Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Влияние пневмотропных цитотоксических сывороток и иммуноглобулинов на реактивность здоровых и больных респираторными болезнями овец

ГОСУДАРСТВЕННА^ КОМИССИЯ СОВЕТА МШИЗТРОЗ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗА?ЧЩМ

АЛМА-АТИНСКИЙ ОРДЕНА ТРУДСЕВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ 300ВЕТ2РКНАРГ1Й ИНСТИТУТ

На правах рукописи

МУРАЛШОЗ КАРЫМШ КАИРКАНОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ПНЕВМОТРОПНЫХ ВДТОТОКСИЧЕСКИХ СЫВОРОТОК И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ НА РЕАКТИВНОСТЬ ЗДОРСЯЖ И БСДШНХ РЕСПИРАТОР- . НЫМИ БОЛЕЗНЯМИ ОВЕЦ

Специальность- 16.00.02-^Патология, онкология

и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на ооисканиа ученой степени кандидата ваторинарных наук

/■лма-Ата - 1990

Работа выполнена на кафедре хирургии и основ ветеринарии Алма-Атинского ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарного института.

Научный руководитель- доктор ветеринарных наук,профессор ■ ЛОПАТНИКОВ Г.И.-

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук.профессор САЙДУ,;;,'ЛН Т.О. ;

- кащгидат медицинских наук КРИВДИНА Л.В.

Ведущее учреждение - "-ззахский научно-исследовательский ветеринарный институт.

Защита состоится года в

часов на заседании специализированного Совета К.120,41.01 по защите"диссертаций на соискание ученой-степени кандидата ветеринарных наук при Алма-Атинском ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарном института.

Адрес института: 480013. г,Алма-Ата. проспект Абая,28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотека института.

Автореферат разослан года.

■ •

1ченый- секретарь специализированного совета, кандидат ветеринарных |"эук. аоцзнт

К.Б.БИЯШЕВ

I. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность теми.. В настоящее время наша страна переживай сложное экономическое положение. Одной из «акнеиинх проблем била и остаетсн выполнение Продовольственной ирогрьм-ии СССР, решение которой неиоход.шо осуы.естшш. в бликайшие. сроки. Одним из условий реализации Продовольственной программы является обеспеченно сохранности поголовья животных. Вместе о теи потери низотных и получаемых от них продуктов животноводства, вследствие высокой их заболеваемости,остаются весьма значительными. Довольно высокив^ютери от заболевании наблюдаются и в овцеводстве. Причем наибольший процент гибели и непроизводственных расходов здесь наблюдается среди молодняка. Первое место среди болезней, наносящих наибольшие потери в этой группе животных,принадлежит болезням органов дыхания.

По литературным данниъ и результатам нагшх наблюдений,потери от них могут достигать 50 и Солее процентов от общей гибели от различных засолеваниЛ.

Несмотря на большие экономические потери, наносимне респираторными болезнями овцеводству, меры борьбы с этими заболеваниями все еще остаются недостаточно разработанными.Основные трудности борьбы с этими болезнгши оьязаны с неоднозначностью причин,способствующих возникновению этих болезней,а такяе с участием неоднородной ыикрофлорн в воспалительных процессах, возникающих в трахее» бронхах и легочной ткани.

Вое попытки, направленные на разработку спец.; }ичоски.; методов профилактики легочньс; заболеваний до ого врекечк не дали лойотвенникх результатов,поэтоиу моропритгич по борьбе с этиыи Оолинйш базируется, глатчч' оОргзом, на лочгяин Сол-них яиррт»кз и уотрячепии причин препр15 .м^лагакаи* к зя^о-

леванию,а также к повышению общей резистентности организма живот-

К числу мероприятий,направленных на повышение общей резис-гентности организма атиоситмя прежде всего применяемые о лечебно-профилактической целью различные стимуляторы,и в частности, цитотоксические сыворотки.

Из этой группы препаратов наиболее изученными являются цитотоксические сыворотки общего действия- антиретикулнрная цитоток-сическая сыворотка (АЦС).

Как в медицинской, так и в ветеринарной практике в последние *%оды, наряду с антиретикулярной сывороткой, иироко применяются сыворотки направленного действия - органотротше цитотоксические сыворотки (прооварин, протестикулин, овариоцитотоксичвская сыворотка, антилимфоцитарная цитотоксическая сыворотка и др.). К препаратам подобного рода относятся и пневмотроляг : цитоток-оичоскап сыворотка, которая в после/ ие годы прошла иирокув апробацию при респираторных болезнях телят ( Лопатников Г.И., Мшшасов И.И. и др.,1988,1990; Б.Ф.Дымко и др.,1988).

Что касается возиовности получения и применения различных видов пневмотропных цитотоксических сявороток (ПЦС) при респираторных болезнях овец,то атот вопрос оставался недостаточно изученным,

В этой связи проблвиа получения различных видов пневмотропных цитотоксических сывороток и иммуноглобулинов и изучение их действич на организм здоровых и больных респираторными болезнями овец является весьма актуальной.

Цель и задачи исследований. Основной целью исследований являлось изыскание различных методов получения гомологичных и ксеногенных пневиотропных цитотоксических сывороток и икмуно-

глобулинов и изучение влияния этих препаратом на организм овец в норме и патологии.

Ддп достижения этой цели были определены следующие основные задачи:

1. Получать высокоактивные гомологичные и ксеногениь'е ци-тоюксические сыворотки и иы.'.уиоглобулинв против легочном ткани оьец.

