Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Разработка и совершенствование микробиологических тестов диагностики, лечения и профилактики мастита у коров

, 1 I

* I ин 1999

11а правах рукописи

ГАСЛНОВ НЛДЖАФ ГАДЖЫ-оглы

РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ТЕСТОВ ДИАГНОСТИКИ, СПОСОБОВ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ МАСТИТА У КОРОВ

16.00.07 - Акушерство и искусственное осеменение 16.00.03 - Негеринарнал микробиология, вирусологии, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Воронеж 1999

Работа выполнена на кафедре акушерства, гинекологии в искусственного осеменения с.-х. животных Московской государственной академия ветеринарной медицины н биотехнологии кмевк К.И. Скрябин» в в лаборатории санитарки молоке и профилактика кастета Всесоюзного вку чао-исследовательского института ветервнарнов санитарии.

Научный консультант ~ Заслуженный деятель науки Казахское ССР, доктор ветеринарных наук, профессор И.И. Архангельске!

Офвциальвые оаловевты: Доктор ветерипараых ваух, профессор,

заслуженшлй деятель науки РФ В.А.Парвко»

Доктор ветеринарных наук, профессор Г.Н.Кузьиин

Доктор »етеринарних наук А.И.Ивашура

Ведущая организация - Саратовский государственный аграрный университет

Защита состоится ______1999 г. в _^?_часов не заседании диссертационного совета Д 020.65.01 во Всероссийски научно-яссле-довапльсхом ветеряаарнон институте патологии, фармакологии и терапия (394.043, Воронеж, ул. Ломоносова, 114/6)

С диссертацией ножио ознакомится а библиотеке института Автореферат разослав __*999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета М.И. Редкий

/7 2? £ /?/- ¿О

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы. Повышению молочной продуктивности topos и улучшению качества, полога препятствуют болезни молочной железы, ;редн которых большой удельный вес занимают маститы. Недостаточно эффективное лечение мастита способствуют яереходу их в хроническую форму, а это 5едет к гипогалактин, агалактии и атрофнн вымени и преждевременной выбраковке продуктивных хоров.

Известно, что основный источников микроорганизмов являются больные маститом коровы (Архангельский И.И., Карташова В.М., 1966; Хилькевич Й.М., 1970; Шатохин Н.Г., 1971; Париков З.А., 1990; Ильинский В.В., 1992; Юрков В.М., 1994; Гейдрих Г., РенкВ., 1963; Радостнтс О.М. и др., 1994). Важное значение а этиология мастита принадлежит кокковой микрофлоре (Клебс, 1872; ЛннгельсгеЙыа, 1ЭО0- Стивен, 1935; Коляков Я.Е., 1964; Ивашура А.И., 1968; Париков В.А., 1970; Кузьмин Г.Н., 1995; Демидова Л.Д., 1997; Й.Давидсон, 1971; Heeschen W.H., 1996 и др.), что и предопределяет сложность борьбы с зтям заболеванием.

Бессистемное применение антибиотиков, несоблюдение доз и кратности их введения приводят к быстрому развитию у микроорганизмов резистентности к препаратам (Саркисов А.Х., 1967; Ившура А.И., 1968; Хильхевяч Н.М., 1973; Бороздин Э.К., 1986; Сидоров М.А, 1988; Конопатхин A.A., 1990; Астрой Г., 1989 н др.). Поэтому для успешной борьбы с маститом необходимы более эффективные лабораторные методы и тесты диагностики, в том числе и определение антибиотикоустойчивостн изолятов - возбудителей мастита.

Поиск новых средств и способов лечения мастита коров актуален с научной и практической точек зрения.

Успешная борьба с мастито« коров кохковой этиологии, зависит от своевременного выявления источников и путей распространения инфекции, что возможно при использовании фаготипировання стафилококков. Методы лабораторного фаготипярсваняя стафялококхо» широко применяются в медицинской практике. Однако изучение стафилококков, выделенных от коров показало, что они оказались резистентными к фатам международного медицинского набора (Й. Давидсон, 1961; Л.И. Петрушнна, 1967, 1970 и др.). Международный подкомитет по изучению стафилококковых инфекций при ВОЗ (1971) организовал испытание международного набора фагов, лидирующих штаммы стафилококков, выделенных от коров. Работа проводилась с 1966 по 1970 гг. в 14 странах мира, 17 научными учреждениями было проверено 7000 штаммов стафилококков. На основано этих исследований подкомитет ВОЗ рекомендовал для типирования стафилококков использовать фагя, полученные от стафилококковых культур, непосредственно выделенных от коров.

Используя три фага (102, 107,1363-14) международного набора Г.П. Шаманова (1967), М.В. Крикова (1967), Т.К. Петрачева (1968), Л.И. Петрушина (1970), показали высокую лизирующую способность культур стафилококков, выделенных яэ экссудата вымени хоров, больных маститом.

В ветеринарной диагностической практике нашей страны использован! типовые стафилококховых бактериофагов до. 1970 г. яе применялось и пре; став ля лось актуальным испытание международного (медипкпекого) набора т! повыя стафилококковых бактериофагов на патогенных культурах стафилохо: ков, выделенных из экссудата вымени больных маститом коров, разрабап аналогичного набора для ветеринарией диагностической лабораторной практ? ки сталажизнешюй необходимостью.

До настоящего времени не отработаны эффективные приемы аптпбакт: рнальнон профилактики мастита у коров, вызвзлныаи или осложаснными а£ тнбнотикоустончивыми микроорганизмами. Это обстоятельство определил тему настоящей работы.

1.2. Цель » задачи исследовании. Целыо настоящей работы явилос язучеяаг степени распространенна мастита у коров, выясиеаве ролл иихробпе го фактора в этиологии мастита, усовершенствование н разработка аффектив Ш1 методов и тестов его лабораторной диагностики, средств лечения и иг профилактики.

Для достижения помеченной цели были поставлены следующие задачи:

1.Изучить степень распространенна и ас г ига у коров на молочных ферма ¡1 комплексах ряда областей Российской Федерации.

2.0 проделать роль кокковой микрофлоры в этнологии мастита у хоров.

3.Усовершенствовать основные я разработан, новые микробиологически методы а тепы диагностики а астата у хоров. •■ -

4.Изучи1ь пригодность международного набора фагог. йыдгдгяаих а стафилококков, полученных от корив дна гаццроваиая ааф алаuuiis.ua лаз5у датглей мастита хоров.

5.Выделять но местных нетипкруемых культур стафилококков фш I предложить его для использования в дополнение к существующему набору.

6.Иаштать пригодность неантибиотнческого препарата - 1%-ниго водно го раствора диоксидина для лечения хоров, больных маститом.

7.0проделать экономическую эффективность разработанных мероприятии но терапия и профилахтихп мастита у норов.

1.3. Научная иовичпа. Определена степень распространения мастита у коров, наносимый им экономический уие-рб » роль микрофлоры а его этаоло-гни на крупных молочных фермах ы промышленных комплексах Московской Смоленской, Горьковской н Куйбышевской областей Российской Федерации Впервые были определены зональные особенности стафилококков, выделенных из экссудата вымени, больных маститом коров разных регионов страны, метолом сравнительного фаготипирования культур с использованием набора типовых стафилококковых бактериофагов крунного рогатого скота (набор Й. Давид со на) и международною набора фагов, используемого в мели пине.

Впервые установлены фаготииы стафилококков - ¡»оибудигелей 'мастита и выделен новый фаг К«95. позволяю а» и й увеличить число тинируемых сгафило-коккоа. Разработаны н усовершенствованы ускоренные методы н тестыиденги-фикации стафилококков и стрептококков. Научно обоснована возможность применения в 'Течении и профилактике, мастита бактериальной лиолшии пеан-тибиотическом» средства - 1%-ю ио/шою рас шора диоксид нна.

'1.1.4. Практическая зпачямость. Для диагностики скрытого мастита у оров усовершенствована проба отстаивания (утверждена ГУВ МСХ СССР, 983).

. -j, Впервые внедрен в производство а стране новый набор типовых стафило-аккашх бактериофагов крупного рогатого скота; разработаны к утверждены Методические указания по его применению...», «Технические условия 2.14.329-1982», «Регламент производства бактериофагов... №284-1982», Фарнакопенная статья - Ф.С.42.36.В.С.-1987», разработана и уеовершенство-ана среда для стафилококкового фага и реакция плазнокоагуляцни.

Предложено применение 7-8%-ного кровяного МПА в лабораторной рактнке и новые критерии определения патогенных свойств стафилококков по х гемолитической активности (утв. УГУВ МСХиП СССР, 1991).

Усовершенствована «Методика определения ДНК-азной активности ста-илококков», утверждений*ТУВ Госатропрома СССР, 1988 и признанная от-аслевой (удост. На рацпред. №439-11/1387-53) н техники постановки КАМП-:ета (изменения и дополнения в п.2.3.9.5) в «Методических указапиях по бак-гриологическому исследованию молоха», утв. ГУВ Госкомиссии Совмина ССР по продовольствию и закупкам, 1990, №042-12 и признана отраслевым редложениеи в СССР (удост. На рацпред, № 439-11/1898-85);

разработаны: мнкробиологнческне критерии получения высоко-)ртного молока на молочных фермах к промкоиплексах (в соаат.), утв. Госаг-апрома СССР, 1986;

- применение индивидуальных салфеток, дезинфекция доильных •аканов перед доением коров, н антисептическая обработка сосков вымени noie доения включены в комплекс ветерияарно-санитариых мероприятий и вае-)епыв производство, 1986;

для лечения коров, больных маститом, взамен антибиотиков, пред-жен неаитнбиотический препарат - 1%-нын водный раствор диоксидина;

ТУ 10.07.136-1989 на раствор диокенднн 1%-нын, утв. ГУВ Госко-исснн Совмина СССР по продовольствию и закупкам, и внедрен в ветеринарию практику в СССР (прихаз №66 от 25.06.90г. по ГУВ). Диокенднн в 1988-90 .экспонировался в павильоне «Ветеринария» ВДНХ СССР, и в 1990 г. пауч-« разработка отмечена серебряной ыедалъю ВДНХ СССР.

1.5. Внедрепяе результатов исследований. На основе диссертационных зтериалов разработаны и усовершенствованы 35 практических предложений, ! из которых утверждены Госагропронон СССР, ГУВ МСХ СССР, ГУВ Гос-1МНССИИ Совмина СССР по продовольствию я закупкам, 5 - Минздравом ССР, 8 - одобрены ГУВ.Госагропрома СССР, ВАСХНИЛ и МВА.

В соавторстве с учеными института эпидемиологии, микробиологии н 1нунологнн ни Н.Ф. Гамалеи АМН СССР организован производственный туск набора типовых стафилококковых бактериофагов крупного рогатого ота по заказу Департамента ветер и нар и и МСХиП РФ; организован промыш-нный выпуск 1%-аого водного 'раствора диоксидина на биопредприятнях и фмацевтнческих заводах РФ и в ряДе ветучереждений СНГ.

В настоящее время годовой выпуск препарата в Российской Федерации достигает 10-12 или. лечебных доз.

