Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Аналитический контроль новых синтетических лекарственных препаратов-производных пиразола и бензамида

' МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ им. И. М. СЕЧЕНОВА

На правах рукописи

ПОСЫПАНОВ Сергей Георгиевич

УДК 615.214—011

АНАЛИТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ НОВЫХ СИНТЕТИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ — ПРОИЗВОДНЫХ ПИРАЗОЛА И БЕНЗАМИДА

15.00.02 — фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

МОСКВА 1990

Работа выполнена в Институте фармакологии АМН СССР.

Научный руководитель — кандидат химических наук Б. М. Пятин.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, доцент В. И. Прокофьева (Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова); доктор фармацевтических наук, старший научный сотрудник Полиевктов М. К. (Всесоюзный научно-исследовательский химико-фармацевтический институт им. С. Орджоникидзе).

Ведущая организация — Всесоюзный научно-исследовательский институт фармации МЗ СССР.

в « » часов на заседании специализированного совета Д-074-05-€6 при Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова (Москва, Б. Пироговская, 2—6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке фармацевтического факультета Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова (Москва, Суворовский бульвар, 1$).

Защита состоится « /6»

Автореферат разослан «

/5

Ученый секретарь специализированного совета Д-074-05-06, кандидат фармацевтических наук, доцент

Н. П. Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОШ 0 ^ (АКТУАЛЬНОСТЬ. В настоящее время профилактика и лечение алко-^ЙЖфт является одной из актуальной .проблем, не только социальной, £р;иа>^кедицинской. В Указе Президиума Верховного Совета СССР "Об усилении борьбы с пьянством" перед АМН СССР поставлена задача разработки медико-биологических аспектов этой проблем, включая создание' средств медикаментозной терапии. В медикаментозной терапии алко-колизма наряду со средствами восстановительной терапии, используются и психотропные препараты различных фармакологических групп. В то же время не существует препаратов для специфической противоалкогольной терапии.

В Институте Фармакологии АМН СССР в течение ряда лет ведутся исследования по целенаправленному поиску новых психотропных средств. С целью поиска препаратов такого типа действия, осуществлялся синтез новых соединений в ряду бенэамида. Проводился также поиск препаратов антиалкогольного и психотропного действия в ряду пиразола. Результатом этих исследований явилось выявление фармакологически активных веществ: бефола - производного бензамида и дибуфена - производного пиразола. Данная работа является частью исследований по созданию новых оригинальных лекарственных средств психотропного действия и их готоеых лекарственных форм.

ЦЕЛЬЮ работы было проведение исследований, направленных на создание комплекса аналитических методов, позволяющих оптимально провести технологические процессы, охарактеризовать качество промежуточных и целевых продуктов синтеза, а также лекарственных форм. Для разрешения клинических испытаний и последующего освоения препаратов промышленностью, ■необходимо было разработать нормативно-техническую документацию. Для этого необходимо было решить следящие задачи:

- изучить физико-химические свойства бефола и дибуфена,

- разработать методики их фармацевтического ан. иза,

- изучить физико-химические свойства полупродуктов синтеза • бефола и дибуфена и разработать методики их анализа,

- разработать методики контроля технологических процессов,

- разработать методики анализа лекарственных форм бефрла и дибуфена,

- изучить устойчивость' субстанций и лекарственных форм бефола и дибуфена.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Изучены физико-хшическиё свойства бефола и дибуфена и промежуточных продуктов, установлена взаимосвязь между- физико-химическими и показателями качества целевых .продуктов. Проведены исследования процессов синтеза бефола и дибуфена. Выделены ■ побочные продукты реакций, установлено их строение и изучены физико-химические свойства. Установлено, что побочные продукты, образующиеся на последней стадии синтеза бефола, определяют качество субстанции. Для дибуфена показано, что стадией-определяющей качество субстанции, является стадия декарбоксилирования. Выявлены закономерности между параметрами технологических процессов и качеством промежуточных и конечных продуктов ситнеза.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМХТЬ. На основании изучения физико-химических свойств бефола и дибуфена, разработаны методики их анализа. Установлены показатели качества и их нормы для промежуточных продуктов, позволяющие получить целевой продукт необходимой степени чистоты и оптимального выхода. Разработаны и оформлены ВФС 42-1735-87 на субстанцию бефола и ВФС 42 на субстанцию дибуфена, а также ВФС 42-1746-87 на 0,25% раствор бефола для инъекций, BSC 42-1745-87 на таблетки бефола по 0,01 г и ВФС 42 на таблетки дибуфена по 0,5 г.

