Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Ускоренные методы диагностики мастита коров в лактационный период

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ САНИТАРИИ, ГИГИЕНЫ и ЭКОЛОГИИ (ВНИИВСГЭ)

РГб ОД

На правах рукописи

ИВАНОВА ОЛЬГА РШОВНА

УСКОРЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ МАСТИТА КОРОВ В ЛАКТАЦИОННЫЙ ПЕРИОД

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1994

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследователь-еким институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии и Прикаспийском зональном научно-исследовательском ветеринарном институте (г. Махачкала)

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор КАРТАШОВА В.М.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор БУШ) II.П. (ШИИВСГЭ)

кандидат ветеринарных наук, ТАРАНОВА Л.А. (Республиканская научно-производственная ветеринарная лаборатория 14СХ РФ )

Ведущая организация - Московская Государственная сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева

Защита состоится "^М^А^ 1995 г. в ^ час. на заседании специализированного совета Д.020.50.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (123022, Москва, Звенигородское шоссе,5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной санитарии, гигиены и экологии.

Автореферат разослан » // " М/б. _ 1994 г.

Ученый секретарь пеииализирсЕанного совета кг-идират Силлогических наук

Л.П.Пименова

- 3 -ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тепы. Цастит коров бил и остается до настоящего времени актуальной проблемой молочного скотоводства. О его широком распространении, о значительном акономичесхом ущербе, наносимом вивотноводству, свидетельствупт многочисленные как отечественные учение ( Архангельский И.Н., 1974; СимецкиЯ O.A., 1979; Инашура А.И., 1991 ), так и зарубежные. Существует тесная взаимосвязь меаду количеством и качеством молока и необходимостью проведении! работ, связанных с профилактикой мастито ( Картааова В.Ii., Оксамитный H.K., 1977; Козырев Ю.А., Валковой И.И., 1977; Райд Х.А., Олкоиен А.Г., I98I; Хилькевнч H.U., 1987; Картасова В.М., 1987, 1988; Карташова В.И., Богатов О.Г., 1987; Хрипунова Л.В. и др., 1987, I968;DoKooI.R.,DondLd д., 1968;Emanuelse>i\/.,Wevet Р. , I989;Edmondson Р. , 1990).

Основным путем профилактики мастита является ранняя диагностики заболевания на первоначальном втапе его развития.

h условиях интенсивного кивогиоводства и концентрации поголовья, а такие на традиционных фермах, особ/в ценность представляют окспресс-методи, позволяющие в течение минимального количества времени дать наиболее полнуо, объективную информацию о состоянии молочного стада по маститам. Подобные методы ранней диагностики мастита у коров разрабатывают во многих странах пира. Одним из таких методов является подсчет числа соматических клеток в сборном молохе и молоке отдельных коров.

Отечественные в зарубекные исследователи указывали на поашенцов содерканке соматических клеток в молоке на четвертей вшенн коров, выделяющих микроорганизмы, что свидетельствует об отрицательном действии бактерий на молочную железу, дате если нет явных патологических признаков мастита. Они обращали внимание на прямую зависимость между количеством соматических клеток в сборном молоке н величиной снижения удоя коров. Однако сведения об использовании подсчета количества стафилококков и стрептококков в сборном молоке и их соответствии количеству больных маститом хоров противоречивы. Противоречив» такке г.гения об использовании количественной характеристики золотистого стафилококка и агалахтийного стрептококка кап

- 4 -

критерия благополучия стад» по маститу. Существуйте методы диагностики мастита в молочных стадах, сосредоточенные на исследовании секрета вымени индивидуально от каждой коровы по БЫТ и другим показателям, трудоёмкие к ыв всегда осуществим для практического использования.

При введении нового стандарта на заготавливаемое молоко (ГОСТ 13264-86), требований по ограничению количества соматических клеток в закупаемом молоке, необходимы методы, позволяндо в течение минимального количества временя дать полнув объективную информации о состоянии молочного стада по маститу. Для »того необходимо знать предельно допустимое количество соматических клеток, а также количество основных возбудителе! мастита в сборном молоке, которые могли бы свидетельствовать о благополучии стада по заболеваемости маститом инфекционной миологии. Определение уровня соматических клеток и основных воабу-днтелей мастита в сборном молоке могло бы играть диагностическую роль при групповых исследованиях на заболеваемость хоров маститом, особенно при массовых обследованиях стад.

Цель и задачи исследований. Учитывая вышеизложенное, мы поставили перед собой цель разработать ускоренные методы диагностики иастита коров в лактационный период. Соответственно цели на разрешенхе были поставлены следуБЩие задачи:

1. Определить уровень соматических клеток в сборном молоке здоровых стад и неблагополучных по маститу.

2. Изучить взаимосвязь между уровнем соматических клеток в сборном молохе и количеством больных маститом коров в стаде.

3. Изучить взаимосвязь наличия агалактийного стрептококка и количество аолотистого стафилококка в сборном молохе с заболеваемостью хоров маститом стрептококковой и стафилококковой этиологии.

4. Изучить соотнооевие между количеством выделенного аолотистого стафилококка, агахахтийного стрептококка, количес-вом соматических клеток в сборном молоке с уровнем мастита в стаде. ;

5. Установить взаимосвязь количества соматических клеток, аолотистого стафилококка а агалактийного стрептококка с уровнем молочной продуктивности.

