Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Сальмонеллезная инфекция в условиях птицефабрик, методы профилактики и оздоровления

 -о

—1

СП

СП

о

_„ 3=1

СО

<£>

ся

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи

КУЗЬМИН ВЛАДИМИР АЛЕКСАНДРОВИЧ

УДК 619:616.9-053.2-084/085

САЛЬМОНЕЛЛЕЗНАЯ ИНФЕКЦИЯ В УСЛОВИЯХ ПТИЦЕФАБРИК, МЕТОДЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ОЗДОРОВЛЕНИЯ

Специальность: 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветерннврных наук

Санкт -Петербург - 1995

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и инфекционных болезней сельскохозяйственных животных Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины

Научный консультант: академик РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор, В.П.Урбан

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Борисенкова А.Н.; доктор ветеринарных наук, профессор Зеленский В.П.; доктор ветеринарных наук, профессор Грошева Г.А.

Ведущая организация - Петрозаводский государственный университет

Защита диссертации состоится 17 мая 1995 г. в 11 часов . на заседании специализированного совета Д 120.20.02 Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Адрес института: 196084, г. Санкт-Петербург, Черниговская ул.,5

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

! у

Автореферат разослан ".........." апреля 1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук,

доцент О.В.Узюмова

I. ОБЩ АЛ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

С начала 90-х годов в развитии промышленного птицеводства, как и других отраслях народного хозяйства России, происходит резкий спад, который выражается в разрушении разработанных ранее технологий кормления и содержания птицы, и как следствие этого, о широком распространении инфекционных болезней, уменьшении объемов производства, повышенном падеже птицы. Так, в целом по Росптице-прому сохранность взрослой птицы в 1993 году снизилась на 1% и составила 92,5%, производство мяса бройлеров за счет сверхнормативного отхода (падежа) уменьшилось на 125,1 тыс.т, убытки от падежа составили 33,4 млрд. рублей.

К таким болезням, встречающимся в птицеводстве и животноводстве, влияющими на качество продукции и здоровье людей, относятся сальмонеялезы. В развитых странах сальмонелл ез занимает важное место среди болезней, передаваемых через пищу, вызывая около 80% всех пищевых токсикоинфекций. Сальмонеялезы только в США каждый год регистрируют у 4 млн человек с ежегодной смертностью от них около 500 человек (Cohen М. et al., 1986). Сальмонеялезы приводят к большим экономическим потерям и в сельском хозяйстве, связанным с уменьшением продуктивности птицы и животных, гибелью молодняка, расходами на бактериологические исследования и ветеринарные обработки, выбраковку при убое. В США ущерб, вызываемый этой инфекцией у людей, животных и птицы, равен ),2 млрд S В год. В Канаде ущерб, наносимый сальмонеллезами только птицеводству, составляет около 4 млн $ (Рахманин Б.П., Куликовский A.B., 1989).

Среди прочих зоонозов сальмонелл ез не имеет себе равных по сложности эпидемиологии и эпизоотологии и трудности борьбы с ним (Доклад комитета экспертов ВОЗ № 774, 1991). Обнаруженные особенности эпизоотического процесса сальмонеллеэной инфекции кур, вызванной S.enteritidis (бессимптомная форма сальмонеллоносительства у взрослой птицы и молодняка старшего возраста, возможность трансо-вариального пути передачи возбудителя, нечеткое клиническое проявление и отсутствие характерных именно для этого заболевания патоло-гоанагомических изменений) с одной стороны, объясняют трудности в диагностике и низкую эффективность проводимых протнвосальмонел-лезных мероприятий, с другой, полволят к не-обходи мости совершен-

сгвовать методы диагностики сальмонелла энтеритиднс инфекции у кур.

Цепь работы: разработать систему оздоровительных и профилактических мероприятий по сальмонеялезу, обусловленному Б.еШегШсНв на крупных птицефабриках с применением специфических средств.

В задачи исследований входило:

1. Изучить эпизоотологию сальмонеллезной инфекции в условиях крупных птицехозяйств Северо-Западного региона России и связь сальмонеллезной инфекции у птиц и крупного рогатого скота.

2. Определить этиологический профиль сальмонелл и усовершенствовать диагностику сальмонеллеза при латентных формах течения инфекционного процесса у птицы.

3. Апробировать для профилактики и лечения сальмонелла энте-рнтидис инфекции кур разновидности известных бактериофагов, микробов-антагонистов, бивалентную живую рекомбинантную вакцину.

4. Разработать систему оздоровительных и профилактических мероприятий против сальмонелл еза, обусловленного З.етегШсНз, на крупных промышленных птицефабриках.

Научная новизна.

- изучены все звенья эпизоотической цепи и установлена эпизоотическая связь их проявления при сальмонеллезе кур, обусловленном еШегШ(1ц в крупных шицехозяйсгвах мясного и яичного направления продуктивности Северо-Западной зоны Российской Федерации;

- доказано, что в условиях промышленных птицефабрик, в основном, распространение приобрели сальмонеллы, нетипичные дли кур, обуславливающие особую картину течения инфекционного процесса (Б.еШегШсНз, Э.скгЬу, БЛурЫтипит, Б.кхшдоп, Б.огашепЬигё, 8.пе>у-роп).

- выявлено, что устойчивую циркуляцию З.еШегШШз в птицехо-зяйствах яичного и мясного направления продуктивности Ленинградской области обеспечивает высокая степень адаптации Б.е/иеп{¡сШ к организму птиц, способность этого серовара вызывать у птицы бессимптомную форму инфекции и возможность к трансовариальной передаче возбудителя сальмонелл еза, вызванного З.еШетШШз;

- в соавторстве создана бивалентная живая рекомбинантная саль-мои&ялезная вакцина для птиц из штамма БлурЫтипит № 274/09 (ла-

бораторный № 58/2), создающая эффект перекрестной зашиты от сальмонелл групп Б и В;

- разработана комплексная система мероприятий против сальмо-неллеза кур, обусловленного З.етстШШв, включающая методы специфической профилактики и применение средств, повышающих общую резистентность птицы.

Практическая ценность. Материалы исследований вошли в следующие разработки: рекомендации по применению аэрозолей лекарственных препаратов в птицеводстве (Л., 1984): рекомендации по профилактике сапьмонеллезов птиц аэрозолями бактериофагов (Л, ЛВИ, 1991); временное наставление по проведению производственных опытов по применению бактериофага сальмонеллезного жидкого в птицеводстве Ленинградской области (утв. вет.отделом АПО Ленинградской области 14.12.92 г.); временное наставление по применению бактериофага сальмонеллезного жидкого в птицеводстве Республики Карелия (утв. вет.отделом АПК Республики Карелия 2.02.93 г.); временное наставление по применению бактериофага сальмонеллезного жидкого в животноводстве и свиноводстве Республики Карелия (утв. вет. отделом АПК Республики Карелия 2.02.93 г.); рекомендации по применению в птицеводстве колибзктерина 123 М (утв.ДВ МСХиП РФ 15.02.95 г.); рекомендации по применению в птицеводстве экстракта мидии (препарат МИГИ-К) (утв. ДВ МСХиП РФ 15.02.95 г.); рекомендации по применению в птицеводстве электролитичеосого раствора гипохлорита натрия (утв. ДВ МСХиП РФ 15.02.95 г.);

Основные положения, выносимые на защиту:

- особенности эпизоотического процесса сальмонелл езной инфекции кур, вызванной З.еШегМйв;

- комплексный подход в профилактике и лечении сальмонеллеза кур, вызванного З.етегШФв, с использованием наряду с лечебно-профилактическими и специфическими средствами препаратов, повышающих общую резистентность и иммунобиологическую активность птицы.