Приказом министра МЗ СССР №994 от 31.08.87 бефол и его лекарственные формы разрешены к медицинскому применению в качестве анти» депрессанта.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты выполненной работы доложены на конференциях молодых ученых Института Фармакологии (Москва,

1965,1986), на совместной конференции молодых ученик Института Фармакологии АШ СССР, Института патфизиологии АМН СССР и Института нормальной физиологии им. II.К.Анохина АМН СССР (Москва, 1986), на У1 Всесоюзном съезде фармакологово/Ташкент, 1988), на конференции по вопросу клинического применения нового оригинального отечественного андидепрессанта бефол (Тбилиси, 1989) а также на межлабораторных конференциях Института Фармакологии (1964-1988 гг).

ПУБЛИКАЦИЯ РКЗУЛЬТАТОЗ ИХЛВДОЗАНИЙ. По результатам проведенной работы опубликовано четыре работы. Работа "Единый аналитический подход при разработке препарата бефол" заняла первое место на кон- -курсе молодых ученых Московского Правления ВХО им. Д.И.Мендслее/-ва в 1988 г.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАКМЦЕВТЙЧЕСШ НАУК. Работа проводилась в соответствии с научно-техническими программами РКП? СССР на 1980-1990 гг 0.69.04 "Разработать и внедрить методы и сродства профилактики, лечения и реабилитации больных психическими заболеваниями", задание 01.02Н и 0.069.13 "Разработаь и внедрить методы и сродства профилактики, ранней диагностики и лечения алкоголизма", задание 02.02М. В "Комплексная программа научных исследований по актуальным проблемам медицины и повышению уровня специализированной медицинской помощи населения г. Москвы на 1987-1990 гг." .(приказ министра МЗ СССР № 469 от 31.03.87) запланировано з 1987-1986 гг разработать и внедрить в медицинскую практшеу новые лекарственные средства для лечения алкоголизма - бефол и дибуфен.

на за^ту заносятся-.

- результаты экспериментальных исследований по разработке методик анализа субстанций бефола и дибуфена;

- разработка методик контроля реакций синтеза бефола и дибуфена;

- контроль качества полупродуктов синтеза и его связь с качеством конечных продуктов - бефола и дибуфена;

- рпг»р&ботка методик контроля качества лекарственных форм обоих пг-мзрптоз;

- 4 - .

- результаты изучения стабильности субстанций и лекарственных форм бефола и дибуфена.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 143 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литератур'"., трех глав экспериментальных исследований, общих выводов и списка литературы. Работа содержит 39 таблиц и II рисунков. Список литературы включает 177 источников, из них 117 на иностранных языках.

Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость.

В первой главе обобщены литературные данные по фармакологическим свойствам, строению и химическим свойствам пиразолов, а также методам анализа производных пиразола.

Вторая глава посвящена разработке методик фармацевтического анализа бефола и дибуфена: установлению строения примесей, разработке методик оценки чистоты препаратов, количественного содержания, реакций подлинности.

В третьей главе описан контроль производства этих препаратов: разработка методик анализа исходных продуктов, контроль протекания процессов, анализ продуктов каждой стадии синтеза.

Четвертая глава посвящена разработке методик анализа лекарствен них форм бефола: 0,25% раствор для шгъекций и таблетки по 0,01 г и дибуфена - таблетки по 0,5 г.

Основное содержание работы

Бефол представляет собой 4-хлор-Ы-(3-морфолинопропил) бензами-да гидрохлорид. Дибуфен - это н-дибутиламид 1,3-дифенилпиразолкир-боновой-4-кислоты.

Фармацевтический анализ субстанций Были изучены физико-химические свойства субстанций бефола и дибуфена. При этом такие показатели как внешний вид, температура плавления, растворимость, рН растворов, потеря в массе при высушивании определялись по общим методикам, описанным в РФ СССР. Более подробно изучалось определение органических примесей и количественного содержания субстанций.

Для оценки органических примесей в бефоле и дибуфене исполь-' ' зовали метод ICX на пластинках Силуфол УФ-254 (ЧСФР).

В бефоле в качестве примесей и как продукты разложения могут присутствовать п-хлорбензойная кислота и морфолинопропиламин. Для разделения бефола и примесей была найдена система этанол-диоксан-концентрированный раствор аммиака (30:10:1). Кислотна пластинке детектируем, просматривая в УФ свете при 254 нм, а морфолинопропиламин - опрыскивая реактивом Драгендорфа. При нанесении 100 мкг субстанции на пластинку, мы нормируем содержание кислоты до 0,2%, а амина до 0,5%.