- 5 -

6. Разработать групповой метод диагностики мастита коров по сборному молоку.

Научная новизна. В результате проведенной научно-исследовательской работы впервые разработан и предложен групповой метод контроля молочных стад иа наличие в них хоров, больных маститом. Этот метод отличается от общепринятых методов тем, что по числу соматических клеток, наличия золотистого стафилококка и агалактийного стрептококка в сборном молоке определен процент больных маститом лактирующих коров в стаде. Он позволит осуществлять контроль бактериального благополучия молока, открывал возможность к разрешению проблемы действенного контроля молочных стад на мастит. Разработанный метод будет в достаточной степени доступен по своей технике выполнения, скорости получения результатов и эффективности. В его основу вошли классические методы исследований молока,не требующие в работе наличия дефицитных компонентов и многоэтапных исследований.

Практическая значимость и внедрение. Практическая значимость работы заключается в разработке методических указаний по групповому методу диагностики мастита коров. Предложен одновременный контроль ситуации по маститам во многих молочных стадах, что особенно важно для районов,поставляющих молоко в центры переработки и производства продуктов в системе детского питания,

Апробация. Проведена на фермах А/0 "Заря Подмовковья" Домодедовского района Московской области.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работы.

Основные положения диссертации, вшесенные на защиту:

1. В сборном молоке неблагополучных по маститу стад в средний период лактации число соматических клеток составляет более 350,0±60 тыс/см3.

2. Обнаружение агалактивного стрептококка в пробах сборного молока вне зависимости от его количества свидетельствует о наличии в стаде коров, больных маститом стрептококковой 8ТИ0Л0ГИИ.

3. Уровень числа микробных тел золотистого стафилококка в неблагополучных по маститу стадах превышает 2000 КОЕ/сн3.

4. Менду числом соматических клеток, количеством эолотнс-

того стафилококка и наличием агалактийного стрептококка в сборном молохе стад и числом больных маститом коров в них существует положительная корреляция. Каждому уровню соматических клеток в сборном мохоке соответствует определенный процент больных маститом коров.

Объем и структура диссертации. Диссертация наложена на № страницах машинописного текста к состоит ив введения, обаора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, предложения для практики, списка литературы, включающего lot отечественных и[соиностранных источников.

Работа иллюстрирована 20 таблицами, 3 графиками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Работе выполнена в период 1969-1993 гг. в лаборатории ветсанитарии ПЗНИШ г.Махачкалы и лаборатории санитарии молока и профилактики мастита ШИИВСГЗ, на мояочных фермах колхозов и совхозов, молокоприемных дунктах и мояааво-дах Дагестана и Московской области.

Экспериментальную работу проводили на коровах красной степной и черно-пестрой пород в условиях молочных комплексов и ферм. Для выполнения предусмотренных исследований проб сборного молока и молока из четвертей вымени были использованы методы: клинические, биохимические, цитологические, бактериологические.

При проведении клинических исследований мы обращали внимание на наличие в вымени хоров пяти признаков воспаления и изменения секрета молочной железы.

Биохимические исследования проводили пробным сдаиванием, по окончании доения последних порций молока в лунки контрольной пластинки IMK-I и исследовали быстрш маститным тестом (EUT) - 256 мастидином.

Цитологические исследования сборного молоха проводили препаратом "Маетоприм", предусмотренном ГОСТом, а также методом Прескотта-Брида и камернш методом.

Микробиологические исследования проводили общепринятыми методами. Для работы испольаовали питательные среды: МПА с крови к.р.с.« ДНК-новокаиновый агар, П2А с каинитом, среду Карташовой (плотную и жидкую), МПБ с : 6,Bit NaCI; 40/6 кедчи; 0,52 сорбита; рН 9,6; глюкоаы; молоко с метилеиовым году-

бш 1:1000.

Также использовали KAAffl-тест, реакцию плазмокоагуляции и определение каталаэной активности.

Молочную продуктивность стад учитывали по данный зоотехнического учета надоя стада. Снижение продуктивности коров,больных маститом,учитывали при контрольных дойках по четвертин вымени в течение лактации при помощи доильного аппарата почетверт-ного доении ДАЧ-I, снабженного электронными датчиками.

При определении количества коров, больных маститом, клиначе скую форму мастита определяли путей визуального просмотра секрета вшени, а субклиническую-по БМТ. В стаде мастит дифференцировали от раздражения вшени путем проведения дополнительных лабораторных исследований, такими как проба отстаивания.

За весь период работы было взято для исследований лабораторными методами: на МПП 258 проб сборного молока от 86 ферм, непосредственно на молочных фермах 78 проб сборного молока от 26 фер*. Обследовано по БЫТ трехкратно 5613 коров и в лаборатории исследовано 2369 четвертных проб молока,из которых I7IQ положительных по ЕЫТ.

Экспериментальные исследования статистически обработаны методом вариационной статистики с вычислением средних арифметических , коэффициента корреляции. Достоверность различий показателей определеляли с помощью критерия Стыодента.

Результаты исследования.

Изучение состояния молочной железы коров путем исследования чеадертных проб молока с параллельным учетом соматических клеток.

