Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональные проявления паразито-хозяинных отношений при саркоспоридиозе овец

На правах рукописи

V

С А X Н О ВЛАДИМИР МИХАЙЛОВИЧ

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ПАРАЗИТО-ХОЗЯИННЫХ ОТНОШЕНИЙ ПРИ САРКОСПОРИДИОЗЕ ОВЕЦ (ВагсосуэШ оукашя)

16.00.02. — патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Ставрополь—1997

Работа выполнена в Всероссийском НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко, Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им К- И. Скрябина, в Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии и в хозяйствах Ставропольского края.

Научный консультант — доктор ветеринарных наук,

профессор А. А. ВОДЯНОВ.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор СТРЕЛЬНИКОВ А. П.

2. Доктор ветеринарных наук, профессор ПОЗОВ С. А.

3. Доктор биологических наук, профессор ЗАБЛОЦКИЙ В. Т.

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии.

/^Защита состоится «..../.£..■» ........................................... 1997 г.

в часов на заседании диссертационного Совета

Д 120.o3.02 Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 355017, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольской госсельхозакадемии.

Реферат разослан «. Ж.............................. ....... 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета ___-

'Оею*

А. П, Боголюбова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Саркоспоридиоз овец является одной из наиболее распространенных и устойчивых паразито-хозяинных систем у овец. В изучении этой системы (начиная с описания Мишером в 1843 г. цист саркоспоридий в мышцах мышей) безусловно приоритетным является эпизоотологический анализ, направленный на учет частоты встречаемости саркоцистоносительства в различных географических зонах, экстенсивности и интенсивности инвазии в зависимости от пола, возраста, упитанности, физиологического состояния животных и другая факторов (Казаков Н. А., Заблоцкий В. Т., 1974; Кислякова 3. И., 1976; Новинская В. Ф., Полозенко Л. В., 1992; Шемарова И. В., 1988; Fidiaracis Р., 1973; Ledderboge N.. 1969, и др.).

Широко освещены объем и причины экономического ущерба, наносимого саркоспоридиями (снижение массы тела, продуктивности, ухудшение качества мяса и, лишь иногда, падеж животных) (Богуш А. А., 1976; Бритов В. А., 1970; Ogassawara S., 1977). Менее активно, хотя и достаточно глубоко, изучались клинические и патоморфологичёские изменения, но опять-таки преимущественно при саркоцистоносительстве [Даньшин Н. С., Даньшина М. С., 1973; Кононенко Г. В., 1967; Пась-ко С. Г. и др., 1972, 1979, 1982; Collery P., Weavers Е., 1981; Dubey J. P., 1983; O'Toole D., Duffecl S. J. et al., 1986, и др.) или в наиболее острые иоменты переболевания — резкого ухудшения состояния (ми смерти кивотного (Арсентьева Н. Ф., 1978; Горбов Ю. К., 1978; Должиков М. А., 1982; Мочульский С. Н., 1982; Мутаходжаев М., 1969; Позов С. А., 1981; il-Etreby N., 1970; Frelier Р. F., 1980). Отсутствие диалектического под-сода к изучению проявлений заболевания на всем его продолжении от момента первого контакта хозяина с паразитом и до стабилизации па-эазито-хозяинных отношений создало большие затруднения и противо-зечия в трактовке патогенеза саркоспоридиоза, а также разработке мер >анней диагностики и лечения заболевания.

Несмотря на то, что абсолютное большинство авторов, изучавших :аркоспоридиоз у овец, подчеркивают 80 — 100%-ную экстенсивность гтой инвазии, встречаются лишь единичные работы, посвященные анализу развития болезни при суперинвазировании или в ассоциациях с аболеваниями заразной или незаразной этиологии. В этих работах зафиксированы факты более легкого или более тяжелого (в сравнении с юноинвазией) переболевания животных, но не вскрыты причины и мор-Ьофункциональный базис этих явлений (Панаскж Д. И., Шигина И. Г., 981; Новак М. Д., 1973; Никольский С. Н., Позов С. А., 1983, 1989). Относительно окончательного хозяина исследования морфологических [зменений касаются чаще всего только зоны локализации паразита — онкого отдела кишечника, а организменная реакция, в том числе и ме-анизм отсутствия иммунитета (зафиксированного многими автора-[И — Fox S. М., Bums J., 1988; Rommel М., Heydom А., 1972), остаются •еописанными.

Наконец, с учетом абсолютно одомашненного овцеводства и искусственного создания стад высокопродуктивных овец, недостаточное внимание, по нашему мнению, уделяется антропогенному влиянию на развитие саркоспоридиоза овец.

Восполнению части неразрешенных аспектов проблемы саркоспоридиоза овец и посвящена наша работа.

Цель работы. Изучить морфофункциональные проявления адаптационных изменений в организмах окончательного и промежуточного хозяев при разных условиях развития саркоспоридиоза у овец и собак, а также оценить состояние паразита багсосуэНэ стсашэ на разных этапах развития как в окончательном, так и в промежуточном хозяине.

Задачи исследований:

1. Описать клинико-морфологические изменения, а также состояние нуклеиновых кислот и полисахаридов в клетках и тканях овец в динамике переболевания саркоспоридиозом при экспериментальном заражении.

2. Изучить реакции индикаторов систем гуморального и клеточного иммунитета (плазмоцитов, В- и Т-лимфоцитов), а также. макрофагов и тканевых базофилов организма овец на разные стадии развития паразита.

3. Описать клинико-морфологические проявления, патологию и иммунные реакции при измененных формах саркоспоридиоза у овец:

— в ассоциации с гельминтозами (дикроцелиозом, диктиокаулезом, ценурозом);

— в условиях суперинвазии;

— при остром и хроническом нитратно-нитритном токсикозе.

4. Изучить клинико-морфологические и гистохимические изменен»; (в том числе реакции систем гуморального и клеточного иммунитета у собак в патентный период энтерального саркоспоридиоза.

5. Описать морфологическое и гистохимическое состояние Б. оукагш в динамике развития в окончательном и промежуточном хозяевах.

6. Проанализировать роль хозяйственной деятельности в созданш и поддержании очагов саркоспоридиоза овец и возможность внутриут робкого заражения ягнят.

Научная новизна настоящей работы заключается в том, что впервые описаны клинические и морфологические изменения, структурные и ги стохимические проявления энергетических сдвигов и перестройки им мунной системы у овец в процессе развития адаптации их организм к саркоспоридиям от момента внедрения паразита до стадии формирс вания цист при экспериментальном заражении.

Описаны морфологические признаки измененных форм саркоспори диоза овец, наиболее часто встречающиеся в условиях овцеводства, также моделированных искусственной суперинвазией.

Описаны структурные и гистохимические изменения в организме жончательного хозяина в период развития и созревания в нем половых ¡рорм паразита; выявлены структурные механизмы защиты организма жончательного хозяина, не препятствующие жизнедеятельности пара-юта при первичном и повторном заражениях.

Изучены механизмы приспособления паразита к жизни и размно-кению как в окончательном, так и в промежуточном хозяине.

Доказана активная роль хозяйственной деятельности человека в совании новых эпизоотических очагов и распространении саркоспори-4иоза среди овец.

Описаны патологические процессы, обусловливающие возможность ;нутриутробного заражения ягнят.

Практическая ценность работы. На основании проведенных иссле-/ ований разработаны два методических указания для работников жи-отноводства и мясоперерабатывающей промышленности «Клинико-мор-юлогические проявления, диагностика, лечение и профилактика сар-оспоридиоза овец» и «Послеубойная диагностика и профилактика сар-оспоридиозов сельскохозяйственных животных».

В процессе работы получены два авторских свидетельства по моди->икации способов морфологических исследований, 23 свидетельства о ационализаторских предложениях, в том числе по способам прижиз-енной диагностики саркоспоридиоза овец; выпущены два информаци-нных листка «Диагностика саркоспоридиоза у овец» и «Люминесцен-кая диагностика энтерального саркоспоридиоза плотоядных», которые огут быть использованы в научно-исследовательской работе или прак-ической деятельности для выявления различных стадий развития па-азита в организме окончательного и промежуточного хозяев.

Описаны клинико-морфологические изменения, развивающиеся у овец а разных этапах переболевания саркоспоридиозом при сверхостром, ;тром, хроническом течении, а также при саркоцистоносительстве, в :ловии суперинвазии, в ассоциациях с гельминтами, при остром и хро-ическом нитратно-нитритном токсикозе, что дает возможность посмер-юго выявления саркоспоридиоза у овец на любой стадии болезни и ри многих осложняющих факторах, изменяющих форму болезни.

Анализ морфофункциональных изменений при энтеральном сарко-юридиозе у собак доказывает, что половые стадии развития сарко-юридий не являются иммуногенными для организма окончательного >зяина и не оказывают на него прямого патогенного воздействия.

Научные данные о пато- и морфогенезе саркоспоридиоза у овец и >бак и формах развития паразита в организмах промежуточного и окон-1тельного хозяев могут быть использованы для разработки способов гагностики, мер лечения и специфической профилактики саркоспори-юза, а также в учебных целях по курсу протозойных болезней в па-натомии и паразитологии.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и получили положительную оценку на IX, XI и XII Всесоюзных конференциях патологоанатомов (Каунас, 1984; Харьков, 1990; Воронеж, 1993), 1-м Международном съезде протозоологов (Витебск, 1992) и IV съезде Всесоюзного общества протозоологов (Ленинград, 1987), Международной конференции по актуальным вопросам ветеринарии (Барнаул, 1995), всероссийских конференциях морфологов (Воронеж, 1989, 1991), межвузовских (Ставрополь, 1989, 1991; Фрунзе, 1990; Оренбург, 1991; Пенза, 1992; Бишкек, 1992) и 49, 51 — 59-й внутривузовских (Ставрополь, 1985, 1987 — 1995) конференциях, а также на заседании Научно-технического Совета Агропромышленного комитета Ставропольского края (1988).

Публикации. Положения диссертационной работы достаточно полнс отражены в 28 научных статьях, часть из которых опубликована в цен' тральных изданиях. Получено 2 авторских свидетельства на изобрете ния.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из разделов «Вве дение», «Обзор литературы», «Собственные исследования», «Обсужде ние», «Заключение», «Выводы», «Практические предложения» и «Спи сок литературы», изложенных на 283 страницах машинописного текста и Приложения — на 36 страницах. Иллюстрирована 17 таблицами и 6' фотографиями. Список литературы содержит 365 наименований работ в том числе 164 — иностранных авторов.

На защиту вынесены следующие положения диссертации:

1. Адаптационный синдром у овец при саркоспоридиозе, вызываемо» простейшим вида Б. оу1сатз (ИаШ1е1, 1886а), развивается в два периода первый — период адаптации, протекающий в форме ди^семинирован ных иммунных воспалений с развитием признаков, характерных для ГН" и сенсибилизации Т-клеточной системы иммунитета, а также с выра женной клинико-морфологической патологией — до 29 — 31-го дня по еле заражения; второй — период стабилизации (уравновешивания) не вой единой структурно-энергетической системы паразит-хозяин — 30 — 31-го дня.

2. Адаптация вегетативных форм саркоспоридий обеспечивается мне гократными шизогониями (мерогониями) в макрофагах промежуточног хозяина и формированием потенциированных мышечных цист.

3. Фактором, сдерживающим развитие паразита в адаптированно! организме промежуточного хозяина, является нестерильный клеточны иммунитет.

4. Эндогенные и экзогенные условия, в которых формируется адат тационный синдром, могут индуцировать изменения морфофункционам ного проявления саркоспоридиоза у овец, обусловливая развитие гипе{ эргического (вплоть до анафилактического шока) или гипоэргическог (токсикоз) течения болезни.

5. Половые формы развития саркоспоридий не являются иммуноге! ными для организма окончательного хозяина и не оказывают на нег прямого патогенного воздействия.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЦДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в 1980 — 1995 годы в лаборатории протозоологии и Вышневолоцком отделе с опытной базой Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко, на кафедрах патологической анатомии Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К. И. Скрябина и Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии, в проблемной паразитологической лаборатории Ставропольской ГСХА, а также в совхозе «Бештау» Минераловодского района, в колхозе «Усть-Невин-¡юмысский» Кочубеевского района, АОЗТ «Родина» и «Кевсалинское» Ипатовского района, на высокогорных отгонных пастбищах хозяйств Урупского, Зеленчукского и Преградненского районов Ставропольского края.

Тема диссертационной работы утверждена на заседании Ученого Со-гета СГСХА (протокол № 153 от 28.02.91).

Опыты по экспериментальному заражению овец саркоспоридиозом 5ыли проведены как самостоятельно, так и совместно с аспирантами >тдела протозоологии ВНИИЭВ М. П. Прусом и А. Т. Рахимовым, а такие аспирантом кафедры биохимии MBA Н. И. Ярован, которые на дан-юм материале выполняли самостоятельные диссертационные работы. Эсновная часть работы с 1985 года выполнялась по плановой тематике

:гсха.

Экспериментальную часть работы проводили на 95 взрослых овцах :тавропольской породы и калининской породной группы в возрасте (на юмент начала опыта) 4 — 8 месяцев, 54 новорожденных ягнятах и 3 [бортированных плодах последних дней суягности. Кроме того, было об-:ледовано на предмет саркоцистоносительства 286 взрослых овец ста-;ропольской породы. В работе использованы 23 беспородных щенка со-iaK в возрасте 5 — 6 месяцев,- а также взрослые собаки: 12 — породы :авказская овчарка и б собак-пастушек (табл. 1).

Овцы, использованные для изучения клинико-морфологических про-влений саркоспоридиозной моноинвазии, с момента рождения содер-<ались в помещениях, выгулом не пользовались, контакта с другими сивотными не имели. Рацион животных состоял из сена и комбикорма. 1еред началом опыта все животные были обследованы на наличие цист аркоспоридий в мышцах, а также яиц кишечных гельминтов. Факт сар-оцистоносительства у овец устанавливали методом компрессионного сследования биоптатов мышц языка по разработанной нами методике эацпредложение № 115 - 28/312 - 436 от 10.10.83 Главветупра МСХ СССР) аллергической внутрикожной пробой по методу С. А. Позова (1982) разработанным им антигеном, а гельминто-копрологическое обследо-ание — методами Фюллеборна и последовательных смывов. В резуль-!те исследований яйца гельминтов, а также цисты саркоспоридий об-

Таблица 1

СХЕМА И ОБЪЕМ ИССЛЕДОВАНИЙ

ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ОВЦЫ ЯГНЯТА СОБАКИ

- ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ СПОНТАННОЕ СПОНТАННОЕ ЭКСПЕРИМЕНТ, СПОНТАННОЕ

СПОСОБ ЗАРАЖЕНИЯ (КОНТРОЛЬ) ПЕРВИЧНО ПЕРВИЧНО ПОВТОРНО НЕИЗВЕСТЕН ПЕРВИЧНО ПЕРВИЧНО НЕИЗВЕСТЕН

ДОЗА ЗАРАЖЕНИЯ - 100 тыс. спороцист/ ясивотное 1. 2, 4, 6, 8 млн. спороцист/ 100 тыс. спороцист/ животное НЕИЗВЕСТНА НЕИЗВЕСТНА 0,5 кг мясного фарша/ животное НЕИЗВЕСТНА

Животное

УСЛОВИЯ ОПЫТА ДНИ ПОСЛЕ ЗАРАЖЕНИЯ - 6, 10. 12, 17, 23, 30, 50, 65 24 — 33 (26) 6, 10, 12 22, 29, 65 НЕИЗВЕСТНО НЕИЗВЕСТНО 11 — 12 НЕИЗВЕСТНО

МЕСТО ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРИЯ ЛАБОРАТОРИЯ ЛАБОРАТОРИЯ ЛАБОРАТОРИЯ ХОЗЯЙСТВА СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ ЛАБОРАТОРИЯ ОТГОННЫЕ ПАСТБИЩА

ВИД ИНВАЗИИ носи- ГЕЛЬСТ. моноинвазия моноинвазия АССОЦИАЦИЯ

суперинвазия А+ д+ + С" f моноинвазия моноинвазия

КОЛИЧЕСТВО животных 4 3 51 19 18 286 3 3 7 57 23 18

ПРОВЕДЕНО ИССЛЕДОВА-

НИЙ: КЛИНИЧЕСКИХ 780 585 9945 3705 3510 — — — — — 621 —

ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ — — — — — — — — — — 828 —

ПАРАЗИГОЛОГИЧЕСКИХ 8 6 102 38 36 286 3 3 7 57 46 18

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕС-

КИХ 4 3 51 19 18 — 3 3 7 — 23 —

ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ 64 48 816 304 288 — 48 48 112 228 345 —

ГИСТОХИМИЧЕСКИХ 256 .192 3264 1216 1152 — — — — — 1472 —

ЦИТОХИМИЧЕСКИХ 320 240 4080 1520 1440 — — - - 342 1840 —

МОРФОМЕТРИЧЕСКИХ 384 288 *4896 1824 1728 — 13 15 35 395 2032 —

СТАТИСТИЧЕСКИХ 384 288 4896 1824 1728 — 15 15 35 395 2032 ■ —

ВСЕГО: 2200 1650 28050 10450 9900 286 84 84 196 1417 9239 18

ИТОГО: 63574 исследования ч

* — моноинвазия; " — динтиокаулез + дикроцелиоз + саркоспоридиоз; "* — ценуроз + саркоспоридиоз; "" — нитратно-нитритный токсикоз

наружены не были. Животные были поделены на две экспериментальные группы: первая — для изучения развития клинико-морфологических проявлений саркоспоридиоза в динамике переболевания — 55 овец; вторая — для изучения клинико-морфологических проявлений сверхострого течения саркоспоридиоза — 19 овец.

