Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Получение и испытание живой вакцины против бруцеллеза из штамма 82-ПЧ

РГ6 од

ЗАНСКИЛ ОРДЕНА ЛЕНИНА ЗЙТЕРИНАРНШ! ИНСТИТУТ имени 11.с. БАУМАНА 11 (!5П1Г ЮО'З

На правах рукописи

БЕДОЗВРОг1А ГАЛИНА АЛчаСАНдРОЗНА

ПОЛУЧЕНИЕ И ИСПЫТАНИЕ 2ИЗОЗ ВАКчИаН ПРОТЧЗ БРУЦЕЛЛЕЗд ИЗ- ШТАМПА 82-ПЧ

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

КАЗАНЬ 1593

Работа вшолнена в лаборатории бактерийных инфекций Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института

( г,Казань)

Научные консультанты: Заслуженный ветеринарный врач РСФСР, доктор ветеринарных наук, профессор К.М.САЛМАКОВ

Заслуженный деятг науки ТССР, доктор ветеринарных наук, профессор, -чадемик АНТ Г.З.ВДН1СОЗ

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор Р.Г.ГОСМАНОВ

Доктор, ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент Россельхозакадемии, заслуженный ветврач РСЗСР В.В.ООЧНЕВ

Доктор, ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент Казахской АСХН Н.П.ИВАНОВ

Ведущее учреяздение - Всероссийский научно-исслед'овг^'ельский институт бруцеллеза и туберкулеза животных ( ВНИИБТ2 )

Защита состоится " " МЮК ^ ^ 1993 г< в часов на ' заседании специализированнагс звега Д-1£0.22.01 при Казанском ордена Тенина ветеринарном -шс'.итуте .тмани Н.Э.Баумана ( 420074, Казань, ветеринарный институт ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского ордена Ленина ветеринарного института имени Н.Э.Баумана.

Автореферат разослан " .Э - и^Нс^ 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

В.Е.ЧЕБОТАРЕВ

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Успешно:^ решеш® продовольственной -

программы.. страны содействуют ликвидация а профилактика инфекционное болезней жппотних, в том числе и бруцеллеза. Эта боле ла клеот широкое распространенно во многих странах млр\. Изучение брунеллеэа я разработка мер 1орьбы с ши приобрели характер между народного значимая.

Нробчема борьбы с бруцеллезной ипфзкццей, наносяшсГ; больно!' эвоиоглшгеокий ущерб и имеющей социальное значение, г-ссша аягуелль-на т. срази с нгнпржазшюй эпизоотической оостановкой э отдельных регионах страны.

Л». .ниггягг«т <5prf3;c.v.caa л^ямоул tc.tlkc при условии применения züc.0n0ai>j.eimi0HUx: средств специфической профилактики в комплексе с организациокно-хозяйственнши и ветершгарио-санитарнши мероприч ятиями ( Орлов Е.С. и др.,1971; Уласевт П.С.,1971; Сашаксл K.M., 1975; Студенцов К,П., 1975; Нгяицкнй A.A., 1Э'/8; Юсупов О.Ю. ц др., IS84; Забродин В.Л. и. др., ISS0; Джупина С,If., 1985; Кос адов Я.А., 1985; Сочнев В.В., 1988; Алиев Э.А.,1987; Иванов Н.П. ,1988; (им В.И,, 1989 и др.}.

С этой целью иеиле^озатвлямя било разработано к преллопея« оапкгое количество убитых и киши вакцин, в том числе из е:..„о.;тсг-юг/ культур бруцнлл { Котлярова X.С., 1950; Юсловец U.K. ,Т?Г?; НсгскиЯ К.И,, Т9Г0; Сели.лов K.M., 1961; Клочков А.А,. т964; Тршгснко П,А., ISG5; Еягузов В.С,,1937; Кдваник Ii.H.t др., 1984; ülymwob K.B., IS84 и др.). Но, несмотря на достижения мирово» ветеринарной науки все еще нет яаде;тсс с; дств специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.

В настоящее время для этих целей широко используются дивна ваздшш аз пгеашов 82 и 19. Однако они шею* сущест -¡шные недостатки. После илиуяизацяя вакциной из юташа 13 животные телгое врегя остаются серопозитивнш:; ( Гринько В.К. и др. ,1289; СЗъад-ков Г.А,, 1909), 470 затрудняет проведение взтеринаг'^-санятарных мероприятий, дифференциацию вакцинированных животных от большее и определен;:- эпизоотического статусу поголовья скота ас лезу.

При комиссионной проверке ( I969-I97C, I9?I-Iv?<-! ) pas-r—JUJ* протявобруцеллезшх вакцин, организованной Главшг.г управлением ветериьария МСХ СССР, наиболее эффективной оказалась вакцина из штамма 82. Она обладает слабоагглютйшшшши и иммуяогеаадьш

свойствами. Быстрая утрата привитыми животными положительных по зателей РА и PGK дает возможность оздоравливать хозяйства от dp целлеза в более короткие ороки. О высокой эффвктивк сти этой ва цины сообщают многие последователи ( Локтева Ф.П, и др., 1877; Базалей O.K. и др., 1980; Белобаб В.И. и др.,1980; Исхаков 0.3. и др.,1080; Косшюв'И.А. и др., 1986 и др.).

Однако, наряду с положительными качествами, она является ре. тогеняой при первичном применении на беременных коровах ( Салма K.M. и др.,1880; Алексеев К.К. и Лукин А.К., 1980; Алиев S.A., и Сацыко^ С.Р., 1983; Бронников А.К.,1987 и др.), вследствие чег штампом 82 не г^комевдуется прививать маточное поголовье. Иглму. низация же животных по мере растела значительно растягивает сро; вакцинации.

Учитывая это, ветеринарной секцией Научно-технического сое МСХ СССР от 27 июля 1976 года (протокол № 74) Казанскому ветери-парному институту та.Н.Э.Баумана было рекомендовано обратить особое внимание на совершенствование иммунизации против бруцелл! за взрослого поголовья крупного рогатого скота, ь том ч::сле öepi менных коров и нетелей.

Исходя' из вышеизложенного, возникает острая необходимость j .разработке схем специфической профилактики животных с нспользовг наем таких, вакцинных препаратов, которые бы создавали у всех в< растных групп крупного рогатого скота напряженный иммунитет, но J обладали реактогенншли свойствами и позволяли проводить диагностику в максимально короткигероки после вакцинации.

Цель и задачи исслэцоуапи?. Целью настоящих исследований . является; изыскать наи< олсо зедскт Binie средства и методы специфической профилактики б, уцб ¿лега к^утного рогатого скота, в том числе стременных коров ь неделе!.

В соответствии с этим были поставлены оледущие задачи:

- взыскать способ иммунизации вакциной из штамма 82 öepewej них коров и нетелей против бруцеллеза;

- получить из различных штаммов бруцелл" мутанты и изучить их культурально-морфологические, биохимические, агглкшшабельнш и другие свойства, е. также их ста» яльнооть и ультраструктуру ;

- изучить антигенные, вирулентные, иммуногенные и реактоге! ные сзойства штамма В. «tortus 82-ПЧ на лабораторных животных и крупном рогатом скоте;

- провести иммуномо р|ю лог иче с ку га оценку вакцины из штаг.2. v 82-114 на морских свинках и крупно:.? оогатом скоте;

- испытать вакцииу из штамма 82-ПЧ на маточном поголовье крупного рогатого скота в производственных условиях;

- разработать технологию и изготовить опытно-промышленную партию жявои сухс вакцины из иташа 82-ПЧ;

- разработать оптимальную оисталу лготивобруцеллезных мероприятий в скотоводстве и предложить ее для производства.

Научная новизна работы. Разработана зтодика отбора мутантов бруцелл для получения вакцинных штаммов.

Получен нови;" ванцишшй штамм В. abertus 82-ПЧ - пеняцял-лшю-чувотвителыпй вариант штамма 62 ( A.C. й 1034400 от 10 апреля 1983 года).

Вакцинный шташ 82-ПЧ всеотсрокке изучен нп лабг лторннх животных и крупном рогатом скоте в эксперимент лгышх и производственник условиях. Определены параметры его стабильности, а также агглютиногенных, иммуногенннх :г реактогвшшх свойств.

Установлен уровень иг,криогенных свойств и поврзвдащего действия вакцлны из штамма 82-ПЧ на организм лабораторных и сельскохозяйственных (крупный рогатый скот) животных путем определения ультраструктурных и патоморфологпческих измелений в органах и тканях привиты:-: чнвотннх в динамике иммуногенеза.

В эксперт,шнтальных и производственных условиях пгдтвер^ена высокая объективность вакцины из штамма 82-ПЧ на группой рогатой скоте для хозяйств с различно:: эпизоотичес^ обстановко.': по бруцеллезу, а также отсутствие у нее абортогенности, аи.готиногеи-нссти и способности создавать у привитых япвотти напряжений иммунитет.

Разработана система специфической профгогактккя оруцелл:зз крупного рогаюго скота с использованием только вакцины из штамма 82-ПЧ или в эмплексе с вакциной из шташа 82.

Разработана технология изготовления яатлвной и с^хой живой вакцины из штамма 82-ПЧ и освоеа их выпуск соответственно в лаборатории бактерийных инфекций ВНИВИ и на Щелковском бкоко.'.:бюито. ( Получено положительное решение ВНИШИЭ на видачу патента от 26 ноября 1991 года по заявке '№ 487341/13 ( 090465) на живуп вакцину .73 шташа 82-ПЧ).

Практическая значилось. Полученный штамм В. аЪогЬиз 82-414 депонирован в лаборатории-муэее (банк) ШИВИ и представлен в ВГНКИ ветпрепаратов в качестве производственного для изготовления вакцины. Справка о депонировании от 15 мая 1981 года, регистрационный ног.'вр 28. Акт об апробации штамма в ВГНКИ от 25.02.91 года.

В результате проведенных исследований разработаны и утверздены:

Технические условия на живую нативную вакцину из штамма 82-ПЧ против бруцеллеза крупного-рогатого скота, утвержденные 1УВ МСХ СССР Т5 октября 1986 года.

Технические условия на с: :ую яшвую вакцину из штамма 82-ПЧ против бруцеллеза крупного рогауого скота, утвержденные 13 ноября 1991 года, от МСХ СССР.

Временное наставление по применению хшой сухой вакцины из штамма 82-ПЧ против бруцеллеза крупного рогатого скота, утвержденное 1УВ МСХ СССР 13 ноября 1991 года.

Нормативно-техническая документация (технические условия, инструкция и наставление) на изготовление, контроль и применение нативной и сухой ваыдаы и? штамма 82-ПЧ против бруцеллеза крупного рогатого скота,, утьерященная директором ВНИВИ в 1983, 1986 и 1990 годах,.

Основные- положения диссертационно.'! работа, выносимые на защиту;- Изыскание новых вакцинных штаммов бруцелл и способов иммунизация крупного рогатого скота против бруцеллеза, в том числе беременных коров;

- получение различных мутантов бруцелл;

- получение и изучение говой давой гакцшга из штамма 82-ПЧ;

- эффективность пршепеь. ч н тшпой вакцлны из лтаг-ма Е2-ПЧ на крупкам рогатом с.коте в г роа. ьодзтвзшшх условиях;

- пазработка системы мероприятий по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота с применением вакцины из штамг-ч 82-ПЧ;

- освоение промышленной технологии изготовления шизой сухсй бруцеллезной вакцины из штамма 82-ПЧ на твердых и жиких питательных средах.

