Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Разработка методов превентивной терапии и профилактики хронического эндометрита у собак

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ПРЕВЕНТИВНОЙ ТЕРАПИИ И ПРОФИЛАКТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ЭНДОМЕТРИТА У СОБАК

16.00.07- Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Саратов - 2007

003054943

Работа выполнена в ГНУ «Северо-кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» РАСХН

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

Карташов Сергей Николаевич

доктор ветеринарных наук, профессор, Авдеенко Владимир Семенович,

кандидат ветеринарных наук, Попов Владимир Германович.

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО « Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им К.И.Скрябина»

Защита диссертации состоится « 6 » апреля 2007 г. в « 14 » часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.01 при ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

по адресу: 410012, г. Саратов, пл. Театральная, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Автореферат разослан « 5 » марта 2007 г. и размещен на сайте : www.sgau.ru

Ученый секретарь диссертационного совета

А.В.Егунова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Среди заболеваний собак, от общей обращаемости в ветеринарные клиники, болезни репродуктивных органов составляют от 1,6 до 4,4% (В.А. Карпов, 1990; Д. Балтиня и др. 1999). Несмотря на относительно невысокий процент распространения гинекологических заболеваний у сук, не вызывает сомнения важность выбора ветеринарным врачом правильной тактики, так как болезни половой сферы заканчиваются часто бесплодием животных, утратой служебных качеств и гибелью. Среди патологии репродукции у сук удельный вес заболеваний матки остается достаточно высоким (B.C. Авдеенко, 2005).

Так, у 46% больных сук с гинекологическими заболеваниями диагностируется хронический эндометрит. Одним из факторов возникновения хронического эндометрита является наследственная предрасположенность. У сук с высокой степенью риска возникновения хронического эндометрита совершенствование методов диагностики и верификации позволяет назначить адекватную превентивную терапию

Консервативные методы лечения патологий матки позволяют не только сохранить репродуктивный потенциал племенных собак, но и избежать осложнений связанных с нарушением нейроэндокринной системы. Традиционные лекарственные и хирургические методы лечения хронического эндометрита и его осложнений малоэффективны с точки зрения сохранения половой функции сук репродуктивного возраста, поэтому особенно важным является поиск новых медикаментозных средств, позволяющих провести органосохраняющую терапию.

Вместе с тем до сих пор не разработаны схемы лечения и профилактики хронического эндометрита у собак, позволяющие сохранить продуктивность животных, что и предопределило цель работы.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы, явилось изучение применения препарата мифепристон у сук с хроническим эндометритом и выявления механизмов действия блокатора прогестероновых рецепторов при данной патологии, а так же изучение эффективности

превентивной терапии и профилактики хронического эндометрита у сук высокого риска возникновения заболевания.

Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:

- установить степень распространения хронического эндометрита у сук мегаполисов г.Волгограда, г.Волжского, г. Ростова на Дону, г.Шахты и г. Новочеркасска;

-выяснить влияние наследственных факторов в развитии хронического эндометрита у сук репродуктивного возраста разных пород;

-оценить триггерную роль уровня прогестерона в возникновении хронического эндометрита вызванной чистой культурой Escherichia coli, у собак, а также протективную роль блокатора прогестероновых рецепторов мифепристона;

-разработать методы верификации и диагностические критерии тяжести течения хронического эндометрита у сук разного репродуктивного возраста;

-определить терапевтическую и профилактическую эффективность мифепристона у сук, предрасположенных к хроническому эндометриту, при повышении маркеров воспаления и уровня прогестерона.

Научная новизна. Впервые установлен механизм развития хронического эндометрита у сук и экспериментально доказана триггерная роль прогестерона и Escherichia coli в возникновении хронического эндометрита. Впервые выявлены информативные показатели уровня половых гормонов у собак при хроническом эндометрите на фоне применения мифепристона. Установлена положительная корреляция между показателями прогестерона и клиническими проявлениями хронического эндометрита, в период применения мифепристона. Впервые в ветеринарной практике разработан способ профилактики хронического эндометрита у собак.

Практическая и теоретическая значимость. В работе изучена степень распространения хронического эндометрита у сук репродуктивного возраста разных пород и выявлена наследственная предрасположенность к

данной патологии. Установлена высокая терапевтическая эффективность мифепристона при хроническом эндометрите у сук в период метэструса на 7-10 день от начала течки в зависимости от изменений показателей прогестерона и маркеров воспаления.

Полученные данные изложенные в диссертации реализуются в практической работе ветеринарных клиник различных форм собственности г. Шахты, г. Таганрог, г. Ростова-на-Дону, г. Новочеркасска, г. Волгограда и г. Волжского.

Объект и предмет исследования. Объектом исследования служили собаки разных пород, лабораторное диагностическое оборудование: иммуноферментный аппарат Пикон Униплан, фотоколориметр КФК-3, рентген аппарат 10Л6-01, ультразвуковой аппарат АЬЬОКА 1100. Предметом исследования явились: препарат мифепристон, гормоны прогестерон, эсградиол, атак же клинические, биохимические, статистические методы .

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных отчетах ФГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» (20052007гг), на Международной научно-практической конференции по мелким домашним животным г. Волгоград 2006 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4-е работы, в которых отражены основные научные положения. Общий объем публикаций составляет 6,5 п.л., из которых 3,2 п.л. принадлежит лично соискателю, в том числе 4-е в рецензируемых изданиях рекомендованных ВАК.

Реализация результатов исследований. Практические рекомендации внедрены в ветеринарную практику ветеринарных клиник различных форм собственности Ростовской и Волгоградской областей.

Разработаны и утверждены Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору по Ростовской и Волгоградской областей «Россельхознадзора» МСХ РФ методические рекомендации: - «Профилактика септических метропатий у собак»;

- «Колыюцитологическая диагностика, метропатий у собак»;

- «Методы определения степени эндогенной интоксикации при септических метропатиях собак»;

- «Реогистерография как метод прогнозирования при метропатиях у собак»;

- «Классификация, диагностика и терапия метропатий у собак»;

- «Применение индексов тяжести в диагностике септических метропатий у собак» (протокол №1 от 12.10.2005 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 122 страницах компьютерного текста состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждений полученных результатов, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа иллюстрирована 15 таблицами, 3 рисунками и 6 фотографиями. Список литературы включает 270 источников, в том числе 112 зарубежных авторов.

На защиту выносятся следующие основные положения:

- распространение и механизм возникновения хронического эндометрита у собак в группах риска;

- клинико-лабораторные информативные критерии хронического эндометрита у сук репродуктивного возраста;

- принципы превентивной терапии и профилактики при хроническом эндометрите у собак.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Настоящая работа выполнена в 1999-2007 гг. в ветеринарных клиниках различных форм собственности г. Шахты, г. Таганрог, г. Ростова-на-Дону, г. Новочеркасска, г. Волгограда и г. Волжского и в лаборатории патологии и физиологии размножения сельскохозяйственных животных ФГНУ «СевероКавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» РАСХН. Пол наблюдением находилось 1023 суки, больные

гинекологическими заболеваниями, из которых у 470 сук был диагностирован хронический эндометрит.