2. разработать рациональные методы титрации и уточнении дозировок пнсБмотрспньк циготоксических сывороток и иммуноглобулинов.

Изучить влияние различных видов пневмотроиных цитотокси-ческих сывороток и иииуноглоОулинов на некоторые морфологические и биохимические локааатели кропи здоровых 15 больных респираторными болезнями овец.

'и Изучить цитонатическоо и нирусингибирую^ос действие различных. видов ПЦС и иммуноглобулинов.

5. Провести производственное испытание различит: ьилов ПЦГ и иммуноглобулинов и влияние их на заболеваемость и течение респираторных болезней ояоц.

Научная чновизна. Получена высокоактивные гомологичные и ксс-ьогенные для овец пневчотрошшо цитотоксичеокие сыворотки и ии-цуцоглобулинн. Разработааи рациональнее методы титрашш и он— ределение оитииальнях доз ПЦС и иммуноглобулинов, с лримеьениен реакции нопрпкой геиаггл^тинаш»? и остановки внуп'нпгямои про-Ом с янд»!! ерентянма лрепараташи Впсргно в культуре кла-ок изучено цигслптическое действие гомологичных и ксеног«нпых инов-нотропикх нитотоксичсских сывороток и иммуиоглоОулкаог.п топж» вируог,нгкоируиЕи.о действие этих препорптор «л прикорм гидосп гриппа.

Изучено влияние гомологичных и коеногениых пневмотротшх цитотоксических сывороток и иммуноглобулинов на заболеваемость респираторными болезнями, характер течения этих болезней, а также влияние этих препаратов на некоторые морфологические и биохимические показатели крови.

Практическая ценность роботы. На основании проведенных исследований можно прийти к заключению о целесообразности применения гомологичных и ксеногенных пневмотровдых цитотоксических сывороток и иммуноглобулинов в целях профилактики и лечения респираторных болезней овец.

Внедрение в практику разработанного метода определения оптимальных лечебно-профилактических доа при помощи нндифер: ситных препаратов позволит обеспечить Солео точную дозировку цитотоксИ" ческих сывороток.

На защиту выносятся:

1. Получение, титрация и определение оптимальных лечебно-профилактических доз различных видов шшвмотропных цитотоксичсс-ких сывороток и иммуноглобулинов.

2. Влияние различных видов пневиотропных цитотоксических сывороток и иммуноглобулинов на некоторые морфологические и биохимические показатели крова аивотных.

Апробация роботы. Основные полопения диссертационной работы доложены и обсукдеиы па научной конференции прсфессорско-препо -давательского состава и аспирантов Алма-Атинского ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарного института (1968), ка Региональной научной конференции ( Улак^Удэ,1990), на иеявузовской ьаучно-практической конференции ( Фрунзе,1990), на раогарениом ¡¿¿»кафедральном заседании Алма-Атинского ордена Трудового Крас-1'.ого Знамена зооветеринарного инсгитута(1990).

Публикации. Основные положения и выводы диссертационной работы опубликованы вт р в'х- научных статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 129 страницах машинописного текста к состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, итогсз ^аботы(обо0-щение, выводы и список литературы). Работа проиллвстриро-"на 37 таблицамк.Списск литературы включает 184 наименования источников, из них 149 на русском языке и 35 на иностранных языках.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследования. Исследования проводились с 1988 по 1990 гг. на кафедре хирургии и ооноз ветеринарки \т2.~ Агинского ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарного института и в хозяйствах Алма-Атинской и Восточко-Казехотанскил областей.

В оптах использовано свыше 10 тысяч овец различных хозяйств,8 ослов,18 кроликов и 210 белых мышей.

Р&бота по получению различных видов пневиотропных питототсси-ческих сывороток ( ПЦС) проводилась о I988.no 1989 год.Всего было получено б серий цитотоксических сывороток.

Для получения, ксеногенных пневыотропных сывороток в качестве продуцентов использовались оолы 3-4-летнего возраста, гомологические цитотоксические сыворотки получали на овцах. Первоначально гип-риммунизацшо проводили по разработанной на кафедре методике с применением неполного адъюванта Фрейнда, з дальнейшим кроме этого адыованто, попользовали гидрыкнсь алюминия (ГОА) в б\1% концентрации.

- б -

3 качестве антигена использовалась легочная ткань овец, которая измельчалась,отмыв .ась физиологическим раствором до исчез новенля видимых примесей крови, гомогенизировалась с прибавлением физиологического раствора из расчета 9 мл на I г ткааи..Получокнан суспензия центрифугировалась при 2500 об/мин з течение 20 кинут. Полученная кадосадочная вдкость ксполг~овалась в качестве антигена. Антиген подвергался обработке антибиотиками ( по 1000 ЕР пенициллина и стрептомицина на 1,0 >лл материала),выдерживался 2 часа в термостате при температуре 37°С., Соотношение, антигена и адъювантов бралось 2:1. Ангигекы вводились подкожно из,расчета 0,25 мл на I кг живой нассы с интервалом 7 дней, трехкратно.

Взятие крови проводилось на 21 день после последней иммунизации у ослов з объеме 2-3 литра. Полученная сыворотка консервировалась 0,5^ раствором фенола и проверялась на активно-cti стерильность и безвредность.

На бактериальную стерильность сыворотки проверялись посевом 'га 1!ПБ к питательный агар. Безвредность полученных препаратов проверялась:путей нодконного введения кроликам в объеме по 0,5 кл,с использованием по 3 животных на каждую серию,а также шести белым икшам по 0,3 мл внутрибршинно,с последующим наблюдение!.: за всеми животными в течение ^0 дне?'.