В нашей стране по требованиям ГОСТа > 13264-88 в сборной молоке число соматических клеток не должно превышать 500 тыс/см3. Следовательно, стадо с числом клеток 500 тыс/см3 должно считаться здоровш для молоха высшего и первого сорта. При этой уровень соматических клеток рассматривается с точки зрения обнаружения примеси анормального молока о сборном.

Мы поставили перед собой задачу - изучить уровень соматических клеток как диагностический тест, то есть для выявления коров, больных маститом. В первую очередь нам необходимо было изучить пороговые значения числа соматических клеток в молоке здоровых коров. Показания быстрых диагностических тестов

- в -

не имели самостоятельного значения и подтверждались бактериологическими исследованиями и пробой отстаивания. В проба* отстаивания мы обращали внимание на наличие осадка, количество и характер сливок, цвет молока.

Бактериологическими исследованиями были выявлены не только больные маститом животные, но и определено наличие микрофлоры в пробах молока, взятых из четвертей вымени здоровых коров. Цель эти* исследований - дифференциация здоровых коров от бактерионосителей. Таким образом, исследованиями были охвачены животные с различным состоянием паренхимы вымени. А именно: здоровые, с раздражением вшени, бактерионосители и больные маститом коровы.

На 26 фермах было исследовано 252 раствором мастидина 5613 коров. Клиническая фориа мастита, встречавшаяся в период осмотра стад, протекала преимущественно с характерными признаками серозного и катарального мастита и не превысила 2,8%.

В результате этих исследований было выделено реагирующих по БИТ и больных маститом коров 525 голов (749 четвертей вымени), что составило в среднем 9,4$. Из них по четвертям: с реакцией в один крест 4,66%, с реакцией в два креста 32,0525, в три креста - 44,ОЙ и четыре креста - 19,

Всего было взято для лабораторных исследований 1710 проб секрета вымени от реагирующих по БЫТ и больных маститом коров.

Пробой отстаивания были подтверждены изменения в паренхиме вымени лишь 30% выявленных по ЕМТ коров. Основное число подтверждений приходилось на пробы молока, давшие с 2% раствором мастидина реакции в три и четыре креста. Во всех четвертных пробах молока было подсчитано число соматических клеток ( таблица I).

Таблица I

Результаты подсчета количества соматических клеток в пробах молока из четвертей с различным состоянием вшени

1 Состояние 1Количество! Количество соматических клеток

» вшени проб !-(тыс/см3)-

{ ] ¡Камедный методШрескотта-Брида

I. Здоровое 396 250,0 д 30 260,4 ± 52

2. Раздражение 68 662,5 1 17 733,5 1 27

3. Бактерионосит. 64 375,0 + 32 309,7 + 34

4. ¡¿астат 591 2.250,0 + 20 1.844,0 ± 29

- 9 -

Из данных табл. I видно, что наибольшее число соматических клеток установлено, как и следовало ожидать, в секрете еы-мени коров, больных маститом.

В работе использовали метод Прескотта-Брида и параллельно камерный метод с целью получения максимально достоверных данных. Можно отметить, что оба метода совпадают и не дают практически расхождений и мы в дальнейшем пользовались только одним из них.

Таким образом, при изучении состояния молочной железы коров путем исследования четвертных проб молока ЕЫТ с параллельным подсчетом соматических клеток определены физиологические границы числа клеток в молоке здоровых коров и выявлен ряд закономерностей.

За норму числа клеток в молоке здоровых коров было взято 260 + 52 тыс/см3 соматических клеток. Подтверждена связь между числом соматических клеток в молоке коров и состоянием их молочных. желез.

Изменения в вьыени, такие как бактерионосительство и раздражение, ведут к постепенному увеличению числа клеток, которое достигает своего максимума при мастите с реакцией 'на ЕЫТ в три и четыре креста. Нетрудно было отметить, что по реакции секрета вьыени с ЕЫТ - по консистенции сгустка можно, до некоторой степени, судить об уровне соматических клеток, хотя косвенный метод неоспоримо менее точен.

Определение уровня соматических клеток в сборном молоке здорового стада ■ Определив значение уровня соматических клеток в молоке коров со адоровьм вшенем, нам необходимо было определить их уровень в сборном молоке здорового стада,

В нашей стране ГОСТом предусмотрено содержание числа соматических клеток в сборном молоке, не превьшащее 500 тыс/см3 для высшего и первого сортов.

Бактерионосительство и раздражение вымени есть практически во всех дойных стадах и способно влиять на число клеток в сборном молоке. Поатому при определении уровня числа соматических клеток в сборном молоке здоровых стад мы учитывали вероятность наличия в них еивотных с различным состоянием вымени.

- 10 -

Дня определения круга молочных стад с числом клеток не превшаюшиы 500 тыс/сма на молокоприемных пунктах, маслозаводе и молочных заводах были взяты пробы сборного молока. Пробы молока брали непосредственно из молочных Цистерн в соответствии с требованиями ГОСТа 13928-84 "Молоко и сливки заготавливаемые. Отбор и подготовка их к испытанию". Отбор проб молока производили стерильными пипетками в стерильные пробирки по 10 см3.