Третью группу для изучения клинико-морфологических изменений в динамике переболевания саркоспоридиозом в условиях суперинвазии составили животные-саркоцистоносители, спонтанно заразившиеся саркоспоридиозом, — 21 овца.

Материалом для заражения овец первой, второй и третьей групп служили ооцисты и спороцисты саркоспоридий, полученные от щенков, которым предварительно был скормлен фарш, приготовленный из пораженных цистами паразита мышц сердца овец. Наличие цист саркоспоридий в мышце сердца определяли по методике А. Г. Какуриной (1970). Перед скармливанием фарша, содержащего цисты саркоспоридий, щенков дважды с недельным интервалом обследовали по методу Дарлинга для подтверждения отсутствия изоспороидной и саркоцистозной инвазии. Слизистую оболочку тонкого отдела кишечника щенков (павших или убитых после начала выделения спорулированных спороцист и ооцист саркоспоридий размером 14,5 х 10,1 мкм и 20,3 х 11,6 мкм соответственно) помещали в теплый (35 — 40°С) 10%-ный раствор гидрокарбоната натрия и гомогенизировали на магнитной мешалке в течение пяти часов. Освободившиеся от слизи ооцисты и спороцисты саркоспоридий отмывали изотоническим солевым раствором посредством центрифугирования и хранили в 2,5%-ном растворе бихромата калия на 0,85%-ном растворе хлористого натрия при +4°С в холодильнике. Количество спороцист в единице объема полученной суспензии определяли общепринятым методом подсчета в камере Горяева на всей площади сетки.

В первой экспериментальной группе 51 овце было выпоено по 100 тыс. спороцист; во второй группе шести овцам — по 1 млн. спороцист, четырем овцам — по 2 млн. спороцист, трем — по 4 млн. спороцист, трем — по 6 млн. спороцист и трем — по 8 млн. спороцист.

В третьей экспериментальной группе 18 овцам выпоили по 100 тыс. спороцист.

Контролем служили семь овец, которых не заражали и содержали отдельно от животных опытных групп: четыре стерильных от цист и три — саркоцистоносителя.

Перед заражением провели клиническое обследование овец. У овец опытных и контрольных групп ежедневно измеряли температуру тела и оценивали общее клиническое состояние.

Четвертую группу — по изучению морфологических изменений при смешанных инвазиях — составили три овцы с комплексной спонтанной инвазией саркоспоридиоз 4- дикроцелиоз + диктиокаулез и три овцы со саркоспоридиозно-ценурозной ассоциацией.

Пятую группу — по изучению патоморфоза саркоспоридиоза под влиянием нитратно-нитритного токсикоза — составили семь овец, спонтан-

но больных саркоспоридиозом. Материал от них был любезно предоставлен нам кафедрой внутренних незаразных болезней СГСХА, где под руководством профессора Н. А. Уразаева у этих животных был индуцирован острый и хронический нитратно-нитритный токсикоз посредством введения в рубец натрия нитрата в дозах 60 и 50 мг/кг живой массы соответственно (Муслих Н. Д., 1990; Назар Д. М., 1991).

Полное патологоанатомическое вскрытие трупов овец проводили общепринятым методом. В процессе вскрытия отбирали материал для гистологических исследований (подчелюстные, мезентериальные и бронхиальные лимфоузлы; кусочки печени, почек, легких, надпочечников, селезенки, переднего мозга, мозжечка, стенки тонкого отдела кишечника и матки; жевательной мышцы, а также мышц языка, пищевода, диафрагмы и сердца) и фиксировали его в 10%-ном растворе нейтрального формалина, а также в жидкости Карнуа, с последующей заливкой в парафин.

Полисахариды и макрофагоциты выявляли посредством окрашивания гистосрезов по способу Шабодаша. Жир в срезах, приготовленных на замораживающем микротоме из кусочков органов, окращивали су-даном-Ш. Нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) и плазматические клетки окрашивали по методу Браше метиловым-зеленым — пиронином. Окраской срезов толуидиновым синим выявляли зоны патологической или естественной метахромазии и тканевые базофилы.

Оценку активности выявляемых веществ проводили полуколичественным методом — в «крестах» гистохимического цветового показателя (ГЦП). За максимальный показатель принимали оценку в четыре «креста» dt). Количество и размеры выявленных гистохимическими методами тканевых базофилов (син. тучные клетки, лаброциты), плазмоци-тов, макрофагов определяли в единице площади среза, равной площади окулярной сетки, имеющей 256 малых квадратов (16x16) при увеличении об. х 40, ок. х 7, бинок. х 1,5. Произведение числа клеток в единице площади на уровень их активности обозначили термином «индекс активности».

Для изучения патологии энтерального саркоспоридиоза двенадцать щенков заразили посредством скармливания им сырого мяса овец, ин-вазированного цистами саркоспоридий. Интенсивность инвазии составляла 56 цист в 24 срезах компрессория. Каждому из щенков скормили по 500 г мышц в виде мелких кусочков. Контрольные щенки сырого мяса не получали в течение всего опыта. Перед заражением и в процессе опыта ежедневно у щенков измеряли температуру тела, частоту пульса и дыхания, проводили гематологические исследования: определяли количество гемоглобина, показатель гематокрита, количество эритроцитов, лейкоцитов по общепринятым методикам. Трех контрольных и пять опытных щенков убили на 12-й день после заражения — в период активного выделения спороцист паразита — посредством передозировки хлороформенного наркоза. Вскрытие трупов щенков, отбор и подготовку материала, а именно, кусочков стенки желудка и кишечника, печени, почек, легких, миокарда, мозга, селезенки, надпочечников, брон-

хиальных, мезентериальных и поверхностных лимфатических узлов, а также гистологические, цитологические и гистохимические исследования по выявлению полисахаридов, метахромазии, нуклеиновых кислот, макрофагов, плазмоцитов и тканевых базофилов проводили с использованием методов, описанных в соответствующих разделах эксперимента с овцами.

Для изучения возможности внутриутробного заражения овец использовали 3 трупа абортированных ягнят и 54 трупа ягнят, павших от гипотрофии в возрасте 2 — 3 дней. Из органов и тканей плодов и ягнят делали мазки-отпечатки и отбирали кусочки мышц языка, миокарда, диафрагмы, пищевода. Мазки-отпечатки фиксировали спирт-эфиром и красили по методам Романовского-Гимза и Браше. Кусочки мышц исследовали в компрессории (по Какуриной А. Г., 1970) и гистологических срезах. Количество мерозоитов в мазках-отпечатках внутренних органов подсчитывали в площади окулярной сетки в иммерсионной системе микроскопа (об. х 100, ок. х 7, бинок. х 1,5).

Для выяснения экологического влияния саркоспоридиоза на отгонных пастбищах хозяйств Зеленчукского, Урупского и Преградненского районов собирали фекалии 18 приотарных собак и пробы травы. Траву собирали на площади в 1 м2 с трех случайных участков пастбища посредством подрезания надземной прикорневой части. Спороцисты сар-коспоридий в фекалиях и траве (после ее измельчения) выявляли флотационным методом (по Фюллеборну) с последующей световой или люминесцентной микроскопией по разработанному нами способу (удостоверение на рацпредложение № 4/89 ССХИ). На отгонных пастбищах, где содержалось 5 отар численностью до тысячи овцематок и 1,5 — 2 тысячи ягнят в каждой, саркоспоридионосительство у овец устанавливали посредством исследования мышц языка, пищевода и области головы от трупов животных, доставляемых на плановые.вскрытия. Отобранный материал исследовали в компрессории и готовили из него гистологические срезы по общепринятым методам. Из каждой отары исследовали по четыре овцы. Вид и инвазионность паразитов, обнаруженных в мышцах овец, устанавливали посредством скармливания мяса пяти лабораторным собакам по 200 г на каждое животное в виде фарша.

Полученный при проведении цитохимических и цитоморфологиче-ских исследований цифровой материал обрабатывали методом вариационного анализа по Пушкареву Н. В. (1970). Заключение о достоверности средних величин изученных показателей и различий между ними делали при уровне вероятности (Р) 0.95 и более.

2.2. Клинико-морфологические и гистохимические изменения у овец в динамике переболевания саркоспоридиозом

2.2.1. Структурная и функциональная патология: состояние нуклеиновых кислот

Морфологические изменения у зараженных овец начали выявляться с 6-го дня расстройствами кровообращения и неглубокой деструкцией эпителия тонкого отдела кишечника, зернистыми дистрофиями паренхимы печени и почек. В мезентериальных лимфоузлах в этот период развивалась гиперемия и гиперплазия лимфоцитов в паракортикальной зоне и по периферии первичных фолликулов.

К 17-му дню болезни в тонком отделе кишечника сформировались изменения, характерные для острого серозно-катарального воспаления — набухание и слущивание эпителиоцитов ворсинок с накоплением на поверхности слизистой оболочки пиронинофильной массы слизи, содержащей примесь слущенных клеток.

Дистрофические процессы в печени и почках продолжали углубляться.

В лимфатических узлах отмечалось активное размножение клеток в центральных зонах фолликулов и накопление пиронинофилоцитов в мя-котных шнурах.

Наиболее глубокие патологические изменения были выявлены у больных овец в период с 23 по 30-й дни после заражения. Эпителий слизистой оболочки тонкого отдела кишечника был почти полностью разрушен. Мезенхима ее — неравномерно плотно инфильтрирована лим-фоидными клетками с выраженной пиронинофилией цитоплазмы.

В печени и почках структура паренхимы не выявлялась — большинство клеток ее находилось в состоянии глубокого некробиоза или некроза. В этих органах в сильной степени были выражены венозная и капиллярная гиперемия и микрогеморрагии. В мезенхиме печени, почек, легких, мышечной ткани встречались небольшие узелковые скопления лимфоидных клеток. В лимфатических узлах большая часть фолликулов была заполнена пиронинофилоцитами различной степени зрелости.

У овец, убитых на 50-й и 65-й дни после заражения, в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника по-прежнему были разрушены ворсинки, а рыхлая соединительная ткань собственной пластинки и под-слизистой основы — умеренно плотно инфильтрирована мезенхимными клетками. В печени и почках деструктивные изменения были распределены неравномерно, в зависимости от тканевой зональности. Глубина патологии изменялась от диффузной зернистой дистрофии до мелкоочаговых некрозов. В интерстиции всех органов и тканей отмечали обширные диффузные или очаговые скопления лимфоидных клеток. Активное размножение лимфоцитов с малым количеством цитоплазмы отмечено в паренхиме лимфатических узлов.

Развитие структурных изменений в динамике переболевания сарко-споридиозом коррелирует с изменением активности нуклеиновых кислот. В первые дни после заражения активность нуклеиновых кислот более чем вдвое снизилась в эпителиоцитах кишечника, печени и почек. К 10 — 12-му дню опыта интенсивность окраски ДНК и РНК в клетках этих органов не превышала уровня одного креста ГЦП. В надпочечниках же, напротив, активность клеток резко повышалась к 6-му дню болезни, а затем снизилась почти до одного креста к 10-му дню. В этот же период снизился уровень активности нуклеиновых кислот в мышечной ткани. Тенденция к снижению активности нуклеиновых кислот в клетках сохранялась и в последующие дни болезни, вплоть до окончания опыта. При этом, если активность РНК в цитоплазме клеток удерживалась на уровне одного-двух крестов ГЦП, то ДНК выявлялась в виде «следов» или интенсивно окрашенных мелких глыбок. Количество Т-лимфоцитов в виде гранулематозных или диффузных инфильтратов стабильно возрастало в течение первых 12 дней опыта. С 12-го по 17-й дни происходило незначительное снижение их количества, а затем отмечали стабильный рост — резкий до 23-го дня опыта и менее выраженный — в период с 25-го по 65-й дни.

2.2.2. Изменение количества полисахаридов

Для изучения процессов, обусловливающих стойкие морфологические гарушения в органах и тканях овец, болеющих саркоспоридиозом, мы 1сследовали изменения количества гликогена и других полисахаридов 1 динамике переболевания.

У здоровых овец в тонком отделе кишечника Шифф-положительные вещества локализовались в криптах и в слизи, тонкой полосой покрывшей поверхность щеточной каемки эпителия. В печени по всему сре-1у равномерно окрашенный в фиолетово-розовый цвет гликоген дока-' мзовался в цитоплазме эпителиоцитов. Максимальное количество его ^ответствовало четырем крестам интенсивности окраски Шифф-йод-юй кислотой. В почках гликоген выявлялся только в интиме артерий, . в надпочечниках цитоплазма клеток корковой (пучковой) зоны имела емно-розовую окраску с интенсивностью два креста ГЦП. В легких □ифф-положительные-вещества не выявлялись. В наружных и глубоких имфатических узлах гликоген с интенсивностью окраски два креста ЦП обнаруживали только в цитоплазме В-лимфоцитов. В селезенке ин-енсивнуто Шифф-положительную реакцию (+:£ ГЦП) давали только тра-екулы. Мышечные волокна языка, диафрагмы, пищевода, скелета и мио-арда равномерно были окрашены в фиолетово-розовый цвет, соответ-твующих трем крестам ГЦП, В матке Шифф-положительные вещества еровато-розового цвета содержались в просвете желез слизистой обо-очки.

2.2.3. Состояние тканевых базофилов и клеток

плазмоцитарной и мононуклеарно-фагоцитарной систем

Тканевые базофилы, выявленные у здоровых животных контрольной группы почти во всех исследованных органах и тканях, обладали свойством метахромазии — толуидиновым синим их цитоплазма окрашивалась в различные оттенки красного цвета.

В лимфатических узлах тканевые базофилы локализовались как в корковой, так и в мозговой зонах. Чаще всего они имели овально-вытянутую форму и цитоплазму, заполненную светлыми красно-малиновыми гранулами. В селезенке лаброциты располагались очень неравномерно. Как и в лимфоузлах, форма их была вытянутая или слегка овальная, а цитоплазма содержала четкие красные гранулы. Большое количество лаброцитов овально-вытянутой формы с четкими крупными гранулами светло-малинового цвета обнаруживали в рыхлой соединительной ткани слизистой оболочки тонкого отдела кишечника. Вытянутые (как фибро-бласты, но значительно более короткие) или овальные, интенсивно окрашенные, с мелкими гранулами тучные клетки выявляли в печени. Много лаброцитов с ярко-красными гранулами в цитоплазме располагалось в интерстиции легких и в перибронхиальных пространствах. Иногда (оа> бенно в клетках, расположенных около бронхиол) отмечали дегрануля-цию. В мышцах языка, пищевода, диафрагмы, сердца лаброциты ветре' чались с малой закономерностью и имели небольшое количество ЦИ' топлазмы с мелкими гранулами. Аналогично выглядели и тучные клетк1 в почках. В матке тканевые базофилы располагались в толще слизисто* оболочки почти на границе с мышечным слоем. Они имели округлук форму, большое ядро и четкие гранулы коричневато-красного цвета. I мозге тканевые базофилы не выявлялись.