Выделение из получение пневмотропнкх цитотоксических сывороток иммуноглобулинов проводилось методом фракционирования с ломощ-,» этанола (Coiux et Со^ол/с ,19^9). Определение активности каждой серии ПЦС и иммуноглобулинов проводили в реакциях с:ы;зивакия комплемента ( Калинин B.C., Гинсбург,194б), преципитацией в агаровом геле по методике Оухтерлони, РИГА по Бакдену < 'о о,1951) и вьутрикожной пробой, модифици-оованной Лопатниковш Г.И.,Нинжствым Ы.И. и др.(1986).

Титрация иДС проводилась на овцах колхоза " Луч Востока" Талгарского района Алма-Атинской области, " Колгутинскп?," Кур-чуыского района Восточно-Казахстанской области.Каждая серия сывороток тптро. .лась на 15 овцах, для уточнения дозировки на лаедую дозу бралось по 3 животных, всего в этих олытах было использовало 306 овец 3-4- летного возраста.

Титрация дозы проводилась но схеме: ПЦС и иммуноглобулины разводились изотопическим растсором хлорида натрия ? разведениях 1:320, 1:640, 1:1200 и т.д. до 1:10240. Аналогичные разведения делались и с нормальной сывороткой для контроля. Титрация проводилась на клинически здоровых, средней упитанности животных. Пестом титрацци служила внутренняя поверхность бедра, где ставилось до б проб различных разведений сшоротон.

Места введения дезинфицировались 70$ спиртом-ректификатом, после чего сыворотки,в указанных разведениях, вводились по 0,2 мл внутрикоано и симметричные участки кожи противоположной конечности вводилось нормальная сыворотка в таких »е разъеданиях.Учет пезультатов осуществлялся через 2 часа. За титр активности цитотоксической сыворотки принималось ее предельное раэвзденио, при внутрикояном введений которого э дозе 0,2 мл на место инъекций возникает реакция,при польом отсутствии или незначительной выракенност.ч таковой слабее,более чем в 3 раза на месте введения нормальной сыворотки»

Уточнений дозировки проводилось на 216 аивотньх по 3 головы на каждую дозу препарата. Для уточнения дозировки, пород подкожным введенной испытуемых доэ у овец проверялась оОаа.. реактивность организма путем носганопкн инут^иксжноИ пробы. Затем эти яе пробы ставились !>а противополозной конечности.

При постановке таких иооб с использованием ПЦС,последние вводились в дозе 0,2 в удвоенной титре. Подкожно препарат вводился в дозах блиакмх к расчетной по титру( 2 мл тигровых единиц на I кг живой массы),Так, если расчетная доза для кивот-них кивой массой ч5-50 кг составляла 0,8 ил сыворотки разведенной 1:10, то для определения оптимальной доэы шш ныа вводил» I группе - 0,4 ыл, П-й - 0,6 мл, Ш-й - 0,8 ыл, 1У-Й - 1,0 нл, У-й - 1,2 ил и У1-Й - 1,4 мл. На 3-7 день все гшвотные вновь проверялись на реактивность. Результаты полученные после первичного и повторного внутрикожного введения сопоставлялись и анализировались.

За оптимальную дозу сыворотки принималось ее количество, при подкожном введении которого, при постановке внутрикогшой пробы,отмечалось наиболее выракенПап, по сравнении с первичной, местная реакция.

йрл определении оптимальности дозировок, для исключения влияния аллвргизеции животных, наряду с НЦС. применялась такие постановка зюй Пробн с применением индифферентных препаратов ( 5% раствор хлорида натрия и дистиллированная вода},

Цатопатическое действие ПЦС и иммуноглобулинов изучалось ¡¡а культурах фийробластоэ куриного аыбриона и клеток Нер-2 (карцчома гортани чояовока).Работы по изучение этих вопросов проводились в условиях лаборатории кафедры и вирусологической лаборатории ДорСЗС.

Изучение ингибирувщего действия ПЦС и иммуноглобулинов ка репродукции вирусов в культурах клеток проводилось на прикеро вируса гриппа человека ( 200 ЦПД50).

Изучение влияния ПЦС и иммуноглобулинов на накоторго показатели периферической крови проносилось на здоровых и больных гноПно-катарэльпой шшчмонией овцах.

Подсчет эритроцитов I- лейкоцитов проводился "? тамере Гг~ рявва, гамоглоб.ш определялся гемометром Сочи. ООЭ- про помощи аппарата Пэнчашсо. шел очный 1 ззерз - по Хоцдрахииу (1974). каталаза - по Баху и ?убковой (1959), обдий белок- по ло.ури, Кушманову О,Д. и др. (1974) ; иммуноглобулин определялись по Мак-Эваиоу. Костину А. (1983) и альбумины- г,о Слуцскому Л.И, (1964).

Производственное испытание ГЩС на заболеваемость не специфическими болезнями и влияние их на продуктивность животных было проведено в откормочном комплексе совхоза " Калгутинский" Курчумского района Восточно-Казахстанской области.Всего в опытах бшо испольэотано 9623 уивотних. в том числа 3210 голов было обработано ослиной. 3195- овечьей сыворотками и 3208 овец было оживлено лля контроля.

Наблюдение волооь за животными в течение 90 дней, о учетом габолаваэмости. патока а выпущенного убоя, а такта прирост етвой массы за период наблюдения.