Апробация работь. Основные полош ния диссертационной работы доложены и обсувдены на заседаниях методической комиссии и ученого совета ВНИИ! в виде ежегодных рабочих программ и отчетов ( 1976-1992 гг.), координационно, совещаниях по проблеме 0.СХ.61

за 1984 год (Новосибирск, 1985), аа 1988 {Махачкала, IS89), Всесоюзной научке-производственно.'* конференции по. борьбе с бруцеллезом крупного рогатого ск> та Казань, 1979), совецанин bgïq-ринарних специалистов страны на ЭДК ( Москва, 1982), ..сесотиой научнойко:Ц;еранциа но проблемам эпизоотологии ( Казань, 1983), республиканской ^учно-пропзводственпой конференций Казань, I986-T992), совеиашш-семичс-ре аракткчсских и научных ветспециэ-листов (Новосибирск, ISS7), семинарах i'-.гср'.шарннх специалистов Оренбургской обллсти (1983), ДгерооПцшна (1088), Арглшин (1389/, .:шой Осетии (1990).

П?<1д*кятщ. По „лк^швми'л п«п~о г.?од&шюдоно 59 ни ««ту трупов;20 отчетов, 20 научных статей, 2 технических условия, 2 временных наставления, 2 временные инструкции, получено одно авторское свидетельство и лза положительных решения па выдачу патента, 3 удостоверения на рационализаторские цредлог-ешн.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изло-авны на9/с страницах машинописного текста и включают введение, 12 глав собственных исследований, заключение, выводы, тактические предложения. Список литлраяуга ссптопт из чЗ В »юотиглкпв,

•ля кптогм:: ic8 ;:п.'/.г.гян!шх. /.иссврл-аиня яклистрированл &*

ц 36 ркс-лс;;*-.;;;. В пржеглнкк иредстакло.ш докуигт», ." " • л'ллр. лс-;-. -да.мв работы. их "<>!,;'.> л

ЛЬТ/ЛЛКСС l:y-i Цнш:О0':1 ,

2. собстввшшб 1 кс;,: .евлн;^

2.:, ;.'атер;пл а чзтодн нсилодовэшй

Работа выполнена в соответствии о плановой иг, :■■ о л

ти - тлло;; г, ¿¿',г-19?:. го«ах п даборэторип бакт-. ¿¡Дюгс лкекф." "сот л;гп;;ло ааучис-пссхолскдсльского ветеринарного института (г.Казань), а такие непосредственно в хоз, ствах Оренбургской, Саратовской областей Российской Федерации, Азербайджана, Армении и Южной Осетии.

В экспериментах .юпользовтля 115 голов крупного рогатого скота, 280 кроликов и 3000 морских сванок. .Производоздвенныв испытания птеведены на 120 тысячах коров и нетелей.

В исследованиях использовали шташы бруцелл: В. abortus 82 (серия 1232 , 0528 , 0379), 19 (серия 7Э), 54,. 544 , 99, R-82 и Е-1096, в, maliteneis 25 и В. euia е, а также полевые культуры, полученные из абортированных плоцов, органов и лимфоузлов больных животных.

В работа использовали питательные среды: печеночно-пептонный глютзо-глицериновый агар и бульон (ШИТА и ППГТБ), пептонно -■мартеновский агар с переваром Хоттингера ( ШАХУ, Дгар "Д", агар и бульон на основе плацантарно-эмбрионально-маточного гицролизата (1ПЭМ', картофельный, гриппозный и эритрит- агар и триптозный бульон.

На первом этапе изучали возможность снижения абортогенного воздействия бруцелл птамма 82 и отрабатывали оптимальные схемы вакцинации беременных коров. При этом испытывали малые дозы вакцины из штамма 82 и использовали штамм В-62 для грунтвакцинации с последущей прививкой вакцины из штамма 82.

На втором этапе исследований изучали возможность получения антибиотико-устойчивых и чувствительных, а также ауксо'хуофных мутантов бруцелл. Целенаправленная селекция клонов с пониженной реактогенностью из шташа 82. проведена с использованием методики длительного культивирования на искусственных питательных средах.

В результате направленного.клонирования и селекции новых 1 вакцинных штаммов бруцегл было установлено, что наибольший интерес в этом отношении представляет штамм 82-ПЧ (пешщилино-чувствитель-ный вариант' птамма 82).

В этой связи , в шс-ед;пде.\ у бруцелл этого штамма более углубленно изучали стаба; ыюезь, .лулх гурадьно-мор^ологические, агглютикабелькые, биохкшг> ас к ¡е, ант; тонные, вирулентные, иммуно-генные, икмувошорфологичеезие и рэак.'огенше свойства, п также исплтывали вакцину из этого шташа в производственных условиях.

Культуралько-морфологические и дифозренциальные с ойстса бруцелл и полученных из них мутантов изучали методами, рекомендованными Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного Комитета по номенклатуре бактерий и Объединенного комитета экоцертов , ФА0/В03 по бруцеллезу (1978).

Стабильность штамма 82-ПЧ изучали путем проверки его свойств после длительного:: культивирования на агаровых и бг*ьонных питательных средах, а также после ,5-кпатного пассирования через

организм морских свинок и 6-кратного - крупного рогатого ско.а, в том числе беременных коров. Определяли так:ке стабильность сиойсть культур бруцелл этого штамма, полученных из отдельных колошй и после лиофшшзацда. Стабильность изучали на традиционной печеноч-11о;: среде и среде на основе ГПЭМ совместно с сотрудниками лабо -ратории питател! ''х сред ИИ - с.н.с,к.м.н. Машеевол Н.К.^ м.н.п. Торбино?» ?.?.!1.

Ос'ггчнц.ш маркерами ¡яташа 82-ПЧ г.вялятся чувствптелыость к пенициллину и эритритолу, агглютинабельность с бруцеллезными ^ - и Й-сыворотками.

Ультрастр;уч;т;/ру бруцелл ыхамм» Ь^.-ПЧ изучат методами гт5— гативнего контрастирования и ультратонких срезов совместно с-с.н.с. лаборатории патоморфологии ВНИВИ, к.б.п. Шошокиним В.А.

Аминокислотных анализ бруцелл штамма 82-ПЧ проводили на автоматическом анализаторе аминокислот Н 1200

В качестве тестов, определяющих иммунологлческуи реактивность животных и агглютиногенность культур бруцелл вакцинного штата, применяли реакцию агглютинации (РА), связывания комплемента (ВСЮ и Роэ-Бенгал пробу (РЕП), которые ставили по общепринятым методи-

ЧЗМ а

Сроки при:Аиваемости и степень обсеменения бруцелл ва.'.циипого атеша в зависимости от дозы у морских свинок устанавливали печез ?, 15, 21, 30, 60, .80 п 120 суток, у крупного рогатого скота через 15, 30, 60, 90 и 180 суток после Ангцппащш.

Морфологические свойства бруцелл изучали на препаратах, окрашенных по методам Козловского и Грамя. Изменчивость бруцелл устанавливали путем постановки трнпафлавиновой пробы, термоагглютинации и окраски колоний по методу Уайта и Вилсона. Хул:,тураль-тше свойства определяли по характеру роста микробот ло Ш~.7<\.

Агглютинабельность культур Лоувелл определяли п./тем псикшоикк пластинчатой и объемной РА с оруцеллезныг.ш & - (1:10), М - (1:10)

(1:50) и I?- (1:10) - сыворотками. Гост бруцелл г присутствии пенициллина ( 0,5; 5; 50; 500 ед/ш), эритригаяа (I мг/дга), тионина и ф:,кс;ша (1:50000, 1:100000) изучали на печеночных средах. Уреазну» активность изучаемых культу;: проверили на среде Кркстенсена. Образование сероводорода устанавливали в процессе роста микробов на печеночной среде.

Вирулентные свойства шташа 82-ПЧ изучали на морских свинках, которых прививали в дозах<10*50, 100, 1000, 10 тыс., 100 тыс I млн, I млрд, 3 млрд м.к., а затем через 20-25 суток после вакцинации убивали и подвергали всесторонним серологическим и бактериологическим исследованиям.

Для определения состояния иммунитета у привитых вакциной из "1тамМа 82-ПЧ в различных дозах морских свинок и крупного рогатого скота использовали вирулентную культуру бруцелл штамма 64, которую применяли в пределах 5-10 инфицирующих доз в зависимости от титрации на соответствующем виде животных.

Иммуноморфологическую оценку эффективности вакцины из штамма 82-ПЧ, уровень содержания Т- и В- лимфоцитов в крови, катион-ных белков в'мазках-отпечатках, антителообразупцих клеток в лимфоузлах и селезенке привитых животных проводили путем патоморфо-логических, гистохимических, яшуясфлгооресцентных и иммунологических исследований.

Работу проводили совместно с сотрудниками кафедры патанато-мии Казанского ветеринарного института ии.Н.Э.Бауиана - аспирантом Алиевым Э.И, п ассистентом Муллакаелим О.Т..

Для элзктронно-микроскопэтеских исследований среды материала получали на ультратоме 1КВ-Ш и просматривали в электронном микроскопеШЛ-100В при увеличении 5000-30000 крат. Материал фотографировали на фотопластинки для ядерных исследований,•'маркировала их и печатали с них электроннограммы.

Иммукофлюоресценгные исследования проводили на люминесцентном микроскопе "Лшам -,'Й" отечественного производства.

Первоначально изучали ш-мунмогиескую перестройку органов _ и тканей привитых вакцине. 1 и штдммя 82-ПЧ морских свинок и телок в сравнении со штаммами 82-• л К,

Затем ш.щномореологические и ультраструктурные изменения в органах ц тканях морских свинок, привитых вакциной из штамма 82-ПЧ; изучали в динамике через I, 2, 3, 5, 7, 10, 14, 21, 28, 45, 60 и 120 суток после иммунизации.

И завершили изучение эффективности различных доз вакцины из шташа 82-ПЧ на 48 нетелях, разх.злеяных на 10 групп, в кавдой из которых находилось по 3-5 голов. Животных 1-4 групп прививали в дозах 50, 100 , 200 , 400 млрд м.к.; 6-9 групп - вакцинировали в соответствующих дозах и оараяали вирулентной культурой,

5 группа была илтактной, 10 группа - заражена вирулентной культурой,

Патматериал, получений от опытных животных, Фиксировали в 10? растворе нейтрального формалина, спирт-формоле я холодном этаноле. Гистосрезы окрашивали гематоксилином и эозином по ван-Гизону и Романовскому-Гимза. Содержание FHK определяли по Браше, гликогена - по Ш^адашу, кислую а челочную фосфатазы - по Гомори. ■ Лля выявления бруцелл в ди.чфовдних органгх и тканях гистосрезы окрашивал;. по методу Циля-Нильсена и по Козловской, Т-ятфоцлтм определяли методом спонтанного розеткообре°ования о эритроцитами барака ( F-POR), В-.тафгаити - дшунофдшресцвкткьм метолом по п, йен«?, schî^x- (1977). Лизосомкне катионные белки ва-являли окраской мазков-отпечатков лимфоузлов и селезенки раствором бро!,фенолового синего, а для флюоресценции - раствором приму-лина.

