатау. "(Швейцария). При расчете площадей пиков и времен удерживания использовали интегратор. Денситограмма модельной смеси беглимина и трех его возможных примесей приведена на рис. 3.

Денситограмма модельной смеси беглимина и примесей

е

(км)

ш <

I - примесь 1{ 2 - примесь П;

3 - примесь Ш; 4 - беглимин

Рис. 3

Установлено, что суммарное содержание примесей в субстанции беглимина не превышает 1$.

Для получения детальной характеристики структуры беглимина и его возможных примесей, а также изучения возможны: направлений ^агментации в наших .исследованиях применялась масс-спектрометрия.

Зона сорбента, соответствующие по положению на хрома-то грамме веществам-свидетелям двух примесей (I и П), обнаруженных в баглимине, элюировали с хроматографетеских ibtöCTHHOK и подвергали масс-спектрометрическому анализу. Я^раллельно снимали масс-спектры стандартных образцов веществ-свидетелей примесей I и П. Исследование проводили на £ромато-масс-спектрометре HP 5988 А квадруполыюм фирмы *Hew£M PjckaicL "(США). При сравнении масс-спектров исследуемых веществ с масс-спектрами стандартных образцов веществ-свидетелей примесей I и П, установлена их полная идентичность.

Применение метода хромато-масс-спектроматрии позволило получить масс-спектры разделенных хронатографических пиков, соответствующих беглимину, примесям I и П.

2. Разработка методик высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа беглимина

Исследования беглимина и примесных соединений 1,11,111 проводили ъ обращагаю-фазрвом режиме на жидкостном хроматографе "Pye Umcarn " модель "Ь С-ТР"(Великобритания), оснащенным УФ-детенторсм, настроенным на 248 rot (чувствительность .0,32 ед.опт.пл.). Полученные результаты показали, что оптимальное разделение беглимина и примесных соединений 1,П,Ш достигается при использовании стальной колонки 250x4,6 ш, упакованной сорбентом " Uch"iojoi£ " Cjg, 5 мнм, подвижной фазы состава: ацетонитрил - вода -диэтиламин (40:60:1). Хроматограмма модальной смеси веществ представлена на рис. 4.

Характеристики хроматографического разделения веществ в этих условиях приведены в таблице I.

Хроматографа модельной смеси беглимина и его возможных примесей

ии

и

6 6 10

мкн

I - примесь I; 2 - примесь П{ 3 - примесь Ш; •4 - беглимян.

Рис. 4

Таблица I

Характеристики хроматографичоохого разделения беглпмшта и его примесей метода« ВЭЕХ

! Название вещества

| к';

I N -(2-амино-5-бромбензгидрил)

глицин 2,40

2 5-Фенил-7-бром- 1,3,4,5-тетрагидро- 4,07 1,4— б8НЗодиазепинон-2

3 5-фенил-7-бром- 1,3- яигидро-<2Н)- 4,95' 1,4- бензодиазепинон-2

4 беглимин . 8,94 ,

°-76 2,62 1,99

1,33

2,65

2 ДО

5,57

Примечание; 1.ЭЗ мин.

Количественное определенна беглимина и примесных соединений в фармакологическом средстве и его лекарственной форме проводили с использованием метода внешнего стандарта. В качестве стандартов использовали одну из серий беглимина . о содержанием действующего вещества 99,£$ и синтезированные стандартные образцы примесей 1,П,Ш. Все стандартные образцы были охарактеризованы по УФ-, ИК-, масс-спектрам,' значениям температур плавления, а также методом ТСХ. Анализ образцов 6 серий беглимина и таблэток беглимина показал, что содержание суммы примесей в них не превышает 1% и

соответственно, что согласуется с данными хроматодэн-сптометрии.

Результаты количественного определения беглимина в лекарственной форме методом ВЭ2Х на примере серии 10189 приведены в таблице 2.

Результаты количественного анализа таблеток беглимина 0,025 г методом ВЗЗСХ (л = 5, Р = 95%)

Содержание беглимина, г ! Метрологические характеристики

3. Выбор состава и технологии лекарственной формы беглимина; определение фармацевтической доступности. Разработка методик контроля таблеток беглимина 0,025 г' и 0,05 г.

Исследования по выбору оптимального состава лекарственной формы беглимина проводили на образцах таблеток, приготовленных методой влажной грануляции по трем различным прописям. Критерием выбора вспомогательных веществ явились результаты теста "Растворение" и данные по содержанию примесных соединений в таблетках беглимина разного состава.

