Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфология молочной железы и ее лактационного барьера в норме и в эксперименте

На правах рукописи

579.841.5:618.9:371

Гуляева Ольга Георгиевна

Морфология молочной железы и её лактационного барьера в норме и в эксперименте

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саранск - 1998

Работа выполнена в Уральской государственной сельскохозяйственной академии, областной ветеринарной лаборатории и лаборатории патоморфологии НИИ вирусных болезней.

Научный руководитель - заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Людмила Ивановна Дроздова

Официальные оппоненты доктор ветеринарных наук, профессор

Ежкова Маргарита Степановна; доктор биологических наук, профессор Кругляков Павел Павлович

Ведущая организация - Костромская государственная сельскохозяйственная академия

Защита диссертации состоится " 19 " июня 1998 г. в " 9 " часов на заседании диссертационного Совета К.063.72.07 при Мордовском государственном университете им. Н.П. Огарева (430000 г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева

Автореферат разослан ои-с*. ^ 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доцент

И.Р. Шашанов

1. Общая характеристика работы 1.1. мато-лактационный барьер охра

няет внутреннюю среду организма от попадания в него чужеродных агентов. Основной функцией гемато-лактационного барьера является регуляция проницаемости для физиологически необходимых веществ (Штерн Л.С., 1967; Росин А.Я., 1981). Это один из барьеров, связанный непосредственно с внешней средой. Он, подобно плацентарному барьеру (Дроздова Л.И., 1992), играет двоякую роль: с одной стороны осуществляет защиту непосредственно молочной железы, с другой стороны, при восходящем попадании чужеродного агента - защиту всего организма. Изучение лактационного барьера имеет большое значение для практики ведения животноводства, для охраны природы, так как большинство инфекционных агентов, проникая через этот барьер, выделяются во внешнюю среду с молоком, тем самым обеспечивая биологический цикл циркуляции в природе. Работ, посвященных исследованию молочной железы, достаточно много (Техвер Ю.Т., 1968; Грачев И.И., ГаланцевВ.П., 1974; Тарнавич Г.Н., Овчиникова P.E., 1985; Коуи А., 1987; Соловьева Л.П., 1998). Однако, в этих работах гемато-лактационный барьер остается не изученным.

лактационного барьера в норме у экспериментальных животных ( морская свинка) и при вакцинации против бруцеллеза штаммом 82. В задачи исследования входило:

1. Изучить морфологию л актирующей молочной железы у морских свинок.

2. Определить составные компоненты лактационного барьера молочной железы в норме и при экспериментальной вакцинации против бруцеллеза штаммом 82.

исследования. Целью работы является изучение

3. Выявить способность проникновения бруцелл вакцинного штамма 82 через лактационный барьер. В нашем исследовании новым является подход к изучению состояния организма при антигенном воздействии на него.

Работа выполнена на кафедре нормальной и патологической анатомии и гистологии УрГСХА, областной ветеринарной лаборатории и лаборатории патоморфологии НИИ вирусных инфекций, является самостоятельным разделом комплексной темы "Исследование механизма проницаемости гисто-гематических барьеров в системе мать-плод-новорожденный при различных патогенных воздействиях на организм животного" (номер государственной регистрации 01.9.10 056814).

1.3. Научная новизна. Впервые установлена специфичность морфологического и ультрамикроскопического строения лакти-рующей молочной железы морской свинки в норме и при экспериментальной вакцинации против бруцеллеза. Определены компоненты лактационного барьера молочной железы. Экспериментально подтверждено участие молочной железы в иммунно-логическом процессе. Установлена ненадежность лактационного барьера для проникновения бруцелл. Выявлено, что местом пер-систенции бруцелл вакцинного штамма являются миоэпители-альные клетки.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.Специфичность строения лактирующей молочной железы морских свинок в норме и в эксперименте.

2.Морфологические критерии составляющих компонентов лактационного барьера молочной железы.

3. Степень надежности лактационного барьера молочной железы при проникновении бруцелл.

Участие молочной железы в иммунологических реакциях при экспериментальной вакцинации.

