Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональные особенности иммунной и сердечно-сосудистой систем у свиней при микотоксикозах

На правах рукописи

Миронова Ольга Анатольевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИММУННОЙ И СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМ У СВИНЕЙ ПРИ МИКОТОКСИКОЗАХ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 4 МАЙ 2009

г. Ставрополь - 2009

003470048

Работа выполнена в ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» Россельхозакадемии

Научный руководитель:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор, Василенко Вячеслав Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Лапина Татьяна Ивановна кандидат ветеринарных наук, Лысухо Татьяна Николаевна

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО «Волгоградская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится « 2009 г. в « » часов на заседании

диссертационного совета Д.220.062-.02 при ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» (355017 г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет».

Автореферат размещен на официальном сайте ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»: http://www.stgau.ru _2009 г.

Автореферат разослан « ЗСЛ

2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Клочко А.К.

3

Условные сокращения

ССС - сердечно-сосудистая система ЧСС - частота сердечных сокращений ИН - индекс напряжении ИВТ - исходный вегетативный тонус ВНС - вегетативная нервная система САС - симпатоадреналовая система КА - катехоламины А - адреналин НА - норадреналин ДА - дофамин

САД - систолическое артериальное давление ДАД - диастолическое артериальное давление СГД - среднее гемодинамическое давление УОК - ударный объем крови МОК - минутный объем крови

ОПСС - общее периферическое сопротивление сосудов УИ - ударный индекс СИ - сердечный индекс

УПСС - удельное периферическое сопротивление сосудов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Развитие животноводства, повышение продуктивности скота и птицы тесно связаны с санитарным качеством кормов, в большой мере зависящим от загрязнения их продуктами жизнедеятельности микроскопических грибов - микотоксинами (Н.А.Спесивцева, 1975; А. Иванов, 2008; Э. Ле Бра, 2008).

В настоящее время описано более 400 микотоксинов, являющихся природными компонентами кормов и пищевых продуктов. Они образуются примерно 350 видами грибов, которые имеют до 10000 штаммов. Доступные методы анализа разработаны примерно для десятой части микотоксинов (Т. Хамидуллин, 2002; Д- О' Сулливан, 2005).

Токсигенные плесневые грибы и их метаболиты, поражая корма, вызывают у животных острые и хронические комплексные отравления. Это сопровождается уменьшением продуктивности, снижением санитарного качества продукции, снижением естественной резистентности и иммунного статуса и, как следствие, повышением заболеваемости инфекционной и незаразной этиологии (В.А. Антипов с соавт., 2007). Микотоксины через пищевую цепь могут попасть и к человеку, у которого действуют подавляюще на иммунитет и даже могут вызвать опухолевые заболевания (Э. Конноли, Д. О' Сулливан, 2005; А.К. Чулков с соавт., 2007).

Россия является зоной рискованного земледелия и вероятность поражения кормов плесневыми грибами очень высока (А.К. Чулков с соавт., 2007). Для южных регионов страны эта проблема наиболее актуальна, что связано с природно-климатическими особенностями и интенсивным ведением животноводства и кормопроизводства (В.А. Антипов с соавт., 2007).

Микотоксины отрицательно воздействуют на все системы организма животных. Особенно сильно при микотоксикозах страдают сердечно-сосудистая и иммунная системы. На фоне поражения иммунной системы возрастает вероятность заболевания животных вирусными и бактериальными инфекциями, резко снижается эффективность проведения специфической профилактики (Э. Конноли, Д. О'Сулливан, 2005; Ф. Неера, 2006).

Чаще в кормах одновременно присутствуют несколько микотоксинов, которые в комбинации оказывают еще более негативный эффект на здоровье животных, чем по отдельности. Сегодня большинство исследователей признают концепцию синергизма в действии микотоксинов на организм, поэтому считают, что безопасных уровней микотоксинов не существует (Д. О' Сулливан, 2005; Г.П. Кононенко с соавт., 2005; А.К. Чулков с соавт., 2007).

В доступной нам литературе отсутствуют публикации по влиянию микотоксинов на статистические характеристики сердечного ритма и состояние неспецифических адаптационных механизмов организма животных, что и определило цель нашего исследования.

Цель работы - изучить морфофункциональные особенности иммунной и сердечно-сосудистой систем у свиней при микотоксикозах на донозологиче-ской стадии.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи.

Изучить при микотоксикозах, вызванных токсинами Т-2 и охратоксином в количествах ниже ПДК:

- морфологические и биохимические показатели крови у свиноматок перед случкой, во время беременности и лактации;

- морфологические и биохимические показатели крови у полученных от них поросят до трехмесячного возраста;

- особенности клеточного и гуморального звеньев иммунитета у поросят;

- функциональное состояние симпатоадреналовой и сердечно-сосудистой систем у поросят с различным исходным вегетативным тонусом и реакции на адреналиновую пробу;

- показатели роста и развития поросят при микотоксикозах;

- взаимосвязь между изменениями морфологических и биохимических показателей крови у свиноматок при микотоксикозах и морфофункциональными изменениями у полученных от них поросят.

Научная новизна. Впервые изучены морфологические и биохимические показатели крови супоросных свиноматок и полученных от них поросят на фоне микотоксикоза, вызванного монотоксином Т2 и сочетанием двух токсинов Т2 и охратоксина в количествах ниже ПДК. Выявлены периоды напряжения и истощения симпатоадреналовой системы по уровню экскреции А, НА, ДА и ДОФА флюорометрическим методом в порционной и суточной моче поросят с различной нагрузкой микотоксинами. Показано, что длительное кормление свиней кормами, содержащими микотоксины, вызывает неблагоприятные изменения клеточного и гуморального иммунитета, состояния симпатоадреналовой и сердечно-сосудистой систем, сопровождается отставанием по относительному приросту живой массы.

Научно-практическая значимость работы. Изменения морфологических и биохимических показателей крови, уровня катехоламинов при микотоксикозах, установленные в процессе исследований, используются в диагностической практике в качестве нормативных данных при оценке функционального состояния свиней на фоне нагрузки организма микотоксинами корма.

Материалы работы необходимы при решении задач, связанных с разработкой приемов эффективной профилактики и лечения свиней при микотоксикозах. Результаты исследований могут быть использованы как справочный материал при составлении учебных пособий и руководств по физиологии и патологии домашних животных для студентов по специальности «Ветеринария» и «Зоотехния».

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях ГНУ «СевероКавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» в 2007-2008 гг. и на трех Всероссийских научных конференциях.

Публикации. Материалы диссертационной работы опубликованы в 10 научных работах, из них 2 - в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, двух методических рекомендациях.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собствен-

пых исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа изложена на 163 страницах компьютерного текста, содержит 36 таблиц, 33 рисунка. Библиографический список включает 209 источников литературы, в том числе 129 зарубежных.

Основные положения, вынесенные на защиту:

1. Динамика показателей морфо-биохимических параметров крови и кате-холаминов у свиней отражает степень нагрузки организма животного микоток-синами.

2. Динамика функционального состояния сердечно-сосудистой системы, показателей иммунобиологического и вегетативного статуса у свиней отражает развитие адаптационного синдрома при микотоксикозах, изменения в данных системах появляются до развития клинических проявлений микотоксикоза.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в 2005-2008 гг. в лабораториях функциональной диагностики болезней сельскохозяйственных животных, микологии и микотоксикологии государственного научного учреждения Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «СКЗНИВИ» Россельхозакадемии).

Объектом изучения были чистопородные свиноматки и поросята крупной белой породы в возрасте до трех месяцев. По принципу аналогов было сформировано 3 группы супоросных свиноматок по 15 голов в каждой. Во время супоросности содержание животных было групповым, по 10-15 голов в станке, кормление осуществлялось готовым комбикормом производства ЗАО «Провими-Азов» СК 15-71 - супоросные свиноматки, СК 14-71 - лактирующие свиноматки, СК 11-01 - поросята группы 0-2, поросята группы 2-4 и выше СК 13-01.

Для характеристики роста и развития поросят разных групп (по 20 голов в каждой) определяли живую массу, среднесуточный прирост живой массы, абсолютную и относительную скорость роста путем их взвешивания при рождении, в 21 день, при отъеме в 2 месяца и в трехмесячном возрасте утром до поения и кормления.

Определение контаминации кормов токсинообразующими микромицетами и их видовую идентификацию проводили с использованием традиционных методов. Параллельно пробы исследовали на содержание в них микотоксинов методом конкурентного иммуноферментного анализа.

Морфологический анализ крови включал: определение числа эритроцитов и лейкоцитов в сетке камеры Горяева, определение концентрации гемоглобина гемоглобинцианидным методом, гематокрита по методике, предложенной И.И. Архангельским и Л.П. Сошенко (1993), СОЭ, выведение лейкограммы по общепринятой методике.

Биохимический анализ крови включал определение следующих

показателей: активность щелочной фосфатазы - по ферментативному гидролизу n-нитрофенилфосфата, аланинаминотрансферазы - по методу Райтмана-Френкеля, концентрации глюкозы - орто-толуидиновым методом, белка - с помощью биуретовой реакции, билирубина - по методу Ендрашика-Грофа, альбумина - по реакции с бромкрезоловым зеленым, креатинина - методом Яффе, мочевины - по реакции с диацетилмонооксимом; определение фибриногена проводили гравиметрическим методом по Рутбергу, сиаловых кислот - по методу Гесса, общей активности лактатдегидрогеназы - методом, основанным на оптическом тесте Варбурга, С-реактивного белка - методом реакции преципитации в капилляре. Уровень электролитов (ионов натрия, калия, хлора) определяли на ионометре И-500 с использованием ионоселективных электродов.

При иммунологическом исследовании использовали реакцию Манчини -для определения концентрации сывороточных иммуноглобулинов, метод розеткообразования - Е-РОК для определения количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций.

Функциональное состояние симпатоадреналовой системы оценивали по уровню экскреции А, НА, ДА и ДОФА флюорометрическим методом в порционной и суточной моче на приборе БИАН-130 (M-80Q). Сбор мочи проводился на каждом этапе исследования, до и после завершения тестирующей функциональной пробы. Для оценки состояния вегетативной нервной системы поросят применялась динамическая запись кардиоинтервалограмм при выполнении адреналиновой пробы (в/в введение 0,01 мг/кг адреналина гидрохлорида в виде 0,01% раствора).