Предварительно были подобраны условия определения высвобождения беглимина из таблеток. Показано, что пягтлуч-шие результаты достигаются в бинарной однофазной система:

Таблица 2

0,0247 0,0250 0,0248 0,0251 0,0254

5 « 2,74-Ю-4 5х «1,22'Ю-4

дх = 3,14-КГ4 £ «¿1,26?

х = 0,0250 г

пирт этиловый 95% - кислота хлористоводородная О,I И (3:7). Оценку количественного содержания беглимина в среда растворения проводили ш разработанной нами спзктрофото-мэтрической методике. Относительная ошибка определения нэ превышала ±1,9%.

Дяя изучения степени чистоты образцов таблеток багли-мина трах исследуемых составов применяли метод хроматоден-сптометрии. Определения проводили на 'свежеприготовленных образцах таблеток беглимина и на образцах, хранивапюсся в течение 2 лет. Ra основании результатов проведенного комплексного исследования признано целесообразным рекомендовать для таблеток беглимина следующий состав: беглимина -0,0250 г, лактозы - 0,0425 г, крахмала - 0,0107 г, поли-вишшпирролидона - 0,0010 г, кальция стеарата - 0,0008 г. (Для таблеток с содержанием беглимина 0,05 г количества всех перечисленных вспомогательных веществ удваиваются).

Дяя выбора оптимальной технологии в"образцах таблеток, приготовленных методом влажного гранулирования, брикетирования и опуяривакял гранул сухой субстанцией, определяли слвдугаиэ показателя: "описание", "распадаемость", "посторонние примеси", "содорл'якиа беглшина". - Методом хроматодан-ситометртг устаноаяено, что минимальное количество примесей присутствует в образцах таблеток, приготовленных методом влалнбй граауляпии. Количественное содержание беглимкна во всех исследуемых образцах, определенное методом спектрофото-метрии,' соответствовало установленным кормам. Таблетки, приготовленные методом олудртзаняя, не удовлетворяли требованиям ст. "Таблетки" ГФ XI по разделу "Распадаемость".

Fia основании результатов проведенной работы установлено, что метод влажной грануляции является наиболее предпочтительным для промышленного производства лекарственной формы Ойглина. - ,

Следующий этап наша исследований посвящен выбору упаковки для црошлиенного выпуска таблеток беглимина. Объектом изучат« были образца таблеток, хранившиеся в естественных -условиях и в климатической камере при различных температурных ро::ж.!ах в упаковке трех видов г банках оранжевого

стекла с навинчиваемыми пластмассовыми крышками, банках оранжевого стекла, укупоренных натягиваемыми пластмассовыми крышками и в контурной ячейковой упаковке. Качество испытуемых образцов оценивали по тем же показателям, что и при выборе технологии.

Данные исследования показали, что минимальное количество примесных соединений в процессе хранения образуется в таблетках, упакованных в банки оранжевого сговда с навинчиваемыми пластмассовыми крышками и в контурную ячейковую упаковку. Остальные показатели качества практически не изменялись .

По разработанным методикам проведена стандартизация показателей качества беглимина и таблеток бэглимина и изучена их стабильность. Результаты проведенных исследований (методики анализов и данные по стандартизации) положены в основу проектов ВФС на беглимин и Таблетки беглимина 0,025 г и 0,05 г.

4. Разработка методик экстракции и количественного определения беглимина и его метаболитов в бно-жвдкости. Изучение фармахокииетаки баглшина.

Для количественного определения беглимина и его метаболитов в плазме кроаи экспериментальных животных предварительно проведена работа по выбору оптимальных условий извлечения этих соединений.

На основании максимального значения константа распределения, характеризующей экстрагирующую способность растворителя, в качестве экртрагента беглимина и его метаболитов предложен диэтиловый эфир. Определены также оптимальный объем экстрагента (Ю-кратннй по сравнению с объемом плазмы крови) и время экстракции - 15 мин.

Идентификаций и количественное определение беглимина и его метаболитов проводили методом ВЗН на жидкостном хроматографе "СоСс/ «( весктал ) с использованием стальных колонок размером (¿50x4,6) мм, защищенных прэдаолонкой размером (50x4,6) мм, упакованных сорбентом "Сияасорб (10 мкм), элюент: этанол - ацетонитрил - ацетатный буфер

рн 4,19 (80:20:120). В этих условиях достигнуто разделение беглшина (3) и его метаболитов: 5 - фенил-7-бром- 1,3-дигидро-(2Н) - I,4-бензодиазепинона- 2(2) и N -(2-амино-5-бромбензгидрил) глицина (I) (рио. 5).

