Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение и стандартизация сборов, перспективных для лечения микробных заболеваний органов мочевыводящей системы

На правах рукописи

СИВОВА ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СБОРОВ, ПЕРСПЕКТИВНЫХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МИКРОБНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ МОЧЕВЫВОДЯЩЕЙ СИСТЕМЫ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ООЗ1В5883

Пермь - 2008

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Федосеева Л.М. Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Петриченко В.М. доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова В.Н.

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 6 мая 2008 г. в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614670, г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Автореферат разослан_2008 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук, доцент

Метелева Б.В.

Введение

Актуальность проблемы. Проблема создания эффективных фитопрепаратов из лекарственного растительного сырья в настоящее время является актуальной Это связано с тем, что лекарственные средства на основе природных биологически активных соединений обладают преимуществами по сравнению с их синтетическими аналогами, так как широта терапевтического действия сочетается с минимальными побочными эффектами Особое значение отводится сборам, так как они содержат комплекс БАС, отвечающий за поливалентное действие на различные системы организма

Перспективным является использование сборов из лекарственного растительного сырья Алтайского края и республики Алтай - экологически благополучных районов Российской Федерации Богатый опыт народной медицины и многочисленные научные исследования дают возможность составлять композиции сборов с направленным фармакологическим действием, например, диуретической и антимикробной активностью в сочетании с антиоксидантным эффектом, которые связаны с содержанием полифенольного комплекса

В Алтайском государственном медицинском университете на кафедре фармацевтической химии с курсами органической и токсикологической химии разработаны и подтверждены патентом (№2249460) составы трех сборов с использованием лекарственного растительного сырья, собранного на территории Алтайского края и республики Алтай Композиции составлены с учетом проявления мочегонной, антимикробной, антиоксидантной активности, что позволит использовать данные сборы для лечения микробных заболеваний органов мочевыводящей системы

Необходимо исследовать влияние фармакотехнологических факторов на сохранение комплекса БАС при совместном содержании в сборах и проявлении ожидаемого фармакологического эффекта

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось фармакогностическое изучение и стандартизация сборов, установление специфической активности

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи

1. Изучить фотохимический состав сборов Провести разделение и идентификацию БАС, установить их количественное содержание

2 Определить технологические параметры сборов и обосновать технологию изготовления водных извлечений

3 Определить острую токсичность и специфическую активность сборов Провести сравнительный анализ

4 Провести морфолого-анатомическое и гистохимическое изучение сборов, выявить диагностические признаки

5 Установить показатели подлинности и доброкачественности сборов

6 Разработать проекты ФС на сборы

Научная новизна. Проведено комплексное фармакогностическое, технологическое и фармакологическое изучение сборов.

Изучен химический состав сборов Установлено, что комплекс БАС сборов включает дубильные вещества, флавоноиды, фенолокислоты, фенологликозиды, флороглюциды, сапонины, водорастворимые витамины

Методом ТСХ, ВЭЖХ, СФМ в сборах идентифицированы флавоноиды рутин, ликвиритин, гиперозид, ликуразид, кверцетин, апигенин Фенологликозид - арбутин Фенолокислоты - в сборе №1 и №2- галловая, коричная, хлорогеновая и ее производные, сборе №3 галловая, хлорогеновая и ее производные.

Изучены дубильные вещества, во всех сборах идентифицированы танин и кислота галловая

Показана целесообразность стандартизации сборов по содержанию дубильных веществ

Установлено количественное содержание в сборах дубильных веществ, флавоноидов, кислоты аскорбиновой.

Проведена сравнительная оценка качественного и количественного содержания БАС в сборах

Проведены исследования по определению острой токсичности, установлена мочегонная, антимикробная и антиоксидантная активность сборов

Установлены технологические параметры сборов, показана целесообразность изготовления отваров

Установлены показатели подлинности и доброкачественности сборов На основании полученных данных разработаны проекты ФС сборов

Практическая значимость В результате проведенных исследований установлена возможность расширения ассортимента лекарственных препаратов на основе растительного сырья за счет использования разработанных сборов и применения их в качестве мочегонного, антимикробного, антиоксидантного средства для лечения микробных заболеваний органов мочевыводящей системы Разработаны проекты ФС на сборы

Степень внедрения Теоретические положения и результаты экспериментальных исследований используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе кафедры фармацевтической химии с курсами органической и токсикологической химии, кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и кафедры фармацевтической технологии Алтайского государственного медицинского университета Подготовлены к рассмотрению проекты ФС на сборы

Основные положения, выносимые на защиту Результаты фармакогностического, фитохимического, технологического и фармакологического исследования сборов, обладающих мочегонной, антимикробной, антиоксидантной активностью

Апробация полученных результатов Основные материалы диссертации обсуждены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемы фармации» (г Барнаул, 2004, 2005, 2006, 2007), «Молодежь - Барнаулу» (г Барнаул, 2005, 2006, 2007); на III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (г Барнаул, 2007)

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Алтайского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01 200316088)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных " работ, одна го которых в журнале, цитируемом ВАК

Экспериментальные исследования по теме диссертации выполнялись на базе Алтайского государственного медицинского университета, на кафедре фармацевтической химии с курсами органической и токсикологической химии, на кафедре фармакогнозии с курсом ботаники (под рук ст преподавателя Гербер Т В ), на кафедре фармакологии (под рук д б н, проф Лампатова В В ), на кафедре микробиологии и вирусологии (под рук к м н, доц Юровой В А ), а также ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Алтайском крае»

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 155 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, трех глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения Работа иллюстрирована 28 таблицами и 64 рисунками Библиографический указатель включает 170 источников литературы, из них 54 зарубежных

