Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Разработка и модификация приборных методов определения безопасности объектов ветеринарно-санитарного контроля
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 16.00.06
Оглавление диссертации Орлов, Александр Владимирович :: 2001 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1 .Биотестирование объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля.
1.2. Использование методов генной диагностики для индикации и идентификации микроорганизмов.
1.3. Приборное обеспечение методов биотестирования и определения микробной контаминации.
2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Цель и задачи исследований.
2.2. Объекты и методы исследований.
2.2.1. Методы биотестирования основанные на регистрации поведенческой (хемотоксической) реакции инфузорий.
2.2.2. Метод определения скорости хемотаксиса инфузорий после их предварительной инкубации с исследуемым веществом.
2.2.3. Комбинированный метод биотестирования.
2.2.4. Упрощенный метод биотестирования.
2.2.5. Методы определения безопасности по выживаемости и ростовой реакции.
2.2.6. Методика бактериологического анализа.
2.2.7. Контаминация проб микроорганизмами.
2.2.8. Мечение тритием бактериальных ДНК методом «ник-трансляции» . .49 2.2.9 Мечение биотином ДНК методом «ник-трансляции».
2.2.10. Мечение ДНК методом «рассеянной» затравки.
2.2.11. Получение меченых ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции.
2.2.12. ДНК -гибридизация на мембранных фильтров с ДНК-зондами меченными тритием.
2.2.13. Точечная гибридизация на мембранных фильтрах с ДНК - зондами меченными биотином.
2.2.14. ДНК-гибридизация с использованием тест-набора с ДНК-зондами меченными биотином.
2.2.15. Методика полимеразной цепной реакции.
2.2.16. Статистическая обработка результатов.
2.3. Результаты исследований.
2.3.1. Разработка и модификация автоматизированных систем оценки безопасности объектов ветеринарно-санитарного контроля.
2^11 г у •» г л лгттДтгг/«лтттг/т г»т*т(-ч» г г\ тттп т тг-v"» /-ч отгттт ттг лтт/лггл» г
1 ajjjauwiKa И. т^ДИЦлйгСацлл аоiwivianaJW-puDcirirLDiys. isjnwibivi биотестирования.
2.3.1.2. Модификации методического и программного обеспечения автоматизированных систем индикации и идентификации микроорганизмов на основе генной диагностики.
2.3.2. Приборная реализация методов определения безопасности объектов ветеринарно-санитарного контроля в полевых условиях.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.
Введение диссертации по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Орлов, Александр Владимирович, автореферат
В настоящее время большое значение приобретают проблемы связанные с экологическим благополучием объектов ветеринарно-санитарного контроля (животноводческих объектов, воздуха, воды, почвы, кормов, строительных и полимерных материалов, продукции животноводства). Одними из основных показателей безопасности объектов ветеринарно-санитарного контроля являются общая токсичность и наличие патогенной микрофлоры.
В последние годы, как у нас в стране, так и за рубежом уделяется большое внимание разработке методов и технических средств определения токсичности на основе биотестирования и индикации, идентификации микроорганизмов на основе генной диагностики.
Практическое значение при определении токсического эффекта имеют ускоренные методы биотестирования с использованием инфузорий (тетрахимен и парамеций). Преимуществом использования тест-организмов являются высокая чувствительность, быстрота анализа, его относительная простота и дешевизна. Для реализации методов биотестирования разрабатываются приборы («Биоскрин», «Микротокс», «Биотестер» и другие) (Айвазова JI.E. и др. 1988; Абильманова К.С. и др. 1991; Долгов В.А., 1992; Долгов В.А и др. 1999, 2000).
Другим важным показателем безопасности объектов ветеринарно-санитарного контроля является содержание патогенных микроорганизмов. Наряду с классическими методами микробиологического анализа, в последние годы для индикации и идентификации патогенной микрофлоры стали активно внедряться альтернативные методики на основе иммунологического анализа и генной диагностики. Методы генной диагностики '"(молекулярная гибридизация нуклеиновых кислот и полимеразная цепная реакция) являются высокоспецифичными и чувствительными методами в обнаружении и идентификации микроорганизмов. (Антонов А.С., 1980; Аянот П.К. и др., 1997; Баборенко Е.П. и др. 1997; Шагинян И.А. и др., 1992; Sklar J., 1985; Brenner D., 1986; Thomas E. J. et. al, 1991; Kruger G. et. al, 1992; Kupperveld F.J.M. et. al, 1992).
Метод гибридизации нуклеиновых кислот, основанный на специфическом связывании известной эталонной нуклеотидной последовательности (генного зонда), с комплиментарными нуклеотидными последовательностями ДНК или РНК исследуемых микроорганизмов, применяется для диагностики возбудителей инфекционных заболеваний бактериальной и вирусной этиологии. (Блохина И.Н. и др., 1976; Дерюшева С.Е., 1993; Асеев Н.В. и др., 1994; Орешкова и др., 1995; Горбовицкая М., 1996; Донской Д.И., 1996; Панин А.Н. и др., 1997; Falkow S. et. al, 1982; Bryau R.N. et. al, 1984; Wachsmuth K., 1986; CurialeM.S. et. al, 1990).
В настоящее время, известны высокоспецифичные нуклеотидные последовательности, используемые в качестве генных зондов и сайтов амплификации, позволяющие не только определять видовую принадлежность микроорганизмов в смеси культур без предварительного обогащения, но и дифференцировать токсигенные и нетоксигенные штаммы. (Донской Д.И., 1996; Панин А.Н. и др., 1997; Hill W. et. al, 1983; Hill W. et. al, 1983; Moseley S.L., 1985; Wolf-Watr H., 1987).