Антнтелообразукхцие клетки, бруцеллезный антиген и импунные комплексы антиген-антитело в лимфовдных органах п тканях выявляли прямил и непрямым иммунофлюоресцентным методом Кумбса. Для индикации специфического иммуноглобулина в ллазмоцитах п тканях

шствориг-пг! ачтиген бруцелл готовили по методу Еуавена из агаровой культуры бруцелл штамма 82-ПЧ.

Степень иммунологической реактивности оргарча'ла жвднмюе « реактогениость вакцины из штамма 82-ОТ изучали1 на нетелях, находящихся в различной'стадии стсльнооти.

Эффективность вакцинопрофилактикн оценивали по показатели заболеваемости крупного рогатого скота бруцеллезом, серопозитиз-нссти и наличию абортов у привитых "животных.

Статистическую обработку цифровых данных проводили с заданной надежностью (достоверностью) Р> 95$ ш уровнем значимосги ч=0,05 на ЭШ "Электроника Ж-56" по разработанным npoipai.*u/-"'.i ( Тукшаитов Р.К., Нигматуллин II.X., 1984).

2.2. Изыскание способа прививки вакциной из што'ила 82 беременных коров и нетелей против бруцеллеза

В литературе имеются сообщения о различных методах снижения абортогешшстк вакцины из штамма 82: коныожтивальтй метод введения препарата ( Муминов А., 1983), использование антибиотиков после прививки ( Ростов А.П., 1987), двухзтапная вакцинация с

иопользованием вначале [лалта доз этого препарата, инактивированную вакцину или другие шташм, а затем - прививка штаммом 82 ( Киршин Б.А., 1977; Салмаков K.M., 1978; Стопин И.С. и др., 1981; Сочнев В.В. и др., 1983).

Работу проводили 'в хозяйствах Оренбургской области. При этом нами апробирован двухэтапный опособ вакцинации с использованием малых «оз щташа 82 и вакцины из шташа Д-82.

Первоначально беременных коров иммунизировали малыми дозами (1-2 млрд м.к.), а через 1-2-3 месяца - полной дозы (100 млрд м.к.) ' вакцины из штамма 82. После вг декия малой дозы штамма 82 в одном из хозяйств у коров в течение месяца абортов не отмечалось. Животные реагировали в РА с биофабричным антигеном в титрах, нике диагностических, а в РСК - негативно. После введения щташа 82 в полной дозе через 1; 5-2 месяца среди привитых коров отмечались аборты в двух гуртах в пределах 4,1-5,3$, в третьем - 125?. При выборочном исследовании привитых кивотных через 4 месяца выявили положительно реагиругадие в РА й РСК, при исследовании через 7 месяцев псе животные реагировали отрицательно.

В другом хозяйство при использовании этого способа получены негативные результаты. Через 1,5-2 месяца после прививки малыми дозами вакцины из штамма 82 коровы абортировали и поэтому бьшо решено прививатт их после отела.

При использовании в качестве грунтвакцины штамма Р-43^ на беременных коровах были получены также неравнозначные результаты. Установлено, что вакцинация беременных коров этим способом в благополучных по бруцеллезу хозяГствлх аборты не вызывала или они были • единичными. Черва 15-30 суток котле введения-вакцины из штамма ■Р-82 у животных результаты Р*. и РСК с бисфабричнш антигеном были отрицательными. Аналогичные ае результаты были после введения штамма 62, через 6-7 месяцев все поголовье привитых животных реагировало негативно. В стадах, угрожаемых по бруцедяьзу или в которых эта инфекция только начинала развиваться и где животных своевременно прививали по этой схеме, сравнительно быстро удавалось предупредит^ возникновение острой вспышки и распространение бруцеллеза.

Вакцинация условно-благополучного поголовья коров позволяла снизить количество положительно реагирующих на бруцеллез животных н сократить срока оздоровления стада.

В неблагополучных по бруцеллезу стадах { острый очаг), ь; нашим данным, этот способ вакцинаций может провоцировать- аборты у Лолышх и находящихся в иккубашгонно» периоде яивотчых, т.е. он не яре ;упревдал развитие инфекции я не давал положительного акцепта. ' '

Анализ резул .татов пршенеипя этого метода в хозяйствах с ¡-¡злЛчноН эпизоотической обстановкой показал,-что вакцина из

не пизюз&ег абортов у фгрвдемшх коров, а у здот-оит лль-отяил не пызктс".' оорвзошшт с.пешфйче'пгих анхатед, улаьли-васмых оиофабричным антигеном ь РА и КЖ. Применение двухэтажной вякнкивш*!* "ото.'тле йнкмцииро^етт, чес

«котя ж зр.т>:п":з от схиль.исги. При атом благополучное по бруцеллезу поголовье ;:швоткых через 6-7 месяцев не реагирует на бруцеллезный антиген, а абортогенность вакцины из шташа 82 в этом случае с чихается в 2-3 раза. В хронически неблагополучных сходах по бруцеллезу после применения зтого метода количество абортов и выделение положительно реагирующих животных в РА и РСК сокращается. В острых бруцеллезтос очагах при развитии инфекции этот метод не дает эшшекта.

Т/п:;г,; оор-чзо:... :;ст;тап';чр наг-ли способ;; р/.-пи^.ч"-- ''г."1"":;':

получен;:!? чу гейтов н изучение

" ГЭьТ.ОЛОГП'ШС.КЧХ СЕОлС"""

В соответствии с поставленной задачей, на птопа.» втяпд

"-'! ЗГ,, а Т.-ТХР л~ сстпкг;!:: ^¡хотро^гтых, йнтцо^отшсо^'С^ст^«-тельных л резистентных к ши мутантов бы'целл. йзыекглие новых неабортогенных штаммов бруцелл вызвано необходимостью вакцинации беремешых коров.

Б результате кровсясягас рябог били получены тнчшшугь"'»- , стрелтоешцпно-, оксагашшо-уотоЯчявыс , нне я некоторые ауксот$о£пие мутанта.

После длительного культивирования штамма 82 на триптозных средах были отобраны стабильные пенициллино-чувствгтельные мутанты бруцелл. Культуры 5-7 - суточного роста рассовали на указанный агар для получения изолированных колоний, которые отсевали на косячки ШИТА. Культуры 2-3,- суточного роста проверяли по культурально-морфологическим свойствам. После четырех-летнсго изучения их, многократных рассевов и пересевов на искусственных •питательных средах и жесткой селекции,-для работы были оставлены 13 культур бруцелл. Все они хорошо росли на печеночных средах, давали выраженную положител. .1ую реакцию о бруцеллезными $ - и Р -сыворотками и отрицательную термоагглютинацию, слабо реагировали с трипафяавином, не росли в присутствии 2,5-5 ед/wi пенициллина и давали слабый рост на среде при 0,5-1,0 ед/мл препарата, были чувствительны к эритритолу и тионину и репродуцировали в присутствии фуксина. При проведении полного комплекса исследований в дальнейшем была оставлена одна культура - вариант 6, которая и явилась основой шташа В. abortus 82-ПЧ и используется ч настоящее время для изготовления вакцины.

После"трех пассажей через организм морских свинок, культура сохранила исходные свойства :t высокую чувствительность к пенициллину и .эритритолу, агглютинабельность в S - и сыворотках, характерную окраску колоний, минимальную остаточную вирулентность на морских свинках. В дальнейших исследованиях эти свойства явились основными маркерами для штамма 82-ПЧ.

В проблеме применения вакцин одним из актуальных является вопрос их стандартизации. Дж обеспе-эния этого фактора при изготовлении вакцинных препарате: яреЗуеазя с 'одной стороны использование достаточно стабильнь t гк> бп ;ло треской характеристике штаммов, с другой. - необходимо пролод гаь постоянный контроль за состоянием их свойств, так как важно выявить начальные признаки изменения и своевременно предотвратить их последствия.

По данным Салтыкова P.A. (1976), любая популяция бактерийных штаммов венетически неоднородна вследствии возникновения в ней спонтанных мутаций. В связи с этим езтор поднимает вопрос о совершенствовании способов сохранен я лвойств вакцинных штаммов. Основными из них он считает лйофклизащш, пассажи через лабораторных животных и изучение отдельное особзй из популяции этих

ВТ8ШОВ.

- 15 -

Стабильность свойств штамма 82-1ТЧ изучали в течение 14-летнего культивирования на искусственных питательных средах. Культура этого штамма прошла 15-кратное пассирование через организм морских свинок и о-кратное - через организм крупного рогатого скота, в том числе беременных коров.

Для контроля биологических свойств популяция штамма 82-ПЧ проводилось из.ъч'чше свойств исходных культур и отдельных колоний из них, культур после целенаправленных последовательных пересевов на питательных средах { 50 - на агаровнч и 30 - бульонных), лро-ас ыих T-J5 пассаже!: на морских свинках и 6 пассажей - на крупном рогатом скоте, а также культур для изготовления серий нативной и cyxoii Бакинец.

lie 'ледованш показали, что культурально-морфологлческие свойства разных культур исходного штамма 82-ПЧ идентичны - он сохрг-няет свою генетическую характеристику.

При электронномикроскопичеслом исследовании ультраструктуры бруцелл штамма 82-ПЧ в сравнении со штаммами U2,I9,5^ и 5-1096 отмечено, что он относится к морфологическому типу 4. Овальные клетки'имеют размеры 400-600 нм по короткой оси и 900-1200 - по длинной осц. Трехслойная стенка почти не-имеет складок, 70ла1::на ее составляет 8,е~2 нгл. Цитоплазматичеокая мембрана у.зы-ласта, всделстгле чего периплазматическоо пространство ::,.;п .» раз-лкчнуа лирису от т4 до 25 нм. Электронная плотность eic относительно высока. Пижркбосояы сконцентрироваян преимущественно '¡о перемеряй клетки ;; шоюфакг.о высокую электронную плот иосп,. Нунлеощ располагается ¡;о.\:яаитно в центре клетки л, наоборот, дмбег низкую электронную плотность. 3 пего вкраплены многочисленные гршгули включения. Ыезооош встречаются повсеместно в виде иетлевшных и концентрических мембран.

В отличие от штамма 82-ПЧ, у бруцелл других ггмг.пв rvrerc--нал стенка аяг.иистпя и складчатая. Кроме того, г .-.гакроотк ток штамма С2 цитоплазма -ллг -равномерно мелкогранулярный и дирфузгай нуклеоид, расположенный по всей 'поверхноетт клетки, чередуясь с полирибосомами, которые тлеют высокую злектроннуп плотность и также располонаяа по р.сей клетке.

Таким образом, результаты исследований ультратонкого строения бруцелл штамма 62-Щ позволяют констатировать, что структурные эламенты его организации хорошо выражены, но по некоторым морфологическим признакам они отличаются от других штаммов бруцелл.

2.4, Изыскание питательных сред для культивирования бруцелл

Известно, чю для выращивания бруцелл в настоящее время широ-ко.использупгся дорогоегоя1ДИ8 среды о использованием пищевых белков (мяса, печени, рабы и др.). Интересы пракиши требуют изыскания дешевых полноценных сред.

. На протяжении ряда лег.в ВЬЛБИ ведутся испеания в направлении поиска эффективных питательных сред для микробиологических целей, ва основе гидролизата из непищевого белка - тканей плаценты, эмбрионов, матки (П1Ш), являющихся отходами производства мясокомбината. Работами Хаертыноаа СЛ., Никитиной В.А,, Мамлеевой Н.К. (1975, 1981, 1986,1987) показана эффективность этих сред для микроорганизмов различных систематических групп.