Хроматограмма разделения модельной сме'си беглшина и двух его метаболитов

£

I - Н -(2-амшю-5-бромбензгидрил) гдицин;

2-5-фенил-7-бром- 1,3-дитикро-(2Н)- 1.4-

бэнзодиазешшоя-2; 3 - бегяшт ■ Рио- 5

Чувствительность разработанной методики для соединения 1-10 мхг/мл; 2-2 мкг/ил; 3 - 10 мкг/мл.

Исследование фармакокинетгате беглимина было проведено на кроликах после однократного пэрорального введения бег ли-мина в виде таблеток в доэе 250 от. Установлено, что в плазма крови рта -через 30 глин после введения беглимин не обнаруживается. В исследуемых пробах регистрировали основной метаболит - N -<2-амино-5-бромбвнзлщрил) глицин; 5 - фенил-7-бром- 1,3-дигвдро-(2Н)- 3,4-бензодиазепинон-2 (структура метаболитов подтверждена методом масс-спектрометрии), а также неиденгифщированные метаболиты с временами удерживания 3,20 и 5,06 мин. Учитывая то, что соединение 2 регистриро-

валооь в плазме крови в следовых количествах, фармахокино-тичеокие параметры рассчитывали по содержанию в плазме крови соединения 3. Кривая зависимости: концентрация - время представлена на рис. б. .

Уровень концентрации N -(2-амино-5-бромбвнзгидрил) глицина в плазме крови кроликов поело однократного перорального введения 250 мг беглимина в вида таблоток

Рио. 6

Экспериментальные данные показывают, что соединение 3 достаточно бистро поступает в системный кровоток, достигая От»* = 211,21 ^ 32,55 мкг/мд 3,2 ± 0,37 ч, быстро выводится из организма, так как период полуэлиминации равен 2,42 ± 0,86 ч. Среднее время удер-жания в организме составляет 6,93 ± 0,62 ч.

швода

I. Проведено комплексное изучение физико-химических свойств оригинального отечественного фармакологического средства ноогропного типа действия - беглимина с использованием химических и физико-химических методов анализа. Сопоставлена аналитические возможности и метрологические характеристики методов. Выбраны обоснованные методики анализа для включения в нормативно-техническую документацию:

- на основе результатов изучения хроматографических свойств беглимина и трех возможных примесных соединений разработана ТСХ-датодика идентификации и определения чистом беглшлна:

- путем сопоставления данных ТСХ и ВЭЖХ- анализа чистоты беглшина, а также результатов масс- и хромато-масс-спектрометрических исследований проведена идентификация и . установлена структура примесей беглимина, показано, что основными примесными соединениями в беглимине являются:

N -(2-амино-5-бромбензгидрия) глицин, 5-фенил-7-бром-1,3,4,5- тетрагидро- 1,4- бензодиазепинон-2, 5-фенил-7-бром- 1,3- дигидро-(2Н)- 1,4- бензодиазепинон-2;

- разработана хроматоденситометрическая методика определения чистоте беглимина; относительная ошибка опреде- . ления не превышает + 8,6$;

- изучено влияние основных компонентов хроматографи-ческой спет они на поведение беглимина и сопутствующих ему примесей в условиях обращенно-фазной ВЗЕСХ, разработана ВЗЗХ-мотодика количественного определения беглимина и примесей; относительная ошибка определения не превышает ±2,3$;

- с использованием метода дериватографии проведен анализ термической устойчивости беглимина. Установлен интервал температури плавления и определен его характер. Показано, что увеличение суммарного содержания примесей'вызывает снижение интервала температуры плавления беглимина;

- разработали методики количественного определения беглимина: метод титрования в неводных средах и нитрито-метрия; относительные ошибки определения составляют ^ 0,5$ и ± 1,3* соответственно.

2. На основании сравнительного изучения показателей качества образцов таблеток беглимина 0,025 г и 0,05 г с различными вспомогательными веществами выбран оптимальный состав лекарственной Форш,

3. По данным определения показателей качества образцов таблеток беглимина, приготовленных методами влажного гранулирования, брикетирования и опудривания гранул сухой субстанцией для промышленного производства рекомендован метод влажного гранулирования.

4. Разработаны методики контроля качества и стандартизации таблеток беглимина 0,025 г и 0,05 г:

- разработана хроматоденсигометрическая методика определения примесей в лекарственной форме беглимина; относительная ошибка определения не превышает ± 6,9£;

- выбраны условия и разработана В32Х-методика определения чистоты и количественного содержания действующего вещества в таблетках беглимина; относительные ошибки определения не превышают ±3,0% и ¿1,8$ соответственно.