Определение параметров системной гемодинамики осуществлялось с помощью реографа-полианализатора РГПА 6/12 «РЕАН-ПОЛИ», программного обеспечения - версия 2, профессиональная для «РЕАН-ПОЛИ», и компьютера.

Полученные экспериментальные данные обработаны методом вариационной статистики (В.В. Парин с соавт., 1968; О.И. Лиссова с соавт., 1977; О.И. Жаринов, 1992).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Распространение микотоксинов в кормах

В ГУРО «Ростоблветлаборатория» с 2006 по 2008 гг. исследовали 1918 проб комбикормов для свиней, поступивших из хозяйств и предприятий Ростовской области, из которых положительными по микотоксинам оказались 205 проб (10,6%).

Из монотоксинов в 37% проб выделялся Т-2 токсина, в 20% - охраток-син, в 17% - зеараленон и в 7% - фумонизин В1, что связано с благоприятными условиями для роста и токсинообразования грибов родов Fusarium sp., Pénicillium sp., Aspergilus sp., Mucor sp. Установлено содержание одного токсина в 36,5%, сочетание двух токсинов - в 39%, трех - в 14,7%, четырех - в 9,8% исследованных проб (рис 1). Таким образом, в 63,5% проб кормов установлено

наличие днух и более микотоксинов, среди которых чаще всего обнаруживали сочетание Т-2 и охратоксина - 8%.

□ Зезралеиан

Ё1 Аф/шоксин 81. и Т-2 токсин

□ Охра токсин т~ Шпулин МСтеригшцеаии

Фумонизии

Рис. 1. Частота выделений микотоксинов в пробах комбикормов для свиней.

3.2. Результаты исследований крови подопытных свиноматок

В ходе проведенных опытов нами были изучены клиническая картина, изменения биохимических и гематологических показателей крови свиноматок и поросят при скармливании комбикормов, естественно контаминированных Т-2 токсином и комплексом охратоксин + Т-2 токсин в количестве 0,1-0,2 и 0,020,1 мг/кг комбикорма соответственно.

Для изучения морфологических и биохимических показателей крови (табл. 1,2) были сформированы 3 группы супоросных свиноматок по 15 голов в каждой. В период подготовки к случке (с восьмимесячного возраста), во время беременности и после опороса свиноматки с поросятами контрольной группы находились на рационах, не содержащих микотоксины. Животные первой опытной группы (как свиноматки, так и поросята на протяжении всего опыта) получали рацион с содержанием Т-2 токсина в количестве 0,1-0,2 мг/кг, животные второй опытной группы получали рацион с содержанием Т-2 токсина и охратоксина в количествах 0,1-0,2 и 0,02-0,1 мг/кг комбикорма соответственно. При данных количествах микотоксинов в корме клинических признаков мико-токсикозов не наблюдали.

Свиноматки контрольной группы имели перед случкой и в период беременности более высокие исследуемые показатели красной крови в сравнении со свиноматками первой и второй опытных групп, одновременно в опытных группах отмечался лейкоцитоз с изменением структуры лейкограммы в сторону увеличения числа нейтрофилов.

Таблица 1. Морфологические показатели крови у свиноматок в период супоросности под влиянием микотоксинов (N=45).

Показатели, ед. измерения Группа (п=15)

Контрольная 1 опытная 2 опытная

Перед случкой

Эритроциты, 101г/л 5,80±0,34 5,41±0,22 4,72±0,30*

Гемоглобин, г/л 144,0±5,5 139,0±4,8 102,0±3,0***

Гематокрит 0,47±0,02 0,44±0,01 0,37±0,03*

СОЭ, мм/ч 6,0±0,7 5,1+1,1 8,0±0,8

Лейкоциты, *ю7л 8,31±0,43 9,26±1,20 10,16±0,46**

1 месяц супоросности

Эритроциты, 1012/л 5,20±0,25 4,42±0,31 4,11±0,30*

Гемоглобин, г/л 142,0+1,5 124,0±4,3*** 97,0±4,7***

Гематокрит 0,44±0,01 0,36±0,02** 0,35±0,02***

СОЭ, мм/ч 5,9±0,8 8, ¡±0,8 9,3 ±0,9**

Лейкоциты, х 104/л 8,58±0,30 10,54±0,45** 14,11±0,92***

2 месяца супоросности

Эритроциты, 1012/л 5,10±0,27 4,30+0,11* 4,13+0,22*

Гемоглобин, г/л 141,0+2,3 119,0+3,8*** 96,1±3,7***

Гематокрит 0,44± 0,02 0,36±0,02** 0,35±0,01***

СОЭ, мм/ч 7,0±1,4 8,3±0,8 11,0±0,9*

Лейкоциты, *ю7л 10,51±0,42 11,32±0,71 13,18±1,75

3 месяца супоросности

Эритроциты, 1012/л 4,90±0,28 3,91+0,21** 3,62±0,22**

Гемоглобин, г/л 127,0±4,2 109,0±3,8** 91,043,7***

Гематокрит 0,39±0,02 0,35+0,02 0,32±0,02*

СОЭ, мм/ч 7,9±1,3 8,3±0,8 11,2±0,7*

Лейкоциты, хю7л 9,72±0,23 12,16±0,75** 14,32+0,60***

* - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 в сравнении с контрольной группой.

В период супоросности у свиноматок опытных групп в сравнении с контролем биохимические показатели характеризовались низким содержанием общего белка, альбуминов, глюкозы, низким альбумин-глобулиновым соотношением.

Так, при трехмесячной супоросности у свиноматок первой опытной группы в сравнении с контролем уровень общего белка был ниже на 24,5%, альбумина - на 27,5%, глобулина - на 22,0%, альбумин-глобулиновое соотношение -на 42,9%; во второй опытной группе соответственно на 32,2%; 51,4%, 42,9% и 47,3% был более низким в сравнении с аналогичными показателями контрольной группы.

Таблица 2. Биохимические показатели крови у свиноматок в 3 месяца супоросности (N=45).

Показатели, ед. измерения Группа (п=15)

контрольная 1 опытная 2 опытная

Общий белок, г/л 72,3±2,7 54,6+2,2*** 49,0+2,8***

Альбумин, г/л 33,1+4,7 24,0±0,7 16,1+0,9**

Глобулин, г/л 39,2±3,5 30,6±2,4 33,9+1,9

Альбумин-глобулиновое соотношение 0,84+0,05 0,81±0,03 0,48+0,04***

Аланинаминотрансфераза, Е/л 100,6±8,3 132,9+6,9** 154,0+6,5***

Щелочная фосфатаза, Е/л 95,6±19,3 114,4±9,7 219,4+7,7***

Лактатдегидрогеназа, Е/л 151,0± 2,5 208,6+13,1*** 214,8+3,5***

Мочевина, ммоль/л 8,04±0,46 9,35+0,73 13,08+0,12***

Билирубин, мкмоль/л 4,36±0,06 7,92+0,84*** 6,94+1,21*

Глюкоза, ммоль/л 6,72±0,28 4,74+0,21*** 3,55+0,15***

рН плазмы 7,4±0,02 7,4+0,02 7,4+0,02

Калий ионизированный, ммоль/л 5,46±0,16 4,30+0,24*** 4,68+0,34

Протромбиновое время, сек. 10,1 ±0,8 10,2+1,9 12,4+1,1

Сиаповые кислоты, ммоль/л 1,80±0,06 2,50+0,04*** 3,10+0,06***

Фибриноген, г/л 3,6±0,1 4,3+0,05*** 4,6+0,1***

С-реактивный белок, кресты - - -

* - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 в сравнении с контрольной группой.

Одновременно в первой и второй опытных группах в сравнении с контролем были более высокими уровни аланинаминотрансферазы на 32,1% и 53,7%; щелочной фосфатазы - на 19,7% и 129,5%; лактатдегидрогеназы - на 38,2 и 41,7%; мочевины - на 16,3% и 62,7%; билирубина - на 81,7% и 58,3%; сиало-вых кислот - на 38,9% и 72,2%; фибриногена - на 19,4% и 27,8% соответственно.

3.3. Результаты морфологических и биохимических исследований крови подопытных поросят

Нами проведены морфологические и биохимические исследования крови у поросят, полученных от свиноматок разных групп. Поросята контрольной группы получали комбикорм без микотоксина, поросята первой опытной группы получали корм с содержанием Т-2 токсина и поросята второй опытной группы получали корм с Т-2 токсином и охратоксином в таких же количествах, что и их матери.

У поросят, рожденных от свиноматок соответствующих групп и получавших корма с тем же содержанием микотоксинов, к трехмесячному возрасту отмечалось снижение числа эритроцитов и количества гемоглобина до 3,2710,81* 1012/л и 86,14+10,12 г/л соответственно при одновременном развитии лейкопении до 9,15±3,33*109г/л и лимфопении до 26,5+3,9 % (табл. 3).

Таблица 3. Морфологические показатели крови у поросят с различной

нагрузкой микотоксинами в возрастном аспекте.

Показатели, 21 день 2 мес. 3 мес.

ед. измерения

Контрольная группа

Эритроциты, х1012/л 6,51+1,17 6,97±0,42 6,93+0,87

Гемоглобин, г/л 105,8+9,96 109,64±7,21 110,55±9,31

Лейкоциты, х109г/л 12,61 ±0,82 13,96±0,97 16,04+2,39

Лимфоциты, % 46,9±7,4 48,3+7,4 53,1+7,7

1 опытная группа

Эритроциты, х1012/л 5,91+1,49 5,49+0,67 4,32+0,95

Гемоглобин, г/л 97,20±9,11 93,70±8,37 97,32+11,21

Лейкоциты, *!Оуг/л 9,74+1,33 11,29±1,18 П,98±3,37

Лимфоциты, % 24,4±8,7 31,1±6,3 30,9±2,4

2 опытная группа

Эритроциты, х10!2/л 4,09± 1,27 3,91+1,23 3,27+0,81

Гемоглобин, г/л 90,01+11,21 88,55+11,26 86,14+10,12

Лейкоциты, хЮ9г/л 6,23±1,25 7,33+1,55 9Д5±3,33

Лимфоциты, % 17,3±4,3 24,5±5,8 26,5+3,9

Проведенными исследованиями установлено (табл. 4), что у двух- и трехмесячных поросят первой опытной группы содержание общего белка и альбуминов достоверно снизилось в сравнении с 21-дневным возрастом и достоверно повысились уровни аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы, калия ионизированного. У двух- и трехмесячных поросят второй опытной группы в сравнении с 21-дневным возрастом содержание калия ионизированного достоверно снизилось, повысились уровни аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы, мочевины, глюкозы.