1.6. Апробация. Основные результаты исследований доложены на заседаниях Ученого совета ВНИИВС (1973-77 гг.) на пяти заседаниях координационного совета ВШШВС; Всесоюзных конференциях (Горький, 1976, Кауна«, 1977, Воронеж, 1986, Москва, 1991,1992); Всероссийских конференциях (Белгород, 1988, Москва, 1994, Воронеж, 1996); Всероссийской научной и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных (Воронеж, 1994); Всероссийских семинарах по методам анализа бактериологических исследований (Российская научно-производственная ветеринарная лаборатория, Косино, 1987,1988, 1991, 1992) на отчетно-научных конференциях Московской ветеринарной академии им К.И. Скрябина (19791992) доложены и получили одобрение 28 докладов.

1.7. Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 162 работы, из них 112 в изданиях, утвержденных ВАК РФ для опубликования по докторским диссертациями сборниках, журналах, материалах научных конференций. Одно предложение признано изобретением, шесть -рацпредложением союзного значения. Две разработки экспонировались на ВДНХ СССР, одна яз них удостоена серебряной медали ВДНХ СССР.

1.8. Объем и структура работы. Диссертация изложена на 380 страницах машинописного текста и имеет следующие разделы: введение, обзор литературы, 4 главы собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список вориатявяо-техничесхой документации и список литературы, включающий 488 наименований, в том числе 356 отечественных и 132 иностранных источников. Работа иллюстрирована 42 таблицами, 9 рисунками и 2 схемами.

Основные положения, выносимые на защиту:

- распространение мастита у коров на молочных фермах и комплексах;

- методы и тесты микробиологической диагностики мастита у коров;

- теоретическое обоснование и разработка неантибкотичсских способов и средств терапии мастита у коров бактериальной этиологии;

• разработка и внедрение микробиологических критериев получения высокосортного молока;

- роль ветеринарно-санитаряых мероприятий в профилактике настнтау коров;

- экономическая эффективность лечебно-профилактических мероприятий при мастите у коров,

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал в истоды Работа выполнялась в 1973-1998 гг. в лаборатории санитарии молока и профилактики мастита ВНИИВС МСХ СССР и на кафедре акушерства, гинекологии н биотехники размножения животных Московской ветеринарной академии ни. К.И. Скрябина, совместно с ИЭМИ им. Н.Ф.Гамалеи АМН СССР; ВГНКЙ ветеринарных препаратов МСХ СССР; на молочных фермах и кон-

шексах Московской, Горьковской, Смоленской и Куйбышевской областей Российской Федерации.

При проведении исследований руководствовались «Методическими уха-¡аниями по диагностике, лечению и профилактике маститов у коров» (1972), (Рекомендациями по борьбе с маститом хоров» (1983) н «Методическим указанны по бактериологияескому исследованию молока и секрета вымени коров» 1983); с помощью клинических методов, реакции с растворами поверхностно-«тивными реактивамн (5%-вын водный раствор димастин, 2%-ный водный )аствор мастиднн и др.), пробы отстаивания, бактериологического анализа. Зсего было обследовано 47552 лактирующих и сухостойных коров, от которых ¡705 проб было подвергнуто лабораторным анализам. Для дифференциация ¡896 испытуемых культур стафи'лб кокков использовали основные тесты по оп-•еделенвю гемолитической, плазнокоагулазной и ДНК-азной активности.

Установление серологических групп 2019 испытуемых культур стрепто-:окков производили высев из кровяного МПА на элективную среду В.М. Кар-ашовой, реакцией по КАМП-тесту, тестам Шермаиа в выборочно реокцвен |реципитация по Леясфилд. Испытуемые 206 колиформпым бактерии высева-[и яазлективную среду КОДА; • ' --*

Чувствительность 8б0иСпыгуемых культур, выделенных от больных мас-итом коров микроорганизмов, к антибиотикам определяли общепринятым ме-одом стандартных дисков, выпускаемых МЗ СССР.

Диагноз намастит с клиническими призвахани ставили на основания ос-ютра и пальпации молочной железы, дифференцировали мастит согласно лассификации А.П. Студенцова (1952). К больным скрытой формой мастита тносилн коров при величин: положительных реахций на растворы поверхно-тно-активных веществ и по пробе отстаивания, или положительной реакции на [иагностикум и присутствия в экссудате возбудителей мастита.

В лабораторной диагностике масти*а применяли типовые стафилококко-ые бактериофаги, выпускаемые ИЭМИ им. Н.Ф. Гамалеи АМН СССР, фаги и ix эталонные штаммы стафилококков, полученные от профессора Й. Давидсона з Англия. Фяготипирование 680 испытуемых хультур выполняли согласно на-тавлеяню, утвержденному Минздравом СССР и методическим указаниям..., азработанным нами.

Бета гемолитические стафилококки и агалактийяые стрептохокки (музей-ые штаммы) из ВГНКИ ветеринарных препаратов, культуры - возбудители 1астита из Копенгагена (Дания).

Использовали антибиотики и яеанэдбиотические препараты с участием отрудиика ВГНКИ ветеринарных препаратов, кандидата ветеринарных паук, т. научного сотрудника Ю.А. Козырева в ВНИИВСГЭ кандидата ветеринар-ых наук, ст. научного сотрудника А.Г. Ммляновсхого. Испытывали неапти-иотический препарат - 1%-нын водный" раствор дноксидина. Токсические войства препарата изучали в соответствен с утвержденными нормативными окументами: острую токсичность определяли яа белых мышах, кожно-езорбтивпое, кожно-раздражающее действие - на кроликах и коровах. На каж-

дое исследование по 5-6 животных. Всего было использовано 20 мышей, 10 кроликов и 6 коров.

Исследовали 87 лроб сборного молока и 160- смывов с доильного оборудования согласно ГОСТу 13926-68 «Молоко и сливки заготавливаемые» и ГОСТу 922-68 «Молоко и молочные продукты, методы микробиологического исследования. Смывы получали согласно методике, изложенной в санитарных правилах...(утв. ГУВ МСХ СССР в 1970 г.), коли-титр - ускоренными методами, согласно «Методическим указаниям по определению санитарного состояния доильного оборудования и молочной посуды по холи-титру» (утв. ГУВ МСХ СССР 17 июня 1971 г.) - с использованием среды КОДА.

Оценку результатов лечения больных маститом коров осуществляли через 5-7 и 15-20 дней при помощи клинических и бактериологических исследований.

Статистическую обработку, полученных данных, проводили по методике Н.В. Садовского (1975).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Распространение мастита у коров в хозяйствах Московской, Смоленской, Горьковскон и Куйбышевской областей РФ

В период с 1973 по 1998 гг. выполнены исследования по выявлению благополучия ферм по маститу коров на 5 молочных комплексах и 8 молочных фермах 12 хозяйств, которые являются типичными для данного региона по уровню кормления, технологии содержания, доения коров и их породному составу (черно-пестрая, айрширская и бестужевская породы). Исследованием 10085 коров установлено, что из них 1,9% болели маститом с клиническими признаками, 14,4% - со скрытым течением и у 20,1% регнетрвроволи раздражение вымени.

Заболеваемость коров маститом определяли при разовом исследовании животных (табл. 1), а также ежемесячным обследованием коров неблагополучной фермы в течение 2-3 лет.

Таблица 1

Заболеваемость коров маститом на молочных фермах и комплексах

№ Л окаитеди Ф ерыы К омпдекси

1 Обследовано коров 5285 4860

2 Заболеваемость коров маститом, Ув 10,9 20,4

3 С клиническими признаками, % 1,3 3,8

4 Со скрытым течением, % 9,6 16,б

5 Атрофия четвертей вымени, % 3,2 7,5

6 Бактериальный мастит, % 78,2 80,6

7 Асептический мастит, % 21,8 19,4

Материалы табл. 1 показывают, что хак на фермах, так и на комплексах основной формой является мастит со скрытым течением, которая диагностиро-

валась значительно чаще, чем с клиническими признаками. Более высокая степень заболеваемости коров маститом со скрытым течением мастита на комплексах- 16,6%, чем на фермах - 9,6%.

Скрытый мастит, протекая латентно н хронически, нередко заканчивается агалактией пораженной четверти вымени. Например, у 7,5% коров на комплексах и 3,2% на племенных фермах отмечали атрофию доли вымени, что связано с неблагоприятным исходом мастита. Бактериологическими исследованиями экссудата вымени от больных маститом животных в 80,6% случаев на комплексах н 78,2 - на фермах был определен мастит бактериальной этиологии, обусловленный кокковой микрофлорой (стафилококки, стрептококки) и только у 19,4% и 21,8% коров соответственно, мастнг протекал, без хохковой микрофлоры.

Анализируя заболеваемость коров маститом на комплексах и фермах следует отметить, что на комплексе «Шапово» в течение года 69% коров перебо-левают маститом, а в комплексе «Бессоново», учхоза аЛеоновсхое» при комиссионном исследовании 365 коров, нами было установлено, что 55% коров оказались с морфофункциональными отклонениями молочной железы.

Таким образом, 2-3 летний опыт работы по борьбе с маститом коров в каждом хозяйстве показал, что принятые плановые меры позволили снизить заболеваемость за первый квартал на 30-35%, за год на 50%, в хояце 2 года до 6570%, за 3 года на 75-80%.

Проводимые протнвомаститнме мероприятия наряду с уменьшением заболеваемости коров маститом, одновременно обеспечивают улучшение санитарного хачества молока. Однако полностью ликвидировать воспаление молочной железы не удалось, поскольку циркулирующая на фермах и комплексах кокковая микрофлора постоянно поддерживает инфекционный процесс в вымени коров, а у переболевших коров на фермах увеличивается до 86% и на комплексах - 88%.

Возникновение инфекционного мастита у хоров зависит от множества причин, из хоторых внедрение в молочную железу патогенных и условно-патогенных микроорганизмов является обязательным условием. Дальнейшее инфицирование здоровых коров сопряжено со взаимодействием трех обязательных звеньев, составляющих непрерывную эпизоотическую цепь:

1 - источник инфекции - больные маститом и бактерионосители;

2 - фактор передачи инфекции (донльные стаканы, материалы для антисептической обработки сосков вымени и др.);

3 - восприимчивые животные со сниженной резистентностью, обусловленной неблагоприятным воздействием внешней среды, включая кормление и содержание (условия промышленной технологии).

С целью выяснения структуры мастита у коров бактериальной этиологии было подвергнуто бактериологическому исследованию 7340 проб молока (секрета) и экссудата из больных н положительно реагирующих на скрытую форму мастита четвертей вымени от 9505 коров, при этом установили, что 2896 (39,48%) испытуемых культур были отнесены к стафилококкам; 2019 (27,5%) -к стрептококкам; 206 (2,8%) - к холяформным и 615 (12%) - к смешанным. В

2217 (30,2%) пробах микрофлоры не было установлено. Бактериологически статус четвертей вымени коров прв мастите приведен в таблице 2.

