Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение плодов перца однолетнего и разработка методов стандартизации липидного комплекса на его основе

На правах рукописи

ЗАВЬЯЛОВА ОЛЬГА АНАТОЛЬЕВНА

ФАРМАКОгаОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПЛОДОВ ПЕРЦА ОДНОЛЕТНЕГО И РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛИПИДНОГО КОМПЛЕКСА НА ЕГО ОСНОВЕ

Специальность 15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Московской медицинской академии им. И М.

Сеченова

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор Ольга Владимировна Нестерова

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор Николай Васильевич Зык

доктор фармацевтических наук, профессор Александр Семенович Берлянд

Ведущая организация: Институт государственного контроля лекарственных средств ФГУ НЦ «ЭСМП» МЗРФ.

Защита состоится 17 июня 2005 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.13 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, ГСП, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, ГСП, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан «*/ » „ЛКХ/Х 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета д. фарм. н., доцент

Т.П. Лагуткина

Общая характеристика работы

Актуальность работы

Растительные масла — богатый источник незаменимых жирных кислот, а также витаминов, фосфолипидов и стерияов. Они способствуют регуляции обмена веществ в организме человека и обладают антиоксидантными, провитаминными, антихолестеринемическими, противовоспалительными, ранозаживляющими и другими ценными свойствами.

В фармацевтической промышленности растительные масла служат растворителями для липофильных лекарственных средств, а также экстрагентами для извлечения биологически активных веществ из растительного сырья. Некоторые из них, в силу особенностей своего химического состава, представляют собой самостоятельные терапевтические средства широкого спектра действия.

Основной источник растительных масел — масличные культуры. Но растительные масла также содержатся и в косточках плодовых деревьев, семенах винограда, арбуза, томатов, являющихся отходом пищевых производств по переработке сельскохозяйственного сырья.

Для снижения себестоимости фитопрепаратов, в последние годы все большую актуальность приобретают безотходные технологии в производстве -использование растительных отходов пищевой промышленности в качестве источника биологически активных веществ.

С этой точки зрения, . отходы плодопереработки перца однолетнего (Capsicum annuum), в настоящее время подлежащие полной утилизации, являются перспективным сырьем для получения растительного масла, которое в зависимости от химического состава может представлять интерес как продукт фармацевтического, парфюмерно-косметического, пищевого или технического назначения.

Плоды и семена перца однолетнего сладких сортов изучены с химической и фармакологической точки зрения недостаточно, сведения об их качественном и количественном составе, а также о биологической активности, фрагментарны. Поэтому фитохимическая характеристика данного вида растительного сырья в сочетании с тщательным изучением фармакологических возможностей получаемого продукта, даст возможность рассматривать его в качестве перспективного источника лекарственных препаратов и позволит расширить ассортимент отечественных лекарственных средств растительного происхождения, полученных на основе липидных комплексов.

Цель работы я задачи исследования

Целью настоящей работы является фармакогностическое изучение плодов перца однолетнего и стандартизация липидного комплекса на его основе. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести фармакогностический анализ сырья - плодов перца однолетнего и определить его диагностические признаки;

- определить содержание влаги, золы общей и нерастворимой в соляной кислоте, органической и минеральной примесей в сырье и на их основании нормировать числовые показатели данного сырья;

- разработать оптимальные условия выделения липидной фракции из исследуемого сырья различными методами;

- изучить химический состав масла, полученного из плодов перца однолетнего;

- определить в липидном комплексе содержание БАВ для оценки перспективности использования отходов плодопереработки перца однолетнего в качестве сырья для получения фармакологических препаратов;

- на основании полученных данных обосновать необходимые показатели качества и методы стандартизации липидного комплекса плодов и семян перца однолетнего.

Научная новизна работы

Разработаны критерии стандартизации сырья на подлинность, включающие макро- и микроскопическое исследование, дериватографические характеристики.

Изучен состав образцов масла плодов и семян перца однолетнего, полученных холодным прессованием и экстракцией различными растворителями.

Проведена гравиметрическая характеристика масличности сырья при различных методах экстракции и разной степени измельчения. Полученные образцы масла охарактеризованы по требованиям фармакопейной статьи № 472 ГФ X «Масла жирные» и ГОСТов на пищевые масла. При этом получены количественные данные содержания 26 алифатических кислот, часть из которых проявляет F-витаминную активность, 10 нейтральных компонентов неомыляемого остатка, витаминов группы А и Е, а также элементов, составляющих основу минерального состава изучаемого липидного комплекса.

Выявлено существенно более высокое по сравнению с другими растительными маслами содержание стериновых и тритерпеноидных компонентов, известных своими репарационными, антиульцерогенными, антихолестеринемическими и провитаминными свойствами.

Показано, что изученное сырье перспективно для получения фармакологических препаратов.

Практическая значимость работы

Получено заключение о проведении апробации масла плодов перца однолетнего, как средства для лечения заболеваний слизистой оболочки полости рта и воспалительных заболеваний тканей пародонта, на базе МСЧ - 4 Федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем при МЗ РФ.

Получено положительное решение по заявке №2004122438 от 8 февраля 2005 года на патент на изобретение «Средство для лечения заболеваний

слизистой оболочки полости рта и воспалительных заболеваний тканей пародонта».

На основании проведенных исследований апробированы и внедрены:

- методика хроматографического определения токоферолов в липидных комплексах (испытательная лаборатория ГУЗ «ЦС и ККЛ ДЗ г. Москвы»);

- определения показателей подлинности сырья плодов перца однолетнего в процессе контроля качества (ЗАО АПФ «Фито-Эм» г. Москва);

- результаты диссертационного исследования (лекционный курс и практические занятия со студентами 5 курса на кафедре фармацевтической и токсилогической химии РУДН по теме «Анализ лекарственных средств липидной природы»).

Высокая биологическая активность масла плодов и семян перца однолетнего в сочетании с уникальностью состава по отдельным физиологически активным компонентам дает возможность выпуска на его основе фармакологических средств, эффективных для лечения ревматических явлений и пародонтоза, а также косметических препаратов и пищевых добавок, обладающих противовоспалительным и ранозаживляющим действием.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Открытом российском конкурсе на лучшую научную работу студентов 2000 года по разделу «Медицинские науки» (Москва, 2001), II Российской конференции молодых ученых России с международным участием (Москва, 2001), VIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001), Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, 2003), на межкафедральной научной конференции ММА им. И.М. Сеченова, ГСКРЛ8-2004 (КотозМкк, 2004).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 3 статьи, 6 тезисов докладов.