С целью лечения и профилактики хронического эндометрита использовали препарат «Мифепристон» фирмы ЗАО "Мир-Фарм"(Россия) в дозе 2-10 мг/кг. 1 раз в день трехкратно. Мифепристон - синтетическое стероидное антипрогестогенное средство, блокирует действие прогестерона на уровне рецепторов, гестагенной активностью не обладает. Отмечен антагонизм с ГКС (за счет конкуренции на уровне связи с рецепторами), который повышает сократительную способность миометрия, стимулируя высвобождение интерлейкина-8 и повышает чувствительность миометрия к простагландинам.

Комплексное обследование больных животных проводили в динамике, используя клинический осмотр по общепринятой методике. Иммуноферментный анализ для определения эстрадиола и прогестерона проводили на аппарате Пикон Униплан (производства России). Рентгенографию по общепринятой методике на аппарате 10JI6-01 (производства республики Казахстан). Ультразвуковое исследование на аппарате ALLOKA 1100 (производства Япония).

Морфологические и биохимические исследования крови проводились в лаборатории ФГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт». Кровь для биохимического и морфологического исследования брали из подкожной вены предплечья, латеральной вены сафена, а при их плохой выраженности из яремной вены. Морфологический анализ крови включал: определение числа эритроцитов и лейкоцитов в сетке камеры Горяева, определение концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом, гематокрита по методике, предложенной И. И. Архангельским и JI. П. Сошенко (1993), СОЭ, выведение лейкограммы по общепринятым методикам. Биохимический анализ крови проводили по следующим показателям: активность щелочной фосфатазы по ферментативному гидролизу n-нитрофенилфосфата, активности аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы по методу Райтмана-

Френкеля, а-амилазы - по Каравею, концентрации глюкозы - орто-толуидиновым методом, белка - с помощью биуретовой реакции, билирубина - по методу Ендрашика-Грофа, альбумина - по реакции с бромкрезоловым зеленым, креатинина - методом Яффе, мочевины - по реакции с диацетилмонооксимом в сильно кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа, а так же используемый для лабораторной диагностики прибор фотоколориметр КФК - 3. Из биохимических исследований, характеризующих воспалительный процесс, проводили определение фибриногена гравиметрическим методом по Рутбергу (P.A. Рутберг, 1974; B.C. Камышников, 2000), сиаловых кислот - но методу Гесса (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1974), общей активности лактатдегидрогеназы, основанном на оптическом тесте Варбурга (оптическом эффекте, связанном с превращением НАД+ в НАДН), С-реактивного белка - методом реакции преципитации в капилляре.

Реакции среды (pH) и уровня электролитов (ионов натрия, калия, хлора) на ионометре И-500 с использованием ионоселективных электродов. Объем циркулирующей крови определяли по методу Филипса.

Полученные результаты обрабатывали статистически с применением методов корреляционного анализа на ПК Pentium с использованием прикладных программ пакета Microsoft Office.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Распространение хронического эндометрита у сук репродуктивного возраста разных пород

В результате проведенных исследований определена степень распространения хронического эндометрита. За период с 1999 по 2005 гг. клиническому осмотру подвергнуто 10330 собак, больных различными инфекционными и незаразными болезнями. Среди сук городских популяций ветеринарных клиник различных форм собственности Волго-Донского региона патология со стороны репродуктивной системы выявлена у 1021 собак. Из них у 470 сук комплексной диагностикой поставлен диагноз

хронический эндометрит. Нами выявлена породная предрасположенность к хроническому эндометриту. Наибольшая предрасположенность встречается среди сук ротвейлеров 8,9%, немецких овчарок 7,45%, спаниелей 6,17%, чау-чау 5,53%, стафтерьеров 4,89%, пекинесов 4,47% и лаек'2,97%.

Нами проведен ретроспективный анализ, основанный на распространении хронического эндометрита у предков первого и второго поколения среди животных, которым поставлен диагноз хронический эндометрит. Данный анализ показал, что из 470 сук предков первого и второго поколения 254 суки болели хроническим эндометритом. Следовательно, заболеваемость хроническим эндометритом у сук составляет 54%, предки которых в течение жизни заболевали хроническим эндометритом. Аналогичные данные получены по однопометникам. При этом проблемы с репродуктивной функцией выявлены у одного или нескольких однопометников женского пола в 105 случаях, что составило 22,34% случаев от всех заболевших хроническим эндометритом сук.

3.2. Роль прогестерона и Escherichia coli в развитии хронического

эндометрита и протективная роль препарата мифепристона

В ходе проведенных нами серий опытов по отработки режимов применения препарата мифепристон в превентивной терапии хронического эндометрита установлена защитная роль блокаторов прогестерона. В связи с этим нами было выявлено экспериментальным путем роль уровня прогестерона и Escherichia coli, в возникновении хронического эндометрита. Для проведения эксперимента были созданы 4 группы собак - 2 контрольные и 2 подопытные, по 10 голов в каждой. У всех собак была диагностирована стадия эструса, подтвержденная кольпоцитологическими и гормональными исследованиями.

По данным цитологического исследования определялся день готовности суки к вязке, в этот день и проводилась контаминация матки Escherichia coli. Момент внесения бактерий в матку выбран для

моделирования инцидента контаминации матки в момент коитуса при обычной вязке. Таблица 1

Схема опыта по выяснению защитной роли блокаторов прогестерона в развитии хронического эндометрита у собак.

1 группа 2 группа

контрольная подопытная контрольная подопытная

Течка 13-15 день, внутриматочное введение (1-й день опыта).

Натрия хлорид 0,9%,стерильный, внутриматочно в дозе 5,0 мл Культура Е. Coli, внутриматочно в дозе 5,0 мл Натрия хлорид 0,9%,стерильный, внутриматочно в дозе 5,0 мл Культура Е. Coli, внутриматочно в дозе 5, 0 мл

Метэструс - начало активного функционирования желтого тела.

Мифепристон внутрь в дозе 5 мг/кг 1 раз день трехкратно Мифепристон внутрь в дозе 5 мг/кг 1 раз день трехкратно Глюконат кальция внутрь в дозе 5мг/кг 1 раз день трехкратно Глюконат кальция внутрь в дозе 5мг/кг 1 раз день трехкратно

Животным подопытных групп внутриматочно вводили чистую культуру Escherichia coli в дозе 5,0 мл, а контрольных групп стерильный физиологический раствор в дозе 5,0 мл. Внутриматочное введение препаратов осуществляли интраоперационно с помощью лапаротомии путем трансмурального введения шприцом в рог матки в день максимального ороговения влагалищного эпителия - при кольпоцитологическом исследовании более 90% ороговевших клеток. В дальнейшем гормональный статус животных контролировался каждые 5 дней. День, в который собакам осуществляли внутриматочное введение, считали первым днем опыта. На 710-й день опыта собакам первой контрольной и подопытной групп перорально назначали мифепристон в дозе 5 мг/кг 3 дня подряд, животным вторых контрольной и подопытной групп внутрь в течении 3 дней назначали глюконат кальция в дозе 5 мг/кг. Данные введения осуществлялись к моменту начала активного функционирования желтого тела, когда при кольпоцитологическом исследовании количество ороговевших клеток было

меньше 5 %, а в мазке преобладали базапьные и парабазальные клетки. В этот же период повторно осуществили забор крови для исследования на половые гормоны и маркеры воспаления. Уровень прогестерона достигал 32 нг/мл, эстрадиола снижался до23пг/мл.