Наибольшее количество тканевых базофилов у здоровых животны; выявлено в мезентериальных лимфоузлах (14,4 + 2,8), легких (16,0 Н 2,37) и в стенке тонкой кишки (14,0 + 2,37). На 6-й день болезни ош выявлялись только в легких (0,8 + 0,37) и в почках (0,6 + 0,27). Н< 10 — 12-й и 23-й дни опыта было отмечено незначительное увеличен» количества тучных клеток. После чего начался резкий спад, и с 30-п дня болезни тканевые базофилы в органах и тканях овец практичесю не выявлялись.

Активность и интенсивность реакции системы гуморального имму нитета у овец, болеющих саркоспоридиозом, мы оценивали по плот ности распределения клеток плазмоцитарного ряда (В-лимфоциты, плаз мобласты, проплазмоциты, плазмоциты) в тканях, количеству цитоггла: мы в них (степени дифференцированное™) и интенсивности ее окраск пиронином (по Браше).

В организме здоровых овец наибольшее количество пиронинофилс цитов выявлено в лимфатических узлах. В периферических участках фо; ликулов корковой зоны наружных лимфоузлов основную массу клето представляли плазмобласты — крупные клетки с относительно больши

ядром, расположенным в центре, и узким ободком цитоплазмы с интенсивностью окраски два-три креста ГЦП.

Мозговая зона лимфатических узлов преимущественно пиронинофиль-ная, очень рыхлая. Основная масса клеток — плазмобласты и проплаз-моциты (крупные клетки со слегка сморщенными, но недифференцированными ядрами). Плазмоцитов мало, локализованы они небольшими группами (по 3 — 5 клеток) в зоне ворот лимфоузла. Интенсивность окраски цитоплазмы — четыре креста ГЦП. В мезентериальных лимфоузлах типичные плазмоциты с умеренной активностью РНК цитоплазмы (+ + + ГЦП) локализовались в фолликулах паракортикальной зоны. В мякотных шнурах и мозговой зоне основную массу клеток составляли малодифференцированные пиронинофилоциты — чаще всего В-лимфоциты с активностью РНК цитоплазмы два креста ГЦП.

В белой пульпе селезенки пиронинофилоциты встречались редко. Основная зона их локализации — красная пульпа. Типичных плазмоцитов мало: в фолликулах они располагались в виде разрозненных групп по 5 — 6 клеток с небольшим количеством яркой — четырехкрестовой — цитоплазмы. В красной пульпе распределение плазмоцитов более равномерное, а активность РНК в их цитоплазме так же высока, как и в фолликулярных клетках. Кроме лимфоидных органов плазмоциты содержались в стенке тонкого отдела кишечника и в составе редкоклеточного фолиферата в зоне триад печени. Активность РНК их цитоплазмы не гревышала двух крестов ГЦП. В легких в'перибронхиалыюм пролифе-зате встречались отдельные единичные плазмобласты (В-лимфоциты) с срупными ядрами и заметным ободком активной (РНК = + + + ГЦП) цитоплазмы. Такие же клетки составляли основу центров фолликулов 5ронхиальных лимфоузлов. В мышцах языка, диафрагмы, пищевода, ске-,ота и сердца, а также в почках, надпочечниках, легких, матке, головном -юзге типичные плазмоциты отсутствовали.

В процессе переболевания наиболее ярко реагировали клетки плаз-юцитарного ряда лимфатических узлов и мезенхимы тонкого отдела ки-цечника. Количество активных плазмоцитов в этих тканях к 6-му дню .озросло более чем в 15 раз,-после чего последовало снижение их ко-ичества почти до нормы к 10-му дню с последующим умеренным воз->астанием к 17-му дню опыта. С 17-го по 23-й день опыта происходило гедленное, а затем (к 30-му дню болезни) резкое (практически до нуля) нижение активности этих клеток, и с 30-го до 65-го дня сохранялся чень низкий уровень активности плазмоцитов во всех органах и тканях.

У здоровых овец умеренно активные макрофаги с Шифф-интенсив-остыо цитоплазмы два креста ГЦП обнаруживали в лимфатических узах и селезенке. В соматических органах активность макрофагов была чень низкой, что не позволяло провести учет их количества.

В процессе эксперимента наиболее выраженную макрофагальную ре-кцию отмечали в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника и ме-ентериальных лимфоузлах. Индекс активности макрофагов в лимфо-злах возрастал с 6-го по 16-й день опыта (до 112,8 + 65,6 ед. против

19,2 +. 5,16 ед. в контроле), резко снизился на 17 — 50-й дни (до 1,2 + 0,88 ед.) и стабилизировался на уровне 20,0 ± 0,92 ед. к 65-му дню болезни. Аналогичными были изменения активности макрофагов в слизистой оболочке тонкой кишки.

2.3. Клинико-морфологическая характеристика хронического течения саркоспоридиоза овец

Через 12 месяцев после заражения овец культурой саркоспоридий в дозе 100 тысяч спороцист каждой заметных различий в клиническом состоянии животных опытной и контрольных групп не отмечали, кроме того, что овцы опытной группы имели меньшую массу и подвижность.

Патологические изменения заключались в диффузной альтерации мышц и паренхиматозных органов, проявляющейся дистрофиями или некробиозом клеток паренхимы печени, почек, слизистой оболочки кишечника. Мезенхима всех органов и тканей была неравномерно плотно диффузно или очагово инфильтрирована лимфоидными клетками. В паренхиме органов отмечали умеренно низкое количество гликогена и активность нуклеиновых кислот в пределах двух-трех крестов ГЦП.

Лаброциты в мезенхиме органов имели активность и плотность распределения, близкие к таковым у здоровых овец.

В лимфоузлах выделялись расширенные герминативные центры фолликулов, заполненные молодыми пиронинофильными клетками.

Активные макрофаги были выявлены только в лимфатических узлах, печени и мезенхиме тонкого отдела кишечника.

2.4. Клинико-морфологическая характеристика сверхострого течения саркоспоридиоза овец

Клиническая патология сверхострого течения саркоспоридиоза развивалась у овец, зараженных заведомо большими дозами спороцист (1, 2, 4, 6 и 8 млн. каждому животному), начиная с пятого дня опыта. С 14-го дня происходило усугубление патологических проявлений в кли ническом состоянии, которое достигло апогея к 24 — 30-му дням, после заражения. В этот период пали или были убиты в атональном состояние все овцы этой .опытной группы. При патоморфологических исследова ниях у них выявлялись морфофункциональные изменения, характерны« для анафилактического шока: массовые кровоизлияния и отеки в ор ганах и тканях, повсеместные некрозы паренхимы, уменьшение актив ности нуклеиновых кислот в клетках # количества полисахаридов в тка нях. Повсеместно обнаруживали дегранулированные тканевые базофи лы и небольшое количество малоактивных плазмоцитов и макрофаго цитов. Незакономерно в тканях выявляли клеточные гранулемы, состо ящие из активных Т-лимфоцитов и плазмоцитов. Наиболее глубокие де структивные процессы отмечали в легких и тонком отделе кишечника

2.5. Клинико-морфологические проявления саркоспоридиоза у овец при суперинвазии

В опыте по индуцированию саркоспоридиоза посредством суперин-вазирования овец-саркоцистоносителей в качестве объекта исследований использовали животных, в мышцах которых обнаруживали цисты паразита.

Контролем служили овцы, спонтанно заразившиеся саркоспориди-озом. На момент исследования отклонений в их клиническом состоянии обнаружено не было. Средняя температура тела овец в группе была 39,5 ± 0,32°С (Р > 0,999), частота дыхания — 53,3 ± 8,16 (Р > 0,99), частота пульса — 84,0 + 2,8 (Р > 0,999). При анатомировании трупов овец была установлена средняя упитанность и отсутствие морфологических отклонений в органах и тканях.

Клинико-морфологические проявления саркоспоридиоза у овец, зараженных 100000 спороцист саркоспоридий, иллюстрирует сглаженное, почти бессимптомное течение болезни. Температура тела у них поднялась до 40,2 + 0,2°С к 10-му дню опыта и удерживалась с небольшим (в пределах 0,5°С) колебанием до 29-го дня, после чего снизилась до 39,6°С (против 39,5 + 0,32°С у контрольных животных). Частота пульса наиболее значительно (до 92,0 + 4,9 удара в минуту) возросла к 10-му дню опыта, с небольшими колебаниями удерживалась до 29-го дня, после чего снизилась до 82,6 + 3,2 удара в минуту (против 84,0 + 2,8 у контрольных овец). Активность нуклеиновых кислот в клетках паренхимы органов удерживалась на характерном для овец-саркоцистоносителей уровне двух-трех крестов ГЦП до 22-го дня опыта; в период с 22-го по 29-й день она резко снизилась (в отдельных участках до нуля). Это состояние нуклеиновых кислот сохранилось до конца опыта — до 65-го дня после суперинвазирования овец. Аналогичную тенденцию имели изменения полисахаридов. Интенсивность цистой инвазии в конце опыта была различной и лишь в отдельных группах мышц (язык, массетер) значительно превышала уровень интенсивности инвазии контрольных животных.

Количество активных плазмоцитов, после небольшого подъема к 6-му дню, снижалось в период с 6-го по 12-й день почти до нуля, а затем повышалось до максимальных значений (особенно в мезенхиме тонкого отдела кишечника) к 22-му дню и с этого момента стабильно уменьшалось, достигая нулевой отметки к 65-му дню опыта. Количество активных Т-лимфоцитов в лимфатических узлах и гранулематозных или диффузных инфильтратах мезенхимы с момента суперинвазирования овец неуклонно увеличивалось, стабилизируясь на максимальных значениях к концу опыта.

Наиболее активные в качественном и количественном отношениях макрофаги локализовались в мезенхиме тонкого отдела кишечника на 6-й- и 10-й дни, после чего их количество повсеместно резко снизилось, и с 22-го дня опыта макрофаги не выявлялись.

Количество тканевых базофилов к 6-му дню болезни снизилось почти до нуля, а затем незначительно возросло к 10-му дню, после чего стабильно уменьшалось, и с 22-го дня опыта эти клетки выявлены не были.

2.6. Клинико-морфологические проявления

саркоспоридиоза в ассоциациях с гельмннтозами (дикроцелиоз, диктиокаулез, ценуроз)

Особенности клинико-морфологических проявлений измененной формы саркоспоридиоза — патоморфоза, формирующегося в паразитозных ассоциациях, изучали на двух группах овец.

В первую группу были включены три овцы, спонтанно заразившиеся саркоспоридиозом на фоне ценуроза; во вторую — три овцы, болевшие одновременно саркоспоридиозом, диктиокаулезом и дикроцелиозом так: же после спонтанного инвазирования.

Животные первой группы погибли после двух-, трехдневного пере-болевания с неспецифическими клиническими признаками: повышением температуры тела до 41,3 + 0,4°С (Р > 0,999), отказом от корма, судорогами, затрудненным, учащенным поверхностным дыханием, желтуш-• ностью видимых слизистых оболочек.

При вскрытии у овец этой группы обнаружили патологоморфологи-ческие признаки, характерные для острого течения саркоспоридиоза: жел-тушность фасций и подкожной клетчатки в области подчелюстного пространства и грудной кости; застойную гиперемию и жировую дистрофию печени; белковую дистрофию эпителия почечных канальцев; очаговую гиперплазию селезенки; мелкоузелковый пролиферативный миокардит с точечными кровоизлияниями под эпикардом; десквамативный энтерит; набухание лимфатических узлов; очаги инте^стициального воспаления мышц скелета, локализованные независимо от цист, с набуханием и атрофией волокон; эмфизему, отек и слабовыраженную очаговую интерстициальную пролиферацию в легких.

Набухание лимфатических узлов было обусловлено разрыхлением и отеком стромы, протекавшими с гипотрофией лимфоидной ткани, которая была представлена отдельными островками.

У двух овец, кроме того, в левой лобной, а у одной — в правой теменной долях головного мозга, находили ценурозные пузыри диаметром около 2,5 — 3 см. Ткань мозга в зоне локализации пузырей была атрофирована, а в более удаленных участках — слегка отечна. В разрыхленном основном веществе отмечали диффузную пролиферацию гли-альных клеток с бессистемно расположенными узелковоподобными скоплениями их. В мозге отсутствовали признаки острого течения ценуроза: кровоизлияния, ходы онкосфер, проявления негнойного энцефалита с характерной сосудистой и глиальной реакциями.

Во второй группе овцы погибали без выраженной агонии после нескольких часов залеживания. Температура тела у них не превышала фи' зиологические показатели. При вскрытии устанавливали выраженную

анемию и истощение с желеобразными отеками подкожной клетчатки в области подгрудка, межчелюстного пространства, коленных складок. Под кожей, в сальнике, в жировых капсулах органов жир полностью отсутствовал, а в области почек и под эпикардом был подвергнут ос-лизнению. В органах и тканях выявлены изменения, характерные для диктиокаулеза: подострый бронхит, перибронхиальные и периваскуляр-ные разрастания соединительной ткани, обширные участки ателектазов в легких. В просветах бронхов (особенно мелких в диафрагмальных долях легких) локализовалось большое количество диктиокаул — клубки по 30 — 40 особей.

Наличие в желчных протоках и желчном пузыре большого количества дикроцелий (в каждой капле желчи обнаруживали по 50 — 60 экземпляров паразита) обусловливало развитие специфических признаков хронического дикроцелиоза — подострого холангита и холецистита, сливающихся очагов билиарного цирроза, атрофии и дистрофии паренхимы печени.

Кроме описанных проявлений болезни у овец регистрировали гидроторакс, асцит и гидроперикардиум с накоплением в грудной и брюшной полостях по 2,5 — 3 литра, а в полости перикарда до одного литра прозрачной, опалесцирующей, желтоватой жидкости. Признаки истощения у овец сопровождались проявлениями глубокой дистрофии и некробиоза эпителия почечных канальцев, белково-жировой дистрофией эпите-лиоцитов печени,, подострого десквамативного энтерита, а также гипоплазией ( с резким сокращением количества лимфоцитов) паренхимы лимфатических узлов и селезенки с отеком и разрыхлением их стромы.

В рыхлой соединительной ткани паренхиматозных органов встречали более или менее плотные узелковые скопления клеток, состоящие преимущественно из Т-лимфоцитов с примесью небольшого количества клеток фибробластнрго ряда.

В сердце, диафрагме, пищеводе отмечали признаки подострого гра-нулематозного миозита со слабовыраженной сосудистой реакцией, глубокой дистрофией мышечных волокон и очаговыми скоплениями Т-лимфоцитов и клеток мезенхимы в межпучковых пространствах. Патологические изменения в мышцах формировались независимо от локализации цист паразита, которых в каждом поле зрения микроскопа (об. х 5, ок. х 5, бинок. х 1,5) обнаруживали по 34,2 ± 8,3 (Р > 0,95). Размеры цист колебались от 25 до 120 мкм в поперечном сечении.

Таким образом, острое течение саркоспоридиоза, протекающее у овец на фоне хронического ценуроза, характеризуется преобладанием дистрофических явлений и сглаженностью или выпадением процессов, типичных для гиперчувствительности замедленного или немедленного типов. Хроническое течение диктиокаулеза и дикроцелиоза снижает резистентность и реактивность организма овец, обеспечивая условия для выживания саркоспоридий и формирования большого количества мышечных цист.