Во введении изложена актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, обозначена новизна и практическая значимость проведенных исследований, описаны положения, выносимые на защиту

Первая глава содержит обзор отечественной и зарубежной литературы проведен анализ номенклатуры разрешенных к использованию сборов с мочегонной активность Приведено описание лекарственного растительного сырья, входящего в состав сборов Описаны методы качественного и количественного определения биологически активных соединений, содержащихся в сборах, данные по их фармакологической активности Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследований В третьей главе приведены результаты фотохимических исследований флавоноидов, фенолокислот, фенологликозидов, дубильных веществ, кислоты аскорбиновой, методики стандартизации сборов по содержанию БАС, внесенные в проекты ФС на сборы Изложены результаты определения технологических параметров и технологии водных извлечений сборов

Четвертая глава содержит результаты изучения острой токсичности и специфической активности сборов (мочегонной, антимикробной, антиоксидантной)

В пятой главе приведены результаты морфологического, микроскопического, гистохимического анализа, установлены показатели подлинности и доброкачественности сборов, использованные для разработки НД на сборы

В приложении представлены данные хроматографических, спектрофотометрических исследований БАС, микрофотографии, результаты изучения сроков годности сборов, протоколы лабораторных исследований по определению микробиологической чистоты, пестицидов, радионуклидов, особотоксичных элементов, цроекты ФС на сборы, основные документы, подтверждающие внедрение результатов диссертационной работы

Объекты и методы исследования

В качестве объектов исследования использовали три сбора, разработанные на кафедре фармацевтической химии с курсами токсикологической и органической химии АГМУ

s

Лекарственное сырье собрано в районах Алтайского края (Хабарском, Первомайском, Троицком, Смоленском), в окрестностях города Барнаула — НИИ садоводстве имени М.А. Лисавенко, Алтайском краевом детско-юношеском экологическом центре, ботаническом саду Алтайского государственного университета) и республике Алтай (Шаболинском, Чемальском районах) в 2004-2007 годах в соответствии с правилами сбора и сушки лекарственного растительного сырья.

В состав сборов входят - сбор №1 цветки ромашки аптечной, цветки календулы лекарственной, листья бадана толстолистного, листья мелиссы лимонной, соплодия хмеля дикорастущего, плоды шиповника майского, сбор №2 цветки ромашки аптечной, цветки календулы лекарственной, листья бадана толстолистного, плоды шиповника майского, плоды и семена лимонника китайского, плоды рябины обыкновенной, сбор №3' цветки ромашки аптечной, цветки лабазника вязолистаого, листья бадана толстолистного, трава володушки многожильчатой, соплодия хмеля дикорастущего, плоды укропа огородного, плоды смородины черной, корневища с корнями валерианы лекарственной

Микроскопический и гистохимический анализ сборов проводили с помощью лабораторного микроскопа «Биолам PI» с увеличением объективов 9, 40, 60, 90, в качестве фотонасадки использовали зафиксированную фотокамеру Som Т-33

Идентификацию основных групп биологически активных соединений осуществляли химическими реакциями, хроматографическими (БХ, ТСХ, ВЭЖХ), оптическими методами (УФ-спектрофотометрия) Количественное определение основных групп биологически активных соединений проводили титриметрическими и физико-химическими методами

Острую токсичность определяли на белых мышах обоего пола путем однократного перорального введения сборов в дозах 2500 мг/кг, 5000 мг/кг, 10000 мг/кг в виде отваров

Мочегонную активность сборов изучали на белых лабораторных 1фысах путем перорального введения отваров сборов в дозе 50мг/кг в течение 14 дней Оценивали основные показатели функции почек объем суточного диуреза, экскрецию с мочой натрия, калия, креатинина

Для изучения антимикробной активности использовали метод культивирования микроорганизмов на питательной среде, содержащей отвары сборов (Навашин С М, Фомина И П)

Оксиданшый и аншоксидантный статус сборов оценивали по общей прооксидантной активности (ОПА) и общей антиоксидантной активности (ОАА)

Проведена статистическая обработка полученных результатов проверка выборок на однородность, расчет среднего значения выборки, стандартного отклонения среднего, граничного значения доверительного интервала среднего, относительной ошибки среднего результата.

Фитохимическое изучение сборов

Для изучения химического состава сборов проводили качественные реакции. В результате исследования установили наличие в сборах флавоноидов, фенологликозидов, флороглюцидов, дубильных веществ, сапонинов, кислоты аскорбиновой

Флзвоноиды

Изучение состава флавоноидных соединений сборов проводили химическими и физико-химическими методами. Для выделения флавоноидов использовали экстракцию спиртом этиловым 70% с последующей очисткой гексаном Идентификацию флавоноидов проводили методом бумажной и тонкослойной хроматографии Для детектирования веществ использовали спиртовый раствор алюминия хлорида 1% Подбирали условия хроматографирования и установили лучшую разделяющую способность системы этилацетат - кислота муравьиная - вода (10.2.3) на пластинках «вогЪШ»

Дополнительную информацию о структуре фенольных соединений получали с использованием УФ-спектрофотометрии. Для чего проводили хроматографирование в оптимальных условиях, пятна элюировали и снимали УФ-спектр. В результате проведения хромато-спектрофотометрического исследования идентифицированы следующие флавоноиды: сбор №1 -флавон, триоксифлавон, рутин, ликвиритин, гиперозид, кверцетин; сбор №2 -рутин, гиперозид, кверцетин; сбор №3 - рутин, ликвиритин, гиперозид, кверцетин, кемпферол.