1.4.Научно -практическая значимость работы. Полученные данные, о специфичности строения молочной железы, расширяют имеющиеся сведения о видовых особенностях молочных желез млекопитающих. Установленные компоненты лактационного барьера являются биологической основой исследования действия вакцинного штамма 82 на организм животного. Они необходимы для изучения иммунологических реакций организма при вакцинации против бруцеллеза. При диагностике бруцеллеза необходимо учитывать длительное носительство бруцелл мио-эпителиальными клетками и ненадежность лактационного барьера.

Ряд положений диссертации являются фундаментальными и могут быть использованы для написания монографий, учебных пособий и в учебном процессе на биологических, ветеринарных и зоотехнических специальностях.

жения диссертации опубликованы в 3 научных работах. Материалы исследований используются в научных и учебных целях на кафедрах анатомии, гистологии, цитологии, физиологии, цитологии, микробиологии и вирусологии Уральской и Костромской СХА, Казанской Академии ветеринарной медицины, Мордовского госуниверситета.

1.6. Апробация работы. Материалы исследований по изучению лактационного барьера доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета факультета ветеринарной медицины Ур-ГСХА в 1992, 1993, 1994 годах; на научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и животноводства ( Казань, 1994); Огаревских чтениях ( Саранск, 1998).

1.7. Объём и структура диссертации. Работа изложена на

_ страницах машинописного текста и включает следующие

разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список литературы. Диссертация иллюстрирована 60 фотографиями. Список литературы включает__источников, в

том числе_иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служили 28 беременных морских свинок. О.сновным материалом являлась молочная железа в заключительный период беременности и в период лактации в норме и при иммунизации морских свинок вакциной из штамма 82 против бруцеллеза и кусочки паренхиматозных органов.

Изучение гисто- и ультраструктуры молочной железы в заключительный период беременности и при лактации проведено на 8 морских свинках. Для изучения воздействия вакцинного штамма на ткани молочной железы и на проницаемость лактационного барьера проведено исследование на 20 беременных морских свинках. Животных иммунизировали вакциной из штамма 82 в дозе 1 млрд.м.к. ( по оптическому бактерийному стандарту мутности). Вакцину вводили подкожно в медиальную поверхность правого паха.

За состоянием здоровья животных велось ежедневное наблюдение. Комплексное исследование, включающее серологическое исследование крови в РА, РСК, РПБ, бактериологическое исследование крови и молока по общепринятым методикам с использованием сред с красками и пенициллином, кольцевую

пробу с молоком (КР) было проведено через 15, 30 и 45 дней от начала опыта. Мазки - отпечатки молочной железы обрабатывали специфической люминесцирующей сывороткой по не прямому методу Кунса и подвергали иммунофлуоресцентному анализу. Убой животных осуществляли на 45 сутки путем передозировки наркоза. У всех павших в ходе эксперимента и убитых морских свинок, наряду с молочной железой после бактериологического исследования на бруцеллез для гистологических исследований были также взяты кусочки паренхиматозных органов: печени, почкек, селезенки и паховых лимфатических узлов ( регионарный месту введения и контррегиональный). Материал фиксировали в 10 %- ном растворе нейтрального формалина, в жидкости Карнуа и 2,5%тНом растворе глютаральдегида для электронномикроскопического исследования. Срезы получали с парафиновых блоков и окрашивали их гематоксилином и эозином (Меркулов, 1969), й метилгрюн - пиронином по Браше (Кононский, 1976).

Для электронномикроскопического исследования отобрано четыре морских свинки, две из которых были экспериментально вакцинированны 1 млрд. взвесью бруцелл во вторую половину беременности. Они гистологически имели целый комплекс изменений, характерных для бруцеллезного вакцинного процесса. Две другие не были вакцинированы и служили, с одной стороны, контролем, а, с другой стороны, объектом для изучения ультратонкой структуры молочной железы.

Для электронномикроскопического исследования кусочки вырезали бритвенным лезвием ввиде пластинки толщиной 0,1 см и помещали в предварительно очищенный 2,5%-ный раствор глютаральдегида. В этом растворе пластинки разрезали на кусочки величиной 0,1 мм и фиксировали в другой порции этого раствора в течение 4- 6 часов. Далее кусочки отмывали в фос-

фатном буфере и обрабатывали осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при температуре +4 С. В качестве заливочных сред нами были использованы аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получали на ультратоме ЬКВ-111,контрастировали 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу ( Б. Уикли, 1975); просматривали в электронном микроскопе ЭМВ - 100БР при ускоряющем напряжении 75К.