2.7. Клинико-морфологические проявления саркоспоридиоза у овец при нитратно-нитритном токсикозе

Опыты по индуцированию острого и хронического нитратно-нитрит-ного токсикоза проводили на овцах, не имеющих клинических признаков саркоспоридиоза, но являющихся саркоцистоносителями. Овцы, подвергнутые острому отравлению, пали через двадцать три дня перебо-левания с выраженными клиническими признаками нитритного токсикоза — метгемоглобинемией, расстройствами деятельности дыхательной, пищеварительной, мочевыделительной. и нервной систем, а также миокардиодистрофией.

При морфологическом исследовании у них были выявлены следующие изменения: подострый десквамативно-катаральный энтерит с полным разрушением ворсинок и метаплазией эпителия крипт в слизистые экзокриноциты. Толща слизистой была избыточно инфильтрирована активными крутлоядерными клетками преимущественно фибробластного ряда. В отдельных участках такие скопления образовывали плотные сплошные зоны. Редко встречавшиеся капилляры были растянуты, переполнены кровью. Изменения в печени имели характер подострого гепатита. Вокруг умеренно расширенных сосудов триад, а также вокруг центральных вен и в паренхиме отмечали формирование очагов пролиферации. В поверхностных (подкапсульных) слоях почки паренхима была полностью некротизирована: в клетках и клубочках отсутствовали ядра, границы между эпителиоцитами не выявлялись. Повсеместно в мезенхиме встречали небольшие ограниченные скопления клеток, состоящие преимущественно из активных лимфоцитов. В лимфатических узлах преобладающим процессом была обильная Т-лимфоцитарная пролиферация в корковой зоне и мякотных шнурах с формированием плотных, без выраженного герминативного центра, вторичных фолликулов в мозговой зоне. В мышцах сердца и скелета развивались процессы подострого интерстициального миозита: дистрофия мышечных волокон с очаговой деструкцией до состояния некробиоза сочеталась с выраженной гиперемией и очаговыми кровоизлияниями. В мезенхиме локализовались отдельные лимфоидноклеточные гранулемы. В каждом поле зрения встречалось по 2,8 + 0,96 внутримышечных цист паразита (Р > 0,95).

Овец, подвергшихся хроническому нитратно-нитритному токсикозу, убили через тридцать дней после отравления субпороговыми дозами натрия нитрита и переболевания с выраженными признаками токсикоза. В тонком отделе кишечника у них отмечали деструкцию ворсинок и накопление клеточно-слизистой массы на поверхности слизистой оболочки. Подслизистая основа и остатки собственной пластинки были диф-фузно плотно инфильтрированы лимфоидными клетками мезенхимы н истинными лимфоцитами. Структура трабекул и эпителиоцитов печени сохранена. Но как в центре, так и по периферии долек в большинстве клеток ядра были лизированы и представлены «тенями». В зонах триа^

Таблица 2

Сравнительная характеристика индикаторов клинического состояния собак при экспериментальном сархоспориднозе

Показатели Контрольные (здоровые) (1) Подопытные Различия в группах

до заражения (2) в патентный период (3)

1 и 3 2 и 3

Температура, °С 39,2 ± 0,08 38,5 + 0,16 38,9 ± 0,06. Р < 0,95 Р < 0,95

Р > 0,999 Р. > 0,99 Р > 0,999

Пульс, ударов/минуту 126,3 ± 3,74 132,1 ± 2,7 124,1 ± 3,0 Р < 0,95 Р < 0,95

Р > 0,999 Р > 0,999 Р > 0,999

Дыхание, движ./мнн. 64,9 + 2,18 58,3 + 3,6 64,3 + 3,16 Р < 0,95 Р < 0,95

Р > 0,999 Р > 0,999 Р > 0,99

Гемоглобин, г/100 мл 11,9 ± 0,38 10,36 ± 0,5 11,6 ± 0,28 Р < 0,95 Р < 0,95

Р > 0,999 Р > 0,999 Р > 0,999

Гематокрит, мм 31,6 ±1,7 31,2 ± 3,4 32,26 ± 1,54 Р < 0,95 Р < 0,95

Р > 0,999 Р > 0,999 Р > 0,999

Лейкоциты, тыс./мкл 12,6 ± 0,47 12,6 ± 1,7 13,2 ± 5,5 Р < 0,95 Р < 0,95

Р > 0,999 Р > 0,99 Р > 0,95

Эритроциты, млн./мкл 4,22 ± 0,22 4,39 + 0,8 3,88 ± 1,05 Р < 0,95 Р < 0,95

Р > 0,999 Р > 0,95 ' Р > 0,95

выявляли сформированные очаги пролиферата мезенхимоцитов. В почках картина патологии мозаичная: чередовались участки полного и неполного некроза паренхимы. В мезенхиме сосудистая реакция не выявлена, встречались ограниченные клеточные гранулемы. Фолликулы лимфатических узлов имели нечеткие границы и слабовыраженные центры размножения. Мякотные шнуры и мозговая зона также были умеренно плотно заполнены лимфоцитами. В мышечной ткани отмечали дистрофию отдельных волокон, межмышечные лимфоидноклеточные гранулемы и небольшое количество цист саркоспоридий (2,2 + 0,96, Р > 0,95).

2.8. Патология энтерального саркоспоридиоза собак

2.8.1. Клинико-морфологические проявления энтерального саркоспоридиоза собак

Собаки, экспериментально зараженные саркоспоридиозом, перебо-левали без ярко выраженных клинических признаков. Лишь с началом массового выделения ооцист — на 11 — 12-й день после скармливания им сырого мяса (при исследовании в компрессории в 24 срезах мышц было обнаружено 55 цист паразита), у собак отмечали легкое угнетение, отказ от корма, выделение размягченных фекалий, тусклость шерсти и слизистых оболочек глаз. Клинические и гематологические показатели у подопытных животных не выходили за пределы аналогичных показателей здоровых собак контрольной группы (табл. 2).

Морфологические изменения в организме собак, выделяющих споро-цисты саркоспорцдий, характеризовались преимущественно признаками атрофии и деструкции. В зонах развития паразита — тонком отделе кишечника — отмечали разрушение «верхней» трети ворсинок. Деструкция выражалась набуханием и слущиванием эпителия или полным отторжением апикальных концов ворсинок вместе с участками собственной соединительнотканной пластинки. На поверхности слизистой оболочки находилась густая масса, содержащая разрушенные и слущенные в виде блоков по 5 — 8 штук клетки эпителия, слизь, большое количество лимфоидных клеток, вместе с которыми происходила мутиляция апикальных концов ворсинок. В собственной пластинке слизистой оболочки (на границе с участками накопления ооцист саркоспоридий) были сформированы плотные скопления молодых лимфоидных и эпителиоидных клеток, ограничивающие зоны развития паразита. В паренхиматозных органах были зарегистрированы признаки зернистой дистрофии или атрофии паренхимы с уменьшением в клетках активности нуклеиновых кислот до уровня одного-двух крестов ГЦП.

2.8.2. Состояние тканевых полисахаридов

Наличие и количество гликогена (в печени и мышцах) и других полисахаридов в органах и тканях собак в патентный период выявляли по средством окраски гистологических срезов Шифф-йодной кислотой I толуидиновым синим.

Слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта на всем продолжении была покрыта большим или меньшим количеством яркой ШИК-че-тырехкрестовой массой муцинов. Слизь, локализованная на поверхности слизистой оболочки, в криптах и между ворсинками двенадцатиперстной и тощей кишок в виде узкой полоски, содержала малое количество муцинов (ШИК = + ГЦП). Крупные, набухшие слизистые эк-зокриноциты имели четкие границы и слабоокрашенную (ШИК = + ГЦП) крупноглыбчатую цитоплазму. В печени гликоген распределялся неравномерно: наиболее интенсивно (ШИК = ++ ГЦП) была окрашена цитоплазма гепатоцитов, локализованных вокруг сосудов печеночных триад. В остальных участках паренхимы гепатоциты имели слегка розовую окраску (ШИК не выше полукреста ГЦП) или вовсе не окрашивались. Миоциты миокарда окрашивались Шифф-йодной кислотой неравномерно, с перемежающейся интенсивностью. Более ярко (+ + + ГЦП) были окрашены волокна с хорошо выраженной поперечной и продольной исчерченностыо; волокна слегка набухшие, извитые, без выраженной исчерченности окрашивались в бледно-розовый цвет (+ + ГЦП). В лимфоидных структурах Шифф-положительные вещества выявляли в клетках мононуклеарно-фагоцитарной системы.

2.8.3. Реакция системы гуморального иммунитета, тканевых

базофилов и клеток мононуклеарно-фагоцитарной системы

Выраженные признаки реакции системы гуморального иммунитета были выявлены только в лимфоидной ткани собак, активйо выделяющих спороцисты саркоспоридий. Наиболее глубокие сдвиги произошли в ме-зентериальных лимфоузлах, регионарных двенадцатиперстной и начальному отделу тощей кишки. Первичные фолликулы в них были плотные с интенсивно окрашенными ядрами лимфоцитов. Большая часть центрально расположенных клеток имела ядра с рыхлым хроматином и небольшое количество мелкоглыбчатой цитоплазмы с активностью РНК два креста ГЦП. В единице площади среза (об. х 40, ок. х 7, бинок. х 1,5) в новообразованных фолликулах паракортикальных синусов содержалось по 47,2 + 3,02 типичных зрелых плазмоцита. В мозговой зоне количество зрелых плазмоцитов увеличивалось по мере продвижения к воротам лимфоузла от 4 —5 до 22 — 28 клеток в единице площади среза.

При оценке состояния тканевых базофилов в организме у собак в период активного выделения ими спороцист саркоспоридий (на 11-й день после скармливания собакам фарша из мышц овец) установлено, что в двенадцатиперстной и тощей кишках лаброциты равномерно были распределены по всей толще стенки. В цитоплазме их содержалось небольшое количество четких, плотных гранул. Много тучных клеток находилось в клеточно-слизистом детрите, заполнявшем просвет кишки. В этих клетках были сохранены четкие границы ядер и отдельные гранулы. Рядом с гранулами хорошо различались сероватые вакуоли — показатель

дегрануляции тучных клеток. В остальных органах и тканях плотность распределения тканевых базофилов не отличалась от контроля.

В исследованных нами парафиновых гистосрезах (фиксация в жидкости Карнуа, окраска Шифф-йодной кислотой) органов и тканей собак, выделявших спороцисты саркоспоридий, макрофаги были выявлены в печени, легких, миокарде, селезенке, лимфатических узлах, лимфатических фолликулах кишечника. Фиксированные макрофаги печени имели высокую интенсивность окраски цитоплазмы — три-четыре креста ГЦП. Форма их была чаще неправильная, амебовидная с небольшим количеством псевдоподий. Ядра умеренно плотные, немногим больше ядер ге-патоцитов. В мезентериальных лимфоузлах тонкого отдела кишечника макрофаги с большим количеством слабоокрашенной (++ ГЦП) цитоплазмы и некрупными бобовидными ядрами локализовались в мякотных шнурах и мозговых синусах. За пределами этих скоплений в мозговой зоне встречались отдельные клетки, а в корковой зоне мы их не обнаружили вовсе. Размер макрофагов в лимфоузлах не превышал 8 — 10 мкм. В остальных органах и тканях макрофаги также имели закономерно низкую активность — не более трех крестов ГЦП.

Клинико-морфологические изменения, выявленные у собак в патентный период энтерального саркоспоридиоза, свидетельствуют о развитии в их организме ареактивных гипобиотических процессов, наиболее тяжело протекающих в зоне локализации паразита — тонком отделе кишечника в виде атрофий эпителия слизистой оболочки и желез с последующим некрозом и слущиванием клеток. На отсутствие организ-менной реакции указывает интактное состояние тканевых базофилов и клеток плазмоцитарной и мононуклеарно-фагоцитарной систем.

2.9. Морфологическое и гистохимическое состояние Б. оу1сап18 в динамике развития в организмах окончательного и промежуточного хозяев

У собак на 11 — 12-й дни после скармливания им сырого мяса овец, в котором содержалось 56 цист паразита в 24 срезах, исследованных в компрессории, половые стадии саркоспоридий локализовались в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника. Наиболее четко различные стадии развития паразита выявлялись при окраске по Браше и Шабо-дашу. В рыхлой соединительной ткани собственной пластинки булавовидно расширенных апикальных концов ворсинок слизистой оболочки тощей кишки было обнаружено несколько стадий развития саркоспоридий. В глубоких слоях рыхлой соединительной ткани локализовались соматические клетки с округлым ДНК-положительным ядром, в цитоплазме которых находились полулунные или сигарообразные эндозоиты саркоспоридий с розовато-зеленоватыми (по Браше) ядрами. Второй стадией развития было формирование в клетках с ДНК-положительным ядром размером 10 х 10 мкм гаметоцитов — округлых пиронинофильных включений, занимающих '/6 — '/5 часть объема цитоплазмы. В дальней-

шем соматические клетки — альмациты — утрачивали ядра, а цитоплазма их заполнялась пиронинофильной (РНК = +4-4- ГЦП) массой с зеленовато-синими включениями ДНК, то есть они превращались в макрогаметоциты. В межклеточном пространстве на этой стадии развития находились мелкие (0,5 — 1 мкм), с ДНК-содержащей расширенной «головкой» и вытянутой «хвостовой» частью микрогаметы.

Следующими зафиксированными фазами полового развития сарко-споридий являлись стадии формирования и спорулирования ооцист. В этом процессе по мере деления ооцисты на две спороцисты и образования в последних по четыре спорозоита в ней уменьшалось содержание РНК и увеличивалось количество ДНК. По мере формирования и созревания спороцист в спорозоитах происходило накопление гликогена. В сформированных спороцистах, локализованных в деструктированных апикальных концах ворсинок слизистой оболочки и в клеточно-слизистом детрите на поверхности слизистой оболочки, количество ШИК-положительных веществ находилось в пределах трех-четырех крестов ГЦП.

То есть в организме окончательного хозяина макрогаметы и неспо-рулированные ооцисты локализовались преимущественно в собственной пластинке слизистой оболочки между клетками рыхлой соединительной ткани. По мере созревания ооцисты продвигались к краю ворсинок и выходили на поверхность их, отторгая эпителий вместе с базальной мембраной. После этого спорулированные ооцисты (свободные или все еще находящиеся в толще оторвавшихся ворсинок слизистой оболочки) вместе с содержимым кишечника выделялись во внешнюю среду.

Весь процесс гаметогонии от внедрения в слизистую оболочку тонкого отдела кишечника эндозоитов, высвободившихся в процессе переваривания мясного фарша, до начала выделения спорулированных ооцист, занимал 8 — 9 дней, а длительность выделения спороцист составила 86 дней.

Бесполое развитие Б. оу!сатз в организме промежуточного хозяина — овцы с формированием мышечной цисты начиналось в тонком отделе кишечника.

К 6-му дню после введения через рот овце спороцист в. оу^атэ в рыхлой соединительной ткани слизистой оболочки тонкого отдела кишечника встречались единичные свободные спорозоиты. Они имели ба-нановидную или вытянутую пироплазмоидную форму и размеры около 2 мкм. Их цитоплазма содержала умеренно активную РНК (4-4- ГЦП).

В корковой зоне мезентериальных лимфоузлов также располагались единичные свободные эндозоиты банано- или сигарообразной формы с четкими ядрами, активность ДНК в которых достигла уровня четырех крестов ГЦП, и слабо-розовой цитоплазмой (активность РНК не превышала уровня двух крестов ГЦП), содержавшей «следы» полисахаридов. Размеры их достигали 5 мкм. В единице площади среза располагалось по 5,2 ± 1,5 особей паразита, Р > 0,95 (об. х 100, ок. х 7, бинок. х 1,5). в мозговой зоне в единице площади среза локализовалось по 3,6 ± 1,3 (Р > 0,95) шизонта — более или менее крупной клетки со слабоокрашенной цитоплазмой (не более двух крестов интенсивности

окраски Шифф-йодной кислотой или пиронином) и набухшими ядрами с рыхлым хроматином (активность ДНК — не более одного-двух крестов или меньше одного креста ГЦП) размером до 20 мкм. В цитоплазме этих клеток содержалось по 10,4 + 3,2 (Р > 0,95) мелких (1,5 — 2 мкм), чаще булавовидной формы, интенсивно окрашенных метиловым зеленым (ДНК = Х% ГЦП) мерозоита. Цитоплазма их содержала большое количество полисахаридов (до четырех крестов ГЦП).