Пути реализации. Результаты исследований могут быть использованы при разработке общих ветеринарно-санитарных и специфических мероприятий против сальмоиеллеза кур, обусловленного Б.йЦепШге в условиях птицехозяй£тв Северо - Западного региона России.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: научно-практической конференции "Биологические активные вещества в сельском хозяйстве" (Л., 1988); III Всесоюзной конференции по нейроэндокринологии (Л., 1988); 1-ой межвузовской конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Л., 1989); симпозиуме "Профилактика болезней птиц" (Тарту, 1989); научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов ЛВИ "Актуальные проблемы ветеринарии" (Л., 1991, 1993); Всероссийской научно-производственной конференции "Гигиена, вегсанитария и экология животноводства" (Чебоксары, 1994); 2nd Scientific Meeting (Coimbra-Portugal, 1994); научной конференции "Актуальные вопросы профилактической и клинической медицины" (С-П., 1994); Международном Симпозиуме "Пищевые зоонозы" (М., 1995); межкафедральном совещании кафедр эпизоотологического цикла СПГАВМ (протокол № 26 от 22.12.94 г.).

Внедрение. Результаты исследований в 1986-1994 г.г. с положительным эффектом внедрены в птицехозяйствах Северо-Западного региона России - ПО "Синявинское", птицефабрике "Лаголово", АОЗТ птицефабрика "Ломоносовская".

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 18 научных статьях, 2 авторских свидетельствах, 2 рекомендациях.

Структура и объем работы. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического указателя использованной литературы, приложения. Диссертация изложена на 305 стр. машинописного текста, иллюстрирована 17 рисунками и 69 таблицами. Слисок использованной литературы включает 601 источник, из них 307 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводили с 1984 по 1994 г.г. в условиях кафедры эпизоотологии инфекционных болезней сельскохозяйственных животных Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (СПГАВМ), ветеринарных лабораторий ПО "Синявинское", птицефабрик "Лаголово", "Ломоносовская", птицесовхоза "Суоярвс-кий" Республики Карелия, лаборатории иммуноморфологии СПНИИ эпидемиологии и микробиологии им.Ласгера (СПНИИЭиМ), кафедры микробиологии СП санигзрно-гнгнеинческого медицинского имешту-

та (СПСГМИ), сектора экономико-матемашческого моделирования Северо-Западного филиала ЦЭНИИ министерства экономики и финансов РФ.

В основе исследований использован комплексный эпизоотологи-ческий подход, включающий методы эпнзоотологического обследования, бактериологический, серологический, патологоанатомический методы, клинико-эпизооюпогичсские анализы и экспериментальные исследования.

Сбор эпизоотологических данных в хозяйствах проводили согласно "Схемы эпнзоотологического обследования птицеводческого предприятия" (1979).

Культуральные и биохимические свойства сальмонелл, изолированных из патологического материала и объектов окружающей среды изучали по схеме Ф. Кауфмана (1959) методами, изложенными в руководствах МО. Биргера (1982), А.СЛабинской (1972), В.А.Килессо (1962), Л.В.Григорьевой (1981).

Бактериологическое исследование воздуха проводили методом седиментации на плотные питательные среды с помощью импакторов (1981). Микробиологический анализ корма осуществляли согласно "Правилам бактериологического исследования кормов" (1981).

Для выделения чистых культур Б.егиегМсИз и ЭлурЫтигшт использовали метод предварительного обогащения-в жидких питательных средах (селенитовая и хлор-магниевая двойной концентрации) с последующим высевом на плотные элективные (Эндо, Левина) и селективные среды (Плоскирева, висмут-сульфитный агар).

Биохимическую активность культур сальмонелл изучали, применяя системы индикаторных бумажек (СИБ) Горьковского (Нижегородского) НИИЭиМ в соответствии с прилагаемым наставлением.

Серологическое нитрование проводили согласно "Методических указаний по бактериологической диагностике сальмонеллезов животных" (1988) с помощью диагностических агглютинирующих адсорбированных сальмонеллезных сывороток .Ленинградского (СП) НИИ вакцин и сывороток, руководствуясь схемой антигенной структуры сальмонелл по Кауфману-Уайту.

Подтшровку биологических (бактериофаги) и химнотерапевтиче-ских препаратов (аитибиотикн и др.) к выделенным штаммам сальмонелл проводилк традиционным методом серийных разведений. Чувствительность сальмонелл к примененным бактериофагам определяли согласно Приложения 2 "Методических указаний по бактериологической диагностике сальмонеллезов животных" (1971).

Методом двухкратных серийных разведений была определена чувствительность культур сальмонелл к 14 антибактериальным препаратам. Результаты оценивали по величине МПК (минимальная подавляющая концентрация препарата, мкгУмл), при которой наблюдается полная задержка роста культуры. Дифференцировку на чувствительные и устойчивые к данному препарату штаммы проводили в соответствии с рекомендациями Национального комитета клинико-лаборатор-ных стандартов (1985). В качестве контроля использовали чувствительные к антибиотикам эталонные штаммы З.аигеив АТСС25923, Е.соН АТСС 25922 и Р.аеп^шозае АТСС 27853.

Индикацию сальмонеллезного бактериофага проводили по методике Грациа (1985). Фаготипирование культур сальмонелл по международной схеме Феликса и Келлоу проводили в ЦНИИЭ (Центр по сальмонеллам) с использованием международной коллекции фагов. Плазмидную ДНК выделяли по методу С.КасЗо , Б.Ьш (1981), используя для ее разделения электрофорез в вертикальном 0,9% агарозном геле. Продукцию колицинов определяли с индикаторными штаммами коллекции Фредерика (1985).

Фагопрофилактику сальмонеллеза на птицефабриках проводили, используя поливалентный сальмонеллезнын бактериофаг АВСБЕ Нижегородского НИИЭиМ (в сухой и жидкой форме) и бактериофаг саль-монеллезный жидкий СПНПКФ "Биотех". Для сравнения были испытаны давно применяемые в ветеринарии бактериофаг против пуллоро-за-тифа птиц Алма-Атинского биокомбината, бактериофаг против сальмонеллеза и колибактериоэа телят Сумской биофабрики.

Обработку цыплят аэрозолями поливалентного сальмонеллезного бактериофага АВСЭЕ проводили однократно в выводных шкафах инкубаторов за 1,5-2 ч до выборки цыплят с помощью генераторов типа САГ-1. Доза аэрозолей бактериофагов - 4 мл/м3, экспозиция обработки 20 мин.

Обработку цыплят в выводных шкафах инкубатория аэрозолями бактериофага сальмонеллезного жидкого, бактериофага против пул--лороза-тифа птиц, бактериофага против сальмонеллеза и колибакте-риоза телят проводили по той же схеме, но в дозе по 5 мл/м3 каждого бактериофага. Аэрозоли бактериофага сальмонеллезного жидкого в птичниках в присутствии птицы применяли один раз в день в дозе 0,25 мл/м3 на 1, 3, 5, 7, 9-й дни выращивания цыплят при экспозиции 20-25 мин.

Пероральная схема использования бактериофагов включала применение: нативного поливалентного сальмонеллезного бактериофага ABCDE в разведении ¡:I0 трехкратно с питьевой водой в дозе 0,1 мл/ голову ежедневно на 1, 2, 3-й дни выращивания цыплят; бактериофага сальмонеллезного жидкого десятикратно с кормом в дозе 0,3 мл/ голову ежедневно в течение первых 10 дней выращивания цыплят; бактериофага против пуллороза- тифа птиц и бактериофага против сальмонеллеза и колибактериоза телят по одинаковой схеме - трехкратно с питьевой водой в дозе 0,2 мл/ голову через день на 1,3, 5-й дни выращивания цыплят.

Антагонистические свойства штаммов E.coli 43 К ("Антакон Е") и E.coli 123 М испытывали в лабораторных условиях СПНИИЭиМ им. Пастера в отношении вирулентных S.enteritidis, выделенных от птицы, на 3-дневных цыплятах при выпаивании им в течение трех дней подряд культуры эшерихий в дозе 0,3 мл бульонной культуры с концентрацией 109 микр.кл.(МК)/мл. Вирулентные S.enteritidis № 5045 из коллекции СПНИИЭиМ вводили цыплятам перорально в дозе 15 LDso.