Далее проводили ВЭЖХ спиртовых извлечений сборов до и после проведения кислотного гидролиза (рис. 1-2). Критериями оценки служили времена удерживания и спектры абсорбции. Установлено наличие 15 соединений в спиртовом извлечении сбора №1, из которых идентифицированы флавоноиды: рутин, ликвиритин, гиперозид, ликуразид, кверцетин. И фенолокислоты: галловая, хлорогеновая и два ее производных, коричная.

и

В спиртовом извлечении сбора №2 - 19 соединений. Идентифицированы флавоноиды: рутин, ликвиритин, гиперозид, ликуразид, кверцетин. И кислоты: галловая, хлорогеновая и ее производные, коричная. В извлечении сбора №3 - 18 соединений; идентифицированы рутин, ликвиритин; гиперозид, ликуразид, кверцетин, апигенин. Кислоты: галловая, хлорогеновая и ее производные.

После проведения кислотного гидролиза пики на хроматограммах не накладываются, достигается четкое разделение агликонов флавоноидов (рис. 2). Во всех сборах идентифицированы: кверцетин, апигенин. Кислота галловая и производное кислоты хлорогеновой с временем удерживания 2,6 и 9,4 минут (рис. 3).

Рис. 2. Хроматограммы спиртовых извлечений сборов после проведения кислотного гидролиза

А Б

Рис. 3. УФ-сиектры кислоты хлорогеновой (Б) и ее производного (А).

Арбутин

Качественный анализ фенологликозидов сборов проводили химическими и хроматографическими (ТСХ) методами. Для исследования использовали водные извлечения сборов. Установили оптимальную систему для разделения фенологликозидов: хлороформ - спирт метиловый (8:2). Для детектирования пятен использовали реактив Паули. Дополнительную информацию о структуре соединений получали с помощью УФ-спектрофотометрии после хроматографического разделения. На основании проведенных исследований в сборах идентифицирован арбутин.

Дубильные вещества

Дубильные вещества извлекали из сборов водой. Исследование проводили химическими и хроматографическими методами. Подобрали оптимальные условия разделения дубильных веществ - система: бутанол -кислота уксусная - вода (4:1:5), пластинки «8огЬй1». Для детектирования использовали раствор железоаммонийных квасцов (ЖАК), пары аммиака. По результатам проведения ТСХ в сборах идентифицированы танин и кислота галловая.

Содержание основных групп БАС в сборах

Проведен количественный анализ некоторых групп биологически активных соединений сборов (таблица 1). Установлено содержание

дубильных веществ: сбор №1 - 7,27±0,21%; сбор №2 - 6,67±0,19%; сбор №3

- 7,45±0,20%; содержание в сборах суммы флавоноидов составило: сбор №1

- 1,30±0,09%; сбор №2 - 1,21±0,09%; сбор №3 - 3,14±0,03%; кислоты аскорбиновой: сбор №1 - 226±5мг%; сбор №2 - 246±4мг%; сбор №3 -207±6мг.

Таблица 1

Количественное содержание основных групп БАС в сборах

Группа БАВ Сбор №1 Сбор №2 Сбор №3

Флавоноиды, % 1,30±0,09 1,21±0,09 3,14±0,03

Дубильные вещества, % 7,27±0,21 6,67±0,19 7,45±0,20

Кислота аскорбиновая, % 0,226±0,005 0,246±0,004 0,207±0,006

Выбор лекарственной формы сборов для экстемпорального изготовления

Для выбора вида водного извлечения проводили определение содержания экстрактивных веществ в настоях и отварах (рис. 4).

30- 5 а й I й îf ¡¡Л.

25 - PF Î2 а 1я Л

20 ■ s настой

15 10 5- У / ш 8 H ! s- ■ отвар, процеженный п/о ■ отвар, процеженный б/о

1 ■ ш

0 л =4' ■ ■ m г

сбор №1 сбор №2 сбор №3

Рис 4. Содержание экстрактивных веществ в настоях и отварах.

Установили, что при изготовлении настоев и отваров сбора №1 извлекается соответственно 20,19%; 22,53% и 25,61% экстрактивных веществ; из сбора №2 -20,13%; 22,62% и 24,96%; из сбора №3 - 20,49%; 22,79% и 25,87%.

В результате полученных данных очевидно, что рациональным видом извлечения сборов является отвар.

Параллельно проводили определение количественного содержания основных групп БАС - дубильных веществ, флавоноидов, кислоты аскорбиновой в отварах, процеженных до и после охлаждения (рис. 5).

Ш отвар. процеженный без охлаждения ■ отвар, процеженный после охлаждения

□ отвар, процеженный без охлаждения в отвар, процеженный после охлаждения

сборка 1

сбор №2 сбор №3

сбор№1 сбор №2 сбор №3

О отвар, процеженный без охлаждения ■ отвар, процеженный после охлаждения

Рис 5. Содержание биологически активных веществ в отварах.

При охлаждении сборов происходит потеря дубильных веществ. Так, в сборе №1 при охлаждении отвара, обнаруживается 4,89±0,09% дубильных веществ, в отваре, процеженном без охлаждения - 5,82±0,19%; из сбора №2 -после охлаждения - 4,55±0,15%, без охлаждения -5,44±0,13%; сборе №3 -5,05±0,11% и 6,25±0,17% соответственно.