За период 1989-1993 гг. были взяты 63 пробы сборного молока от 21 фермы и исследованы препаратом мастоприм (ГОСТ 2345379). Препарат мастоприм предназначен для определения примеси анормального молока в сборном . Реакция проб сборного молока с препаратом представляла собой однородную жидкость, что свидетельствовало, согласно стандарту, о наличии в них не более 500 тыс. соматических клеток в 1см3.

Отобранные пробы исследовали в лаборатории прямш подсчетом соматических клеток методом Прескотта-Брида и бактериологическими методами. Затем из 21 фермы с учетом возможности трехкратного исследования были вццелены 12 ферм, на которых в дальнейшем и была проведена основная работа, включающая в себя не только исследования сборного молока стад, но и непосредственное обследование каждой коровы в них.

Обследование на мастит проводили 2%-нш раствором масти-дина по окончании доения. В каждое углубление молочно-контроль-ной пластинки из соответствующих четвертей вшени надаивали по 1см3 молока, добавляли 1см3 2St-Horo раствора мастидина. Реакцию учитывали по степени желеобразного сгустка.

Всего в 12 молочных стадах исследовано 1909 дойных коров. От 62 коров, давших положительную реакцию с БИТ, были взяты пробы молока для постановки пробы отстаивания и бактериологических исследований.

Бактериологические исследования подтвердили диагноз на мастит у 40 коров, что составило 2,09^, количество соматических клеток сборного молоха не превысило 410,8 тыс/см* или 342,6 + 60,1 тыс/см8. В стадах с числом соматических клеток до 400 тыс/см8 процент мастита не превышал 3. Увеличение числа клеток от 400 до 500 тыс/см* соответствовало увеличению больных маститом к .ров до 45ь.

- II -

В пробах сборного молока, давших с мастопримом реакцию как жидкость густой консистенции, находилось 447,1 + 21,0 тыс/см3 соматических клеток.

Следовательно, если считать стадо с 3% больных коров в стаде здоровш, то за верхнюю границу числа соматических клеток можно принять 400 тыс/см3, что соответствует однородной жидкости в реакции сборного молока с мастопримом..

Определение уровня соматических клеток в сборном молоке от коров, больных маститом

Подсчет числа клеток в молоке больных маститом коров показал значительное увеличение их в сравнении с нормой. Поэтому перед нами была поставлена задача определить уровень соматических клеток в сборном молоке от коров,больных маститом.

Решение этой задачи позволило бы выявить зависимость между числом больных маститом коров и числом соматических клеток в сборном молоке этих стад. К разрешению этой задачи подходили с учетом полученных результатов предвдущих исследований. Для выявления интересующих нас молочных стад использовали тот ке принцип, то есть пробы сборного молока предварительно брали на молокоприемных пунктах и молзаводах, исследовали лабораторными методами (бактериологические и Прескотта-Брида) и по результатам этих исследований определяли фермы, на которых проводили основную научно-исследовательскую работу.

Характеристику консистенции молока и соответствующее ей 'количество клеток в I см3 определяли по таблице ГОСТ 23453-79. Согласно таблице стандарта числу клеток от 500 тыс. до I млн»со-сгсетствует выраженный желеобразный сгусток,при помешивании которого хорошо видно дно луночки пластинки. Увеличение же количества клеток характеризуется плотным сгустком, легко выб-расываемьы из луночки пластинки - более I млн. клеток в см3. Однако, нами было замечено, что не все взятые пробы молока при смешивании с раствором мастоприма можно отнести ко второй или третьей характеристике, реакция с диагностикумом имела не три, а пять характеристик, а именно: жидкость с густой консистенцией -вторая; третья - слабый сгусток; четвертая - выраженный сгусток, просматривается дно луночки; пятая - плотный сгусток, легко выбрасывается из луночки. То есть, результаты исследований сбор-

- 12 -

ного молока с препаратом мастоприм и прямш подсчетом соматических клеток, по нашим даншацне укладывались в характеристики таблицы стандарта по выявлению примеси анормального молока в сборном. По этим признакам все взятые на гормолэаводах и молокоприемных пунктах пробы сборного молока были разделены на пять групп. О первой группе было сказано выше,ко второй группе было отнесено 32 пробы сборного молока, к третьей - 25 проб, к четвертой - 7 проб и к пятой - I проба соответственнп. Эти исследования преследовали цель определить возможность использования косвенного метода, предназначенного для определения примеси анормального молока в сборном, для выявления стед с тем. или иным количеством соматических клеток.

Таким образом, мы подошли к решению одной из основных поставленных на разрешение задач - определить уровень соматических клеток и количество больных маститом коров с стаде, провести корреляционный анализ между ними. Для этого из хозяйств Кизлярского.Карабудахкентског'о районов, с одинаковой характеристикой смеси сборного молока с диагностикумом были выбраны хозяйства для непосредственных исследований. Из 32 ферм, сборное молоко которых показало в реакции с мастопри-мом жидкость густой консистенции за 1990-1993 гг. были выбраны 8, в которых и была проведена основная работа.

Исследования коров на заболеваемость маститом проводили согласно рекомендациям по борьбе с маститом коров. Для получения объективных данных, использовали принцип трехкратной пов-торности. Всего было исследовано БЫТ 1786 дойных коров, выделено положительно реагирующих 122 коровы и взято для лабораторных исследований 459 четвертных пр°б молока.