По окончании опытов, результаты оопоставлялиоь о результатами контрольной группы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Получение, титрация и опг целение дозировки гомологичных и ксеногенних пиезмотролных цмтотоксических сывороток и иммуноглобулинов

Как нами уке сшечалось пневмотропнье цитотоксичсские сыворотки впервые были получены с широкой апробацией в производственных условиях на кафодре хирургии и основ ветеринарии в 1983 году.

Применение этих препаратов с лечебно-профилактической целью на многих тысячах телят показало виоощю их эффективность. Змеето с том в ряде случаев при повторных использованиях сывороток были отмечены некоторые их недостатки. К числу последних аренде всего следует отнести возникновение случаев осложнений, ь частности, сывороточной болезни. .Причиной возникновения этих ослс:пншш.; явилось аллергиэация организма связанная с ксеноген-ност^а применяемых препаратов.

В этой связи, одной, иа поставленных задач перед нами являлось изучение возможности получения гомологичной «иевыотроп-1!0Й цитотоксической сыворотки.

Кроме того на овцах, несмотря па широкое распространение респираторных болезней среди этого вида животных, ранее пневмо-тропиые цитотоксические сыворотки не апробировались.

Работа по получению различных видов пневмотропных цатотокси-ческих сывороток проводилась с 1968 по 1989 год, всего аа протяжении этого промежутка времени было получено 6 серий цитоток-сичеоких сывороток. При постановке первых опытов, гипериммуни-зыпя проводилась по ранее разработанной на кафедра методике с применением неполных вдьввалтов Фрейнда. В дальнейшем, крове этого адъвванта использовалась гидроокись алюминия (ГОД).

Ке.к в первом,так и во втором случае антигены вяодипсь подкожно из расчета 0,25 мл суспензии па 1 кг кльои ;.:ассг с интервалом ? дней, трехкратно, Взятие крови прободалось па 21 день поело .¡ослсдней икмуназации, от животных получали кровь в оОьоме: от овец 250-200 мл, от ослов - 2-3 литра. .Полученная сыворотка консервировалась 0,5;" раствором фонола м ¡¡{/сверялась на активность, стерильность ;; безвредность.

Из полученных пневмотропних цптотоксических сшкротск • были выделены иммуноглобулины, с целью уменьшения количества неоиоцифичгских селков,солеи, лиаидов и других Оаластных ве~ цесть,содержащихся в них. Имму.чоглобулнлц из ПЦС вкделенн методом фр&кциоиирования с .юмоць» этанола (С'-'1'1 ^ 11 * ,19^9). Определение активности какдоГ. серии ПЦС и иимуноглооуликов проводит в реакциях связывания комплемента, преципитации в агаровом геле, РИГА и внутрилокной лробои.

Результаты.полученные при постановка этих реакций приводятся в таблице I.

Табпица I

Результаты определения тг;трд ГПЙ и им:'уно"лобУ-линоч в РСК.РЛ.РНГА и анутрикоклоП пробой

Ш : Виды сыворо- :Используемнй;Татрн оыпор->ток и -шмуноглобу- I

ССРПЙ- глобулинов3" 5 адь""» — - - - " - ~ ---v-

: : : РСК : РП : РИГА :Бнутри-'

. кожная '■

* • * ' 'ПС I

I ЩС оолинчй ■¿райнпа 160 16 1260 12ПС

2 ПЦС ослиный ГОА 160 32 2560 2Г;<"0

3 ПЦС овечий ОреЯнда 80 Л 640 Г 50

4 ЩС овачгЯ ГОА 100 8 12Г ШЮ

5 Кммуноглобуля- !ш ослиппп ФрвЯняо 220 64 0120 1/120

6 гол 24Г Г28 ГС № /ОЛЧР

7 1!.\1муноглг'.1у т-|Г» ОН^-Ш! Фра1?чла ЮС - V П.РС

8 и хГЛ 120 о 2 «л. .'.С '■»-"/Г "

Из таблацц видно,что наиболее низкая чувствительность при постановке реакции с легочной тканью овец отмечалась реакция преципитации. РСК па своей чувствительности цла примерно в 10 раз олав чувствительной. А чувствительность РИГА и внутрвкожпая проба давала полот-штольную реакцию в размвлании примерно э 100 более высокую , "зам реакция преципитации в агаровом гала.

Судя по всем реакциям гомологичные сыворотки и иммуноглобулина обладайт значительно меньшей активностью нежели гетерогенные,при это?.! сыворотки полученные с применением антигена с гидроокисью алюминия отмечалась значительно большая активность,чем при применении антигена с адъювантсм Фрайнда(примврнов 2 раза).Основываясь па этих данных все дальнейшие исследования направленные на получение цитотоксичоских сывороток .нами проводились с Еспользованивм в качества адъювапта 6,7% гидроокиси алюминия.

С^шочзвостно.что состояние обаей реактивности оказывает существенное влияние на жизнедеятельность животного организма.Смним из метопов определения общей реактивности является постановка внутри-кодной пробы при помощи цитотокси49ских сывороток. Применение этого метода, по мнению ряда авторов, позволяет проводить не только Констанцию общего состояния организма, но п достаточно'достоверно судить о динамика развития болезней, а следовательно и проводить оценку применения средств терапии(В.И.Ио;|фз и пр.,1979; Г.Ы."ва~ но пл. 1951 и др»). Основываясь на этих данных. ка<£адрой хирургии и основ ветеринарии разработан метод определения оптимальных доз цитотоксачаских сывороток путам постановки вкутрикожнкх проб в посла применения сывороток.