Связь задач исследования с проблемным планом научного совета

Диссертационная работа выполнена в рамках отраслевой научно-исследовательской программы ММА им. И.М. Сеченова «Разработка и совершенствование технологии подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием» и в соответствии с комплексной темой кафедры общей химии ММА им. И.М. Сеченова: «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (номер государственной регистрации 01.200.118796).

На защиту выносятся

Результаты стандартизации плодов перца однолетнего и липидного комплекса плодов перца однолетнего, полученные при различных методах экстракции и разной степени измельчения сырья в условиях лаборатории и опытно-промышленного производства, а также данные по содержанию биологически активных соединений исследуемого объекта.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 132 страницах, содержит 19 таблиц, 11 рисунков, 2 схемы, 3 диаграммы, 4 графика и состоит из введения, четырех глав, списка литературы из 146 источников, из них 53 иностранных, и выводов.

Первая глава посвящена обзору литературы по биологическим, фармакогностическим и химическим аспектам характеристики изучаемого растительного сырья. Во второй главе описаны объекты исследования и методы, применяемые для разработки характеристик подлинности и показателей качества плодов перца однолетнего и липидного комплекса на его основе. Третья глава излагает экспериментально-методическую часть по изучению показателей качества плодов перца однолетнего, а четвертая глава посвящена фармакохимическому изучению и стандартизации липидного комплекса плодов и семян перца однолетнего, а также изучению динамики изменения жирнокислотного состава липидного комплекса в процессе хранения.

Материалы и методы исследования

Объектом исследования служили высушенные при температуре 60°С семена и плоды перца однолетнего, соответствующего критериям доброкачественности ГОСТа 13908-68 «Перец сладкий свежий», предъявляемого к свежим плодам культурных сортов сладкого перца (Capsicum annuum).

Для определения физико-химических показателей масла перца однолетнего были использованы в качестве сырья семена сладкого перца, очищенные от плодовой мякоти, без учета сортовых характеристик, а для углубленного исследования компонентного состава масла перца однолетнего, были выбраны семена трех сортов сладкого перца - Крепыш, Богатырь и Белоснежка - наиболее сильно отличающиеся друг от друга по содержанию каротиноидов, а, следовательно, и по внешнему виду, в фазе технической спелости.

При использовании сортовых семян проведено полное ручное отделение семян от гипантия с целью более адекватной характеристики сырья.

При опытно-промышленной наработке масла семян методом холодного прессования полного отделения от остатков плодовой мякоти не проводилось.

При стандартизации плодов перца однолетнего руководствовались общими статьями ГФ XI «Плоды» и «Семена».

При микроскопическом исследовании и разработке диагностических признаков перца однолетнего учитывали требования, предъявляемые к технике приготовления микроскопических препаратов цельного сырья в соответствии со статьей ГФ XI «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья».

Определение физико-химических показателей липидного комплекса плодов перца однолетнего проводили в соответствии с общей статьей 472 «Масла жирные» ГФ X.

Числовые показатели липидного комплекса определяли, применяя соответствующие методики ГФ XI, а определение перекис но го числа проводили по методике ГОСТ 26593-85 с Изменением №1, утвержденным в мае 1999 г.

В работе использовались современные физико-химические методы анализа: газожидкостная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография, тонкослойная хроматография, дериватография, спектрофотометрия и другие.

Статистическую обработку результатов проводили по общепринятым методам вариационной статистики соответствующей статьи ГФ XI.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Изучение показателей качества плодов и семян перца однолетнего

Для разработки характеристик подлинности сырья нами была проведена работа по морфолого-анатомической характеристике перца однолетнего.

Плод - синкарпная ягода призмовидной формы диаметром 3-6 см, длиной до 10 см. Поверхность плода гладкая, продольно-ребристая, соответствующая числу сросшихся плодолистиков. Плод прикреплен к чашечке своим плоским или вогнутым основанием. Вершина плода может быть острой, тупой или даже вогнутой. Внутри плода перца образуется слипшаяся полость. Цвет - зеленый, желтый, красный. Запах ароматный, вкус сладковатый.

Семена плоские, почковидные, с хорошо выраженным ободком по краю. Длина от 2 до 6 мм. Толщина семян составляет 0,5-1 мм. Поверхность -глянцевая или матовая, гладкая или слегка шероховатая. Цвет семян желтый или бледно-желтый. Запах отсутствует. Вкус сладковатый.

Раздел микроскопии был выполнен в соответствии с требованиями предъявляемыми к микроскопическим исследованиям ГФ XI. Описание диагностических признаков исследуемого объекта сопровождается фотографиями микропрепаратов.

На поперечном срезе семени различают: спермодерму, эндосперм и зародыш. Спермодерма (семенная кожура) состоит из 5-6 рядов клеток. Снаружи располагается однослойный эпидермис. Его клетки крупные, сильно склерифицированные, V - образные, с внутренней стороны с извилистыми, неравномерно-утолщенными, пористыми боковыми стенками и бородавковидными выступами. Внешние стенки эпидермальных клеток покрыты толстой кутикулой. Под эпидермисом находится 4-5 рядов мелких,

тонкостенных, сдавленных в радиальном направлении клеток паренхимы и однослойная внутренняя эпидерма. Эндосперм целлюлярного типа представлен полигональными, толстостенными клетками, содержащими жирное масло и алейроновые зерна. Зародыш в семени изогнут (напоминает цифру 6). Его клетки мелкие, с тонкими стенками, содержат алейроновые зерна и жирное масло.

Перикарпий (околоплодник) состоит из трех дифференцированных слоев: экзокарпия, мезокарпия и эндокарпия. Экзокарпий представлен плоскими, с сильно утолщенной наружной клеточной стенкой и покрытыми гладкой кутикулой, эпидермальными клетками. Клетки экзокарпия округлой и многоугольной, реже трапецевидной и квадратной форм, со слабоволнистыми, дуговидноизогнутыми и четковидноутолщенными оболочками. Некоторые клетки четковидной утолщенности не имеют. Клеточная стенка с простыми цилиндрическими порами. Клетки содержат глыбки каротиноидов. Внутренняя эпидерма представлена клетками с более толстыми оболочками, чем у наружной эпидермы, поэтому их "четковидность" выражена в большей степени. Эпидермис подстилается слоем, состоящим из 4-5 рядов мелких, толстостенных, содержащих оранжевые капли и глыбки каротиноидов, клеток паренхимы. МезокарпиЙ многослойный (от 14 до 30 слоев клеток), крупноклеточный, (только периферические 3-5 слоев клеток в 3-6 раз мельче), содержит глыбки каротиноидов, и капли жирного масла. Эндокарпий представлен клетками с волнистыми, тонкими стенками. Эти клетки покрыты тонкой кутикулой.