На основании бактериологических исследований был поставлен окончательный диагноз на мастит у 107 коров.

Процент мастита в стадах был следующим: 4,4; 4,3; 6,0; 7,8; 6,2; 6,4; 7,6; 7,1, что в среднем составило 6,05%. Количество соматических клеток в сборном молоке этих стад было следующим: 508,4 + 30,5; 529,5 +, 26,3; 540,8 + 42,1; 603,1 ± 10,2; 547,0 ± 50,2; 572,9 + 25,4; 603,3 1 11,1; 612,1 + 12,6 тыс/см3 соответственно. [(агт,Хае-тг)]

На основании данных по формуле "С »-------------—

»» пс. Н Чг определяли корреляционную связь Т. ■ <4,о.

Корреляция положительная, что указывает на прямую зависимость между числом соматичесхшс клеток в сборном молоке и количеством больных маститом корок в стадах. Таяим образом, установлено, что в сборном молоке,дающем с мастопр;шом реакцию как жидкость густой консистенции,находится от 400 до 600 тыс. клеток в см3.

На следующем этапе исследовательской работы на ШЗ и МПП были взяты для лабораторных исследований 75 проб молока от 25 ферм, давшие с мастопримом реакции как слабый сгусток. Из этих хозяйств было выбрано 7 ферм, дойные стада которых были исследованы БМТ. В них также были ввделены условно больные животные, из четвертей вьмени которых были взяты пробы молока для последующих лабораторных цитологических и бактериологияеских исследований.

Всего было исследовано 2%-кш мастидином 1364 коров,, реагирующих положительно, выявлено 203 головы, бактериологическими исследованиями подтверждено 195 случаев мастита, что составило 14,3%.

Количество соматических клеток в сборном молоке и процент больных маститом коров непосредственно в каждом стаде был следующим: 594,6 +.16,2 тыс/см3 - J0,0%; 598,9 + 12,5 тыс/см3 -10,2; 648,8 + 14,7 тыс/см3 - 12,0%; 648,3 + 18,7 тыс/см3 - 14,8%; 703,1 + 9,2 тыс/см3 - 16,6%; 737,8 + 17,1 твс/см3 - 17,1%; 746,5 + 20,0 тыс/см3 - 17,5%.

В последующих исследованиях сосредоточили внимание на 7 фермах, сборное молоко которых давало с мастопримом выраженный сгусток,при вращении которого просматривали дно луночки, а для индивидуальных исследований коров были выбраны, с учетом возможности трехкратного исследования,две фермы. Всего на двух молочных фермах было исследовано 285 коров и выделено БИТ 108 условно больных животных. Лабораторными исследованиями было подтверждено 75 случаев заболевания коров маститами, что соответствует в среднем 26,2%. Процент мастита в стадах составил: 22,8; 24,7; 26,1 - 1естадо, 27,3; 27,7; 28,3 - 2е стадо. Количество соматических клеток в сборном молоке стад было 832,9; 859,1; 959,1; 959,2; 967,7; 959,2 тыс/см3соогветственно. Таким образом, реакции сборного молока с мастопримом, дающей

- 14 -

выраженный сгусток,соответствовало 600 - 1000 тыс/смэ соматических клеток.

Пятая группа, характеризующаяся образованием плотного сгустка, легко выбрасываемого из луночки, наиболее редко встре-чаидался.

За весь период проведения работы по выявлению корреляции между числом клеток в сборном молоке и процентом коров больных маститом, была выявлена всего одна молочная ферма, исследования на которой были провеяны теми же методами, что и на других фермах. Трехкратно на ферме было исследовано 330 коров, процент мастита составил 32,5 , а число соматических клеток 1275,4 + 24,7 тыс/см3.

Выявленная закономерность представлена на графике I.

График I.

Уровень соматических хлеток в сборном молоке и процент больных маститом коров в стаде.

!

более !

30% -Л

«н 8*1

1-)-1-1-1-„

до 400 400-600 600-800 800-1000 более 1000тыс/см3

Таким образом.увеличение количества больных животных прямо пропорционально увеличению числа соматических клеток. Следовательно, для осуществления контроля сразу многих молочных стад по маститу достаточно исследовать только сборное молоко каждого стада на число соматических клеток, используя для этой цели прямой подсчет числа клеток или реакций молока с препаратом мас-топрим, с отработанным нами характеристиками сгустка по числу соматических клеток.

Изучение взаимосвязи агалактийного стрептококка в сборном молоке с количеством коров, больных маститом стрептококковой этиологии.

Основное отличие раздражения вьыени от заболевания коров маститом, заключается в отсутствии в четвертных пробах молока главных возбудителей мастита. Поэтому в наших исследованиях одним из основных тестов было использование бактериологических методов, и диагноз на мастит складывался из двух показателей: подсчет соматических клеток и бактериологические исследования.