5. Изучена стабильность беглимина и таблеток беглимина методом "ускоренного старения" в течение срока, эквивалентного 2 годам хранения в естественных условиях.

6. Обоснованы и предложены принципы методологического подхода к анализу беглимина в плазме крови:

- выбраны оптимальные условия извлечения беглимина и его возможных метаболитов из плазмы крови;

- разработана ВЗЙС-методика определения беглимина и метаболитов в плазме крови; относительная ошибка определения не превышает ±4,2£.»

7. Проведено изучение экспериментальной фармакокинэ-тики беглимина. Показана быстрая биотрансформация беглимина.. Методами ТС!, ВЗЯХ и масс-спектрометрии установлено, что основным метаболитом является Ы-(2-амино~5~бромбенз-гидрил) глицин. Рассчитаны его основные фармакокинетичос-киэ параметры. " • • ■

8. На основании проведенных исследований разработаны научно обоснованные методики контроля и установлены параметры качества беглимина и его лекарственной формы, которые по-

лояены в основ у проектов ВФС на беглшин и таблетки бегли-шша 0,025 г и 0,05 г.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1. Евтушенко H.G., Нечаева Ю.А. Изучение физико-химических свойств отечественного фармакологического средства психотропного действия.// В кн.: Тез.докл.Всес.научно-гехн. конференции "Состояние и перспоктивн создания новых готовых лекарственных средств и фотохимических препаратов". - ■ Харьков, - 1990. - С.186-187.

2. Евтушенко Н.С., Попков В.А., Фатова E.D., Нечаева Ю.А., Решетняк В.Ю,, Азизов Й.К. Идентификация компонентов лекарственных форм с использованием метода отражательной спектрофотомэтрш и ТСХ.// Фармация. - 1990, - И 4.

- С.36-10.

3. Нечаева Ю.А., Евтушенко U.C., Решетняк В.Ю. Применение метода дериватографяи для анализа и стандартизации фармакологического психотропного средства, производного . глгогдаа.// Рукопись депонирована в ВНИШИ МЗ СССР. M.: 1990.

- Реферат в - 1ЭЭ0. - if 5. Раздел ХХП.

4. Нечаева Ю.А. Контроль качества фармакологического средства "Р-55" методом хроматографии в тонком слое сорбента.// В кн.: Тезиса докл.научн.конференции молодых ученых

и студентов "Молодей, практическому здравоохранению". -Москва. - 19ЭО. - С.56.

5. Евтушенко Н.С., Нечаева Ю.А., Пятин В.М., Щербакова О,В., фучанков A.A., Кисляк H.A., Степаненка O.E. Влияние технологии таблетировышя на количество примесных соединений в лекарственной форме,// В кн.: Тезиоы докл. таучно-иракт.конференции "Резерва совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР". - Владимир. - 1991. -'.С. 25-26.

6. Евтушенко Н.С., Нечаева Ю.А. Применение спектроскопии IWP в анализа отечественного фармакологического средства - арилкрокзводного глицина СР-55").// В кн.: Тезгси докл.тучио-практ .конференции "Состояние и перспэк-

"'яш развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке". -Î6MCK. - 1991. - С.28.

7. Евтушенко Н.С., Нечаева JD.А., Пятин Б.М., Кясляк

il. А., Щербакова О.В., Степаненко О.Б. Выбор упаковки для . Таблеток фармакологического средства - арилпроизводного Глицина.// В кн.: Тезисы докл.научно-практ. конференции "Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и i'a Дальнем Востоке". - Томск. - 1991. - С.61.

8. Нечаева Ю.А., Волкович C.B., Евтушенко Н.С. Прпма-нение методов хроматографии.в тонких слоях сорбента и масс-спектрометрии для идентификации примесей в беглимине.// В сб.: "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств". - Москва. - 1991. - Т.П. - С.18-19.

9. Нечаева Ю.А., Евтушенко Н.С. Исследования в области анализа лекарственной формы беглимина.// В сб.:- "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств". - Москва. - 1991. - т.1. - C.II2-II3.

10. Нечаева Ю.А., Пятин Б.М., Кесляк H.A., Кручен-Ков A.A. Разработка оптимального состава таблеток багли-клна.// В сб.: "Проблема стандартизации и контроля качества лекарственных средств". - Москва; - 1991. - т.п. -Ö.I40-I4I.

Подписано к печати 1Ь.02.19У2г. Зак.Ту объем I п.л. Тип.МГТУ им.Баумана