Таблица 2

Михроорганизмы экссудата вымени коров, больных маститом ва молочных фермах и комплексах (%)

М икрооргдннзмы lip оби получено от коров

на ф ершах ил комплексах

Стафилококки « т.ч. St. aureus St. epídermldís 51,2 29.7 31.8 49,9 30,3 28,6

Стрептококка i т.ч. Str. agalactia« и др. серологич. группы 40,2 62,9 17,04 39,9 60,0 18,01

Жолвфориние бактерии 1,6 1,2

Ассоциации микроорганизмов 7,0 5,0

Выделено культур 78,2 80,6

Пробы, не содержащие бактерия 21,8 19,4

3.2. Особенности Диагностики мастита у коров в период запуска и сухостоя ;г> Объективными показателями в эти периоды служат: визуальный учет секрета и микробиологические нахождения в экссудате патогенной кокковое микрофлоры. В норме обычно секрета мала (3-5 мл), он в начале клейкий, вязкий, тягучий, а затем прозрачный, слегка желтоватый, густой, во второй половине сухостоя коричневый, часто отсутствует.

Наши опыты убедительно показали, что, если корова больна скрытой формой мастита, то секрета много, он жидкий, бесцветный, иногда имеет матовый оттенок. Из секрета таких четвертей вымени при бактериологическом исследовании выделяется патогенная кокковая микрофлора. Данное предложение (разработка) одобрено ГУВМСХ СССР и вошло в «Рекомендации по борьбе с маститом коров» (1983).

В период запуска и в начале сухостойного содержания коров, мастит с клиническими признаками также резко отличается от таковых в лактационном периоде. В эти периоды характерна хроничесхая, катаральная или гнойно-катаральная форма мастита. Основные клинические признак» мастита в эти периоды: очаговые уплотнения и наличие катарального или гнойно-катарального экссудата. При бактериологической исследовании экссудата выявляется возбудитель, определяется его чувствительность к применяемый лечебным препаратам.

4. Разработка н у совершен стповапис микробиологических методов н тестов диагностики мастита у коров.

4.1. Определение патогенных свойств стафилококков по их гемолн-таской активности. Гемолитическая активность стафилококков - характер-|й признак их патогенности. Для изучения культурально-биохииических, ологических и др. характеристик стафилококков отбирают колонии с кровя-го агара по гемолитическим свойствам, согласно «Методичесхям указаниям бактериологическому исследованию молока я секретавымеии коров» (1983). i этой методике дифференциация стафилококковых хультур заключается в нвружении на кровяном МПА (с эритроцит амн кролика или крупного рогато-скота) зон гемолиза вокруг колоний стафилококков, обладающих: а,р-лолитическиин свойствами и смешаяным а,Р-гемолизом, без учета зоны ге-лиза. Недостатком данного способа является то, что для их дальнейшей фферелци.чции отбирают все гемолнтнчесхи активные культуры, независимо величины зоны гемолиза, в результате чего в 65-70% случаев их патоген-сть не подтверждается другими тестами, я на их дифференциацию приходит-тратять значительное количество питательных сред, лабораторной посуды н )очего времени для исследования. Кроне того, многие авторы указывают на !личия между гемолитической и хоагулазной активлостями патогенных ста-лохокхов (Загаевский И.С., 1979; Петерсои К.А., 1982; Hejliíek К., 1984, escbea W. H., 1986 и др.).

Целью нашей работы было изучение в сравнительном аспекте гемолити-;кой активности мазмокоагулирующих и некоагулирующих плазму хрови >лика и крупного рогатого скота стафилококков и разработать конкретные (тернн отбора колоний для дальнейшей дифференциации исследуемых куль-|. Для этого исследовали 1596 стафилококковых культур, из них 30 - выде-[ные от людей и полученные из Государственного института стандартизации :онтроля медицинских биологических препаратов имени Л.А.Тарасевмча я ¡6 из молока (секрета) и экссудата вымен и коров. Установили, что 680 куль-обладалв плазмокоагулнрующей; гемолитической н ДНК-азной активною, 295 - не коагулировали плазму, но имели гемолитические и ДНК-азные йства и 447 - не продуцировали гемолизины, ас хоагулировали плазму хро-кролика и крупного рогатого скота, но 90 (20,1%) из них обладали ДНК-ой активностью.

На основании этих исследований нами предложен новый способ опреде-ня патогенных свойств стафилококков по их гемолитической активности, орый позволяет устранить недостатки существующего способа, что сокра-:т на 65-70% обьем диагностической работы, расход питательных сред, ла-аторпой посуды и рабочего времени и совпадает с их плазмокоагулазной ах-ностью в 98-100% случаев.

Сущность предложенного способа заключается в следующем. Оценку ге-ттической активности испытуемых культур стафилококков проводили по ичию зоны гемолиза вокруг колонии, проводя измерения линейкой или 1Лиметровой бумагой.,При:ЗОне распространения гемолизинов в 3 мм и бо-геиолитнческую реакцию-считали положительной, менее З им - сомнн-

тельной. Отсутствие зоны свидетельствует об отрицательной реакции. Кулы ры с зоной гемолиза в 3 им и более подвергали дальнейшей дифференциации ,, Для,улучшения контрастности зоны гемолиза на 100 мл МПА внесли ' мл кровн/аместо 5 пл. Уменьшение количества агара а чашке Петри до 10мл, вместо 15-20 ыл, позволяет значительно сократить расход МПА, а увели' ние в нем на 2-3% эритроцитов резко улучшает контрастность зоны гемоли при этом получаются идентичные результаты исслеедования.

Нашр изменения ранее существовавшей методики и дополнения к в были апробированы во многих ветеринарных лабораториях. На основании эт апробаций ГУВ МСХ и продовольствия СССР 19.11.91г. № 042/07 утвержде и внесены изменения и дополнения в п.2.3.8.2. в «Методичесхах ухазаний бактериологическому исследованию молокан секретавымени хоров» (1983).

4.2. Усовершенствование методики реакции плазмокоагуляции. основании своих экспериментальных исследований и результатов сравните.) ных испытаний на разные тесты (на лабораторных животных), с паспортйзи; ванными хультурами, а также не коагулировавшими плазму испытуемым 1 культур стафилококков, которые по гемолитической и ДНК-азной актив ноет были отнесены к патогенным, совместно с ст. микробиологом ИЭМИ I Н.Ф.Гамалеи АМН СССР И.А.Парчипсхой усовершенствовали методику пр ведения реакции плазмокоагуляции, а именно:

• разведенную 1:4 плазму разливали по 0,5 мл в аглютинацнонные п; бирки и подогревали в термостате при 37°С 6-10 ч.;

,.''„ - использовали для плазмокоагуляции 3-5 часовые бульонные культур вместо 20-24 часовых;

- после 6 часового учета результатов пробирки в штативе, ие давшие г ложительную реакцию, оставляли в термостате на 18 часов;

- положительной реакцией считали наличие плавающих дисков в плаз] Примененное нами усовершенствование позволяет в 4-5 раз сократить вре исследования (на 18-20 часов).

Данная модификация согласованна с ИЭМИ им Н.Ф. Гамалеи А& СССР (1976) я утверждена ГУВ МСХ СССР 16.09.1976 года.

4.3. Совершенствование техники определения ДНК-азной активное стафилококков. В настоящее время для дифференциации патогенных культ стафилококков от непатогенных определение их коагулазкой активности яа: ется одним из основных тестов, характеризующих патогенность стафилококк! Для исследования коагулазнон активности проверяемых культур стафилокс ков нужно отобрать колонии с гемолитической активностью. Затеи ветернн! ная лаборатория обязана, согласно требованиям «Методических указаний бактериологическому исследованию молока и секрета вымени коров», утв. Г1 МСХ СССР (1983), использовать еще один из существующих тестов по усмс рению лаборатории или исследователя. Многочисленные отечественные и : рубежные исследователи предпочтение отдают ДНК-азной активности в ка1 стве третьего теста. Мы также широко использовали в своей работе этот л как наименее трудоемкий, легко выполнимый и высокоэффективный при ди ференциации испытуемых культур стафилококков. • 4

Исследовали 1474 стафилококковые культуры, выделенные из секрета и ссудата вымени коров, в том числе 588 - обладающих плазмокоагулазпоя, политической и ДНК-азной активностью; 499 - некоагупирующих плазму, но ладающих гемолитическими и ДНК-азными свойствами и 387 - не продуцн-ющих гемолизины, не коагулирующие плазму, из них лишь 77 культур ?,9%) обладали ДНК-азной активностью.

Результаты наших исследований показали, что ДНК-азной активностью ладают в 100% случаях не тольхо коагулазопозитивные и коагулазонегатив-1е испытуемые культуры, но и гемолитически активные, не продуцирующие «олнзины (19,9%). В связи с этим мы провели анализ и вылепили, что коли-ствеввая оценка образования ДНК-азы с указанием просто зоны просветле-я вокруг колонии или в крестах (Н.Б. Мордвипова и др., 1967) свидетельст-ют лишь о ДНК-азной активности испытуемых культур, но не является крикнем патогенностн. Поэтому мы предлагаем конкретныечеритерки отбора по ПС-азной активности тех испытуемых культур, которые оказались плазаокоа-чирующимн. Для этого сопоставили ДНК-азпую активность этих культур 1филококков и установили, что все они имели тоны деполимеризации ДНК от (о 8 мм и более. Испытанные яаии 499 культур не коагулирующих плазму, но обладающих гемолитическими свойствами, имели зоны деполимеризации Ж в пределах 2-3,9 мм; из 387 не продуцировавших гемолизин - лишь 77 ),9%) культур оказались ДНК-азоактивныыи, т.е. зоны деполимеризации сорили 0,1-1.9 мм.

На основании этих исследований мы рекомендовали новую модяфнка-ю определения ДНК-азной активности стафилококков, заключающуюся в сеае в одну чашку Петря 60-90 испытуемых культур точечными соприкосно-ниями бактериологической петли (диаметром в 2 ми) с поверхностью агара, есто 6-8 штрихами и разработали новые критерии. В чашке Петри с иссле-емыми культурами измеряли ширину зоны от края колонии до ее границы. >иер исследуемой культуры определяли трафаретом, совмещая метку на чаш-Петри с первым квадратом. При ширине зоны просветления 4 мм и более Ж-азную реакцию считали положительной, менее 4 им - сомнительной, при сутствии зоны - отрицательной. Культуры, давшие положительную ДНК-зую реакцию, относили к патогенным. Таким образом, усовершенствованная ми техника определения ДНК-азной активности стафилококков позволяет кратять на 70-75% обьем работы, питательных сред"й лабораторной посуды и еныпить расход дорогостоящей ДНК (рис. 1, 2). Результаты наших исследо-ний подтверждены данными, полученньши при широком производственном пытании. Наше предложение ГУВ Госагропрома СССР в 1987 г. было при-аио отраслевым (удоет. нарацпред. № 439-11/1387-3), а в 1988 г. былаутвер-(ена разработанная нами методика определения дезоксирибонуклеазной НК-азной) активности стафилококков.