Данные литературы, опубликованные как в нашей стране, так и за рубежом, среди множества выделяемых при мастите коров микробов наибольшее внимание уделяют агалактийному стрептококку. Этот микроорганизм, попадая в паренхиму вьмени, способен вызывать мастит с прекращением лактации, легко распространяется среди дойных коров посредством доильных стаканов. Поэтому свое внимание мы остановили именно на нем. В связи с этим мы поставили перед собой задачу изучить взаимосвязь агалахтийного стрептококка в сборном молоке с количеством коров,больных маститом стрептококковой этиологии. Однако, прежде ^ем приступить к её решению, чтобы исключить или учесть возможное попадание данного микроорганизма из внешней среды нами была определена степень распространения агалактийно1о стрептококка в ней. Последнее связано с тем, что в литературе сведения о присутствии в объектах внешней среды агалактийного . стрептококка различны.

Исследования проводили непосредственно на двух фермах, из сборного ьолока которых был ввделен агалактийный стрептококк. Рробы с объектов внешней среды для лабораторных исследований на наличие агалактийного стрептококка брали с интервалом в три дня в течение двух недель. Исследованию подвергали смывы с

доильных стаканов, молочных шлангов, доильных бидоноф, вёдер, тканей для процеживания молока, молочного танка. Помимо этого были взяты пробы с кожи вшени, внутренней поверхности бедра коров, а также воды, используемой на фермах.

Всего было взято для исследований 144 пробы иа объектов внешней среды.

В результате проведенных исследований проб-смывов, взятых с объектов внешней среды на. молочных фермах, агалактийный стрептохокк выделен не был, в то время как в сборной молоке •тих стад данный возбудитель присутствовал.

Таким образом, мы подошли к решению поставленной задачи по изучении взаимосвязи агалактивного стрептококка в сборном молоке с количеством коров, больных маститом стрептококковой этиологии.

Оба стада были исследс хны быстры! маститнш тестом, взяты четвертные пробы молока для бактериологических исследований, которые позволили определить процент больных маститом стрептококковой этиологии коров. Всего было исследовано 480 дойных коров, БЫТ выделено 52 животных и взяты пробы молока из 78 четвертей положительных по EUT и 20 проб молока из смежных непораженных четвертей вымени. Бактериологическими исследованиями из 78 было подтверждено 49 случаев мастита и агалактийный стрептококк выделен в ассоциации с золотистш стафилококком.

Проведенные исследования показали, что наличие агалактивного стрептококка в сборном молоке стад • связано с контаминацией молока данньы микроорганизмом от больных маститом коров. Обнаружение в посевах сборного молока на питательных средах даже нескольких колоний агалактийного стрептококка свидетельствовало о наличии в стаде коров,больных маститом этой этиологии. Существует связь количества агалактийного стрептококка в сборном молоке от числа коров с маститом стрептококковой этиологии. Однако, в практических условиях не следует ориентироваться на количественное содержание данного возбудителя в молоке, так как обнаружение и выделение даже единичных КОБ свидетельствует о неблагополучии дойного стада и о необходимости срочно принимать меры по детальному его обследованию и фармакотерапии.

Зависимость количества золотистого стафилококка в сборном молоке от наличия коров, больных маститом стафилококковой этиологии

О золотистом стафилококке, как наиболее частом источнике мастита пишут В.И.Карташова (1973-1988); Н,К. 0ксамитный(1977), Г.В.Зверева (1984), Me.Donald ¿.S. (1984), Bakken G (1987), flun-qler S.P.H., Austin F.H. (1987), Booth ).M. (1988),£г$Ипе fcj.

Éberhart Ц. (1988). В то же время эти и многие другие исследователи (Wieson 1978) указывали, что мастит стафилококковой этиологии занимает до 65-70% среди других возбудителей.N.O.KlastruP (1986) считает, что стафилококки из гнфицкроганных четвертей вымени вцделяются нерегулярно и в различном количестве, Его наличие на коке сосков вьмени, доильном оборудовании и других объектах и другие факторы создают определенные трудности ь диагностике мастита стафилококковой этиологии.

В связи с этим мы поставили перед собой ичдачу установить зависимость количества золотистого стафилококка в сборном молоке от наличия коров, больных маститом стафилококковой этиологии. Важное значение в разрешении этой задачи имели исследования tro оттределенив динамики выделения золотистого стафилококка из четвертей вымени,давших с ШТ реакции в один, два, три, четыре креста,и количество золотистого стафилококка в сборном молоке здоровых стад.

Всего было взято для исследований 80 проб молока по 20 проб от каждой положительной реакции с ШТ. Лосев и инкубирование разведений молока из четвертей 1:100 на питательной среде позволили установить прямую зависимость увеличЬния числа колоний с интенсивностью реакции молока с ЕЫТ. Так, количество колоний в пробах с реакцией составило: один крест - 17,14 ± 0,15; два - 24,35 + 1,1; три - 32,0 + 0,30; четыре - 22,35 + 1,11 соответственно. В четвертных пробах молока здоровых коров микрофлора отсутствовала. В пробах сборного молока, взятых от здоровых стад, число микробных тел стафилококка не превысило 2 тыс/см3. Эта цифра может служить границей, определяющей здоровье стада по маститу стафилококковой этиологии.

Для того, чтобы установить зависимость количества золотистого стафилококка в сборном молоке от наличия коров, больных маститом стафилококковой этиологии, мы исследовали на количество золотистого стафилококка пробы сборного молока, которые взяли на фермах, где проводили обследования поголовья БМТ.