Таблица 2

Уровень прогестерона и эстрогена у собак во время проведения опыта по выяснению влияния прогестерона на матку

Группа 1 группа

контрольная опытная

Уровень Эстрогена прогестерона Эстрогена прогестерона

гормона пг/мл нг/мл пг/мл нг/мл

ЕС 1 60,3±10,3 12,4±1,5 63,5± 10,3 13,5±2,11

О Я 5 25,3±4,1 20,0±2,55 21,52±3,6 20,1 ±2,9

н ¡а 10 21,5±3,5 29,2±4,7 20,5±5,5 26,67±4,49

15 10,8±4,2 20,6±3,7 10,14±4,5 19,8±3,0

20 9,8±2,5 16,9±3,5 8,0±2,4 18,9±2,9

Группа 2 группа

контрольная опытная

Уровень Эстрогена прогестерона Эстрогена прогестерона

гормона пг/мл нг/мл пг/мл нг/мл

1 64,3± 14,8 12,4±3,3 62,2±12,2 14,0±3,11

г о 5 22,5±6,1 20,3±4,97 19,56±4,5 19,54±3,83

сг ¡2 10 19,9±3,57 29,3±3,7 18,9±5,48 27,78±5,49

15 10,6±2,17 38,0±3,9 10,4+3,4 38,б±2,93

20 9,3±2,9 45,6±3,8 8,9±2,0 50,2±2,74

Примечание: здесь и далее * - р<0.05; ** - р<0.01; *** - р<0.001

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что у сук, которым вводился препарат мифепристон, концентрация прогестерона в крови на 10-й день метэструса колебалась в пределах 15-22 нг/мл. К этому времени у 40% сук, (которым внутриматочно вводили Escherichia coli), развился хронических эндометрит.

У подопытных животных, которым в период функционирования желтых тел назначали глюконат кальция, уровень прогестерона составил от 38 до 62 нг/мл. При этом у 100% животных (которым внутриматочно вводили Escherichia coli), развился хронических эндометрит. При этом признаки хронического эндометрита не развивались у животных при уровне прогестерона в крови 11-19 нг/мл, которым внутиматочно вводили Escherichia coli.

Таким образом, при наличии возбудителя в матке у собак не развивается воспалительный процесс до тех пор, пока уровень прогестерона не достигнет 33-38 нг/мл. Из результатов данного эксперимента следует, что уровень прогестерона в крови, способствует возникновению бактериального воспалительного процесса в матке. В связи с этим используемый нами блокатор прогестерона препарат мифепристон способен снижать уровень прогестерона в крови у животных и оказывать профилактический эффект в развитии хронического эндометрита у сук.

2.3. Характеристика морфо-биохимических изменений в крови у сук больных хроническим эндометритом

Результаты гематологического исследования крови у больных сук, с различной степенью тяжести течения хронического эндометрита, показывают, что нет статистически достоверной разницы между показателями крови у клинически здоровых сук и у сук с продромальным течением хронического эндометрита.

Исключение составляет СОЭ и уровень содержания лейкоцитов, которые в 2 раза выше при продромальном течении хронического эндометрита, чем у клинически здоровых сук. Таблица 3

Лейкограмма собак больных хроническим эндометритом разной степени тяжести

Показатели, ед. измерения Латентный период Степень тяжести течения болезни

легкое среднее тяжелое крайне тяжелое

Лейкоциты, *10 /л 9,56±0,3 15,0±0,2* 20,4±0,2* 28,5±1,2* 63,8±0,70*

Эозинофилы, % 5,6±0,2 6,7±0,1* 5,7±0,18* 2,2±0,2* 1,2±0,1*

Юные, % - - 2,0±0,14* 4,2±0,18* 2,5±0,18*

Палочкоядерные нейтрофилы, % 4,5±0,2 7,0±0,2** 24,3±0,4* 22,2±0,30* 16,4±0,3*

Сегментоядерные нейтрофилы, % 53,0±1,6 53,6±1,6* 47,5±1,9* 51,5±1,10* esjii^*

Лимфоциты, % 32, Ш,4 28,2±1,0* 13,4±0,7* 12,4±0,5* 5,3±0,20*

Моноциты, % 4,8±0,2 4,5±0,25* 7,1±0,12* 7,5±0,12* 5,5±0,14*

Биохимические исследования крови показали, уровень AJIT, ACT, концентрация натрия в плазме крови у сук больных хроническим эндометритом остаются близкими к норме, тогда как маркеры воспаления повышаются - сиаловые кислоты в 2,6 раза, фибриноген в 3 раза, С-реактивный белок в 3,6 раза и четко коррелируют с тяжестью хронического эндометрита, и их показатели растут по мере усугубления синдрома. У сук с латентной формой хронического эндометрита сиаловые кислоты, фибриноген, С-реактивный белок имели достоверные отличия от клинически здоровых животных и были сопоставимы с показателями характерными для легкого течения заболевания.

Таблица 4

Биохимические показатели у сук, больных хроническим эндометритом

Показатели Клинически здоровые Латентный период Степень течения болезни

Легкое Среднее Тяжелое Крайне тяжелое

AJIT, Е 72±2,5 79±3,5* 80±3,9* 185±6,5* 170±12* 202,54±15*

ACT, Е 63±4,б 63±4,6* 62±3,7* 122±4,9* 163±3,1* 215±4Д*

Мочевина, ммоль/л 7,8±0,5 10,1±1,0* 11±1,6* 2 4±33* 33±4,5* 44±6Д*

Креат., ммоль/л 82±2 94±3,1 * 101±3,5* 122±10,1* 183±4,4* 242±11,1*

Сиал.кисл., ммоль/л 2,2±0,06 2,6±0,08* 2,9±0,2* 3,5±0,1 * 3,9±0,08* 7,1±0,05*

Фибрин., г/л 3,4±0,1 5,0±0,5* 5,3*0,2* 8,9±0,03* 11,2±0,03* 15,6±0,5*

С-реак. белок, +(1) - 1,0±0,03* 1,0±0,03* 1,6±0,03* 2,7±0,01* 3,5*0,04*

Таким образом, проведенные нами исследования показывают, что выявленное нами информативные показатели-маркерам воспаления -С- реактивный белок, фибриноген и сиаловые кислоты характеризуют степень течения хронического эндометрита.

3.4. Превентивная терапия при хроническом эндометрите у сук репродуктивного возраста разных пород

Для опыта были отобраны животные с латентной формой хронического эндометрита. Диагноз ставили на основании повышения маркеров воспаления - сиаловых кислот, фибриногена, С-реактивного белка на 7-10 день от начала течки. Всего было создано 5 группы по 20 голов в каждой фуппе. Динамику заболевания отслеживали но уровню маркеров воспаления.