Определение ДНК-азнон активности стафилококков

Рис. 1. Посевы гшазмокоагулнрующих культур стафилококков на ДНК-азную активность по общепринятой методике в виде штрихов

Рис. 2. Точечные посевы 90 испытуемых культур стафилококков на ДНК-азную активность по разработанной нами методике (1 -положительные, 2-сомишггельные и З-отрицательные стафилококки)

4.4. Фпготнпнроппняе стафилококков. Изучали источники я пути распространения стафилококковых инфекции с помощью типовых стафилококковых бахтериофагов. Работа выполнялась а два этапа. На первом этапе изучали фаголизобильность стафилококков прн иастлте коров, специфичность таловых стафилококковых бактериофагов (международного набора), выпускаемых в медицине и специальный набор, выделенных от коров (фага из Англии), их ислы-тывали на достаточном материале испытуемых культур стафилококков, выделенных из экссудата вымени, больных .маститом коров.

На втором этапе исследований кроме фаготнпяровапня 6S0 испытуемых культур сгафилохоккоа, ставилась задача организовать выпуск производственной серии фагов и их испытание в республиканских ветеринарных лабораториях н отделах зетсанэксяертизы НИИ с тем, чтобы оформить и утвердить нормативно-техническую документацию на производственный выпуск, а также перейти к организации фягоирофилахтвхи мастита у коров стафилококковой этнологии.

Фаготипирояапием испытуемых 680 культур стафилококков, выделенных из молока (секрета) и экссудата вымени коров, больных маститом установили, что основные фаготины в молочных хозяйствах Московской, Горьковской, Смоленской и Куйбышевской областей я в других регионах СССР яри мастите корон оказались: 102, 107 и 117 фагя, они лизировял* 60,8%; 57,5% и 52,9% соответственно.

Результаты производственных апробаций этих фагов, по разнарядке Г'УВ МСХ СССР, & 9 учреждениях было испытано 3317 культур стафилококков, и а 77-100% случаев (в среднем 33%) они оказались типируемыми, прячем основные фаготипыв этих учреждениях также оказались 102, 107 а 117 фагя.

На основании езоих экспериментальных исследований и результатов производственных испытании типовых стафилококковых бахтериофагов, выделенных из стафилококков, полученных от коров, мы разработали и утвердили Минздравом СССР:

- «Методические указания по его применению...»; «Технические условия 42.I4.-329-19S2»; «Регламент производства бахтериофагов...»; № 284-1982; -«Фармакопейная статья - Ф.С.42.36 В.С.-1987».

Разработана и усовершенствована среда для стафилококкового фага и реакции нлазмокоагуляцни, согласованы с институтом эпидемиологии, микробиологии н кммунологян им. Н.Ф. Гамалеи AHM СССР II.VI.76 г. я утверждены ГУБ МСХ СССР 16 сентября 1976 года.

Прн испытании размноженных нам» типовых стафилококковых бактериофагов. выделенных из стафилококков, полученных от корон, на 5S0 испытуемых культур стафилококков, лизировались 649 (95,5%), а по заданию ГУВ МСХ СССР, при комиссионном испытании 120 испытуемых культур стафилококков 117 (97,7%).

Из нетнпируемых культур стафилококков нами выделен новый фаг №93, с помощью которого увеличивается тмпируемых стафилококков до 98,5%.

Такая высокая специфичность этих фагов позволила нам предложить фа-гошпярованне стафилококков ляи набором фагов 5 ветеринарных лабораго-

риях н считать - тестом определения патогенности стафилококков. Данно предложение согласовано Центральной ветеринарной лаборатории МСХ ССС и одобрено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР, опубликовано журнале «Ветеринария», 1987.-№ 6.-С.32.

Стоимость одного набора фагов (ценах 1985) составила 1р. 61х. Для диф ференциации патогенных стафилококков от непатогенных достаточно приобре сти в год 2-3 набора и можно дифференцировать более ЗООО испытуемых куль тур стафилококков. Следует отметить, что это самый дешевый, легко выполни мый н высокоспецифичный тест.

На основании вышеизложенных тестов, нами разработана схема диффе ренциации испытуемых патогенных стафилококков от непато генных, котора позволяет сократить сроки бактериологических исследований до трех суто (вместо пяти-шести), что в свою очередь позволяет ускорить начало проведени лечебных мероприятий (рис. 3).

4.5. Усовершенствование техники постановки КАМП-теста Для дифференциации агалактннного стрептококка от других серологически групп. При бактериологическом исследовании 7340 проб молока (секрета) экссудата из больных и положительно реагирующих на скрытую форму масти та четвертей вымени от 9505 коров мы установили, что 2898 (39,48%) испытуе мых культур были отнесены к стафилококкам; 2019 (27,5%) - к стрептококка] и 206 (2,S%)- к колиформным бактериям; из общего числа 615 (12%) - к сие шанным (стафилококки, стрептококки и колиформные бактерии). В 221 (30,2%) пробах микрофлоры не было установлено. Результаты этих исслсдовг ннй показали, что стафило- и стрептококки являются специфическими возбуди телями мастита.

Для дальнейшей дифференциации испытуемых культур стрептококке исследовали на тесты Шермана с последующей проверкой на КАМП-тест. И 2019 испытуемых культур на элективной среде росли 73,6%; па МПБ с 40я/ желчи - 65,2%; редуцировали метиленовую синь - 26,4%; и росли на МПБ 6,5% хлорида натрия 8,2%. Все исследованные культуры стрептококков, н редуцирующие метиленовый синий н не давшие роста на МПБ с 6,5% хлорид натрия, мы проверили на КАМП-тест. Из 1556 культур положительно реагиро вали 950 (61,1%), отрицательно 606 (38,8%).

С помощью преципитирующей сыворотки, изготовленной нами путе; иммунизации кроликов антигенами из агалахтийных стрептокохков по метод Ленсфилд г модификации ИЭМИ им. Н.Ф. Гамалеи AHM СССР (И,О. Введен екая, 1957), выборочно изучали серологические свойства стрептокохковм культур, которые были отнесены к серологической группе В. Серологичесха реакция подтвердила достоверность КАМП-теста с ß-гемолитнческим стафило коккам.

С целью экономии питательной среды, мы широко испытали а своих ис следованиях и рекомендуем усовершенствованный метод постановки KAMÍI геста. В этих целях иясо-пеигониый агар в объеме 100 см3 расплавляли в cíe рильной колбе в водяной бане; охлаждали до 42-45°С н стерильной градун ро ванной пипеткой вносили в него 7 - 8 см3 (вместо 5 см'1) цитратной крови

15 СХЕМА

дифференциации испытуемых патогенных стафилококкой от непатогенных (по Н.Г. Гасанову)

Посев на7-8%-ный кровяной МПА

МП Б через 3-5 ч Плазмокоагуляцнн

Полужидкий агар для храпения

Цлазмо коагуляция

ф сзэ

^атотипизация СЗ Ец»

■ и^брасывается

ш?

га

МПБ для ДНК-азной активности

Определения чувствительности стафилококков к применяемым лечебным препаратам

Рис.3. Схема дифференциации испытуемых культур стафилококков

Проверка испытуемых культур стрешокомсов на КАМП- тест

Рис. 4. Посевы испытуемых стрептококков по С1гп«пе Л., АЙапз N.. Мипс!1-Ре1ег-&еп Е. 0.2, 3 - положотельный. 2, 3, 4 - отрицательный).

Риг. 5. Посев« <¡0испытуемых стрептококков короткими':5?6'мм штрихами перпендикулярно к диаметральному ирадиально к круговому посевы бгта пли альфа-бета гемолитического стафилококка по разработанной нами методике (1- положительные, 2 - отрицательные стрептококки.»

крупного рогатого скота, смешивали вращательными движениями колбы и разевали по 10-12 си9 (вместо 15-20 си3) равномерно по дну чашки Петри. Чаш кн ; застывшим агаром помещали а гериосгат при 37°С на 30-40 мин. для яодсу-ипвания, затем суточную я ля 3-5 часовую бульонную культуру бета или альфа-эета гемолитического стафилококка высевали на кровяной чясо-пептоипын irap. Посев делали по диаметру и сплошной круговой линией по периферии сровяного агара г чаикн Петрн. Испытуемые культуры (изоляты) стрептокок-сов высевали короткими (5-6 мм) штрихами перпендикулярно х диаметральному и радиальио к круговому посеву бета или альфа-бета гемолитического стафилококка, на расстояния 5-6 мм между посевами, не доводя бактериологиче-:кой петли на 5-6 «м до посева бета гемолитического стафилококка. На одной юшке Петри, вместо б испытуемых культур, одновременно проверяли 50 и бо-îee азочятов стрептококков, что в 10 раз уменьшает расход латзтельаой среды, iaôopaTOpHOH посуды я затраты рабочего времени.

Чашки с посевами помещали а термостат при 37°С на 1S-Î4 ч. КАМП-■ест считали положительным, если визуально четко выражена л виде полукругл юна гемолиза испытуемой культуры стрептококка г зоне беттг алн альфа-бета •гаолитичесхого стафилококка (рис. 4 и 5),

Результаты наших исследований в высокой степени совпали с апробацией 1 десятках ветеринарных лабораторий (в отделах ветерянарно-сан.чтариых зке-1ертиз), а лабораториях НИИ и ВУЗах. Заключительная апробация была прове-jeHa в Российской республиканской научно-производственной ветеринарной ¡аборатория. На основании полученных данных ГУБ МСХ и продовольствия L'CCP 1У.02.УО r. jV» 042-12 утверждены изменения я дополнения а а.2. 3. '). 5 ¡остановка КАМП-теста а «Методических. указаниях но бактериологическому ^следованию молокан секрета вымени короа» (1933) л нродложенме прнзнаио 1траслевым а СССР (удост. на рацпред. ife439-11/1898-35).

5. ЛЕЧЕНИЕ КОРОВ, БОЛЬНЫХ МАСТИТОМ

5Л. Леченнс коров, Дольных с клиническим я признакам!! мастита. В [ачале нашей работы лечение коров, больных маститом осуществляли анти-iuoTnxauB по следующей схеие. Корове после установления диагноза н определения чувствительности выделенной микрофлоры к применяемым лшибио-ихам (табл. 3), назначали внутримышечные -инъекции пенициллина со преи-омицииои по 625 н 375 тыс. ЕД соответственно, по 3 раза s сутки с ннтерва-юм в 8 ч, проводили массаж (при серозном ¡1 катаральном маститах), перед даиваиием для разжижения содержимого пораженных четвертей вымени вво-шли 120-200 1-2%-ного теплого (37-33 "С) раствора двууглекислого натрия,

ерез 10-15 мин. сдаивали. Повторно определяли визуальным осмотром яыде-¡яемьгй экссудат, при необходимости повторяла разжижение второй, иногда и ретяй раз (2-3 раза утрой и 2-3 раза вечером).

Антибиотики растворили на 0,5%-ном растворе новокаина. После гща-ельното сдаивания ииграцистерняльно вводили те же антибиотики по 50-100 ыс. ЕД два раза а сутки. В опыте было 20 коров. Выздоровление коров иасту-

ало медленно, а восстановление полочной продукт шшетм было неполным.