, Всего были проведены обследования в 26 стадах с различны» числом коров, больных маститом стафилококковой этиологии, а с учетом исследований сборного молока этих стад, взятых на МПП и ИЗ, было проведено 140 исследований.

- 18 -

Из 26 ферм 15, по реакции сборного молока с мастопримом, были выделены как неблагополучнее по маститу.

Исследования сборного молока этих стад дали следующие результаты: 20 тыс.КОЕ/см3 (колонии образующие единицы) - 6,0% мастита в стаде; II тыс.КОЕ/см3 - 7,1%; 8 тыс. КОЕ/см3 - 4,4%; 9 тыс.КОЕ/см3 - 6,2%; 10 тыс.КОЕ/см3 - 7,6%; 18 тыс.КОЕ/см3 -10,0%; 39 тыс.КОЕ/см3 - 23,8%;31 тыс.КОЕ/см3 - 12,0%; 40 тыс. КОЕ/см3 - 16,6%; 34 тыс.КОЕ/см3 - 14,8%; 33 тыс.КОЕ/см3 - 17,1%; 49 тыс.КОЕ/см3 - 27,7%; 46 ть".КОЕ/см3 - 32,0%; 6 тыс.КОЕ/см3 -7,8%; 46 тыс.КОЕ/см3 - 17,5%.

Таким образом, существует положительная корреляция (ъ ■ 0,7) между числом золотистого стафилококка в сборном молоке и процентом больных маститом коров и на основании результатов бактериологических исследований можно судить не только о санитарно-гигиеническом состоянии ферм, но и о состоянии коров на них.

Изучение взаимосвязи уровня соматических клеток в сборном молоке с надоем молока в стаде.

Влияние мастита на продуктивность коров бесспорно, по мнению многих авторов при его различном исходе ведет к снижению молочной продуктивности. При наличии мастита отмечают снижение годового удоя, в то время как с возрастанием удоев появляется общая тенденция увеличения частоты заболевания.

Как ухе Говорилось вше, появление в стаде хоров,больных маститом, обязательно сказывается на увеличении числа соматических клеток в сборном молоке. Таким образом, образуется связь: продуктивность - мастит - число соматических клеток в молоке. Для решения поставленной задачи: изучить взаимосвязь между процентом мастита и уровнем снижения молочной продуктивности в стаде, мы провели контрольные дойки отдельных здоровых и больных маститом коров в средний период лактации.

Дойку каждого животного проводили аппаратом ДАЧ-1 по инструкции, трехкратно, с периодичностью в три дня. По даннш зоотехнического учета надоя стада и отдельных групп коров определяли среднестатистическую суточную продуктивность подопытных животных. Всего было проведено 30 контрольных доек у 10 коров, три из которых были здоровы, семь- больные маститом.

Животные были подобраны так, чтобы их продуктивность, сог-васно зоотехническим данньм, была одинакова, коровы имели по

одной больной четверти и сами четверти совладали. В среднем суточный удой коров был 8 литров 780 ил. Контроль проводили в утреннею дойку. Следует отметить, что больным животным лечение в отот период не проводили и заболевание протекало по мере развития патологического процесса.

Продуктивность больных четвертей была несколько ниже и изменялась по мере усиления тяжести заболевания. Для того, чтобы определить насколько снижается секреция молока в клинически больных четвертях вшени, мы вручную ввдаивали молоко из больных четвертей вшени трех коров в измерительные стаканы. Количество вьдоенного молока не превышало 60 ил. У здоровых коров максимальное количество молока вьдаивали из одной четверти 1,160 х.

В сравнении с контрольны« четвертями в больных объем молока был меньше на 15,056 в первый, 19,- во второй, 25,0^-в третий дай исследований.В среднем продуктивность больных маститом четвертей снижалась на 19,9$.

Данные наших исследований согласуются с сообщениями ученых, занимающихся вопросами молочной продуктивности коров. Исследования молочной продуктивности стада, в целом, и определение соответствия между суточнъы надоем, числом соматических клеток в сборном молохе и числом больных маститом коров в стаде намного сложнее. Это связано с физиологическим колебанием лактации каедого животного в стаде, кормлением, содержанием, климатическими условиями, стресс-факторами и наличием заболеваний, Позтому судить о заболеваемости коров маститом в стадах по суточные надоям не представляется возможны*.

Разработка группового метода диагностики мастита коров в лактационный период

Контроль молочных стад на заболеваемость коров маститом преследует две основные цели: диагностическую, с последующей профилактикой и лечением коров и санитарно-гигиеническую -предотвращение попадания молока от больных животных в сборное, поступающее на молочные пункты. В связи с этим актуальной является задача по групповой диагностике мастита в дойных стадах.

Проведенная нами работа по подсчету соматических клеток и ввделению золотистого стафилококка или агалактийного стрептококка в пробах молока из четвертей вьыени отдельных животных и

- 20 -

в сборном молоке благополучных по маститу стад и исследования коров ШТ в самих стадах дали нрм возможность считать стада с числом клеток 350 + 60 тыс/см3 и менее 2 тыс.КОЕ/см3 золотистого стафилококка и свободными от агалактийного стрептококка в сборном молоке здоровым.