По данным Корунова В.П. (1973), бруиеллы являются аминогетеро-грофными микроорганизмами, которые, в процессе эволюции, приобрели высокую сяздань паразигировашщ в организме животных и человека, удовлетворяя своп питательные потребности за счет готового субстрата (аминокислот); имеющегося в организме. В связн с этим, ПШЛ представляет интерес в том отношении, чго, будучи продуктом ферментативного (трилтического) расщепления белков, он содержи!; широкий спектр аминокислот, играющих важную роль в метаболизме бруцелл. Кроме того, в плацентарной ткани содержатся гормоны, витамины, стимулирующие репродукцию бактерий. При этом необходимо отметить, что исходное сырьв для изготовления ЛШ в 10-15 раз дешевле по ".равнению со стойкостью пищгшх продамся, используемых а традиционных средах.

Свойства исходной культуры игамча Я2-1Щ и продуцируемой попу-этого штамма при длительном пассировании и культивировании на агаровых и бульонных средах ГПЯД и ШПТа в сравнительном аспекте со штаммами 82 и 19 изучали по следующим показателям! выживаемости бруцелл на агаровых средах, оптической Плотности роста в жидких-срадах, морфодогии колоний, ишкгориалънил свойствам, диссоциации, росту в присутствии пенициллина, тионш а и фуксина, серонодородо-образовашш, уреазной. и каталазной активности» Исследования культур проводил через кагдые 10 пассажей.

Изучение эффективности агаровых оред для вакцинных щга:..,лов бруцелл при длительном их пассировании показало, что эксперкген-" таяыше среды яа основе ГПсМ яэ ус -упали, а иаогдь и превосходили традиционные печеночные орады, Колонии бруцелл на них были более крупными и рост их начинался в более рашше сроки, чем на печеночной среде. Причем морфология их оставалась типичной. Пассирование бруцзлл на средах ШШ не отражалось на их биологический характеристике.

После длительного пассирования на бульонных средах о последующим высевом на соогвегогвумдий агар установлено, чго яа среда ЛЗЛ колонии появляются на сутки раньше, чем яа ПЩТл. Тенденция к лучше^ росту ш г.82-ПЧ на среде ШШ нос. л а отагиотическ:. достоверный характер. Величина оптической плотности после дозированиаго посева бруцелл также свидетельствовала о высокой э;*фвк$изяооти среда П1Ш. Однако длительное пассирование бруцелл в жидка*, средах может1 привео-ги к фвнотптвокт изменения?" при ояраоке колоний, гогорые снижаются пересевами на агаровых средах.

Исследованиями установлено, что длительное последовательное . пассирование бруцелл штамма 82-ПЧ яа агаровых средах ИЗ.! и ПШТА не изменяло их биологической характеристики, кулыурально-морфологи-ческие свойства были аналогичными исходной культуре; Ш3.1 л^ляется хорошей росгостимулирующзй основой питательных оред для вирыцира-ния бруцедл. По материалам исследований получено пологительнс ~ решение яа выдачу патента.

Вакцинный штамм 82-ПЧ не отличается от других штаммов бруцелл по к-Гйлазной и уреазной активности.

Проведенный качественный и количественный аминокислотный анализ бактериальной маооы бруцелл 82-ПЧ в сравнении с штаммами 82,I9#i-I09B показал, что существенных различий межу г.имп яе отмечается, Однако по относительно*»^ содержанию ашнонксдо! 'iui несколько отличались. Наибольший удельный вес в суммарном, содержании амино-киолот у шт.82-ПЧ составляют глугаминов-дя кислота. и серия^

которого было больше яа 4D%, чем у других штаммов, "в.наименьшем количестве содержится фенилаланин, лейцин, изолейция. У бруцелл штамма 82 наибольший удельный вес занимали» алаяин, лейцин, лизия, глугакиновая кислота.

2.5. Изучении биологических свойств штамма 82-ПЧ

Одним из основных требований, предъявляемых к живым бруцеллезным вакцинам, является хорошая приживаемость, интенсивное обсеменение бактериями внутренних органов и лимфатических узлов, быстрое освобождение от них организма животных и выраженная иммунологическая перестройка.

Приживаемость культуры- ата-лма 82-ПЧ изучали в 4 опытах на морских свинках и в 2 - на крупном рогатом скоте. Свинок иммунизировали в дозе 2-3 млрд м.к. и убивали через 3, 7, ТО, 15, 2Т, 30, 45, 60, ЭО и 120 оуток после вакцинации. Инфицированность морских овинок составила через 3 недели через месяц -23Я, 2 месяца - Ю%, 3 месяца - 0%. Процесс очищения привитых морских свинок начинает отмечаться через месяц-после вакцинации и заканчивается к 2-2,5 меся дам. Через 1,5-2 месяца у отдельных свинок могут высеваться единичные культуры вакцинного-штамма. Наибольшая внсеваемость микробов отмечается из регионарных лимфоузлов и селезенки. Максимальная инфицированное гь достигала до, 70%, средний индекс инфицированное та составлял БОЙ.

В опытах на крупном рогатом скоте использовали 18 голов чивог-ных, в том чиоле 12 телок 16-18 месячного возраста и 6 коров, тлеющих 3-С месячную беременность. Животных прививали вакциной из штамма 82-ПЧ в дозах 50, 100, 150, 200 и 400 млрд м.к. и убивали через I, 2, 3 и 6 месяцев после вакцинации. Культуры вакцинного штамма высевались у животных только в течение месяца после вакцинации, об-садекяемость у них ооставила в пределах 5-20%. Культур бруцелл из плодов не было получено.

Шташ 82-ПЧ обладает о патотной ви гулентностьи, обеспечивающей приживаемость бруцелл и вреь гнк; з ci хранение их в организме животных. Исследования вирулентных свойств этого штамме Проведены в 4-х опытах на 300 иорских свинках. Кавотнкх иадниэировали в дозах 10, 100, 1000 10000, I млн, I млрд и 3 млрд м.к. в I мл. С этой целью использовали юмизнне и сухие культуры, пассированные и полученные из отельных серяй нвткеноЯ.вакцины. Зевотных убивали чер*э 20-25 суток после вакцинации*

Саытачи 7С1»но»леяо, ■что вторит з культуры бруцелл высевались от мороквх евино», привитых в дозе Ю000 м.к. и выше. Индекс

инфицированное« у свинок на введение такой дозы составил 23-Й5/', а введение на 100 тис м.к, -50-70На дозу 1000 м,к, получена I культура вакцинного штампа, на введение таътж дез культур не выявлено.

Таким образом, минимальной инфицирующей дозой штамма 82-114 является 10000 м.к., при введении которого бруцеллн обнаруживается у большинства морских свинок.

Возможность миграции кулмуры итамм-а 82-ОТ от вакцинированных к невакцииированяым проверяли в двух опытах на морских свинках и в опыте на крупном рогатом скота,.

В каждуо из 5 клеток помещали по 5 голов привитых вакциной из штамма 82-ПЧ в дозе 3 млрд м.к» и 5 непривитых морских свинок» Животных убивали через 10,15,21,¿0,<»,60,90,120 суток после вавцши*-ции. При бактериологическом исследовании подсаженных нопривитнх овинок культур вакцинного штамма на было получено, при исследовании ог них сывороток крови в Ра и РСК гадзе получены отрицательные результаты.

Миграция вакцинного лгамма яэ установлена шал в ошхэ на галках, В колхозе им,Го-кого Оренбургской области в гурте, находящемся яа откорме, из 290 бычков и хеяоя в возрасте 12 дееявев, привили 50 голов вакциной из штамма 82-ПЧ в дозе 100 млрд м.к., остальное поголовье было невакцянировайо против оруселлвэа. При ежемесячном серологическом исследовании 1до 6 мес») в при исследовании серед убоем непринятые животные на бруцеллез ае реагировала*

Антигенные свойства'тгаша 82-ПЧ изучали на морских свинках, кроликах и крупяом рогатом окоге. Морские свинки, привитые вакциной из штамма 82-ПЧ в малых дозах, не реагировали а Ра а РСК о «Змофабркч-яым антигеном. Шзяотйгвдмые показатели в Н2С были огывчвицу животных, привитых в дозе 10000 м.к. и вше, Агютншшы у привитых ¡»вводных а дозе 2-3 шрд м.к. выявлялись яа 7-е оугки, достигали максимального значения на 15-0 оу т (у огдедышх животных до ф ЫЙ), В последующем они постепенно исчезала и лишь единичные овивки сохраняли полежитедьнув РА з Гаграх 10-20 А® белее шеяцо, '

У кроликов агглютинины выявлялись в болап высоких гкгр^ос I до 80 МБ через 15-20 суток) я более предолжиггльяов арекл. Через 2 месяца после вакцинации антитела обнаруживались в пределах 10-20 ЫЙ,

В экспериментах на крупном рогатом скопе установлено, чю в оборотке крови привитых «ивотных агглютинины выявлялись На 7-е сутки, максимальный их уровень отмечен на 14-40 су тки и составил 50160 МБ® в дальнейшем лишь единичные кивогные реагировали положительно на биофа'бргчный антиген, но титры были ниже диагностических.

При исследовании сывороток крови с гомологичным антигеном уровень антител был выше и выявлялись они более продолжительное время.

Сенсибилизирующие 'свойства штамма 82-114 изучали ни морских свинках и крупном рогатом скоте, Положительную аллергическуй реакции на бруцеллин через месяц после однократной вакцинации довали 21,1% а на аллерген КШ - 56,52> морских свинок. Через 3 месяца после вакцияапли число реагирующих животных уменьшилось в 3,5 разы. Через месяц после двухкратной вакцинации процент реагирующих тавотных па бруцеллин составил 10,на аллерген - 42,

При изучении аллергического состояния крупного рогатого скота на введение вакцины установлено, что через 2 месяца после зрвичной вакцинации из 12 нетелей, в т.ч. 5 голов имеющих 2-4 месячную беременность, 80^ животных реагировало на аллерген. Привитые животные на бруцеллин давали отрицательную реакцию.

Нммуногениые свойства штамма 82-ПЧ'изучали в 7 опыта* на 938 морских свинках и в трех опытах на 85 головах крупного уог^ого скота,

В опытах на морских свинках напряженность иммунитета испытывалась в зависимости от взятой в опыт к^лыгры (исходные дативная и су^ая, Пассированные и др.), дозы в .кциш (0,5-"-1,5-2-3-4-5 млрд м.к.), срока (2-2,5-3-4-4,5-5.месяце ' ш. ;яе вакиг. нации) и дозы заримаця (25-50^-100 м.к. в зависимости от лщацЕи),

Ис"ледованшши установлено, чю наиболее и^муногенной для морских свинок оказалась культура штамма 82-ПЧ (вариант6), оптимальная доьа вакцины .составила 3 млрд м.к,. Оптимальный срок для заражения привитых морских свинок - через 3-3,5 месяца'после вакцинации, & оптимальная дозь аирулентного штамма (10 минимальных инфицирующих доз) 50 м.к.