Таблица 3. Чувствительность к препаратам микрофлоры вымени, выделенной из экссудата (в %)

СтзфшюЕОюгн Стрептококки Калнформкые бактерии

Накыеноваяне КОЛ-ВО чувстви- мало- нечувст- кол-во чувстви- мало- нечувст- кол-во чувстви- мало- нечувст-

препаратов шташгов тельных чувстви- ьггтепь- штаммов тельных чувстви- витель- штакыов тельных чувстви- витель-

тельных кых тельных ных тельных ных

Пенвдшннн 480 68,6 20,1 12^3 320 75,4 15,2 9,4 126 20,5 24,2 55,3

Схрелгошоди 480 2,4 2,2 22,4 320 4,3 30,5 24,2 126 46,7 34,8 22,5

Эритроизщнн 480 70,7 23,7 7,3 320 80,8 19,2 - 126 26,5 26,8 46,7

Моноинцин 350 8,4 14,6 ■ 210 88,0 12,0 - 42 80,5 13,3 6,2

Неошшкн 350 86,2 13,3 - 210 83,5 16,5 - 42 86,2 13,8 -

Левомкцетнн 350 55,3 37,0 7,7 210 74,1 18,5 7,4 42 64,5 19,5 16,5

Теграцккднк 480 40,4 37,3 223 320 40,5 23,4 31,1 126 38,8 40,1 21,1

Ок* С1 ггетр аднклнн 480 45,6 30,2 24,2 320 50,0 29,3 20,7 126 44,4 24,3 30,2

Хлортетрациювш 480 46,4 28,3 2,3 320 40;4 24,4 3,2 126 42,6 27,1 30,2

Линимент прополиса 30 70,0 30,0 - 20 90,0 10,0 - 20 80,0 15,0 5,0

1%-)ШЙ ДНОКСНДЯЯ 480 96,8 3,2 - 320 98.1 1,9 - 126 83,6 6,8 4,6

В работе были выполнены серии опытов по разработке и применению комплексного метода лечения коров, больных с клиническими признаками мастита. Этот метод разработан на основании анализа результатов лечения коров, больных с клиническими маститами разными методами. Обоснованием применения его была необходимость при лечении всестороннего воздействия па молочную железу и организм коровы в целом.

Данные таблицы 3 показывают, что микрофлора вымени, вызвавшая или осложнившая воспалительный процесс от 30 до 50% н более случаев оказалась антибиотихорезистентной и малочувствительной в связи с этим определение пнтибиотикограммы микроорганизмов перед лечением коров, больных маститом становится необходимой. В тоже время эта микрофлора оказалась высокочувствительной к линименту прополиса и 1%-ному водному раствору дноксп-Г.ияа.

Сущиость комплексного метода лечения заключается в следующем. Больную маститом корову изолировали из группы в отведенное место (ветязо-лятор и др.), переводили на ручное доение, исключали сочное корма, силос, ограничивали водопой, зеленную массу, кормили доброкачественным сеном, сенной, хвойной мукой, пророщенным зерном, свеклой и морковью. По каллорий-ности рацион доводили до 10-11 к.е., а скармливали его в 4-5 приемов в сутки. Выполняли короткую новокаиновуш блокаду нервов вымени по Д.Д. Логвинову, которую при необходимости повторяли через 24-48 часов; при серозном и катаральном мастите делали массаж 4-5 раз в сутки. Разжижали содержимое пораженной четверти вымени (при подострых и хронических маститах) 2%-ным теплым (37-38°С) раствором двууглекислого натрия по 150-250 мл, через 15-20 мин. долю тщательно выдаивали Проводили внутривенное введение ок-ситоцина перед сдаиванием в дозе 3-5 мл (15-20 ЕД) в +0-50 мл 40% глюкозы; при необходимости введение повторяли через 30-40 мин.; затем интрацистер-нально вводили (взамен антибиотиков) по 20 мл теплого 1%-яого водного раствора диоксидина 3-5 кратно с интервалом S-12 ч; 2-3 разав сутки производили аппликации озокерита, между аппликациями озокерита кожу сосков вымени смазывали 10%-нок ихтиоловой мазью. Внутривенно вводили 10% раствор хлористого кальция с 40%-ной глюкозой а лозе 150-200 мл однократно в течение 3-5 суток и 10 мл 20%-ного кофеина

Комплексный метод лечения требует необходимости изоляции животного в отдельное помещение, перевод ее с машвиною доения на ручное, чго позволяет снимать механичесхие раздражители, создает необходимый покой, а молочная железа своевременно освобождается от скапливающегося экссудата, в котором содержатся патогенные микроорганизмы н их токсины - мощные биологические раздражители.

Блокада нервов вымени снимает нервные возбуждения, уменьшает межтканевое давление, улучшает отток продуктов воспаления, и приток продуктов питании и тем самым наступает нормализация обменного процесса, и быстрее наступает выздоровление.

Таб.иша Терапевтическая эффективность препаратов при маотиге с клиничесмгми пртнатт

Препараты Серозный Катаральный ГнаЙка-катарзпький

подвергнуто дечсгаао коров выздоровело подвергнуто лечгмао коров лечгдаю коря* выздоровело

корон т хоров % короз %

Псккщсшин со сгрептошгцнном 10 4 40 10 5 50 10 4 40

Мастнсан-А 10 3 30 10 4 40 10 4 40

Пекэрснн-А 10 6 60 10 5 50 10 5 50

Дкфурои-А 10 5 50 10 6 60 10 5 50

Днфурол-Б 10 6 60 10 5 50 10 4 40

Масп одад 10 4 40 10 5 50 10 4 40

Мастнцлд ло 4 40 10 6' 60 ^ 10 5 50

Лгагиигга прополнса ¡и ),ислег блаклда 10 70 10 б 60 10 6 60

Мастисан-Е 10 5 50 10 б ¿0 10 б 60

Мастнсая-Е и биожала 10 7 70 10 8 30 10 7 70

р-р днаксйдина 10 6 60 10 5 50 10 4 40

1 ? о р-р днокскдкна и блокада 10 7 70 16' 6 60 10 5 50

Комплексный и ЯТ10ХСЯДКН 10 9 90 10 & 30 10 7 70

Комплексный 10 3 во 10 8 80 10 7 70

Молочная железа при мастите нуждается а защите от переохлаждения. Действие тепла на вымя при аппликации озокерита {45-46°С) вызывает его гиперемию, актиьизирует обмен в нем л нейтрализацию продуктов токсикоза, в очаге, воспаления при расширения сосудов улучшается всасываемость, отток, тепло в периферической крови вызывает местный лейкоцитоз, все это вместе приводит к более быстрому выздоровлению коровы.

Введение в пораженную четзсрть вымени 2-3 кратно 10-20 мл 1%-иого зодпого раствора днокендина с интервалом 8-12 ч обуславливает в ней антимикробные и умеренно раздражающие действия, что активизирует обмен и снимает интоксикацию бактериальной этиологии. Массаж положительно воздействует на миоэпителиальные клетки вымени, на механо- и бпрорецепторы ею, что способствует осаооождению вымени от экссудата.

Внутривенное введение растаора 40%-иой глюкозы, хлорида кальция, кофеина повышает резистентность всего организма, активизирует сердечнососудистую систему, нейтрализует токсины, выделяемые .микроорганизмами. На фоне такого комплекса лечения, диетотерапия ловышае: ¿бтую рулете:;;-иость организма а локальную резистентность вымен» коровы.

Полученные данные (табл. 4) показывают, что использование ПЦного водного раствора диокендниа в комплексе с другими средствами,., не только значительно эффективнее применения препарата «Мастнсан-Е» при лечении лоров с хлляическнмн признаками маститов, но ¡1 случаен исключает

Закгерионосатсльстло. Курс комплексною лечения с использованием диоксидам был короче на 2-3 сут.

5.2. Л анаше корой, больных скрытым маститом

Установив диагноз на скрытый мастит я определив чувствительность гш-цеяенной из экссудата вымени микрофлоры к применяемым лечебным препаратам. Сформировали подопытные группы коров н подвергали их лечению согласно наставлению по применению препарата, утвержденною ГУБ Госагро-иромаСССГ, Сформировав группы подопытных хоров, их подвергали акутлер-;ко-|инеколо)пческой диспансеризации, затем переводили и ист изолятор, изменяли рацион кормления, ограничивали водопой, исключили силос, корнеплоды, ¡очные корма.

У опытных и контрольных животных изучили обшне п клинические ¡¡;>к,1-¡ак-.лц. При этом установили, что животные, как опытные, гак и контрольные, тмелн среднюю упитанность, живую массу от 450 до 600 кк возраст колебался )Т 4 до 7 нет. все клинические показателя у них были » предела:; физиолошче-:хон нормы. У коро» опытных и хой1|)0'1ьиых «рули нерол и а еденном препарата ; аОиопшов ;>кссудат из больных четвертей нынепи шателмо еллнвялн я ¡¡дельную посуду. После двукратной обработки сосков 70°-ныа спиртом. и ка-кдую пириженну ю чожерть нымони зиждили очи и ит нреп.чраюв. нкюрсин-Л. ,4нсан-Е, маСтмсаи-А ИЛИ 1%-ный йодный раствор ^иоксидина ш> 10 см дна >аза в сутки с интервалом 12 часов, а пенициллин со прещомлцинои пг< № мс. ЕД в 50 мл 0,5% -нот пово&аима >рм раза сут км с нлюрлллом 8 часол. Толучсннме результаты отражены н гябл.

Таблица 5. Лечение скрытого мастита у коров

Процент излечения

Препарат животных Число коров корок четвертей

вымени

1 группа

Пенэрснл-А Опытная 10 80 85

Масти сан-Е Контрольная 10 70 72

Пенициллин со Контрольная 10+ 40 46

стрептомицином

Ееа лечения Контрольная 10 20 а -

2 группа

11енэрсин-А Опытная 10 90 95

Пепэрснн-А Опытная 10++ 100 100

Мастнсан-Е Контрольная 10 70 74

Мзстнсан-Е Контрольная 10" 80 82

Мастисан-А Контр ольная 10 40 44

3 группа

Пензрсин-А Опытная 10 90 92

Мастисан-Е Контрольная 10 70 70

Мастисаи-А Контрольная 10* 40 43

4 группа

1$4 диокендин Опытная 20 90 96

1% диокендин Опытная 30 96,6 98,8

Мастисан-Е Контрольная 20 80 85,5

5 группа

1% ДИОКСИД 1!Н Опытная 40 87,5 88,9

1% диокендин Опытная 20 94 96,8

|М астисаи-Е Контрольная 26 76,9 78,6

Примечание к таблице: * • без учета антнбиотнкограммы микроорганизмов; ++ - препарат был введен четырехкратно, а 1%-ный водный раствор диок-сидивав первой опытной группе был введен двукратно, во второй - трехкратно с интервалом 12 ч.

Материалы табл. 5 показывают, что лечение коров, больных скрытым маститом, осуществляемое антибиотиками и антибиотикосодержащими проти-вомаститными препаратами недостаточно элективно, так как к ним происходит быстрое привыкание микроорганизмов. Поэтому нами разработан и усовершенствован метод лечения коров, больных скрытым маститом с использованием неантибиотического препарата - 1%-иого водного раствора диохсидина, позволяющий (как видно из табл. 5) не только обеспечить высокий эффект (96,8%) лечения и надежно профилактирует бактерионосительство у изле-

чеиных коров. Широкий антнмихробный спектр действия 1%-ного водного раствора диоксидина позволяет рекомендовать его для широкого применения в целях лечения больных маститом коров.