Поиск и идентификацию очагов поражения, а также отдельных сосудов и клеток осуществлялась методом прицельного ультрамикротомирования путем получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И.Лысенко (1973).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Гистологическое строение лактирующей молочной железы морской свинки Молочные железы морских свинок макроскопически в начале беременности были представлены парой сосков, расположенных в, паховой области, которые имели конусовидную форму и были скрыты в густом пуху. На протяжении беременности молочные холмы увеличивались в размерах и к концу беременности были хорошо различимы. Для гистологических исследований иссекали молочную железу полностью.

При гистологическом исследовании лактирующая молочная железа морской свинки представляет собой компактное железистое образование, относящееся к экзокринным железам и состоящее из специализированных клеток, называемых секреторными единицами, и соединительнотканных компонентов. Желе-

зистое образование представлено молочными дольками, включающими в себя:

1. Альвеолы, состоящие из секреторных и несекреторных альвеолярных клеток.

2. Миоэпителиальные ( корзинчатые ) клетки.

3. Внутридольковые и междольковые протоки.

4. Соединительная ткань как внутри, так и между дольками.

Дольки состоят из секреторных альвеол и разделены тонкими прослойками соединительной ткани.

Молочная железа представлена как крупными дольками, прилегающими плотно друг к другу с тонкой прослойкой соединительной ткани между соседними альвеолами. Однако, встречаются и мелкие дольки, погруженные в соединительную ткань. Возможно это связано с тем, что альвеолы в разных участках молочной железы находятся на разных стадиях своего развития. Кроме этого, альвеолы находятся на разной стадии секреции: одни растянуты и резко переполнены секретом, другие - содержат его в очень небольшом количестве или же находятся в спавшемся состоянии. Молоко из альвеолярных клеток выделяется по мерокриновому типу.

По периферии альвеол находятся миоэпителиальные клетки, которые своими многочисленными отростками окружают альвеолу. При сокращении миоэпителиальных клеток происходит выдавливание секрета альвеол в молочный проток.

Внутридольковые и междольковые выводные протоки отличаются друг от друга как по величине, так и по строению. У внутридольковых протоков ядра более гиперхромные, эпителий однорядный кубический и вокруг всегда есть узкая прослойка соединительной ткани. Междольковые протоки крупнее, чем

внутридольковых, их больше и они лежат в междольковой соединительной ткани. В непосредственной близости к ним находятся эластические и коллагеновые волокна. У междольковых протоков эпителий многорядный цилиндрический. Протоки заполнены густым секретом со сгустками молочных камней.

В окружающей соединительной ткани, кроме внутридольковых и междольковых выводных протоков, расположены кровеносные сосуды артериального и венозного типов, большое количество коллагеновых и эластических волокон, жировая клетчатка и мякотные нервные волокна. Кровеносные сосуды в дольках образуют густую сеть капилляров, лежащих в тонкой соединительнотканной прослойке, окружающей секреторные клетки, по этим капиллярам к ним поступают кислород и питательные вещества.

Соединительная ткань содержит большое количество фиб-робластов и единичные макрофаги, лимфоциты и плазматические клетки.

Таким образом, характерной особенностью молочной железы морских свинок является её компактность, быстрое развитие и угасание лактационной функции, отсутствие молочных цистерн, наличие большого количества междольковых выводных протоков, интенсивная васкуляризация в период лактации. Секреция осуществляется по мерокриновому типу.

3.2. Ультраструктурное изучение лактирующей молочной железы морской свинки

Электронномикроскопическое изучение позволяет дать описание всех клеточных элементов, входящих в состав молочной железы.

Альвеолярные клетки располагаются в молочной дольке. — Цитоплазма этих клеток была всегда просветленной, за счет небольшого количества рибосом, как свободных, так и связанных с гранулярной эндоплазматической сетью. Включений в этих клетках не было обнаружено. Ядро округлой формы с равномерным распределением хроматина. Эти клетки находятся в состоянии покоя. Вокруг альвеолярных клеток находятся миоэпи-телиальные клетки.