Кроме того, при охлаждении отваров происходила потеря витамина С. В отваре сбора №1 без охлаждения его содержание составило 219,1±9,2мг%, после охлаждения 210,3±б,4мг%; отварах сбора №2 - 251,3±6,1мг% и 226,2±8,1мг%; отварах сбора №3 - 203,1±7,2мг% и 188,2±8,1мг%

о

сбор№1 сбор №2 сбор №3

соответственно На содержание флавоноидов в отварах сборов технология изготовления влияет незначительно Результаты не имели достоверных отличий

Исходя из чего, можно сделать вывод о том, что оптимальным видом извлечения сборов является отвар, процеженный без охлаждения

Изучение острой токсичности и специфической активности сборов

Изучение острой токсичности (кафедра фармакологии ГОУ ВПО АГМУ Росздрава) При пероральном введении отвары сборов не вызывали гибели животных в дозе 10 ООО мг/кг, что свидетельствует о практической безвредности исследуемых сборов

Дня изучения мочегонной активности сборов (кафедра фармакологии ГОУ ВПО АГМУ Росздрава) крысам на протяжении 14 дней вводили внутрижелудочно отвары сборов в дозе 50 мг/кг Определяли основные показатели функции почек В результате проведенных исследований установили, что сборы обладают диуретическим действием Большая активность выявлена у сбора №3. При его введении диурез увеличивался в 2,3 раза При введении отвара сбора №1 - в 1,7 раз; сбора №2 - в 1,5 Предположили, что в развитии диуретического действия участвуют два механизма увеличение клубочковой фильтрации (о чем свидетельствует повышение уровня креатинина, выделяемого с мочой), а также снижение реабсорбции в канальцах, на что указывает повышение экскреции ионов натрия При этом существенного увеличения экскреции с мочой калия не происходило - результаты определения не имели достоверных отличий на протяжении времени введения и после отмены сборов

Изучение антимикробной активности (кафедра микробиологии ГОУ ВПО АГМУ Росздрава) проводили методом культивирования микробной культуры на питательной среде, содержащей отвары сборов В работе использованы 29 штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от больных с гнойно-воспалительными,

стоматологическими, гинекологическими, урологическими заболеваниями. Микроорганизмы относились к семействам: Enterobacteriaceae - Escherichia Coli - 6 штаммов, Pseudomonadaceae - Pseudomonas aeruginosa - 7 штаммов, Micrococcaceae - Staphylococcus epidermidis - 3 штамма, Staphylococcus aureus - 6 штаммов, грибы рода Candida - 7 штаммов. В результате исследований установлено, что сборы оказывают выраженное антибактериальное действие на эпидермальный стафилококк (рис. 6), и золотистый стафилококк (рис. 7).

Рис. 6. Антимикробная активность сборов в отношении Staphylococcus epidermidis.

Рис. 7. Антимикробная активность сборов в отношении Staphylococcus aureus.

Сбор №3 кроме того, - проявил антигрибковую активностью в отношении грибов рода кандида (рис. 8). Не выявлено антибактериального действия на грамотрицательные микроорганизмы (Е. coli, Ps. Aeruginosa).

Рис. 8. Антимикробная активность сборов в отношении грибов рода Candida.

Антиоксидантную активность определяли методом in vitro (кафедра фармакологии ГОУ ВПО АГМУ Росздрава). Устанавливали показатели общей антиоксидантной (ОАА) и прооксидантной активности (OIIA) (таблица 2).

Таблица 2

Показатели антиоксидантной и прооксидантной активности сборов

в опытах in vitro

Сбор №1 Сбор №2 Сбор №3

ОАА, % ОПА, % ОАА, % ОПА, % ОАА, % ОПА, %

73,9±0,85 14,2±1,20 71,8±1,25 21,1±1,55 б8,7±1,41 27,9± 1,68

В результате исследования установили, что отвары сборов проявляют выраженную антиоксидантную активность in vitro. Так, показатель общей антиоксидантной активности отвара сбора №1 составил 73,9±0,85%; сбора №2 - 71,8±1,25%; сбора №3 - 68,7±1,41%. Обладают незначительной способностью стимулировать прооксидантную активность. Большее значение

показателя прооксидантной активности выявлено у отвара сбора №3 -27,9±1,68%, у отвара сбора №2 - 21,1±1,55%, и в меньшей степени стимулировал процессы перекисного окисления отвар сбора №1, показатель составил 14,2±1,20%.

Разработка нормативной документации на сборы

С целью разработки нормативной документации на сборы устанавливали показатели подлинности и доброкачественности

Внешние признаки. Сбор №Г смесь цельных или измельченных трав, листьев, плодов, цветков зеленого цвета с бурыми, красными и оранжевыми вкраплениями, состоящая из желтых трубчатых, белых язычковых цветков и кусочков обертки цветоложа зеленого цвета (цветки ромашки), желтых трубчатых и оранжево-желтых язычковых цветков (цветки календулы), кусочков листьев темно-бурого цвета (листья бадана), кусочков стеблей, листьев серовато-зеленого цвета (трава мелиссы); желтовато-зеленых, буровото-желтых кусочков соплодий (шишки хмеля); кусочков околоплодника оранжево-красного, буровато-красного и цельных орешков желтоватого цвета (плоды шиповника) Запах ароматный, вкус пряный приятный, кисловатый

Сбор №2 смесь цельных или измельченных цветков, листьев, трав, плодов желто-зеленого цвета с оранжевыми и темно-коричневыми вкраплениями, состоящая из желтых трубчатых, белых язычковых цветков и кусочков обертки цветоложа зеленого цвета (цветки ромашки); желтых трубчатых и оранжево-желтых язычковых цветков (цветки календулы), оранжево-красных кусочков плодов с серповидно-изогнутыми, гладкими красновато-бурыми семенами (плоды рябины), кусочков листьев темно-бурого цвета (листья бадана); желтовато-бурых кусочков семян с красными вкраплениями мякоти (плоды лимонника), кусочков околоплодника буровато-красного и цельных орешков желтоватого цвета (плоды шиповника) Запах ароматный, вкус кисловатый