Для подтверждения отсутствия алкалоидов в культивируемых сортах сладкого перца проведены качественные реакции с реактивами, используемыми в осадочных реакциях на алкалоиды, что позволило в дальнейшем рассматривать перец однолетний сладких сортов в качестве перспективного источника липидного комплекса.

Для определения показателей качества - влажности, золы общей (метод дериватографии и метод ГФ XI) (см. таб. 1), содержания липидного комплекса (см. таб. 2) - в качестве сырья была использована сортовая смесь семян и плодов перца однолетнего, предварительно высушенная при температуре 60°С.

Различия в числовых показателях влажности и золы общей объясняются выбором методик их определения.

Так, частичное увеличение потери массы (влажности) образца, возможно, за счет начала термического разложения, связанного с удалением конституционно-связанной воды (согласно методике ГФ XI образец находится при температуре 105"С достаточно длительное время, как правило, 2-3 часа, до достижения постоянной массы), а более низкое значение содержания золы общей, полученное методом дериватографии, может быть объяснено тем, что при температуре 700-800°С наблюдается дополнительная потеря массы за счет возможной деструкции сухого остатка, в отличие от методики, рекомендованной ГФ XI, где температура каления 500°С.

Таблица 1

Результаты определения показателей влажности н золы общей плодов перца однолетнего разными методами

Термические эффекты Метод дериватографии Метод ГФ XI

60-120°С удаление влажности 120-160'С удаление влажности 240-3204; тер«,™«« 320-370*С разложение с 370-460*С образованней 4б0-530"С ™1!'ногои:гатта Влажность 5±0,1% Зола 4,5±0,2% Влажность 6,5±0,1% Зола 6,2±0,2%

Таким образом, с помощью метода дериватографии можно определить истинное содержание влаги и золы в сырье и обоснованно рекомендовать температурный режим определения этих показателей для каждого вида сырья.

Анализ результатов исследования термических характеристик плодов перца однолетнего позволяет сделать вывод о том, что определение влажности в нашем случае следует проводить при температуре 160 43, а золы общей - при 530 0С.

Таблица 2

Содержание липидного комплекса в разных частях плода в зависимости

от метода экстракции

Органический Выход липидного комплекса, %

растворитель

Семена целые Семена измельченные Околоплодник перца

п=5;Р=95%

хлороформ 0,91 ± 0,02 21,59 ±0,54 0,69 ±0,06

8=0,1Б=1,96% 8=0,54 Е=2,50% 8=0,45 Б=0,26%

хлороформ :метанол не опр. 22,36±1,52 не опр.

1:1 8=1,22 Б=6,79°/о

хлороформ гметанол не опр. 23,35±0,81 не опр.

1:2 8=0,65 Б=3,46%

гексан не опр. 15,50±0,0,98 8=0,79 Б=6,34 % не опр.

петролейный эфир не опр. 17,83±0,55 не опр.

квалификации «ч» 8=0,45 Е=3,П%

диэтиловый эфир не опр. 17,75±0,53 8=0,43 Б=3,00% не опр.

По данным, приведенным в таблице 2, видно, что использование в качестве экстрагента смеси хлороформ :метанол - 12 значительно повышает выход липидного комплекса семян перца однолетнего. Это объясняется присутствием метанола, который разрушает комплексы липидов с белками, растворяет структурные липиды и дезактивирует ферменты, вызывающие

разрушение липидов во время экстракции. Но использование метанола в качестве возможного экстрагента нежелательно из-за его токсического действия.

Для сравнения, для одного из образцов, была проведена экстракция высококипящим петролейным эфиром. Выход масла не увеличился, несмотря на более высокую температуру экстракции, но время полного удаления растворителя значительно возросло.

Различия в числовом выражении липофильной фракции, полученные в результате экстракции разными органическими растворителями, позволяют предположить различный состав сопутствующих маслу веществ, т. е. глико -, церебро -, фосфолипидов.

Семена перца однолетнего содержат не менее 21% липидного комплекса и поэтому в соответствии с международной классификацией могут быть отнесены к масличному сырью, используемого для промышленного получения жирного масла не только экстракционным методом, но и методом прессования.

На основании всего выше сказанного, предлагаем нормировать показатель «содержание липидного комплекса» - не менее 21%.

Исходя из результатов исследований предлагается регламентировать следующие числовые показатели и их нормы для семян перца однолетнего (табл. 3).

Таблица 3

Числовые показатели семян перца однолетнего_

Показатель Предлагаемая норма

Содержание липидного комплекса, % не менее 21

Влажность, % не более 7,5

Зола общая, % не более 7,0

Зола нерастворимая в 10% растворе не более 3,5

хлористоводородной кислоты, %

Органические примеси, % не более 1

Минеральные примеси, % не более 1

Физико-химическое изучение и разработка показателей качества липидного комплекса плодов и семян перца однолетнего

Для определения физико-химических показателей масла (см. таб. 4) были использованы в качестве сырья семена сладкого перца, очищенные от плодовой мякоти, без учета сортовых характеристик.

Полученный нами липидный комплекс анализировался в соответствии с требованиями ст. 472 «Olea pinguia» ГФ X и соответствующих методик ГФ XI.

Липидный комплекс перца однолетнего, представляет собой полупрозрачную густую зеленовато-бурого цвета маслянистую жидкость (полученный методом холодного прессования) или прозрачную маслянистую жидкость желто-бурого цвета (полученный методом экстракции гексаном) с характерным ароматным запахом и сладковатым вкусом.