Исследования показали, чю у морских свинок, привитых вакциной из Ш1.82-ПЧ в дозе 2-3 млрд м.к. и зараженных вирулентной культурой в дозе 50 м.к. через 3-4,5 месяца иоолч вакцинации« напряженность

имму.штета составила 75-9СЙ при Ю0;£ контрольной заражении штатных ЯИВ01НЫХ..ШИ - 60-Э0Д).- - - ----------- -----

В первом опыте п- определению иммуногеиноеги вакцины аз штамма 82-ПЧ на крупном эогатом скоте использовали 1елок 14-Г-> месячного возраста в кол!честве 28 голов» из них 6 голов привили вакциной из шГамма 82-ПЧ в дозе 100 млрд м.к., 1С голов ~ вакциной из шгв82 и 3 головы были интактныв, Через 3 месяца после ванцннацш: сыворотки крови опытных яивогних реагировали в Рл а биофабрачнш антигеном в пира.', ниде диагностических, в РСК - они давали отрицаге.зную реакцию, с гомологичным антигеном-в обеих реакциях» Животння заражали через ? месяцев посла-в«ки«н«»ции вируле...гно2 ..ультуроз в дозе I млрд м.к. Напряженность иммунитета в эуом опыте составила 50&,

Во втором опыте использовали нетелей в возраста 16-19 месяцев в количестве 21 головы, из них 6'имели 2-4 месячнув стельность» Необходимо было определить аб^ргогенносуь вакцины аз штамма 62-114 и ее иммуногенность на стельных животных. Для этой цели вакциной иь штамма 82-ПЧ в доза 100 ;лрд м.к. привили 6 голов (всех беременных),. шг.82 - 3 головы и 3 головы были ипГантными, Через 5 месяцев посла Вакцинации опытных и контрольных нивогных з.^олалд вирулентной куль-•гурой в дозе 100 млн м.к.

Рвзуль а ты опытов показали, что в течение 5 месяцев после вакцинации и 33 суток после заражения абортов у привитых животных не отмечено, получен один здоровый теленок. При убое у 5 нетелей, привитых вакциной шт.82-ПЧ, обнаружены хорошо сформированные плоды в возрасте 6-9 месяцев, устойчивость я заражению опытных аивот-;шх были в пределах б?*.

В третьем опига использовали 36 голов нетелей, из них имели беременность от 2 до 5 месяцев. В о. ле предполагалось определит!, реакгогенность вакцины из шгамма 82-ПЧ в дозах 50-400 млрд м.к. для беременных нетелей и установить для ш»х оптимальную иммунизирующую дозу препарата. С этой целью хивотных ионизировали в дозах 50,100, 150,200 и 400 млрд м.к..

Результаты исследований показали, что агглютинины в сывпроткз крови у 90/2 опытных хивотных обнаруживались максимально да 10-^0 сутки, затем шло их сапнла. и угасание реакций через 45-60 оуюк, причем титры были низкие (40-80 МВ). В РСК на 20 сутки реагировало в разных группах 68-100$ животных.

Заражение иштпааровшших и контрольных животных проводили чврвз 4 месяца посла едаунизации вирулентной культурой шт.54 в дозе 100 млн м.к. Результаты исследований показали, что вакцина из штач-•ма 08-4И в дозах 50-400 млрд м.к. не была реакгогенной для беременных нетелей, Ыаксшальнув устойчивость (80£) к заражению вирулентной культурой имели животные, вакцинированные в дозе 150-200 млрд м. (ИИ у них составил 1,4#), 60£ животных защищала доза вакцины в 100 млрд бруцелл (HU-U/I) ирк интенсивном инфицировании {Ш~41%) контрольных животных.

Результаты п^югисгслегических исследований органов и тканей нетелей, иммунизированных вакциной из штамма 82-ПЧ в разных дозах, аоказилн, что более выраженные лим$оидно~гиперпластичбские, макро-фатальные, нлизмоклеточные реакции в лимфоузлах и селезенке и активизацию элементов рап^уло-гиетлоцигарной системы во внутренних органах вызывала вакцина в дозах ICO и 200 млрд u.R. У телок, вакцинированных в дозе 50 млрд М.&., иммуноморфологические изменения проявлялось слабее. У животных, привитых в дозе 400 млрд м,к.у в лимфатических у злых в селезенке отмечались .явления делимфстизации и фибротвзации тканой. Крсмо toro, продолжительность и интенсивность прллаферации антктелоббразувщих клеток в процессы их диффереялиа-Сях гагасв находилась в прямой завысямооти от дозы введенной вакцины.

Заражение вируленгаой лулыуроЗ бруцелл у вакцинированных хйаьхяых вызывало усиление иммуномор^ологических изменанй в лямфо-тщяцт органах* Изучение локализации в клетках цитоплазмагических ¿атиондах белков флюореоцвнтно-оимхимическимп реакциями показало, 4X6 наибольшее количество tu отмечалось в лимфоузлах и селезенке . животных, иммунизированных вакциной из штамма 82-ПЧ и зараженных pispes 4 месяца вирулентное культурой бруцелл. Показатель как колтес ква гранулоцитов о катиоНдыми белками, ras г интенсивность их флуорс цекцни лязосомаых кагнояяы* белков у этих гелок превышал показатель Жн«ак«яых животных в 2-3 раза.

Таким образом, вакцина из щгаыма 82-IN в дозах 100-200 млрд м.1 являегоя иммуногенной, вызывает в органах и тканях иммунизированных Жйво1яых доброкачественные изменения, свойственные вакцинному процессу и может создавать достаточно напряженный иммунит против вирулентной культуры бруцелл. Обнаружение большого числа зрелых ,

□лазмоциюв в ликвидных органах телок, а ТаКЖб ЗпаЧЛОЛЬНОв число гранулоци^ов о содержанием большого количества лизссоиных катаошшх балков также свидетельствует об иклуногеннооти эакцшш.

Основное качественное отличие вакцины иь ытамь.а 82-ПЧ от других противобруцвллезных препаратов является его слабая рвактогенлосгь» Результаты исследования показали, ЧТО ЭТОТ ИГа.^/^ хорошо приживается в организма беременных галок, пе айорюгзнвн, вызывает выравненную им^.уног/ор^ологпческую перестройку орг-.и.зма г. создает при згом достаточно напряженный иммунитет против окопе резательного заражения. У воех вакцинированных в разных дозах не га лей, в ток числе и поо.ча заражения их вирулентной культурой оруцелл, плоды Развивались нормально» В ма!ке и плаценте животных, а также в органах плодов (печени, селезенка,лимфоузлах) патологически изменений не отмечали.

Таким образом, анализ имууиомор^ологических, ульграотрукгурннх, гистохимических, имхунофлюоресцентных, иммунологических и серологически исследований ПОЗВОЛЯВ Г СЧИТАТЬ НОЬЫЙ вакцинный ШТаММ 82-ИЧ высокоиммуногенным препаратом, вызывающим внражьндыз иммуноморфологи-

ческие изменения в органах прилитых животных. Кроме того, результаты исследований ПОКаЗаЛ!', Ч1'0 ИММуНКЗаЦЕП животных против бруцеллеза необходимо проводить в дозах 100-200 млрд м.к., а повторную вакцинацию - в период полного затухания аллергических и специфических процессов, обусловленных первичной иммунизацией, через 10-12 месяцев после введения антигена,

2.6, Иммуноморрологнчвская оценка вакцины из шгамш Й2-ПЧ

Об эффективное«! вакцинных препаратов можно судись лишь на' основании результатов комплексных исследований иммунобиологической перестройки организма привит* животных. Иммунитет, приобретаемый, в результате вакцинации, является результатом сложных реакций организма и создается двумя системами— клепочной и гумерад&ной» (Пвгроз Р.В,, 1976),

Исследования показала, что новый г ишинный штамм бруцалл 82-114 достаточно хорошо пукашвавтоя в организме.щ>гви1цх живо«адх и бызы-ваег в нем выраженные им'/.уноморфояогичеокив изменения. При п чецвд динамики изменений улыраотрукгуры клзгок лимфсидных органов морских

свинок наблюдалаоь нарастающая фуякциоь-аьная активизация лимфоцитов и макрофагов селезенки и лимфоузлов уже в первые сутки после иммунизации. Наличие бруцелл в цитоплазме этих клеток на 3-й оугки указывает на активный фагоцитоз, который в последующие сроки исследований отмечался и в конгррегионалышх лимфоузлах. На 5-7-е сутки в цитоплазме иммуяокомпегентных клеток обнаруживали бруцеллоподобные частиш о деогруктивной клеточной стенкой, что является результатом частичного переваривания бруцелл. Об этом факте говорит наличие в макрофашв. множества лизосом и остаточных телей. На 10-е сутки в макрофагах лимфоузлов выявлялись фагосомы с полупереваренными бактериями, а через 14 Суток - в них отмечались как клеточные фрагменты, ■ гак и оотатки бруцелл. Видимо, в этой случае имел место фагоцитоз клеток нагруженных бруцеллами. На 14-2х сутки в лимфоузлах огмеча-лооь множество делящихся стромальных клеток, которые, вероятно, замещали иммунокомпетентные клетки.

Наивысшая выраженность специфических и аллергических изменений в органах и ткангх наступала на 14-е сугкк после иммунизации и оставлялась на этом уровне до 28 суток. К специфическим изменениям относятся гиперпластическо-макрофагальная и плаьмоклеточная реакции, а также повышенный синтез РНК, глобулинов- в лимфоидных органах и цитоглазмагических катионных белков - в гранулоцитах. Аллергические изменения характеризовались мукоидным набуханием стенок мелких кровеносных оосудов, эозинофилией, гомогенизацией ретикулярной стромы, отеком и разрыхлением периваокудярной ткани грабекул и очаговым скоплением лимфоидяо-гиогаоцитарн"Х клеток в трабекулах и парентима-юзных органах.

Следует отметить, что через 45,60 и 120 суток после вакцинации иммуноморфологические изменения затухали и подвергались обратному развитие.

Следовательно, фагоцитоз бруцелл вакцинного штамма лимфоцитами г макрофагами иммунокомпетентных органов сопровождается перестройкой структурных элементов этих клеток, лизисом микроорганизмов В фаГО-лизосомах и переводом их в иммуногенную форму. Вакцина из штамма бруцелл 82-ПЧ вызывает не толыЛ выраженные, но и обратимые иммуноморфологические изменений в органах и тканях.

•В лимфоузлах и селезенке опытных животных в разгар иммуногенеза отмечались высокая активность кислой фосфа-тозы в Т-зависимых зонах

и щелочной' фос$атяз!г в В-залиоп-ппсзонахт- что-указывает- на- активи-- -

зацию Т- и В- клеточной реакции. Изучение динашки Т- а В- лимфоцитов в периферической «роди подтверждает это уже на 7-е сутки увеличением процентного содержания клеток. На 14-е сутки по .азатель Т- и В- клеток вакцишц.оьашшх животных превышал таковой у интактных ди-Естшк в 2 раза, °пта:.т отмечалось постеганное их снижение.

Гпстслог/ческке л им.гу¡юфлюоресцентные исследования показали, что количество аахителообраэующих клеток ь лиыфоуалах л оелв&Ьпке возрастало с первых суток после иммунизации морских свинок и к 1014 —u i;v Т nui: j lit ¡uiu MriKGIL".icLJibilGi'o л nci ч u .i àiH., itpcBcimcifi УРОВЕНЬ iiit—

тактных животных в лимХоузле в 4,8 раз , а в селезенке - 6,7 раза. Lotît отмечалось постеленное сп.гасние уровга глобулннсодеряащих клеток к I2C- суткам (срок наблюдения).