У трехмесячных поросят обеих опытных групп отмечено снижение в сравнении с контролем уровня общего белка, альбуминов, глобулинов, лактатдегидрогеназы; повышение содержания аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, мочевины, билирубина; у животных второй опытной группы в сравнении с животными контрольной и первой опытной групп отмечается повышение уровня глюкозы, снижение уровня ионизированного калия.

Таблица 4. Биохимические показатели крови у поросят с различной

нагрузкой микотоксинами в возрастном аспекте.

Показатели, ед. измерения 21 день 2 мес. 3 мес.

Контрольная группа

Общий белок, г/л 67,53+3,19 63,36±3,79 69,45±4,28

Альбумин, г/л 32,75+3,21 27,86±1,98 36,22+3,21

Глобулин, г/л 37,77+2,91 36,04±3,83 32,73±4,14

Аланинаминотрансфераза, Е/л 61,77+5,44 95,20±6,66*** 94,64±14,12*

Мочевина, ммоль/л 4,82±1,04 6,05+0,89 6,33±1,64

Билирубин, мкмоль/л 4,44±0,66 4,05±1,32 4,02+1,87

Глюкоза, ммоль/л 5,65±0,28 4,78+0,12** 4,78+0,11**

Протромбиновое время, сек. 10,9±1,0 9,1+1,2 9,8±1,5

Сиаловые кислоты, ммоль/л 1,89±0,66 1,29±0,58 1,78+0,59

Фибриноген, г/л 3,08+0,58 3,17±0,86 2,18±0,65

С-реактивный белок, кресты - - -

1 опытная группа

Общий белок, г/л 69,57±4,78 52,3±3,68** 53,74±2,82**

Альбумин, г/л 32,57±2,47 23,52±2,42* 23,95±2,71*

Глобулин, г/л 35,54±3,59 29,3±5,13 30,6±3,88

Аланинаминотрансфсраза, Е/л 73,36±6,33 103,54+8,58** 102,42+11,09*

Мочевина, ммоль/л 5,17±0,98 7,27±0,85 7,43±1,18

Билирубин, мкмоль/л 6,42±0,87 6,17±1,36 6,03±1,92

Глюкоза, ммоль/л 4,62±0,22 4,84±0,14 4,89±0,13

Протромбиновое время, сек. 9,4±1,1 8,9±1,1 8,4+1,7

Сиаловые кислоты, ммоль/л 2,69±0,38 1,57±0,48 1,59±0,57

Фибриноген, г/л 3,24±0,66 3,05±0,95 3,47+0,59

С-реактивный белок, кресты - - -

2 опытная группа

Общий белок, г/л 58,03±7,23 49,1±3,75 48,65±4,97

Альбумин, г/л 22,89±2,17 18,01±2,24 17,88+3,04

Глобулин, г/л 40,09+6,71 31,28±6,22 26,52+3,57

Аланинаминотрансфераза, Е/л 82,06±8,15 123,96±9,64** 123,81±11,58**

Мочевина, ммоль/л 6,14±1,27 10,21±0,97* 10,52±1,68*

Билирубин, мкмоль/л 7,13±1,13 6,36±1,08 6,94+1,63

Глюкоза, ммоль/л 4,46±0,14 8,74±0,21*** 8,73+0,28***

Протромбиновое время, сек. 9,6+1,2 9,8+1,1 9,4±1,4

Сиаловые кислоты, ммоль/л 2,25±0,58 1,78+0,61 1,94±0,68

Фибриноген, г/л 3,14±0,69 3,09±0,98 3,56±0,44

С-реактивный белок, кресты - - -

* - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 в сравнении с исследованием в 21 день.

3.4. Результаты изучении иммунобиологического статуса у подопытных

поросят

Результаты определения относительного и абсолютного содержания Т- и В-лимфоцитов у трехмесячных поросят, получавших корма с микотоксинами,

представлены в табл. 5 .

Таблица 5. Показатели клеточного иммунитета периферической крови у _подопытных поросят в возрасте 3 месяцев._

Группа, (п = 20) Т- лимфоциты

Т - лимфоциты Т-хелперы, Т-супрессоры, Тх/Гс

% х109/ % х107л % х10%

Контрольная 49,7±0,5 4,24± 28,7±0 2,45±0 12,9 ± 1,1±0, 2,23±

0,02 ,9 ,01 0,6 01 0,02

1 опытная 43,73±1, 1,62± 21,6± 0,8±0, 12,4± 0,46±0 1,74±

3 0,12 1,9* 12 1,6 ,01 0,01

2 опытная 30,2±1,4 0,73± 16,61 ± 0,4±0,0 9,37 ± 0,23±0 1,74±

** 0,02 1,1** 1 0,9** ,01 0,01

*/?<0,05,**/> <0,01 в сравнении с животными контрольной группы.

У поросят первой опытной группы отмечались лейкопения до 11,98х 109/л и лимфопения до 30,99x10%, которые сопровождались снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 43,73%, а среднего абсолютного - до 1,62*10%, что было на 61,79% меньше в сравнении с контрольной группой. Процентное и абсолютное значение Т-хелперов и Т-супрессоров составило 0,8*10% и 0,46x109/л соответственно, что на 67,34 % и 58,18% меньше, чем в контрольной группе. У поросят второй опытной группы отмечались лейкопения до 9,15x10% и лимфопения до 26,55*10%, которые сопровождались снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 30,2%, абсолютного - до 0,73x10%, что на 82,78% было меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значение Т-хелперов и Т-супрессоров составило 16,61%, 0,4x10% и 9,37%, 0,23x10% соответственно, что было на 83,67% и 79,09% меньше в сравнении с контрольной группой.

Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета у трехмесячных поросят первой опытной группы выявил, что процентное содержание В-лимфоцитов в периферической крови снизилось до 19,57%, абсолютное их число снизилось до 0,47х 10%, что было на 13,0% меньше, чем в контрольной группе. Уровень иммуноглобулинов А, в и М составил соответственно 2,6; 10,8 и 11,2 мг/мл, что на 29,8; 8,5 и 41,8 % ниже, чем в контрольной группе.

Таблица 6. Показатели гуморального иммунитета у подопытных поросят

в возрасте 3 месяцев.

Группа, (п = 20) В-лимфоциты Иммуноглобулины

% х 10% А, мг/мл й, мг/мл М, мг/мл

Контрольная 22,5±2,2 0,54±0,016 3,72±0,7 11,8±0,21 1,96 ±0,2

1 опытная 19,57±26 0,47±0,028 2,61±1,2 10,8±0,39 1,14 ±0,4

2 опытная 11,96±27 0,27±0,034* 2,15±1,6* 11,20±0,42 1,40 ±0,7

*/?<0,05,** р <0,01 в сравнении с животными контрольной группы.

У поросят второй опытной группы процентное содержание В-лимфоцитов в периферической крови снизилось до 11,96%, абсолютное среднее значение В-лимфоцитов оказалось 0,27±0,034, что было на 50,0% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, О и М составил соответственно 2,15; 11,20 и 1,4 мг/мл, что на 42,2; 5,4 и 28,6 % ниже, чем в контрольной группе.

3.5. Особенности функционального состояния симпатоадрензловой системы у подопытных поросят

Анализ функционального состояния САС показал, что поросята с различным исходным вегетативным тонусом в сердечно-сосудистой системе отличаются по уровню экскреции катехоламинов и их предшественников (табл. 7).

У 30% поросят контрольной группы с преобладанием симпатических влияний на сердечный ритм в условиях покоя отмечается уровень секреции адреналина 10,12±0,34 нг/мин., что выше, чем у животных с эйтонией в этой же группе.

Таблица 7.Экскреция катехоламинов и ДОФА у двухмесячных подопытных поросят с различным исходным вегетативным тонусом в сердечно-сосудистой ___системе, (М±ш)_

Показатели, ед. иакрения

Группа ИВТ А НА ДА ДОФА НА/А

(нгУмин.) (нт/мин.) (нг/мин) (щ/мии)

С' 10,12*0,34 19,68±1,79 123,56*7,13 9,89*1,11 2,09

1 э° 839±0,71 17,79*1,62 13925Ш38 14,1541,18 2,16

В" 8,43*036 163ШД4 156,12*6,43 2234*2,87 2,03

| £ 1/2 ** * ** **

2/3 * * **

13 ** ** ** **

С 10,56*0,76 16,17±1,41 104,49*5,19 8,22*1,46 1,69

1 э 8,72*0,31 15,29*1,17 110,64*6,09 14,44*4,53 1,76

§ в

1/2 ** * *

С 11,73±0,78 16,69*1,28 96,42*3ДЗ 11,93*133 133

Э 9,б6±0,4б 1434*2,02 92,14*4,66 12£Ш,26 1,52

в В 7,13*0,53 11,494135 86,40*5,73 9,08*221 1,87

1/2 »* * *

2/3 ** ** **

1/3 ** ** ** »*

Примечание: С-симпатикотония; Э-эйтония; В-ваготония; различия достоверны между группами с ИВТ: * - р<0,05; ** - р<0,01.

Показатели предшественников адреналина и норадреналина имели наибольшие различия у поросят с разным типом вегетативной активности. Так, уровень дофамина у поросят с симпатикотонией оказался на 21%, а уровень ДОФА на 56% ниже, чем у животных с ваготонией.