Несмотря на определенные достижения в области биотестирования и генной диагностики актуальным является разработка и совершенствование методов пригодных для автоматизированного анализа и приборной реализации в полевых условиях. Автоматизация методов с разработкой компьютеризированных программ проведения исследований и обработки конечного результата сделают эти анализы рутинными, доступными для широкой практики ветеринарии.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка и модификация приборных методов определения безопасности объектов ветеринарно-санитарного контроля"
ВЫВОДЫ
1. На основе турбометрического устройства «Биотестер-Н» и модулей автоматического устройства анализа биологических проб разработан макетный образец автоматизированной системы биотестирования с использованием инфузорий.
2. С использованием тетрахимен разработана модификация метода ускоренного биотестирования водных сред на автоматизированном устройстве «Биоскрин», позволяющая на треть сократить время анализа.
3. Для определения токсичности различных объектов ветеринарно-санитарного контроля разработаны программы проведения автоматизированного анализа и обработки результатов.
4. При проведении испытаний автоматизированных систем на основе «Биоскрина» и «Биотестера-Н» показана сопоставимость результатов анализа, однако система на основе «Биотестера-Н» вследствие конструктивных особенностей, позволяющих использовать экспрессные тест-функции (хемотаксис) и тест-функции роста имеет преимущества в плане ускоренного получения конечного результата и их достоверности.
5. На основе использования группо - и видоспецифичных генных маркеров и ДНК-гибридизации разработаны схемы и программное обеспечение индикации и идентификации возбудителей на автоматизированной системе анализа биологических проб.
6. Разработанные схемы проведения анализа и оценки результатов позволяют сократить время индикации и идентификации, а также оптимизировать использование генных маркеров.
7. Разработан комплект технических средств и тест-систем, позволяющий проводить анализ токсичности и микробной контаминации объектов ветеринарно-санитарного контроля в полевых условиях.
8. На основании результатов исследования разработаны методические указания определения безопасности объектов ветеринарно-санитарного контроля на основе биотестирования и генной диагностики, предназначенные для практического применения.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ
Для использования в практике работы научных и производственных, ветеринарных учреждений и лабораторий могут быть рекомендованы разработанные нами:
Автоматизированные системы с программным обеспечением, методики и тест-системы определения токсичности и групповой и видоспецифической индикации микроорганизмов в объектах ветеринарно-санитарного контроля.
Комплект технических средств и тест-систем для определения токсичности и индикации микроорганизмов в полевых условиях.
Методические указания по использованию инфузорий тетрахимена пириформис в качестве тест-культуры в приборе «Биотестер-2». Утвержденные Департаментом ветеринарии МСХ РФ № 13-7-2/2157 от 16.10.2000 г.
Методические указания по ускоренному определению токсичности продуктов животноводства и кормов. Утвержденные Департаментом ветеринарии МСХ РФ № 13-7-2/2156 от 16.10.2000 г.
Методические указания по индикации энтеробактерий в объектах ветеринарно-санитарного надзора на основе ДНК-гибридизации. Утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП РФ № 13-7-2/12 от 28.03.2000 г.
Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2001 года, Орлов, Александр Владимирович
1. Абильманова К.С., Ирпенина Л.Б., Турехонов Т.М. Экспериментальный метод определения токсичности фенолов // Аналитическая химия объектов окружающей среды. Тез. Докл. СПб Сочи, 1991, ч. 3, с. 205.
2. Айвазава Л.Е., Гроздов А.О., Соколова С.А. и др. Метод биотестирования водных сред с использованием инфузорий // Методы биотестирования вод. Черноголовка, 1988, с. 37-42.
3. Айвазава Л.Е., Гроздов А.О., Старцева А.И., Никоненко Е.М. Оценка токсичности грунтов методом биотестирования //' Физиология и токсикология гидробионтов: Сб. науч. тр. Ярославль, 1988, с. 127-132.
4. Айвазова Л.Е., Соколова С.А., Ткаченко В.Н. Исселование токсичности сточных вод йодобросного производства // Биотестирование природных и сточных вод. М., 1981, с. 51-57.
5. Айвазова Л.Е., Старцева А.И., Цвылев О.П. Метод биотестирования водных сред с использованием одноклеточных водорослей // Методы биотестирования вод: Сб. статей, Черноголовка, 1988, с. 18-21.
6. Андрющинин О.П., Олексиф И.Т. Токсинорезистентность планктонных инфузорий // Всесоюз. конф. по водной токсикологии. Одесса, 1988, с. 97.
7. Антонов B.C. и др. Автоматизированный метод выявления бактериурии // Лабор. дело, 1990, № 4, с. 21-24.
8. Антонов А.С. Молекулярные основы геносистематики. Изд. МГУ, М., 1980.
9. Ю.Асеев Н. В., Светличкин В.В., Астахова О.И. Тест-система для ускоренной индикации и идентификации сальмонелл и кишечной палочки в продуктахубоя с/х животных на основе генных зондов. Труды ВНИИВСГЭ, т. 94, 1994, с.95-98.
10. Багдасарьян Г.А., Гениатуллин К.В. Использование микроорганизмов в контроле загрязнений окружающей среды // Гигиена и санитария, 1981, № 11,с. 11-13.
11. Балаян А.Э., Стом Д.И. Метод биотестирования по обездвижению клеток водорослей дюнилиеллы // Методы биотестирования вод: Сб. ст. Черноголовка, 1988, с. 21-23.
12. Белецкий В.И. Некоторые методологическте аспекты биотестирования // Всесоюз. конф. по водной токсикологии. Тез. докл. Одесса, 1988, с. 7-8.
13. Белоусова Р.В., Гончарова Т.М., Асеев Н.В. и др. Разработка способов и технических средств полевой индикации возбудителей инфекционных заболеваний животных на основе генных зондов. В кн.: Вопросы ветеринарной биологии. М, 1994, с. 68-70.
14. Бенюмович М.С. Действие афлатоксина на животные клетки в культуре тканей // Фармокология и токсикология, 1973, том 36, № 4, с. 497-501.
15. Билай В.И., Курбацкая З.А. Микробиологические биотесты обнаружения микотоксинов в пищевых продуктах // Оценка загрязненности пищевых продуктов микотоксинами, М., 1985, с. 286-296.
16. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф. Геносистематика бактерий. М., 1976.
17. Болдырева Н.М. Методы биотестирования сточных и природных вод на культуре инфузорий // Методы биотестирования вод: Сб. ст., Черноголовка, 1988, с. 42-43.
18. Боровков A.M. Хлорелла удобный биотест при поиске микотоксинов // Микотоксины: Тез. докл., Оренбург, 1077, с. 68-69.
19. Бресткина М.Д., Данильченко О.П., Тушмалова Н.А. Hydra attenuata в качестве тест-объекта при оценке загрязнения сточных и природных вод // Методы биотестирования и биоиндикации природных вод. Л., 1987, с. 71-76.
20. Вальехо-Роман К. М. Гибридизация ДНК В кн.: Молекулярные основы геносистематики. Изд-во МГУ, М, 1980, с.86-105.
21. Васильев И.Р., Маторин Д.Н., Венедиктов К.С. Методы биотестирования природных вод по замедленной флуоресценции микроводорослей // Методы биотестирования вод: Сб. статей. Черноголовка, 1988, с. 23-26.
22. Веселов Е.А. Биологические и физиологические тесты для оценки ядовитого действия промышленных сточных жидкостей на рыб и кормовые ресурсы водоемов // Проблемы водной токсикологии: меж-вуз. Сб. Петрозаводск, 1988, с. 3-6.
23. Веселов Е.А. Использование инфузории туфельки для теста токсичности // Метериалы мед. -биол. конф. Петрозаводск, 1969, с. 255-257.
24. Веселовский В.А., Веселова Т.В., Дмитриева А.Г. Метод биотестирования по определению флуоресценции водорослей с помощью портативного флуориметра // Методы биотестирования вод: Сб. ст. Черноголовка, 1988, с. 26-29.
25. Габович Р.Д, и др. Биотоксины гидробионтов м профилактика пищевых отравлений // Вопросы питания, 1989, № 2, с. 4-11.
26. Гиль Т.А., Балаян А.Э., Стом Д.И. Метод биотестирования по гашению люминесценции светящихся бактерий // Метод биотестирования вод: Сб. ст. Черноголовка, 1988, с. 15-17ю
27. Глухова М.Н., Фролова С.М., Субботина Г.М. Микробиологическое определение токсических веществ в природных водах // Аналитическая химия объектов окружающей среды: Тез. докл. СПб Сочи, 1991, ч. 3, с. 199.
28. Голдберг A.M., Фэзьер Д.М. Испытания химических препаратов на токсичность: эксперименты на животных и их альтернатива // В мире науки, 1989, № 10, с. 6-13.
29. Голубкова Э.Г. Paramecium caudatum, как токсикологический тест-объект //Гидробиологический жирнал, 1978, том 14, № 2, с. 95-99.
30. Голубкова Э.Г. Экология Paramecium caudatum Emenbery в условиях острой и хронической интоксикации: Афтореф. дис. . канд. биол. наук, Петрозаводск, 1980.
31. Голубкова Э.Г., Москалева Н.В., Виссарионова Н.И, Овсянникова Н.В. Сравнительное изучение резистентности парамеций и дафний кнекоторым препаратам // Всесоюз. конф. по водной токсикологии. Одесса, 1988, с. 110-111.
32. Горбовицкая М. Диагностика болезни Марека с использованием ДНК-зондов. // Птицеводство. М. 1996. №2, с 27-28.
33. Горошко О.Г. Использование инфузорий Tetrahymena pyriformis в токсикологических исследованиях // Бюллетень / ВИЭВ, 1987, том 61, с. 76-78.
34. Гроздов А.О., Соколова С.А, Простейшие, как тест-объекты в прикладных токсикологических исследованиях // Биотестирование природных и сточных вод. М., 1981. С. 30-36.
35. Дахновский В.И. Зайченко A.M. Сравнительное изучение антибиотической активности некоторых микотоксинов // Тез. докл. симп. по микотоксикологии (продуценты, химия, биосинтез, определение действие на организм), Оренбург, 1977, с. 32-33.
36. Дерюшева С.Е. Биотинилирование ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции. Труды ВНИИ генетики и разведения с/х животных. Санкт- Петербург, 1993,с.43-45.
37. Дмитриева А.Г. Метод биотестирование по определению живых и мертвых клеток водорослей с помощью люминесцентной микроскопии // Методы биотестирования вод: Сб. ст. Черноголовка, 1988, с. 85-89.
38. Долгов В.А. Сравнительная оценка параметров токсичности различных веществ для инфузорий тетрахимена пириформис и белых крыс // Сб. науч. трудов ВНИИВСГЭ «Проблемы ветеринарной санитарии и экологии», 1996, том 100, с. 127-129.
39. Долгов В.А. Лавина С.А., Фролова И.А. Проблемы повышения информативности биотестового анализа // Тез. докл. Межд. научной конф. «Проблемы санитарии, гигиены и экологии (дезинфекция, дезинсекция, дератизация), М., 1999, с. 173-174.
40. Долгов В.А. Совершенствование методики биотестирования объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля // Тез. докл. Межд. научной конф. «Проблемы санитарии, гигиены и экологии (дезинфекция, дезинсекция, дератизация), М., 1999, с. 171-172.
41. Долгов В.А., Пермякова Н.В., Кодухова И.В. Ветеринарно-санитарное и экологическое значение биотестирования объектов окружающей среды // Тез. докл. научной конф. «Гигиена, ветеринария и экология животноводства», г. Чебоксары, 1994, с. 118.
42. Друца В.Л. Радиоизотопное мечение ДНК. В. кн.: Молекулярные основы геносистематики. Изд. МГУ. М., 1980, с.35-50.
43. Дрыгин Ю.Ф., Бузмаков А.В., Тетерина H.JL, Морозов С.Ю. Нерадиоактивная диагностика вирусных инфекций зондами "ДНК-пероксидаза". // Молекулярная биология. 1992. т.26.