Сбор №3 смесь цельных или измельченных корней и корневищ, трав, листьев, плодов зеленого и черного цвета с коричнево-бурыми вкраплениями, состоящая из желтых трубчатых, белых безъязычковых цветков и кусочков обвертки цветоложа зеленого цвета (цветки ромашки), цельных желтовато-белых цветков и отдельных их частей (цветков лабазника); кусочков листьев, стеблей, веточек зонтика зеленого цвета, лепестков желтого цвета (трава володушки), кусочков листьев темно-бурого цвета (листья бадана), цельных плоских плодов зеленовато-бурого цвета с желтовато-бурой каймой (плоды укропа), кусочков корней и корневищ светло-коричневого цвета (корневища с корнями валерианы), желтовато-зеленых, буровато-желтых соплодий (шишки хмеля), кусочков плодов черного цвета с мелкими продолговатыми семенами (плоды смородины) Запах специфический, ароматный; вкус горьковато-кислый

Микроскопические диагностические признаки.

Сбор №1 фрагменты эпидермиса язычковых и цельных трубчатых цветков с железками из 6-8 выделительных клеток, расположенных двумя рядами в 3-4 яруса с желтоватым содержимым (эфирное масло) - цветки ромашки аптечной,

- обрывки эпидермиса язычковых цветков, состоящего из удлиненных клеток с округлыми хлоропластами оранжевого цвета; цельные трубчатые цветки с более вытянутыми клетками - цветки календулы лекарственной,

- обрывки эпидермиса листа с крупными многоугольными прямыми четковидноутолщенными клетками Устьица овальной формы, крупные, многочисленные, окружены 4-5 околоустьичными вытянутыми клетками, образующими круг. Железки 01фуглые, многоклеточные с желтовато-бурым содержимым Выделительных клеток 12-13, расположены радиально Друзы оксалата кальция - листья бадана толстолистного,

- обрывки эпидермиса, состоящего из клеток с извилистыми стенками, устьица с двумя околоустьичными клетками, расположенными

перпендикулярно продольной оси устьица, волоски трех типов простые двух-, пятиклеточные, конусовидные с бородавчатой поверхностью и головчатые с крупной круглой головкой и одноклеточной ножкой, эфиромасличные железки округлой формы с просвечивающейся ножкой и радиально расходящимися 8 выделительными клетками - трава мелиссы лимонной;

- фрагменты эпидермиса чешуек, состоящего из клеток с сильно извилистыми стенками, устьичный аппарат радиального типа с 7-8 околоустьинными клетками. Простые одноклеточные волоски, щитковидные (лупулиновые) железки - соплодия хмеля,

- наружный эпидермис плодов, состоящий из многогранных клеток с неравномерными утолщенными стенками, обрывки паренхимы плода с тонкостенными клетками, содержащими друзы оксалата кальция и красно-оранжевый пигмент (каротиноиды), многочисленные одноклеточные волоски и их обломки - плоды шиповника

Сбор №2 фрагменты эпидермиса язычковых и цельных трубчатых цветков с железками из 6-8 выделительных клеток, расположенных двумя рядами в 3-4 яруса с желтоватым содержимым (эфирное масло) - цветки ромашки аптечной,

- обрывки эпидермиса язычковых цветков, состоящего из удлиненных клеток с округлыми хлоропластами оранжевого цвета, цельные трубчатые цветки с более вытянутыми клетками - цветки календулы лекарственной,

- обрывки эпидермиса листа с крупными многоугольными прямыми четковидноутолщенными клетками Устьица овальной формы, крупные, многочисленные, окружены 4-5 околоустьичными вытянутыми клетками, образующими круг Железки округлые, многоклеточные с желтовато-бурым содержимым Выделительных клеток 12-13, расположены радиально Друзы оксалата кальция - листья бадана толстолистного,

- обрывки наружного эпидермиса плодов окончатого типа, состоящего из четырехугольных разновеликих клеток с сильно утолщенными стенками, обрывки паренхимы плода из продолговатых тонкостенных клеток с оранжево-красным содержимым (каротиноиды), проводящие пучки, мелкие друзы и призматические кристаллы оксалата кальция, каменистые клетки группами и одиночно - плоды рябины обыкновенной,

- обрывки эпидермиса плодов из многоугольных прямостенных клеток, встречаются клетки, заполненные жирным маслом лимонно-желтого цвета и секреторные клетки с маслом, окруженные шестью вытянутыми клетками радиально, обрывки мякоти из клеток округлой или овальной формы, с оранжево-красным содержимым (каротиноиды) - плоды и семена лимонника,

- наружный эпидермис плодов, состоящий из многогранных клеток с неравномерными утолщенными, местами четковидноутолщенными стенками, обрывки паренхимы плода с тонкостенными клетками, содержащими друзы оксалата кальция и красно-оранжевый пигмент (каротиноиды), одноклеточные волоски и их обломки - плоды шиповника

Сбор №3 фрагменты эпидермиса язычковых и цельных трубчатых цветков с железками из 6-8 выделительных клеток, расположенных двумя рядами в 3-4 яруса с желтоватым содержимым (эфирное масло) - цветки ромашки аптечной,

- обрывки эпидермиса листа с крупными многоугольными прямыми четковидноутолщенными клетками Устьица овальной формы, крупные, многочисленные, окружены 4-5 околоустьичными вытянутыми клетками, образующими круг Железки округлые, многоклеточные с желтовато-бурым содержимым Выделительных клеток 12-13, расположены радиально Друзы оксалата кальция - листья бадана толстолистного;