Одновременно с увеличением количества антителообразупщих клеток происходило изменение и п качественном составе плазматичь .<их клеток. Через 3 дня после вякцг'-.чиш ¡аблюдалось увеличение количества плч-з.гобластов в 3 раза и л;;гтТопл~змоцитов - 6-Т5 раз. Зрелых плазмоци-

■■ . • Г; г-.аа. Ч". 1Г.0 оутск иосла iu.t '.viinaaiytii уровень зтих .■ \: л ■ .;-у-.¡лал :феви:-.;!Л таково/ ,у интактных лг.во'.-

: '¡vr ra.vrrva:!, пг.'гя ;тсп .¡ааулатгаппаат;;' r:irv~ pi'i:.ij

: "o'j'.î:, fibjивобр/пеллезнс.м п.пунпте'!- неръостеш н-

- ,:i4;r ' ! алаточтактори замлхп. Известно тнк-е, что в

- ' ' - ■ ' > " ' ' ; ' a ï Т Л Л'' ЛЛ"' [' с 7ИС ' ' ' ООТЛ<П"ЛТСЧ

" •-.;■!•! '17 ■ '1 к - i - ;>а;арел!':льп;о-:!, 'гчние грануле'.'.г, -гго связано с остаточной вирулентностью вакцинных штаммов ( Куцдрюкова Л.И., 1984).

ничние или очаговые скопления эпителиоидных клеток, что связано, по-видимому, с низкой остаточной вирулег-чюотью этого штамма, а также быстрш фагоцитированием и переработкой его макрофагами.

■' ' 1'!' "'j-iL l'a Г Г) я HCC T'J ¿10 li'f НИИ ПО'ЙаШЗаПТ , [ТО ЮКЦПЧШЧ' Л^ПЛ

i ,гр.::,етоя слабо pjrunv"вшшм и тянвает обратите аовтгокшишп ные изменения в органах и тканях. не выходящие за рамки вакпииаль-

ЛОГГ, ;:,;r>ÎTSCC(. привитых чивотннх.

Таким образом, вакцинный штамм бруцалл 82-ПЧ является достаточно им!.-уногвнным и способен индуцировать образование в лимЬоидяых органах большого количества ангителообразующих клегок, их созревание и переход в более зрелые формы.

2.7« Производственное испытание Еивой.нативной Вакцины из штамма 82-ПЧ на крупном рогатом скоте

В 1980 году проведено Производственное испытание вакшшы из штамма 82-ПЧ на крупном рогатом скоте в производственных условиях. Согласно распорлжеяйю 1УВ ЫСХ РСФСР, вакцина из штамма 82-ПЧ иммунизировали независимо от стельности 149 коров в совхозе "Волжская коммуна" (огд.5) Оренбургской области. Результаты опыта показали, что в течение года после вакцинации среди привитых животных абортов поствакшшадьного и бруцеллезного характера «а зарегистрировано. При контрольном исследовании сыворотсх крови через 2 месяца после г.-шщ:-нации были выявлегл единичные положительно .реагирующие животные в РА и РСК. При исследовании всего поголовья через 6 месяцев выявлено 5 голов, реагирующих в Рл (1:100) и РСК. При повторных исследованиях все гизогные не реагировали на биофабричный антиган. Аналогичные результаты были получены и при вакцинации коров в колхозе им.Калинина,

После детального анализа применения вакцины с участием представителей Г/В и ветотдела было принято решение о дальнейшем испытании вакцины из шт.82-ПЧ в хозяйствах области. В период о 1932 по 1956 год было привито отой вакциной в 27 хрзяйствох области более 20 тысяч коров и нетелей. Работа проводилась в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу. Молодняк прививали вакциной из штамма 82, а все маточное поголовье- одновременно, независимо от стельности- вакциной из штамма 82-ПЧ. Прививка проводилась только по е.рпцательноыу серологическому фону после удаления из гуртов всех подчжигельно реагирующих на бруцеллез животных.

В благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах у привитых животных отмечались .Нормальные отели, аборты не регистрировали.отрицательные результат В .РА и РСК с бнофибричным антигеном

отмечались уже чароз 4-6 сесядав.

-27В уоловно-благополучных и неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, в которых перед вакцинацией, среди коров выявлялись_положигель------- -но реагирующие-на брунеллез, ч в некоторых- имели место аборты, привитый скот реагировал негативно или коли'.зсгво реаг:.руищаго скота резко сникадось.

В этих хозяйствах регистрировались единичные аборты, но при исследовании аборТИрОЪаВШИХ КОрОВ И абОрТИрОВаННЫХ ПЛОДОВ, К8К правило, получали отрицательные результаты. Необходимо отманить, что ни в одном слечае яри этом нв была полупака культура вакцинного штамма 82-ПЧ. При исследовании всего привитого поголовья коров через 6 месяцев количество ргагируищаго скота резко сделалось и после 2-3 доследований получади негативные результаты (совхозы •'Мирный труд", "Уранбаш" Октябрьского района и др„).

Согласно наставлению по применению препарата привитых коров рекомендуется ревакцшшровать через 2 года» После ревакцинации ^оров вакциной из шГамма 82-ПЧ п благополучных хозяйствах (колхозы "Путь к коммунизму", "Заветы Ильича" Саракгашского района) у животных отмечались нормальные отелы, аборт;г отсутствовали. При исследовании через 6 месяцев в Рл и РСК животные на бруцртлезнкй антиген не реагировали.

В эгог же срок в неблагополучных хозяйствах до бруцеллезу ревакцинацию проводили ш*ышок 82* При зсом в отдельных хозяйствах отмечались единичные абортировавшие животные.

Проанализировав полученные результаты производственных испытаний, а Такие ДаНКЬЗ им^уномореологических исследований привитых коров, ми рекомендовали проводить ревакцинацию через год после первичной прививки.

В 1387-1988 родах, согласно разрешению 1УВ МСХ СССР, вакцин;' из штамма 82-ПЧ применяли в хозяйствах Азербайджана, лркении и йеной Осетии, и тикне в отдельных хозяйствах Саратовской, Курганской, Иркутской£ Шшшской, Челябинской, Волгоградской и др» областей Российской федерации.

В ходе производственного испытания отрабатывались следующие методы применения вакцины: "

- одномоментная и без учета стельности вакцинация всего мят очного поголовья окота в хозяйствах о различной эпизоойтпоскоЯ обетаиопкоИ по бруцеллезу.

- Одномоментная и баз учета сроков стельности вакцинация беременных коров вакциной из штамма 82-ПЧ, а остальных - вакциной из штау,:/л 82.

- Ревакцинация коров по фону штамма 82-И этой яе вакцино;; или вакциной из штамуа 82.

Параметрами контроля эффективности иммунизации служили: сохранение благополучия хозяйств в течение трех лег, отсутствие абортов у привитых коров, серологические показатели до и после прививки, выход молодняка ;; пр.

Основанием для испытания ВаКЦПНЫ в Азербайджане явилась сложная эпизоотическая ебсгановка по бруцеллезу. !Ь I.0I.87 года в 31 районе республики имелось 77 неблагополучных пунктов по бруцеллезу крупного рогатого скота, а больной оког выявлялся и частично оставался на передержке в 29 районах, т.е. 55,1 районов были неблагополучными по этой инфекции.

В республике вакцина из штимча 82-ПЧ использовалась в 16 хозяйствах Геокчайскогг района, в 25- Исмаилинского, в 21-лгДашского, а 25-Швыахинского, а затем евдз в 26 районах в более чем ¿30 хозмаг г-вах привили 46 тысяч коров и нетелей.

Первоначально вакцина была применена б Геокчайском районе, в котором до вакцинации имелось 3 неблагополучных по бруцеллезу хозяйства. Вакцинировали в 16 хозяйствах 3613 коров и петеле;!. После прививки за животными велось систематическое наблюдение. При псс.т'нс-ващш привитого окота через 6-I2-I8-24 месяца количество реагирующего скота Н-. бруцеллез снизилось с 210 до 2 голов - после вакцинации Вакцинированное поголовьо сохраняло благополучие в течение 4 лег (срок наблюдения) лбортов поствакцинаяьного характера но отмечалось;

Агдашокий район относятся к неблагополучным pa£oaa.v по бруцеллезу. При исследования коров пе^ед вакцинацией из 10 хозяйств района было выявлено 65 коров, положительно реагирующих на бруцеллии. Через 6-месяцев после вакцинаиил число положительно реагирующих сре; привитых животных сократилось до 26 голов, которые выявлены в основном из ранее оздоровленных и неблагополучных хозяйств. При исследовании через 12 месяцев пгсле вакцинации выявлено всего 6 голов. За период наблюдения абортов пос-гвакцкпальаогс характера не отмечалось.

¡киболее слоааоя обстаноька по бпуцаллезу била в Шемаханском ЗаЙОНв. ÍÍ3 34 хозяйств^ района, в когоргх имелся крупный рогатий жот, 4- были официально неблагополучные по бруцеллезу, и aya в !9 - выявлялось большой количество положительно раагируо..даго окота, 1 в некоторых ИЗ НИХ отмечались аборты.

По просьбе руководства шемахинокого РлПО вакциной из шгамма 32-114 привили 8217 коров и нетелей в 25 хозяйствах, п т.ч. в 8 - в <су.плексе вакциной из штамма 82.

3 благополучных хозяйствах (".íar^m", им. ¿адендивви, им.Де. . Ькаб-рлн и др.) до вакцинации и через 6 и 72 глее, посла нее животные « реагировал:: за бруц£Л.;ччный лбооюн снеди привитого

5кога не ошечалось.

В 12 условно-благополучных по бруцеллезу хозяйствах до вакци-1ащш вцятлялпеь полоиигельио-реагируидие аивопша в пределах 3,6/«'. 1осле их удаления в á хозяйствах коров привили только аакц.:ной аз ura.v./.a 8-,-ПЧ, а в грех - в кс ллексе со шт.82. Поола вакцинации lepas 6 ¡..ее. положительно реагируи.цих выявлено в 6 раз ниже, а через 12 гее,- на 84« уменьшилось выявление больного скота. Аборты отме-

■1ались ТОЛЬКО Б СОВХОЗв ИМ. A.CáXXa?, Б KOTODOM ДО ВаКЦИНаЦШ! бНЛО знявлено 7 пололи re ль но реагирующих животных, а через 7-10 суток юсле вакцинации отмечено 3 аборта. При исследовании через 6 месяцев зиявили в этом хозяйства 11 положительно реагирующих животных. После трехкратных исследований хозяйство било поставлено на контроль, а 3aTw.\í иивотные были ревакцинированы.

В группу С массовым ВЫЯВЛвНКвМ больного скота 1Х0Д.1Л0 8 хозяйств Тоголовьо коров этих хозяйств v'.'._ .шшали в основном в комплексе с вакциной г" штамма 82, т.е. Есех бэрзмешшх глвотных вакциной из штампа 82-ПЧ, а остальных - шт.82. После вакцинации положительный результат был получен по трем хозяйствам (совхозы "Шамаха", им,Энгельса и им.Сабира) и в^е два хозяйства били оздоровлены после ревакцанациа. В целом по этой группа хозяйогв колич тво положительно реагирующих животных после вакцинации снизилось в 2,5 раза,

■ Через год после вакцинации привитое поголовья ревая'циянрезали,-причем в благополучных хозя.-огвах - г- »кыиной из штамма 82-ПЧ, а в неблагополучных - из штамма 82¿ Поола ревакцинации шт.82-ПЧ в течение года у животных отмечалась нормальные отелы, при серологических

-сследованяях через 6-12-18 меояцев реагирующие не отмечалось.