44. Еськов А.П., Каюмов Р.И., Лужецкий А.С. и др. Метод токсикологической оценки полимерных материалов // Гигиена и санитария, 1985, № 1, с. 62-65.
45. Игнатьев А.Д., Шаблий В.Я., Использование инфузорий Тетрахимена пириформис, как тест-объекта при биологическом исследовании в сельском хозяйстве//М., 1978.
46. Калюжная М.Г., Хмелленина В.Н., Сузина Н.Е., Лысенко A.M., Троценко Ю.А. Новые метанотрофные изоляты из щелочных озер южного Забайкалья. «Микробиология», 1999, том 68, №5, с.677-685.
47. Карелин А.И., Макаров В.А., Боровков М.Ф. Словарь ветеринарных, зоогигиенических и санитарных терминов. М.: Росагропромиздат., 1990.
48. Карпович Т.А., Колупаев Б.И. Бейм A.M. Метод биотестирования на основе регистрации дыхательной и сердечной активности рыб // Методы биотестирования вод: Сб. ст. Черноголовка, 1988, с. 60-65.
49. Квятковская А.Ю. Разработка автоматизированных методов ДНК -диагностики эшерихий и сальмонелл в объектах ветеринарно-санитарного надзора.// Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. М, 1998.
50. Коверский В.А. и др. Влияние микотоксинов на скорость разрушения эритроцитов растущих животных // Проблемы защиты кормов и продуктов животноводства от заражения токсическими веществами, М., 1980, с. 76-77.
51. Колупаев Б.И. Метод биотестирования по изменению дыхательной и сердечной деятельности у дафний // Методы биотестирования вод: Сб. ст. Черноголовка, 1988, с. 103-104.
52. Комарницкая Н.П. и др. Методика определения микотоксинов в фуражном зерне //Ветеринария, 1990, № 10, с. 57.
53. Коромыслов Г.Ф. и др. Методы биологической оценки безвредности и токсичности микробиологического белка в кормлении лабораторных животных//Бюллетень ВИЭВ, 1984, Вып. 52, с. 10-13.
54. Коромыслов Г.Ф., Фомин Б. А., Артюшин С.К. и др. Диагностикумы инфекционных болезней сельскохозяйственных животных на основе генной инженерии. Труды ВИЭВ, 1994, т. 69, с. 8-14.
55. Крайнюкова А.Н. Биотестирование в охране вод от загрязнения // Методы биотестирования вод: Сб. статей, Черноголовка, 1988, с. 4-14.
56. Курбацкая З.А. Биологические методы обнаружения микотоксинов в пищевых продуктах и кормах // Оценка загрязненности пищевых продуктов микотоксинами, М., 1985, с. 262-278.
57. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М," Медицина", 1978.
58. Лукина Г.А. Действие малых доз фенола на фотосинтез хлореллы // Труды Института биологии внутренних вод, 1971, № 10, с. 42-46.
59. Лысенко A.M., Суходолец В.В. Дивергенция Streptococcus thermophilus по уровню гомологии ДНК. «Микробиология», 1999, №4, с.448-451.
60. Мажарова И.В. Методические подходы к экологической оценке загрязнения окружающей среды пестицидами // Охраны природной среды при интенсификации сельскохозяйственного производства: Сб. науч. тр., 1983, с. 59-69.
61. Маккреди Б.Д., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. М, Мир, 1999, с.496-506.
62. Мальков И.Г., Артюшин С.К., Фомин Б.А., Коромыслов Г.Ф. Разработка метода идентификации микобактерий человеческого и бычьего видов с использованием ПЦР.//Молек. генетика микроб, вирусол. , 1993. -2.- С. 39. М.-" Медицина".
63. Маниатис Т, Фритч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М., «Мир»., 1994.
64. Маторин Д.Н., и др. Применение метода регистрации замедленной флуоресценции для биотестирования загрязненных природных вод гербицидами и фитотоксическими веществами // Методы биоиндикации и биотестированию природных вод, JL, 1987, с. 18-25.
65. Медников Б.Н. Дивергенция геномов и некоторые вопросы эволюционной теории. Автореф. на соискании ученой степени доктора биологических наук. Москва, 1978.
66. Медников Б.Н., Леванова Г.Ф. О возможных принципах построения естественной системы микроорганизмов. Физиология и биохимия микроорганизмов. Межвуз. Сб. №2, Горький, 1980.
67. Мишанькин Б.Н., Волохонская Н.Л, Москвитина ЭА. и др. База данных о нуклеотидах последовательностях, используемых в качестве праймеров микроорганизмов // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1998, № 5, с. 39-43.
68. Монахова Е.В., Власов В.П., Вуцан В.Н., Е.И.Седых, Н.К.Михась.// Видоспецифический ДНК-зонд для идентификации холерных вибрионов. // Молекул, генетика микроб.вирусол. 1993.-4.- с.8-1 1.- М.-"Медицина".
69. Плеханов С.Е., Аль-Сальман И.М., Телитченко М.М. Биотестирование цинка, кадмия, кобальта по физиологическим реакциям клеток харовых водорослей // Гидробиологический журнал, 19907 том 26, № 5, с. 42-46.
70. Погосян B.C., Агаджанян Э.А., Никогосян М.И. и др. Оценка мутагенной активности атмосферного воздуха на основе выявления соматических мутаций у трагесканции // гигиена и санитария, 1986, № 6, с. 84-85.
71. Пожарова А.В., Папутская Н.И. и др. Методы биотестирования по хемотоксической реакции парамеций // Методы биотестирования вод: Сб. статей, Черноголовка, 1988, с. 99-103.
72. Романенко Л.А., Лысенко A.M., Михайлов В.В., Курика А.В. Новый вид буропегментированных агарлитических бактерий рода Alteromonas. «Микробиология», 1994, том 63, №6, с. 1081-1087.
73. Романенко Л.А., Михайлов В.В., Лысенко A.M., Степаненко В.И. Новый вид меланинсинтезирующих бактерий рода Alteromonas. // «Микробиология», 1995, том 64, №1, с.74-77.