Как показала послздуш«е исследования, состояние обшей реактивности можат «грата большую роль а при оценка результата аллергических иссладовзиаЗ,, так как при помощи этих методов удается заявить животных тхошипхея в состоянии аллергии, оценка пека-

зэтэлей иммунобиологических исследований у которых на может считаться достоверной ( Д.Д.Новак.1984).

Отмечая положительные стороны этого метода.нельзя исключить того.что при неоднократном использовании одних и тех же цатотоксн-ческих сывороток создается возможность появления нетипичных реакций в связи с возможной сенсибилизацией организма вивотных( Козловский В.В.. Емзльянанко И,Л.и др.. 1983).

По мнению Д.Д.Новака и дрЛ 1984).более нздвмиыа результата здесь можно получить при применении,для определения обшей реактивности организма, гяотаминной пробы.При этом,как оказалось, результаты, полученные при ее постановке, почти полностью совпадает о таковыми, получаемыми прп вяутрикояном введении АЦС( Болобаб.в. и др.).Судя по этим данным, можно прийти к заключении,что при постановке внутрикожиой пробы воспалительная реакция монет возникать не только под действием антител .но и других препаратов,причем степень ее проявления зависит от реактивности организма. В связи о этим нами были поставлена опыты по изучении возможности применен ил, для определения обаей реактивности организма, других аидифериитных химических препаратов.В качестве последних были испытаны: хлористый кальций, спирт ректификат, глицерин, глюкоза, хлорид натрия в различных концентрациях,а такяа дистиллированная вода. .

Постановку опытов проводили на овцах. Препараты вводили внутри-колшо в дозе по 0,2 мл овцам в бесшерстную внутреннюю поверхность бедра, в спмметричнуи область протпвопилошшй коцечпостп вводилась ПЦС в удвоенном тигре.

Пр;- постановке этих опытов наиболее' стабильные результат помп были получены при применении дистиллированной воды и 5% раствора хлорида? натрия. Основываясь на этих донных, последую оно опыты по изучению изменений обшей реактивности у овец производились только с применением раствора поваренной соли, и дистиллированной воды с сопоставлением получошшх данных с результатами .отмечавшимися прп применении ПЦС,

Опиты отавшшсь о том же порядка,как и в предыдущем случае. Разнице заключалась а том,что на кавдом кивотном испытивалоеь 3 праг.арата: дистиллированная вода, Ъ% раствор хлорида нстрия и ПЦО в удвоенном титра.Вводанка первых двух препаратов проводилось ов~ цам- в левую внутреннюю поверхность бедра, о симметричные участки кожи, для контроля вводилась ПЦО. Учат реакции во всах случаях проводился чарвз 2 часа. Результаты постановки опытов приводятся в таблице 2,

Таблица 2

Стапель проявления раакции на вщтрикохное введение 5% раствора хлорида натрия, дистиллированно;: води и пневмотропной цитогокоической сыворотки (ПЦО) овцам.

Ш :Инвентарн.:., _ __Еок"да_,Раэщ1Я_(„мц)____.

пп . номер раствор хло-; Дистиллирован- : п

. рвда иатрпя . {пя води • • • •

I. 4616 ' 16 15 26

2. 2418 4 4 6

3. 2419 13 12 16

'1. 2910 14 13 22

5. ¿749 7 7 9

6. 7208 14 13 23

7. 0447 5 Г .1 7

е. 4995 ,18 18 29

о "Г 1316 'Я п

ю. 0760 1С 15 26

Ил мате риалов,приведенных в таблице видно,что у овец степень проявления роакцпи на все 3 препарата у всех кивотных находилась в опоакьланноЯ корреляционной зависимостп. Практически вез иивот-пыа.лоеавшав рззко влраг-енну» реакцию на цитотоксическую оыворот-^у,реагировали при.шрно в тако!1 жэ степени на ¿ведение чиствл-лированно? вгпи и Ь% раствор.-! хлорида натрия.

Лополиптелыша дашшэ била получены в 1969 год-, на 167 ов-н-'.:.ига этом также установлено.что пси введении этих пре-

паратов одним и там т животным в разные .участки кожи, внутренних поверхностей бедер,степень проявления реакции на все 3 препарата била примерно аналогичной. Практически все животные дававшие резко вц» раженную реакцию на цитотоксическую сыворотку, повышенно реагировали также к на введение 5% раствора хлорида натрия и дистиллированной воды (138 овец) и наоборот, у араактивннх и малорэактивных животных реакции на псе 3 препарата почти отсутствовали или были слабо; выраженными (23 овцы).

Основываясь на этих данных мояпо прийти к заключению,что опре- ■ деление состояния реактивноотн животного организма может проводиться но только путам постановки зпутрпконной пробы с использованием цитотоксических сывороток и гистамина, а такжв и других химических ввшо-ч, обеспечивающих возникновение,на месте введения, кратковременного воспалительного отека, степень проявления которого может служить критерием для определения обаей реактивности организма животных. В этой евл^п, в дальнейшем, при уточнении дозировки каждой серии ДЦС, применительно к цнтотоксичаскпм снвороткем,мы широко пользовались постановкой впутрикогащх проб ш овцах с примечанием а качества раздражителей дистиллированной воды и 5% раствора хлорида натрия.

дшш

В этиологии респираторных болозней молодняка овец особое место занимает вирусная инфекция ( Соколов Ы.И., Коваленко Я.Р..1581; Глухов М.И. я др., 1232),

Заболеваемость с участием вирусов в отдельных случаях достигала 43 и более процентов.