Для лечения животных первой группы применяли препарат мифепристон в дозе 2 мг/кг. 1 раз в день трехкратно на 7-10 день от начала

течки. Для лечения животных второй группы применяли препарат мифепристон в дозе 5 мг/кг. 1 раз в день трехкратно на 7-10 день от начала течки. Животных третьей группы лечили с применением препарата мифепристона в дозе 7 мг/кг. 1 раз в день трехкратно на 7-10 день от начала течки. Животных четвертой группы назначали курс лечения с применением мифепристона в дозе 10 мг/кг. 1 раз в день трехкратно на 7-10 день от начала течки. За всеми животными было установлено наблюдение в течение 20 дней. Один раза в день у всех животных определяли С- реактивный белок, фибриноген и уровень сиаловых кислот. Среди животных первой группы заболело 1,5% сук, у которых после проведенного лечения начали нарастать показатели маркеров воспаления и клинически проявились все признаки хронического эндометрита. Среди животных второй группы заболели 0,5% сук. В третьей и четвертой группе не заболело ни одно животное. В пятой группе 75% сук заболели хроническим эндометритом.

Таким образом, трехкратное введение препарата мифепристон в дозе 7 мг/кг оказалось эффективным для предотвращения развития хронического эндометрита при латентной форме болезни. Таблица 5

Показатели у сук с латентным периодом хронического эндометрита на

12 день опыта

Показатели 1 группа 2 группа 3 группа 4группа 5 группа

Сиаловые кислоты, ммоль/л 2,0+0,06 2,2±0,06 2,0±0,3 2,0±0,1 2,6±0,08

Фибриноген, г/л 3,4±0,1 3,2±0,5 3,0±0,2 3,3±0,03 5,6±0,03

С-реактивный белок, +(1) 0,5±0,01 1,0±0,03

Патогенетической основой этому явилось резкое снижение уровня прогестерона уже на следующий день после начала применения

мифепристона с 34 нг/мл до 18 нг/мл, что оказалось значительно ниже уровня, способного вызвать эндометрит у собак. Таблица 6

Показатели прогестерона у сук с субклиническим течением хронического эндометрита на 12 день опыта

Показатели прогестерона нг/мл 1 группа 2 группа 3 группа 4группа 5 группа

До начала опыта 38,0±3,9 32,2 ±2,5 31,0±2,2 34,1±2,9 29,2±3,4

На 3 день 19,4±2,1 16,2±1,6 16,4±1,2 11,4±0,5 36,3±2,9

На 12 день опыта 15,5±1,2 13,2±1,6 13,1±1,3 11,8±1,8 51,0±3,4

Проведены исследования прогестерона у 7 клинически здоровых сук. Уровень прогестерона определяли каждый день с первого дня течки до 24 дня. При этом выяснилось, что только у двух сук уровень прогестерона превысил уровень способный вызвать эндометрит у собак (34 нг/мл) и у всех этих животных предки первого, второго поколения и сибсы в разный период жизни были прооперированы по поводу хронического эндометрита (рис.1).

У 46% сук, имеющий наследственную предрасположенность, именно эти животные имеют повышенный риск развития заболевания. До критического уровня у предрасположенного к хроническим эндометритам животного уровень прогестерона достиг к 11 дню полового цикла, именно в этом период начинает происходить смена влагалищного мазка и начинают повышаться маркеры воспаления, у всех этих сук в дальнейшем развились тяжелые формы хронического эндометрита.

Опыт проведенный на 20 суках показал, что у сук с предрасположенностью к хроническому эндометриту, которым на 7-10 день полового цикла был введен мифепристон в дозе 7 мг/кг. 1 раз в день трехкратно, ни у одного из этих животных не развился хронический эндометрит.

Рис. 1. Уровень прогестерона у сук в период формирования желтого тела.

Учитывая специфику постановки опыта исследуемых животных, поскольку собаки не являются продуктивными животными, поэтому сложно определить эффективность по общепринятым методикам. Для этого провели анализ эффективности по группам Сравнивая стоимость лечения и терапевтический эффект.

Затраты на проведение профилактических мероприятий по iруинам в пересчете на среднее животное определяли но формуле.

?« -- C'en х Дп х m х l i до,

Сеп - стоимость единицы препарата: Дп - доза препарата; m масса среднего животного, ; время ( ¡rtpja долж и тел ыюсть) лечения.

Затраты на прОведечШ профилактических мероприятий по группам составили:

3в1 ~ О.ЗЗруб'мг х 2мг/кг-еут х 21,7 кг х Зсут 42,97 руб.

Зв2 - 0,33руб/мг х 5мг/кг-сут х 21,7 кг х Зсут ~ ! 07,42 руб.

ЗвЗ = 0,33ру6/мг х 7мг/кг-сут х 21,7 кг X Зсут -- 150,38 руб.

Зк4 - 0,33руб/мг х 10 м г/к г-су т х 21,7 кг х Зсут - 214,8,3 руб.

Эффективность профилактических мероприятий по группам составила: - 42,97 pyô/гол.

Эв2 • 107.42 руб/гол.

ЭвЗ = - 150,38 руб/гол.

Эв4 = -214,83 руб/гол.

Из приведенных данных следует, наибольшая экономическая эффективность при равных показателях терапевтической эффективности отмечается в 3-й группе животных.

Следовательно, экономическая и профилактическая эффективность мифепристона составила 100% при минимальной дозе 7 мг/кг.

4. ВЫВОДЫ

1. Частота заболевания хроническим эндометритом у сук составляет 46 % от всех больных гинекологическими заболеваниями. 54 % сук с хроническим эндометритом являются предками первого и второго поколения, 22,34 % заболевших сук - однопометники. Самой распространенной формой течения болезни является латентное, что составляет 82%.

2. Системный подход к изучению роли прогестерона и Escherichia coli в возникновении хронического эндометрита у сук выявил взаимосвязь между уровнем прогестерона и развитием воспаления в матке. Трехкратное применение блокатора прогестерона препарата мифепристон в дозе 7мг/кг. на 7-10 день от начала течки снижает уровень прогестерона в крови и прекращает развитие бактериального воспалительного процесса в матке.

3. Развитие латентной формы хронического эндометрита приводит к изменению морфологических, биохимических показателей и показателей уровня прогестерона. У больных сук повышается на 20-50% уровень лейкоцитов и СОЭ, сиаловых кислот на 22%, фибриногена на 62% и появляется преципитат С реактивного белка в капилляре и уровня прогестерона выше 32 иг/мл.

4. Лечение латентной формы хронического эндометрита осуществляют блокатором прогестероновых рецепторов препаратом мифепристон. Трехкратное введение на 7-10 день от начала течки лекарственного средства мифепристона в дозе 7 мг/кг оказалось эффективным для предотвращения

развития хронического эндометрита. Патогенетической основой этому явилось резкое снижение уровня прогестерона с 34 нг/мл до 18 нг/мл после применения препарата мифепристона и содержания С - реактивного белка, сиаловых кислот, фибриногена в крови до физиологических значений клинически здоровых сук.

5. Профилактическая оценка действия препарата мифепристон у сук с наследственной предрасположенностью к хроническому эндометриту, матери и бабушки которых, а также сибсы страдали данной патологией, осуществлялась в начале метэструса когда резко начинает нарастать уровень прогестерона и при кольпоцитологическом исследовании из мазка исчезают ороговевшие безъядерные клетки. При этом эффективность препарата в дозе 7 мг/мг. составила 100% при трехкратном применении.