Аналогичные результаты получены в Армении. После землетрясения >с!гавщиЯся крупный рогатый окот был ообран я размещен в 20 районах республики. Кроме того, было завезено из разных регионов ограны Юльиое количество нетелей,

Соглаоно указанию 1УВ МИ СССР через 1,5 месяца после трагедии нашим участием начата планомерная работа по вакцинации всего маточного поголовья вначале в районах, расположенных вокруг гг. Спитак и Леняяак-н, а затем и в дчугих. В период с января по мац' 1339 года былр привито 36 тионч коров и не гелей в То? хозяйствах 18 районов республик!.

Согласно информации начальника 1УВ Армении Степанлна л.Н., ьакдана из шп'«•:/,а 82-ПЧ показала высокую эффективность при применении в хозяйствах республик*:, отмечаются ее неабортогенные и слабо-■лтлюгиногенные свойства. При ежемесячном исследовании 3245 привитых коров-, через месяц после вакцинации выявлялось максимальное количество реагирующего скота 5,5Я, в т.ч. ь тигре 1:50-67%, 1:100-¿4«, 1:200-7?! коров, на 90 сутки выявлено всего II проб в титре 1:50, В дальнейшем при ежемесячных исследованиях (до года) долуче/ш отрицательные показатели,

Б связи со сложной обстановкой по бруцеллезу, вакцина из штамма 82-ПЧ была применена в 30 хозяйствах на 9000 коровах и нетелях в ЩяоО Осетии. До применения вакцинг в хозяйствах было выявлено больного скота в Цхиявальском районе 150 голов, в Знауроком -64, Цгавсквм -52, Лениногорском- 55 гслов. После применения вакцины количество реагирующим скота снизилось в 6-10 раз, в т.ч. по Цхинвальског/у району в 10 раз (совхоз им.1етагурова и колхоз "Ередви" Абортов поствакпинального характера после вакцинации не выявлено. Через год после вакцщздйл во всех хозяйствах проведена ревакцинация. Но истечении трех месяцев среди ревакцшшроваяяого скота оелгаенэяий не выявлено.

По итогом производственных испытаний наш разработана система мероприятий по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота о применением вакцины из штамма 82-Ш, на которую составлена и утвер-гцена ГУБ ."ОХ СССР соответствующая научно-техническая документация.

По просьба I7B UCX РФ на Щелковском биокомбинате было изготовлено 32 опытно-промишланяые серии сухой живой вакцины из стажа 82-ПЧ. По своим свойствам выпущенные сьрии вакцшш соответствовали всем параметрам, излоденяым внормативвд-гв*'1Ичас*:°Я документации на этот препарат. С разрешения ГУВ MCI В» сухую живую вакцину применяют в ряда регионов страны для спацифическрй профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота (Сараювскад,Челябинская,Волгоградская, Читинская, Иркутска? и др. области).

ТаК, В Иркутской области КУ.!/уНИЭИрОХ.аНО В 1990-ISX ГОДаХ Вакциной из штамма 62-ПЧ в 5-ги районах, 19 хозяйогвах-17538 голов Маточного поголовья. При постоянном охо,.'.еслчкоц контроле аринигих короь и нетелей по кольцэзой реа:шгп с молоком и при плановых серологических исследованиях по Рл и РСК реагирую^ животных на бруцеллея'не выявлялось. Случаев абортов оради привитого поголовья на наблюдалось.

Таким образом, применен: з вакцины из штамма 82-ПЧ дав! возможность стабилизировать осогааовку по бруцеллезу, сохранить благополучие хозяйств от инфекции, в короткие ороки оздоровить неблагополучные пункты по бруцеллезу, уменьшить количество реагирующаго скота, создать единый иммуный фон среди матичного поголовья и возможность одномоментной ревакцинации скота.

3. в ы в о л ы

1. Предварительная (за 30-60 суток) прививка с;алгным коровам культуры В.abortus i-82 или v./IOO дозы вакцины из штамма 82 позволяет снизить абортогенносгь полной дозы згой вакцины до 20-30%.

2. Методой клонирования из различных штаммов бруцелл получены г.утанты, устойчиьле и чувствительные к пенициллину, стрептомицину и оксациллину.

Селекцией на трипгозных средах г цучая новый вакцинный штамм В, abortus 82-ПЧ - пелицллляяо-чувогвигелышй вар-ант вакцинного штагла 82,

3. Основными маркера?«: штамма JT-ПЧ являются:

- чувствительность к пенициллину (не растет на агаре в присутствии 5 ВД/мл натриевой соли пенициллина) и эритритолу (отсутствует ргот на агаре, содержащем I мг/мл препарата),

- -игглитинабельность в бруцеллезных и 5-сыасчогках,

- низкая вирулентность (минимальная инфицирующая доза для морских овинок составляет IOOOO м.к.);

-слабая агглагиноганнооть (через месяц после прививки морские свинки не реагируют в Рл о бпофабричннм антигеном),

- »реактогенносгь для беременных коров (не вызывает аборты при первичное викц-нашк. беременных коров).

4. Штамм 82-ПЧ сохраняет стабильность кулыуральнон/.орфологичес-ких, агглвтинабеяьных и вирулентных свойств, что подтверждено 14-лэтним культивированием его и* искусогве.пшх ппт^тзльлих срецах, 50-кратными по с л а д is а г ль ными пзреоевами на агаровых и оО-крагнк.-.ж

- на бульонных средах, 15-КраГНЫМ пассг.рованием На морских СВННКал п б-крагныу - на крупном рогатом скота, в т.ч. беременных коровах, а такго при изучении агаровых культур, получен.-шх из отдельных колоний, при Изготовлении 55 серий нагивной вакш:.чы во fl.-IjBil и 32 серий сухо,! вакцшш - на Щелкове..ом блокомбийагв.

-6. Разрабог-.'.ная новая питательная cpcia на основе плаценгар-Ни—эмбрионально—v<aточного ггцролизаГа ШШ), полученного из дешь-вого сирья - отходов производства мясокомбината, ПО CBOH.Y ростовым свойствам имеет значительные преимущества перед традиционно применяемыми для кульг.:в.;роаания бруцелл средмш.

Длительное культивирование бруиелл Щ гамма 82-ПЧ К а аГар^ВО.! среда ГП3.1 не изменяло их мор$ологит,?скшс, тинкюопальных, биохи ческшс, серологических- свойств.

6.При алекхрошю-микроскоппч^ском исследовании бруцеллы штау./а. 82-ПЧ однородны, основные структурные элементы их организации хорошо выражены. В отличие от штамма 82 клеточная стенка у них наибольшей юлщины, четко очерченная и,почти не имеет складок, в цитоплазме их • содержится концентрированные элзктроняо-плоЕшэ агрегаты полирибосом

и компактный же нуклеоВД..

7. Минимальной инфицирующей доз о Л для морских свинок является ЮС 0 м.к. штамма 82-ПЧ. Бруцаллы хорошо рассеется и прибиваются в лимфатических узлах и органах в течение месяца (:;,i-50a), к 1,5-2 месяцам они элиминируют из организма и могут высеваться лишь единичные культуры.

- Зо -

--------В арганизме^крушшго рогатого сноп», в т.ч. бер ешшх коров,

бруцеллы штамма 62-ПЧ приживаются в течение 1-1,5 месяцев.~ Индекс шьццированности у ш.х через месяц посдз прививки находится в пределах 5-20,?.

3. У морских СВИНОК, Ир«ВИ1ЫХ ВаКЦИНО,; ИЗ ЦЦаь^а (¿¿-ПЧ В Д036 2-3 МЛр I, М.К. , агглютинины ВЫЯВЛЯЮТСЯ На ?~е сугки, достигая МаКСИ-МаЛЫЮГО значения Ни 15-е сутки И утрачиваются Б концу месяца. ЛИШЬ единичные реагируют в Рл в титре до '¿и „:В.

9. Штамм 02-ПЧ не обладает коягагиозносгыо. В опытах на морских свинках л Круццо:/. рсгагок скоте не уог«но>->1э«»а щц'р-Ааш Сруцлдд

ЭТОГО ШТаММа ОТ ВаКЦ'.ШфОВаННЫХ На КЭПриВЩ'ЫХ ЬИоОГНЫХ.

10. Вакцинный штамм.82-ПЧ обладав/ хорошо выраженной иммунологической активностью. Введенный в дозе 2-3 млрд м.к. визыаал образование хорошо выраженного иммунитета у 75-86% морских свинок. У крупного рогатого скота, прибитого в дозе 100 млрд м.к. - чег ' Ь-7 месяцев иммунитет вираб,..гцБ--\ч в пределах 30-67;?, а у вакциииро-ванного в '.озе 150-200 млрд м.к. - у 80#.

11. Вакцина из дгамма 82--ПЧ сцзивкят и»«муноиор';ологцческую перестройку организма животных, аушшллоцу.зса лнл^ойдно-гапералас-тачеокой, ЧаКро^аГаЛЬНОЙ И ялазмоклеючао^ ¿..мКШШШ в лимфоузлах и селезенке, а также активацией клеток ре¿щ^ло-гасыощн^лой системы во пнугренних органах. У морских, свинок эти процессы затухают через 4 месяца после иммунизации.

Фагоцитоз бруиелл вакцинного ШГаМ.'.а ЛП|\'40ЦП1а'/,И И Макр0.раГа.МИ им-лунокомпетеигных органов сопровождай гея перзогпо: ;ой структурах ¿даиеихоа этих клеток и лизис,- : микроорганизмов. При этом отмечав год повыше"из уровня 1- и В-лимфоцитов в крови максимально на 14-е сутки, нормализация их происходит через месяц посла инокуляции препарат».

12. Разрабо. ла система протизибруиеллозных мероприятий с использованием вакцины из штамма 82-ПЧ, составлена и утверждена соответствующая нормативно-технически - документация,

13. Вакцина из штамма 82-ПЧ эффективна при п'\шенешщ на крупном рога-том скоте в общем комплексе органмз,-ационно~хозяйпгвен-ннх я ветеринарно-санитарн!'.; прогиво'руцедлезкых мероприятий» Использование вакцины дс.ет возможность одновременно чакцинир^вать все поголовье скота, в том числе норов я нетелей независимо от стельности,

itii а благополучии* (угрозивтх), гак -и неблагопг луч/шх по Оруиел-лвзу хоз -:'сгвах.

14. Ревакцинация крупного рогагого скога вакииной из штампа ¿2-ПЧ повышает его устойчивость к заболеванию бруивл'.езом. Оптимальным сроком ревакцинации является 10-12 месяцев. После ревакцинации серологические исследования животных на бруцеллез допускается начинать в благополучных хозя!.огвах через 6 месяцев, в неблагополучных - через 3-4 месяца.

15. Изго-овле.чнце на мэлковском ококомбинате 32 серии оухой айвой вакцины из шта,\:мй 82-ПЧ По современной гехноло!.:и, в том числе на £вердых п жидких»питательных средах, при контроле соответствовали требования;,' ¿ахничесяих условий.

4. ПР-ОШЧССКИБ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Предложен новый вакцинный шг^та В. abortus 82-ПЧ для профилактики бруцеллеза кругного рогатого скота, в тс ; числа берег-'.енннх короз л нетелей U.C. й Ï04490 от 10.04.83 г.} положительное решение ВШИГПЭ на'выдачу патента от 26.Л.91 г. по ^лвке 4Я7341/13 (090465)

В связи о этим разработанн:

1. Технические условия на нивую н-..-;:внуч вакцину из ш1а;,:;,;а 82-ПЧ против бруцеллеза крупного рогатого скота (Утверждены Г/В .МСл ССОР 15. октября IB86 года).