Вирусингибнрутаае действие цитотоксаческих сывороток впервые было одасано С. Л', Си I г. У. (1939); изучением действия антлцэ-

люллярннх сывороток было установлено определенное влияние этих

- 16 «препаратор 11а репродукцию вирусов в культурах ткани»

В задачи наших исследований входило изучить цитопатическоа действие ПЦС и иммуноглобулинов на культурн фибробластов куриного эмбриона и Нер-2(карийоны гортани человека),а также исследовать ииги-бирующее действии1 этих препаратов на репродукцию вирусов в культурах клеток.

Для установления степени цитопатичзского действия ни культурн клеток,ПЦС! и иммуноглобулинов,проводили метолом татрации в различных развадениях( от 1:10 до 1:640). П<зрад этим неспацифнческис ингибиторы устранялись подогреванием в водяной бане в течение 30 минут. ксекогенпых сывороток при 61°С. гомологччных- при 56°С.

Для контроля били поотавлени аналогичные опиты с нормальнцма снвсроками,культуры клеток без сывороток.

Наблюдение валось и течение 10 дней.При этом уотач злено,что ПЦС в иммуноглобулина оказывают определенное влияние на культуры кла-ток.Так Щ%о коапоганних ПЦС и иммуноглобулинов было соответственно в пределах раэвацений Х:1С0 и 1:640, гомологичных ПЦС и иммуноглобулинов - 1:40 и 1:160.

Контрольные сыворотки,как ослиная, так и овечья,также облапал и слабыми цитопатогенными свойствами, но титр ЦПД50 здесь составил у ослиной сыворотки 1:20, а оэечгай- 1:15. Причем цитоток-спчаокий эффект в обоих случаях на культуры клаток проявлялся на 5-3 день.

После проведения предварительного исследования г.о изучению предельного титр? втивтэлого ЦЩ^ в культурах клаток, шнш проведен: исследортние иигибирующего действия ПЦС и иммуноглобулинов но репродукцию вгрусов в культурах фябробластои курИиЛ о эмб-рионя ; клеток Нер-2.11рп этом во всех случаях ПЦС а иммуноглобулины '.сладовялись начиная с титра, не гшпиегг реакции на ЦШЦр гэ культурам тканей.

Изучение ангибирующаго дайотвпя проводилось на примере вируса гриппа человоко{200 ЩЩ^). В культур« ста ток вводили испытуемый разведения ПЦС и иммуноглобулинов «посла чего к ним набавляли указа шш'1 сируо гриппа в разведения 1510.

Для контроля ставились аналогичные опыта о нормальными сыворотками и культуры клеток с вирусом»баз сывороток.

Ут при постановка первых опытов было откачено,что под действием коеноганных ПЦО отмечалось торможапва репродукции вирусов,причем в довольно высоких разведениях сывороток.

Коеногашша ПЦС задаривали репродукции вирусов на протяяиняо 7 дней а разведзшш 1:700,а в развадонин 1:460 па прогяненпо всо-го периода наблюдения.

Е:'с более вырамниов ингибпрушюв .действие бало отмечено при использовании пшуноглобулинсв.пцюзяешшх из ксеногашщх ПЦО. Репродукция вируса гриппа под ого действием на отмечалось в течение 5 дней при разведают 1:ЭС0. о под действием этого препарата п разводами 1:700 па протягвнша 10 дней { срок п-блнзашш). Более слабее впгибврупваа действии на с:;руо отмечалось пря использования | 70М0Л0П1чных ПЦС.под ее воздействием репродукция вируса на отшчо- ''. лась при разводашш 1:500 пз 5 дань псслсдосаппл. а о разводами 1:200 репродукция вируса на отмачалаоь на яротяжапио 10 дней.'

Насколько луч сто результаты била полуют! при использования иммуноглобулинов, вшншнтй пэ гомологичны:: ЯШ, задержка рапро-дукцип вирусов на прогягавиа 3-х дней пдйсь била отмечена а разва-дзшш 1:600, а в раэвэдаипа 1:400 репродукции вирусов на наблюдалось в течанга 10 днзй.

В контрольных опитах нормальные сыворотка не обладали пнгнбп-руашими спойстезмп га репродукция вируез гриппа.

Культуры клеток с вирусом баз сывороток была такта поряяэны полностью.

Из полученных результатов следует.что пнавмотропниа цятотоксп-

часкиа сгворотки и иммуноглобулины обладают определенным ицгиби- ' рукхшш действием на репродукцию вирусов гриппа на культурах клеток. Видимо, првпантивноа и лачабноа свойства ПЦС и иммуноглобулинов при вирусных распираторннх инфекциях можно в какой-либо мара объяснить впрусиягибиругаишм пайотвием этих препаратов.

Изучанкз влияния паавмотропных цптотоксических сывороток и иммуноглобулинов на некоторые показатели парифаричес. крови эдорочцх и болышх респираторными болезнями овец

Работа по изучению влияния действия ЩС и иммуноглобулинов на организм здоровых овац проводилась на животных кафедры хирургии и осноа ветеринарии и совхоза " КолгатинскийнКупчумского района Восточно-Казахстанской области.

При проведении опытов было взято 5 группы овец по 25 голов в каядоП.Животина I группы обрабатывались ослиной ПЦС, тавотные П-й группы - иммуноглобулинами,полученными из стой сыворотки; та-вотнна Ш группы- гомологичной овечьей ПЦС, 1У-й группы- п.эд но глобулинами из этой сыворотки и У-й группы - служили контролем.