Летальную дозу S.enteritidis штамма № 5045, выделенного от цыплят, определяли по стандартной методике на 1-, 8- и 20- суточных цыплятах в виварии СПГАВМ путем перорального (автоматической пипеткой по 0,5 мл) и внутримышечного (шприцами по 0,3 мл) заражения.

Бактерицидную активность эубиотическнх штаммов E.coli 43 К и E.coli 123 М при их совместном культивировании с вирулентными S.enteritidis изучали in vivo и in vitro на цыплятах 2-суточного возраста при пероральном выпаивании по 0,5 мл смеси бульонной смешанной культуры E.coli 43 К (или E.coli 123 М) с вирулентными S.enteritidis № 5045.

Колибактерин 123 М (антагонистический штамм Е.соИ 123 М) совместная разработка СПНИИЭиМ им.Пастера и СПГАВМ. Он получен на основе культуры эшерихий, антагонистичных в отношении вирулентных сальмонелл и продуцирующих бактерицидные микрощшы. В птицехозяйствах колибактерин 123 М в жидкой форме испытывали по пероральной схеме применения на цыплятах с питьевой водой утром до начала кормления. Доза выпаивания колибактерина 123 М бройлерам и ремонтному молодняку составляла 109 МК /0,3 мл/ голову. Бройлерам выпаивали колибактерин 123 М на 1, 2, 3-й дни выращивания, ремонтному молодняку - на 1, 2, 3, 4 и 5-й дни выращивания.

Электролитический раствор гипохлорита натрия (активный фи-зиологичекий раствор гипохлорита натрия 0,25%) для снижения "микробного давления" в воздухе птицепомещений получали с помощью аппарата ЭПГ-1,0, разработанного в Институте электрохимии РАН (Москва), методом электроокисления раствора хлорида натрия.

Аэрозольную обработку воздуха электролитическим раствором гипохлорита натрия проводили в инкубатории и птичниках в присутствии птицы при концентрации раствора гипохлорита натрия 1000 мг/л (2 режим работы аппарата ЭПГ-1). Аэрозольную обработку воздуха выводных шкафов осуществляли генераторами типа ТГУ, 'Электрозоль-1" или ДАГ-2 во время вывода цыплят за 1,5-2 ч до выборки однократно в дозе 0,25 мл/м3 при общей экспозиции 20-25 мин.

Аэрозольную обработку воздуха птичников электролитическим раствором гипохлорита натрия проводили генератором САГ-1 в дозе 0,25 мл/м3 при каждом распылении раствора проводили на 1, 3 и 4-й дни выращивания цыплят при общей экспозиции 45 мин.

Экстракт мяса мидии для повышения общей резистентности цыплят, содержащий полный комплекс аминокислот и набор микроэлементов, получали путем кислотного гидролиза по технологии, разработанной во ВНИРО в 1987 году.

Препарат МИГИ-К в птицехозяйствах применяли' аэрозольным (в выводном отделе инкубатория) и пероральным (в птичниках) способами.

Аэрозольную обработку цыплят в выводных шкафах инкубатория препаратом МИГИ-K проводили во время вывода цыплят за 1,5- 2 ч до их выборки однократно в дозе 4 мл/м3 при экспозиции 20-25 мин.

При пероральном применении МИГИ-K задавали с кормом трехкратно на 1,2 и 3-й дни выращивания цыплят в дозе 0,2- 0,3 мл/голову.

Бивалентная живая рекомбииантиая сальмонеллезная вакцина для птиц из штамма Salmonella typhimurium № 274/09 (лабораторный № 58/ 2) разработана ВНИИ эпидемиологии и микробиологии Н.Ф.Гамалеи (Москва), СПНИИ эпидемиологии и микробиологии им.Пастера и СПГАВМ на основе вакцины против сальмонеллеза овец (Авт.свид. № 1389054) из штамма S.typhimurium, депонированного во ВГНКИ вет-препаратов под № 274. Путем гибридизации с аттенуированным штаммом S.dublin на штамм № 274 был передан соматический антиген 09, специфичный для сальмонелл группы D и получен рекомбинант, несущий гены как S.typhimurium, так и соматический антиген 09 сальмонелл группы D, в результате чего создана принципиально новая вакцина.

LD50 вирулентных штаммов сальмонелл, использованных для заражения, определяли на 360 цыплятах разного возраста (1-3-, 8-10- и 20-суточных) по стандартной методике.

Адгезивные и инвазивные свойства вакцинного штамма № 58/2 исследовали на перевиваемой культуре клеток .НЕР-2 и перевязанных петлях тонкой кишки кролика по стандартной методике с последующим морфологическим исследованием под микроскопом гистологических срезов тканей. Заражение проводили вакцинным штаммом (опыт) и вирулентными штаммами S.typhimurium № 415, S.enteritidis (контроль) в дозе 108 МК/мл.

Безвредность вакцинного штамма № 58/2 изучали на 3-дневных цыплятах при оральном введении в глотку при помощи шприца различных доз микроорганизмов (от 105 до 108 МК/мл.). При изучении ответной иммуноморфологической реакции лимфоидной ткани и макрофагов проводили иммуноморфологические исследования.

Протективность вакцинного штамма № 58/2 изучали in vivo при пероральном заражении кроликов дозой 1010, трехдневных цыплят -дозой 5x104 МК. После пероральной нммутпаиии взкитшмм штам-

мом кроликам и цыплятам орально вводили вирулентные штаммы S.typhimurium, S.enteritidis, S.dublin, S.gallinarum-pullorum в дозе 10* -10ю МК/мл. Протективность вакцины оценивали с помощью иммуно-морфологических критериев при микроскопировании гистологических препаратов слепой кишки.

Энтеротоксигенность вакцинного штамма № S8/2 изучали in vitro в морфологических опытах, заражая перевязанные петли тонкой кишки кролика по общепринятой методике. Заражение проводили вакцинным штаммом (опыт) и вирулентными штаммами S.typhimurium № 415, S.enteritidis в дозе 10' -10'» МК/мл.

При получении положительных результатов при изучении адгезивное™, инвазивности, энтеротоксигениосги, безвредности, протек-тивносги вакцинного штамма N° 58/2 в лабораторных опытах с разрешения ГУВ МСХ РФ в ПО "Синявинское" провели испытание бивалентной живой рекомбинангной сальмонеллезной вакцины для птиц на ограниченном поголовье.

Кур-несушек в возрасте от 130 до 210 дней и цыплят в 2-3-дневном возрасте (выведенных из яиц от иммунизированных кур-несушек), иммунизировали трехкратно с интервалом между 1-м и 2-м введением в две недели, а между 2-м и 3-м - одну неделю. Иммунизирующие дозы составляли для кур - 5х108, 5х109 и 5х109 МК/мл, для цыплят - по ЗхЮ8 МК/мл в каждую иммунизацию. Предварительно за 2 ч до иммунизации птицу лишали корма и воды.

От иммунизированных кур-несушек и цыплят отбирали пробы для йммуноморфологических и бактериологических исследований.

Иммунотенность живой рекомбинантной сальмонеллезной вакцины для птиц из вакцинного штамма № 58/2 оценивали в РНГА с эри-троцитарными диагностикумами по титрам антител к сальмонеллам группы В и D в сыворотках крови иммунизированных и контрольных кур и цыплят в течение цикла трехкратной иммунизации.

. Биометрическую и статистическую обработку полученного материала осуществляли в соответствии с существующей методической литературой с использованием вычислительной техники: МК-61, "Искра-1256.6", "Искра-226" и "Искра- 1030.И". Графическое оформление полученных результатов проводили с помощью ПК ЭВМ "IBM-PS-286",

"IBM-PS-386", "IBM-PS-486" с применением программ Statgraf, Microsoft office.

В птицехозяйствах Северо-Западной зоны России проведено в общей сложности около 12,5 тыс. микробиологических исследований.

В условиях производства действие лечебно-профилактических препаратов испытано на общем поголовье 1548,7 тыс. голов птицы.