В 1988-89 гг. нами совместно с Ю.А. Козыревым (ВГНКИ ветеринарных препаратов МСХ СССР) и А.Г. Миляновским (В1ШИВС ГУВ МСХ СССР) было организовано и проведеяо широкое производственное испытание препарата - ]%-ного водного раствора двоксидииа для лечения мастита и выявления эффективности препарата в условиях производства. С этой целью препарат производился Калужским химикофармацевтическии заводом (во флаконах и ампулах), Калининской встеринарно-производетвенной лаборатории (во флаконах) и Узбекским биокомбинатом (во флаконах, 7 млн. 251 тыс. доз).

Широкие производственные испытания препарата контролировалось в 14 областях РСФСР, в 3 областях УССР, в двух районах ЛССР.

В целом, с учетом авторских и соавторских апробаций в 320 случаях маститов, в процессе отработки доз при различных формах болезни и применение препарата в комплексной терапди клинических форм (1982-86 гг.) и анализ результатов терапевтического использования препарата в контролируемых и неконтролируемых опытах по актам, представленным ветеринарными специалистами 23 совхозов, 43 колхозов, 3 ОПХ установлено, что препарат - 1%-ный водный раствор диоксидина использован при терапии маститов в 5046 случаях, в том числе контролируемых опытах - 2840 коров, терапевтический эффект составил 90,5%, в неконтролируемых опытах - в 2206 гол. (87,2%).

В контролируемых опытах лечения 814 случаев клинических маститов, где 1%-ный водный раствор диоксидина использовался в схеме комплексного лечения, взамен антибиотиков, терапевтический эффект составил 72%. На основании проведенной широкой производственной апробации Фармсовет Главного управления ветеринарии Госагропрома СССР (1989) утвердил результаты апробации и 1%-ный водный раствор диоксидина был принят к внедрению в ветеринарную практику (приказ №66 от 25.06.90 г, ло Госкомиссии СМ СССР но продовольствию и закупкам).

5.3. Профилактика мастита у коров. Для изучения роли ветеринарно-санитарпых мероприятий и профилактике мастита у коров и эффективности их применения на молочных фермах и промышленных комплексах были выполнены нами преддоильная санитарная обработка сосков вымени у 40 подопытных коров 0,5%-ным раствором дезмола с применением индивидуальных тканевых и бумажных салфеток, дезинфекция доильных стаканов перед каждым доением коров 0,.5%-ным раствором дезмола, антисептическая обпаботка сосков посп» доения дезинфицирующими эмульсиями и с целью профилактики послеродовых маститов у коров, нами на достаточном материале испытано и предложено лечение коров, больных маститом в начале сухостойного содержания и профилактики бактерионосительства с использованием не антибиотического препарата - 1%-ного водного раствора диоксидина.

5.3.1. Обработка заключалась в следующем. После обтирания вымени полотенцем, смоченным теплой водой, соски подопытных коров дезинфицировали 0,5%-ным раствором дезмола (45°С), а соски контрольных животных не дс-

зинфицировали. При изучении бактериальной обсененевности и коли-титраустановили, что дезинфекция сосков вымени позволяет снизить обсемекешюсть микрофлорой по сравнению с контролем а 176-182 раза. Коли-титр в смывах с сосков вымени подопытных коров был>1, а с коптрояьных- 0,01-0,001.

Применение одноразовых тканевых а бумажных салфеток позволяет снизить количество микробов в 48,6-60,5 раза соответственно; коли-тнтр в иод-опытных группа был равен 1, а в контрольных - 0,01-0,001.

Для профилактики передачи иифекцин от одной хоровы к другой в процессе доения проводили опыты по дезинфекции доильпых стакапов 0,5%-ньш раствором дезмола перед доением каждой коровы в течение 30 дней. Анализ полученных даипых показал, что в опытной группе инфицированное«, секрета вымели снизилась с 40 до 27,9%, а в контрольной - увеличивалась с 42,2 до 48,8%. Результаты этою опыта послужили основанием для его внедрешш на ряде молочных комплектвв.

В производственных условиях с целью профилактики мастита испытывали действие эмульсий на кожу сосков вымени 30 подопытных коров в течение 90 дней. Клинические исследования показали, что соски обработанные контрольной и обеими экспериментальными эмульсиями, г течение опыта были эластичными, безраздражений. Маститы были предупреждены в опытной группе в 14,5% случаев. В течение опыта снизилось бактериальное обсеменение кожи сосков вымени у подопытных животных в среднем в 12,8 раза по сравнению с контрольными, коли-титр в опытных группах 'был >1и 1, а в контрольных -0,1-0,01. Результаты этих исследований позволили внедрить в производство второй вариант эмульсии, которая пе расслаивается в процессе длительного хранения н пе обладает специфическим запахом.

С целью профилактики послеродовых маститов у коров нами на достаточном материале испытано и предложено лечение коров, больных маститом в начале сухостойного содержания и профилактики бактерионосительства с использованием пеаитибиотнческото препарата - 1%-ного водного раствора диок-сидина. Широкий слектр антибактериального действия препарата позволил» резко сократить (до 3-4%) послеродовых маститов и бактерионосительство у излеченных коров, а также обеспечил получение высокосортного молока. Поэтому, рекомендуем лечить больных маститом коров в начале сухостойного со-держация и профилактировать бактерионосительство с использованием 1%-ного водною раствора диоксидина согласно разработанному нами и утвержденному ГУВ Госагролрома СССР (1989), наставлению по его применению.

Таким образом, предложенные и испытанные иами меры профилактики мастита у коров, внедрение которых будет способствовать повышению эффективности лечения больных животных за счет антимикробной активности препарата и активизации факторов защиты молочной железы и организм» животного, а также своевременно профилактировать возникновение и развитие мастита и обеспечивают получение и сдачу высокосортного молока. Поэтому они вошли в «Санитарные и ветеринарные правила для молочных ферм колхозов, совхозов и подсобных хозяйств» и «Санитарные правила по уходу за доильны-

ии установками и молочной посудой, Контролю их санитарного состояния и са-яктарного качества молока», утвержденные Госагропроиом СССР (19X6).

Разработаны и внедрены в производство микробиологические критерии получения высокосортного молока (ГОСТ 13264-88 «Молоко коровье. Требования при закупках»)

Определение экономического ущерба, причиняемого маститом коров: а) экономическая эффективность диагностики и лечеиня скрытого мастита у коров. Цель наших исследований - выяснить экономическую эффективность ранней диагностики и лечения мастита у коров. В опытных и контрольных 1руипах животных учитывали количество и качество молочной продуктивности коров, затраты времени на диагностику и лечение, приобретение диагностических и лечебных средств, л 1йкке расходы, связанные с оплатой ветеринарных специалистов при оказании лечебной помощи, проведение бактериологических исследований с учетом других прямых затрат я накладных расходов.

В хозяйстве 1 ии организовали первую серию опытов по определению тотерь молочной продуктивности коров, больных скрытым маститой, наличие «второго устанавливали массовыми диагностическими исследованиями. Из шела положительно реагирующих на мастлтные тесты коров-аналогов сформировали одну опытную и две контрольные группы животных по 10 голов а саждой. В опытной группе были больные коровы, которых лечили, в контроль-юи группе также находились больные животные, но лечебную помощь ям не жазывали, во 2 контрольной содержали клинически здоровых. ■ - 1 В качестве лечебных средств применяли внутримышечно пенициллин со трептомицином по 800000-1000000 БД и эти же препараты внутривыменно но 10-100000 ЕД два раза в сутки на 0,5% растворе новокаина, атахже мастисаиы-специальную эмульсию для антисептической обработки сосков вымени юсле доении и озокерит. Курс лечения больных коров опытных групп составил ри дня. После выздоровления на .5-7-й, 1-5-20-Й и 30-40 дни проводили сравни-ельную оценку удоя подопытных животных до н после болезни.

Анализ полученных данных показал, что потери молочной продуктивпо-ти во время болезии составляли 1-4 кг (а среднем 3,2 кг), после лечения через -7.дн.-3;5 кг, 15-20дн.-0,5 кг и 30-40 дн.-0,3 кг! В1 контрольной группе снижс-ие молочной продуктивности во все сроки обследования в среднем составило кг. Потери молочной продуктивности па бдну корову за 40 дней достигали в пытно'й группе 25 кг; а а 1 контрольной - 57 кг. Средний удой подопытных оров был ниже йа 0,3 кг, чей у здоровых в контрольной группе.

Валовой Надой короны опытной группы достигал 628 кг на сумму 17,84 IV' контрольной соответственного кг и 16,8 р. Затраты на лечение коров, о льны х маститом на ранней стадии, равнялись 26 р, и предотвращенный щерб составил 190;4 р.; экономическая эффективность - 164,4 р., или 16,4 р.;иа дно животное. Эффективность на 1 р. затрат определяли отношением суммы кономическоги' эффекта к затратам на лечение/Она составила.¡5,3,4 р. (цены 986 г.) .■ I ;;

Вторую серию опытов мы проводили в хозяйстве 2, где создали две по; опытные н две контрольные группы коров-аналогов, по 10 голов в каждой. В группу включили животных, давших па династии положительную реакцию i два креста, во 2 на три креста, но имеющих отрицательную реакцию на проС отстаивания при отсутствии патогенной микрофлоры в секрете вымени, опытных группах взамеи двухтактного ввели трехтактный режим доения и у тановилн строгий контроль, исключали холостое доение. После установлен» нового режима проверяли парепхниное молоко 5%-ным раствором днмастина пробой отстаивания.

Полученные данные похазывают, что потери молочпой продуктивности 1 опытном группе составили в среднем 0,4 кг, 1 контрольной - 0,8 и 0,8-1,2 к Потерн молочной продуктвввости аа одну корову в первых опытной a koi трольной группах достигали 1,7 и 23 кг соответственно, во вторых - 4,9 и 30 кг соответственно. У хоров первых опытной п контрольной групп валовой н; дой на 30 дней лактации был равен 41S,3 хг (117,12 р.) и 405 ,:г (113,4 р.) соо встствешю, вторых групп-415,1 кг (116,23 р.) и 390,1 кг (109,23 р.). Затраты i диагностические исследования не превышали 1,8 р. Экономическая эффект ность в расчете на одно животное в данном случае составила 3,54 р. на р. затр! 19,66 р.;

б) экономическая эффективность диагностики и лечения при клииич( ских формах мастита у коров. На основании диагностических исследований ряде обследованных хозяйств были сформированы по принципу аналогов опытных и 5 контрольных групп, по 10 голов в каждой. Во всех хозяйствах ж и вотные имели одинаковые условия кормления и содержания. В опытных груг пах применяли различные схемы лечения клинических фори маститов. Срок наблюдения (включая обследование) составили около 60 дней, в том числе 4 дней после клинического выздоровления.