В дибуфене в качестве примесей могут присутствовать 1,3-дифе-нилпиразолкарбоновая-4-кислота и н-дибутиламин. При анализе образцов субстанции кислота и амин обнаруживались не во всех облазцах. В каждом образце, но в различных количествах содержалась неиденти-фицированная примесь. Она была выделена на колонке с силикагелем и идентифицирована методами ИК, ПМР и УФ спектрометрии. У® спектр примеси в этаноле имеет максимум поглощения при 276 нм. В ШР спектре примеси отсутствует сигнал протона в положении 5, а присутствует сигнал одиночного протона, который можно отнести к положению 4 ядра пиразола. В ИК спектре присутствуют полосы поглощения, которые можно отнести к колебаниям С=Э и C-N амидной связи. Анализируя реакции синтеза дибуфена, была предложена структура примеси как

н-дибутиламида 1,3-дифенилпиразолкарбоновой-5-кислоты, и названа изодибуфеном. Структура примеси была подтверждена встречным синтезом. Для разделения дибуфена и всех примесей предложена система гексан-диоксан (5:1).

Яри определении растворимости в воде бефол дает опалссцирую-щие растворы. Изучение последней реакции синтеза позволило выявить образование побочных продуктов - эфира, ангидрида и морфолида п-хлор бензойной кислоты. Для разделения побочных продуктов и бефола разработана методика ТСХ в системе гексан-диоксан (7:3). Анализ экстрактов из субстанций бефола показал наличие следовых количеств этилового эфира п-хлорбензойной кислоты и самой кислоты. Установлено, что опалесценцию растворов бефола вызывает п-хлорбензойнай кислота в количествах менее 0,2$, поэтому мы-описываем раствор бефола в воде как опалесцирующий.

Для количественного определения препаратов использовали методику неводного кислотно-основного титрования, основываясь на основных свойствах молекул. Для бефола предложена система уксусный ангидрид-муравьиная кислота (30:1)! Для сравнения образцы анализировали в традиционной системе уксусная кислота-раствор ацетата окис-ной ртути (25:5). Определение проводили индикаторным и потенциомет-рическим способами. Хотя срачок потенциала в Точке эквивалентности для первой системы был меньше, чем во второй, однако результаты определения индикаторным способом практически совпадали. Поэтому для количественного определения предлагаем использовать систему уксусный ангидрид-муравьиная кислота, как не содержащую'токсичного компонента.

Дибуфен также является амидом и по результатам количественного определения возможно сравнить основность молекул бефола и дибуфена.

Дибуфен количественно определяли индикаторным и потенциометрическнм способами б различных неводчгос сродах, вклпчасяих уксусную кислоту» уксусный ангидрид, хлороформ, дихлорэтан, бензол, муравьиную кислоту. Однако, во всех системах выделенио точки ¡эквивалентности обоими способами было затруднительно. Испольоопаэтиеся индикаторы (кристаллический фиолетовый, метиловый фиолетовый, нейтральный красный, малахитовый зеленый, орацет голубой В) имели очень растянутый переход окраски, либо н нескольких случаях, четкий переход, но вдали точки эквивалентности. Таким образом, осношшэ свойства'у молекулы дибуфена практически отсутствуют, Для разработки метода количественного определения использовали кислотный >/, щелочной гидролиз. Эти методы также не привели к количественным результатам. Тогда был попользован об";чй метод определения азота - метод Кьельдаля. Для деструкция молекулы дибуфена вначале был примечен фармакопейный метод (Г1> XI СССР, в. I, с. 160). Затем для увеличения окисления использовали пергидроль, селен, оксид ртути (II), в качестве катализатора ~ смесь сульфатов калия и меди в различных соотношениях. Однако, максимальное количество дибуфена, которое удалось определить таким способом равнялось Попытки количественного определения методами гидролиза и Кьельдаля еа;о раз показали практическое отсутствие основных свойств у молекулы дибуфена, а также ее чрезвычайною устойчивость. Поэтому было решено обратиться к физико-химическому методу - сиектрофотометрическому. Вначале был использован вариант с соединениями, обладающими близкий максимум поглощения и растворимыми, как и дибуфен, в спирта. Однако, различная подчиняемоеть закону Вера для дибуфена и этих соединений (стрептоцида и ¡гевокяинамида) в определяемом диапазоне сделала невозможной разработку подобной методики. Второй вариант спектрофо-метркцеского метода - ото использование стандартного образца дибу ■

фена-свидетеля. Для этого была разработана методика синтеза стандартного образца, не содержащего примесей (менее 0,05%). Было получено пять серий стандартного образца дибуфена-свидетеля, для которого установлены показатели качества. Затем была определена величине удельного показателя поглощения для четырех концентраций -5, 6, 7 и 10 мкг/мл растворов стандартного образца дибуфена-свидетеля в спирте. Затем нами раэрЭтывалея вариант спектрофотометри-ческого метода с использованием раствора стандартного образца дибуфена-свидетеля в качестве рабочего стандартного образца. сС использованием разработанной методики были проанализированы серии дибуфена.