74. Романова Л.В., Мишанкин Б.Н.Сучков И.Ю. Полимеразная цепная реакция: генотипический скрининг штаммов Fran, tularensis с использованием неспецифических праймеров.// Биотехнология, 1993. N6.-с. 8-9.1.l
75. Саксонов M.H., Трипузов Г.В., Стом Д.И. Метод биотестирования по выходу электронов из клеток элодеи // Методы биотестирования вод: Сб. ст. Черноголовка, 1988, с. 96-97.
76. Семененко Э.И. и др. Изучение возможности экспресс-оценки токсичности полимерных материалов и изделий их них на гидробионтах // Гигиена и санитария, 1987, № 2, с. 29-32.
77. Синагатуллина Э.М. Разработка тест-систем для выявления инфекционных агентов с использованием нерадиоактивных биотиниллированных ДНК-зондов. Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. М., 1992.
78. Стикланд Ю.Е. Получение зондов и их мечение. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. М, Мир, 1999. с. 329-372.
79. Таланов Г.А., Хмелевский Б.Н. Санитария кормов, М.: Агропромиздат, 1991.
80. Тимошин В.Б., Замараев B.C., Антонов В.А., Липницкий А.В. Видоспецинфический ДНК-зонд для идентификации токсигенных штаммов возбудителя сибирской язвы. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1994, № 1, с. 30-33.
81. Трахтенберг И.М. и др. Методы изучения хронического действия химических и биологических загрязнителей // Рига, 1987.
82. Турова Т.П. Определение таксономического положения микроорганизмов с помощью метода гибридизации ДНК. "Биологические науки ", 1989, № 2, с.26-28.
83. Ульянова И.П., Семакова Л.В. и др. Применение биотестирования для оценки токсичности городских сточных вод // V Всесоюз. конф. по водной токсикологии, Одесса, 1988, с. 205-207.
84. Филенко О.Ф. Водная токсикология // МГУ Черноголовка, 1988.
85. Фролова И.А., Аппаратный метод биотестирования объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля // Тез. докл. «Конференция научного обеспечения развития ветеринарной медицины в Северо-Восточном районе России», Н. Новгород, 1999, с. 116-117.
86. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика. // М, Мир., 1999. с.558.
87. Чан Т.В.Т. Гибридизация нуклеиновых кислот. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М, Мир. с.374-394.
88. Шибата Д.К. Полимеразная цепная реакция и молекулярно-генетический анализ биоптатов. В кн. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М, Мир, 1999. с.395-425.
89. Широкова Е.Л. Новый комплект оборудования для профилактики инфекций в полевых условиях // Зарубеж. воен. мед., 1998, № 1, с. 38-39.
90. Шоттгер Р.А., Людке Д.Д. Стратегия исследования для предсказания угрозы загрязнения водной среды // Теоретические вопросы водной токсикологии: Матер. 3-го Советско-Американского сипм., 1979, БОРОК СССР, с. 7-16.
91. Штина Э.А. Водоросли, как экологические индикаторы // Гидробиологичекий журнал, 1990, том 26, № 5, с. 93-94.
92. Amrein Р.С. A rapib automated system for Measurement ofantibody titres //J.Nucl. Med., 1974, 15, № 126, p. 1145-1148.
93. Andrew V., Sayler G. The use of gene probes in the rapid analysis of natural microbial communities.//" J. Ind. Microbiol." 1988, 3, №5, p. 281-292.
94. Andriman W., Gradoville L., Heston L. Use of cloned probes to detect Epstein Barr viral DNA in tissues of patients with neoplastic and lympho-proliferative diseases.//. Journal of infectious Disease. 1983, V.148, p. 967-977.
95. Arenas M.J. Identification of HPV: in situ hybridization or polymerase chain reaction. //J. Pathol. 1991, V.164, № 3, p. 191-193.
96. Arora Asha, Cupta A.B. The effect of copped sulphate of formation of sporation dises oscillation sp. // Arch. Hydrobiol, 1963, v. 96, № 2, p. 261266.
97. Asai Т., Zaporojets D., Squires C., Squires C.L. // An Escherichia coli strain with all chromosomal rRNA operons inactivated: Complete exchange of rRNA genes between bacteria. // PNAS, 1996, v.96, p. 1971-1976.
98. Ashall F., Miless M. Diagnosis of parasitic diseases using DNA to DNA hybridization.// «Trans Roy Soc trop. Med. Hyg.». 1988, № 2, p. 235-236.
99. Baker R.F. Binding of DNA to cellulose nitrate filters under denaturing conditions. //"Anal. Biochem.", 1977, v.78, p.569-571.
100. Banu F. et. al. Antimicrobial activity of mycotoxin sterigmatocystin produced by Aspergillue xersicolor // Curr. Sci., 1985, v. 54, № 19, p. 10001001.
101. Berger C., Melchers F. In situ hybridization ofmRNA molecule in single cells.// «Annu rep., 1985, Basel Inst. Lmmunol», Basel, p. 1-10.
102. Blum J.J. et. al. Effect of clofidrate in Tetrahymena // Molec. Pharmacology, 1968, v. 4, p. 155-161.
103. Bohm H., Karch H. DNA fingerprinting of Escherichia coli 0157:H7 strains by pilsed-fild gel electroforesis.//J. Clin. Microbiol., 1992, v.30, p.2169-2172.
104. Boom R, Sol C, Beld M., Weel J., Goudsmit J., Wertheim-van Dillen. Improved Silica-Guanidiniumthiocyanate DNA isoation Procedure Based on Selectiv Binding of Bovin Alpha-Casein to Silica Particles. //J. Clin. Microbiol, 1999, v.37, №3, p.615-619.
105. Bovie E.C.? O'Braen T.L. Some effects of selenium, vanadium and zirconium on the swimming rate of Tetrahymena pyriformis: a bioassay study // Univ. Kons. Sci. Bull, 1982, v. 52, № 4, p. 39-44.