- фрагменты эпидермиса чешуек, состоящего из клеток с сильно извилистыми стенками; устьичный аппарат радиального типа с 7-8 околоустьичными клетками Редкие простые одноклеточные волоски, щитковидные (лупулиновые) железки - соплодия хмеля,

- обрывки эпидермиса листа и желтых лепестков венчика с извилистыми клетками со слабыми четковидными утолщениями, устьица окружены четырьмя клетками; вдоль жилок секреторные ходы с желтым содержимым -трава володушки многожильчатой,

- обрывки эпидермиса с вытянутыми клетками, обрывки гиподермы, состоящей из крупных клеток с каплями эфирного масла, обрывки коры с однородными округлыми клетками, заполненными крахмальными зернами -корневища с корнями валерианы;

обрывки эпидермиса плодов - клетки неправильной формы, многоугольные с четковидными утолщенными клеточными стенками, мякоть плодов, состоящая из удлиненных тонкостенных клеток темно-фиолетового цвета, одревесневшие каменистые клетки - плоды смородины черной,

- эпидермис лепестков с клетками неправильной формы, различного размера, извилистые с четковидными утолщениями клеточных стенок, бугорчатые, волоски двух видов простые одноклеточные и двухклеточные длинные с бородавчатой поверхностью, у основания розетка из 7-9 клеток, и короткие одноклеточные волоски с гладкой поверхностью, без розетки, устьица окружены пятью клетками, друзы оксалата кальция - цветки лабазника

В результате проведенного гистохимического анализа установлена локализация эфирного масла в железках цветков ромашки, травы мелиссы, плодов смородины, соплодий хмеля, клетках гиподермы корневищ с корнями валерианы, жирного масла в эндосперме плодов лимонника, укропа, шиповника, эпидермисе плодов лимонника, крахмала в клетках коры валерианы, млечного сока в млечных ходах листьев володушки, дубильных веществ в мезофилле листа бадана и вдоль жилок в лепестках лабазника; флавоноидов в лепестках лабазника и мезофилле листа володушки

о

Для определения доброкачественности сборов установлены числовые показатели.

Сбор №1 - дубильных веществ не менее 6%, влажность не более 12%, золы общей не более 11%, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более 3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 6 мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%

Сбор №2 - дубильных веществ не менее 6%, влажность не более 12%, золы общей не более 10%, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более 3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 6 мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%

Сбор №3 - дубильных веществ не менее 7%, влажность не более 12%, золы общей не более 10%, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более 3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 6 мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%.

Определен срок годности сборов - 3 года.

По показателю «Микробиологическая чистота» сборы удовлетворяют требованиям Изменения №3 к ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» Сборы прошли радиологический контроль и соответствуют требованиям СанПиН 2 3 21078-01

На основании полученных результатов разработаны проекты ФС

24

Общие выводы

1 Проведено комплексное изучение сборов Установлено наличие в сборах флавоноидов, фенологликозидов, флороглюцидов, дубильных веществ, сапонинов, водорастворимых витаминов

2 Определен качественный состав фенольных соединений сборов

Сбор №1 флавоноидьг рутин, ликвиритин, гиперозид, ликуразид, кверцетин, апигенин, фенолокислоты галловая, коричная, хлорогеновая и ее производные, фенологликозид - арбутин Дубильные вещества представлены конденсированной и гидролизуемой группами, идентифицирован танин и кислота галловая

Сбор №2 флавоноиды рутин, ликвиритин, гиперозид, ликуразид, кверцетин, апигенин; фенолокислоты галловая, коричная, хлорогеновая и ее производные, фенологликозид - арбутин Из дубильных веществ идентифицирован танин и кислота галловая

Сбор №3 флавоноиды- рутин, ликвиритин, гиперозид, ликуразид, кверцетин, апигенин, фенолокислоты галловая, хлорогеновая и ее производив, фенологликозид - арбутин Из дубильных веществ идентифицирован танин и кислота галловая

3 Количественно определены основные биологически активные соединения сборов флавоноидов (сбор №1 - 1,30±0,09%, сбор №2 -1,21±0,09%; сбор№3-3,14±0,03%), дубильных веществ (сбор №1 - 7,27*0,21%, сбор №2 - б,67±0,19%, сбор №3 - 7,45±0,20%), кислоты аскорбиновой (сбор №1 - 226±5мг%, сбор №2 - 246±4мг%, сбор №3 - 207±6 мг%)

4 Определены коэффициенты водопглощения и коэффициенты общей потери экстрагента- для сбора №1 - 1,78±0,02 и 1,89±0,03; для сбора №21,69*0,01 и 1,81±0,03; для сбора №3 - 1,69±0,03 и 1,86±0,03 соответственно Установлено, что оптимальной лекарственной формой для экстемпорального изготовления является отвар, процеженный без охлаждения

5. Доказано, что сборы не обладают токсичностью, оказывают мочегонное, антимикробное, антиоксидантное действие

6 Установлены морфолого-анатомические признаки сборов и числовые показатели

Сбор №1 - дубильных веществ не менее 6%, влажность не более 12%, золы общей не более 11%, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более 3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 6 мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%

Сбор №2 - дубильных веществ не менее 6%, влажность не более 12%, золы общей не более 10%, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более 3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 6 мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%.

Сбор №3 - дубильных веществ не менее 7%, влажность не более 12%, золы общей не более 10%, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более 3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 6 мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%

7 Срок годности - 3 года

8 Разработаны проекты ФС на сборы.

По теме диссертации опубликованы работы

1. Определение числовых показателей сбора на основе листьев бадана толстолистного. // Актуальные проблемы фармации - Барнаул, 2004. -Выл 1.-С 6-8 (соавт. Бабаева М В.)