На основании проведенных анализов нами предложены нормы для показателей качества субстанций бефола и дибуфена (табл. I). и оформлены ЫС 42 на субстанции бефола и дибуфена.

Таблица I

Показатели качества субстанций бефола и дибуфена

Показатели Нормы по ВФС 42

качества бефол дибуфен

Описание Растворимость

Подлинность

белый или белый с кремо-ватым оттенком кристаллический порошок легко растворим в воде (допускается образование мутных растворов)

УФ спектр в воде, макс. 239 нм, щелочной гидролиз

белнй или белый с кремо-ватым оттенком кристаллический порошок очень легко растворим в хлороформе, легко раство рим в ацетоне и этилаце-тате, практически не рас творим в воде УФ спектр в спирте, макс 276 нм, реактив Дранендо фа

Температура плавления, °С

рН, 1% водный раствор Посторонние органические примеси,

187 - 193 4,0 - 5,0

п-хлорбензойная кислота не более 0,2е?, морфоли-100 мкг нопропиламин не более 0,5%

Потеря в мессе не более 1%

при высушивании,

100°С

Количественное 99

содержание, не более

Срок годности 2 года

69 - 74

изодибуфен не более 7% 1,3-днфенилггиразолкарбо-новая-4-кислота не более 0,2$

3,5

2 года

Контроль производства бефола и дибуфена Наряду с разработкой НТД на субстанции, перед нами стояла задача разработки методик анализа для контроля производства этих препаратов. Для обеспечения качества субстанции, достигнутого на лабораторных образцах необходимо контролировать протекание реакций синтеза. Качества субстанции также в значительной степени определяется качеством исходных и промежуточных продуктов. Продукт первой стадии синтеза бефола - п-хлорбензойная кислота. В качестве примесей она может содержать о~хлорбензойную кислоту. Для обнаружения примеси разработана система бензол-муравьиная кислота (25:1) с разделением в ненасыщенной камере на пластинках Силуфол УФ-254. Для количественного продукта опредления продукта стадии-использовали методику кислотно-основного титрования его спиртового раствора 0,1 н. раствором КОТ (индикатор - тимоловый синий).

На следующих двух стадиях используется три амина: морфолин, морфолинолропионитрил и ыорфолинопропиламин. Для контроля качества аминов, определения пршесей в полупродуктах предложена методика 1СХ в системе хлороформ-метанол-концентрированный раствор аммиака (40:30:1). Детектирование пробили парами иода. Установлена чувствительность детектирования аминов -0,2 мкг для морфолина, I мкг для нитрила и 0,07 мкг для морфоликопропиламина. Методику количественного определения разрабатывали для морфолшопропиламина. При кислотно-основном титровании в среда ледяной уксусной кислоты получаются результаты, свидетельствующие об ацилированш амина в процессе анализа.

Предложено проводить ацилирование перед проведением анализа, ввдерживая I ч в смеси уксусный ангидрид-уксусная кислота (20:10) и затем титруя полученный раствор.

В отличие от обычного метода получения амидов взаимодействием моля хлоранпидрида с двум молями амина, бефол получают взаимодействием эквимолярнкх количеств реагентов. Достичь эквимолярности в заводских условиях трудно, по&гому исследовалось влияние избытка каждого реагента на качество получаемого бефола. Для аналиаа на присутствие примесей испольаовалась вышеупомянутая ТСХ система, растворители которой подбирались с улетом разделения трех аминов и бефола. Анализ образцов субстанции показал, что возрастание избытка хлоранпидрида вызывает сначала мутность растворов бефола при определении растворимости, а затем, при большем избытке и изменение цвета субстанции до розового или светлокремового. Также, может появляться запах, обусловленный этиловым эфиром п-хлорОензойной кислоты (табл. 2). При кристаллизации, из большинства этих образцов удалось получить фармакопейные продукты. Избыток морфолинопропил-ампна вызывает снижение температуры плавления субстанции но 2°-Иг'С и повышение результатов количественного определения до 102^-10^.