При развитии лактационной функции происходит сближение кровеносных капилляров и альвеолы.

Основным структурным секретообразующим компонентом альвеолы является секреторная клетка, которая имеет осмиофиль-ную плотность в базальной части за счет хорошо развитой гранулярной эндоплазматической сети, мембраны которой лежат рядами с равномерно расположенными на них рибосомами. В апикальной части цитоплазма секреторных клеток просветлена за счет массы вакуолей самой различной формы и величины. Между вакуолями располагаются участки гранулярной эндоплазматической сети, а также довольно крупные митохондрии с матриксом гомогенного вида и хорошо выраженными кристами и сохранением двуконтурности мембран. В цитоплазматическом матриксе, а также в вакуолях находится большое количество овальных, округлых включений (капель) осмиофильного, а также гомогенного и зернистого вида, не окруженные мембраной. Включения самой разной величины , формы и плотности наблюдались у края клеток, на апикальной мембране и за пределами клеток. Таким'образом, секрет путем экзоцитоза поступал в просвет малых и больших протоков. Эти включения являются белковыми, липидными каплями молока т.к. имеют различную осмиофильную плотность. Ядра альвеолярных клеток крупные,

округлой формы с неравномерным распределением хроматина и эксцентричным расположением ядрышка.

Ми^эйителиальные клетки - это довольно осмиофильные клетки с отростками, которые располагаются с эпителиальной стороны базальной мембраны, занимая промежуточное положение между альвеолярными клетками и базальной мембраной. Они охватывают альвеолярные клетки и способствуют "выжиманию" из них молока. В составе одной альвеолы встречаются 2-3 миоэпителиальные клетки. В цитоплазме трудно дифференцировать какие-либо органеллы из-за плотности структур. Местами попадаются участки, где хорошо просматривается гранулярная эндоплазматическая сеть, слабо выраженный пластинчатый комплекс, набухшие митохондрии и миофибрилляр-ные структуры. Ядра темные, неправильной формы с краевым расположением хроматина.

Соединительная ткань, где расположены выше описанные клетки, представлена фибробластами, синтезирующими эластические и коллагеновые волокна. Эти волокна встречались как в поперечном, так и в продольном сечении, среди них наблюдались мононуклеары и капилляры. Кроме этого, в соединительной ткани были обнаружены жировые и плазматические клетки.

Эндотелий капилляров зернистого вида с мелкими вакуолями и отростками. Ядра неправильной формы с маргинацией хроматина. Базальный слой в виде плотной полосы, неравномерно окрашен.

Таким образом, при электронномикроскопическом изучении молочной железы морской свинки во время лактации нам удалось впервые описать ультраструктурные отличительные признаки секреторных и несекреторных альвеолярных клеток и миоэпителиальных клеток. И, кроме того, дать описа-

ние всех клеточных элементов, составляющих лактационный барьер.

3.3. Морфология молочной железы и других органов беременных морских свинок при экспериментальной противобруцеллезной вакцинации штаммом 82

Гистологически были исследованы не только молочные железы морских свинок, но также их паренхиматозные органы, такие как селезенка, печень, почки, легкое, сердце и лимфоузлы. Кроме того, было проведено исследование иммунокомпе-тентных органов плодов и новорожденных, полученных от этих морских свинок.

При гистологическом исследовании лактирующей молочной железы морских свинок, иммунизированных вакциной штамма 82, нами были обнаружены следующие изменения: очертания долек были нечеткими, что связано с деструктивными изменениями стенок краевых альвеолотрубок, число которых и размеры были неодинаковыми. Одни из них резко растянуты с атрофированным эпителием, в других - клетки эпителия размножаясь папиллематозно внедрялись в просвет. Большая часть альвеол не содержала секрета.

Прослойки соединительной ткани были расширены и хорошо выражены как внутри так и между дольками. Наблюдалось утолщение соединительно-тканных волокон и их гомогенизация.

В междольковой и внутридольковой соединительной ткани наблюдали её отек и разрыхление. Здесь же, или в непосредственной близости к кровеносным сосудам, постоянно обнаруживали эозинофильно- и плазмоклеточные инфильтраты.