Таблица 4

Результаты определения физико-химических показателей липидного _ комплекса перца однолетнего (п=5: Р=95%)_

Числовые показатели Гексановый экстракт Хлороформ-метанольный экстракт Прессовое масло

Плотность 0,927 ± 0,002 г/см1 8 = 0,001 Е = 0,27 % 0,930 ±0,005 г/см1 8 = 0,002 Е = 0,53 % 0,927 ± 0,007 г/см3 8 = 0,003 Е = 0,80 %

Показатель преломления 1,4741 ±0,0005 Б = 0,0002 Е = 0,0337% 1,4742 ±0,0002 8 = 0,0001 Е = 0,0168% 1,4742 ± 0,0005 8 = 0,0002 Е=0,0337 %

Кислотное число 5,00 ± 0,12 мг Б = 0,05 Е = 2,48 % 2,90 ±0,15 мг 8 = 0,06 Е = 5,14% 9,76 ± 0,12 мг 8 = 0,05 Е= 1,27 %

Число омыления 136,67 ±3,05 мг/г 8=1,23 Е = 2,23 % 134,64 ±3,37 мг/г 8=1,36 Е = 2,51 % 152,96 ±3,23 мг/г 8 = 1,30 Е = 2,11 %

Йодное число 119,00 ±2,48% 8=1,00 Е = 2,09 % 126,00 ±2,98% 8=1,20 Е = 2,36 % 129,71 ±3,20% 8=1,29 Е = 2,47 %

Перекисное число 0,1 ± 0,005 ммоль/кг 8 = 0,002 Е = 4,97 % 0,1 ± 0,007 ммоль/кг 8 = 0,003 Е = 7,45 % 0,2 ± 0,002 ммоль/кг 8 = 0,001 Е=1,24%

Учитывая результаты проведенных исследований (см. таб. 4), мы предлагаем следующие нормы числовых показателей для стандартизации липидного комплекса плодов перца однолетнего, представленные в виде таблицы 5.

Таблица 5

Нормы показателей кач ества липидного комплекса

Числовой показатель Предлагаемая норма

Плотность, г/см3 0,927-0,923

Коэффициент преломления 1,4741-1,4742

Число омыления, мг/г 136-145

Кислотное число, мг не более 10

Йодное число, % не менее 119

Перекисное число, ммоль/кг не более 0,2

Липилная фракция, % не менее 21

Прогоркание жира контролируется по величине кислотного числа. Доброкачественные жиры содержат небольшое количество свободных жирных кислот.

Число омыления позволяет определить состав жиров и их доброкачественность.

По величине йодного числа масло перца по степени высыхаемости относится к группе полувысыхающих масел (тип линолевой кислоты), что соответствует данным, полученным в результате хроматографического анализа.

Изучение минерального состава липидного комплекса проводили на портативном микропроцессорном спектрофотометре DR/2010 (HACH, USA) и на портативном сканирующем кристалл - дифракционном рентгеновском спектрометре «Спектрослан» в соответствии с методиками и процедурами для проведения анализов на усовершенствованной портативной лаборатории фирмы НАСН, марка ДР-2010, 1997-2000 «НАСН» США. Методики определения аттестованы. Все катионы определялись до 10'5% (см. таб. 6).

Таблица 6

Минеральный состав липидного комплекса_

Объект Zn, Си, Fe, Мп, s,% Р,% Si, %

% % % % (общий) (общий) (общий)

Прессованное 610"4 6-10"* 610'3 0,910" 1,7-10' НО'2 <1-10"

масло

Водный НО" МО" МО"3 0,610" не опр. не опр. не опр.

экстракт

Кислотный 8-10" МО"3 8-10'3 1,610" не опр. не опр. не опр.

экстракт

Кроме того, параллельно проведен анализ минерального состава липидного комплекса перца однолетнего на рентгенофлюоресцентном сканирующем спектрометре (методика безразрушающего анализа жидких и твердых веществ на металлы от Са до V).

Для углубленного исследования компонентного состава масла перца однолетнего в качестве сырья были выбраны семена трех сортов сладкого перца - Крепыш, Богатырь и Белоснежка - наиболее сильно отличающиеся друг от друга по содержанию каротиноидов, а, следовательно, и по внешнему виду, в фазе технической спелости.

Сорт Крепыш (образец 1) характеризуется ранним сроком созревания. Растение компактное, высотой 37-55 см, с урожайностью 3-4 кг/м2. В фазе технической спелости плоды имеют желтую окраску.

Сорт Богатырь (образец 2) — среднеспелый сорт с урожайностью 3,5-7 кг/м2, повышенным содержанием витамина С. Окраска плодов в фазе технической спелости — светло-зеленая, в биологической — красная.

Сорт Белоснежка (образец 3) — среднеранний сорт с урожайностью 5-6 кг/м2, плоды в фазе технической спелости имеют белую окраску.

Нами была проведена лабораторная наработка образцов экстрактов семян перца однолетнего трех сортов гексаном, моделирующим пищевой бензин, с последующей экстракцией смесью метанола с хлороформом 1:1 с целью исчерпывающего выделения фосфолипидов. Полученные в нескольких

повторностях экстракты были фракционированы на свободные кислоты, связанные кислоты и неомыляемые вещества (см. табл. 7).

Таблица 7

Содержание липидных компонентов в семенах перца однолетнего

Образец 1 1 2 | 3 1 1 2 | 3

Экстрагент Гексан Метанол: хлороформ

Выход экстракта, % 14,8±0,3 8=0,1 Е=1,68 % 15,б±0,5 8=0,2 Е=3,18 % 16,2±0,5 8=0,2 Е=3,06 % 8,2±0,2 8=0,1 Е=3,02% 8,5±0,2 8=0,1 Е=2,92 % 6,8±0,2 8=0,1 Е=3,65%

Свободные кислоты, % от массы экстракта 3,7±0,2 8=0,08 Е=5,37 % 2,6±0,05 8=0,02 Е=1,90 % 4,0±0,2 8=0,08 Е=4,97 % 8,4±0,2 8=0,1 Е=2,9б% 8,3±0,2 8=0,1 Е=2,69 % 9,2±0,5 8=0,2 Е=5,40%

Связанные кислоты, % от массы экстракта 82,6±2,5 Е=3,00 % 86,2±2,3 8=1,2 Е=3,46% 86,9±4,2 8=1,7 Е=4,86% 77,3±2,2 8=0,9 Е=2,89% 80,1±2,7 8=1,1 Е=3,41% 78,2±4,5 8=1,8 Е=5,71%

Токоферолы, мг %(метод ВЭЖХ) 20,0 22,0 17,0 не опр. не опр. не опр.