На 17-й день развития основная масса паразита была сосредоточена в мезентериальных лимфоузлах, где на единицу площади мозговой зоны приходилось по 97,4 + 10,1 (Р > 0,99) мерозоитов, располагавшихся преимущественно свободно или в виде небольших скоплений. Мерозоиты имели высокую активность нуклеиновых кислот, большое количество полисахаридов.

На 22-й день в каждом поле зрения в срезах мезентериальных лимфоузлов встречалось по 4 — 5 шизонтов, содержавших не более 18 — 20 зоитов паразита в цитоплазме с низкой активностью РНК и небольшим количеством полисахаридов. В различцых участках корковой зоны бронхиальных лимфоузлов располагалось от 10 до 200 (119,0 + 36,9, Р > 0,95) зоитов саркоспоридий. Основная их масса имела округлую форму, вакуолизированную или окрашенную в красновато-коричневый (буро-желтый) цвет цитоплазму. Локализовались зоиты в абсолютном большинстве на оболочках Т-лимфоцитов. Очень редко по 3 — 5 зоитов с низкой (не более одного креста ГЦП) активностью нуклеиновых кислот располагались в цитоплазме макрофагов.

25-й день цикла развития характеризовался активным разрушением шизонтов и выходом свободных мерозоитов. В мезентериальных лимфоузлах встречались неограниченные плотные скопления зоитов по 60 — 80 экземпляров и большое количество свободных паразитов — до 200 в поле зрения (по 156,2 + 21,9, Р > 0,999, в единице площади среза). В красной пульпе селезенки в каждом поле зрения микроскопа обнаруживали до двадцати Т-лимфоцитов, на оболочке каждого из которых было зафиксировано от 3 до 12 мерозоитов. В последних не выявлялись полисахариды, активность РНК цитоплазмы не превышала двух, а ДНК ядер— одного креста ГЦП.

С 26-го дня опыта (на 26, 27, 28, 29, 31 и 33-й дни исследования) фактов размножения паразитов выявлено не было. Напротив, в лимфатических узлах и селезенке отмечали активную фиксацию мерозоитов на оболочках Т-лимфоцитов. Наиболее ярко этот процесс был выражен в мозговой зоне мезентериальных лимфоузлов, где в единице площади среза выявляли до 200 экземпляров паразита, адгезированных на поверхности Т-клетох. В эти же дни в мышцах под сарколеммой появились предцистные формы развития саркоспоридий — плотные образования округлой или овальной формы с четкой перифокальной капсульной зоной. Они имели высокую активность нуклеиновых кислот (до четырех крестов интенсивности окраски толуидиновых синим) и небольшое содержание полисахаридов. Диаметр этих форм паразита от 5 — 6 мкм

и выше в зависимости от степени «зрелости». В более крупных образованиях содержимое фрагментировалось и появились свободные неокрашенные участки — предшественники септ. Количество предцист-ных форм небольшое — по одной на 8 — 10 полей зрения (об. х 90, ок. х 7, бинок. х 1,5).

На 50-й и 65-й дни в мезентериальных лимфоузлах зоитоподобные красновато-бурые образования по 8 — 18 экземпляров встречались в цитоплазме ретикулярных клеток. В поперечнополосатых мышцах языка, пищевода, скелета, сердца, диафрагмы было сформировано большое количество цист паразита (до 15 — 18 в поле зрения, об. х 9, ок. х. 7, бинок. х 1,5). Они имели различные размеры и хроматофиль-ность. «Молодые» цисты имели длину до 10 — 15 мкм, были заполнены преимущественно округлыми эндозоитами, с высокой активностью нуклеиновых кислот (+ + — + 4- + ГЦП) и большим содержанием полисахаридов (Ч—!—ГЦП). Ядра эндозоитов были относительно крупные — до двух третей объема клетки. При поперечном разрезе выявлялось, что эндоглия занимала приблизительно четвертую часть полости цисты.

Через 12 месяцев с момента попадания в" организм промежуточного хозяира саркоспоридий обнаруживали в лимфатических узлах (преимущественно мезентериальных) в виде свободных умеренно активных ме-розоитов, рассеянных в мезенхиме мозговой зоны по 150,0 +. 11,7 (Р > 0,99) экземпляров в единице площади среза. Здесь же были локализованы активные Т-лимфоциты с адгезированными .на их оболочках зоитами паразита (по 24,2 + 2,6, Р > 0,99, клетки в единице площади среза), а также шизонтоподобные скопления мерозоитов, в которых приблизительно одна треть активная, а две трети — коричневато-красные с низкой активностью нуклеиновых кислот и не содержащие полисахаридов, и свободные пигментированные зоитоподобные образования. Состояние мышечных цист не отличалось от положения на 65-й день опыта.

У овец-саркоцистоносителей, спонтанно заразившихся саркоспори-диозом, в мозговой зоне лимфоузлов выявили небольшое количество свободных активных живых мерозоитов (по 7,4 ± 1,9, Р > 0,95, в единице площади среза) или мерозоиты в шизонтоподобных скоплениях — до 20 экземпляров, а также желтовато-серые или красно-коричневые зоитоподобные гранулы пигмента или их скопления. Большинство мышечных цист имело преимущественно пиронинофильную окраску. Количество цист в различных мышцах составляло в среднем 2,1 + 0,75 (Р > 0,99) в единице площади среза при об. х 9, ок. х 7, бинок. х 1,5.

Таким образом, в организме овцы как промежуточного хозяина осуществляется постоянная циркуляция зоитов Б. оу^ашэ. С интервалом в 8 — 9 дней в макрофагах хозяина происходит шизогония паразита с последующим уничтожением большей части новообразованных зоитов системой Т-клеточного иммунитета. Меньшая часть зоитов дает начало новым шизонтам или формирует мышечные цисты.

2.10. Внутриутробная передача саркоспоридий

и искусственное формирование природных очагов саркоспоридиоза овец

Для изучения вероятности внутриутробного заражения ягнят мы обследовали 3 трупа абортированных ягнят последних дней суягности и 54 трупа ягнят, павших от алиментарной дистрофии в первые 2 — 3 дня жизни.

В исследованных с целью обнаружения цист саркоспоридий мышцах языка, пищевода, диафрагмы, скелета, а также в миокарде ни в компрессионных, ни в гистологических срезах терминальных форм развития паразита — цист или предцистных стадий — обнаружено не было. В мазках-отпечатках лимфатических узлов, печени, почек, миокарда, легких, окрашенных способами Романовского-Гимза и Браше, мы обнаружили большое количество мерозоитов саркоспоридий — банановидных и вытянуто-грушевидных образований размером 1,5 — 2 мкм с хорошо различимыми ядрами и цитоплазмой. Активность ДНК ядер их оценивалась в четыре креста, а РНК цитоплазмы — в три креста ГЦП.

Плотность распределения вегетативных форм саркоспоридий приведена в таблице 3.

Таблица 3

Плотность распределения бесполых форм саркоспоридий у новорожденных ягнят

Морфологическая единица

Плотность распределения, (X + ш)

Достоверность (Р)

Лимфатические узлы

Селезенка

Печень

Почки

Миокард

Язык

5,4 ± 2,5 0,4 ± 0,45 2,8 ± 0,32 1,2 ± 0,65 1,2 ± 0,42 1,6 ± 0,75

> 0,95 < 0,95

> 0,99

> 0,95 > 0,999

> 0,99

Экстенсивность инвазии ягнят составила 61,11

В летний период 1990 и 1991 годов нами были обследованы отгонные пастбища хозяйств Зеленчукского, Урупского и Преградненского районов, расположенных в долинах рек Малая Дукка, Архыз и Зеленчук. На этих пастбищах в зоне альпийских лугов на высоте 2 — 2,5 тысячи метров над уровнем моря с начала июня по 10 — 15 сентября содержат маточное поголовье овец совместно с ягнятами текущего года рождения. Каждая бригада чабанов, как правило, использует одни и те же пастбища в течение 2 — 3 лет, сохраняя на них загоны для животных и свое временное жилье. Для охраны овец и защиты их от нападения диких животных чабаны содержат на каждом стойбище по 2 — 3 (реже — больше) кавказских овчарки и столько же собак-пастушек.

При исследовании в компрессории кусочков мышц области головы, а также языка и пищевода овец в каждом из 24 срезов площадью приблизительно 1 см2 было обнаружено 12 — 16 цист сарк о споридий, то есть всего 288 — 384 цисты в 24 срезах. Гистологические отклонения заключались в набухании и фрагментации волокон, потере поперечной, а в ряде случаев и продольной исчерченности. В каждом поле зрения микроскопа (об. * 5, ок. х 5, бинок. х 1,5) обнаруживали по 7 — 8 цист паразита. •

У трех лабораторных собак, которым скармливали фарш, приготовленный из мышц обследованных овец (по 200 г каждому животному), по истечении 10 дней наблюдали клинические признаки энтерита: легкое угнетение, частичный отказ от корма, понос с выделением полужидких слизистых фекалий серо-желтого цвета. Способом Фюллеборна в фекалиях собак обнаружены спорулированные спороцисты сакроспо-ридий.

У 18 приотарных собак, рацион которых в основном состоял из мяса павших овец, на момент исследования клинических признаков желудочно-кишечных заболеваний не отмечали, но в их фекалиях, собранных на пастбище, обнаруживали спорулированные саркоспоридии (до 50 тыс. экземпляров в каждом грамме фекалий).

Спороцисты саркоспоридий нами были обнаружены также в траве, собранной на пастбище. С одного квадратного метра участков высокогорных лугов, предназначенных для выпаса овец, было собрано в среднем по 680 г травы (в сухом виде), в которой содержалось от двух до четырех тысяч спороцист.

Таким образом, обнаружение вегетативных форм саркоспоридий в организмах новорожденных ягнят и абортированных плодов свидетельствует о возможности трансплацентарного заражения овец, что в совокупности с низкой культурой овцеводства (в частности, отгонного) и неэкологичной хозяйственной деятельностью создает условия для существующей в настоящее время почти 100%-ной экстенсивности сарко-споридиозной инвазии овец.

3. ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Морфофункциональн^е проявления

формирования адаптационного синдрома у промежуточных хозяев (овец)

Результаты наших исследований иллюстрируют активную морфофун-кциональную реакцию обеих сторон — и организма хозяина, и паразита в становлении адаптационного синдрома при саркоспоридиозе овец. Формирование единой системы «паразит-хозяин» происходит с характерной для многих паразитозов протозойной природы фазностью.

В первую, ферментативно-токсическую (Маркевич А. П., 1985; Faubert G, 1981), фазу, когда спорозоиты саркоспоридий активно внедрялись в организм промежуточного хозяина, морфологические проявления разрушения тканей выявлялись только в воротах инвазии в виде альтера-тивного энтерита, сопровождающегося активной пролиферацией клеток мезенхимы. Менее глубокие изменения — на уровне снижения активности нуклеиновых кислот до уровня двух крестов ГЦП и появления признаков зернистой дистрофии — отмечали в печени и почках. Однако бурная дегрануляция тканевых базофилов, происходящая в этот период (6-й день после заражения)" во всех тканях организма, свидетельствовала о развитии реакции на организменном уровне. Наиболее выраженное сокращение количества' лаброцитов произошло в этот период в тонком отделе кишечника и в легких (приблизительно, в 14 и 20 раз в сравнении с контролем, соответственно).

Свободные спорозоиты паразита, обнаруженные в этот период в единичных экземплярах в рыхлой соединительной ткани слизистой оболочки тонкого отдела кишечника, в бронхиальных и поверхностных лимфоузлах, селезенке, мезенхиме мышц, печени, почек, имели размеры 2 — 3 мкм, низкую активность нуклеиновых кислот и «следы» полисахаридов в цитоплазме, что свидетельствовала об истощении энергетических запасов паразита в Процессе проникновения в организм хозяина. В мезентериальных лимфоузлах, регионарных воротам инвазии, свободные зоиты достигали размеров 5 мкм. В каждом поле зрения микроскопа их насчитывали до 5,2 + 1,5 экземпляров (Р > 0,95). От ранее описанных они отличались предельно высокой активностью ДНК ядер.

Приспособительная способность зоитов саркоспоридий проявилась тем, что будучи -захваченными макрофагами, они угнетали в последних обмен веществ (в клетках, заселенных зоитами, резко уменьшалось количество нуклеиновых кислот и полисахаридов) и превращали их в аль-мациты (способность внутриклеточных паразитов выживать и размножаться внутри фагоцитов описана многими исследователями (Маркевич А. П., 1985; Kumar С, R., 1984, и др.) — крупные (до 20 мкм) клетки с едва различимыми ядрами, в цитоплазме которых содержалось до 10,4 + 3,2 (Р > 0,95)^ мелких (1,5 — 2 мкм) активных мерозоитов, сформированных в процессе бесполого деления спорозоитов.

Зоиты паразита как корпускулярный антиген и выделенные зоитами

полисахариды (количество которых в спорозоитах окончательного хозяина в 3 — 4 раза больше, чем в свободных спорозоитах в мезенхиме промежуточного хозяина) активировали иммунокомпетентные клетки организма овец, что подтверждалось увеличением количества и активности макрофагов в два раза, клеток плазмоцитарного ряда (в девять раз) и Т-лимфоцитов (в 1,3 раза) в первую очередь в первичном' комплексе, а затем во всех лимфоузлах и мезенхиме отдельных органов. Этот факт соответствует общепринятому положению неспёцифической реакции макрофагов и лимфоцитов на первичное внедрение антигенов (Коляков Я. Е., 1986; Петров Р. В., 1987; Хачоян В. И., Карапетян А. Е. и др., 1992). '

Лимфоцитоз тканей в этот период, очевидно, был следствием активации иеспецифических Т-киллеров и клеток пиронинофильного ряда, по мнению Kumar С. R. (1984), всегда принимающих активное участие в ограждении и выведении паразитов наряду с макрофагами и неан-тительными клеточными факторами. То есть параллельно с первой фазой развития адаптационного синдрома в период с 1-го по 6-й день после заражения включается вторая фаза — иммунологическая, проявляющаяся активацией клеток иммунной системы.

На 10 — 12-й день развития адаптационного синдрома, когда количество свободных зоитов паразита в организме овец значительно сократилось за счет массового уничтожения их Т-лимфоцитами, и даже в мезентериальных лимфоузлах Недостоверно встречалось по одному скоплению (разорвавшемуся шизонту) мерозоитов на 18 — 20 полей зрения, механизмы структурной перестройки организма промежуточного хозяина продолжали функционировать с нарастающей интенсивностью. В тканевых базофилах увеличилось количество цитоплазмы и гранул, что обусловило выявление значительно большего количества этих клеток (в среднем по организму — в 13,3 раза). Сокращение общего объема продуктов метаболизма паразитов и биологически активных веществ, выделяемых лаброцитами, обусловило некоторую стабилизацию деструктивных процессов, хотя в силу их большой инерционности и формирования «вторичных порочных кругов» (Струков А. И., Серов В'. В., Сар-кисов Д. С., 1982) в печени, почках, тонком отделе кишечника углублялись, а в легких, мышцах, головном мозге появились дистрофические изменения.