6. Экономическая эффективность лечения составила 100% при применении препарата мифепристона в дозе 7 мг/кг , по затратам это составило 150,38 руб/гол. Данная доза является самой оптимальной при лечении и профилактики хронического эндометрита у собак.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Учитывая наследственную предрасположенность к хроническому эндометриту, а также высокую эффективность трехкратного введения мифепристона при лечении латентной формы хронического эндометрита эффективно профилактическое введение препарата мифепристон всем сукам, у которых, матери и бабушки, а также однопометники страдали хроническим эндометритом.

2. Определять латентную форму хронического эндометрита у сук в группах риска по повышению уровня прогестерона выше 32 нг/мл. С -реактивного белка, сиаловых кислот, фибриногена в крови.

3. Практической ветеринарии предлагается для лечения латентной формы хронического эндометрита и профилактики данной патологии у сук группы риска применять мифепристон в дозе 7 мг/кг. на 7-10 день от начала течки трехкратно.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чулкова Г.Б. Применение кломинфенцитрата при синдроме гиперэстрогенизации у сук. / Чулкова Г.Б , С.Н. Карташов, В.Н. Василенко, Е.В. Карташова, A.B. Шафикова. // Научная мысль Кавказа. Северо-Кавказский научный центр высшей школы. - Ростов на Дону, 2006,№1. С.183-185.

2. Г.Б. Чулкова /Коррекция гормонального статуса при удлиненном эструсе у собак / Г.Б. Чулкова, С.Н. Карташов, В.Н. Василенко, Е.В. Карташова, , A.B. Шафикова.// Научная мысль Кавказа. СевероКавказский научный центр высшей школы. - Ростов на Дону, 2006, №2. С.188-191.

3. Г.Б. Чулкова / Интерстициальный нефрит при септических метропатиях у собак" / Г.Б. Чулкова , С.Н. Карташов, В.Н. Василенко, Е.В. Карташова, , A.B. Шафикова. // Научная мысль Кавказа. СевероКавказский научный центр высшей школы. - Ростов на Дону, 2006, №3. С.233-237.

4. Г.Б. Чулкова /Нейтропеническая лихорадка при утерогенном сепсисе у собак. / Г.Б. Чулкова, С.Н. Карташов, В.Н. Василенко, Е.В. Карташова, A.B. Шафикова. // Научная мысль Кавказа. Северо-Кавказский научный центр высшей школы. - Ростов на Дону, 2006, №3. С. 180-183.

Подписано в печать 20 02 07 г. Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная. Печать трафаретная Объем 1,0 уел печ л. Тираж 100 экз Заказ 59

Типография ООО «Литера» Лиц ПД№7-0014от29мая2000г г Саратов, Дегтярная пл., 12, оф 2 т 91-86-56

Актуальность темы. Проблема воспалительных заболеваний половой системы у сук занимает в настоящее время первое место в структуре заболеваемости этих животных (В.Э. Аллен, 1999; А.Е. Баранов, 1993; С.И. Братюха, 1989,1995; А.Д. Белов, 1990, 1995). Во всех странах мира в последние годы отмечено повышение частоты воспалительных заболеваний репродуктивной системы у сук. В России за последние 5 лет инцидентность этой патологии увеличилась на 45% и продолжает расти. Особое место в связи с широким распространением занимает хронический эндометрит (Э.Б. Мордашева, 2003; А.В. Шафикова, 2004). Он возникает в любом возрасте, характеризуются длительным, затяжным течением, приводит к развитию расстройств полового цикла, нарушениям репродуктивной функции. Традиционные лекарственные и хирургические методы лечения хронического эндометрита собак и его осложнений малоэффективны с точки зрения сохранения репродуктивной функции животного, поэтому особенно важным является поиск новых медикаментозных средств, позволяющих профилактировать данное заболевания.

Главная цель воспроизводства — получение от каждой самки здорового приплода. Хронический эндометрит часто является непосредственной причиной снижения или полной потери способности суки к размножению, а иногда и гибели ее. В деле профилактики и устранения этой патологии важная роль отводится повышению уровня ветеринарного обслуживания животных, своевременному выявлению сук с патологией матки, оказанию им квалифицированной лечебной помощи.

Вместе с тем до сих пор не разработаны схемы лечения и профилактики хронического эндометрита у собак, позволяющие сохранить продуктивность животных, что и предопределило цель нашей работы. Цель работы.

Изучить этиопатогенез и морфофункциональные показатели при хроническом эндометрите у собак, разработать комплексную систему диагностических и лечебно-профилактических мероприятий при этом заболевании. Задачи исследований.

1. Изучить распространение хронического эндометрита у собак в Волгоградской области.

2. Выяснить влияние генетических факторов на развитие хронического эндометрита у собак.

3. Выяснить триггерную роль уровня прогестерона в развитии хронического эндометрита у собак, а также протективную роль блокатора прогестероновых рецепторов «Мифепристона» при развитии пиометры, вызванной чистой культурой Escherichia coll

4. Определить диагностические критерии тяжести течения хроническго эндометрита, а также субклинического эндометрита у собак.

5. Разработать принципы превентивной терапии хронического эндометрита у собак.

6. Разработать принципы профилактики хронического эндометрита у собак.

Научная новизна.

Изучено распространение хронического эндометрита у сук в условиях Волгоградской области. Изучен этиопатогенез хронического эндометрита у собак, доказана триггерная роль прогестерона в его возникновении.

Впервые проведены определения уровня половых гормонов у собак при хроническом эндометрите на фоне применения «Мифепристона» и выяснена его протективная роль в возникновении данного заболевания.

Впервые выявлен курабельный период хронического эндометрита у собак и разработаны новые способы лечения, позволяющие предотвратить тяжелое течение хронического эндометрита. Впервые в ветеринарной практике разработан способ профилактики хронического эндометрита у собак. Теоретическая и практическая значимость.

Выявлена генетическая предрасположенность у собак к хроническому эндометриту, а также разработаны принципы превентивной терапии и профилактики хронического эндометрита, позволяющие эффективно контролировать это тяжелое септическое заболевание.

Полученные данные по этиопатогенезу, морфофункциональным показателям крови и клинико-морфологическому проявлению хронического эндометрита, целесообразно использовать при составлении руководств, учебных и справочных пособий по морфологии, физиологии, биохимии и патоморфологии. Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных отчетах ГНУ СКЗНИВИ (2003-2005 гг.). Реализация результатов исследований.

Разработанные практические предложения реализуются в практической работе ветеринарной клиники «Вита» (г. Шахты, г. Таганрог, г. Красный Сулин Ростовской обл.), в ветеринарных клиниках г. Волгограда. Используются в практической работе ветеринарными специалистами Волгоградской и Ростовской областей, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах акушерства и хирургии, внутренних незаразных болезней и патофизиологии Донского аграрного университета. Внедрены в практику и рекомендованы НТС Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору Ростовской области, следующие методические рекомендации: «Применение индексов тяжести в диагностике септических метропатий у собак», «Классификация, диагностика и терапия метропатий у собак», «Реогистерография как метод прогнозирования при метропатиях у собак», «Методы определения степени эндогенной интоксикации при септических метропатиях собак», «Кольпоцитологическая диагностика метропатий у собак», «Профилактика септических метропатий у собак» (протокол №1 от 12.10.2005 г.).