Анализ уровня котехоламинов у поросят на фоне скармливания корма с микотоксинами показал резкое снижение предшественников адреналина и норадреналина в моче. Так, у поросят второй опытной группы уровень дофамина был 96,42±3,23 нг/мин. (симптатикотоники), 92,14±4,66 нг/мин. (эйтоники) и 86,40±5,73 нг/мин. (ваготоники). Интересно отметить, что в контрольной группе поросят уровень предшественников адреналина и норадреналина был наиболее высок у ваготоников, а при наличии микотоксинов в корме у ваготоников отмечался наименьший их уровень.

Таким образом, ваготония в контрольной группе животных, употреблявших корма без микотоксинов, и в опытных группах - с микотоксинами имеет разную природу: в первом случае - это особенный тип ЦНС - истинная ваготония, во втором случае - истощение адренэргических структур.

3.6. Реакции симпато-адреналовон системы на адреналиновую пробу у подопытных поросят с различным исходным вегетативным тонусом

Тестирующая функциональная проба в виде дозированного внутривенного введения адреналина позволила выявить реактивность и функциональные резервы симпатоадреналовой системы в исследуемых группах (табл. 8).

У поросят-симпатотоников контрольной группы при относительно высоких фоновых значениях экскреции норадреналина 10,12±0,34 нг/мин. в ответ на адреналиновую пробу происходит прирост уровня адреналина до 11,67±1,38 нг/мин., что на 15% выше по отношению к фону; повышается и экскреция норадреналина с 19,68±1,79 нг/мин. до 21,98±2,54 нг/мин. (на 11%). При этом выделение ДОФА поднимается с 9,89±1,11 нг/мин. до 13,76±3,17 нг/мин., что на 29% превышает фоновый уровень функционирования симпатоадреналовой системы.

У поросят-эйтоников из этой же группы происходит повышение уровня адреналина и норадреналина с 8,39±0,71 нг/мин. и 13,10±0,94 нг/мин. до 17,79±1,62 нг/мин. и 39,32±2,82 нг/мин. соответственно, что выше на 36% и 55%, тогда как уровень ДОФА поднялся с 14,15±1,18 нг/мин. до 25,24±2,32 нг/мин., что на 44% выше относительно фонового уровня. У поросят-ваготоников отмечался самый высокий уровень прироста катехоламинов и их предшественников: адреналина - с 8,43±0,36 нг/мин. до 15,87±1,58 нг/мин.; норадреналина - с 16,31±1,24 нг/мин. до 23,74±1,91 нг/мин.; ДОФА - с 22,34±2,87 нг/мин. до 27,52±3,69 нг/мин., что на 47%, 32% и 19% выше в сравнении с фоновым уровнем.

Во второй опытной группе только у поросят-симпатотоников происходит повышение уровня адреналина с 11,73±0,78 нг/мин. до 13,91±3,05 нг/мин. и норадреналина с 16,69±1,28 нг/мин. до 19,03±2,99 нг/мин., что соответственно на 15,7% и 12,3% выше фоновых значений; при этом снижение уровня ДОФА с

11,93±1,33 нг/мин. до 9,17±2,15 нг/мин. указывает на резкое снижение резервных возможностей симпатоадреналовой системы.

Таблица 8. Экскреция катехоламинов и ДОФА у поросят с различным исходным вегетативным тонусом до и после адреналиновой пробы, (М+т).

Показатели

Группа ивт А НА ДА ДОФА НА/А

(пг/мин.) (нг/мин) (нг/мин. (нг/мин.)

Фоновый уровень

С 10.12Щ34 19,68+1,79 123,56+7,13 9,89+1,11 2,09

1 Э 8,39*0,71 17,79Ы,62 139,251838 14,15+1,18 2,16

I В 8,43+036 1631+1,24 156,12+6,43 2234+2,87 2,03

1 После аяреиалиювой пробы

¡3 С 11,67+138 21^8±2^4 136,24+7,63 13,76±3,17 152

Э 13,10*0,94 39321-2,82 162,14+8,14 253+232 3,06

В 15,87+1,58 23,74+1 <?1 187,89+8,44 27,52+3,69 1,7

Фоновый уровень

С 10,5610,76 16,17+1,41 104,4915,19 8,22+1,46 1,69

Э 8,72+031 15,29+1,17 110,«-±6,09 14,44+4,53 1,76

§ В - - - - -

После адреналиновой пробы

С 12,7413,15 24,59Ы,81 141,14+453 103Ш,62 1,87

Н 14,13+2,63 22,15=13,49 186,4047,77 12Д2+439 1,64

В 6,1710,65 73:136 89,16+9,43 8,09+1,80 132

Фоновый уровень

С 11,73+0,78 16,69+1,28 96,42+3,23 11^3+133 133

Э 9,66±0,46 1434+2,02 92,14+4,66 12^9*1,26 1,52

§ 1 В 7,13Я)3 11,49+135 86,40+5,73 9,08+2^1 1,87

ё о После адреналиновой пробы

С 13,91+3,05 19,03*229 81^6+10,47 9,17+2,15 13

Э 83212,06 12,14+3,43 72^41:11^1 10,2913,21 1,48

В 5,83±1,76 9,17+2,13 60,93+8,68 7,1213,03

У поросят-эйтоников и ваготоников второй опытной группы, судя по реакции на адреналиновую пробу, уровень адреналина снижается с 9,66±0,46 нг/мин. до 8,32±2,06 нг/мин.; норадреналина - с 14,34±2,02 нг/мин. до 12,14±3,43 нг/мин.; ДОФА с 12,29±1,26 нг/мин. до 10,29±3,21 нг/мин., то есть на 13,9%, 15,4% и 16,3% соответственно, отмечается выраженное угнетение симпатоадреналовой системы. У поросят-ваготоников второй опытной группы в ответ на введение адреналина его уровень не изменялся, но и фоновый уровень был достаточно низким, всего 7,13±0,53 нг/мин.; тогда, как уровень

норадреналина снизился с 11,49*1,35 нг/мин. до 9,17*2,13 нг/мин., а ДОФА с 9,08*2,21 нг/мин. до 7,12±3,03 нг/мин., на 20,2% и 21,6% соответственно.

Таким образом, в ответ на адреналиновую пробу у поросят второй опытной группы, получавших корма с микотоксинами Т-2 и охратоксииом, отмечается парадоксальная реакция симпатоадрсналовой системы: по происходит повышения уровней катехоламинов и их предшественников, а отмечается, напротив, их снижение. Это отображает истощение симпатоадрсналовой системы с полным выпадением компенсаторных решений в ее работе, направленных на сохранение энергии и более экономное ее расходование, поэтому адреналиновый стимул приводит не к стимуляции симпатоадрсналовой системы, а к ее торможению.

3.7. Функциональное состояние сердечно-сосудистой системы у подопытных поросят

Намц. оценивались и гемодинамические параметры, позволившие выявить различия в состоянии сердечно-сосудистой системы у поросят контрольной и опытных групп и особенностей вегетативной регуляции сердечного ритма. Так, в покое у поросят контрольной группы с симпатикотоническим вариантом исходного вегетативного тонуса показатели УОК (5,210,47 мл) и МОК (0,733±0,03 л) были достоверно выше, чем у животных в состоянии эйтонии (4,6±0,22 мл и 0,529±0,07 л соответственно) и ваготонии (4,4-1:0,24 мл и 0,468*0,06 л соответственно).

Аналогичные различия наблюдаются и в отношении УИ и СИ, которые у симпаготоников наиболее высокие и составляют 13,3*0,68 мл/м2 и 2,2-1.0,01 л/мин./м2 по сравнению с группой эйтоников (соответственно 12,3*0,57 мл/м2 и 1,8±0,03 л/мин./м2) и ваготоников (соответственно 11,1*0,13 мл/мя и 1,6*0,09 л/мин./м2). При этом у поросят-симпатотоников УПСС оказался ниже, что указывает на физиологическую сбалансированность между периферическим сопротивлением сосудов и МОК, находящихся в обратно пропорциональной связи. Относительное снижение УОК, МОК и СИ у эйтоников и ваготоников п контрольной группе, сопровождающееся более высокими значениями УПСС может свидетельствовать о преобладающей активности сосудистою компонента в регуляции артериального давления. У поросят первой опытной группы с симпатикотоническим вариантом исходного вегетативного тонуса показатели УОК и МОК (соответственно 5,1*0,55 мл и 0,702' 0,08 л) были выше, чем у особей в состоянии эйтонии (соответственно 4,5+0,23 мл и 0,521±0,03л) и ваготонии (соответственно 4,3±0,25 мл; и 0,458*0,07 л).

У поросят-симпатотоников первой опытной группы, как и в контрольной группе, МОК, УИ и СИ (соответственно 0,702±0,08л; 13,4*0,74 мл/ м2 и 2,1*0,03 л/мин./м2) были выше, чем у эйтоников (соответственно 0,521*0,03; 12,4*0,52 мл/ м2 и 1,7±0,05 л/мин У м2) и наготоников этой же группы, и относительно ниже таковых в контрольной группе в соответствии с исходным вегетативным тонусом.

Несмотря на более высокий исходный вегетативный тонус и показатели вариабельности сердечного ритма интегральные показатели производитель -

ности сердечно-сосудистой системы у поросят первой опытной группы оказались ниже, чем у поросят контрольной группы. Это связано с увеличением УПСС, уровень которого оказался выше, чем в контроле, и составил у симпатотоников 3018,6±392,4; у эйтоников - 3538,0±412,1 и у ваготоников - 3641,1 ±352,9 у .е.

Снижение УОК, МОК и СИ в первой опытной группе поросят, сопровождающееся более высокими значениями УПСС, свидетельствует о более высокой активности сосудистого компонента в регуляции АД, что увеличивает нагрузку на сердце.

У поросят второй опытной группы с симпатикотоническим вариантом исходного вегетативного тонуса показатели УОК и МОК (соответственно 5,6±0,65 мл и 0,873±0,12 л) выше, чем в состоянии эйтонии (соответственно 5,0±0,65 мл и 0,680±0,04 л). УИ и СИ у поросят второй опытной группы также оказались самыми высокими и составили у симпатотоников соответственно 13,9±0,99 мл/м2 и 2,5±0,04 л/мин/м2, у эйтоников этой же группы эти показатели оказались равными 13,1±0,68 мл/м2 и 1,9±0,04 л/мин./м2.