В клетках снизилась почти до нулевой отметки активность нуклеиновых кислот: в отдельных участках происходило отмирание паренхимы — некробиоз и некроз клеток. Значительно ярче проявились признаки сосудистых расстройств. По всему организму активировались макрофаги — индекс их активности в среднем по организму возрос от 34,8 на 6-й день до 58,3 единицы на 10-й день (у здоровых животных он составлял 17,8 единицы). Снижение его в среднем по организму на 4 единицы к 12-му дню, вероятно, объясняется формированием шизонтов второй генерации. В реакции лимфоцитарной системы произошли более резкие перемены — на фоне стабильного роста количества и -плотности ткане-

вого распределения высокоактивных Т-лимфоцитов число плазмоцитов резко снизилось (от 50,0 до 3,5 клеток в единице площади среза) и основную массу пиронинофилоцитов стали представлять более молодые клетки — активированные В-лимфоциты, плазмобласты и проплазмоциты — активные продуценты специфических сывороточных и тканевых иммуноглобулинов (Петров Р. В., 1975), но интенсивность обмена веществ в них (судя по низкой активности нуклеиновых кислот) была невысокой. К 12-му дню в мезенхиме тканей и лимфатических узлов был отмечен рост индекса активности зрелых плазмоцитов (примерно в 2 раза в сравнении с 10-м днем). Активация системы гуморального иммунитета в этот период болезни подтверждалась увеличением количества сывороточных антител, выявленных Рахимовым А. Т. (1985) и Хан Н. Г. (1986) при экспериментальном саркоспоридиозе овец. Т-лимфоциты, сохраняя тенденции к количественному увеличению и активации в лимфатических узлах, начали формировать гранулематозные скопления в мезенхиме и пе-риваскулярных пространствах органов и тканей. Очевидно, что 12-му дню начинают накапливаться признаки сенсибилизации В- и Т-лимфоцитов, выражающиеся в увеличении их количества и активности, а также изменении распределения в организме, что характерно для аллергических иммунных реакций (Адо А. Д., 1978; Пяткин К. Д., Кривоше-ин У. П., 1981).

Появление признаков аллергических реакций свидетельствует о переходе процесса взаимной адаптации в системе паразит-хозяин в третью фазу — иммунопатологическую.

На 14 — 16-й день после заражения, вероятно, произошло разрешение второй шизогонии, так как на 17-й день в межклеточном пространстве всех органов и тканей, а также подчелюстных и бронхиальных лимфоузлах встречались единичные свободные мерозоиты. Основная масса (до 97,4 ± 10,1, Р > 0,99, экземпляров в единице площади среза) зоитов, лежащих свободно или в небольших скоплениях, локализовалась в ме-зентериальных лимфоузлах. Об их высокой жизнеспособности свидетельствовали интенсивная окраска нуклеиновых кислот, большое количество полисахаридов, в том числе склонных к бета-метахромазии.

На массированное выделение продуктов обмена веществ паразита полной дегрануляцией и сокращением объема цитоплазмы отреагировали тканевые базофилы, количество которых в среднем по организму сократилось до нуля (кроме легких, где их активность составила 24,5 ± 3,47, Р > 0,99 единиц). Совместное действие продуктов метаболизма ме-розоитов и биологически активных веществ, выделенных тучными клетками, обострило процессы морфологической перестройки в организме овец. Проявления сосудистых расстройств стали заметны на макроскопическом уровне в виде кровоизлияний на серозных и слизистых оболочках. На тканевом уровне преобладали процессы глубоких дистрофий, некробиоза и некроза клеток, а также сосудистые расстройства в виде множественных микрогеморрагий и застойных гиперемий. Активность нуклеиновых кислот в. клетках снизилась почти до «нуля». Регенератив-

ные процессы в этот период были представлены очаговыми периваску-лярными и мезенхимальными скоплениями активных (с высокой интенсивностью окраски ДНК и РНК) молодых круглоядерных клеток.

Во всех органах и тканях выявляли макрофаги, но среднеорганизмен-ный индекс активности их снизился в три раза в сравнении с 12-м днем.

Увеличение объема лимфатических узлов в этот период объяснялось бурной пролиферацией В-лимфоцитов. И в корковой, и в мозговой зонах основную массу клеток составляли пиронинофилоциты различной степени дифференцировки. Типичные активные плазмоциты выявляли во всех органах, в том числе и в составе клеточных гранулем. Среднеорга-низменный индекс активности плазмоцитов в сравнении с 12-м днем увеличился в 3,8 раза. Количество и активность Т-клеток в лимфоузлах заметно не изменились, но количество и размеры клеточных гранулем, сформированных в мезенхиме органов и тканей, состоящих преимущественно из активных Т-лимфоцитов, значительно возросли — отдельные межмышечные гранулемы насчитывали до 250 клеток.

Таким образом, в период второй шизогонии паразита (с 12-го по 17-й дни после заражения) в организме хозяина формируется третья фермен-тативно-токсическая фаза адаптации. Но развитие ее происходит уже на фоне иммунологической и иммунопатологической фаз, индуцированных предыдущими этапами развития паразито-хозяинных отношений. Поэтому в организме хозяина значительно более ярко, чем после первой шизогонии паразита, выражены структурно-сосудистые расстройства, а реакция иммунокомпетентных клеток несет в себе признаки развивающейся гиперчувствртельности организма хозяина на паразита и его метаболиты.

22-й и 23-й дни развития паразито-хозяинных отношений ознаменовались резким сокращением количества свободных, мерозоитов. Вегетативные формы паразита находились либо в шизонтах (количество которых только в мезентериальных узлах за сутки возросло от 4 — 5 до 8 — 12 экземпляров в единице площади среза), либо на поверхности Т-лимфоцитов. При этом первые содержали активные нуклеиновые кислоты и большое количество полисахаридов, а во-вторых полисахариды не выявлялись. вовсе, а активность нуклеиновых кислот была резко снижена. Небольшое количество шизонтов было сформировано в бронхиальных и поверхностных лимфоузлах, а единичные более или менее активные свободные зоиты очень редко встречались в межклеточных пространствах мезенхимы мышц, почек, мозга, матки, легких.

Тканевые базофилы в зонах пролиферации и уничтожения паразита практически не выявлялись. Наибольшее количество вакуолизированных лаброцитов было обнаружено в слизистой оболочке тонкого отдела кишечника, а в легких их цитоплазма содержала мелкие гранулы. Активная дегрануляция тканевых базофилов обусловила почти полное разрушение и плотную лимфоцитарноклеточную инфильтрацию слизистой оболочки тонкого отдела кишечника. В паренхиматозных органах преобладали процессы некробиоза и некроза, гиперемии и кровоизлияния. Повсеместно

в мезенхиме органов встречались плотные клеточные скопления, состоящие преимущественно из Т-лимфоцитов, клеток фибробластного ряда и единичных более или менее активных плазмоцитов.

Во всех тканях, за исключением поверхностных лимфоузлов, значительно (практически до нуля) снизилась активность макрофагов вследствие заселения их вегетативными формами паразита. В соотношении Т- и В-лимфоцитов повсеместно преобладали пиронинофилоциты, иллюстри-4 руя активацию гуморальных факторов иммунного ответа и активную реакцию сенсибилизированных В-клеток. Количество Т-лимфоцитов (а часто и их активность) значительно снижалось, что особенно наглядно проявлялось в лимфатических узлах.

Но умеренно активная дегрануляция тканевых базофилов, сопровождаемая плазматизацией тканей, а также их деструкцией и сосудистыми расстройствами, суть проявления накопления признаков аллергического состояния гиперчувствительности немедленного типа, а сокращение количества Т-лимфоцитов в лимфоузлах вследствие преобладания их гибели над размножением в совокупности с повсеместным формированием Т-лимфоцитарных гранулем есть морфологический базис состояния гиперчувствительности замедленного типа (Струков А. И., Серов В. В., Сар-кисов Д. С., 1982; Петров Р. В., 1987)!

Очевидно, что к 22 — 23-му дню адаптационного синдрома в организме промежуточного хозяина третья ферментативно-токсическая фаза усугубляет иммунопатологическое (ГНТ и ГЗТ) состояние, индуцированное первой шизогонией и стимулированное второй шизогонией паразита.

25-й день цикла развития саркоспоридий (наступивший через две недели после появления первых признаков сенсибилизации иммунокомпе-тентных клеток в организме промежуточного хозяина) характеризовался активным разрушением шизонтов, сформированных ранее в лимфатических узлах и выходом свободных мерозоитов третьей генерации, с последующим расселением их по всему организму. Наибольшее количество паразитов по-прежнему локализовалось в мезентериальных лимфоузлах — до 200 экземпляров в поле зрения микроскопа. В других лимфоузлах, а также в мезенхиме легких, почек, мышц встречалось небольшое количество свободных активных мерозоитов.

Расселение зоитов саркоспоридий по организму сопровождалось массовой адгезией их на'оболочках сенсибилизированных Т-лимфоцитов. Эта тенденция, при отсутствии фактов размножения паразита, сохранялась до 33-го дня цикла развития. Наибольшую интенсивность процессы иммобилизации мерозоитов имели в мезентериальных лимфоузлах, количественно менее выраженными они были в бронхиальных и подчелюстных лимфоузлах и селезенке. В зоитах, адгезированных на поверхности Т-лимфоцитов, резко уменьшались активность нуклеиновых кислот и количество полисахаридов, а отторгнутые после контакта с Т-клетками паразиты приобретали рыжевато-бурый цвет, сохраняющийся при любых окрасках, и скапливались в конгломераты. Часть мерозоитов погибала посредством резкого пикноза и последующего фагоцитоза нежиз-

неспособных мерозоитов: мелкие, округлые пикнотизированные меро-зоиты встречались в капиллярах печени и макрофагах других органов.

Очень редко в лимфатических узлах встречались шизонты — клетки с «тенями» ядер и малоактивной цитоплазмой, содержащей три-четыре зоита. Этот факт свидетельствует о том, что некоторая малая часть мерозоитов третьей генерации смогла избежать уничтожения в иммунных механизмах и продолжила развитие в альмацитах.

Массированный выброс метаболитов паразита, в совокупности с «одномоментным» появлением большого количества корпускулярного антигена — мерозоитов саркоспоридий — спровоцировали резкую полную дегрануляцию тканевых базофилов во всех органах и тканях, чем обусловили разрешение состояния гиперчувствительности немедленного типа — анафилактический шок (Жаков М. С., Прудников В. С., 1992). Кли-нико-морфологические признаки последнего: повышение температуры тела почти до 42°С, угнетение, судороги и смерть овец с признаками глубокой деструкции тканей органов, паренхиматозной желтухи, а также генерализованные сосудистые расстройства в виде отеков, застойных гиперемий, массовых кровоизлияний, особенно ярко были выражены на 26-й день развития адаптационного синдрома у овец, зараженных заведомо летальными дозами паразита (1 млн. и более спороцист саркоспоридий). Аналогичные клинические и морфологические изменения у овец, павших после спонтанного или экспериментального заражения, отмечали М. А. Должиков (1982), М. П. Прус (1982), А. Т. Рахимов (1985), А. Heydorn, R. Gestrich (1976), В. L. Munday (1975) и др., кроме того, М. А. Должиков на 28 — 31-й день болезни обнаружил шизонты паразита в эндотелии сосудов печени, почек, головного мозга, а А. Heydorn et R. Gestrich (1976) выявляли в тканях свободно лежащие меронты.

В этот же период глубокой деструкции подвергалась слизистая оболочка матки. Сосуды ее расширялись и разрыхлялись, встречались даже мелкие кровоизлияния. Резкое снижение количества полисахаридов свидетельствовало об истощении местных энергетических запасов, а отсутствие иммунокомпетентных клеток и малое количество макрофагов делало возможным свободную миграцию мерозоитов через слизистую оболочку матки от матери в плод, что подтверждается как нашими исследованиями: в мазках-отпечатках органов и лимфоузлов плодов и новорожденных ягнят было обнаружено до 5,4 ± 2,5 (Р > 0,95) свободных мерозоитов в поле зрения микроскопа; так и исследованиями других авторов (Л. И. Куткене, Я. С. Грикене, 1992; С. Н. Никольский, 1931; С. Н. Никольский и С. А. Позов, 1989; А. Т. Рахимов, 1985; О. В. Рыбалтов-ский, А. В. Дудкина, 1971; Т. Я. Свет-Молдавский, 1970; R. Fayer, А. Johnson, М. Lunde, 1976).

У овец, переживших кризис разрешения ГНТ, количество макрофагов резко снизилось. Но в лимфатических узлах сохранившиеся клетки имели высокую активность цитоплазмы (до ++ ГЦП).

Состояние лимфоцитарной системы в условиях развития шоковой реакции было прямопротивоположным предыдущему периоду (17 —

23-й день): плазмоциты были разрушены во всех органах и тканях, только в герминативных центрах фолликулов лимфоузлов и красной пульпе селезенки сохранялось небольшое количество малоактивных клеток B-ряда. Зато Т-лимфоциты получили мощный импульс к активации и заполнили почти всю паренхиму лимфоузлов, периваскулярные пространства органов и тканей, сформировали множественные плотные мезенхи-мальные гранулемы, что является морфологическим проявлением активного состояния Т-клеточной системы иммунитета (Р. В. Петров, 1987).

Таким образом, с 25-го по 30-й день адаптационного синдрома при саркоспоридиозе у овец посредством развития анафилактического шока (на 26-й день) разрешается состояние аллергической реакции гиперчувствительности немедленного типа, и на первое место в борьбе-адаптации с паразитом выходят механизмы клеточного иммунитета. Специфичность наличия лимфо-гистиоцитарных узелков и инфильтратов при саркоспоридиозах подчеркивается многими исследователями (М. А. Дол-жиков, А. Т. Азарян, 1982; С. Г. Пасько, 1982; В. А. Салимов, 1977; В. Bratberg; О. Helle, М. Hilali, 1982; Р. Cyhrs, 1962; Т. Landsverk, 1978).

С 50-го по 60-й день адаптационного синдрома единичные свободные малоактивные, но живые зоиты саркоспоридий выявлялись только в межклеточном пространстве мозговой зоны мезентериальных лимфоузлов. Во всех органах в цитоплазме активных макрофагов содержалось по два-четыре зоитоподобных образования. Значительно больше было неживых зоитоподобных образований красно-бурого цвета, локализованных в цитоплазме ретикулярных клеток лимфоузлов и свободно — в селезенке.

Если учесть выявленную нами закономерность, что с момента внедрения паразита в организм промежуточного хозяина шизогонии повторяются регулярно через 8 — 9 дней, то 50-й день стал следующим, после разрешения очередной (шестой), но уже малоколичественной шизогонии — днем адаптированного состояния хозяина к паразиту и паразита к хозяину. Несмотря на три шизогонии, прошедшие в период с 25-го по 50-й день, с 30-го дня после заражения у овец выявилась некоторая стабилизация в морфологических процессах на уровне вялотекущих дистрофических состояний паренхимы органов и неполной регенерации участков полной деструкции, образовавшихся в предыдущие периоды адаптационного синдрома.

В тканевых базофилах отмечали слабые проявления реабилитации — небольшое количество цитоплазмы с легкими признаками метахромазии еще не содержало гранул. Выявлялись лаброциты только в мышцах, куда «перекочевала» основная масса паразитов, и в легких. В легких и лимфоузлах также появились умеренно активные макрофаги, а в мозговой зоне лимфоузлов, межмышечных клеточных гранулемах и в красной пульпе селезенки — активированные молодые пиронинофилоциты и единичные плазмоциты. Т-лимфоциты с предельно высокой активностью ДНК ядер по-прежнему переполняли лимфатические узлы и формировали множественные активные гранулемы в мезенхиме органов и тканей.

Основная масса паразитов в этот период локализовалась в мышечных

волокнах в цистах различного размера, формы и степени зрелости. Реакция тканей, окружающих цисты, заключалась в более или менее выраженной атрофии мышечных волокон с сохранением поперечной исчер-ченности в них. Отсутствие выраженных морфологических изменений в мышечной ткани, окружающей цисты, в этот период полной адаптиро-ванности хозяина к паразиту и обусловило развитие и стабилизацию ошибочного мнения многих исследователей о непатогенности саркоспо-ридий. При этом одни ученые на основании результатов морфологических исследований подчеркивали безвредность только цистной стадии паразита (Шишков В. П., 1958; Landsverk Т., Bratberg W., 1979), что является совершенно справедливым, другие же (Арсентьева Н. Ф., 1978; Кононенко Г. В., 1967; Лубянецкий С. А., 1956; Петренко Б. Г., Говоров A.M., 1951; Юстов Н. Л., 1937) дрлали обобщающие выводы о безвредности для животных саркоспоридий вообще. Еще менее верными, по нашему мнению, являются попытки некоторых авторов связать патогенез саркоспоридиоза с наличием мышечных цист, а остроту патологических процессов объяснить интенсивностью именно цистной инвазии (Джексон Р., Маккей Д., 1977; Пасько С.-Г., Агарков Е. М., 1972; Пасько С. Г., Пасько В. И., Сипко А. А., 1982; Рахимов Т. X., Забирова М. А., 1979; Салимов В. А., 1980; El-Etreby N. 1970), так как очевидным является факт формирования мышечных цист паразита в период угасания активных морфофункциональных реакций организма хозяина.