Часть исследований была проведена с аспирантом кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней сельскохозяйственных животных СПГАВМ Максимовым П.Н. и соискателем Максимовой З.Н., за помощь которым в работе выражаю благодарность.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Источники возбудителя сальмонелчезной инфекции и пути заноса и распространения сальмонелл в птицехозяйствах

Изучение эпизоотологии сальмонеллеза, обусловленного S.entcri-tidis, показало, что в обследованных птицехозяйствах основным источником возбудителя инфекции является больная и переболевшая птица, выделяющая возбудителя во внешнюю среду с пометом. Бактериологические исследования проб помета птицехозяйствах яичного и мясного направления Ленинградской области показали, что 24,02± 6,20% проб были контаминированы S.enteritidis.

Изучение горизонтального механизма передачи выявило значительную контаминацию S.enteritidis объектов окружающей среды: воздуха птичников 8,83±2,24% проб, воздуха выводных шкафов инкубатория 16,3б±4,00% проб,кормов из кормушек 30,06±7,61% проб, воды из лотковых поилок 11,16±3,3б% проб, смывов с технологического оборудования птичников 9,65±2,13% проб, смывов с выводных шкафов в ннкубаториях 15,63±4,06% проб.

Подтвержден вертикальный (трансовариальный) механизм передачи S.enteritidis, который на практике встречается гораздо реже при данной инфекции, чем горизонтальный. При бактериальном исследовании Жйгпса яиц, предназначенных для инкубации, S.enteritidis в птицехозяйствах Ленинградской области выделены из 1,09±0,19% проб, из эмбрионов в 8,2!±1,19% случаев. При заражении птицы возбудителем сальмонелла энтеритндис инфекции выявили, что развитие характера интенсивности инфекционного процесса у кур заяисит от путей переда-

чи возбудителя, "ворот инфекции", возраста птицы, количества сальмонелл, попавших в организм птицы. Взрослая птица при алиментарном заражении не проявляет клинических признаков сальмонеллеза, а возбудитель инфекции локализуется при этом в паренхиматозных и других внутренних органах.

При аэрогенном пути заражения молодняка в выводных шкафах инкубатория S.enteritidis местом первичной локализации возбудителя инфекции является слизистая дыхательных путей. Гибель цыплят наступает в первые 3-5 дней жизни.

Изучение эпизоотологии сальмонеллеза на крупных птицефабриках Северо-Западного региона России показало, что по (.альмо-неллезу практически неблагополучны все обследованные птицехо-зяйства. Установлено, что в этиологическом профиле сальмонелл, распространенных на птицефабриках северо-западной зоны России, ведущее место занимают: S.enteritidis - 14,56% , S.typhimurium -10,88%, S.derby - 10,13%.

Изучая причины этого явления, установили, что основным путем первичного заноса возбудителя сальмонеллеза энтеритидис в пти-цехозяйства являются племенная продукция (инкубационные яйца и суточные цыплята), поступающая из хозяйств-поставщиков, неблагополучных по S.enteritidis инфекции, а также корма, в основном животного происхождения.

3.2. Биологическая характеристика изолированных культур сальмонелл

В ходе выполнения микробиологических исследований в обследованных хозяйствах из 4962 проб внутренних органов кур-несушек, погибших эмбрионов, цыплят разных возрастных групп, кормов, воды, смывов с прямой кишки коров и телят, молока и объектов окружающей среды за период с 1984 до 1994 г.г. выделено 863 культуры сальмонелл.

По морфологическим, тинкториальным, кульгуральным, ферментативным и серологическим свойстгам 263 выборочно взятых культур являлись типичными представителями рода Salmonella. Они имели стабильные идентичные ферментативные признаки по 23 тестам, используемым для идентификации эитеробакгерий.

Серологическая идентификация 863 культур сальмонелл, выделенных в четырех хозяйствах Ленинградской области я Республики Карелия, выявила, что к сероварианту S.enteritidis относились 14,57% культур, к S.typhimurium - 10,88%, к S.derby - 10,13%, к S.givi - 6,86%, к S.bispebierg - 3,96%, к S.virchovv - 2,41%, к S.senfetnberg - 4,21%, к S.in-fantis - 5,72%, к S.bovis roorbificans - 4,34%, к S.Iexington - 8,98%, к S. Oranienburg - 8,67%, к S.heidelberg - 5,26%, к S.newport - 7,36%, к S.ana-tum - 3,53%, к S.panama - 3,12% культур.

В наших экспериментах у 100 штаммов S.enteritidis, выделенных в птнцехозяйствах мясного и яичного направления Ленинградской области, методом серийных разведений была определена антибиотикоре-зистентность к 7 препаратам. Установлено, что большинство культур S.enteritidis из птицехозяиств Ленинградской области проявили чувствительность к левомицетину, тетрациклину, ампициллину, необиоцину и фуразолидону. Практически все культуры были устойчивы к тилаиу и фармазину.

Фаготипирование сальмонелл по международной схеме Феликса и Келлоу, проведенное в ЦНИИЭ показало, что 120 штаммов S.enteritidis. из различных источников птицехозяиств Ленинградской области принадлежали к одному фаговару 1. Изученные культуры сальмонелл сероваров S.enteritidis из птицехозяйств Ленинградской области не продуцировали колицинов с индикаторными штаммами коллекции Фреде- -рика.

Показана идентичность культур S.enteritidis, выделенных из различных источников (кормов, кур-несушек, эмбрионов, цыплят, смывов с технологического оборудования птицеводческих помещений) птицефабрик Ленинградской области по основным изученным биологическим свойствам.

3.3. Применение биологических и химиотерапевтических препаратов в птицеводстве

В птнцехозяйствах Ленинградской области определена фагоре-зистентность выделенных штаммов S.enteritidis по отношешда к 4 бактериофагам. Максимальной литической активностью в отношении выделенных культур сальмонелл обладали поливалентный саль-

монеялезный ABCDE бактериофаг (76,92± 15,69%) и бактериофаг сальмонеялезный жидкий (71,79±13,46%).

Оценку эффективности фагопрофилактики проводили по сохранности цыплят 1-40 дней выращивания и деловому выходу ремонтного молодняка.

Анализ полученных результатов показал, что аэрозольно-перора-льное применение поливалентного сальмонеллезного ABCDE бактериофага обеспечило повышение сохранности подопытных цыплят 120-дневного возраста на 5,14% (р<0,03), ремонтного молодняка в возрасте 1-120 дней, на 1,7% (р<0,02), делового выхода молодки 1-120 дней на 10,45% (р<0,005); уменьшило высеваемость сальмоьелл из внутренних органов подопытных цыплят на 25,05% (р<0,05) по сравнению с контролем. Сочетанное аэрозольно- пероральное использование поливалентного сальмонеллезного ABCDE бактериофага выявило, что такая фагопрофилактика способствует полной элиминации сальмонелл, в том числе и S.enteritidis, из организма цыплят в первые 7 дней их выращивания.

Аэрозольно-пероралыюе применение бактериофага сальмонеллезного жидкого обеспечило повышение сохранности подопытных цыплят 1-39-дневного возраста на 2,25% (р<0,02), уменьшило высеваемость сальмонелл из внутренних органов подопытных цыплят на 36,57% (р<0,05) по сравнению с контролем.

Результаты экспериментов по фагопрофилактике показали, что применение сальмонеллезных фагов сокращало падеж птицы и предотвращало распространение сальмонеллезной инфекции, что совпадает с данными других исследователей (Качмазов Г.С., 1990; Радчен-ко В.А., 1993).

Однако, как ' видно из приведенных данных, использование бактериофагов, обеспечивая снижение падежа молодняка, не может полностью пресечь циркуляцию возбудителя, а следовательно, гарантированно предупредить риск зараженности или контаминации готовой продукции, получаемой от птиц. Кроме того, как известно из литературных источников, при длительном применении одного типа бактериофагов нельзя исключить риск появления фагорезистентных штаммов сальмонелл (Alonso R. et al., 1987; Edel W. et al., 1988; Pavia A.

et al., 1990). В то же время, учитывая безопасность метода, возможность его использования и наличие защитного эффекта, начиная с первых минут после вывода цыплят, высокую экономическую эффективность, аэрозольное применение бактериофагов является перспективным компонентом комплексной схемы профилактики сальмонел-лезной инфекции среди птиц.