Публикации.

По материалам представленной к защите диссертации опубликовано 4 статьи, в том числе в изданиях рекомендованных ВАК - 4, 6 рекомендаций одобрены НТС Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору Ростовской области. Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 122 страницах текста компьютерного исполнения. В диссертации приведены 15 таблиц, она иллюстрирована 3 рисунками и 6 фотографиями. Список литературы включает 270 источников, в том числе 112 зарубежных авторов. На защиту выносятся следующие основные положения:

1. распространение и этиопатогенез хронического эндометрита у собак;

2. клинико-лабораторные критерии клинического и субклинического эндометрита у собак;

3. принципы превентивной терапии при эндометрите у собак;

4. принципы профилактики хронического эндометрита собак.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

По данным А.Д. Белова (1900, 1995), С.С. Липницкого (1996), А.А. Кудряшова (1999), падеж сук по причине болезней половой системы составляет от 25% до 35% среди всех патологий у этих животных.

Все более возрастающая актуальность проблемы, такая как хронический эндометрит собак, связана как с увеличением числа больных животных и высокой летальностью при этой патологии, так и со значительными экономическими затратами на лечение. (W.B. Atkinson, 1980; Н. Baniecki,1981; D.T. Baird, 1994; С. Абдельазиз, 1997).

Объяснение причины стремительного возрастания числа зарегистрированных случаев заключается в улучшении диагностики заболевания и в увеличении числа сук, страдающих различными эндокринными и иммунологическими нарушениями (В.Э. Аллен, 1999; А.Е. Баранов, 1993; С.И. Братюха, 1989,1995; А.Д. Белов, 1990,1995).

В гуманной медицине большую роль в этиологии хронического эндометрита отводят, так называемым, вторичным нарушениям функций эндокринной и иммунной систем, возникающим в результате применения кортикостероидных и цитостатических препаратов при терапии дерматологических и онкологических заболеваний. (А.Г. Андрее, 1989; W.B. Atkinson, 1980; G.E. Abraham, 1983, 1984; J.A. Arias Stella, 1984, 1985; D.T. Baird, 1994). В литературе, посвященной хроническому эндометриту собак, также имеются данные о влиянии кортикостероидов на развития нарушений в матке у этих животный, но чаще всего указывается на связь хронический эндометрит с применением прогестинов для подавления течки и эстрогенов для предотвращения беременности. (В.Э. Аллен, 1999; Э.Б. Мордашева, 2003; W. Jochle, 1977; I.B. Christiansen, 1984; Н.М. Evans, 1991). Определенное значение имеет также возрастание популяции этих домашних животных. (Ф.М Бернет, 1964; В.В Никольский, 1966; Е.А. Васильева, 1971; С.Я Любашенко, 1974; Дж. Л. Микинс с соавт., 1982; Я.Е Коляков, 1986; Е.М. Вихляева, 1997;

В.А Середин, 1998; R.C Bone, 1996). Немаловажное значение приобретает увеличение распространения иммунодефицитов и аутоиммунных заболеваний у животных. (И.М. Карпуть, 1989,1993; Ю.Н. Федоров, 1996).

Летальность при тяжелом течении хронического эндометрита очень высока. Наиболее высокая летальность, достигающая 80-90%, описывается в группах животных с полиорганной недостаточностью. (В.А. Карпов, 1990; В.А Руднов с соавт., 1995; Б.Р. Гельфанд с соавт., 1997; А.Л. Костюченко с соавт., 2000; W. Jochle, 1977; R.I.A. Goris, 1999).

Что касается материальных затрат, то лечение септической формы хронического эндометрита в среднем требует трехнедельного срока. Экономические затраты при применении реанимационных технологий с последующей реабилитацией в течение нескольких недель могут достигать 1020 тысяч рублей.

Вопросы терминологии и классификации хронического эндометрита собак подвергаются обсуждению и в ветеринарной медицине не систематизированы.

4. ВЫВОДЫ

1. Хронический эндометрит - это нарушения секреторной и пролиферативной функций матки при отсутствии беременности, возникающие с участием или без участия микрофлоры на фоне гормонального дисбаланса. Хронический эндометрит составляют 4,5 % от общей патологии собак.

2. Уровень прогестерона является пусковым моментом в возникновении хронического эндометрита у собак. Матка собак находится в длительном «уязвимом периоде» для развития хронического эндометрита, поскольку прогестерон у них продолжает вырабатываться около двух месяцев.

3. Критерием деления хронического эндометрита собак на клинический и субклинический является наличие или отсутствие синдрома системной воспалительной реакции. На фоне нарушений полового цикла и репродуктивной функции основными клиническими признаками хронического эндометрита являются астения, полидипсия-полиурия, анорексия.

4. Лечение хронического эндометрита осуществляют блокатором прогестероновых рецепторов «Мифепристон» по принципу понижения уровня прогестерона и повышения уровня простагландинов.

5. В случае субклинического течения эндометрита возможно применение превентивной терапии препаратом «Мифепристон» .

6. Для профилактики септических хронический эндометрит всем сукам, у которых предки первого и второго поколения болели хроническим эндометритом, необходимо на 7-10-й день эструса трехкратно задавать «Мифепристон» в дозе 7 мг/кг.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Использовать для превентивной терапии хронического эндометрита однократное введение препарата «Мифепристон». Субклиническое течение хронического эндометрита выявлять по маркерам воспаления.

1.5. Заключение

В структуре заболеваний репродуктивных органов у собак поражения матки занимают первое место, а среди них преобладают хронический эндометрит. В России за последние 5 лет инцидентность воспалительных заболеваний половых органов у собак увеличилась на 45% и продолжает расти.

Объяснение причины стремительного возрастания числа зарегистрированных случаев заключается в улучшении диагностики заболевания и в увеличении числа сук, страдающих различными эндокринными и иммунологическими нарушениями.

Эндометрий - гормоночувствительная ткань, обладающая способностью динамично реагировать на любые изменения гормонального гомеостаза - от гиперплазии до атрофии. Нередко эти состояния последовательно сменяют друг друга и являются звеньями одной цепи нарушений репродуктивной системы. Гиперпластические процессы в эндометрии имеют различную степень развития и при инфицировании приобретают характер септических состояний.

По мнению И.П. Кондрахина с соавт. (1985), Л.Г.Егорова (1998), основной причиной хронического эндометрита считают расстройство, которое у собак называют продолжительная течка - синдром, характеризующийся нарушением структуры полового цикла: увеличена продолжительность фазы проэструса или эструса. По их мнению, избыток эстрогенов приводит к морфологическим изменениям исполнительных органов, вызывая хронический эндометрит, железисто-кистозную гиперплазию эндометрия, гиперплазию и пролапс слизистой оболочки влагалища.

В.Г. Гусев (1991), С.С. Фарроу (1996), А.С. Okkens et al. (1985) доказали что в основе развития пиометры лежит расстройство взаимоотношений эстрогенных гормонов и прогестерона. При гиперсекреции эстрогенов возникает миксометра или гидрометра, а на фоне гиперлютеинизации в связи с задержавшимся желтым телом на яичнике - пиометра. В стенке матки развиваются необратимые изменения, иногда возможны разрывы матки и перитонит с сепсисом.