2 Изучение флавоноидов сбора на основе листьев бадана // Актуальные проблемы фармации - Барнаул, 2005 - Вып 2 - С 142-147 (соавт Федосеева Л М, Бабаева М В.)

3. Изученеи антимикробной активности сборов на основе листьев бадана толстолистного. // Молодежь - Барнаулу Материалы научно-практической конференции - Барнаул, 2005 С 309-310 (соавт Федосеева Л М, Юрова В А)

4 Изучение флавоноидов сборов на основе листьев бадана толстолистного методом ВЭЖХ // Актуальные проблемы фармации - Барнаул, 2006 -Вып 3 -С 139-144 (соавт Федосеева Л М, Кудрикова Л Б)

5 Качественное определение дубильных веществ в сборах на основе листьев бадана толстолистного // Актуальные проблемы фармации -Барнаул, 2006 - Вып 3 - С 156-160 (соавт Федосеева Л М, Хижняк О. А)

6 Предварительное изучение некоторых фенольных соединений сбора на основе листьев бадана толстолистного // Материалы заочной международной конференции «Приоритеты фармацевтической науки и практики» - Москва, 2006 -С 328-330 (соавт Федосеева Л М)

7 Изучение специфической фармакологической активности сбора на основе листьев бадана толстолистного // Материалы заочной международной конференции «Приоритеты фармацевтической науки и практики» -Москва, 2006. - С. 328-330 (соавт Федосеева Л М, Зверев Я Ф, Юрова В А.)

8 Исследования по стандартизации сборов на основе листьев бадана толстолистного // Материалы региональной научно-практической

конференции (с международным участием), посвященной 40-летию фармацевтического факультета КГМУ «Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики» - Курск, 2006 - С 324-327 (соавт. Федосеева Л.М.)

9 Изучение флавоноидов сборов на основе листьев бадана толстолистного // Химия растительного сырья - 2006 - №4 - С 49-54 (соавт Федосеева Л М, Кудрикова Л Б, Турчанинов А А )

10 Количественное определение основных групп биологически активных веществ сборов на основе листьев бадана толстолистного // Молодежь -Барнаулу Материалы научно-практической конференции - Барнаул, 2007 С. 215-217 (соавт Федосеева Л М )

11 Микроскопический анализ сбора на основе листьев бадана толстолистного //Актуальные проблемы фармации - Барнаул, 2007 - Вып 4 - С 184194 (соавт Федосеева Л М, Гербер ТВ)

12. Фотохимический анализ сбора на основе листьев бадана толстолистного // Материалы Ш Всероссийской научной конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» - Барнаул, 2007 - С. 254-259 (соавт. Федосеева Л М )

Подписано в печать 18 02 2008 Формат 60x84/16 Бумага офсетная Печать ризографная Уел печ л 0 97 Тираж 100 экз Заказ 145

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ООО «Пять плюс». 656049, г Барнаул, пр Красноармейский, 73 Тел 35-42-60,62-85-57

Актуальность проблемы. Проблема создания эффективных фитопрепаратов из лекарственного растительного сырья в настоящее время является актуальной [27, 95, 99]. Это связано с тем, что лекарственные средства на основе природных биологически активных соединений обладают преимуществами по сравнению с их синтетическими аналогами, так. как широта терапевтического действия сочетается с минимальными побочными эффектами. Особое значение отводится сборам, которые содержат комплекс БАС, отвечающий- за поливалентное действие на различные системы организма [8, 74, 81, 169].

Перспективным является использование сборов из лекарственного растительного сырья, Алтайского края и республики Алтай - экологически благополучных районов Российской Федерации. Богатый, опыт народной медицины и многочисленные научные исследования дают возможность составлял, композиции сборов с направленным фармакологическим действием, которое связано с содержанием определенных групп биологически активных соединений [46, 55, 77, 112].

В" Алтайском государственном медицинском университете на кафедре фармацевтической химии1 с курсами органической и токсикологической химии разработаны и подтверждены патентом (№2249460) составы трех сборов с использованием^ лекарственного растительного сырья, собранного на территории Алтайского края и республики Алтай. Композиции составлены с учетом проявления мочегонной, антимикробной, антиоксидантной активности, что позволит использовать данные сборы для лечения микробных заболеваний органов мочевыводящей системы.

Необходимо исследовать влияние фармакотехнологических процессов на сохранение комплекса БАС при совместном содержании в сборах и проявлении ожидаемого фармакологического эффекта.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось фармакогностическое изучение и стандартизация сборов, установление специфической активности.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить, фитохимический состав сборов. Провести разделение и идентификацию БАС, установить их количественное содержание.

2. Определить технологические параметры сборов и обосновать технологию изготовления водных извлечений.

3. Определить острую токсичность и специфическую активность сборов. Провести сравнительный анализ.

4. Провести морфолого-анатомическое и гистохимическое изучение сборов, выявить диагностические признаки.

5. Установить показатели подлинности и доброкачественности сборов!

6. Разработать.проекты ФС на сборы.

Научная новизна. Проведено комплексное фармакогностическое, технологическое, фармакологическое и микробиологическое изучение сборов.

Изучен химический состав сборов. Установлено, что комплекс БАС сборов включает дубильные вещества, флавоноиды, фенолокислоты, фенологликозиды, флороглюциды, сапонины, водорастворимые витамины.

Методом ТСХ, ВЭЖХ, СФМ в сборах идентифицированы флавоноиды: рутин, ликвиритин, гиперозид, ликурозид, кверцетин, апигенин. Фенологликозид - арбутин. Фенолокислоты - в« сборе №1 и №2: галловая, коричная, хлорогеновая и ее производные; сборе №3: галловая; хлорогеновая и ее производные.