Клинические проявления адаптационного синдрома с 6-го по 65-й день полностью отражали морфофункциональные изменения в организме овец и прямо коррелировали с ними. Температура тела, уровень аппетита и общее состояние организма изменялись в периоды шизогонии паразита, достигая критического состояния на 25 — 30-й дни и стабилизируясь на нормофункциональном уровне к 50 — 65-му дню болезни. Аналогичную клиническую картину у овец, экспериментально зараженных саркоспо-ридиозом, отмечали A. Heydorn et R. Gestrich (1976), M. А. Должиков (1982), M. П. Прус (1982), С. Н. Никольский и С. А. Позов (1982), А. Т. Рахимов (1983).

Таким образом, более или менее уравновешенное состояние в изучаемой системе паразит-хозяин начинает устанавливаться с 30-го дня адаптационного синдрома и заключается в том, что шизогонии, саркоспоридий в макрофагах лимфоузлов продолжаются с постоянным интервалом 8 — 9 дней; большая часть новообразованных мерозоитов уничтожается сенсибилизированными Т-лимфоцитами, а меньшая дает начало новым шизонтам. Так поддерживается хотя и количественно угасающая, но длительная (а может быть, и постоянная) циркуляция вегетативных форм саркоспоридий в организме овец. Стабилизация паразито-хозяинных отношений проявляется в этот же период формированием мышечных цист, в которых происходит вначале интенсивное размножение эндозоитов, а затем замедление обмена веществ.

Со стороны организма промежуточного хозяина — овцы, стабилизация морфофункционального состояния проявляется персистирующими

вялотекущими дистрофиями, отсутствием сосудистых реакций и плотной лимфоцитарноклеточной инфильтрацией мезенхимы тканей и органов с преобладанием активных Т-лимфоцитов и потенциированных пи-ронинофилоцитов, содержащих большое количество полисахаридов. Именно такое состояние мы выявляли через 12 месяцев у овец, экспериментально зараженных саркоспоридиозом, и у овец, клинически здоровых — саркоцистоносителей, спонтанно заразившихся саркоспоридиозом. Сходные морфологические изменения у животных, спонтанно зараженных саркоспоридиозом, описаны другими авторами, которые наряду с саркоцистоносительством как признаки саркоспоридиоза выделяли развитие острых или хронических миозитов, дистрофические и некротические процессы в паренхиматозных органах, истощение, а также лимфойдноклеточную и плазмоцитарную пролиферацию в лимфатических узлах и селезенке (И. С. Авессаломов, 1978; С. Г. Пасько, 1979; Т. X. Рахимов, М. А. Забирова, 1979; F. Collery, Е. Weavers, 1981; P. F. Frelier, 1980; Т. Landsverk, В. Bratberg, 1979).

Анализ активности внутриклеточных ферментов, проведенный в наших предыдущих исследованиях (В. М. Сахно, 1984), а также интенсивности обмена полисахаридов в динамике адаптационного синдрома показывает, что, обусловливая развитие более «грубых» структурных изменений в организме хозяина, иллюстрирующих различные этапы взаимоадаптации и коррелируя с ними, к 50-му дню опыта интимные процессы в клетках стабилизируются на уровнях, значительно более низких, чем у здоровых животных. С одной стороны, это объясняет невозможность полной регенерации тканей на субклеточном и клеточном уровне и пер-систирование дистрофических состояний, а с другой — иллюстрирует тот факт, что образовалась новая биологическая система «саркоспори-дия-овца», со свойственной ей единой энергетической системой, «обеспечивающей сбалансированный обмен веществ для обоих партнеров в процессе сосуществования» (Маркевич А. П., 1985).

Пониженный (в сравнении со здоровыми овцами и спорозоитами ооцист) уровень обмена веществ хозяина и паразита (гипобиотические. цисты и малое количество циркулирующих форм) и обеспечивает сосуществование антагонистов в стабильных условиях.

3.2. Патоморфоз саркоспоридиоза овец

При изменении условий существования вновь созданной биологической системы овца-саркоспоридия происходит усиление одной из сторон с последующим превалированием паразита или хозяина. Это подтверждается многочисленными наблюдениями по изменению интенсивности цистной инвазии овец со сменой времен года, зональности, физиологического состояния, наличия сопутствующих заболеваний (Гадаев А., 1978; Голосницкий А. К., Бузаджи А. В., 1972; Казаков Н. А., Заболоцкий В. Т., 1974; Новинская В. Ф., Полозенко Л. В., 1992; Шемарова И. В., 1987; Fidiaracis Р., 1973; Lederboge Н., 1969). В наших опытах наличие в

организме овец диктиокаул и дикроцелий привело к значительному возрастанию интенсивности цистной инвазии (до 34,2 ± 8,3 против 2,1 ± 0,75 цист в поле зрения при спонтанной моноинвазии) вследствие снижения общей резистентности и реактивности животных в результате преобладания в организме дистрофических и склеротических процессов. Заражение же овец саркоспоридиозом на фоне ценуроза обусловило их гибель с признаками острого течения, значительно отличавшимися от острого течения при саркоспоридиозной моношгвазии: преобладанием и усугублением дистрофических процессов и сглаженностью или выпадением морфологических проявлений иммунных реакций, характерных как для ГНТ (острые паренхиматозные воспаления, геморрагический диатез, гиперплазия лимфоидной ткани), так и для ГЗТ (диффузная или гранулематозная Т-клеточная инфильтрация тканей), что, очевидно, было обусловлено общей гипоэргичностыо организма, развившейся вследствие атрофии головного мозга.

Ни острое, ни хроническое нитратное отравление овец-саркоцисто-носителей не уничтожало признаки, характерные для стабильной системы овца-саркоспоридия (Муслих Н. Д., 1990; Назар Д. М., 1991), но если при остром отравлении существующие при саркоспоридиозе дистрофические процессы усугублялись действием токсина, что и привело к смерти овец, то хронический нитратный токсикоз обусловил угнетение клеточных иммунных механизмов и стимулировал замещение деструктиро-ванной паренхимы клетками фибробластного ряда с формированием очагов молодой соединительной ткани. В этих условиях паразит получил возможность для формирования множества предцистных форм внутримышечных волокон.

Опыты по суперинвазированию овец, больных саркоспоридиозом, еще раз доказали активную роль иммунной системы хозяина в поддержании стабильности паразитоза овца-саркоспоридия. А факты сглаженности клинических признаков в течение болезни, отмеченные также Прусом М. П. (1982) и Рахимовым А. Т. (1983), подчеркнули высокую устройчивость и инерционность этой системы вследствие снижения уровня реактивности организма овец.

Морфологические изменения в организме овец при суперинвазиро-вании саркоспоридиями в целом были сходны с изменениями, развивающимися при первичном заражении, но менее глубокими, что свидетельствует о преобладании ферментативно-токсического действия паразита и сглаживании повреждающего воздействия иммунопатологических процессов. Основную роль в развитии адаптационного синдрома при саркоспоридиозной суперинвазии также играли клеточные факторы иммунитета. Стабильный рост активности и количества Т-лимфоцитов в виде формирования диффузных и очаговых инфильтратов отмечали с первых дней суперинвазии до конца опыта (65-й день). Незначительная активация плазмоцитов, в основном в воротах инвазии, была зарегистрирована в первые 6 дней. Затем пиронинофилоциты были представлены В-лим-фоцитами с низкой активностью цитоплазмы, и только на 29-й день (срок

разрешения гиперчувствительности немедленного типа) очень большое количество плазмоцитов было зарегистрировано в подслизистой основе деструктированной стенки тонкого отдела кишечника. Как известно, именно в подслизистых основах пиронинофилоциты вырабатывают иммуноглобулины Е — адапторы анафилактических реакций гиперчувствительности немедленного типа (Петров Р. В., 1987). Реакция макрофагов коррелировала с реакцией макрофагов при первичном заражении. А полная интактность тканевых базофилов подтверждала тезис о низкой реактивности организма овец-паразитоносителей. Наличие в организме хозяина сенсибилизированных к саркоспоридиям данного вида иммунных систем обусловило формирование значительно меньшего количества мышечных цист при суперинвазии (8,16 ± 1,8, Р > 0,99), чем при первичном экспериментальном заражении (16,5 ± 1,06, Р > 0,99) или при саркоспо-ридиозе, протекающем в ассоциациях с гельминтами, оказывающими иммуносупрессирующее воздействие (34,2 ± 8,3, Р > 0,95). Повышенную устойчивость овец-саркоцистоносителей к повторному заражению отмечают многие исследователи (Никольский С. Н., Позов С. А., 1989; Прус М. П., 1982; Рахимов А. Т., 1983).

3.3. Проявления паразито-хозяинных отношений при энтеральном саркоспоридиозе у окончательных хозяев (собак)

Постоянная циркуляция в организме промежуточного хозяина — это не единственный путь поддержания популяции саркоспоридий. Значительно более эффективным является возможность активизации и «обновления» паразита в половом этапе размножения в организме окончательного хозяина (Степанова Н. И., 1982).

Нашими опытами доказано, что в строгом соответствии-с циклом развития кокцидий изоспороидной группы, подробно описанным Бейер Т. В., Шибаловой Т. А. и Костенко Л. А. (1978), изоспоры в. оисашв формируются в альмацитах рыхлой соединительной ткани апикальной трети ворсинок тонкого отдела кишечника собак, где проходят все стадии полового размножения от эндозоита, вышедшего из мышечной цисты, до спорулированных спороцист. По мере созревания спороцист в содержащихся в них спорозоитах увеличивалось количество ДНК (как фактора высокой потенции к последующему бесполому делению) и полисахаридов — веществ, обеспечивающих энерго-ферментативный базис для внедрения и адаптации в организме промежуточного хозяина.

Паразито-хозяинные отношения саркоспоридий с организмом окончательного хозяина складывались таким образом, что хозяин вначале изолировал зону развития паразитов от организма посредством плотной лим-фоцитарной инфильтрации слизистой оболочки тонкого отдела кишечника, а затем отторгал (мутилировал) апикальные части ворсинок вместе с накопившимися в них ооцистами и спороцистами паразита. Отторжению и активному выделению паразита из организма хозяина способст-

вовала дегрануляция тканевых базофилов на поверхности слизистой оболочки кишечника. Накопление в просвете кишечника биологически активных веществ группы гистамина, вышедших из тучных клеток, резко усиливало моторику кишечника и способствовало выносу паразита вместе с разжиженными каловыми массами.

Интактное состояние индикаторов иммунной системы собак доказывает отсутствие у половых форм саркоспоридий свойств корпускулярных или молекулярных иммуномодуляторов. Количество, плотность распределения, Морфологические особенности, функциональная активность макрофагов и тканевых базофилов в патентный период не давали оснований-для констатации их активного состояния. Также маловыражен-ной была и реакция лимфоидной системы, кроме лимфоузлов, регионарных зонам развития паразита, где отмечали активацию лимфопоэза и увеличение количества плазмоцитов, что можно расценить как реакцию механизмов гуморального иммунитета на неспецифические антигены, проникающие через поврежденную слизистую оболочку кишечника.

В целом организм окончательного хозяина реагировал на развитие в нем половых форм паразита ареактивными деструктивно-гипобиотиче-скими процессами в форме атрофий со снижением количества полисахаридов и активности нуклеиновых кислот, как в тонком отделе кишечника, так и во всех внутренних органах и мышечной ткани. При этом ни в одной ткани не отмечали сколько-нибудь выраженных сосудистых или пролиферативных реакций. Проведенные нами исследования позволили объяснить неточность определения отдельными исследователями (Горбов Ю. К., 1976; Должиков М. А., 1982; Прус М. П., 1982) патологии кишечника у собак в патентный период саркоспоридиоза как «энтеритов различных видов» недостаточной глубиной проведенных исследований.

Очевидно, что реакция организма дефинитивного хозяина определяется резким и длительным (до 86 дней в нашем опыте) снижением поступления питательных веществ через слизистую оболочку тонкого отдела кишечника, а установившийся у собак способ защиты организма в виде мутиляции паразита вместе с участками собственных тканей делает возможным непрерывное развитие кишечных форм саркоспоридий при реинвазировании, что как отсутствие приобретенного иммунитета под-гвержает большое количество исследователей (Вершинин И. И., 1973; Степанова Н. И., 1982; Rommel M., Heydorn А., 1972, и др.).

3.4. Характеристика условий

искусственного формирования природных очагов саркоспоридиоза овец

Возможность многократных повторных заражений собак саркоспо-ридиями и длительное выделение форм паразита, инвазивных для овец (86 дней в наших опытах и до 90 дней — по другим источникам — Горбов Ю. К., 1975; Munday В. L., Barker I. К., Richard M. D., 1975; Niculescu A., Furcherea A., Buhaa M., 1979) значительно повышает риск заражения овец

в условиях длительного территориального контакта с собаками. Именно такие условия создаются хозяйственной деятельностью человека в промышленном овцеводстве. Наиболее яркий пример искусственного создания природных очагов саркоспоридиоза мы наблюдали на отгонных высокогорных пастбищах, где условия рельефа местности не позволяли проводить частую смену зон выпаса овец, а трудности с доставкой продовольствия ограничивали рацион приотарных собак только мясом вынужденно убитых или павших овец. В результате на пастбищах создавался стационарный, персистирующий в течение трех-четырех лет (вследствие высокой устойчивости спороцист саркоспоридий во внешних условиях — Голубков В. И., Рыбалтовский О. В., Кислякова 3. И., 1974; Мусаев М. А., Суркова А. М., Искандерова Н. Г., 1992) искусственный очаг саркоспоридиоза, характеризующийся наличием в фекалиях приотарных собак (до 50 тыс. экземпляров в каждом грамме) и в траве на пастбищах (от двух до четырех тысяч на 1 м2) спорулированных спороцист саркоспоридий. Наличие высокой плотности спороцистной загрязненности травы на пастбищах не только обусловливает возможность гибели овец вследствие первичного инвазирования, но и значительно снижает целесообразность отгонного овцеводства, так как овцы-саркоци-стоносители (в 24 срезах мышц для компрессория было выявлено в среднем по 302,4 ± 27,0, Р > 0,99, цист паразита) значительно хуже здоровых оправдывают кормовые затраты и имеют низкое качество мяса (Бо-гуш А. А., 1976; Бритов В. А., 1970; Даныпин Н. С., 1972; Bergmann V., Kinder Е., 1975).

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Что же такое саркоспоридиоз?

Ученые, отвечающие на этот вопрос, по-прежнему (со времен первых описаний мышечных цист) разделяются на две основные группы. Первые саркоспоридиозом называют саркоцистоносйтельство и анализируют степень влияния на организм хозяина (преимущественно, на качество мяса) интенсивности и экстенсивности цистной инвазии. Вторые рассматривают саркоспоридиоз как болезнь промежуточных хозяев, вызываемую возбудителем протозойной природы с облигатным двуххозяин-ным циклом развития. Придерживаясь, в основном, мнения второй группы исследователей, мы считаем, что более или менее достоверно на этот вопрос можно ответить только при условии конкретного анализа того или иного периода Сосуществования паразита и его окончательного или промежуточного хозяина.