Аналогичная работа в стадах,неблагополучных по маститу, позволила выявить корреляционную зависимость между числом соматических клеток, количеством золотистого стафилококка или наличием агалактийного стрептококка и процентом больных маститом коров.

На основании полученных результатов мы разработали методику по контролю молочных стад на мастит, основанную на подсчете числа соматических клеток, золотистого стафилококка и наличия агалактийного стрептококка в сборном молоке.

Для более удобного практического применения предложенного метода мы использовали препарат мастоприм. Он применяется для определения примеси анормального молока в сборном и имеет согласно ГОСТу три характеристики. Однако нами было отработано пять характеристик, каждая из которых соответствует определенному числу соматических клеток и золотистого стафилококка. Использование иастоприма как косвенного метода значительно упрощает контроль стад на мастит на первоначальном этапе, так как по характеру сгустка можно ориентировочно судить о благополучии стада по маститу и необходимости проведения более детального исследования как сборного молока так и дойных коров.

Этот метод группового контроля молочных стад исключает многочисленные исследования дойных стад по четвертям, тем са-мш облегчает труд ветспециалистов, позволяет чаще чем предусмотрено ветеринарньы законодательством проводить профилактические мероприятия и своевременно выявлять стада с высоким уровнем заболеваемости хоров маститом.

На основании проведенных исследований по контролю молочных стад на мастит и учета данных литературы мы разработали "Временные методические указания об ускоренном методе выявления стад, неблагополучных по маститу", которые утверждены ГУВ Минсельхо-аа РФ II мая 1993 г. Они состоят из четырех разделов, включающих

общие сведения, механизм действия, указания к применению и оценку результатов. Для оценки результатов предложена таблица показателей сборного молока, характеризующих уровень заболеваемости коров в молочном стаде.

ВЫВОДЫ

1. На основании проведенных цитологических исследований молока здоровых коров из отдельных четвертей вшени в средний период лактации установлено, что количество соматических клеток в нем не превышает 260 + 52 тыс/сыэ.

2. При исследовании четвертных проб молока от коров с раздражением вьыени и бактерионосителей установлено значительное увеличение числа соматических клеток 733,5 + 27 тыс/см3 и 309,7 ± 34 тыс/смэ соответственно.

3. Установлен порог числа соматических клеток в сборном молоке здоровых стад а средний период лактации, который составил 350,0 + 60 тыс/см3.

4. На фермах,неблагополучных по маститу стрептококковой этиологии, при проведении многочисленных бактериологических исследований смывов с основных узлов доильного оборудования, кожи вымени и сосков ни в одном случае не был вццелен агалактий-ный стрептококк, что послужило основанием считать больное животное основнда источником контаминации молока агалактийнъы стрептококком.

Поэтому обнаружение агалактийного стрептококка в пробах сборного молока вне зависимости от его количества свидетельствовало о наличии в стаде коров, больных маститом стрептококковой этиологии.

5. Для вьделения и количественнного учета золотистого стафилококка в наших исследованиях хорошие результаты получены при использовании высокоэлективной, дифференциально-диагностической среды - новокаино-кровяного агара, что было подтверждено четырьмя реакциями

6. Определен уровень числа микробных тел золотистого стафилококка для здоровых стад до 2000 КОЕ/см3 и неблагополучных по маститу стад-свыпе 2000 К0Е/смэ.

7. Установлена положительная корреляция {*. » 0,9) между

- 22 -

числом соматических клегок в сборном молоке стад и числом больных маститом коров в них.

8. Разработанные метода диагностики мастита коров в лактационный период, являющиеся действенными, доступными для практического использования и позволяют выявлять неблагополучные по маститу стада и прогнозировать их заболеваемость. Так, уровне соматических клеток от 400 тыс/см3 до I мян./см3сбор-ного молока соответствует 5-21% больных маститом коров, увеличение количества клеток бог. з I млн./см3 процент мастита в стаде возрастает от 21 и вше.

Предложения для практики

На основании проведенных исследований разработаны "Временные методические указания об ускоренном методе выявления стад,неблагополучных по маститу", утвержденные ГУВ Цинсельхо-аа РФ II мая 1993 г.

Список опубликованных работ по материалам диссертации

1. Иванова O.P. Взаимосвязь быстрого маститного теста, пробы отстаивания и бактериологического исследования секрета вымени при мастите коров./ Сб.науч.тр.мол.уч. проблемы ветеринарной санитарии". Выпуск П. - У., 1992, с. 25.

2. Иванова O.P. Уровень соматических клеток в молоке коров красной степной породы в период лактации Скорма, мастит). / Сб.науч.тр. "Проблемы ветеринарной санитарии и экологии" Часть П. - M., 1993, с. 88т92.

3. Иванова O.P. Экспресс-метод диагностики мастита -важный фактор при получении экологически чистого молока./ Тезисы докладов науч.-техн. конф. 7-8 апреля 1993 г. - "Экологические проблемы ветеринарной санитарии". Часть I. - 11., 1993, с. 82.

4. Карташова B.U., Иванова O.P. Метод контроля молочных стад на заболеваемость маститом. // Ветеринария, 8, 1993,

с. 39-41.

ЕНИИВСГЭ, 1994 г, Москва, Звенигородское шоссе, 5, зак. тир. 80 окз.