106. Brechot C. Application du donare de 1 DNA du virus de 1 hepatite В pour le diagnostic des infection lines au vims de 1 hepatite В.// "Ann. Biol. Clin", 1985, №4, p. 351.
107. Brenner D. Gene Probes in Detection and identification of Pathogenic Bacteria.// "Clinical Microbiol", 1986, №7, p. 106-109.
108. Britten R. J., Kohe D.E. Repeated sequences in DNA.// "Science", 1968, v.161, p.529-540.
109. Carret G., Flandrois J.P. Automation du diagnostic bacteriologique et de pantibiogramme // Spectra 2000, 1986, 14. № 111, p. 49-53.
110. Chen Mou-Liang. Effect of energy source on growth and respiration of Tetrahymena pyriformis // Red. Biol. Abstracts, 1971, v. 52, № 96369.
111. Chen Shy, Xu Renlin, Yee Arlene et. al. An automated fluorescenn PCR metod for detection of shiga toxin-producing Escherichya coli in foods // Appl. And Environ Microbiol., 1998, 64. № 1, p. 4210-4216.
112. Chou S., Merigan T.C. Rapid detection and quantitation of human cytomegalovirus in urine through DNA hybridization. // New England Journal of Medicine. 1985, v. 308, p. 921-925.
113. Chu B.C.F., Wahl G.M., Orgel L.E. Derivatization of unprotected polynucleotides.// Nucl. Acid Res. 1983, v. 11, p. 6513-6529.
114. Church R.B. Method for study of hybridization and reassociation of nucleic acids axtracted from cells of higher animals. In: Molecular techniques and approach in developmental biology, ed. by M. J. Chrispeels. N. Y., 1973, p. 223-301.
115. Conner C.P., Heithoff D.M., Julio S.M., Sinseheimer R.L., Mahan M.J. // Differential papperns of acquired virulence genes distinguish Salmonella ctrains. PNAS, 1998, v.95, p.4641-4645.
116. Day P.J.R., Bevan I.S., Gurney S.J., Young L. S., Walker M.R. Synthesis in vitro and application of biotinylated DNA probes for human papiloma virus type 16 by utilizing the polimerase chain reaction. // Biochm.I. 1990. v.767. №1, p.119-123.
117. De Ley I., Cattoir H., Reynaerts A. The quantitative measurement of DNA hybridization from renaturatiun rates. // "Europ. J. Biochem.", 1970, v. 12, p.133-142.
118. Denhardt D.T. A membrane filter technique for the detection of complementery DNA.// "Biochem. Biophys. Res. Coramun.", 1966, v.23, p. 641-646.
119. Erlich H.A. PCR technology.// Stockton Press, New York, 1989.
120. Falkow S., Moseley S. Specific DNA probes in diagnostic microbiology.// Патент США №4358535,10.11.1982,435/15.
121. Fine S.P., Reddy G.R., Marnett L.J. Mutagenicity in Escherichia coli of the mayor DNA adduct derived from the endogenous mutagen malondialdehyde. // Proc. Natl. Acad. Sci, 1997, v.94, p. 8652-8657.
122. Forster A., Modness J., Skingle D. Non-radioactive hybridization probes prepared by chemical labeling of DNA and RNA with novel reagent, photobiotin.// "Nuc. Acid Res", 1985, №3, p.745.
123. Friedman H., Specter S. Automation and mechanization in clinical microbiology//Pure and Appl. Chem., 1982, 54, № 11, p. 2041-2044.
124. Gannon V. P., King R.K., Kim J.Y., Thomas E.J. Rapid and sensitive metod for detection of Shiga-like toxin-produsing Escherichia coli in ground beefusing the polimerase chain reaction.// Appl. Environ Microbiol, 1992; v.58, p.3809-3815.
125. Garger S., Turpen T. Use of RNA probes to detect plant RNA viruses.// «Meth Enzymol.», v.l 18, Orlando, 1986, p. 717-722.
126. Gendre Farncois, Brignon Pierre, Cie Gervaus Danone SA // Procede de mise en enidence de contaminanants microbiologiques a usage alimentaire // заявка № 9613125 от 28.10.96. Опубл. 30.04.98., бюллетень № 98/18.
127. Gillespie D., Spiegelman S. A quantive assay for DNA-RNA hybrids with DNA-RNA immobilized on a membrane.// "J. Molecul. Biol.", 1965, v. 12,1. ООП О л О
128. Gou D. F., Kubota H, Onuma N, Kodama H. Detection of salmonid heipes virus in fisli by Southern-blot technique.// J. Vet. Mod. Sci. 1991. v. 53, NI.P 43-48.
129. Gramley W.A., Asghar A., Frierson H.F., Powell J.M., Powell S.M. Detection of Helicobacter pylori DNA in Fecal Samples from in fected individuals.// J. Clin. Microbiol., 1999, v.37, p.2236-2240.
130. Halt C.,Ward M.E.,Clarke 1 .N. Analysis of the entire nucleotide sequence of the ciyptic plasrnid of Chlamidia trachomatis serovar L I .Evidence for involvement in DNA replication. // "Nucl. Acid. Res.", 1988, v.16.- p.4053-4067.
131. Hashimoto Y., Itho Y., Fujinada Y., Khan A.Q., Sultana F., Miyake M., Hirose K., Yamamoto H., Ezaaki T. // Development of nested PCR based on the ViaB sequence to detect Salmonella thyphi. // J. Clin. Microbiol., 1995, v.33, p.775-777.
132. Hayashi K. Manipulation of DNA by PCR. In. PCR the Polimerase chain reaction, Eds.: Mullis K.B., Ferre F. & Gibbs R.A., Birkhauser, 1994, p. 3-14.
133. Herrick J., Michalet X., Conti C., Schurra C., Bensimon A. Quantifying single gene copy number by measuring fluorescent probe lengths on combed genomic DNA.// "Proc. Natl. Acad. Sci", 2000, v. 97 (1), p 222-227.