Каротиноиды, мг % 2,8±0,02 8=0,05 Е=4,43% 1,3±0,05 8=0,02 Е=3,81% 2,0±0,1 8=0,03 Е=3,72% 3,8±0,05 8=0,05 Е=3,27% 2,0±0,05 8=0,02 Е=2,48% 2,6±0,1 8=0,05 Е=4,77%

Фосфолипиды, % 0,8±0,02 8=0,01 Е=3,10% 0,5Ш),05 8=0,02 Е=5,51% 0,4±0,02 8=0,007 Е=4,34% 5,5±0,12 8=0,05 Е=2,26% 4,7±0,17 8=0,07 Е=3,70% 5,ОАО 1,5 8=0,06 Е=2,98%

Неомыляемые вещества, % 2,9±0,1 8=0,04 Е=3,42% 2,2±0,1 8=0,04 Е=4,51% 2,1±0,1 8=0,04 Е=4,73% 3,5±0,1 8=0,05 Е=3,44% 3,6±0,1 8=0,05 Е=3,44% 3,2±0,1 8=0,05 Е=3,88%

Свободные кислоты, полученные экстракцией 2% - ным водным раствором щелочи из эфирного раствора экстракта, освобожденного от фосфолипидов, с последующим выделением из солей, и связанные кислоты, полученные при омылении суммы жиров и прочих сложных эфиров водно-спиртовой щелочью, были переведены в метиловые эфиры действием эфирного раствора диазометана.

Для определения жирнокислотного состава проводилась идентификация метиловых эфиров методом хроматомасс-спектрометрии (см. таб. 8). Полученные масс-спектры сравнивали с базой данных (см. график 1,2).

Кроме указанных кислот, составляющих в сумме от 90 до 98 % , указанных фракций, в исследованных образцах обнаружены миристиновая, 13-метилтетрадекановая, пентадекановая, 14-метилпентадекановая, пальмитолеиновая, 14-метилгексадекановая, маргариновая, гептадеценовая,

гедолеяновая, эйкозадиеновая, эйкозапентаеновая, арахиновая, арахидоновая, линоленовая, бегеновая, трикозановая, лигноцериновая, пентакозановая, церотиновая кислоты, которые составляют от 0,05 до 1,0 %, а также следовые (менее 0,05%) количества лауриновой, пентадекановой и нервоновой кислот.

Таблица 8

Результаты хроматомасс-спекгрометрии по определению жирнокислотяого состава липидного комплекса плодов перца __однолетнего, %__

Образец 1 2 3

Фракция Свободные кислоты Связанные кислоты Свободные кислоты Связанные кислоты Свободные 1 Связанные Кислоты | кислоты

Жирно-кислотный состав гексанового экстракта семян сладкого перца

Пальмитиновая 14,9 10,9 22,1 17,2 12,5 13,6

Стеариновая 5,3 3,3 6,0 6,4 3,6 3,0

Олеиновая 15,2 15,7 15,2 15,3 9,0 12,2

Линолевая 60,2 67,8 48,9 52,2 66,0 69,6

Жирно-кислотный состав хлороформ-метанольного экстракта семян

Пальмитиновая 24,8 18,2 22,2 27,4 19,4 15,3

Стеариновая 5,6 5,5 5,6 5,4 5,4 2,6

Олеиновая 14,0 13,1 19,5 6,8 10,2 11,7

Линолевая 51,9 57,1 48,8 59,2 50,4 68,2

АЬыпйапое

Э200000 эоооооо гаооооо злооооо 2-400000 2200000 2000000 1900000 1вООООО 1ЧООООО 1200000 1000000 вООООО

вооооо

400000 200000

График 1

Хроматограмма свободных кислот масла перца

Хроматограмма связанных кислот масла перца

График 2

Суммарные кислоты одного из образцов дополнительно изучены газожидкостной капиллярной хроматографией с идентификацией по относительному времени удерживания. Метиловые эфиры для этой пробы получены кислотным метанолизом.

Аналогично исследован состав жирных кислот плодов перца (таб. 9).

Таблица 9

Жирнокислотный состав нефракционированнрго масла

Компонент жирного масла

Содержание в %

Семена Плоды

№ Насыщенные кислоты, в т.ч. включая изомеры 13,15 27,51

1 Лауриновая кислота С(12:0) 0,02 0,95

2 Миристиновая кислота С(14:0) 0,11 3,21

3 Пентадециловая кислота С(15:0) 0,03 0,99

4 Пальмитиновая кислота С(16:0) 10,34 15,82

5 Маргариновая кислота С(17:0) 0,10 0,41

6 Стеариновая кислота С(18:0) 1,89 3,70

7 Арахиновая кислота С(20:0) 0,24 0,75

8 Бегеновая кислота С(22:0) 0,21 0,83

9 Лигноцериновая кислота С(24:0) 0,18 7,3

Мононенасыщенные кислоты, в т.ч. включая 6,59 7,3

изомеры

1 Пальмитолеиновая кислота С( 16:1) 0,26 1,82

2 Гептадеценовая кислота С(17:1) 0,05 0,21

3 Олеиновая кислота С(18:1) 6,20 4,89

4 Гадолеиновая кислота С(20:1) 0,07 -

5 Нервоновая кислота С(24:1) 0,01 -

6 Эруковая кислота С(22:1) - 0,20

Полннепасыщевные кислоты, в т.ч. включая 80,26 65,19

изомеры

1 Линолевая кислота С(18:2) 79,44 33,34

2 Линоленоая кислота С(18:3) 0,47 21,01

3 Эйкозадиеновая кислота С(20:2) 0,06 -

4 Арахидоновая кислота С(20:4) 0,16 10,56

5 Эйкозапентаеновая кислота С(20:5) 0,13 -

6 Эйкозатриеновая кислота С(20:3) - 0,28

Таким образом, жирнокислотный состав масла плодов перца однолетнего выгодно отличается от состава других растительных масел по содержанию ненасыщенных кислот с высоким антиоксидантным эффектом и обнаруживает уникальное количество арахидоновой кислоты, биогенетически связанной с простагландинами.

Динамику изменения жирнокислотного состава проб в процессе хранения изучали при помощи метода хроматомасс-спектрометрии (см. таб. 10).

Таблица 10

Зависимость состава пробы от времени хранения

Время хранения образца, сутки С(16:0)/С(18:2) (соотношение содержания пальмитиновой и линолевой кислот) С(18:0)/С(18:2) (соотношение содержания стеариновой и линолевой кислот) Количество 9-0-(9:0), % (содержание 9-оксононановой кислоты, артефактного продукта, образующегося при окислении непредельной кислоты по двойной связи в 9-ом положении Количество продуктов окисления исследуемых кислот, накапливающихся в процессе хранения,%

0-5 0,17 0,05 0,00 0,00

5-10 0,33 0,10 0,60 1,30

10-20 2,7 1,25 6,10 20,00

20-30 18,0 3,00 10,30 22,90

30-50 100,00 30,00 11,80 28,20

Таким образом, наши результаты показывают, что хранение пробы более 5 суток недопустимо, т.к. приводит к существенным искажениям количественных данных.