У поросят второй опытной группы производительные показатели сердечно-сосудистой системы оказались выше, чем в предыдущих двух группах, что соответствует самым высоким показателям катехоламинов у поросят этой группы, высокому исходному вегетативному тонусу симпатоадреналовой системы и высокой вариабельности сердечного ритма. Необходимо отметить, что более высокие МОК, СИ у симпатотоников второй опытной группы связаны также с самой высокой ЧСС. Такое увеличение производительности ССС более энергозатратно, чем за счет увеличения УОК, что в дальнейшем, если не устранить причину (микотоксикоз), неминуемо должно сказаться срывом компенсаторных механизмов и снижением производительности ССС.

3.8. Рост и развитие подопытных поросят

Нами изучено действие микотоксинов на рост и развитие поросят до трехмесячного возраста. Поросята контрольной группы были рождены от свиноматок, получавших комбикорма с содержанием микотоксинов на уровне фоновых значений, и в дальнейшем сами получали эти же корма. Поросята первой группы были рождены от свиноматок, рацион которых содержал Т-2 токсин в количествах 0,1-0,2 мг/кг, и в дальнейшем сами получали эти же корма. Поросята второй группы были рождены от свиноматок, рацион которых содержал Т-2 токсин и охратоксин в количествах 0,1-0,2 и 0,02-0,1 мг/кг комбикорма, и в дальнейшем сами получали эти же корма.

Различий по крупноплодности между сравниваемыми группами установлено не было: живая масса при рождении у поросят из разных групп была примерно одинаковой - 1,06-1,07 кг.

В возрасте 21 день у молодняка, полученного от свиноматок контрольной группы, установлены достоверно более высокие значения по всем показателям, характеризующим рост и развитие. Они превосходили аналогов из первой и второй групп соответственно: по живой массе на 0,39 кг (Р<0,01) и

0,74 кг (Р<0,001); среднесуточному приросту - на 17 г (Р<0,01) и 31 г (Р<0,001); абсолютному приросту - на 0,37 кг (Р<0,01) и 0,67 кг (Р<0,001); относительному приросту - на 34 % (Р<0,01) и 64 % (Р<0,001) соответственно.

В двухмесячном возрасте поросята контрольной группы имели живую массу 18,3 кг, что было больше на 1,1 кг (Р<0,01) по сравнению с молодняком первой группы. Животные второй группы уступали им 2,4 кг (Р<0,001). Поросята второй опытной группы также характеризовались наименьшими среднесуточными и абсолютными приростами живой массы. Молодняк первой опытной группы по этим показателям занимал промежуточное положение. Существенных различий между группами в двухмесячном возрасте по относительной скорости роста установлено не было. Следует отметить, что поросята первой и второй групп отставали от аналогов из контрольной группы на 6,0 %, хотя разница носила статистически недостоверный характер.

При анализе данных по показателям, характеризующим рост и развитие поросят сравниваемых групп в трехмесячном возрасте, установлено, что поросята контрольной группы превосходили аналогов из первой и второй опытных групп по живой массе на 3,7 кг (Р<0,01) и 6,8 кг (Р<0,001); среднесуточному приросту - на 90 г (Р<0,01) и 148 г (Р<0,001); абсолютному приросту - на 2,7 кг (Р<0,01) и 4,4 кг (Р<0,001); относительному приросту - на 11,4 % (Р<0,01) и 17,9 % (Р<0,001) соответственно.

4. ВЫВОДЫ

1. При исследовании 1918 проб кормов и кормового сырья в ГУ «Рос-тоблветлаборатория» в 10,7% обнаружили микотоксины. В среднем за три года

наличие одного токсина зарегистрировано в 36,5%, двух - в 39,0%, трех - в

14,7% и четырех токсинов - в 9,8% проб кормов и кормового сырья. В 37% проб кормов и кормового сырья из всех выделений монотоксинов обнаруживался Т-2 токсин; в 8% - сочетание Т-2 и охратоксина.

2. У свиноматок, получавших корм с содержанием Т-2 токсина и охратоксина в количествах 0,1-0,2 и 0,02-0,1 мг/кг комбикорма соответственно перед случкой, во время беременности и лактации установлено с высокой степенью достоверности снижение количества эритроцитов (до 2,8±0,22*1012/л), гемоглобина (до 65,0±3,7 г/л), низкий гематокрит (0,25±0,02); повышение СОЭ (до 11,2±0,7 мм/ч.); лейкоцитоз (22,4±4,42x10 /л) с изменением лейкограммы в сторону эозинофилии и палочкоядерного нейтрофильного лейкоцитоза; гипо-альбуминемия (18,0±0,9г/л) и гипоглобулинемия (26,9±2,2 г/л) на фоне снижения содержания общего белка (45,0±2,4 г/л); гипогликемия (до 3,11±0,13 ммоль/л); повышение уровней аланинаминотрансферазы (175,0±12,7 Е/л), щелочной фосфатазы (215,0±14,7 Е/л), лактатдегидрогеназы (354,6± 18,4 Е/л) и мочевины (16,42±1,45 ммоль/л).

3. К трехмесячному возрасту у поросят, полученных от свиноматок с нагрузкой микотоксином Т-2 в концентрации 0,1-0,2 мг/кг комбикорма, на фоне поступления микотоксинов в организм с кормом отмечается эритропения до 4,32+0,95х1012/л и лейкопения - до 11,29±1,18х109/л; снижение уровня ионизи-

рованного калия - до 5,32±0,11 ммоль/л; снижение уровня общего белка - до 53,74±2,82 г/л; повышение СОЭ - до 8,34+2,13 мм/ч., уровня альбуминов - до 23,95+2,71 г/л, мочевины - до 7,43±1,18 ммоль/л, глюкозы - до 4,89±0,13 ммоль/л, активности аланинаминотрансферазы - до 102,42±11,09 Е/л, щелочной фосфатазы - до 93,54±12,77 Е/л, лактатдегидрогеназы - до 188,0113,27 Е/л.

4. У поросят, полученных от свиноматок с нагрузкой микотоксином Т-2 и охратоксином в концентрации 0,1-0,2 и 0,02-0,1 мг/кг комбикорма соответственно, на фоне поступления микотоксинов в организм к трехмесячному возрасту отмечается эритропения до 3,2710,81х1012/л и лейкопения до 9,15±3,3х109/л; снижение уровня ионизированного калия до 3,87±0,22 ммоль/л, общего белка до 48,65±4,97 г/л; повышение СОЭ до 13,22±3,44 мм/ч, уровня альбуминов - до 17,8813,04 г/л, мочевины - до 10,5211,68 ммоль/л, глюкозы -до 8,7310,28 ммоль/л, активности аланинаминотрансферазы - до 123,81111,58 Е/л, щелочной фосфатазы - до 166,9+11,76 Е/л, лактатдегидрогеназы - до 193,34+3,47 Е/л.

5. К трехмесячному возрасту у поросят, полученных от свиноматок с нагрузкой микотоксином Т-2 и охратоксином, на фоне поступления микотоксинов в организм, содержание в крови В-лимфоцитов было ниже в 2,0 раза, Т-лимфоцитов в 5,8 раза, в том числе Т-хелперов - в 6,1 и Т-супрессоров - в 4,8 раза; содержание иммуноглобулина А было ниже - в 1,7 и иммуноглобулина М - в 1,4 раза в сравнении с показателями поросят контрольной группы.

6. На фоне токсикоза микотоксином Т-2 и охратоксином у двухмесячных поросят с различным исходным вегетативным тонусом в сердечнососудистой системе экскреция адреналина у симпатотоников и эйтоников повысилась в 1,2 раза, у ваготоников снизилась в 1,2 раза; норадреналина - у симпатотоников и эйтоников снизилась в 1,2 раза, у ваготоников - в 1,4 раза; экскреция дофамина снизилась у симпатотоников в 1,3 раза, эйтоников и ваготоников - в 1,5 и в 1,8 раза соответственно; уровень ДОФА у симпатотоников повысился в 1,2 раза, снизился у эйтоников и ваготоников в 1,2 раза и в 2,5 раза соответственно; соотношение НА/А снизилось у симпатотоников в 1,6 раза, у эйтоников - в 1,4 раза, у ваготоников осталось на уровне с контролем.

7. У двухмесячных поросят, получавших корма без микотоксинов, симпатоадреналовая система реагирует на адреналиновую пробу адекватным повышением уровня катехоламинов и их предшественников; у поросят, получавших корма с содержанием микотоксина Т-2 и охратоксина, отмечается парадоксальная реакция симпатоадреналовой системы, проявляющаяся снижением уровней катехоламинов и их предшественников в ответ на адреналиновую пробу.

8. На фоне токсикоза микотоксином Т-2 и охратоксином у двухмесячных поросят более высокие производительные показатели сердечнососудистой системы обеспечиваются высокой частотой сердечных сокращений, что более энергозатратно, чем за счет увеличения ударного объема крови. Высокая энергетическая цена увеличения минутного объема крови в дальнейшем, если не устранить микотоксикоз, проявляется снижением производительности

сердечно-сосудистой системы.

9. В трехмесячном возрасте поросята, получавшие корм с микотокси-ном Т-2 и с двумя микотоксинами Т-2 и охратоксином, отставали от аналогов, получавших корм без микотоксинов, по живой массе на 3,7 кг и 6,8 кг; среднесуточному приросту на 90 г и 148 г; абсолютному приросту на 2,7 кг и 4,4 кг; относительному приросту - на 11,4 % и 17,9 % соответственно.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендовать для свиноматок в период подготовки к случке, беременности и лактации и для выращивания поросят 1-3 месячного возраста использование кормов, не содержащих микотоксины Т-2 и охратоксин.

2. Рекомендовать определение уровня катехоламинов и их предшественников как скрининговый метод для выявления нагрузки микотоксинами на донозологической стадии развития микотоксикоза.

3. Результаты исследований могут быть использованы как справочный материал при составлении учебных пособий и руководств по физиологии и патологии домашних животных для студентов по специальности «Ветеринария» и «Зоотехния».

Список опубликованных работ

1. Бутенков, А.И. Вариабельность сердечного ритма у поросят при некоторых патологических состояниях /А.И.Бутенков, O.A. Миронова// Журнал Ветеринария и кормление «Веткорм».-М.-№2.-2009г,- С.32-33.