134. Hill W., Payne A. Detection and enumeration of virulent Yersinia enterocalitica in food by DNA colony hybridization.// "Appl. F Environmental Microbiology", 1984, №4, 801-807.
135. Hopmar A., Wiegant J., Tesser G. A no-radioactive in situ hybridization method based on mercurated nuelcie acid probes and sulfhydryl-hapten ligands.// «Nuel. Acid. Res.», 1986, v.14, №16, p. 6471-6488.
136. Huck L.G., Dorn C.R., Angrick E.J. DNA probe for detection of serogroup 0157 enterohemorrhagic Escherichia coli.// Int. J. Food Microbiol; 1995, v.25, №3, p.277-287.
137. Huss H.H. Control of indigenous pathogenic bacteria in seafood. Food control, 1997, v.8, №2, p.91-98.
138. Innis M.A., Gelfand D.H., Sninsky J.J., White T.J. Optimization of PCRs. In: PCR protocols, a guide to methods and applications.// Academic Press, San Diego, California, 1990.
139. Ivanova Т., Turova Т., Antonov A. DNA-DNA and rRNA-DNA hybridization studies in the genus Ectothiorhodosrira and other purple sulfur bacreria.//"Arch. Microbiol", 1985, №2, p. 154-156.
140. Jaulhac В., Nowicki V.,Boznstein N.Detectoin Legionella pneurnofila method PCR.//J.Clin. Microbiol.-1992.-v.30 № 4.p 92-94.
141. Kacian D., Lawrence Т., Sanders M., Putnam J., Majlessi M., McDonough S., Ryder T. A rapid and sensitive chemiluminescent DNA probe system for detection of amplified HIV and HBV DNA. // Fresenius J. Anal. Chem. 1990. v.337, №1, p. 95.
142. Karh H., Meyer Т. Evalution of oligonucleotide probes for identification of shiga-like-toxin-producing Esherichia coli.// J. Clin Microbiol, 1998, v.27, p.l 180-1186.
143. Kim J., Nietfeldt J., Benson A.K. Octamer-based genome scanning distinguishes a unigue subpopulation of Escherichia coli 0157:H7 strains in cattle.//Proc. Nail. Acad. Sci. USA, 1999, v. 96, Issue 23, p. 13288-13293.
144. Kimpton C.P., Morris D.J., Corbit G. Sensitive non-isotopic DNA hybridisation assay or immerdiate-early antigen detection for rapid identification of human cytomegalovirus in urin.// J. Virol. Meth. 1991, v.32, №1, p. 189-199.
145. Koistinen T. et. al. Growth inhibition of Lactobacillus measured using Bioscrin // The First China-Japan Mycology., 1987.
146. Lakshmi D., James D. A solution hybridization assay for the quantitation of prodynorphin mRNA.// "Mol. Brain Res.", 1987, №2, p. 173-176.
147. Lanata C. Sensitivity and specifity of DNA probes with the stool blot technique for detection of Eschenchia coli enterotoxins.// "J. Infec. Diseases", 1985, №5, p. 1087-1090.
148. Liberona H.E., Moxham J.M., Timbs D.V. Qualitty controlprocedures in an automated serological testing laboratory // N.Z. Vet. J., 1978, 26, № 23, p. 60, 65-66.
149. Lim J.K., Gunther N.W., Zhao H., Johnson D.E., Keay S.K., Mobley H.L.T. // In Vivo Phase Variation of Escherichia coli Type 1 Fimbrial Genes in Women with Urinary Tract Infection. // Infection and immunity, 1998, v. 66, №7, p.3303-3310.
150. Longer P. Enzymatic synthesis of biotin-labelekl polynucleotides novel nucleic acid affinity probes.// Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1981, №11, p. 6633.
151. Luk J.M., Kongmuang U., Trans R.S., Lindberg A.A. An enzyme-linked immunosorbent assay to detect PCR products of the rfbS gene from serogroup D salmonellae: a rapid screening prototype.// J. Clin. Microbiol. 1997, v.35, p.714-718.
152. Marmur J., Doty P. Heterogeneity in deoxyribonucleic acids. I. Dependens on composition of the configurational stbility of deoxyribonucleic acid.// "Nature", 1959, v. 183, p. 1427-1431.
153. Marmur J., Doty P. Thermal renaturation of deoxyribonucleic acid. // "J. Molecul. Biol.", 1961, v.3, p.585-594.
154. Martm R. H. Non-radioactive techiques for the labelling of nucleic acids.// Biotech. Adv. 1991, v.9, p. 185-196.
155. Maxwell J.H., Van Ness J., Hahn W.E. Assay of DNA-RNA hybrids by SI nuclease digestion and adsorption to DEAE-cellulose Filters.// "Nucl. Acids. Res.", 1978, v.5, p.2033-2037.
156. Moore R., Schmid J. Gounder J and Stuley J Deoxyribonuclei acid Hology Among the Gaulobacters.// Inter J of Systemat. Bacter, 1978, v.28, №3, p.349-353.
157. Morello J.A., Graves M.N. Bohnhoff M. Automation in Laboratorium fur klinische Microbiologie // Med. Lab., 1982, 35, № 3, p. 73-83.
158. Moseley S.L., Hyg J. Detection of enterotoxigen Esherichia coli by DNA colong hybridization.// "J. Infect", 1989, №6, p. 892-898.
159. Montor T.W., Oraveerakul K., Zhang Q.Q., Choi C.S., Ludemann L.R. Polymerase chain reaction amplification for the detection of porcin parvovirus.//J. Virol. Meth. 1991. v.32, № 2-3, p. 201-211.
160. Nataro J.P. Detection of an abherence factor of enteropathogenes Escherichia coli with a DNA probe.// "J. Infec. Diseases", 1985, №3, p.560-565.