2. Технические условия яы "жилую сухую в..кц;<я;' «э шмя.:а 82-ПЧ против бруцеллеза крупного рогатог- скога (У гвер;г.дены- СУ В Î/.CÀ СССР 13 ноября 1991 года).

3. Временное наставление по применению живо»'; сухой закыпны из о таму.а 82-ПЧ против бруцеллеза крупного рогатого скота (Утверждено ГУБ МСХ СССР 13 ноября 1991 года).

4. • Временное наставления по применении ¿сивой натавной вакцина из 82-ПЧ против бруцеллеза крпного рогагого скота (утверждено дарокюром ВНЖ1 21 декабря 1933 года).

5. Временная инструкция по ч,зготовленив ь контролю д.ивой натив-ной вакцины из штамма 82-ПЧ прошв бруцеллеза крупного рогатого скота (Утверждена директором 3!Г.Ш 21 декабря 1983 года). .

- }b -

0. Щ.:з:..ешия инструкция по из го-, -влоаио и гонгроло кпво'1 jyxoa s.!.<«hwj из aj-jv.a ь2-ПЧ прогич б;уцсллвз« крупного por-ïor-o жог» (l'iBcjwneiia ли;, .viopon Ж.ЭД 10 июня Х8:Ю годе).

5. CIL.СОК P.-,БОТ, CiiyEffuKOJl-uffiUX ПО JliiCCh'PTniùIM

1. ,llVa..'r.'. В ai.01' (ра:->НОЭППНОСТЬ "ПЧ"), ЙОПоЛЬлуе»а. . ДЯ.t

л- ou-gifi!..« Н1.ог.1ьос..уцбллезаой Л^;. »рунного i.oraturo ..•

(C<iл;.:-коБ К.«...Белозерова Г. л.//лвгорское свидетельство .> J034400

i г. пНПК.Лн >'(1114 J.

2. Нив ал ВаКШГШ ДЛЯ ПрОфНЛаКШКИ ..jynHOiu рОГаТОГО eliûi'U.

(Салу.аков К.','...Белозерова //Положительное решение ВНИНГПЗ fia зпдачу патента от 26 ноября X99I года по Заявке Л 437341/13 ЙЬ0465).

3. Питательная сред-» № щагностики 'бруцзллиза. см^.'леези il.К.. Белозерова Г..»., Торбин« .'.11.// Положительное решение ВШа!ГПЗ н« BHÏÏH4V Патента ОТ 24 января 1Уз2 ГОДа ПО ЗаЯВКВ И 4C.734I/I3 (0384bo).

I. il'.-^.m;''- -,..>: :it;uL4; шТаМ\а O^y^cJb'i -¿-Î14 lu-* лх 1 ! M '.< .. i

1 ••'•>>• ÎV.'11'J» Т.п.// Te;J.Л 1.11/i;!! r:. de ".•■: .. .

: ...nO''';i: .¡осле ивкп twi;c,i >i.. ■

. .. • i ,, ,¡...1.// ¡кмшыл xic ; о cn.5 jiiJiî v/i:1.' ■

.. . -чикл? сьеза t'J т: .Xr.-i.V пгября Xiwd г.), Тез.г чл. ,т.Х»ХЭй.

Г - :'чс■.'„ссс;л....... ¡3;. -¡Г1 В. (jt.r.ojep,:!,..

1.Л., -Хплива Г, К.// ДоСз ilictili.'ï l\ajatiOKuil Ijciôjmnaprtùi1 ШПОлЫ — h maнн-пяптнпиплптва: Тй.ч.локя. на v4Hft-nnnH.4H. капа).-Казань-I99T.

7. Аминокислотный состав оруцелл штамма аг-йн сьелозерова Ц.д. Вахигоза Г.Н.// Достижения Казанской . .ïepuHctpHO'i науки - в практику диаотаоводсгЕн; Тез.докл.научно-произа.конф. - .азань, Х99Х, 19).

Разработать я вяедрг ть у ccjî е п аено явовашш s ч новые opfeiotbn, го-ai и оаособи диагностики и олсци^чиокой профилактики бруцеллез« крупного рогатого ci'.oï. (Белозерова Г.«,,ВаХиговг Г.П.,Мамлеева d.K. .Муллокаев О.Т. ,Торбина „"¡.П. .Шошокин В,л.//Заключительный отчет, задание 02.0Х.05 ДМ.-X990-й госрегистрации 0X860093071, Я инвентарнн ■ Л 029I0028I29.

9. Изыскать и испытать в производственном опыте новые проти-вобруцаллезные вакцины, /¿алмаков K.M. »Белозерогза Г.л.,Крашенинникова Л.л.// Заключительный отчет, 8адаяие 01.05.113.-71979,. № инвентарный Б-860166.

10. Разботать новые и усовершенствовать существуйте вакцины против бруцеллеза крупного рогатого окота,.овец и северных оленей; выдан Шшоельхозу ССОР исходные требования на разработку опытно-промышленного производства указанных Чакцин./ллимов A.«i.,Белозерова Г.<».,Ваоилевокий Н.М. и др.// 3al; .ачительный отчет, го Заданию 01.02.05 W2.-I985- # Госрегиограции 8I8QI028, » инвентарный.

11. Заключительный отчет по спецтеме./йлимов л.М.,Белозерова Г. А»»Салманов K.M.// 1985- * инвенгарны.: 120.

12. Разработать сисггуу специальных мероприятий по профилактика и ликвидации бруцеллеза крупного рогагого окота о применением новых вакцин из штаммов 82 и 82-1Ы, методов и средсг диагностики. /Белозерова Г.л.,<*омин AM.// Отчет по заданию "1УВ-26", -1962,

J* инвентарный 02920008173.

12. Дать пред. ожения о внедрении новых методов и средств борьбы О бруцеллезом сельскохозяйственных животных./лбузаров *}.Ш.,<1Лимов н.М, Белозерова Г.А. и др.// Заключительны? отчет по задании 0I.05.H4.,-1960, Ягоорегиотрации 810810028 , № инвентарный 9',/221.

14. Иммуноморфологические изменения в органах беременных коров при иммунизации различными вакцинами против бруцеллеза./Алиев Э.Ш,Белозерова Г.«.// В кн.: Диагностика, пробка и методы борьбы о губерк. и бруц. животных, Казань, 1985,35.

15. Иммуноморфологич в окая оценка эффективности вакцины из штамма бруцелл 82-ПЧ./ ¡/¡уллокаев О.Т., Белозерова Г.п.//8 кн.: Достижения ветер, и зоотех.наук в жив-во, Казань, 1983,25.)

16. Ишуноморфологичвская оценка эффективности вакцины из штамма bü-ПЧ в зависимости от дозы /(¿улиокаев О.Т. »Белозерова Г.н.// Теоретические и практические вопросы ветеринарии и зоотехнии: Тез. докл.научн.произв.конф. - Казань,1989- с.44.

IV» ЙШуН0К0р£йЛЭГНЧв0КН6 ¿ärmsrf&n В СрГаНоХ Ц ТКаНЯХ морских свинок посла ревакцинации вакциной из яташа a2-ifi /Ыумашх, 0.1,.Белозерова Г.л.// Животноводству - кон^лакснуа программу развития: Теа.докл.кйучно-проязэ.конф, -Кизиль,1320, 43.

J6. Гистологические и улмраструктурние изменения в иммуаоког.-петентных органах морских свинок, иммунизированных вакциной из гг;"',:.".'?- *>-.i4,»' •»•А.чсига О,Т.. №шокш1 В.л.,Бадозерова Г.а.//Псвы-шениа адакт-шносы л« ;2o.~ö-np^f4»<»HfK4aCiUi2 игр ПГ" м^нь* болезнях животных: Сб.научных трудов,- Каз. нь, 1ЭУ0,

19„ Динамика уровня Т- и В-Л1Ш^0Ц1 .ов у г орских свинок, иммунизированных вакциной из-ШГомма бруцалл В2-ИЧ./ Муллодаев О.Т., Белозерова Г„л.// Достижения Казанской ветеринарной а=уки - в практику животноводства: '¿езлокл. научно-производ.коаф. - Казань, 1991, 13.

¿С, £" содержания иммуясгссмлзтея?«"* клеток у морских

сьоаок, приватах закланой из шшлма бруцзлл сй-ПЧ./Муллокаев ОЛ'-. Белозероь« Г.л.//досий(ения Казанской ввгервк&рноЗ laosi - в практику хнвогновозс?зв{ Тез. докл. п^учио-произ в о „с гва. ко л}»> - Казань, 1991, 14.

21.Лйвгаостг'чесиая аррзкпщность аллерген» КяИ./Лутфуллиа U.Z,, Взлозеро^з г.,..// Республиканская научис-1ехяич„кон.р.мсл.уче»шх: Тез.докл.- Казань, 1-84, 14.

22, Ультраструктурные изменения в иммунокимпагзагшх органах г^вогнах, привитых ьикниной >ь бруцелл L2-II4./ МудлОкавв.О.Т., ¿'еиокг... В,й.»Белозеровс. Г.л.// Peonyбл.кау-i »о-произв, кояф.? Тез. докл.-чйктуалыше ^опросы вегерннари а зоохахаии.- К«аань,1992, .

23, Содержание "".зосошшх кагионных белков у телок, привитых вакппной г:з ягамма бруцелл 62-ПЧ./ Иултокаев О,Т.,Белозерова Г.я,// Экологические основы совершенствования ветеринарнгч и гзсогсх.чиччоких мероприятий в кявотноводст^е» Сб, й«учя.1рудов.~Кизаш>,Ь92, 98-X01«.

24, Пагоморфологическло- я где Юл. :мич е с кие изменения в орг max

и тканях коров, рспммун.:зг.рпвашшх вакциной из шгамка öpj- лл 82-114/ Муллакаев 0.Т.,Белозерова Г.л.// Физиологические основы развития, резистентности и продуктивности животных. Сб.научн.трудов,,Казань, 102-104,

25. Материалы изучения живой ватины против бруцеллеза круп-аого рогатого окота из штамма 82./Салмаков К.;*. .Алехин P.M..Плотникое Э,С,,Абузаров Ю.Щ,, Киршян Б,л.,Белозорова Г.л. и r..j,/ Соотояяие

и перспективы научных исследований по диаг-ке, пробке туберкулеза и меры борьбы.: Тез. докл.каучн.£ояф. - Омок, 1980, 84-84.

26. Результаты проварки свойств отдельных серий сухой живой противобруцеллвзяой вакцины из шташа 82/ Михайлов Н.л.,Салмаков К.М, Белозерова Г.Л. и др.//Шуч№Э груды КГШ» Казань, 1980, т.135, 48-60.

• 27. Выживазмобть бруцелл в отдельных сериях оухой живой вакцины из штамма 82 при различных условиях хранения./ Белозерова Г.д.,Кра-шеЕиня'-'чова й.л,// Научные труды КГШ1., Казань, ISoO, т.135, 95-S8.

28. Стабильность биологических свойств культур бруцалл вакцинного штамма 82.//Салмаков К.М.,Кнршин Б.л,.Бзлозорова Г.л. и др.// Разработка средств и. методов борьбы о бруцеллезом. Сб.ниучн. трудов -Казань, IÜ84, 3-24,