Эффективность иммунизации как метода профилактики сальмо-неллезов подтверждена во всем мире, что позволило экспертам ВОЗ рекомендовать этот метод для широкого повсеместного применения (доклад комитета экспертов ВОЗ № 774,1991).

В производственных условиях ПО "Синявинское" проведены испытания бивалентной живой рекомбинантной сальмонеллезной вакцины для птиц из штамма S.typhimurium № 274/09 (лабораторный № 58/2). Испытания вакцины проводили на ограниченном поголовье птицы (46400 голов кур-несушек и 52300 голов цыплят) в ПО "Синявинское". Вакцина разработана совместными усилиями НИИЭиМ им. Гамалеи, СПНИИЭиМ им.Пастера и СПГАВМ.

В лабораторных и производственных условиях выявлен протек-тивный эффект вакцннного штамма № 58/2 in vivo и in vitro на цыплятах в отношении вирулентных штаммов S.typhimurium, S.ente-ritidis, S.gallmarum-pullorum. Вакцина экологически безвредна, поскольку микробы вакцинного штамма спонтанно разрушаются в течение двух недель в организме птицы или в окружающей среде.

Результаты проведенных производственных испытаний показали иммуиогенность вакцины: куры-несушки формировали иммунитет при пике напряженности на 8-е сутки после третьей иммунизации (р<0,01). Титр специфических антител к сальмонеллам группы D в РИГА достигал log2 - 11,0, далее наблюдалось снижение титра специфических агглютининов и к 18-м суткам после третьей иммунизации он составлял log2 - 3,7 при фоновых значениях log2 - 4,0 (р<0,01). Пе-рорально иммунизированные цыплята, выведенные от иммунизированных кур, формировали иммунитет при пике напряженности на 13-е сутки после третьей иммунизации (р<0,01). Титр специфических антител к сальмонеллам группы В в РИГА достигал к этому сроку log2 - 8,6, к сальмонеллам группы D log2 - 13,0. Далее как у кур-несушек

наблюдалось снижение титра специфических агглютининов (р<0,01).

Результаты наших исследований подтверждают высокую ареакто-геиность испытанной вакцины.

Вакцинация поголовья кур-несушек обеспечила значительное (в 1,5 раза) сокращение случаев регистрации у кур-несушек желточного перитонита (Р<0,05). За счет этого выбраковка несушек уменьшилась на 2,8%, сохранность вакцинированного поголовья возросла на 0,8%, за 6 месяцев яйценоскость в вакцинированных группах на 1 курицу-несушку увеличилась!« 7,7 яйца (Р<0,05).

Трансовариальный иммунитет цыплят, полученных из инкубационных яиц вакцинированных кур-несушек родительского стада, исследовали, определяя титр специфических агглютининов в желтке яиц от вакцинированных кур и в сыворотке крови цыплят от этих кур. Титр специфических агглютининов в желтке в РА составлял 1:80-1:160, в контрольной группе 1:40. Специфические антитела в сыворотке крови цыплят, полученных из яиц от вакцинированных кур-несушек родительского стага, определяли в РА на 1-5-10-15-20-30-й дни выращивания. Их ткгр в суточном возрасте составлял 1:80-1:160, затем напряженность трансовариальчого иммунитета постепенно снижалась (р<0,05) и к 30 дню специфические антитела можно было уловить только в ККРНГА.

Пероральное применение вакцины позволило снизить падеж иммунизированных цыплят, выведенных из яиц от вакцинированных кур родительского стада, за 1-90 дней их выращивания на 25,1% (р<0,01).

Вакцина создает местный кишечный иммунитет и эффективно снижает выделение сальмонелл зараженной птицей. Установлено, что •, высеваемость Б.еШегШШз от вынужденно убитых цыплят в опытных группах была на 15,3% ниже (р<0,02), а от павших цыплят на 45,0% ниже (р<0,02), чем в невакцинированном контроле.

Эти результаты полностью согласуются с данными Н.Меуег (1994) по эффективному использованию в птицеводстве Германии аналогичной оральной живой сальмонеллезной вакцины 2<х«а1ога1, с успехом испытанной на поголовье кур-несушек в 1,2 млн голов.

Результаты производственных опытов, проведенных в ПО "Си-нявцнское", позволяют нам рекомендовать бивалентную живую реком-бннантную сальмоиеллезную вакцину для птиц в качестве эффективного средства специфической профилактики сальмонеллеза кур, обусловленного S.enteritidis.

Большое внимание в настоящее время в нашей стране и особенно за рубежом, уделяется биологическим методам профилактики саль-монеллезов, основанным на использовании микробов-антагонистов.

В производственных условиях птицехозяйств яичного и мясного направления продуктивности на ПО "Синявинское" и птицефабрике "Ломоносовская" был испытан колибактерин 123 М, представляющий собой совместную разработку СПНИИЭиМ им. Пастера и СПГАВМ. Колибактерин 123 М приготовлен из эубиотического штамма E.coli 123 М, который in vitro и in vivo обладает антагонистическими свойствами по отношению к вирулентным S.enteridis. Антагонистические свойства по отношению к вирулентным S.enteridis переданы штамму E.coli 123 М с плазмидой синтеза бактерицидного полипептида мнкроцина широкого спектра действия. В лабораторных условиях доказано, а в производственных условиях подтверждено, что использование колибактерина 123 М препятствует накоплению S.enteritidis, их патогенному действию на организм цыплят, защищает молодняк от носительства сальмонелл.

Пероральное применение колибактерина 123 М как антагониста вирулентных S.enteritidis в производственных условиях позволило снизить высеваемость сальмонелл от цыплят 1-20- дневного возраста на 22,87% (р<0,05), повысить сохранность цыплят 1-20-дневного возраста на 2,09% (р<0,04), сохранность ремонтного молодняка в возрасте 1 -45 дней на 0,71 % (р<0,05), увеличить среднюю массу забитой головы бройлера на 87 г (р<0,03), ремонтного молодняка на 105 г (р<0,03).

Наши результаты полностью согласуются с данными отечественных и зарубежных исследователей (Мишурнова Н.В. с соавт., 1993; Персов A.C. с соавт., 1987; Ziprin R. et al., 1991; Mulder R„ 1991), которые успешно применяли микробов-антагонистов для эффективного предотвращения зараженности цыплят сальмонеллами.

Лечение кур, больных сальмонеллезом, обусловленным S.enteriti-dis, как былб указано выше, следует проводить комплексно, используя наряду с лечебно-профилактическими и специфическими средствами также препараты, повышающие общую резистентность и иммунобиологическую активность птицы. К ним относятся два препарата, испытанные в крупных птицехозяйствах области и рекомендуемые для широкого внедрения в промышленное птицеводство: электролитический раствор гипохлорита натрия (активный физиологический раствор гипохлорита на грия 0,25%) и экстракт мидии (препарат МИГИ-К).

Электролитический раствор гипохорита натрия, применен в производственных условиях ПО "Синявинское" как препарат для снижения микробного фона в воздухе птицепомещений, значительный уровень которого является стрессором для птицы, снижая уровень обшей резистентности птицы. В ходе проведения производственных опытов впервые установлено, что аэрозольное применение электролитического раствора гипохлорита натрия в инкубатории и в птичниках по разработанной схеме применения препарата снижает в опыте количество сальмонелл в воздухе выводных шкафов на 35,70% (р<0,05), в отичниках на 30,00% (¡><0,05); уменьшает в опытных группах высеваемость сальмонелл из эмбрионов на 7,9 Г/о (р<0,05), из внутренних органов цыплят 1-20-дневного возраста на 20,71% (р<0,02) по сравнению с контролем. Сохранность подопытных цыплят была на 0,8% выше, чем в контроле (р<0,04).