Анализ но наличие примесей показал присутствие амина в бефоле. После одной или дпух кристаллизации таких образцов были получены фармакопейные продукты. Однако, при избытке какого-либо из реагентов в количестве более 1%, субстанцию бефола оикс'.шть от примесей кристаллизацией не удавалось. Поэтому был раэр&ботгк метод очистки через основание. Для основания бефола разработаны методики анализа и установлены параметры качества, позволяющие получать фармакопейный продукт.

Таким образом, для синтеза бефола разработаны методики атаиза полупродуктов и контроля процессов, позволяющи^получать продукт фармакопейного качества.

Таблица 2

Побочные продукты в синтезе бефола

Значения й^

Соединение 1Этанол-диоксан-} аммиак 30:10:1* ! Гексан-диоксан | 7:3

Л-хлорбензсЙняя кислота 0,28 0,30

Этиловый эфир п-хлорбенэойной кислоты 0,70 0,60

Ангидрид п-хлорбензойной кислоты 0,60 0,45

Морфолид п-хлорбензойной кислоты 0,70 0,15

. *Бсфол - 0,53

Синтез дтбуфоно состоит из шести стадий. Продуктом первой стадии является фенилгндразон бензальдегида, очень легко пылящий' порошок. Для оценки присутствия в нем исходный продуктов - ф.енилгид-рнэинп и бона альдегида, предлагаем методику 1СХ с разделением в хлороформе на пластинках Силуфод УФ-254. Исходные продукты практически

не обнаруживались, однако в зависимости от оттенка в цвете порошка, имелись стартовые пятна различной интенсивности. В сь^зи с изменением технологии, когда на следующую стадию продукт стали передавать в виде пасты, был введен показатель потери в массе при высуц вании. Количественное определение в продукте не проводили, считая сухой остаток, при отсутствии примесей, за весь фенилгидразон.

При проведении второй стадии был выделен в значительных количествах побочный продукт. После очистки были изучены его физико-химические и химические свойства. Продукт растворялся в гелочах, образовывал осадок с реактивом Драгендорфа, не т^оовался раствором хлорной кислоты. После получения ПМР, ИК и Ух» спектров, элементного анализа, после рассмотрения химизма возможных побочных реакций, для соединения была предложена структура 1-фснил-3-метил~4-бензил-пиразол-5-она (пиразолон). Структура была доказана встречным синтезом и совпадением результатов измерения физико-химических показателей. Для оценки наличия примесей в продукте второй стадии да разработали методику ТСХ в системе бекзол-диоксан (9:1). Эта сис- , тема позволяет разделять фенилгидразон бензальдегида, этиловый эфир 1,3-дифенил-5-метилпиразолкарбоновой-4-ккслоть! - продукт второй стадии и "пиразолон" - побочный продукт на этой стадии. Изучение хишшш образования побочного продукта позволило таким образом изменить условия реакции на второй стадии, что пиразолон практически не стал образовываться. Поэтому для количественного определения продукта второй стадии использовали методику щелочного гидролиза с последующим выделением 1,3-дифенил-5-ме'тилпиразолкарбоновой-4-кислогы и титршетрическим ее определением в ацетоне.

Продуктом третьей стадии является I,З-дифенил-5-метшширазол-карбоновая-4-кислота. При разработке методики ТСХ, с целью унификации контроля производства, разделялись продукты второй и третьей стадий и их побочные продукты. Поэтому для оце^'И примесей исполь-

зовали ту же ТСХ систему банзол-дисксан (9:1). Поскольку третья стадия - это щелочной гидролиз эфира до кислоты, то примеси этилового эфира в кислоте не обнаруживалось. "Пиразолом'' обнаруживался только в образцах, полученных по первоначальной технологии второй стадии. Для количественной оценки продукта на третьей стадии использовали титриметрическую методику 0,1 к. раствором КОН в среде ацетона, такую же как и на второй стадии, исключая гидролиз.

Четвертая стадия - это окисление метилкарбонсвой кислоты до 1,3-дифениллиразолкарбоновая-4,5-дикислота. Определение присутствия примесей в продукте проводили методом ТСХ. При разработке 1СХ системы выявилось, что дикарбоновая кислота сильно сорбируется на пластинках и образует очень вытянутые пятна. В таких случаях используют добавление сильнокислых или основных добавок в систему. .. В результате добились разделения этих кислот в системе толуол-этилацетат-муравьиная кислота (40:10:5). Для количественного определения продукта разработана титриметрическая методика 0,1 н. раствором КОН в среде ацетона.