Масло семян перца обнаружило высокое содержание неомыляемого остатка. Поскольку известно, что неомыляемый остаток во многом определяет биологическую ценность, нами проведено исследование состава нейтральных продуктов омыления всех трех образцов масла методом хроматомасс-спектрометрии без ацетилирования и силилирования образцов (см. таб. 11 и график 3).

Таблица 11

Результаты качественного и количественного состава неомыляемого _остатка масла семян сладкого перца, (%)_

Экстрагент Гексан Хлороформ :метанол

Образец 1 2 3 1 2 3

Сквален 1,3 0,6 0,9 1,0 1,3 1,7

Холестерин 1,7 2,3 1,9 1,7 0,9 ел.

Кампестерин 8,8 6,0 8,0 5,2 11,3 8,2

4-метилзимостенол 1,4 2,1 0,5 2,2 1,2 1,9

Стигмастерин 4,1 2,7 5,0 4,5 6,3 6,5

Ланостенол 6,4 7,5 8,2 7,2 8,2 6,8

Р-Ситостерин 35,6 28,8 24,4 23,8 40,3 38,3

Изофукостерин •9,7 14,3 13,9 10,1 8,3 10,5

Циклоартанол 4,6 4,8 5,8 7,8 2,6 4,4

Циклоартенол 24,0 25,2 26,3 31,3 18,2 20,1

График 3

Хроматограмма неомыляемого остатка масла перца

Abundance

Tlrrie—>

Полученные данные свидетельствуют о наличии в составе неомыляемого остатка масла семян перца однолетнего разнообразных полициклических спиртов с высокой репарационной, антиульцерогенной, противовоспалительной, антихолестеринемической, антилипидемической активностью.

Количественный состав неомыляемой фракции липидного комплекса характеризуется низким содержанием холестерина. Его содержание в использованном сырье не превышает 0,02%, что не может существенно влиять на диетические качества исследуемого масла. В то же время высокое (0,8-1,2% на вес экстракта) содержание р-ситостерияа и циклоартановых тритерпеноидов, обладающих широким спектром физиологической активности, включающим ранозаживляющую, провитаминную, антиульцерогенную, антиоксидантную и другие, ставит объект нашего исследования в один ряд с общепризнанными маслами медицинского назначения: облепиховым, маслом из зародышей пшеницы, маслом из шелухи овса.

Р-ситостерин относится к фитоэстрогенам. Практически не влияя на уровень протеинов, уже небольшие его дозы (5-10мкг) увеличивают в плазме уровень альбумина, а-глобулина и фибриногенного комплекса. Также Р-ситостерину присущи противовоспалительные свойства, превосходящие действие аспирина.

Таким образом, масло семян сладкого перца, которое может производиться в значительных количествах на основе крупнотоннажного растительного сырья, обладает высоким потенциалом при использовании как в качестве пищевого продукта или в виде пищевых добавок, заменяющих зарубежные аналоги сходного химического состава, так и в качестве основы медицинских препаратов широкого спектра действия.

С целью унификации метода стандартизации липидного комплекса плодов перца однолетнего по содержанию действующих веществ, проведено количественное определение суммы каротиноидов 43,57±1,19 мг % и суммы токоферолов 161,35±7,25 мг % — методом спектрофотометрии по общепринятым методикам. Методики основаны на законе Бугера-Ламберта-Бэра, концентрация определяемого вещества вычисляется исходя из коэффициента экстинкции чистого стандарта или табличных данных.

Тем не менее, при работе со сложными смесями природных веществ, многие из которых могут вносить вклад в оптическое поглощение на рабочей длине волны, необходима верификация альтернативным методом. В нашем случае, существенный вклад в оптическое поглощение раствора на длине волны 300 нм, могут вносить флавоноиды, которыми богато исследуемое сырье. Поэтому, для масла семян перца однолетнего сортов Крепыш, Богатырь и Белоснежка было проведено определение содержания токоферолов с помощью ВЭЖ-хроматографии на жидкостном хроматографе «Милихром» с УФ-детекцией, колонка 6,3 смх 0,2 см, заполненная сорбентом ИсЬгоаэгЬ ИР-18, элюент — метанол, по модифицированной методике. В качестве стандарта

использованы образцы токоферолов, любезно предоставленные АО «Алтайвитамины».

Содержание токоферолов в исследуемых образцах в пересчете на вес гексанового экстракта 20, 22 и 17 мг %. В качестве основного компонента фракции токоферолов идентифицирован токоферол.

С учетом вышеизложенного, полученные данные позволяют оценить масло семян перца как полувысыхающее, с высоким содержанием эссенциальной линолевой кислоты и умеренным содержанием каротиноидов и суммарных токоферолов. Высокий процент неомыляемого остатка может поставить масло перца в один ряд с облепиховым и маслом из зародышей пшеницы по ранозаживляющим и противовоспалительным свойствам.

ВЫВОДЫ

1. Проведено фармакогностическое изучение и разработаны характеристики подлинности, показатели доброкачественности для нового перспективного источника липидных комплексов - плодов перца однолетнего.

2. Проведена опытно-промышленная и лабораторная наработка образцов масла плодов перца однолетнего, которая показала, что максимальный выход липидной фракции за счет более полной экстракции веществ пограничной полярности происходит при введении в экстракционную систему полярного растворителя - метанола. На основании проведенных исследований установлено, что плоды перца однолетнего могут быть отнесены к масличному сырью (содержание липидного комплекса не менее 21 %).

3. Проведено детальное исследование качественного и количественного состава липидных компонентов масла семян перца однолетнего методом хроматомасс-спектрометрии и капиллярной хроматографии, включающее сравнительный анализ жирно-кислотного состава при различных способах пробоподготовки: идентифицировано 26 алифатических кислот и 10 нейтральных тритерпеноидов (некоторые соединения обнаружены в изученном сырье впервые). Специфичность состава и соотношение кислот позволяет рекомендовать определение жирнокислотного состава в качестве показателя подлинности на этапах: лекарственное растительное сырье -липидный комплекс - лекарственное средство.

4. Верификация методики количественного определения токоферолов в липидных комплексах методом ВЭЖХ с УФ - детекцией.

5. Изучены физико-химические характеристики и разработаны показатели качества липидного комплекса в соответствии с требованиями общей статьи ГФ X «Масла жирные».

6. Изучена динамика изменения жирно-кислотного состава липидного комплекса в процессе хранения.

7. На основании химического состава и клинических испытаний установлено, что плоды перца однолетнего, содержащие ряд биологически активных веществ, являются перспективным сырьем для получения препаратов, обладающих высокими репарационными и противовоспалительными свойствами.