161. Nieminen K., Humppi T.5 Biologiset aseet Norea ilmaisu antaa aikaa suojautua // Kemia-Kemi. 1999, № 3, p. 214-217.
162. Notario R., Brda N. Metodos automatizados у rapidos en bacteriologia 11 Acta bioquim. Clin.Lationoamer., 1980, 14, № 4, p.635-642.
163. Onada J.C. et. al. The toxicity of liposomal chloroamphenicol for Tetrahymena pyriformis // Int. J. Pharma, 1980, № 7, p. 89-98.
164. Palva A. A gene in the detection ofEscherichia coli and other Enterobacteriaceae by nucleic acid sandwich hybridization.// «J. Clin. Microbiol.», 1983, №1, p.92-100.
165. Peirce C., DNA technology provides new tools for identifycirung genetic causes of disease.// «Res. Resour. Report.», 1988, №8, p. 1-4.
166. Perenhou H. La biologie entree dans i'industrie // Rev. lait. fr., 1998, № 584, p. 22-23.
167. Ranki M. Sandweich hybridization as a convmient method for detection ofnucleic acids in crude samples.// «Gene 21», 1983, p. 77.
168. Rifai S., Barbancon V., Prevost G., Piemont Y. Staphylococcus aureus Synthetic exfoliative toxin A and В DNA probes for detecton of toxigenic Staphylococcus aureus strains.//"J. Clin. Microbiol.", 1989, №3, p. 504-506.
169. Rubin F., Lane E., Lesman M., Hoffman S. Use of a DNA probe to detect Salmonella typhi in the blood patiens with typhoid fever.// "J. Clin. Microbiol", 1989, №5, p. 1112-1114.
170. Rusvai M., Belak S. Detection of bovine adenovirus nuclric acid sequences in nasal specimens by biotinylated DNA probes. 1992, №4, p.311-316.
171. Samadpour M., Liston J., Ongerth J.E., Tarr P.I. Evalution of DNA probes for detection of Shiga-like-toxin-producing Escherichia coli in food and calf fecals samples.// Appl. Environ Microbiol, 1990, v.56, p. 1212-1215.
172. Sansonetti P., Boileau С. H Sonde d' DN et procede pour la detection de Shigelles et des souches entero-invasives de Esherichia coli. Патент ЕР, №170584, 12.07.1985, С 12 Q 1/68.
173. Serhir В., Dugord D., Jacques M., Higgins R., Harel J. Cloning and characterization gene (dexS) from Streptococcus suis.// GENE, 1997, № 190, p. 257-261.
174. Sever J.L. Future perspectives in virology diagnosis, treatrem and immunoprohylaxis // S. Afr. Med. J., 1986, v. 70, p. 10-16.
175. Sharma K.B. Arya S.C. Detection of Salmonella typhi by Nested PCR Based on the ViaB Sequence. // J. Clin. Microbiol., Dec., 1995, p.3361.
176. Shibata D., Martin W., Appiemen M. Detection of cytomegalovirus DNA in periferal blood of patients infected with human immunodefficiency virus. «Infec. Deseases» 1988, №6, p. 1185-1192.
177. Silberstein G.B., Hooper A.B. The effect of the herbicide 2,4,5-trachlorophenoxy acetic acid on the growth and metabolism of Tetrahymena pyriformis //J. Cell. Physiol., 1974, v. 85, p. 331-338.
178. Tchen P., Ranki M. Time-resolved fluoromentri, a sensitive method to quantify DNA-hybrids. "Nucl. Acid Res.", 1986, №2, p. 1017-1028.
179. Tenover F. Studies ofantimicrobiol resistance genes using DNA probes. "Antimicrob Ag Chemother. 1986, N5, p.721-725.
180. Thrasher J. et. al. The effect of four mencury compounds on the generation time and cell division Tetrahymena pyriformis // Environmental Reseerch, 1973, v. 20, p. 6.
181. Todd D., Creelan J. L., MeNulty M. S. Dot-hybridization assay for chicken anemia agent using a cloned DNA probe.// J. Clin. Microbiol. 1991. v.29, № 5, p. 933-939.122
182. Van der Giessen J.W.B., Eger A., Haagsma J., Haring R., Gaastra., van der Zeijst В. A. M. Mycobacterium paratuberculosis. Amplification of 165 rRNA sequences to detect Mycobacterium paratuberculosis.// L. Med. Microbiol, 1992, №4, p. 255-256.
183. Viscidi R.P., Yolken R.G. Molecular diagnosis of infection diseases by nucleic acid hybridization.// Mol. and Cell. Probes. 1987. №1, p. 3-14.
184. Wetmur J. G., Davidson W. Kinetics ofrenaturation of DNA.//J. Mol. Biol. 1968. №31, p. 349-370.
185. Методические указания предназначены для ускоренной оценки токсичности продуктов животноводства (мясо, мясопродукты, молоко, яйца) и кормов (зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма, мясокостная и рыбная мука, дрожжи кормовые и др.).
186. Принцип метода основан на определении выживаемости инфузорий Tetrachymena pyriformis в среде, содержащей испытуемый продукт или корм.
187. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
188. И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ (Млясельгозарод Росснн) ЕДАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ 07139, Mocxsa, Орлюсов пер., 1/11 Для телеграмм: Mocxsa, 84 Млнроссельхозпрол Телекс: 411258 ЗЕРНО jjcc: (095) 975-58-50, Тед. :207-80-000300 N 13-7-2/12
189. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ' по индикации энтеробактерий в объектах ветеринарно-санитарного надзора на основе ДНК-гибридизации1 .Общие положения
190. Настоящие методические указания предназначены "для ускоренной индикации бактерий родов Escherichia и Salmonella в мясе, мясе птицы и мясном фарше на основе реакции гибридизации нуклеиновых кислот с использованием меченых биотином ДНК-зондов.
191. Компонентами реакции являются: испытуемый материал (выделенная из. объекта исследования ДНК контаминируемых микроорганизмов) и меченые биотином ДНК-зонды. Реакция проводится на мембранных нитроцеллюлозных фильтрах с диаметром пор 0,45 мкм.2. ДНК-зонды