2. Коваленко, A.B. Воспроизводительные качества свиноматок в условиях кормового стресса /А.В.Коваленко, O.A. Миронова// Журнал «Зоотехния».-М.-№3.-2009.-С.29-30.

3. Карташов, С.Н. Использование реографии в исследовании системной гемодинамики и определении артериального давления у животных /С.Н. Карташов, A.M. Ермаков, O.A. Миронова, Е.В. Карташова, О.В. Клименко, М.С. Кривко, А.И. Бутенков, А.В.Шафикова// Рекомендации ГНУ «СКЗНИВИ».- г. Новочеркасск.- 2005.- 22с.

4. Карташов, С.Н. Определение параметров системной гемодинамики, диагностика критических состояний /С.Н. Карташов, В.Н. Василенко, O.A. Миронова, А.М. Ермаков, Е.В. Карташова, Л.П. Славинская, М.С. Кривко, А.И. Бутенков // Рекомендации ГНУ «СКЗНИВИ».- г.Новочеркасск.- 2005 - 22с.

5. Ермаков, A.M. Статус вегетативной нервной системы у щенков с разной степенью гипотрофии /А.М. Ермаков, A.A. Миронова, O.A. Миронова// Всероссийская научно-практическая конференция 15-16 марта 2007 г. «Актуальные проблемы функциональной морфофункциональной диагностики болезней животных».- г. Новочеркасск.- С.25-30.

6. Ермаков, A.M. Оценка адаптационных резервов организма щенков с гипотрофией разной степени /A.M. Ермаков, O.A. Миронова, Д.А. Андреев, С.Н. Карташов// Всероссийская научно-практическая конференция 15-16 марта

2007г. «Актуальные проблемы функциональной морфофункциональной диагностики болезней животных»,- г. Новочеркасск,- С.30-37.

7. Бутснков, А.И. Функциональное состояние сердечно-сосудистой системы у поросят 1,5 мес. с различным типом кормления /А.И. Бутенков, O.A. Миронова// Материалы 8 Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития».- г. Саратов.- 2008,- С. 294-296.

8. Бутенков, А.И. Результаты изучения состояния ССС и вегетативного статуса у поросят с гипотрофией разной степени тяжести /А.И. Бутенков, O.A. Миронова// Материалы 8 Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития»,- г. Саратов,- 2008,- С. 294-296.

9. Коваленко, H.A. Естественная резистентность свиней, районированных в Ростовской области /H.A. Коваленко, O.A. Миронова// Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития патологии, морфологии и онкологии животных».- Новочеркасск,- 2008.- С. 164-167.

10. Коваленко, A.B. Состояние отрасли свиноводства в Ростовской области /A.B. Коваленко, H.A. Коваленко, O.A. Миронова // «Инновационные технологии в свиноводстве».-Международная научно-практическая конференция (пос. Криница, Геленджикский район, Краснодарский край, 15-19 сентября 2008г.).-С. 156-159.

Миронова Ольга Анатольевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИММУННОЙ И СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМ У СВИНЕЙ ПРИ МИКОТОКСИКОЗАХ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 28.04.09 Печать оперативная Объем 1 усл печ.лист. Заказ № 2736/1 Тираж 100 экз. Издательско-полиграфическое предприятие ООО "МП Книга", г.Ростов-на-Дону, Таганрогское шоссе, 106

Актуальность темы. Развитие животноводства, повышение продуктивности скота и птицы тесно связаны с санитарным качеством кормов, в большой мере зависящим от загрязнения их продуктами жизнедеятельности микроскопических грибов — микотоксинами (Н.А.Спесивцева, 1975; А. Иванов, 2008; Э; Ле Бра, 2008).

Микотоксины являются природными компонентами кормов и пищевых продуктов, в настоящее время описано более 400 микотоксинов. Они образуются примерно 350 видами грибов, которые имеют до 10000 штаммов. Доступные методы анализа разработаны примерно только для десятой части микотоксинов (Т. Хамидуллин, 2002; Д. О' Сулливан, 2005).

Токсигенные плесневые грибы и их метаболиты, поражая корма, вызывают у животных острые и хронические комплексные отравления: Это сопровождается уменьшением продуктивности, снижением санитарного качества продукции, снижением естественной резистентности и иммунного статуса и, как следствие, повышением: заболеваемости инфекционной и незаразной этиологии (В.А. Антипов с соавт.,2007). Микотоксины; через пищевую цепь могут попасть и к человеку, у которого действуют подавляюще на иммунитет и даже могут вызвать опухолевые заболевания (Э. Конноли, Д. О' Сулливан, 2005; А.К. Чулков с соавт., 2007).

Россия является зоной- рискованного земледелия и вероятность поражения кормов плесневыми грибами очень высока (А.К. Чулков с соавт., 2007). Для, южных регионов , страны эта проблема наиболее актуальна, что связано с природно-климатическими особенностями и интенсивным ведением животноводства и кормопроизводства (В.А. Антипов с соавт., 2007).

Микотоксины отрицательно воздействуют на все системы организма животных. Наиболее повреждаемыми системами являются нервная, сердечно-сосудистая, иммунная, пищеварительная, выделительная, репродуктивная, кожа. Особенно сильно при микотоксикозах страдают сердечно-сосудистая и иммунная системы. На фоне поражения иммунной системы возрастает вероятность заболевания животных вирусными или бактериальными инфекциями, и резко снижается эффективность проведения специфической профилактики (Э. Конноли, Д. О' Сулливан, 2005; Ф. Неера, 2006).

Чаще всего в рационе животных одновременно встречается несколько микотоксинов, которые в комбинации оказывают еще более негативный эффект на здоровье животных, чем по отдельности. Сегодня большинство исследователей признают концепцию синергизма в действии микотоксинов на организм, поэтому считают, что безопасных уровней микотоксинов не существует (Д. О1 Сулливан, 2005; Г.П. Кононенко с соавт., 2005; А.К. Чулков с соавт., 2007).

В этой связи представляет интерес оценка изменений в сердечнососудистой и иммунной системах свиней под влиянием микотоксинов. В доступной нам литературе отсутствуют публикации по влиянию микокоток-синов на статистические характеристики сердечного ритма и состояние неспецифических адаптационных механизмов организма животных, что и определило цель нашего исследования.

Цель работы - изучить морфофункциональные особенности иммунной и сердечно-сосудистой систем у свиней при микотоксикозах на донозологи-ческой стадии.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи. Изучить при микотоксикозах, вызванных токсинами Т-2 и охратоксином в количествах ниже ПДК:

- морфологические и биохимические показатели крови у свиноматок перед случкой, во время беременности и лактации;

- морфологические и биохимические показатели крови у полученных от них поросят до трехмесячного возраста;

- особенности клеточного и гуморального звеньев иммунитета у поросят;

- функциональное состояние симпато-адреналовой и сердечно-сосудистой систем у поросят с различным исходным вегетативным тонусом и реакции на адреналиновую пробу;

- показатели роста и развития поросят при микотоксикозах;

- взаимосвязь между изменениями морфологических и биохимических показателей крови у свиноматок при микотоксикозах и морфофункциональными изменениями у полученных от них поросят.

Научная новизна. Впервые изучены морфологические и биохимические показатели крови супоросных свиноматок и полученных от них поросят на фоне микотоксикоза, вызванного монотоксином Т2 и сочетанием двух токсинов Т2 и охратоксина в количествах ниже ПДК. Выявлены периоды напряжения и истощения симпато-адреналовой системы по уровню экскреции А, НА, ДА и ДОФА флюорометрическим методом в порционной и суточной моче поросят с различной нагрузкой микотоксинами. Показано, что длительное кормление свиней кормами, содержащими микотоксины вызывает неблагоприятные изменения клеточного и гуморального иммунитета, состояния симпато-адреналовой и сердечно-сосудистой систем, сопровождается отставанием по относительному приросту живой массы.

Научно-практическая значимость работы. Изменения морфологических и биохимических показателей крови, уровня катехоламинов при микотоксикозах, установленные в процессе исследований, используются в диагностической практике в качестве нормативных данных при оценке функционального состояния организма свиней на фоне нагрузки организма микотоксинами корма.

Материалы работы необходимы при решении задач, связанных с разработкой приемов эффективной профилактики и лечения свиней при микотоксикозах. Результаты исследований могут быть использованы как справочный материал при составлении учебных пособий и руководств по физиологии и патологии домашних животных для студентов по специальности «Ветеринария» и «Зоотехния».

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях ГНУ Северо

Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт в 2007-2008 гг. и на трех Всероссийских научных конференциях.

Публикации. Материалы диссертационной работы опубликованы в 10 научных работах, из них 2 - в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, двух методических рекомендациях.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа изложена на 163 страницах компьютерного текста, содержит 36 таблиц, 33 рисунка. Библиографический список включает 209 источников литературы, в том числе 129 зарубежных.

4. ВЫВОДЫ

1. При исследовании 1918 проб кормов и кормового сырья в ГУ «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» в 10,7% обнаружили ми-котоксины. В среднем за три года наличие одного токсина зарегистрировано в 36,5%, двух - в 39,0%, трех - в 14,7% и четырех токсинов - в 9,8% проб кормов и кормового сырья. В 37%о проб кормов и кормового сырья из всех выделений монотоксинов обнаруживался Т-2 токсин; в 8% - сочетание Т-2 и охратоксина.

2. У свиноматок, получавших корм с содержанием Т-2 токсина и охратоксина в количествах 0,1-0,2 и 0,02-0,1 мг/кг комбикорма соответственно перед случкой, во время беременности и лактации установлено с высокой степенью достоверности снижение количества эритроцитов (до

12

2,8±0,22х10 /л), гемоглобина (до 65,0±3,7 г/л), низкий гематокрит (0,25±0,02); повышение СОЭ до 11,2±0,7 мм/ч; лейкоцитоз (22,4±4,42х109/л) с изменением лейкограммы в сторону эозинофилии и палочкоядерного ней-трофилеза; гипоальбуминемия (18,0±0,9г/л) и гипоглобулинемия (26,9±2,2 г/л) на фоне снижения содержания общего белка (45,0±2,4 г/л); гипогликемия до 3,11±0,13 ммоль/л; повышение уровней аланинаминотрансферазы (175,0±12,7 Е/л), щелочной фосфатазы (215,0±14,7 Е/л), лактатдегидрогена-зы (354,6±18,4 Е/л) и мочевины (16,42±1,45 ммоль/л).