Основное содержание диссертационной работы опубликовано в печатных работах:

1. Фармакогностическое изучение плодов и семян перца однолетнего // Тезисы работ участников открытого российского конкурса на лучшую научную работу студентов 2000 года по разделу «Медицинские науки». - М.: Издательский дом «Русский врач». - 2001. - С. 60-61.

2. Фитохимическое исследование плода перца однолетнего // Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины. Материалы II Российской конференция молодых ученых России с международным участием 24-28 апреля 2001 г. - М.: «ГЭОТАР - МЕД». - 2001. - Т. 2. - С. 263.

3. Соавторы О.В. Нестерова, В.Ю. Решетняк. Изучение плодов перца однолетнего, как перспективного источника липидного комплекса // УШ Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тез. докл. - М. -2001.-С. 565.

4. Соавторы О.В. Нестерова, В.Ю. Решетняк. Физикохимические показатели липидного комплекса плодов перца однолетнего и изучение его жирно-кислотного состава // VIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тез. докл. - М. - 2001. - С. 691-692.

5. Соавторы О.В. Нестерова, В.Ю. Решетняк. Фармакогностическое изучение плодов перца однолетнего // Kimyo va farmatsiya. - Тошкент: Узбекистан Республикаси ФА «ФАН» Нашриети. - 2002. - №3. - С. 32-37.

6. Соавторы Т.П. Кукина. Семена сладкого перца как потенциальный источник растительного масла. Международная научная конференция «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» 8-11 октября 2003 Алматы, Казахстан. Тез. докл. - Алматы. - 2003. - С. 106.

7. Variation of Fatty Acids Composition in Storage Process/ Olga A. Zavialova, Tatyana P. Kukina, Leonid M. Pokrovsky. «ICNPAS-2004». Novosibirsk (Russia) September 12-17,2004. - 2004. - P. 124.

8. Совместно B.A. Попков, В.Ю. Решетняк, О.В. Нестерова, А.А. Абрамов, Т.П. Кукина, Л.М. Покровский. Физико-химические показатели масла из семян сладкого перца // Вести. Моск. ун-та. - Сер. 2. - Химия. -2004. -Т.45. -№6. -С. 413-416.

9. Совместно В.А. Попков, В.Ю. Решетняк, О.В. Нестерова, А.А. Абрамов, Т.П. Кукина, Л.М. Покровский. Хроматографическое определение состава неомыляемого остатка масла семян сладкого перца // Вести. Моск. унта. - Сер. 2. - Химия. - 2005. - Т. 46. - № 4. - С.

Завьялова Ольга Анатольевна (Россия)

Фармакогностическое изучение плодов перца однолетнего и разработка методов стандартизации липидного комплекса на его основе.

Проведено фармакогностическое изучение и разработаны

характеристики подлинности, показатели доброкачественности для нового перспективного источника липидных комплексов - плодов перца однолетнего.

Проведено детальное исследование качественного и количественного состава липидных компонентов масла семян перца однолетнего методом хроматомасс-спектрометрии и капиллярной хроматографии, включающее сравнительный анализ жирно-кислотного состава при различных способах пробоподготовки: идентифицировано 26 алифатических кислот и 10 нейтральных тритерпеноидов. Изучены физико-химические характеристики и разработаны показатели качества липидного комплекса в соответствии с требованиями общей статьи ГФ X «Масла жирные».Изучена динамика изменения жирнокислотного состава липидного комплекса в процессе хранения.

На основании химического состава и клинических испытаний установлено, что плоды перца однолетнего являются перспективным сырьем для получения препаратов, обладающих высокими репарационными и противовоспалительными свойствами.

Olga A. Zavialova (Russia)

Pharmacognostic study of capsicum solanberry and elaboration of standardization methods for capsicum-based lipid complex.

Pharmacognostic investigation was carried out as well as authenticity characteristics and factors of merit were denned for a new promising source of lipid complex - i.e. capsicum solanberry.

Capsicum seed oil lipid components were analyzed for qualitative and quantitative composition, using the method of chromatography-mass spectrometry and capillary chromatography, alongside with a comparative analysis of fatty acid composition, variable sample preparation procedures having been employed. 26 aliphatic acids and 10 neutral triterpenoids were identified (some of the compounds were discovered in the samples under study for the first time ever).

The physical-chemical characteristics have been denned and lipid complex factors of merit established in compliance with the requirements of the general clause GF H "Fatty oils".

The time history of lipid complex fatty acid composition during storage has also been identified.

Based on the chemical composition and clinical trials it was established that capsicum solanberries present a promising source of raw materials for obtaining medicinal preparations, featuring enhanced reparation and anti-inflammatory properties.

ММЛ им. И. М. Сечеиови

Иидмиспмо в иечшь

2005 г.

|нрпж 100 экземпляров

wsi^crrtf ; ¿дачгевеягш (

Ч ^ У

915

09Ш2005-

Актуальность работы

Растительные масла — богатый источник незаменимых жирных кислот, а также витаминов, фосфолипидов и стеринов. Они способствуют регуляции обмена веществ в организме человека и обладают антиоксидантными, провитаминными, антихолестеринемическими, противовоспалительными, ранозаживляющими и другими ценными свойствами.

В фармацевтической промышленности растительные масла служат растворителями для липофильных лекарственных средств, а также экстрагентами для извлечения биологически активных веществ из растительного сырья. Некоторые из них, в силу особенностей своего химического состава, представляют собой самостоятельные терапевтические средства широкого спектра действия.

Основной источник растительных масел — масличные культуры. Но растительные масла также содержатся и в косточках плодовых деревьев, семенах винограда, арбуза, томатов, являющихся отходом пищевых производств по переработке сельскохозяйственного сырья.

Для снижения себестоимости фитопрепаратов, в последние годы все большую актуальность приобретают безотходные технологии в производстве - использование растительных отходов пищевой промышленности в качестве источника биологически активных веществ.

С этой точки зрения, отходы плодопереработки перца однолетнего (Capsicum annuum), в настоящее время подлежащие полной утилизации, являются перспективным сырьем для получения растительного масла, которое в зависимости от химического состава может представлять интерес как продукт фармацевтического, парфюмерно-косметического, пищевого или технического назначения.