Мы применяли дифференцированное лечение и определяли его стон мость в зависимости от формы мастита. Затраты на лечение на одно больно животное составили: при серозном мастите -3,6 р., катаральном - 6,46 р., фцб ринозном - 17,35 р., катарально-гнойном и гнойном - 13,65 р., в среднем 10,9 р. Потери молока в период болезни и после клинического выздоровления в и чеиие 40 дней в расчете на одну корову в среднем составили 226.8S кг, отсюв коэффициент экономического ущерба был равен 63,52 р. Фактический эконс ыический ущерб в конце лечения и наблюдений составил 264,6 р., затраты и лечение 765,8 р. Исходя из этих данных, овределяли предотвращенный эконо мичеекий ущерб, который систавил4Ш,3 р., или 59,74 р. на одну корову. Про веденные лечебные мероприятия эффективны. Они предотвратили экономичс ский ущерб в расчете на одну леченую корову 59,74 р., экономический эффек составил 48,8 р., экономическая эффективность на 1 рубль затрат равнялас 4,46 р.

Профилактику маститов проводили во всех 20 обследованных хозяйства (М--9505). При расчетах эффективности мероприятий иснильаивали нотенци альный (возможный) коэффициент заболеваемости (Кз), равный 2,03, коэффи циент экономического ущ ерба (Ку) в расчете на одно животиое - 63,52 р., фа*

меский экономический ущерб (Уф) - 1270,4 р., затраты (За) на проведение эофилактихи маститов с учетом диагностических исследований, мойки и де-шфехции доильного оборудования, организации активного моциона, преддо-иьдой антисептической обработка сосков вымени и др. - 4600 р. Нредотяра-енный экономический ущерб определяли, исходя из данных по формуле: у=М»Кз-Уф; Ду=9505«2,03-1279,4= 12244357.53 р.; Эв=Пу-Зв = 1224357,53-¡600=1178757,53 р„ Эр=Эп : Зв - 1178757,53 : 45600 + 25,85 р.

Таким образом, система профилактических мер оказалась эффективной, ¡смотря па значительные затраты при се проведении. Б результате экономиче-;пй ущерб предотвращен в расчете на одно животное в размере 128,81 р., зко-шический эффект достиг 124,01 р., экономическая эффективность на 1 рубль трат составила 25,85 р., т.е. в 5,8 раза выше, чем лечение больных животных, езультаты отражены з табл. б.

Таблица 6. Экономический ущгрб от маститов и экономическая эффективность противомаститиых мероприятий (на 1 корозу)

Форма мастита Ущерб, р. Экономический эффект. Р- ■Эффект н» 1 руб. ¡атрят, р.

ф истический предотвращенный

С клиническим проявлением 264,6 9,74 48,3 Г 4,46

Со скрытый течением - 19,04 16.44 | 6,32

Раздражение т,5 77 * | -1,54 1

Профилактика мастита 1270,-1 17,3,81 1 124.01 | г.5,Я 5

ВЫВОДЫ

1. В хозяйствах Московской, Горьковсхой. Смоленской .ч Куйбышевской ластей Российской Федерации при одноразовой исследовании установлено, о клинически выраженный мастит регистрируется 1,9%, скрытый и раздразнив вымени - 20,1%. Высокий уровень заболеваемости коров маститом наго дали в стойловый период (32,3%) и в период запуска (44,2%); после отела и 1ервыи месяц лактации (38,8%).

2. Заболеваемость коров маститом на фермах составляет 10,9% на ком-сксах - 20,4%. Скрытый мастит на комплексах - 16,6% и па фермах - 9,6%.

3. В 80,6% случаев на комплексах и 78,2% - на фермах мастит имел бак-¡шзльную этиологию, обусловленную кокковой микрофлорой (стафилококки 51,2-49,9%, стрептококки - 39,9-40,2%, .а ассоциации стафилококков со эептокоххами - 5,0-7,0%) и копиформиые бакт ерии 1,2-1.6% у 19,4% и 21,8% ответственно, мастит протекал без кокковой-микрофлоры.

4. Предложенный способ определения патогенных свойств стафилококков по величине зоны их гемолитической активности сокращает на 65-70% объем диагностической работы, расход питательных сред, лабораторной посуды и рабочего времени, а также совпадает с плазмокоагулазной активностью в 98100% случаев.

5. Усовершенствованная методика реакции плазм о коагуляции стафило-' кокков позволяет использовать для плазмокоагуляции 3-5 часовые бульонные культуры, вместо 20-24 часовых, что в 4-5 раз сокращ ает время исследования.

6. ДНК-азная активность стафилококков при ширине зоны нросветлення 4 мм и более является положительной, менее 4 мм - сомнительной, при ее отсутствии отрицательной.

Усовершенствованная техника определения ДНК-азной активности стафилококков позволяет на одну чашку Петри наносить 60-90 испытуемых культур вместо сократить на 70-75% объем работы, питательных сред и лабораторной посуды, а также снизить расход натриевой соли ДНК.

7. Стафилококки, выделяемые из экссудата вымени, больных маститом коров типировались фагами крупного рогатою скота, полученные из Англии 94-96% культур, в том числе фагами 102, 107 и 117 лизпровались соответственно 60,8%, 57,5% и 52,9% стафилококков.

Выделенный новый фаг №95 из потлпируемых стафилококков позволяет увеличить число типируемых стафилококков до 98,5%.

S. Предложенная схема иидпкации стафилококков из экссудата вымени коров и их идентификация позволяет сократить сроки бактериологических доследований до трех суток (вместо пяти), что в свою очередь позволяет ускорить начало проведения лечебных мероприятий.

9. Усовершенствованная техника постановки КАМП-теста для-дифференциации агалактийното стрептококка (группа Б) от других серологических групп в 10 раз сокращает расход питательной среды, лабораторной посуды н затрат рабочего времени.

10. На протяжении 20-ти последних лет наблюдается значительное повышение устойчивости кокковой микрофлоры вымени больных маститом к антибиотикам и химяотерапевтическим препаратам:

- число штаммов стафилококков, резистентных и малочувствительных к пенициллину составило 32,4%, стрептомицину -47,6%, тетрациклину - 59,6% и окситетрациклииу - 54,4% и только 3,2% к 1% водному раствору диоксидина;

- число штаммов стрептококков, резистентных и малочувствительных к пенициллину составило 24.6%, стрептомицину - 54,7%, тетрациклину - 59,5% и окситетрациклииу - 50%, к 1% водному раствору диоксидина - 1,9%;

- число штаммов колифорииых бактерий, резистентных и малочувствительных к иениниллину составило 79,4%, эритротоммпииу - 73.6%, тетрациклину - 61,2%, хлортетерациклину - 57.3%, линименту прополиса - 20% и 1% диоксидину - 11.2%

11. Применение к 1% водного раствора диоксидина в комплексе с другими средствами для лечения коров, больных маститом с клиническими признаками, нозволилеполучить терапевтический эффект от.70 до 90% случаев а ¡ааи-

мостя от формы воспаления. Самый высокий процент излечения больных (вотных отмечали при серозной и катаральной формах мастита, соответст-нно, 90 и 80% случаев. При лечении коров, больных скрытым маститом зы-оровело - 96,8% животных. В 98-99% случаев исключает б актер и о но сите ль-ао.

12. Антисептическая обработка сосков вымени коров 0,5%-ным раство-м дезмола перед доением с последующим обсушпваннем тканевыми или бу-¡жными салфетками снижают бактериальную обсемепенность кожи, соответ-5епно, в 176-182 раза, дезинфекция доильных стаканов перед доением каждой ровы уменьшает инфицированиость секрета вымепи с 40% до 27,9%. Смазы-ние соскон вымени после доения антисептической эмульсией предупреждает . .стит в 14,5% случаев. 1Солн-тнтр молока, смывов с сосков и доильных стака-

в в опытных группах коров > 1 и 1, ав контроле - 0,1 - 0,01.

13. На основании экспериментальных исследований разработаны п сне-ены в производство в стране микробиологические критерии получения высо-сортного молока (ГОСТ 13264-38 «Молоко коровье. Требования при закупка).

14. Экономический эффект прп использовании разработанных нами медов диагностики и лечении коров, больных ластят см, г расчете на одно житное составил 48,3 р., а на 1 р. затрат получено прибыли 19,66 р. (в ценах 85 г.).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для подтверждения диагноза на скрытый мастит у коров применять авершенс1вованную пробу отстаивания (утв. МСХ СССР, 1983 «Рекомеада-и по борьбе с маститом коров»).

2. Идентификацию стафилококков проводить с использованием нового ждународного набора типовых стафилококковых бактериофагов, выделен-х из стафилококков, полученных от коров согласно утвержденных «Методи-:кнх указаний по его применении...», утв. ГУБ МСХ СССР, 1976.

3. Для дифференциации стафилококков применять усовершенствованные: Л 5ду для стафилококкового фагаи реакцию плазиокоатуляции.

4. Для определения патогенностн стафилококков по их гемолитеческой гивности использовать 7-3%-ный кровяной МПА и отбор колонии нронзво-гь согласно утвержденных методических указаний ГУВ МСХиП СССР, 1991.

5. Определение дезокенрибонуклеазной (ДНК-азной) активности стафи-коккои проводить согласно усовершенствованной методики, утвержденной В Госагропрома СССР, 1988.

6. Для идентификации патогенных стафилококков от ненатогенных в ла-раторной практике использовать схему индикации стафилококков, одобрен-н ГУВ Госатропрома СССР. 1987.

7. Для идентификации агалактийного стрептококка группа В от других ¡ологических групп проводить КАМП-тест, согласно изменения и дополне-я » п.2.3.9.5 в «Методических указаниях по бактериологическому исследова-

пию молока и секрета вымени коров», утв. ГУВ Госкомиссии ОМ СССР по продовольствию и закупка», 199.0, № 042-12.

8. Для лечения коров, больных маститом, взамен антибиотиков, применять препарат - 1%-ный водный раствор дяксядина согласно наставлению по его применению, утвержденному ГУВ Госагропрома СССР (1989).

9. С целью профилактики послеродовых маститов и бактерионосительства в период запуска я в начале сухостойного содержания проводить исслсдоза-ние на скрытый мастит и бактерионосительство всех коров с последующим ин-трацистсрнальным введением больным и бактерионосителям антимикробных препаратов с учетом чувствительности к ним микрофлоры вымени.

10. С целью профилактики мастита и повышения саиатар«о1.-а иачеегка молока использовать на фермах преддонльную антисептическую обработку сосков вымени коров 0,5% раствором дез«сла,'с применением индивидуальных тканевых или одноразовых бумажных салфеток И'для предупреждения передачи ифехции от одной коровы к другой в процессе доения проводить дезинфекцию доильных стаканов перед доением каждой коровы.

11. Организовать па молочных фермах регулярную антисептическую обработку сосков вымени коров я производить охлаждение молока а потоке (на комплексах) согласно утвержденных ветерииарно-санитарных .мероприятий, внедренных в производство Госагропромои СССР (1986)

12. На молочных фермах и промышленных комплексах использовать микробиологические критерии получения высокосортного молока (ГОСТ 13264-88 «Молоко коровье. Требования яри закупках»).