Исследований, посвященных выявлению иммунодепрессивного свойства прогестерона, у собак не проводились. Но имеются многочисленные исследования в этой области на сельскохозяйственных животных.

Прогестерон - первичный яичниковый стероид, который влияет на местную резистентность тканей. У всех сельскохозяйственных животных (коровы, овцы, свиньи), как экзогенный, так и эндогенный прогестерон приводил к стереотипным реакциям, снижая резистентность матки к бактериальным повреждениям. Экзогенный PGF2a увеличивает секрецию маткой PGF2a, и LTB4. Эти два эйкозаноида, обеспечивающие местную резистентность матки, связаны с многочисленными иммунными процессами в ней.

По всей видимости, такая же закономерность существует и у собак. Об этом свидетельствует высокая предрасположенность этих животных к септическим хроническим эндометритам. Именно у собак самый длинный период функционирования желтого тела полового цикла среди домашних животных. Поиски новых средств, блокирующих иммунодепрессивные свойства прогестерона является актуальной задачей. При лечении сельскохозяйственных животных широко применяется простагландин F2a. Но у собак этот препарат имеет низкую широту терапевтического действия. В гуманитарной медицине появилось новое поколение средств - антагонисты прогестероновых рецепторов, их применение открывает новые возможности в лечении септического хронического эндометрита у собак.

Установлено, что прогестерон угнетает, а «Мифепристон» стимулирует высвобождение интерлейкина-8 в эндометрии человека in vitro. Анализ морфометрических показателей выявил дозозависимое антигестагенное ингибирование образования желез и дегенеративные изменения железистых клеток в эндометрии. Это действие «Мифепристона» как нельзя лучше подходит для лечения хронического эндометрита, переводя эндометрий в стадию покоя.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы, методы и исследования

Настоящая работа выполнена в 1999-2005 гг. в лаборатории патологии и физиологии размножения сельскохозяйственных животных ГНУ СКЗНИВИ. Основные этапы, апробация и практическое применение разработанных методик проведены в ветеринарных клиниках г. Шахты, г. Красный Сулин, г. Таганрог Ростовской области, г. Волгограда

При изучении распространения хронический эндометрит использовались отчетные материалы ветеринарных клиник г. Шахты, г. Красный Сулин, г. Таганрог Ростовской области, г.Волгограда.

2.1.1. Подопытные животные и их характеристика

За период исследования диагноз- хронический эндометрит, мы поставили 470 собакам, опыты были проведены на 142 суках с хронических эндометритом. Диагноз ставили на основании результатов клинических, лабораторных, рентгенологических исследований, УЗ- диагностики. При поступлении животного в клинику для исследования отбирались животные, имеющие любые отклонения со стороны репродуктивной системы: любые нарушения полового цикла, непродуктивные вязки, выделения из влагалища, нарушения общего состояния. Все животные подвергались тщательному клиническому осмотру, затем у них брали кровь для морфологических, биохимических и гормональных исследований, а также мазки из влагалища для цитологического исследования. Клиническое исследование больных животных проводили по общепринятой методике с последующим занесением результатов исследований в соответствующие протоколы или истории болезни.

Критерием постановки диагноза на хронический эндометрит были наличие симптомов поражения матки при одновременном клинически выявляемом астеническом синдроме, лихорадки, тахикардии и тахипноэ, полидипсии-полиурии, анорексии. Из лабораторных признаков всегда выявлялся лейкоцитоз, моиоцитоз, повышение СОЭ, анемия, повышение значений мочевины и креатинина. Окончательно диагноз устанавливался при Узи- диагностики или лапаротомии.

2.1.2. Методика клинического исследования

Прежде чем снять анамнез жизни животного, мы приступали к выяснению катамнеза. При этом уделялось особенное значение тому, болели ли предки первого и второго поколения, а также сестры по женской линии хроническим эндометритом или нет.

При сборе анамнеза жизни и заболевания особое внимание уделяется характеру питания собаки, моциону, моменту начала заболевания и возможной его связи с периодом полового цикла, стрессовыми ситуациями, изменениями стереотипа жизни, предшествующим назначением гормональных препаратов (особенно эстрогенов и гестагенов). Детально выясняются характер выделений из влагалища (внешний вид, запах, наличие примесей крови, гноя), особенности полового акта, если он был (продолжительность, полноценность, болезненность). Выясняются характеристики текущего полового цикла.

Клинический осмотр проводили по общепринятой методике. Исследовали цвет и состояние кожных покровов, тургор кожи, мышечный тонус, состояние языка, форма и размер живота. При пальпации живота выявляют спазмированные, болезненные участки кишечника и матки. Осматривается аногенитальная область, проводится пальцевое ректальное исследование на предмет опухолевых процессов во влагалище.

Исследование органов грудной и брюшной полостей проводится с применением методов пальпации, перкуссии и аускультации. Оценивается состояние мышц, суставов, скелета, а также неврологический статус животного.

В диагностике гинекологического заболевания выделяют два этапа: первичная диагностика и уточненная диагностика.

Главной задачей первичной диагностики является установление диагноза патологии матки. Эта задача в основном решается при первичном приеме больного животного. Уточненная диагностика проводится с помощью специализированных методов исследования.

На первом этапе работы необходимо было из всех поступивших в клинику животных отобрать для исследования сук с патологией матки.

Мы разработали алгоритм постановки диагноза на патологию матки. Первоначально выясняются следующие признаки: нарушение общего состояния, повышение температуры тела, анорексия, наличие выделений из влагалища, изменения кожи, аногенитальной области, полидипсия-полиурия. Чрезвычайно характерны для этой группы больных сук различные нарушения полового цикла.

Температуру тела измеряли термометром ректально. Особенностью собак является то, что температура у них может повышаться при психическом возбуждении во время исследования. Во избежание ошибки хозяева животных измеряли ректальную температуру у каждого животного 5 раз в день в домашних условиях, на основании чего высчитывалась средняя. В течение суток показатель общей температуры колебался от десятых долей градуса до 2°С как у здоровых, так и у больных животных.

Пульс прощупывали у собак с внутренней стороны бедра на бедренной артерии, оценивая его по частоте и степени наполнения. Частоту сердечных сокращений определяли по пульсовой волне при соблюдении всех правил данного исследования. В норме у собак пульс аритмичный, происходит его учащение на вдохе и урежение на выдохе, при тахипное и тахикардии эта закономерность не наблюдается. Учащение пульса коррелировало с повышением температуры и астеническим синдромом (угнетение). Для исключения влияния феномена дефицита пульса нами проводился контроль частоты сердечных сокращений по электрокардиограмме и аускультативно.

Температура тела, пульс и астения были взяты за критерии для оценки общего состояния животного.

Чем тяжелее протекает болезнь, тем более выражены вышеперечисленные признаки, характерные для всех сук, больных хроническим эндометритом. Но, данная симптоматика не является специфической, так как имеет место у всех собак с воспалительными процессами в других органах (например, пневмония, пиелонефрит, абсцессы различной локализации). Поэтому для постановки диагноза необходимо ориентироваться на симптомы, характерные только для хронического эндометрита - увеличение матки, устанавливаемое пальпацией через брюшную стенку, гнойные выделения из влагалища, изменения картины цитологического мазка, нарушение полового цикла.