Плоды и семена перца однолетнего сладких сортов изучены с химической и фармакологической точки зрения недостаточно, сведения об их качественном и количественном составе, а также о биологической активности, фрагментарны. Поэтому фитохимическая характеристика данного вида растительного сырья в сочетании с тщательным изучением фармакологических возможностей получаемого продукта, даст возможность рассматривать его в качестве перспективного источника лекарственных препаратов и позволит расширить ассортимент отечественных лекарственных средств растительного происхождения, полученных на основе липидных комплексов.

Цель работы и задачи исследования

Целью настоящей работы является фармакогностическое изучение плодов перца однолетнего и стандартизация липидного комплекса на его основе. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести фармакогностический анализ сырья - плодов перца однолетнего и определить его диагностические признаки;

- определить содержание влаги, золы общей и нерастворимой в соляной кислоте, органической и минеральной примесей в сырье и на их основании нормировать числовые показатели данного сырья;

- разработать оптимальные условия выделения липидной фракции из исследуемого сырья различными методами;

- изучить химический состав масла, полученного из плодов перца однолетнего;

- определить в липидном комплексе содержание БАВ для оценки перспективности использования отходов плодопереработки перца однолетнего в качестве сырья для получения фармакологических препаратов;

- на основании полученных данных обосновать необходимые показатели качества и методы стандартизации липидного комплекса плодов и семян перца однолетнего.

Научная новизна работы

Разработаны критерии стандартизации сырья на подлинность, включающие макро- и микроскопическое исследование, дериватографические характеристики.

Изучен состав образцов масла плодов и семян перца однолетнего, полученных холодным прессованием и экстракцией различными растворителями.

Проведена гравиметрическая характеристика масличности сырья при различных методах экстракции и разной степени измельчения. Полученные образцы масла охарактеризованы по требованиям фармакопейной статьи № 472 ГФ X «Масла жирные» и ГОСТов на пищевые масла. При этом получены количественные данные содержания 26 алифатических кислот, часть из которых проявляет F-витаминную активность, 10 нейтральных компонентов неомыляемого остатка, витаминов группы А и Е, а также элементов, составляющих основу минерального состава изучаемого липидного комплекса.

Выявлено существенно более высокое по сравнению с другими растительными маслами содержание стериновых и тритерпеноидных компонентов, известных своими репарационными, антиульцерогенными, антихолестеринемическими и провитаминными свойствами.

Показано, что изученное сырье перспективно для получения фармакологических препаратов.

На основании полученных данных были обоснованы показатели качества и методы стандартизации сырья плоды перца однолетнего и липидного комплекса на его основе.

Практическая значимость работы

Получено заключение о проведении апробации масла плодов перца однолетнего, как средства для лечения заболеваний слизистой оболочки полости рта и воспалительных заболеваний тканей пародонта, на базе МСЧ — 4 Федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем при МЗ РФ.

Получено положительное решение по заявке №2004122438 от 8 февраля 2005 года на патент на изобретение «Средство для лечения заболеваний слизистой оболочки полости рта и воспалительных заболеваний тканей пародонта».

На основании проведенных исследований апробированы и внедрены:

- методика хроматографического определения токоферолов в липидных комплексах (испытательная лаборатория ГУЗ «ЦС и KKJ1 ДЗ г. Москвы»);

- определения показателей подлинности сырья плодов перца однолетнего в процессе контроля качества (ЗАО АПФ «Фито-Эм» г. Москва);

- результаты диссертационного исследования (лекционный курс и практические занятия со студентами 5 курса на кафедре фармацевтической и токсилогической химии РУДН по теме «Анализ лекарственных средств липидной природы»).

Высокая биологическая активность масла плодов и семян перца однолетнего в сочетании с уникальностью состава по отдельным физиологически активным компонентам дает возможность выпуска на его основе фармакологических средств, эффективных для лечения ревматических явлений и пародонтоза, а также косметических препаратов и пищевых добавок, обладающих противовоспалительным и ранозаживляющим действием.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Открытом российском конкурсе на лучшую научную работу студентов 2000 года по разделу «Медицинские науки» (Москва, 2001), II Российской конференции молодых ученых России с международным участием (Москва, 2001), VIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001), Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, 2003), на межкафедральной научной конференции ММА им. И.М. Сеченова, ICNPAS-2004 (Novosibirsk, 2004).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом научного совета по фармации и фармакологии

Диссертационная работа выполнена в рамках отраслевой научно-исследовательской программы ММА им. И.М. Сеченова «Разработка и совершенствование технологии подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием» и в соответствии с комплексной темой кафедры общей химии ММА им. И.М. Сеченова: «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (номер государственной регистрации 01.200.118796).

На защиту выносятся

Результаты стандартизации плодов перца однолетнего и липидного комплекса плодов перца однолетнего, полученные при различных методах экстракции и разной степени измельчения сырья в условиях лаборатории и опытно-промышленного производства, а также данные по содержанию биологически активных соединений исследуемого объекта.

выводы

1. Проведено фармакогностнческое изучение и разработаны характеристики подлинности, показатели доброкачественности для нового перспективного источника липидных комплексов - плодов перца однолетнего.

2. Проведена опытно-промышленная и лабораторная наработка образцов масла плодов перца однолетнего, которая показала, что максимальный выход липидной фракции за счет более полной экстракции веществ пограничной полярности происходит при введении в экстракционную систему полярного растворителя — метанола. На основании проведенных исследований установлено, что плоды перца однолетнего могут быть отнесены к масличному сырью (содержание липидного комплекса не менее 21 %).

3. Проведено детальное исследование качественного и количественного состава липидных компонентов масла семян перца однолетнего методом хроматомасс-спектрометрии и капиллярной хроматографии, включающее сравнительный анализ жирно-кислотного состава при различных способах пробоподготовки: идентифицировано 26 алифатических кислот и 10 нейтральных тритерпеноидов (некоторые соединения обнаружены в изученном сырье впервые). Специфичность состава и соотношение кислот позволяет рекомендовать определение жирно-кислотного состава в качестве показателя подлинности на этапах: лекарственное растительное сырье - липидный комплекс -лекарственное средство.

4. Верификация методики количественного определения токоферолов в липидных комплексах методом ВЭЖХ с УФ - детекцией.

5. Изучены физико-химические характеристики и разработаны показатели качества липидного комплекса в соответствии с требованиями общей статьи ГФ X «Масла жирные».

6. Изучена динамика изменения жирнокислотного состава липидного комплекса в процессе хранения.

7. На основании химического состава и клинических испытаний установлено, что плоды перца однолетнего, содержащие ряд биологически активных веществ, являются перспективным сырьем для получения препаратов, обладающих высокими репарационными и противовоспалительными свойствами.