Препараты вводили двухкратно в оттитрованных дозах, подкожно. Парад постановкой опытов и на 7,14.21 к 30 дни бралась кровь для йссладования на морфологические и биохимические показатели«,

Как покапали результаты исследований под пайотвием коаногенных пл9Вг.:этропних цитотоксичаских сыворотак происходят опрапаланнна измвгагтя как морфологических,так и биохимических показателей в пври(?вричаской крови тавотных. Так о 7 дня происходит нарастаниа обшаго количества лейкоцитов, эритроцитов а гемоглобина, которые к 14-21 пно после введения оыв^роток достигают пика о последующа« некот^рн»! снигащвам етих показателей.

Примерно такнв жо йзменания, отмечались и при иослоловании

ОС 1"ГО Гкшш, ИИМуПОЬЮбуЛПИОВ В 1ШТПЛЛЗП.

- 19 -

Что касается показателей СОЭ, щелочного резерва и альб.уминов, то эти показатели за период исследований, изменений не претерпевают и находятся примерно на таком же уровне.

Примерно такие же изменения, были отмечены и при изучении изменений тех яш показателей крови под действием ксеногенных иммуноглобулинов. выделанных из той же серии сыворотки.

Все-исследованные .нами изменения показателей крови и их сыворо-' ток;отмачавшиеся нами под действием иммуноглобулинов практически ничем но отличались от таковых отмечавшихся под действием пневмо-тропных цитотоксических сывороток. По нашему млению это свидетельствует о том.что в этих изменениях главная роль принадлежит именно иммуноглобулинам, другие фракций сыворотки крови на оказывают заметного влияния на эти показатели. Достогерность материалов.получениях нами показателей крови под действием сывороток и иммуноглобулинов подтверждается там.что эти'показатели в контрольной группа, за весь период наблюдения на претерпевали заметных изменений. Примерно такие же результаты были получаны при изучении влияния на биохимические и гематологические показатели крови гомологичными пнавмо-тропными цитотоксическими сыворотками и иммуноглобулинами.

Изучение влияния пневмотропных цитотоксических сывороток и иммуноглобулинов на некоторые гематологические и биохимические показатели крови овец больных респираторными заболеваниями,проводились в лечебно-санитарном пункта колхоза " Луч Востока" Талгарс-кого района Алма-Атинской области.

Овец с внешними проявлениями клинических признаков распиратор-ных болезней разбили на 5 групп по 30 голов в кастой. Животным первой группы ввели пневмотропную цитотоксическую сыворотк?.полученную от ослов, вторую обработали иммуноглобулинами.выделе иными из этой сыворотки, третью- ПЦС,полученных от овец, четвертую- иммуноглобулинами от гом')логич:;-::х ПЦС. пятая группа слуяила контролем.

— 3CL-- —

Препарат вводили двухкратно с интервалом 7 дней в оттитрованных дозах, подкожно в области средней трети<шеи. Перед постановкой опыта и на 7,14.21.30 дань проводилось крововзятие для морфологических и биохимических исслбдований. Все подопытные и контрольное животные и контрольные животные находились совместно в одинаковых условиях кормления и содержания.

Все животные в необходимых случаях подвергались лечению антибиотиками (тетроолеан, бициллин- 3).

Как показали результаты исследований в группах, обработанными пневмотропными цитотоксическими сыворотками ужа начиная с 7 дня происходили сдвиги морфологических и биохимических показателей крови.Увеличивалось количество эритроцитов, повышалось содержание гемоглобина, щелочного резерва, общего балка и иммуноглобулинов. Показатели эти достигали пика и к 21 дню, затем незначительно «снижались к 30 дню от начала опыта.

Показатели каталазы и альоумина несколько снижались к 21 дню от начала опытов(на 35-47$).При этом динамика изменений, как морфологических, так и биохимических показателей крови у исследованных животных под действием гомологичных ПЦС и иммуноглобулинов соответ ствовала таковой, отмечавшейся при применении ксоногенних препара-тов.Вместе с тем следует отметить,что по-видимому это связано с тем,что при применении гомологичных препаратов,сыворотка как таковые на воздействуют, на органик-.! как антиген.

Наиболее значительные изменения в положительную оторону у этих животных по показателям количества лейкоцитов, СОЭ, резервной щелочности и каталааа, это по- видимому, связано с пераболаванием животных и нормализацией дыхательных функций легких. Что касаатся количества эритроцитов, гемоглобина, общего белка и иммуноглобулинов в периферической крови контрольных животных, то содержание их также изменяется в лучшую сторону, однако эти изменения значительно уступали таковым, отмечавшимся при применении как гомологичных,

- 21 -

Последнее обстоятельство,по вашему мнению, можно объяснить общастимулирующими действиями цитотохсинов в опытных группах.

Обобщая приведенные данные, можно прийти к заключению о высоком отимулирутам эффекта пнавмотропных циготоксичаских сывороток.

О благоприятном действия этих препаратов можно судить такка по разности сохранности поголовья в опытных и контрольных группах. Так, па протятениэ 30-ти дней паблвдвний и исследований язвотнцх. наибольшая количество потерь связано о бронхопнавмониай, отмачено в контрольной группа ( 8 голов),в то время как а подопытных группах потери это колебались от одной до чатнрах голов.