Данных о применении активного физиологического раствора в птицеводстве нашей страны и за рубежом в доступной литературе практически не встречалось. О наличии сходного эффекта ингиби-рования микрофлоры (в первую очередь, бактерий кишечной группы) на скорлупе яиц и поверхности тушек за счет использования электро, активированной воды, полученной методом электрохимической активации, сходным с методом электроокисления, сообщали В.И.Фи-лоненко с соавт. (1990).

Также впервые в практике промышленного птицеводства в ПО "Синявинское" был испытан в качестве биостимулирующего препарата для повышения обшей резистентности птицы и профилактического средства против сальмонеллеза птиц экстракт морских

моллюсков мидии (препарат МИГИ-К) производства Московского ВНИРО. В результате аэрозольного (в выводных шкафах инкубатория) и перорального (в птичниках с кормом) методов применения препарата МИГИ-К по разработанной схеме сохранность з опытных группах цыплят 1-20-дневного возраста была выше при аэрозольном способе на 2,32% (р<0,02), при пероралышм на 1,43% (р<0,02), чем в контроле. Высеваемость сальмонелл от цыплят была ниже, соответственно на 8,33% и на 1,11%, чем в контроле (р<0,05).

О наличии положительного действия белковых гидролизатов на организм животных и птицы сообщали К.К.Мовсум-Заде с соавт. (1969; 1989), Т.Ганчев с соавт. (1974). Причины этого явления объясняются широким набором биологически активных веществ, аминокислот в их составе, которым придают особую роль активаторов ферментов и других соединений. Отсюда вытекает и многообразное действие МИГИ-К, как белкового гидролизата на организм птицы: улучшение обмена веществ, повышение иммунобиологической реактивности, стимуляция роста и развития, что наблюдалось не только в наших исследованиях, но и описано в работах В.А.Берестова (1963; 1964), К.Койчева с соавт. (1974) и в информационном письме (1987).

3.4. Методы диагностики сальмонеллезной инфекции, обусловленной З.етег№с1к

Обнаруженные особенности эпизоотического процесса сальмонеллезной инфекции кур, вызванной серовариантом Б.еШегШ-<Й8 в крупных птицеводческих хозяйствах Северо-Западного региона России (бессимптомная форма сальмонеллоносительства у молодняка старшего возраста и взрослой пгицы, нечеткое клиническое проявление и отсутствие характерных именно для данного заболевания патологоанатомических изменений), с одной стороны, объясняют трудности в диагностике и низкую эффективность проводимых противосальмонеллезных мероприятий, с другой, подводят к необходимости совершенствования методов диагностики сальмонелла эн-теритидис инфекции у кур. Поэтому необходимо было провести комплекс диагностических исследований, наиболее достоверных, доступных и приемлемых для производства.

Эффективность оздоровительных мероприятий от сальмонелла энтеритидис инфекции зависит от надежности и совершенства методов диагностики, применяемых для выявления зараженной птицы.

В результате проведенных исследований осуществлен комплекс диагностических методов: эпизоотологические, серологические, клинические, бактериологические, патологоанатомические исследования. Из этого комплекса для диагностики сальмонеллезной инфекции кур, обусловленной S.enteritidis, наиболее достоверным оказался бактериологический метод. Он позволяет определить наличие возбудителя сальмонеллезной инфекции и выделить его.

Основной акцент при диагностике сальмонеялеза кур, обусловленного S.enteritidis, следует делать на бактериологические исследования погибших эмбрионов (хориоаллантоисная жидкость, нерассосавшийся желток), трупов погибших и вынужденно убитых цыплят и взрослой птицы (кровь из сердца, печень, желчь, селезенка, трубчатые кости, фолликулы, содержимое слепых отростков тонкого отдела кишечника), кормов, воды, подстилки, мекония.

Количество посевного материала, вносимого в среды обогащения, при исследовании внутренних органов и кормов на S.enteri-' tidis должно быть значительным ( не менее 2 мл гомогенатов органов на 5-6 мл среды и не менее 250 г корма при Соотношении корма и среды 1:5).

В качестве дополнительных методов диагностики сальмонеллезной инфекции кур, обусловленной S.enteritidis, следует обязательно использовать: клинико-эпизоотологический и серологический методы (исследования ремонтного молодняка, кур-несушек до и в течение периода яйцекладки в оптимальные для серодиагностики сроки в ККРНГА с помощью поливалентного сальмонсллезного эри-троцитарного антигена). Именно в связи с тем, что результаты по ККРНГА бывают положительными только при высокой степени зараженности поголовья, при которой возбудитель из кишечника попадает во внутренние органы, и не выявляют кишечную форму саль-монеллоносительства, серологический .метод можно использовать лишь в качестве ориентировочного, дополнительного к бактериологическому методу.

3.5. Система мероприятий против сальмонеллезов в птицеводстве

В основу системы мер положены ветеринарно-санитарные мероприятия, рекомендованные инструктивными документами по борьбе с сальмонеллезами, кроме того выявленные в ходе исследований особенности развития эпизоотического процесса при сальмонеплезной инфекции, вызванной $.еп1егШШ$, а также особенности технологии яичного и мясного производства, учитывая которые можно управлять течением сальмонелл езной инфекции и снизить экономический ущерб от нее.

Разработанная система мероприятий против сальмонеллеза кур, обусловленного 3.еШсгШ£Ш, комплексная и включает в себя меры по предотвращению заноса возбудителя и его распространения, меры по повышению общей резистентности и иммунобиологической активности у птицы; контроль за эпизоотическим состоянием птицехозяйства путем мониторинга, включающего регулярные бактериологические исследования эмбрионов, молодняка и родительского стада, птичников, инкубатория, кормов и персонала; регулярные серологические исследования ремонтного молодняка, кур-несушек до и в течение периода яйцекладки; систему диагностических исследований. Разработанная система мероприятий включает и специфическую профилактику сальмонеллеза кур, обусловленного Б.етегШШз, с использованием живой рекомбинантной вакцины и бактериофагов.

Научно-обоснованная система мероприятий против сальмонеллеза кур, Обусловленного З.еШегЖсШ, предполагает обязательный контроль качества противоэпизоотичеких мер. Он включает в себя мероприятия общей направленности: на источник возбудителя инфекции, механизм его передачи и резистентность птицы к инфекции.

ВЫВОДЫ

1. Промышленная технология ведения птицеводства, значительные поголовья птицы на небольших площадях пгицехозяйств создают все условия для организации стационарных эпизоотических очагов, обусловленных неспецифическими сальмонеллами для кур, среди которых ведущее место занимают Б.еМегШс^, БЛурШтипит, 8 (1егЬу, ЭЛехтд-Юп, Б-огашепЬи^, 8лпГат1$.

2. Из 863 культур сальмонелл, выделенных в промышленных пти-цехозяйствах Северо-Западного региона России, дифференцированы по основным биологическим свойствам 16 серовариактов сальмонелл, из которых превалировали S.enteritidis (14,56±2,S0%) в Ленинградской области и S.typhimurium (10,88±2,13%) в Республике Карелия. Фаготи-шрование изолированных сальмонелл по международной схеме Феликса и Келлоу показало принадлежность S.enteritidis к фаговару 1, S.typhimurium - к фаговару 2. Выявлена идентичность культур S.enteritidis и S.typhimurium, выделенных из различных источников (куры, эмбрионы, цыплята, смывы с прямой кишки КРС, технологического оборудования, воздух, корма, вода, помет, молоко, больные люди).

3. Стационарность эпизоотических очагов сапьмонеллезной инфекции, вызванной S.enteritidis, обусловлена за счет поступления возбудителей извне - с комбикормами и племенной продукцией из других хозяйств, а также распространения возбудителя внутри хозяйства с инкубационными яйцами и пометом птицы.

Установлено, что однократный занос сальмонелл какого-либо се-ровара (S.enteritidis, S.typhimurium, S.infantis, S.bispebierg, S.heidelberg) приводит к острой эпизоотической вспышке сальмонеллеза длительностью около года, в дальнейшем в связи с элиминацией сальмонелл при заменах поголовья и проводимых ветеринарно-санитарных мероприятий эпизоотический очаг угасает.