Изучая конкретные паразито-хозяинные сообщества «ОУ1.ч-8.о\асатз» и «Сашс1ае-5.о\чсаш5», мы пришли к выводу, что со стороны промежуточного хозяина (овцы) саркоспоридиоз есть морфофункциональное проявление сложного адаптационного синдрома, протекающего со сменой клеточных реакций и развитием признаков гиперчувствительности немедленного и замедленного типов. В каждом конкретном этапе этого синдрома клинические и морфологические изменения в организме овец могут характеризовать болезнь или как почти полное безразличие животных к любой дозе паразита (1 — 5, 7 — 10, 12 — 14, 18 — 25-й дни), или как легкое недомогание (на 6, 10 — 12, 15 — 17-й и с 32-го дня), или как анафилактический шок с резким расстройством функций и смертью (на 25 — 30-й дни).

Со стороны окончательного хозяина (собаки) первые 7—10 дней (препатентный период) контакта с паразитом проходят клинически индифферентно, а в патентный период (с 8 — 10 по 89 — 90-й день) развивается строго отграниченная от организма кишечная инвазия, патоген-ность которой заключается в снижении уровня питания организма собаки из-за разрушения большей части слизистой оболочки тонкого отдела кишечника.

Со стороны паразита существование и выживание в организмах как окончательного, так и промежуточного хозяина есть возможность размножения и сохранения себя как вида и «генеральная задача» его — не уничтожить организм хозяина, а «приспособить» его для совместного сосуществования в стабильной новообразованной биологической системе «паразит-хозяин».

Таким образом, клинико-морфологические признаки саркоспоридио-за, как и других паразитозов, есть проявление адаптационного синдрома, протекающего более или менее остро и злокачественно (для хозяина и паразита) в зависимости от конкретного состояния как организма хозяина, так и паразита, а также условий их взаимоадаптации.

В естественных (природных) условиях саркоспоридиоз является од-

ним из механизмов сохранения чистоты энергетических экологических ниш, одинаково эффективно действующих как на «верхних», так и на «нижних» границах: овцы с непомерно высокой (для вида) интенсивностью обмена веществ погибают в период разрешения состояния гиперчувствительности немедленного типа через 25 — 30 дней после первичного контакта с возбудителем. «Гипоэргичные» животные вследствие избыточно-безграничного заселения вегетативными формами паразита, а мышц — цистами (не сдерживаемого иммунными механизмами), преобладания ферментативно-токсической фазы, развития дессиминирован-ных пролиферативных и склерозирующих процессов как во внутренних органах, так и в мышцах погибают в результате токсикоза со стабильной потерей реактивности или вследствие снижения подвижности становятся легкой добычей хищников. Выживают в контакте с этим паразитом только «нормэргические» (для вида) животные или овцы, сумевшие в процессе адаптации к паразитоносительству стабильно снизить ранее высокий уровень обмена веществ.

Только априорно (или адаптированно) нормэргический организм способен обеспечить и поддержать умеренное саркоцистоносительство и перманентную циркуляцию вегетативных форм, обеспечивающих состояние премуниции (табл. 4).

Таблица 4

Структурно-логическая схема саркоспоридиоза овец

ян$о хагоры рыация Форми парьзито-хоздкнных отношений

Сиерть Твлерантность Парнмт Г«г.ерчу»ст-ииепиос« Смерч

«в а «п Ж Ж а> Си О а я О" к св аэ (Л. а < 'к (А в; м о • А> О» 9 ф ж с (- ?-> р. и А

ее и ав о 1 ч> СЪ ¿г в> X с и т о. ц о /гзт /пра-атрогакке ш

(0 «в О 0) 1 9 я * АЬ О О. х л / .Хроническое /течение ПРШНИЦИЯЧ Остров / гечеише/

Ф и в 1 XX О X в «ж о* и <•> / \ тохшоз ^ Хроническое/ течение У

«: св И й> X < ь X О. Л л

Всякие внешние или внутренние воздействия, изменяющие уровень энергетического фона промежуточного хозяина, облигатно приводят к нарушению подвижного равновесия в системе «паразит-хозяин». Именно такие условия наиболее часто создаются в промышленном овцеводстве (и в животноводстве вообще), где человек, формируя стада высокопродуктивных животных, искусственно интенсифицирует их обмен веществ (а следовательно, и реактивность) или, наоборот, повышенной эксплуатацией и несбалансированным кормлением обусловливает снижение уровня резистентности, и тем и другим создавая из естественной устойчивой биологической системы «паразит-хозяин» проблему для животноводства. Поэтому дальнейшая работа ученых и ветеринарных специалистов должна быть направлена на поиск компромисса между необходимостью постоянного повышения продуктивности животных и максимальным сохранением естественного уровня паразито-хозяинных отношений при саркоспоридиозной инвазии.

5. ВЫВОДЫ

1. Адаптационный синдром у овец при саркоспоридиозе, вызываемом простейшим Б-оласашв (ГЫШе!, 1886 а), развивается в два периода: первый — период адаптации, протекающий в форме диссеминированных иммунных воспалений с развитием признаков, характерных для ГНТ и сенсибилизации Т-клеточной системы иммунитета, а также с выраженной клинико-морфологической патологией — до 29 — 31-го дня после заражения; второй — период стабилизации (уравновешивания) новой единой структурно-энергетической системы паразит-хозяин — с 30 — 31-го дня.

2. Адаптация вегетативных форм саркоспоридий обеспечивается многократными шизогониями (мерогониями) в макрофагах промежуточного хозяина и формированием потенциированных мышечных цист.

3. Фактором, сдерживающим развитие паразита в адаптированном организме промежуточного хозяина, является нестерильный клеточный иммунитет.

4. Эндогенные и экзогенные условия, в которых формируется адаптационный синдром, создают условия для развития измененных форм сар-коспоридиоза (ГНТ и токсикоз) посредством изменения уровня реактивности организма овец (гиперэргия и гипоэргия соответственно).

5. Количество мышечных цист в организме овец (интенсивность сар-коцистозной инвазии) обратно коррелирует с уровнем резистентности их организма. '

6. Циркуляция вегетативных форм паразита в организме овец в острый период саркоспоридиоза в совокупности с деструктивными гистологическими и гистохимическими изменениями в матке создает предпосылки для внутриутробного заражения ягнят саркоспоридиями.

7. Половые формы саркоспоридий развиваются внутри клеток рыхлой соединительной ткани собственной пластинки ворсинок слизистой оболочки тонкого отдела кишечника собак, не являются иммуногенными для организма окончательного хозяина и не оказывают на него прямого патогенного воздействия.

8. Активная защита организма окончательного хозяина от развивающихся в его кишечнике саркоспоридий осуществляется посредством му-тиляции апикальной трети ворсинок вместе с содержащимися в них паразитами.

9. Патологические изменения в организме окончательного хозяина обусловливаются длительным (до 86 дней) сокращением поступления питательных веществ через слизистую оболочку кишечника, заполненную и деструктированную развивающимися формами саркоспоридий.

10. Существующие в настоящее время приемы овцеводства с использованием отгонных пастбищ обусловливают создание стойких природных очагов саркоспоридиоза и повышение интенсивности и экстенсивности саркоспоридиозной инвазии овец.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Способы прижизненной и послеубойной диагностики (в том числе и по клинико-морфологическим проявлениям), лечения и профилактики саркоспоридиоза овец, изложенные в Рекомендациях для работников животноводства и мясоперерабатывающей промышленности «Клинико-мор-фологические проявления, диагностика, лечение и профилактика саркоспоридиоза овец» и «Послеубойная диагностика и профилактика сар-коспоридиозов сельскохозяйственных животных», разработанных по заказу Научно-технического Совета производства и переработки продукции животноводства Агропромышленного комитета Ставропольского края.

Рекомендации внедрены в производство и используются, в хозяйствах, предприятиях мясоперерабатывающей промышленности и ветеринарных лабораториях Ставропольского края (справки о внедрении № 82/14 и № 83/14 от 15.11.95; № 23/5 от 16.11.95).

2. Оригинальные «Способ изготовления парафиновых блоков для ги-стоисследований» и «Способ изготовления гистопрепаратов», защищенные авторскими свидетельствами № 1728713 и № 1656377 Государственного комитета по изобретениям и открытиям.

3. Способ прижизненной диагностики саркоцистоза (саркоспоридиоза), описанный и распространенный в форме информационного листка Московского областного ЦНТИ (№ 19 — 84), и способ люминесцентной диагностики энтерального саркоспоридиоза плотоядных — в форме информационного листка Ставропольского межотраслевого территориального ЦНТИ (№ 53 — 88).

4. Предложения по совершенствованию способов патологоанатоми-ческих и гистологических исследований, а также способ люминесцентного выявления кокцидий, признанные рационализаторскими и принятые Ставропольским СХИ (удостоверения № 17/87, 18/87, 48/87, 44/88, 45/88, 46/88, 4/89, 19/89, 20/89, 21/89, 22/89, 23/89, 6/90, 2/91, 3/91, 11/91).

5. При гибели овец с признаками острых' септикоподобных заболеваний для исключения саркоспоридиоза следует исследовать мазки-отпечатки мезентериальных узлов с целью обнаружения зоитов паразита.

6. При проведении экспериментов или исследований на овцах следует иметь в виду, что обнаружение цист саркоспоридий в мышцах овец свидетельствует о постоянном наличии в их организме морфологических изменений, обусловленных развитием адаптации к саркоцистоносительству.

7. Интенсивность цистной инвазии мышц овец можно использовать для косвенной оценки уровня резистентности их организма.

8. Информацию о морфофункциональных изменениях в организмах окончательного (собак) и промежуточного (овец) хозяев, а также о состоянии саркоспоридий в динамике адаптационного синдрома рекомендуем использовать в научной и учебно-методической работе, а также при разработке способов диагностики, лечения и специфической профилактики саркоспоридиозов.

7. СПИСОК РАБОТ,

ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Никольский С. Н., Пасько С. Г., Сахно В. М. Диагноз — саркоцистоз//Сельские

зори, 1980. — № 12. — С. 39.

2. Сахно В. М. Патоморфологические и гистохимические изменения при остром

саркоцистозе у овец//Тезисы докл. на Всесоюзной науч.-производ. конференции. — Самарканд-Джамбай, 1983. — С. 205 — 206.

3. Сахно В. М. Экспериментальный саркоцистоз ягнят//РЖ Ветеринария, 1983. —

№ 7, реф. В01708. — С. 67.

4. Прус М. П., Сахно В. М., Ярован Н. И., Рахимов А. Т. Симптомокомплекс и

некоторые вопросы патогенеза при саркоцистозе овец//Тезисы докл. на Всесоюзной науч.-производ. конференции. — Самарканд-Джамбай, 1983. — С. 201 — 203.

5. Прус М. П., Сахно В. М., Ярован Н. И., Рахимов А. Т. Экспериментальный сар-

коцистоз ягнят//Ветеринария, 1983. — № 8. — С. 39 — 41.

6. Сахно В. М. Патоморфология и некоторые вопросы патогенеза эксперименталь-

ного саркоспоридиоза овец: Автореф. дис... канд. вет. наук. — М., 1984. — 23 с.

7. Сахно В. М. Патоморфология экспериментального саркоцисгоза овец//Докл. ВАС-

ХНИЛ, 1984. — № 4. — С. 44 — 46.

8. Сахно В. М. Диагностика саркоцистозе овец: Информ. листок Моск. обл.

ЦНТИ. — М„ 1984. — 1 с.

9. Сахно В. М. Люминесцентная диагностика энтерального саркоспоридиоза пло-

тоядных: Информ. листок Ставроп. ЦНТИ. — Ставрополь, 1987. — 2 с.

10. Сахно В. М. Клинико-морфологические проявления, диагностика, лечение и про-

филактика саркоспоридиоза овец: Метод, рекомендации для работников животноводства. — Ставрополь, 1989. — И с.

11. Сахно В. М. Послеубойная диагностика и профилактика саркоспоридиозов сель-

скохозяйственных животных: Рекомендации для работников мясоперерабатывающей промышленности. — Ставрополь, 1989. — 10 с.

12. Сахно В. М. Некоторые аспекты патогенеза саркоспоридиоза овец//Механизмы

интеграции биологических систем. Проблема адаптации/Тезисы докл. науч,-практ. конференции. — Ставрополь, 1989. — С. 207 — 209.

13. Сахно В. М. Патология энтерального саркоспоридиоза. Сообщение I. Патомор-

фология тонкого отдела кишечника//Вклад молодых ученых и специалистов в науч.-техн. прогресс с. х. производства/Тезисы докл. Кирг. СХИ. — Фрунзе, 1990. — С. 100 — 101.

14. Сахно В. М. Патология энтерального саркоспоридиоза. Сообщение II. Морфо-

логические реакции в патентный период//Вклад молодых ученых и специалистов в науч.-техн. прогресс с. х. производства/Тезисы докл. Межвузов, науч.-практ. конференции. — Ставроп. СХИ. — Ставрополь, 1991. — С. 216.

15. Сахно В. М. Патология энтерального саркоспоридиоза. Сообщение III. Споро-

цнетогенез и реакция регионарных тканей//Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний с. х. животных/Сб. науч. тр. Ставроп. СХИ. — Ставрополь, 1991. — С. 30 — 33.

16. Сахно В. М. Статус тканевых базофилов в патентный период энтерального сар-

коспоридиоза//Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний с. х. животных/Сб. науч. тр. Ставроп. СХИ. — Ставрополь, 1991. — С. 26 — 30.

17. Сахно В. М. Роль хозяйственной деятельности в формировании природных оча-

гов саркоспорилиоза//Ветеринария, 1992. — № 3. — С. 35 — 36.

18. Сахно В. М. Морфологические проявления смешанной инвазии у овец//Ци-

тология, 1992. — N2 4. — С. 137.

19. Сахно В. М. Иммуномодулирующая активность саркоспоридий//Творчество мо-

лодых — агропромышленному комплексу: Тезисы докл. — Пенза, 1992. — С. 70 — 72.

20. Сахно В. М. Клинико-морфологическое проявление саркоспоридиоза овец при

гельминтозах//Ветеринария, 1992. — № 6. — С. 37 — 38.

21. Сахно В. М. Саркоспоридиоз овец: отдаленные последствия острого тече-

ния//Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний с. х. животных: Сб. науч. тр./Ставроп. СХИ. — Ставрополь, 1992. — С. 16 — 19.

22. Сахно В. М. Патология энтерального саркоспоридиоза. Сообщение 7. Морфо-

функционалыюе состояние мононуклеарно-фагоцитарной системы в патентный период//Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний с. х. животных: Сб. науч. тр./Ставроп. СХИ. — Ставрополь. 1992. — С. 19 — 23.

23. Сахно В. М. Патология энтерального саркоспоридиоза. Сообщепие 8//Пробле-

мы научного обеспечения повышения эффективности с. х. производства: Тезисы докл. Кирг. СХИ. — Ч. 2. — Бишкек, 1992. — С. 49.

24. Сахно В. М. Интактность лаброцдтов у овец при хроническом саркоспоридио-

зе//Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней сельскохозяйственных животных: Материалы Всероссийской науч.-метод. конференции по патанатомии с. х. животных (19 — 21 октября 1993 г., Воронеж). — Воронеж, 1993. — С. 81 — 82.

25. Сахно В. М. Качественно-количественная характеристика пиронинофилоцитов

у овец при хроническом саркоспоридиозе//Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболевапий с. х. животных: Сб. науч. тр./Ставроп. СХИ. — Ставрополь, 1993. — С. 23 — 26.

26. Сахно В. М. Интенсивность регенераторных реакций при хроническом течении

саркоспоридиоза овец//Диагностика, лечение, профилактика инвазионных и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр./ Ставроп. СХИ. — Ставрополь, 1993. — С. 26 — 29.

27. Сахно В. М. Персистирование морфологических признаков саркоспоридиоза

у овец при нитратно-нитрптном токсикозе//Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр./ СГСХА. — Ставрополь, 1994. — С. 17 — 20.

28. Сахно В. М. Саркоспоридиоз овец как трансплацентарная инвазия//Актуальные

проблемы ветеринарии: Материалы международной конференции (26 — 30 июля 1995 г., г. Барнаул)/Алтайс. ГАУ. — Барнаул, 1995. — С. 123.