Таким образом, сочетание клинических признаков, характерных для всех воспалительных заболеваний (ССВР), с увеличенной маткой позволяет с уверенностью поставить диагноз на хронических эндометрит. Но в ряде случаев стенка матки может быть настолько дряблой, что ее прощупывание становится невозможным. В этом случае делают рентгеновские снимки, на которых видны затемнения в каудо-вентральной части брюшной полости или УЗ-диагностика.

2.1.3. Методика выполнения морфологических и биохимических исследований крови

Морфологические и биохимические исследования крови проводились в лаборатории ГНУ «СКЗНИВИ» и ветеринарной клинике г. Волгограда.

Кровь для биохимического и морфологического исследования брали из подкожной вены предплечья, латеральной вены сафена, а при их плохой выраженности из яремной вены.

Морфологический анализ крови включал: определение числа эритроцитов и лейкоцитов в сетке камеры Горяева, определение концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом, гематокрита по методике, предложенной И. И. Архангельским и JT. П. Сошенко (1993), СОЭ, выведение лейкограммы по общепринятым методикам.

Биохимический анализ крови включал определение следующих показателей: активность щелочной фосфатазы по ферментативному гидролизу n-нитрофенилфосфата, активности аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы по методу Райтмана-Френкеля, а-амилазы - по Каравею, концентрации глюкозы - орто-толуидиновым методом, белка - с помощью биуретовой реакции, билирубина - по методу Ендрашика-Грофа, альбумина - по реакции с бромкрезоловым зеленым, креатинина - методом Яффе, мочевины - по реакции с диацетилмонооксимом в сильно кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа.

Из биохимических исследований, характеризующих воспалительный процесс, проводили определение фибриногена гравиметрическим методом по Рутбергу (Р.А. Рутберг, 1974; B.C. Камышников, 2000), сиаловых кислот - по методу Гесса (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1974), общей активности лактатдегидрогеназы, основанном на оптическом тесте Варбурга (оптическом эффекте, связанном с превращением НАД* в НАДПН), С-реактивного белка -методом реакции преципитации в капилляре.

Реакции среды (рН) и уровня электролитов (ионов натрия, калия, хлора) на ионометре И-500 с использованием ионоселективных электродов. Объем циркулирующей крови определяли по методу Филипса.

2.1.4. Методика гормональных исследований

В основе количественного определения эстрадиола и прогестерона в биологических жидкостях животных лежит конкурентный вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Принцип метода основан на конкуренции между адсорбированным на поверхности лунок планшета эстрадиолом (прогестероном) и свободным (в калибровочной пробе или анализируемом образце) эстрадиолом (прогестероном) за активные центры связывания аффинных антител к эстрадиолу, меченых пероксидазой. В результате иммуноспецифической реакции между антителами к эстрадиолу (прогестерону) и самим эстрадиолом, содержащимся в пробах (стандарты или образцы) и на поверхности лунок планшета образуются комплексы антитела-зстрадиол. Комплекс антиген-антитело, не связанный с поверхностью планшета, удаляют путем промывки.

В результате ферментативной реакции пероксидазы с перекисью водорода субстратного раствора происходит окрашивание 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (ТМБ) в синий цвет. Интенсивность окраски обратно пропорциональна содержанию эстрадиола в анализируемом образце. Реакцию останавливают добавлением серной кислоты, вызывающей смену окраски с синей на ярко-желтую. Результаты реакции оцениваются на иммуноферментном анализаторе (спектрофотометре) при длине волны 450 нм.

Образцы биологических жидкостей, если они не исследуются в тот же день, должны быть заморожены и храниться при температуре минус 20° С.

Кровь брали также как и для проведения биохимического анализа, получали и отбирали по 0,2 мл сыворотки на каждый анализ в стеклянные или полиэтиленовые пробирки. Добавляли по 1 мл диэтилового эфира, закрывали пробирки пробками, интенсивно встряхивали в течение 1 минуты и помещали в емкость, содержащую смесь ацетона и сухого льда до замораживания водной фазы(замораживание водной фазы можно проводить в холодильнике при минус 20°С и ниже);

-переливали эфирный экстракт во флаконы или пробирки и помещали их на водяную баню при +37°С до полного выпаривания эфира;

- растворяли сухой остаток в 50 мкл Растворителя для анализируемых проб, добавляли 325 мкл рабочего раствора промывочного буфера и использовали в ИФА.

2.1.5. Методика цитологических исследований

Гистологическое строение влагалищного эпителия подвержено гормональным влияниям. В анэструсе, в период наименьшей концентрации эстрогена и прогестерона, влагалище покрыто 2-3-слойным неороговевшим плоским эпителием. Под влиянием эстрогенов происходит пролиферация клеточных слоев. И когда уровень эстрогенов достигает максимальных значений (90 нг/мл), в норме в конце проэструса, клетки, находящиеся на поверхности, подвергаются ороговению. Пик пролиферации (до 20 слоев) и ф ороговение, как правило, совпадают с течкой. В этот период количество эстрогенов снижается, а прогестерона резко возрастает. В начале метэструса слоистость эпителия опять постепенно уменьшается, а ороговевшие клетки слущиваются, в этот период происходит падение эстрогена до 10 нг/мл, прогестерон держится на прежнем уровне, около 30 пг/мл.

В комплексной диагностике хронического эндометрита у сук вагинально-цитологическое исследование имеет важное значение. Гормонально обусловленное изменение структуры используется для того, чтобы определить, какая фаза полового цикла соответствует хроническому эндометриту -эстрогеная или гестагенная. Эти данные имеют решающее значение для окончательной постановки диагноза на хронический эндометрит.

Мазок из влагалища берется по определенной методике. Сначала, во влагалище вводится влагалищное зеркало, можно воспользоваться медицинским ректоскопом. Зеркало вводится в направлении краниодорсально, а затем направление меняется на краниальное, поскольку у сук влагалище имеет выраженный изгиб. Стерильный тампон, смоченный физиологическим раствором закрепленный на изогнутом зажиме Кохера, вводят во влагалище, стараясь не касаться его преддверия, простирающегося от половых губ до устья уретры. Это важно потому, что изменение структуры эпителия в преддверии не так четко выражено, как во влагалище, и, кроме того, интерпретацию могут осложнить клетки из мочевыводящих путей. При наличии обильных выделений из влагалища их слегка промакивают стерильным тампоном, после чего попытка повторяется. Выделения из матки, как правило, заполняют нижнюю часть влагалища и не мешают взятию мазка. Мазок берется путем однократного проведения тампоном по своду влагалища и переноса полученного материала на предметное стекло. Рекомендуется прокатать тампон по стеклу, а не размазывать пробу, так как во втором случае на стекло попадает гораздо меньше клеток, которые к тому же могут быть повреждены. Затем мазок высушивается на воздухе и окрашивается.

Решающим для оценки вагинального мазка является то, что ороговевшие суперфициальные клетки легко отличимые от остальных клеток.

Важнейшими критериями оценки клеток во влагалищном мазке являются их размеры, форма, соотношение между ядром, цитоплазмой и наличие вещества клеточного ядра (таб. 1).