Морфологически были выявлены изменения сосудистой стенки, которые выражались в повышении ее проницаемости,

что сопровождалось плазморрагией и диапедезом эритроцитов. В стенке сосуда обнаружена ярко выраженная пролиферативная реакция в виде набухания и размножения клеток эндотелия и адвентиции, в некоторых сосудах обнаружены тромбы.

Образования специфических гранулем в молочной железе не выявлено. Тем не менее, отдельные эпителиоидные клетки встречались в основном вокруг междольковых протоков. Одним из постоянных признаков было наличие эозинофильно-клеточной инфильтрации, особенно периваскулярно и в меж-дольковой соединительной ткани. Здесь же была выявлена де-грануляция тучных клеток. Среди клеток инфильтрата постоянно обнаруживались плазматические клетки и единичные гигантские клетки Березовского.

При иммунофлуоресцентном исследовании мазков - отпечатков молочной железы, обработанных кроличьими антителами к И-формам бруцелл, и меченой антисывороткой барана против глобулинов кролика по непрямому методу Кунса, было отмечено свечение отдельных бактериальных клеток, макрофагов и лейкоцитов.

Наряду с этим, в молочной железе был виден процесс физиологической атрофии долек с замещением их жировой клетчаткой или рыхлой соединительной тканью. При этом, в эпителии альвеол отмечался пикноз ядер и увеличение количества жира в просвете альвеол.

Кроме того, наблюдалось разрастание не только междоль-ковой, но и внутридольковой соединительной ткани, которая делила дольки на железистые островки.

При гистологическом исследовании лимфоузлов, селезенки, печени, легкого и сердца были обнаружены дегенеративные , иммуноморфологические и компенсаторно- приспособительные изменения в виде зернисто-жировой дистрофии в печени, муко-

идного и фибринозного набухания стенки кровеносных сосудов в перечисленных органах, гипертрофических процессов в паренхиматозных клетках или их гиперплазия.

В лимфатических узлах, регионарных месту введения вакцины, было отмечено увеличение объема лимфоидных фолликулов по сравнению с таковыми у контрольных животных. Центры их были расширены и заполнены размножающимися ретикуло-гистиоцитарными и плазматическими клетками. Наряду с этим, четко прослеживается редукция лимфоидной ткани мякотных тяжей и расширение центральных синусов. Наблюдалось формирование эпителиоидно- клеточных гранулем, которые были представлены или отдельными скоплениями эпителиоидных клеток без примеси каких-либо других, или это были оформленные гранулемки, содержащие кроме эпителиоидных, плазматические клетки, лимфоциты и единичные эозинофилы и гистиоциты.

В селезенке обнаружено увеличение числа фолликулов с активизацией реактивных центров, содержащих большое количество иммунобластов, небольшое количество макрофагов и малых лимфоцитов. Наблюдается фибротизация селезенки - некоторые фолликулы были расширены, а некоторые - редуцированы. При исследовании селезенки плода наблюдали сформированные фолликулы с хорошо выраженной центральной артерией. В центральной артерии четко видна пролиферативная реакция эндо-телиоцитов. Мегакариоциты отсутствовали , в строме появлялись плазмобласты, это свидетельствовало о том, что селезенка функционировала как постфетальная. В перифолликулярной зоне появлялись плазматические клетки, которые свидетельствовали о том, что селезенка участвует в антитело- образовании как зрелая.

В печени как гистологически, так и макроскопически зарегистрированы обширные очаги кровоизлияний, активизация процессов пролиферации звездчатых ретикулоэндотелиоцитов и трансформация их в фибробласты. Кроме того, на фоне зернистой дистрофии гепатоцитов, наблюдались процессы разрастания соединительной ткани между дольками.

В сердце отмечена застойная гиперимия и диапедез эритро-' цитов в мелких кровеносных сосудах.

В легком - периваскулярный отек и полиморфно-клеточная инфильтрация, диапедез эритроцитов, активная пролиферация эндотелия стенки сосудов.

В почках - явление зернистой и жировой дистрофии эпителия почечных канальцев. Наблюдаются межканальцевые по-лйморфно-клеточные инфильтраты и интракапиллярный гло-мерулонефрит. Кровоизлияния в корковой зоне и активизация эндотелия артериол клубочка.