Пятая стадия синтеза - это декарбоксилирование дикарбоновой кислоты до 1,3-дифенилпиразолкарбоновой-4-кислоты. Как показало изучение примесей в дибуфене и реакционных масс пятой стадии, процесс декарбоксилирования идет по нескольким направлениям. Наряду с целевой 4-кислотоЙ, образуется также I,3-дкфенилпиразолкарбо-нозая-5-кислота и 1,3-дифенилпкразол. Для -определения чистоты продукта на этой стадии необходимо разработать методику разделения изомерных пиразолкарбоновых кислот. Поэтому, для разделения и изучено поведение .четырех вышеупомянутых пиразолкарбоновых кислот при разделении на пластинках Кизельгель Ф 254. В ненасыщенной'камере на этих пластинках удалось разделить все пираэолкарбоновыэ кислоты

в системе хлороформ-диоксан (4:1). При переходе к насыщенной камере или на пластинки Силуфол УФ-254 степень разделения падала и раз делить все кислоты в одной системе уже не удазалось. Однако пары кислот, т.е. мотилкарболоаую с дикарбоновой и 4-кислоту с 5-кисло-той на пластинках Силуфол У&-254 разделить возможно в системе то-луол-этклацетат-куравьиная кислота (40:10:5). Для количественного определения продукта разработана методика титриметрического определения в спирте 0,1 н. растсэром КОН. Промежуточные продукты и примеси, образующиеся при, анализе дкбуфена , о тагсхо норви их качества пошцоны в таблице 3.

Таблица 3

Прокохуточнцо продукта в синтезе дибуфена

'й'' | H «именован и | ста-

дий

продукта

Внешний вид

ТСХ,

[плазле-'0ТСУТС1™15

¡ния, Oqj !

! примесей

(Кол::чо-| Потере "стаенное в

'сВДЧмассе,

|нио, .-! I ¡не менее %

I ^енилгидра-

зок

бензальде-

белыл ил у. белый с келтоватьм

ИЛИ КрОМОЕиТЫМ

оттенком порошок, паста с ро-зозатш или кремоватым оттенком

белый или о'ельй с яелтоватым или кремоватым оттенком пор.

150 -

156

гида

Этиловый _____ ... . .

1;3- с яелтоватым 105 -дкфекил-5- .. , ... ыетилпира- оттенком пор. 108 золкарбоно-во%-4-кке-лсты

1,3-дифвпял-белый или белый 185 5~иетялп'ире-с кремовым от-золкарбо- тенком порошок 199 нопля-4-ккслота

1,3-дяфенил-белый или белый 185 писазолкар- с желтоватым боковая-4,5-кли кремоватым 191 дкккслота оттенком порогпок I,3-дифенил-белый или белый 203 пиразолкар- с кремоватым боновал-4- оттенком порошок 207 кислота

50 ï-пгг

100 мкг, допускается стартовое пятно

57,5

100 мкг 99,0 0,5

100 мкг, не

более 5% 90,0 5,0

мотилккслоты

100 мкг. не

более ,5% 99,5 0,5

5-кислоты

3

Как следует из вышеизложенного, в синтезе дпбуфено встречаются четыре пиразолкарбоновые кислоты, которые часто присутствуют в виде пркглесей друг в друге. Поскольку, как показали наши доследования, именно их присутствие я определяет как качество промежуточного продукта стадии, так и конечного продукта синтеза, били изучены физико-химические свойства этих кислот, знание которых позволит внести изменения в технологию синтеза для улучшения качества полупродуктов, Измерена растворимость в различных растворителях, сняты УЗ спектры в спирте и воде.и определены константы ионизации. Растворимость в органических растворителях определяли по методике СССР XI издания. Растворимость в воде по этой методике для всех четырех кислот отнесена к категории "практически не раствори,'«а". Дм определения фактической растворимости, была разработана спектрофо-тометрическая методика. Она основана на том, что после измерения поглощения насыщенного раствора соответствующей кислоты при расчетах концентрации используется удельный показатель поглощения. Он определяется из следующего эксперимента. Измеряется поглощение раствора кислоты трех различных концентраций вблизи концентрации насыщения, вычисляется удельный показатель поглощения и он используется при расчетах. Константы ионизации мы определяли по методике для одноосновных кислот, не требующих поправки на активность ионов водорода. Эту методику обычно используют для веществ легко растворимых в воде. Поэтому определение проводили по модифицированной методике, в различных спирто-водных смесях, экстраполируя полученные значения к нулевому содержанию этанола (табл.4} . Полученные таким образом константы дониза'ции для ^-замещенных и 5-замещенных кислот отличаются друг от друга. Карбоксильная группа в положении 5 проявляет более кислые свойства, чем в положении 4. Ра'личия в кислотности позволили нам предположить, что для очистки пиразол-карбоновых кислот возможно использовать их различия в рКа. Нагла