Клиническое проявление сальмонелла энтеритидис инфекции зависит от возраста и проявляется у цыплят до 10-дневного возраста в септической форме. У цыплят месячного возраста и старше, а также у взрослой птицы инфекция протекает бессимптомно, птица при этом остается носителем и выделителем S.enteritidis.

4. Эпизоотический процесс сальмонеллеза тифимуриум у КРС в птицесовхозе "Суоярвский" развивался торпидно. Инфекция у КРС и птицы протекала латентно. Выявлено широкое носительсгво S.typhimurium среди КРС (78,26± 15,38% у коров и 58,82± 11,43% у телят); птиц промышленного стада (5,26±1,13% у кур-несушек и 9,10±2,27% у цыплят 1 -60 дней) и диких птиц (80,00±22,85%), обитающих на территории данного хозяйства.

5. Аэрозольное и аэрозолыю-пероральиое применение бактериофагов в птицехозяйствах яичного и мясного направления продуктивности Ленинградской области с целью профилактики сальмонеллеза повысило сохранность цыплят 1-10 и 1-20- дневного возраста при оптимальных аэрозольно- пероральиых схемах применения: в случае использования поливалентного сальмонеллезного бактериофага ABCDE на 5,14% (р<0,03), бактериофага сальмонеллезного жидкого на 2,25% (р<0,02) по сравнению с контролем.

Применение бактериофагов, снижая падеж молодняка, не обеспечило ликвидации эпизоотического очага, однако уменьшило высевае-мость сальмонелл от цыплят подопытных групп 1-10 и 1-20- дневного возраста при оптимальных аэрозольно- пероральиых схемах применения: в случае использования поливалентного сальмонеллезного бактериофага ABCDE на 25,05% (р<0,05), бактериофага сальмонеллезного жидкого на 36,57% (р<0,05) по сравнению с контролем. Кроме того, со-чеганное аэрозольно-пероральное использование поливалентного сальмонеллезного ABCDE бактериофага выявило, что такая фагопрофилактика способствовала полной элиминации сальмонелл, в том числе и S.enteritidis, из организма цыплят в первые 7 дней их-выращивания.

Учитывая экологическую безопасность использования бактериофагов, их протективный эффект уже в первые дни жизни цыплят, аэрозольное применение бактериофагов оправдано в качестве компонента комплексной схемы профилактики сальмонеллеза среди птиц.

6. In vivo и in vitro в лабораторных опытах доказано антагонистическое действие эубиотического штамма E.coli 123 М (с переданной ему плазмидой синтеза микроцина) в отношении вирулентных S.enteritidis. Впервые в производственных условиях птицефабрик яичного и мясного направления показана целесообразность перорального применения колибактерина 123 М (антагонистического штамма E.coli 123 М) с питьевой водой в борьбе с сальмонеллезом птиц. Разработан «i схема при* менения колибактерина 123 М. Сохранность в опытных группах цыплят 1-20-дневного возраста была на 2,09% выше (р<0,04) ремонтного молодняка в возрасте I -45 дней на 0,71% выше (р<0,05), а высеваемость сальмонелл на 22,87% ниже, чем в контроле (р<0,05). В подопытных

группах средняя масса забитой головы бройлера была на 87 г, ремонтного молодняка на 105 г выше, чем в контроле (р<0,03).

7. Препарат МИГИ-К (экстракт мидии) биостимулирующего действия при аэрозольном (в выводных шкафах инкубатория) и перораль-ном (в птичниках с кормом) применении по разработанной схеме обеспечил повышение устойчивости цыплят к заражению сальмонеллезом: сохранность в опытных группах цыплят 1-20-дневного возраста была выше при аэрозольном способе на 2,32%, при пероральном на 1,43% , чем в контроле (р<0,02). Высеваемость сальмонелл от цыплят была ниже, соответственно на 8,33% и на 7,77%, чем в контроле (р<0,05).

8. Электролитический раствор гипохлорита натрия (активный физиологический раствор г ипохлорита натрия 0,25%), нолученный с помощью аппарата ЭДО-3 при аэрозольном применении в ннкубатории и птичниках по разработанной схеме обеспечивал резкое снижение количества сальмонелл: в воздухе выводных шкафов во время вывода цыплят на 35,70%, в птичниках на 30,00% по сравнению с контролем (р<0,05). Высеваемость сальмонелл из внутренних органов эмбрионов в опытных группах была ниже на 7,91% (р<0,05), а у цыплят l-20-днев-ного возраста на 20,71% ниже, чем в контроле (р<0,02). Сохранность подопытных цыплят была на 0,80% выше, чем в контроле (р<0,04).

9. Впервые создана бивалентная живая рекомбинантная сальмонелл езная вакцина для птиц из штамма S.typhimurium № 58/2, разработанная совместными усилиями сотрудников НИИЭиМ им.Гамалея, СПНИИЭиМ им.Пасгера и СПГАВМ на основе вакцины против саль-монеллеза овец (авт.свидетельство № 1389054). В результате гибридизации аттенуированного штамма S.dublin на него был передан соматический антиген 09, и получен рекомбинантный штамм для принципиально новой вакцины. В лабораторных условиях in vivo и in vitro доказана адгезивность, инвазивность, безвредность, протективносгь данной вакцины.

10. Живая рекомбинантная сальмонеллезная вакцина для птиц из штамма S.typhimurium № 58/2, испытанная на ограниченном поголовье в производственном опыте на ПО "Синявинское" яичного направления по предложенной схеме пероральиого применения с питьевой водой курам-несушкам и 2-3- дневным цыплятам, выведенным из яиц от иммунизированных кур- несушек, оказала протективное действие и снизила

падеж цыплят в возрасте 1-90 дней в опытных группах на 25,1% по сравнению с контролем (р<0,01). В стадах кур-несушег применение вакцины обеспечило уменьшение выбраковки несушек на 2,8% (р<0,05) за счет сокращения случаев регистрации желточного перитонита в 1,5 раза (р<0,05), повышение сохранности вакцинированного родительского поголо: .я на 0,8%, увеличение яйценоскости в вакцинированных группах за б месяцев на одну курицу-несушку на 7,7 яйца (р<0,05).

Использование вакцины обеспечило снижение высеваемости вирулентного штамма S.enteritidis у подопытных цыплят на 30,15% по сравнению с контрольными группами (р<0,02).

11. Разработана система мероприятий против сальмонеллеза кур, обусловленного S.enteritidis, в основу которой наряду с общими веге-ринарно-санитарными мероприятиями включены особенности развития эпизоотического процесса при сальмонелла энтеритидис инфекции, а также особенности технологии яичного и мясного производства, учитывая которые можно управлять течением сальмонеллезной инфекции и снизить экономический ущерб от нее. Научно-обоснованная система мероприятий против сальмонелла энтеритидис инфекции кур предполагает использование специфических средств профилактики (бактериофаги и бивалентную живую рекомбинантную сальмонелл езную вакцину для птиц из штамма S.typhimurium N 58/2), а также препаратов, препятствующих колонизации сальмонеллами кишечника цыплят и повышающих резистентность и иммунобиологическую реактивность птицы.

Внедрение научно-обоснованной системы мероприятий против сальмонеллеза кур, обусловленного S.enteritidis, в птицехозяйствах Северо-Западного региона России позволило ослабить напряженность эпизоотического процесса и профилактировать эту инфекцию.

12. Эффективность оздоровительных мероприятий в птицеводстве при сальмонелла энтеритидис инфекции во многом зависит от надежности и совершенства диагностических методов. Учитывая особенности эпизоотического процесса сальмонеллеза кур, вызванного серова-риантом S.enteritidis (бессимптомная форма сальм. теллоноситепьства у молодняка старшего возраста и взрослой птицы, нечеткое клиническое проявление и отсутствие характерных для данной инфекции пато-логоанатомических изменений), в комплексе диагностических методов преимущество очдастся бактериологическим меюдаи, позволяющим

выделить и идентифицировать возбудителя. Серологический и клини-ко-эпизоотологические методы используются в качестве ориентировочных дополнительных методов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

{.Рекомендации по применению аэрозолей лекарственных препаратов в птицеводстве (Л., 1984);

2. Авторское свидетельство "Способ выращивания цыплят" (Ns 1425887 от 22.05.88 г.).