Таким образом, при анализе изменений происходящих в ткани молочной железы и в других паренхиматозных органах лактирующих морских свинок, при введении вакцины из штамма 82 обнаружены процессы, которые, с одной стороны можно охарактеризовать, как иммуноморфологические, но есть и более глубокие, то есть патологические. Наряду с этим , в организме выражена компенсаторно-приспособительная реакция, что можно охарактеризовать как защитную реакцию организма в ответ на воздействие возбудителя.

3.4. Ультраструктурное изучение молочной железы морских свинок при бруцеллезной инфекции

При ультраструктурном изучении экспериментального материала основные изменения были зарегистрированы во всех

клеточных элементах молочной железы и стенке кровеносных сосудов.

В молочной железе' борьба с возбудителем осуществляется на линии плазматической мембраны эндотелия капилляров. На люминальном крае эндотелиоцитов обнаруживалось большое количество цитоплазматических выростов. Большей частью эти выросты имели удлиненную форму в виде псевдоподий, концы которых, соединяясь, захватывали бруцелл. Цитоплазма эндо-телиальных клеток умеренной плотности, вакуолизирована. Вакуоли крупных размеров с хлопьевидным содержимым. Расположение рибосом равномерное, за исключением вакуолизиро-ванных участков.

Отмечалась деструкция митохондрий с нарушением дву-контурности мембран и разрушением крист до полного их исчезновения. Ядра клеток осмиофильны с краевым расположением хроматина. В цитоплазматическом матриксе эндотелиальных клеток обнаружены осмиофильные иммунные комплексы: единичные и в виде конгломератов. Это образования разной величины, овальной или округлой формы.

Базальный слой капилляров разрыхлен, местами истончен, а в некоторых участках полностью лизирован.

Следующий этап борьбы с бруцеллами вакцинного штамма осуществлялся в миоэпителиальных клетках. Их цитоплазма осмиофильна, но, в основном, резко вакуолизирована с расширением цистерн и канальцев эндоплазматической сети. Ядра пикнотичны с краевым расположением хроматина. В цитоплазматическом матриксе и в вакуолях встречались бруцеллы разной величины и формы.

Альвеолярные клетки были всегда просветлены за счет уменьшения рибосом, как свободных, так и связанных с гранулярной эндоплазматической сетью. Рибосомы в цитоплазме рас-

полагались неравномерно, местами наблюдалось их полное отсутствие. На мембранах канальцев и цистерн гранулярной эн-доплазматической сети отмечались участки с неравномерным расположением рибосом или их отсутствие. Канальцы и цистерны эндоплазматической сети расширены и содержали мелкозернистый материал.

Митохондрии резко расширены с нарушением двуконтур-ности мембран и обрывками крист. В некоторых видны участки хлопьевидного материала. В цитоплазме альвеолярных клеток были обнаружены бруцеллы различной величины, у некоторых просматривались участки мембран.

В клетках, где бруцеллы скапливались группами, цитоплазма была почти лишена органелл, кое-где встречались рибосомы, обрывки мембран, а в окружающей ткани отмечалась деструкция и отек. Некоторые альвеолярные клетки с хорошо просматриваемыми очагами локальной деструкции, выглядели в виде осмиофильных образований различной величины, некоторые были окружены мембраной. Цитоплазма таких клеток зернистая, а местами хлопьевидного вида. В цитоплазме обнаруживались еданичные капли молока. Крайне редко встречались протоки, заполненые каплями молока.

Встречались участки дискомплектации и дезорганизации ткани. Все клеточные структуры в стадии деструкции, лишь местами удается рассмотреть остатки органелл, обрывки мембран. Ядра грубозернисты, пикноморфны, некоторые почти полностью заполнены хроматином. Наблюдались участки с полным распылением или растворением структур, а на месте погибших клеток мелкозернистый или хлопьевидный материал -некротический детрит. На месте погибших клеток регистрировалась масса бруцелл самых разных размеров и форм, встречались и погибшие бактерии.

В месте введения вакцины отмечалась гибель ткани, а также большое количество бактерий самой разной величины и формы - как в поперечном так и продольном сечении. У некоторых просматривалась внутренняя структура и мембрана, окружающая их.