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ А, СТАТЬИ:

1. Валковой Й.И., Гасанов П.Г. Опыт получения высокосортного молока на молочных комплексах // Проблемы повышения ветер пиар и о -сапитарпого качества» биологической ценности продуктов питания животного происхождения и животноводческого сырья. - Тез.докл.Всесоюзн.коиф. ВАСХЙИЛ. - г. Горький, 9-12 июня 1976. - С.108-109.

2. Гасими П.Г. Сравнительное изучение чувствительности стафилококков к действию фагов // Тр.ШШИВС.-тои 56.-С.2-29., 1976.

3. Гасанов Н.Г. Определение изучение чувствительности вымени к антибиотикам ,7 Тр.ВШШВС, 1977.-том57.-С.30-34.'

4. Г асаной И.Г. Фаютипы патогенных стафилококков при маститах. II В етер к пар и я. -19 7 7. -№ 2.-С. 75 - 76.

5. Козыре» 10. Д., Валковой И.И.. Гасаиов Н.Г. Клеточный состав паренхим наго молока коров - бактерионосителей П Ветеринар и.-1977.-j453.-C.77-' 79.

6. Балковой И.И., Гасанов П.Г. Санитарная оценка качества молока на молочных комплексах И Сельский механизатор. -1977.-№1.-С.28.

7. Буткус К.Д., Бугрова В.И., Гасанов Н.Г. Тины энтеротоксинов стафилококков, выделенных из молока коров //IV Всесоюзн.науч.кон.Лит.филиал

1НИИ маслодельн. и сыродельной промыт-та, 1977.-Новые исследования по овышепию качества и эффективности производства молочных продуктов.-layuac, 15,77.-0.176-177.

S. Гасанов Н.Г. Типовые стафилококковые бактериофаги // Ветерина-ия. -№3.~ 197S. - С.йб.

9. Буткус К.Д., Бугрова В.И., Гасанов Н.Г. Типы эвтсротокспнов ста-ндококков, выделенных из молока коров Н Вопросы питания АМН СССР. -978, -№3,- С.86-88.

10. Гасанов Н.Г., Буткус К.Д, Определение чувствительности иатоген-ых стафилококков к антибиотикам // Ветеринария. 1979. - №12. - С.70-71.

11. Гасанов Н.Г. Профпяактиха послеродового мастита у коров // Мо • очное п мясное скотоводство. •• 1980. - №1. - С.36-33.

12. Гасанов 11.Г. Изучение фагот'.шов стафилококков, зыделенвых от зров /¿'Бетсрпнэрия. - 1980. • Я»1. - С.65-66.

13. Гасанов И.Г.;Д)1иаиихаэаболмаппя хоров субклиикчсскля мастя-)м //Ветеринария. - 1980. -№10.- С.45-46.

14. Гасанов Н.Г. . Изучение типов фага стафилококков, выдел с л пых ■хретавымеа'й коров //ЖМЭИ АМН СССР. 1981. - № 1. С. 107-108.

15. Гасанов Н.Г. Сравнительная эффективность применения антибиозов пролонгированного действия при субклнническнх маститах у коров з пе-мд запуска а сухостоя //Тр. МЕЛ. - 1981. J&117. С.94-97.

16. Гасанов Н.Г. Конформным мисшг // Се льекоs хи Julian а за рубе-ом. - 19S1.-№8.-С.48-51.

17. Гасанов Н.Г. Сравнительная эффективность некоторых препаратов Ж лечении мастита у коров // Вопросы ветеринарной фармации ¡1 фармада ¡о-шин, -Тезисы докл. Всесоюзной научио-ирактической хоиф. к Рига - 1932. -42-f4.

IS. Шайхамаиов М.Х.» Гасанов Н.Г. Экономическая эффективность шлей диагностики ;,к;ст«га у хоров //Всстпих с.-х. науки ВЛСХНИЛ. - ¡982. -6.-С.87-91.

19. Гасанов И.Г. Роль колиформиых бактерий в л поло in и мастита /У >. МВА. - 1982. - юм 129. - С.69-71.

20. Гасанои Н.Г.. Лкначук И.Л.. Ойфуллип С.А. Ярофллаятнки маету коров в послеродовом в«риоде//Тр. ?ЛВА. 1032. юа 129. С.65-63.

21. Гасанов Н.Г. Фаюшиирование сгафлликиккоа // Ucicpauapuji. 83. - №9. - С.72.

22. Гасанои Н.Г. Апробация стяфилокохховых бактериофагов крупного .гаю и» скота// М. - МВА. - леи, н В1ШИТЗИСХ Госагронрома. - 1984. -12.

23. Гасанои Н.Г. Роль ¡иалактинною стрептококка я этиологии мастита iOpuB //М. - МВД. ■ деп. в ШШИТЭИСХ Госагронрома. - 1985. - С.10.

24. Гасанов II.Г., Козырев 10.Л., М иляиовский А.Г Речультаты изуче-и бактерицидной эффективности диокендина к. возбудителям маститов // М. ВА. - дсн. v ВНИИТЭИСХ Госягаонрома. - 1985. - С.J6.

25. Шайхаманов М.Х., Гасанов Н.Г., Козырев Ю.Л. Предупрежден экономического ущерба при клинических формах мастптау коров // Вестник i х. науки ВАСХНИЛ. - 1985. -№9. - С.105-109.

26. Гасанов Н.Г. Гесты патогепности и фаготкпы стафилококков секр та вымени коров // М. -.МВА. - ден. в ВНЙИТЭИСХ Госагропрома. - 1986. С.8.

27. Гасанов Н.Г., Козырев Ю.Л., Миляновский А.Г. Терапевтичесх эффективность диокездипз пра лечении мастита у коров // Докла; ВАСХНИЛ. 1986. - №4. С.33-35.

28. Гасанов 11.1'., Козырев 10. А. Использование водного раствора дно сиданав терапии мастита у коров // Тез. докл. Всесоюзи. хонф. г. Воронеж.

1986. - ч.2. - С.26-27.

29. Гасанов Н.Г. Диагностика ранней стадии мастита у коров с при* пением новою препарата «Универсал;; // М. - МВА. деп. в ВНИИТЭШ Госагропрома. - 3987. - С.7.

30. Гасанов Н.Г, Роль ветеринарно-саннтарных мероприятий в npoi} лакiикс иасгятоз у хоров // М. - МВА. - деп. и ВНИИТЭИСХ Госагропрома

1937. - С.8.

31. Гасаиов Н.Г. Новое в борьбе с маститами коров // М. - МВА. - д в ВНИИТЭИСХ Госагропрома. - 1986. - С.7.

32. Гасанов Н.Г. Фагентирование стафилококков // Ветеринария.

1987. - №6. - С.32.

33. Гасанов Н.Г. Биологические свойства стафилококков, выделенп аз экссудата вымени коров // Сельскохозяйственная биология ВАСХНИЛ 19S8. -К»4. - С.131-132.

34. Гасанов Н.Г. Изучение гемолитической, коагулазной и ДНК-азг активности стафилококков /УМ. - МВА. ден. з ВНЙИТЭИСХ Госагропром!

1938. - С.8.

35. Гасанов Н.Г. Лечение скрытых маститов у коров // М. - МВА деп. в ВНИИТЭИСХ Госагропрома - 1988, - СЛ.

36. Якубов М.Г., Козырев 10.А., Гасанов Н.Г. Цитологический к троль электроепшуляции вымени малопродуктивных первотелок в проце доения //Me:кауз. сб. научи, тр. г. Белгород. - 1988. - С.12-16.

37. Гасанов Н.Г., Козырев Ю.А., Миляновский А.Г. Изучении icpa.ii тической эффективности диоксидппа up и некоторых формах маститов хоро Межвуз. сб. научи, тр. г. Белгород. - 1988. - С.17-22.

38. Гасанов Н.Г. ДНК-изпая активность стафилококков при лаборат ной диагностике маститов// Ветеринария. - 1990. -№2.-€.71.

39. Гасанои Н.Г. Получение качественного молока ни промыт лет

фермах и комплексах // Молочное я мясное скотоводство. - 1990. - №3. - С.

< 1 1.

40. Гасанов Н.Г. Профилактика мастита v коров // М., ВДНХ СС 1990.-С.6.

41. : Гасаиов Н.Г. Профилакшка иаспгтду корой л получение выа качественного молока У/М., МВА. - Межвуз. с^, науч. гр, ■• ДУ90. - С.100-10«

42. Гасанов И.Г. -Печение мастита у корол с применением дноксидина // М..МПА -Межиут. сб иауч. тр. 1990. С.105-110.

43. Козырев Ю.Л., Гас&пов II.Г. Модифицированное определение ДНК-ячной активности стафилококков // Тез. докл. научи, коиф. «Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов». М, Ш'НКИ ветеринпрных препаратов. - 1991. - C.J46-148.

44. Козырев 10.Л., Гпсаноп Н.Г. Результаты терапии коров при мпетите 1%-пым раствором дпокгиднна // Тез. докл. 1'сссоюзн. копф М., ВГШСН ветеринарных препаратов. - 1991. - С.243-24 5.

45. Гпсппов Н.Г. Изменения и дополнении к методическим указаниям по бактериологическому исследованию молохя //Ветеринария. - J992. - №4. -С.61.

46. Гасанов Н.Г Усовгршг иствованние лабораторные методы диагностики ияетнта стафилококковой этнологии у коров //М., МВЛ. - Межвуз. сб. ияуч. тр. - Диатностнка, терапия и профилактика пкушерско-гннехолотичесхой патологии у животных. -1994. С.92-96.

47. Шайхаманов М.Х., Гасанов Н.Г., Козырев 10.А,. Гусейнов Э.М. Эффективность лечения больных маститом коров с применением диоксидииа// M., МВА. - Межвуз. сб. науч. тр. - Диагностика, терапия к профилактика аку-шерско-гинеколот ичесхой патологии у животных.- 1994. - С.123-126.

48. Гасанов Н.Г. Усовершенствованные бактериологические исследования на маститы //Материалы Всероссийской научной и учебно-иетодичсской конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. - г. Воронеж. - 1994. - С.220-221.

П. ИЗОБРЕТЕНИЕ

1. «Препарат для дезинфекции сосков вымени» // Авт. свид, №556808 (СССР). 1977. С,2 (в сопи i.).

15. РАЦИОНАЛИЗАТОРСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Способ модификации определения ДНК-азной активности стафилококкои. 1988. - № 439-1 1/1337-53. С.6.

2. Способ модификации среды л посева при дифференциации ai ялак-тчйного стрептококка в КАМН-тест. 1989. - № 439-1 1/1898-85 (в соавт )

3. Способ лечения Киров, больных субклиннческими маститами путем интрпцис1српаям1ых инстилляний 1%-ю «одною раствора диоксидииа. - 1986.

4. Петля для фиксации комолых коров и плодом при цитологических родах. - 1988. - № 109. - С.б.

5. Способ определения miroi синие i и стафилококков по их /сиолит-ческой акгип Hoci и. - 1993. - № 181. - С. 6.

За к. 3X6 - 99 г Тир. 100 экз. Объем ~ 2 п. л.

Типография Воронежскою государственного аграрного университета имени К. Д. Глинки 3940X7. г. Воронок, ул. Мичурина, 1