3. Авторское свидетельство "Стимулятор роста бройлерных птиц" (№ 1577100 от 08.03.90 г.).

4. Рекомендации по профилактике сальмонеллезов птиц аэрозолями бактериофагов. (Л., 1991 г.).

5. Временное наставление по проведению производственных опытов по применению бактериофага сальмонеллезного жидкого в птицеводстве Ленинградской области (утв. вет.отделом АПО Ленинградской области 14.12.92 г.).

6. Временное наставление по применению бактериофага сальмонеллезного жидкого в птицеводстве Республики Карелия (утв. вет.отделом АПК Республики Карелия 2.02.93 г.).

7. Временное наставление по применению бактериофага сальмонеллезного жидкого в животноводстве и свиноводстве Республики Карелия (утв. вет.отделом АПК Республики Карелия 2.02.93 г.).

8. Рекомендации по применению в птицеводстве колибактерина 123 М (угв-ДВ МСХиП РФ 15.02.95 г.).

9. Рекомендации по применению в птицеводстве экстракта мидии (препарат МИГИ-K) (утв. ДВ МСХиП РФ 15.02.95 г.).

10. Рекомендации по применению в птицеводстве электролитического раствора гипохлорита натрия (утв. ДВ МСХиП РФ 15.02.95 г.).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кузьмин В.А. Эпизоотологические аспекты смешанной инфекций при выводе цыплят // Всесоюз. конф. по проблемам эпизоотологи. - Сб.тез.докл. - Казань, 1983. - С. 154.

2. Рекомендации по применению аэрозолей лекарственных препаратов в птицеводстве / Всесоюз.н.-и.ветеринарный ин-т птицеводства: Разраб. В.Д. Соколов, В.В.Шорников, Г.Е.Афанасьева, В.А.Кузьмин и др. - Л.-1984.- Юс.

3. Кузьмин В.А. Микробизм в инкубатории и его влияние на выводимость и сохранность цыплят II Профилактика и ликвидация заразных болезней. - Сб.науч.тр. ЛВИ. - Л. -! 985. - С. 35-40.

4. A.c. SU 1425887 AI А 23 К 1/00. Способ выращивания цыплят/ К.И.Аавик, Н.А.Тамм, Л.Х.Голубева, В.А.Кузьмин и др.; к/х "Виру", ЭССР. - Зарег. 22.05.1988.

5. Коваленко Р.И., Александрова Т.П., Белова Н.Г., Кузьмин В.А. и др. Применение полипептидов эпифиза крупного рогатого скота в качестве стимулятора роста цыплят-бройлеров II Биологически активные вещества в с.-х. - Маг. к науч.-практ. конф., Экспресс-информ., № 6-87, Л., 1988. - С. 26.

6. Коваленко Р.И., Белова Н.Г., Кузьмин В.А., Таммемяги В.В. Влияние эпифизарных полипептидов на гематологические показатели цыплят-бройлеров II 111 Всесоюз. конф. по нейроэндокринологии. - Тез. докл.-Л., 1988.-С.33

7. Урбан В.П., Кузьмин В.А., Бойцов А.Г., Козлова Н.С. и др. Хи-миобиологические препараты при сальмонеллезе птиц // Новые фармакологические средства в ветеринарии. - Сб. тез. докл. 1-ой Межвуз, науч.-практ. конф. Л., 1989. - С. 39.

8. Урбан В.П., Кузьмин В.А., Бойцов А.Г., Козлова Н.С. Анти-биотикорезистентность энтеробактерий, выделенных от птиц И Инфекционные болезни с.-х. животных. - Сб. науч. тр. ЛВИ. - Л., 1989. - С. 95-100.

<

9. Урбан В.П., Кузьмин В.А., Бойцов А.Г., Козлова Н.С. К механизму передачи S.enteritidis у птиц и система мероприятий II Профилактика болезней птиц. - Мат. симпозиума. - Тарту, 1989. - С. 16-17.

10. A.c. SU 1577100 AI А 01 К 67/02 Стимулятор роста бройлерных птиц I Р.И.Коваленко, Н.Г.БеЛова, Т.П.Александрова, В.А.Кузьмин и др.; ЛГУ, СССР. - Зарег. 08.03.1990.

11. Коваленко Р.И., Кузьмин В.А., Пчеловодова Д.В. Эволюционный консерватизм полипептидной системы эпифиза в ряду рыбы-птицы-млекопитающие II X Всесоюз. совещание по эвол.физиолопга. -Тез. докл. - Л., 1990. - С. 14-15.

12. Урбан В.П., Кузьмин В.А., Максимов П.Н., Бойцов А.Г. Выделение S.eateritidis из объектов птицеводческого хозяйства яичного направления И Актуальные проблемы ветеринарии. - Тез. докл. науч. конф. ЛВИ. - Л., 1991. - С. 89-90.

13. Кузьмин В.А., Ещеико И.Д. Динамика микробной контаминации мяса бройлеров при разных условиях хранения // Актуальные проблемы ветеринарии. - Тез. докл. науч. конф. ЛВИ. - Л., 1991. - С. 58.

14. Рекомендации по профилактике сальмонеллезов птиц аэрозолями бактериофагов / ЛВИ: Разраб. В.П. Урбан, В.А. Кузьмин, А.Г. Бойцов,Н.С.Козловаидр.-Л., 1991,- Зс.

15. Полоцкий Ю.Е., Ефремов В.Е., Бондаренко В.М., Кузьмин В.А. и др. Защита от вирулентных сальмонелл групп В и D после перо-ральной иммунизации цыплят гибридом Salmonella typhimurium и Salmonella dublin II Журн. микробиол., эпидем. и иммунобиол. - 1992. -№9-10.-С. 50-57.

16. Полоцкий Ю.Е., Ефремов В.Е, Бондаренко В.М., Кузьмин В.А. и др. Иммуноморфологическая оценка вакцинального процесса в кишечнике И Тр. Петербургского об-ва патологоанатомов. - С.-П., 1992. - вып. 33. - С. 62-65,

17.Кузьмин В.А. Вакцинация цыплят бивалентной сальмонеллез-ной вакциной // Актуальные проблемы ветеринарии. - Мат.науч.конф. СПВИ. - С.-П., 1993. - С. 37-38.

18. Kozlova N.S., Ivanov V.P., Voskresensky A.M., Kuzmin V.A. The nature of antibiotic resistance of some enterobacteria species circulating in St-Petersburg and region И 2nd Scientific Meeting, University Hospital. -Coimbra,'Portugal, - 1994. - P. 23.

19. Урбан В.П., Кузьмин В.А. Ветеринарно-санитарные мероприятия при эпизоотической вспышке сальмонеллеза II Гигиена, ветсанита-рия и экология животноводства. - Мнт.Вссросс. науч.-производ. конф. -Чебоксары. 19У1. - С. 443-444.

20. Кузьмин В.А. Фагопрофилактика сальмонелл езной инфекции в промышленном птицеводстве // Гигиена, ветсанитария и экология животноводства. - Мат.Всеросс. науч.-произаод. конф. - Чебоксары, 1994. - С. 237-238.

21. Козлова Н.С., Захаркив Ю.Ф., Грушвицкая Е.А., Кузьмин В.А. Сальмонеллоносительство у крупного рогатого скота на молочно-то-варной ферме // Актуальные вопросы профилактической и клинической медицины. - Тез. докл. науч. конф. - С.-П., 1994. - С. 32-33.

22. Ефремов В., Кузьмин В., Бондаренко В., Смирнова Г. и др, Полевые испытания на птицах живой рекомбинаитной вакцины против сальмонелл групп В и D // Пищевые зоонозы. - Международный симпозиум. - М., 1995. - С. 66-67.