В протоках соска наблюдалась масса бруцелл разной величины, а также "пустые" формы. Встречались возбудители с вакуолями довольно крупных размеров с нарушением наружной мембраны, с мембранными включениями, а также с разрывом наружной стенки. В таких протоках не наблюдалось капель молока. Клетки, выстилающие стенки протока в стадии деструкции и дифференцировать какие-либо органеллы не представлялось возможным.

Таким образом, ультраструктурное изучение молочной железы морских свинок при бруцеллезной инфекции показало поражение всех клеточных структур, составляющих лактационный барьер. Электронномикроскопически это было представлено дистрофическими деструктивными процессами с дезорганизацией и дискомплектацией ткани.

Как результат взаимодействие антигена с антителами в стенке капилляров обнаружены конгломераты иммунных комплексов.

Что касается бруцелл - основным местом их локализации были миоэпителиальные клетки, просвет протоков и место гибели клеток.

ВЫВОДЫ

1. Лактирующая молочная железа у морских свинок представлена альвеолярно-трубчатыми железами, состоящими из: П альвеол

О миоэпителиальных клеток

■ внутри- и междольковых протоков.

■ соединительной ткани

2. Ультраструктурно установлена специфичность секреции молока молочной железой морской свинки. Она осуществляется только по мерокриновому типу.

3. Лактационный барьер молочной железы представлен:

• эндотелием кровеносных капилляров

• межклеточным веществом периальвеолярной соединительной ткани

• базальной мембраной миоэпителиальных и альвеолярных клеток.

4.Молочная железа беременной и лактирующей морской свинки при экспериментальной вакцинации штаммом 82 вовлекается в иммунологический процесс. Это подтверждается специфическими реакциями: скоплениями эпителиоидных клеток и наличием единичных клеток Березовского.

5. Ультрамикроскопическими исследованиями при эксперименте в эндотелии капилляров молочной железы выявлена специфическая иммунологическая реакция антиген - антитело в виде иммунных комплексов.

6.При экспериментальном исследовании в региональных лимфоузлах появляются бруцеллезные грануллемы, что подтверждает специфическую реакцию организма на антиген.

7.Установлено, что местом длительной локализации бру-целл в молочной железе являются миоэпителиальные клетки, которые могут служить источником повторного заражения животного и окружающей среды.

8. Доказательством ненадежности лактационного барьера для бруцелл вакцинного штамма является обнаружение их в миоэпителиальных клетках и протоках молочной железы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Результаты исследования могут быть использованы:

• при написании соответствующих разделов и справочных руководств по сравнительной анатомии, гистологии, морфологии и патологии животных;

• в учебном процессе для чтения лекций и проведения практических занятий на ветеринарных, зоотехнических и биологических факультетах высших учебных заведений, а также на курсах повышения квалификации преподавателей;

• при разработке более надежных методов диагностики бруцеллеза. При создании новых диагностических методов исследования необходимо проводить экспертизу молока и молочной железы.

Список опубликованных работ, отражающих основное содержание диссертации

1. Л.И. Дроздова, О.Г. Гуляева. Морфология молочной железы морских свинок при экспериментальной противобруцел-лезной вакцинации штаммом 82 // Матер, научно- производственной конф. по проблемам ветеринарии и животноводства. -Казань, 1994. - С. 18.

2. О.Г. Гуляева, Л.И. Дроздова, Л.Г. Тулакина. Гистологическое и ультраструктурное строение молочной железы морской свинки // Морфофизиология и ультраструктура организма животных и птиц при патогенном воздействии. - Екатеринбург, 1998. - С. 26-33.

3. О.Г. Гуляева, Л.И. Дроздова, Л.Г. Тулакина. Гистологическое и ультраструктурное строение молочной железы морской свинки при экспериментальной вакцинации штаммом 82 //

Морфофизиология и ультраструктура организма животных и птиц при патогенном воздействии. - Екатеринбург, 1998. - С. 33-41.

Подписано в печ. Формат 60x84 1/16

Бумага С^йСРШАОбъем ^ О Тир. 100 Зак. № Екатеринбург, К-83, пр. Ленина, 51. Типолаборатория УрГУ.