Таблица 4

Значение рКа пиразолкарбоновых кислот в водно-этанолышх смс-сях

Шзганкс кислоты

Содержанке спирта, мольная доля, X

0,871 | 0,657 | 0,503 | 0,386.) 0,295

|Корреляционное уразнение

1,3-Д2;Ьеккл--5-метплпи-ргзолкагбо-ноеся-4-ки-

слота 8,359 8,022 7,742 7,741 7,487

1,3-ДифенЕл-пигазолкар-боног.ая-4-

кяслота 7,533 7,222 6,Б79 6,520 6,077

I, 3-дифенкл-лкразолкаp-бOIIOEaя-5-клслота

боновая-4,5-дикислота

5,461 5,094 4,861 4,586 4, 441

8,85 8,48 8,07 7,80 7, 71

3,77 3,72 3,43 3,37 3, 33

рКа=1,447Х +7,09 5 = 0,9623

рКа=2,<>48Х + 5,52 К = 0,9725

рКа=1,780Х+ 3,92 Е = 0,9980

рКа=2,086Х +7,05 рКа=0,860Х +3,06

был проведен эксперимент по очистке дикислоты от примеси кетилкио-лоты. Используя дробное додкисление и выделяя осадки при рН, когда одна кислота в основном находится в молекулярной форме, а другая в ионной, получили дикислоту без яркмесег! с выходом 35%.

На последней стадии синтеза анализировали технические образцы получаемого дибуфена методом ТСХ в системе гексан-диоксан (5:1) . В них обнаруживались 'изодибуфен, 1,3-дифенштиразолкарбоновая-4-кис-лота и невдентврицированные примеси. Поскольку очисткой избавиться от лркмесей изодибуфена к 4-кислоты не удалось, мы нормируем содержание изодибуфена до 7%, а 1,3-дифенилпиразолкарбоновой-4-кпслоты -до 0,2^. ■

Таким образом, разработаны методики анализа конца реакций синтеза бефола-ж дибуфена. Использование установленных показателей ка-

честка волупродаьгчв позволяет получать фармакопейный яг. >ду:-.т.

Лекарственные фэрг.щ бофола и дноуфска к их анализ

Бефэл в мьдпцкискоЯ практике предлагается использовьть в ваде 0,25)? р. стг'Орв для инъекций и таблеток по 0,01 г, а дкйу^ен ъ Ei-де таблеток пз 0,5 г.

Поскольку наличие примесей усганвливается 2 субстанции, то ле-карстпеянке формы акализируатяс методом ТСХ для определения устойчивости препарата в лекарственной ф)рме. При этом использовали методику, применяемую для субстанции. Примеси в лекарственных формах бефола определяли в системе спирт-диоксан-конц. раствор аммиака (£0:10:1) . При нанесении водного р,- стоора хромагогракмы били ие,до-влетвjpKi ельны из-за долгого времени наизсеиия и нарушения слоя си-ликагеля. При анализе спиртовых вытяжек из таблеток (спирт - наилучший рйстроритель бефола) на хроматограмме проявляется тлоса от старта до пятна бефола. Установлено, что это вызвано наличием л>ли-винлллирролидона в качестве вспомогательного вещества. Учитьвая з?п-шеизлжеиное, разработана методика экстракции осионаивя яз лекарственно!: g jpku и определения в з.>кр1мк экстракте в системе спирт-дпоксан-конц. р створ аммиака (80:10:1) . Количественное определение г лекарственны* формах бе гола проводили слектрофэтометрлчесюш методом. Для лекйост^вииич форм б.г'пл;; показано, что Есдомогателъ-нив ведостяа не г-те^алт проведет;» анализ«. Для tíaJma т> пределах эпредслпв.-шх К'|;п.интраци:1 выполняется закон Lepa, показаны высокие оспрогзводкм >сть п т »чкоегь

Как от.'лечалюь, дксу.^к является очеяь.усгойчлвкм соединением. Поэтому р{-эло-й«ч:йо .шепаркто в провесе хрг..с.:ия не осшару^еио. 3 то xv г сарвларптс в таблетке составляет Поэто-

му к ».! о í-ííi. лс«зрст1 ечиуп •ip.s/ ;ибу. чаи. методом ТСХ. Для т.лк'.ес гг'"«ного онркделбшш t¿:i. :е пгмочьз ля слектро,фотометрический метод с шк.лгзо:.! (.;¡-prj, ц< растворов л :. 2'i'o им. Ь ареалах

измеряемых концентрации выполняется закон Беро, показана вксокпя воспроизводимость и точность метода.