Основываясь tía результатах полученных прп изучении морфологических , биохимических показателей кровв, впруопнгибирубшпе свойства пнг-мотропнах цитотокоичаских сывороток п иммуноглобулинов,a Тают латзратзрных дошни, сяидетальствуйлих о високш лачабно-про-фплактипаском эффекта получанннх при применения ПЦС на телятах( Ло— патников Г.И», Минжаоов !<1.П.,196б) памп былп поставлены опыту по производственному испытанно ахкх препаратов га овнах.

Парад постановкой дтпх опытов пнввмотропиыа цитотсксачоскпа сыворотки били подйаргнутн тптрацпп' о посла,пушим определением оптн-м ольнше доз.

Основные опыта по взучанпп лзчабно-профзлактичзского дайствгл различных епдоп пнашотроппых цптотокепчеекпх сывороток были вы^ полнены о января по «арт, месяцы 1989 года в совхозе " Капитанский" Курчумского района Бооточно-Казахотанспой облаотп. Еивотныа содержались стойлсво в откормочном комплекса, гае содержалось 12 тысяч отец. bcíT кормление было по одпшзкоаому рациону.

Все подопытное поголовье было раэдалено на ?■ группы: гласит I группы обработали оолипой- ПЦС, П-Й - оаачьай Ш|3, Ш-д группа служила контрольной.

Результата постановки опытов приводятся в таблица 3,

Таблица 3

Производственное испытание влияния различных ПЦС на сохранность и продуктивность овец в совхозе "Кулгатинский" Курчумского района Восточно-Казахстанекой области

групп

Кп-во:Из них:Срадняя яивая :Средний!Пало и:^ паде-

ывот-.заболат масса,кг .прирост.внпуж-.жя и

им 'ло ----------- живой 'денно *вынук-

: :к на- :к кон- гмассы, :убито {данного

. .чалу . цу .кг . .убоя

5 'опыта ' опыта '

: : ; :

I ПЦС ослиная 3210 250 24,1 38,2 14,2 102 3,2

п ПЦС овечья 3195 280 24,6 38,4 13,8 124 3,6

ш Контроль 3208 420 24,3 33,5 9,2 296 9,2

Кз материалов таблицы видно,что в первой группе где применялась ксеногениая ослиная сыворотка сохранность поголовья составила 96,8^, средний прирост массы на одну голову - 14,2 кг. во второй группе, обработанной ПЦС сохранность поголовья составила 96,4?!. а прирост живой массы 13,8 кг. в то врш;я как в контрольной группа почти ня Ъ% ниже (Э1,8!?).0 оредний прирост кивой массы был равен 9,2 кг.

На основании проведенных опытов по испытанию пневмотрэпннх цито-токсичаскпх сивороток п иммуноглобулинов, можно прийти к заключение о целесообразности их применения с лечебной и профилактической целью при респираторных заболеваниях овец.

Наряду с отим мокяп отметить,что ксеногенгшв цитотгжоичэскиэ саворогня я-зляются более эффективными по сравнению о гомологичными, однако преимущество последних заключается в том, что они на чбпаппюг энафилптогетшм" сноПотвам в поэтому позволяют пэлноотью исключить мзяйкновеняв <зы"орот1чной болваня при повторном их примечания.

ВЫВОДЫ

1. Разработка с;семн иммунизации п методы получения высокоактивных ксеноганных.гомологичных пневмотротщх цитотоксичаских сывороток п иммуноглобулинов против легочной тканп овец о использованием различных здъювантов. и провалена сравнительная оценка действия стих препаратов на организм овец в норма п патологии.

2. Разработаны методики определения обыей реактивности организуй с применением идаиферантных препзратов нля постановки внутрикоя-ннх проб на животных.

3. Полученные пневмотропныа цпготокспческпа сывороткп п пммуно-глобулины обладают цитопатпчаскпч действием на фибробласта куриного эмбоиона п клетки Нер-2,а таквв ингпбпрувдям действием на рап-родукг 'Ю вируса гриппа в культурах клаток.

4. Применение ПЦС в кшуноглобулипов нэ здоровых и больщ»х респираторными болезнями овец способствуат нормализация морфологических

и биохимических показателей кровп.пргт их нарупанпях псвкяаат обяуп реактивность организма еявотдцх.

5. Применение пневмотропшсс цитотоксичаских сывороток и иммуноглобулинов в условиях производства, почта в 2 раза спипаат забола-ваемооть и гибель япвотшпс от расппратсргшх болззнзй овац.

пракпишсив ПРЕШШШ

1. Методику получения высокоактивных ——------. овачыяс

и ослиных пнешотропных циготокспческшс сывороток п применение этих ппепаратов для профвлактвкп п яе-чзнпя овец.

2. Способ« титрации пнвЕмотропннх цятотоксическпх снвсротаа и иммуноглобулинов и определение обпгай реактивности оргалит овец путем постановки внутрикодной проба с применением ицдиферввг-нше препаратов.

3, Полученные результаты по цитопатичаскому и вирусингиби-руюиаму действию могут быть использованы также и в учебном процессе при изучении соответствующих разделов потфизиологии и вирусологии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТБ2ЯЗ ДИССЕРТАЦИИ: .

1. Биохимические показатели крови овец при приывнешш лневмо-тропной цитотоксической сыворотки.- Тезисы докладов межвузовской научно-, тактической конференции.-Фрунзе.1990.- С.98-99.

2. Пнавмотропнне цитотокоические сыворотки и их применение при респираторных заболеваниях овец.Депонировано в КвзНИИНТИ.1990. -C.V.

3. Реактивность организма и способы определения в ветеринарной практике.Депонировано в КазНЙШТЙ, 1990.- 0.8.

/