3. К трехмесячному возрасту у поросят, полученных от свиноматок с нагрузкой микотоксином Т-2 в концентрации 0,1-0,2 мг/кг комбикорма, на фоне поступления микотоксинов в организм с кормом отмечается

10 О эритропения до 4,32±0,95хЮ /л и лейкопения - до 11,29±1,18x10 /л; снижение уровня ионизированного калия - до 5,32±0,11 ммоль/л; снижение уровня общего белка - до 53,74±2,82 г/л; повышение СОЭ - до 8,34±2,13 мм/ч, уровня альбуминов - до 23,95±2,71 г/л, мочевины — до 7,43±1,18 ммоль/л, глюкозы — до 4,89±0,13 ммоль/л, активности аланинаминотрансферазы — до 102,42±11,09 Е/л, щелочной фосфатазы — до 93,54±12,77 Е/л, лактатдегидро-геназы — до 188,01±3,27 Е/л.

4. У поросят, полученных от свиноматок с нагрузкой микотокси-ном Т-2 и охратоксином в концентрации 0,1 -0,2 и 0,02-0,1 мг/кг комбикорма соответственно, на фоне поступления микотоксинов в организм к трехмесячному возрасту отмечается эритропения до 3,27±0,81 х1012/л и лейкопения до 9,15±3,33х109г/л ^10%; снижение уровня ионизированного калия до 3,87±0,22 ммоль/л, общего белка до 48,65±4,97 г/л; повышение СОЭ до 13,22±3,44 мм/ч, уровня альбуминов - до 17,88±3,04 г/л, мочевины - до 10,52+1,68 ммоль/л, глюкозы - до 8,73±0,28 ммоль/л, активности аланинаминотрансферазы - до 123,81±11,58 Е/л, щелочной фосфатазы - до 166,9±11,76 Е/л, лактатдегидрогеназы - до 193,34±3,47 Е/л.

5. К трехмесячному возрасту у поросят, полученных от свиноматок с нагрузкой микотоксином Т-2 и охратоксином, на фоне поступления микотоксинов в организм, содержание в крови В-лимфоцитов было ниже в 2,0 раза, Т-лимфоцитов в 5,8 раза, в том числе Т-хелперов — в 6,1 и Т-супрессоров — в 4,8 раза; содержание иммуноглобулина А было ниже - в 1,7 и иммуноглобулина М - в 1,4 раза в сравнении с показателями поросят контрольной группы.

6. На фоне токсикоза микотоксином Т-2 и охратоксином у двухмесячных поросят с различным исходным вегетативным тонусом в сердечнососудистой системе экскреция адреналина у симпатотоников и эйтоников повысилась в 1,2 раза, у ваготоников снизилась в 1,2 раза; норадреналина - у симпатотоников и эйтоников снизилась в 1,2 раза, у ваготоников — в 1,4 раза; экскреция дофамина снизилась у симпатотоников в 1,3 раза, эйтоников и ваготоников — в 1,5 и в 1,8 раза соответственно; уровень ДОФА у симпато тоников повысился в 1,2 раза, снизился у эйтоников и ваготоников в 1,2 раза и в 2,5 раза соответственно; соотношение НА/А снизилось у симпатотоников в 1,6 раза, у эйтоников - в 1,4 раза, у ваготоников осталось на уровне с контролем.

7. У двухмесячных поросят, получавших корма без микотоксинов, симпато-адреналовая система реагирует на адреналиновую пробу адекватным повышением уровня катехоламинов и их предшественников; у поросят, получавших корма с содержанием микотоксина Т-2 и охратоксина, отмечается парадоксальная реакция симпатоадреналовой системы, проявляющаяся снижением уровней катехоламинов и их предшественников в ответ на адреналиновую пробу.

8. На фоне токсикоза микотоксином Т-2 и охратоксином у двухмесячных поросят более высокие производительные показатели сердечнососудистой системы обеспечиваются высокой частотой сердечных сокращений, что более энергозатратно, чем за счет увеличения удельного объема крови. Высокая энергетическая цена увеличения минутного объема крови в дальнейшем, если не устранить микотоксикоз, проявляется снижением производительности сердечно-сосудистой системы.

9. В трехмесячном возрасте поросята, получавшие корм с микотоксином Т-2 и с двумя микотоксинами Т-2 и охратоксином отставали от аналогов, получавших корм без микотоксинов, по живой массе на 3,7 кг и 6,8 кг; среднесуточному приросту на 90 г и 148 г; абсолютному приросту на 2,7 кг и 4,4 кг; относительному приросту - на 11,4 % и 17,9 % соответственно.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендовать для свиноматок в период подготовки к случке, беременности и лактации и для выращивания поросят 1-3 месячного возраста использование кормов, не содержащих микотоксины Т-2 и охратоксин.

2. Рекомендовать определение уровня катехоламинов и их предшественников как скрининговый метод для выявления нагрузки микотоксинами на до нозологической стадии развития микотоксикоза.

3. Результаты исследований могут быть использованы как справочный материал при составлении учебных пособий и руководств по физиологии и патологии домашних животных для студентов по специальности «Ветеринария» и «Зоотехния».

143

1.10. Заключение

Микотоксины являются природными компонентами кормов и в зависимости от природно-климатических условий, соблюдения культуры выращивания зерновых культур, их уборки, хранения, транспортировки, микотоксикологического контроля могут накапливаться в кормах в разных количествах, попадать при их поедании в организм животных (Т. Хамидуллин, 2002; Д. О' Сулливан, 2005).

Токсигенные плесневые грибы и их метаболиты, поражая корма, вызывают у животных острые и хронические комплексные отравления. Это сопровождается уменьшением продуктивности, снижением санитарного качества продукции, снижением естественной резистентности и иммунного статуса и, как следствие, ростом заболеваемости животных (В.А. Антипов с соавт., 2007). Аккумулируясь в органах и тканях животных, молоке, яйцах, микотоксины через пищевую цепь могут попасть и к человеку, у которого действуют подавляюще на иммунитет и даже могут вызвать опухолевые заболевания (Э. Конноли, Д. О' Сулливан, 2005; А.К. Чулков с соавт., 2007).

Микотоксины в низких концентрациях вызывают хронические формы отравления, характеризующиеся в основном иммуносупрессией, снижением темпов роста, повышением предрасположенности к действию других агентов, в том числе инфекционных. Особенно сильно при микотоксикозах страдают сердечно-сосудистая и иммунная системы. На фоне поражения иммунной системы возрастает вероятность заболевания животных вирусными или бактериальными инфекциями, и резко снижается эффективность проведения специфической профилактики (Э. Конноли, Д. О' Сулливан, 2005; Ф. Неера, 2006).

Вызванная микотоксинами иммунодепрессия затрагивает как природный, так и адаптационный иммунитет: ,

• снижение активности Т- и В- лимфоцитов;

• снижение активности №С клеток;

• подавление синтеза иммуноглобулинов и антител;

• снижение активности комплемента и интерферона;

• нарушение функций макрофагов.

Чувствительность иммунной системы к вызываемой микотоксинами иммунодепрессии возникает из-за уязвимости постоянно пролиферирующих и дифференцирующихся клеток, принимающих участие в иммунитете.

Чаще всего в рационе животных одновременно встречается несколько микотоксинов, которые в комбинации оказывают еще более негативный эффект на здоровье животных, чем по отдельности. Сегодня большинство исследователей признают концепцию синергизма в действии микотоксинов на организм, поэтому считают, что безопасных уровней микотоксинов не существует (Д. О' Сулливан, 2005; Г.П. Кононенко с соавт., 2005; А.К. Чулков с соавт., 2007).

С точки зрения донозологической диагностики при микотоксикозах следует различать две стадии. Первая стадия с преобладанием неспецифических изменений над специфическими, когда гомеостаз еще сохранен и на первый план выступает повышенная активность регуляторных механизмов, благодаря чему и сохраняется неустойчивое равновесие со средой. Вторая стадия протекает с преобладанием специфических изменений над неспецифическими, т.е. на первый план выступают конкретные проявления болезни, определенные симптомы и синдромы (P.M. Баевский, 2000). .

Переход от нормы к патологии, от здоровья к болезни происходит постепенно по мере поступления микотоксинов в организм животных. Мико-токсины в корме, особенно часто встречающиеся охратоксин, Т-2 токсин вызывают малабсорбцию в кишечнике, что приводит к пониженному всасыванию и, как следствие, пониженным концентрациям витаминов Е, С и кароти-ноидов в тканях. Микотоксины способствуют накоплению свободных радикалов в кишечнике, что вызывает истощение резервов антиоксидантов, окси-дативный процесс, апоптоз энтероцитов, внося дополнительный вклад в развитие малабсорбции (О.Н. Сафронова с соавт., 1989; В.А. Грехнев, 1993).

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследования проводились в 2005-2008 гг. в лабораториях функциональной диагностики болезней сельскохозяйственных животных, микологии и микотоксикологии государственного научного учреждения Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «СКЗНИВИ» Россельхозакадемии), экспериментальной базе института, СПК-колхозе «Советинский» Неклиновского района Ростовской области, ГУРО «Ростоблветлаборатория».

Объектом изучения были чистопородные свиноматки и поросята крупной белой породы в возрасте до 3-х месяцев. По принципу аналогов (Н.С. Аксёнов, 1996) было сформировано 3 группы супоросных свиноматок по 15 голов в каждой. Во время супоросности содержание животных было групповым, по 10-15 голов в станке, кормление осуществлялось готовым комбикормом производства ЗАО «Провими-Азов» СК 15-71 — супоросные свиноматки, СК 14-71 - л актирующие свиноматки, СК 11-01 - поросята группы 0-2, поросята группы 2-4 и выше СК 13-01.