Изучены дубильные вещества; во всех сборах идентифицированы танин и кислота галловая.

При проведении качественных реакций идентифицирована кислота аскорбиновая в сборах.

Показана целесообразность стандартизации сборов по содержанию дубильных веществ.

Установлено количественное содержание в сборах дубильных веществ, флавоноидов, кислоты аскорбиновой.

Проведена сравнительная оценка качественного и количественного содержания БАС в сборах.

Проведены исследования по определению острой токсичности; установлена мочегонная, антимикробная и антиоксидантная активность сборов.

Определены технологические параметры сборов, показана целесообразность изготовления отваров.

Установлены показатели подлинности и доброкачественности сборов. На основании полученных данных разработаны проекты ФС сборов.

Практическая значимость. В результате проведенных исследований установлена возможность расширения ассортимента лекарственных препаратов на основе растительного сырья за счет использования разработанных сборов и применения их в качестве мочегонного, антимикробного, антиоксидантного средства для лечения микробных заболеваний органов мочевыводящей системы.

Разработаны проекты ФС на сборы.

Степень внедрения. Теоретические положения и результаты экспериментальных исследований используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе кафедры фармацевтической химии с курсами органической и токсикологической химии, кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и кафедры фармацевтической технологии Алтайского государственного медицинского университета. Подготовлены к рассмотрению проекты ФС на сборы.

Основные положения, выносимые на защиту. Результаты фармакогностического, фитохимического, технологического и фармакологического исследования сборов, обладающих мочегонной, антимикробной, антиоксидантной активностью.

Апробация* полученных результатов. Основные материалы диссертации обсуждены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемы фармации (г. Барнаул, 2004, 2005, 2006, 2007); «Молодежь -Барнаулу» (г. Барнаул, 2005, 2006, 2007); на Ш Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (г. Барнаул, 2007).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук.

Диссертационная? работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Алтайского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01.200316088).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, одна из которых в журнале, цитируемом ВАК.

Экспериментальные исследования по теме диссертации выполнялись на базе Алтайского государственного медицинского университета: на кафедре фармацевтической химии с курсами органической и токсикологической химии, на кафедре фармакогнозии с курсом, ботаники (под рук. ст. преподавателя Гербер Т.В.), на кафедре фармакологии (под рук. д.б.н., проф. Лампатова В.В.), на кафедре микробиологии и вирусологии (под рук к.м.н., доц. Юровой В.А.), а также ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Алтайском крае».

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 155 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, трех глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 85 рисунками. Библиографический указатель включает 170 источников литературы, из них 54 зарубежных.

Общие выводы

1. Проведено комплексное изучение сборов. Установлено наличие в сборах флавоноидов, фенологликозидов, флороглюцидов, дубильных веществ, антраценпроизводных, сапонинов, водорастворимых витаминов.

2. Определен качественный состав фенольных соединений сборов:

Сбор №1 флавоноиды: рутин, ликвиритин, гиперозид, ликурозид, кверцетин, апигенин; фенолокислоты: галловая; коричная, хлорогеновая и ее производные; фенологликозид - арбутин. Дубильные вещества представлены конденсированной и гидролизуемой группами, идентифицирован танин и кислота галловая.

Сбор №2 флавоноиды: рутин, ликвиритин, гиперозид, ликурозид, кверцетин, апигенин; фенолокислоты: галловая, коричная, хлорогеновая и ее производные; фенологликозид — арбутин. Из дубильных веществ идентифицирован танин и кислота галловая.

Сбор №3 флавоноиды: рутин, ликвиритин, гиперозид, ликурозид, кверцетин, апигенин; фенолокислоты: галловая, хлорогеновая и ее производне; фенологликозид - арбутин. Из дубильных веществ идентифицирован танин и кислота галловая.

3. Количественно определены основные биологически активные соединения( сборов: флавоноидов (сбор №1 - 1,30±0,09%; сбор №2 - 1,21±0,09%; сбор №3 - 3,14±0,03%), дубильных веществ (сбор №1 - 7,27±0,21%; сбор №2 -6,67±0,19%; сбор №3 - 7,45±0,20%), кислоты аскорбиновой (сбор №1 -226±5мг%; сбор №2 - 246±4мг%; сбор №3 - 207±6 мг%;).

4. Определены коэффициенты водопглощения и коэффициенты общей потери экстрагента: для сбора.№1 - 1,78±0,02 и 1,89±0,03; для. сбора №2 -1,69±0,01 и 1,81±0,03; для сбора №3 - 1,69±0,03 и 1,86±0,03-соответственно. Установлено, что оптимальной лекарственной формой для экстемпорального изготовления является отвар, процеженный без охлаждения.

5. Доказано, что сборы не обладают токсичностью, оказывают мочегонное, антимикробное, антиоксидантное действие.

6. Установлены морфолого-анатомические признаки сборов и числовые показатели:

Сбор №1 - дубильных веществ не менее 6,5%, влажность не более 12%, золы общей не более 11%, золы, нерастворимой в 10% растворе-хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более-3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 6 мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%.

Сбор №2 - дубильных веществ не менее 6%, влажность не более 12%, золы общей не более 10%, золы, нерастворимой * в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более 3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий б мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%.

Сбор №3 - дубильных веществ не менее 7%, влажность не более 12%, золы общей не более 10%, золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 1%, органической примеси не более 3%, минеральной примеси не более 1%, частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 6 мм не более 15%, частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,16 мм не более 8%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 20%. Срок годности - 3 года. 8. Разработаны проекты ФС на сборы.