Изучена устойчивость субстанций и лекарстгетшх -орм беф.ола к дибуТена. Препарата хранили в естественных условиях г течение 4 лет для бефола и 5 лет для дибудека, для -лекарственных (юрм бефоло е течение 4 лет, для лекарственных форм дибу.}хгна в течение 3 лет. йроседеияне а.чалчгк доказали, что качество субстанций и лекарственных (|ор>/ во время хранения не изменились.

На основании я.-ювсдешаис исследовеик" составлены зуг на субст цки к лекарстргкшо форма Оеоолп к дибучена. Приказом '3 СССР Л 294 от 51.08.87 бгфол в виде таблеток по 0,01 г и 0,25,® раствора для инъекцкЛ разрешен к мсдацкнсхону применения в качестве онтидепрес-санта. На опытном заводе КОХ АК УССР начато производство субстанции г, на ЯШ) "Дарница" начат дром-шзлекнкй вшуск лекарствелккх Сюрм.

О Ь ^ л' ььЬОди

1. Впервые изучены физико-химические к хккичеспае свойства новых оригинальных психотропных препаратов - бефола и дибуфена. Предложен к показатели, определявшие качество этих препаратов.

2. В качестве примеси в субстанции бефола могут быть п-хлор-бензопная кислота к морфолинопропиламин. Кислота в этих количествах шкет визквагь :.угность водного раствора при определении растворимости в воде.

3. Показано, что примесями в дибуфене являются 1,3-дифонилпи-раголкарбоновая-4-кислога, н-дибутиламин и дополнительная примесь, •которая методами Л.лР, ПК и масс-спектрометрии, а также встречным скн тезом идентифицтрована как н-дибутиламяд 1,3-дифекидшфазолкарбонов бой-5-кислоты.

4. Предложено бефол определять количественно в среде уксусный ангидрид-муравьиная кислота (50:1) титрованием 0,1 н. раствором хлорной кислоты. Показано, что кислотно-основное титрование, щелочной и кислых гидролиз, а гаке метод Кьельдаля . не пригодны для

оличестренного определения диб.у^ена. Предложен спект.юфотомэтри-еский метод со стандартным образцом дпо'у 1ена-сг::детсля.

5. Разработаны кетодн- аналитического контроля промежуточных лро-уктов синтеза бесрола - п-хлпрбензойной кислоты и пор'/шшопропил-«кна. Изучен процесс получения конечного продукта - бефола :: уста-овлена зависимость моду качеством бефола и параметрами технологк-еского процесса. В случае получения некачественного продукта пока-□на возможность получения фармаколеиного беф >ла через его оснований

6. Изучены процессы получения промежуточных продуктов синтеза ибуфена. Показан), что при синтезе пиразолового цикла образуется эбочный продукт - 1-фен:;л-3-мет;;л-4-бензклякразолон-5. Он бил центи^идарован на основании IMP и ЙК спектров, элементного анализа

сравнением с образцом, полученным встречным синтезом.

7. Показано, что при декаьбоксвлироьании Т.З-ди^енилпиразолкарбо-)вой-4,5-дикислоты образуются побочные продукты - 1,3-длфеннлпира-

эл и 1,3-дифенклпиразолкарбоновая-5-кислота. Установлена закономер- . )сти между качеством продукта стадии декарбоксклирования и наличк-,1 примесей е дибуфене. Изучены физико-химические свойства

зтырёх пиразолкарбоновьх кислот, использующихся в синтезе дибуфена.

8. Разработана методика анализа лекарственных форм бефола. Дред->жена методика экстракции бефола из лекарственных cjopw для определил устойчивости лрепарг^та. Определена однородность дозирования предл-жен тест "растворение" для таблеток бефола и дибуфена.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Разработка лекарственных форм и методов анализа препарата

л (в сзавт.) - Тез.'У1 Всесоюз. съезда фармакологов, Ташкент, '88, с. 2S6.

2. Химико-фармацевтическая технология а анализ бефола (в соавт.) Ь кн.: ие-1ол - иовкй оригинальный отечественный аптиденрессапт, сква, АМН СССР, 1359, с. 202-2ТО

3. "Не годи анализа пр«иир; тй бефол (в соавт.) - Рук. деп. в Хим.

jSiiO.

4. Контроль производства бефола. I. ТСХ анализ п-хлорбензойно

кислоты. ( в соавт.) - Передовой опыт в мед. пром., 1990 - № 8. -С. 45-48.