В период подготовки к случке (с восьмимесячного возраста), во время беременности и после опороса свиноматки с поросятами контрольной группы находились на рационах, содержащих микотоксины на уровне фоновых значений (Т-2 токсин ниже 0,05 мг/кг, охратоксин ниже 0,01 мг/кг комбикорма). Животные первой опытной группы (как свиноматки, так и поросята на протяжении всего опыта) получали рацион с содержанием Т-2 токсина 0,10,2 мг/кг - и животные второй опытной группы получали рацион с содержанием Т-2 токсина и охратоксина, в количествах 0,1-0,2 и 0,02-0,1 мг/кг комбикорма соответственно.

Для характеристики роста и развития поросят разных групп (по 20 голов в каждой) определяли живую массу, среднесуточный прирост живой массы, абсолютную и относительную скорость роста путем их взвешивания при рождении, в 21 день, при отъеме в 2 месяца и в трехмесячном возрасте.

Для определения контаминации кормов токсинообразующими микромицетами первичное выделение грибов из зерна и кормов осуществляли на сусло-агаре, видовую их идентификацию проводили с использованием традиционных методов. Параллельно пробы исследовали на содержание в них микотоксинов методом конкурентного иммуноферментного анализа.

Морфологические и биохимические исследования крови проводились в лаборатории функциональной диагностики болезней сельскохозяйственных животных ГНУ «СКЗНИВИ» Россельхозакадемии и ГУРО «Ростоблветлаборатория». Кровь для биохимического и морфологического исследований брали из ушных и хвостовых вен.

Морфологический анализ крови включал: определение числа эритроцитов и лейкоцитов в сетке камеры Горяева; определение концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом, гематокрита.по методике, предложенной И. И. Архангельским и Л. П. Сошенко (1993), СОЭ, выведение лейкограммы по общепринятым методикам.

Биохимический анализ крови включал определение следующих показателей: активность щелочной фосфатазы по ферментативному гидролизу п-нитрофенилфосфата, аланинаминотрансферазы по методу Райтмана-Френкеля, концентрации глюкозы - орто-толуидиновым методом, белка - с помощью биуретовой реакции, билирубина - по методу Ендрашика-Грофа, альбумина - по реакции с бромкрезоловым зеленым, креатинина -методом Яффе, мочевины - по реакции с, диацетилмонооксимом в сильно кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа; определение фибриногена проводили гравиметрическим методом по Рутбергу (В.С. Камышников, 2000); сиаловых кислот - по методу Гесса, общей активности лактатдегидрогеназы, основанном на: оптическом тесте Варбурга (оптическом эффекте, связанном с превращением НАД4^ в С-реактивного белка - методом реакции преципитации в капилляре.

Уровень электролитов (ионов натрия, калия, хлора) определяли на ионометре И-500 с использованием ионоселективных электродов.

Иммунологические исследования. При иммунологическом исследовании был использован комплекс следующих методов: реакция Манчини — для определения концентрации сывороточных иммуноглобулинов, определение количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций методами розеткообразо-вания — Е-РОК. Тимусзависимые Т-лимфоциты имеют рецепторы для эритроцитов барана, которые выступают специфическим маркером для их распознавания (Е-РОК: Erythrocyte — розеткообразующие клетки). Выявляли 2 субпопуляции: теофиллинчувствительные Т-лимфоциты (Т-супрессоры), утратившие способность к розеткообразованию под влиянием обработки теофиллином, и теофиллинустойчивые Т-клетки (Т-хелперы) лимфоциты, такую способность сохранившие.

Функциональное состояние симпато-адреналовой системы оценивали по уровню экскреции А, НА, ДА и ДОФА флюорометрическим методом в порционной и суточной моче на приборе БИАН-130 (М-800). Сбор мочи проводился на каждом этапе исследования, до и после завершения тестирующей функциональной пробы.

Определение параметров системной гемодинамики. Для снятия реокардиограммы по Кубичеку необходимо наложить четыре электрода. Два из этих электродов активные, они создают высокочастотный ток низкого напряжения. Первый накладывается на голову между ушами, второй на конечность в области бедра, точное положение этого электрода не имеет значения. Вторая пара электродов - потенциальные, они и регистрируют изменение сопротивления тела. Первый электрод кольцевой, его накладывают на среднюю часть шеи, второй, пластинчатый, накладывают слева от мечевидного отростка.

Регистрация реокардиограммы осуществлялась автоматически с помощью компьютерного комплекса — реографа-полианализатора для комплексного исследования параметров кровообращения РГПА 6/12 «РЕАН

ПОЛИ», программного обеспечения - версия 2, профессиональная для «РЕАН-ПОЛИ», и компьютера. На данном реографе при проведении исследования одновременно с реограммой регистрируется электрокардиограмма и фонокардиограмма, что необходимо для определения фаз сердечного цикла.

Измерение амплитуд и временных интервалов осуществляется от начальной точки и нулевой линии реограммы, Программное обеспечение реографа позволяет автоматически определять изолинию, начало реограммы, амплитуду и продолжительность реограф и ческой кривой. Расчеты около 40 показателей программа проводит автоматически для каждого кардиологического цикла.

На стандартной реограмме выделяют систолическую волну, максимум амплитуды которой обозначен маркером «Б», инцизуру -второй минимум реограммы, обозначенный маркером «¡», диастолическую волну, второй максимум реограммы, обозначенный маркером «сЬ>. Начало реограммы также соответствует пересечению первой производной с изолинией с левой стороны, обозначено маркером «а», при этом начало следующей реограммы обозначено маркером «а'», на первой производной обозначен маркером «е» второй минимум, что соответствует окончанию периода изгнания.

120ямЛС тгсгрк* I

1ООмДе'см!

Обработка - ТПГР по Кцбичекв с СКГ - [Ефремова (Аре) Наталья (кавказская овч[ ВлсиЛМ ?0ПЭ, 13.24 4ВЦ Р1Г"ЗЕ

Данные Режь#и 8ий Обработки Настройки Инструменты Справке » £ оз » « а» и ^ х т» 4. в о а ^ а а. вв» ГПГУКЮ 1

20 ^«-/о» а ъ

•кс 142 »0 г *ЭКГ-1ЧСС уд ■ « г ,

УОК 21 мл 125 А ТПГР Кув,

ПИ 173 « «XI г 10О ,.скг*пи. | кпд 53.9 «Ц1СГ 2000 Й . (ТПГР Кув1 емок 2.99 М*»1 аш Г 050 *тп> КЛЕ •

МШПЖ 26.14 4M.pT СТ <000 I! 200 Ж ТПГР Куб, к

Готов

Э Л й й Н

Щовработи-. {>

Ойрайопш «10101 Фгаею 0001-01

Правильная расстановка маркеров.

На фонокардиограмме программа отмечает начало первого тона, обозначенного маркером «1», и начало второго тона, обозначенного маркером «II».

На кардиограмме программа отмечает маркером «С>» первый минимум, а маркером «Я» первый максимум, маркерами«0'» и «Я'», соответствующие места следующего кардиоцикла.

Оценка вегетативного тонуса. Для оценки состояния вегетативной нервной системы поросят применяется динамическая запись кардиоинтерва-лограмм при выполнении адреналиновой пробы (в/в введение 0,01 мг/кг адреналина гидрохлорида в виде 0,01% раствора). Поскольку синусовый сердечный узел является не только водителем ритма сердца, но и индикатором функционирования всех регулирующих систем организма, то такой интегральный параметр кардиоинтервалограммы, как ИН в покое, может служить показателем исходного вегетативного тонуса (ИВТ), а его динамика в ответ на изменение функционального состояния под действием адреналина отражает вегетативную реактивность.

Регистрация КИТ на адреналиновую пробу осуществляется следующим образом: в положении лежа на правом боку проводится 1-я запись КИТ (исходная); 2-я - регистрируется сразу же после введения адреналина; 3-я запись КИТ осуществляется через 10 минут после адреналиновой пробы. В каждом из трех массивов кардиоциклов рассчитывается ИН, т.е. соответственно ИН1, ИН2, ИНЗ.

Исходный вегетативный тонус (ИВТ) оценивается по ИН1, а также по ИНЗ. Последний может представить более точную информацию, т.к. при первой регистрации поросята, как правило, испытывают волнение.

Полученные экспериментальные данные были обработаны математическим методом вариационной статистики (В.В. Парин с соавт., 1968; О.И. Лиссова с соавт., 1977; О.И. Жаринов, 1992).

2.2. Распространение микотоксинов в кормах

В последнее десятилетие в стране резко обострилась проблема мико-токсикозов животных, представляющая собой чрезвычайно высокую экономическую и экологическую опасность. Для южных регионов страны, особенно Кубани и Ростовской области, эта проблема наиболее актуальна, что связано с природно-климатическими особенностями и интенсивным ведением животноводства и кормопроизводства. В значительной степени этому спо-собствовует и снижение культуры земледелия, в частности за счет сокращения использования фунгицидов. Вместе с тем, резкий рост цен на энергоносители ухудшает условия уборки урожая и его хранения, как на элеваторах, так и непосредственно в хозяйствах за счет несоблюдения оптимальных температурных режимов хранения и сушки зерна.

С целью определения распространения микотоксинов в условиях Ростовской области нами проведен анализ химико-токсикологических исследований ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория» кормов и кормового сырья, принадлежащих сельскохозяйственным предприятиям области.

В ГУРО «Ростоблветлаборатория» с 2006 по 2008 гг. исследовали 1918 проб комбикормов для свиней, поступивших из хозяйств и предприятий Ростовской области, из которых положительными по микотоксинам оказались 205 проб. Из них 75 проб были положительны по одному из микотоксинов, что составило 36,5%. В остальных случаях в кормах выделялось более одного микотоксина (табл. 1).

В течение последних трех лет токсигенные колонии микромицег в среднем выделялись из 10,6% проб комбикормов для свиней. Наибольшее количество токе и генных изолятов отмечено у Alternaría sp., Pénicillium sp., Aspergilus sp.

Зеаралонон

Афлатоксин ЕЦ

Т-2 токсин

Охрзтоксин

Па тулин

Стеригмацестии Фумониэин

Рис. 1. Частота выделений монотоксинов в пробах комбикормов для свиней

В кормах, доставленных из хозяйств Ростовской области, на протяжении всего периода исследований с 2006 по 2008 гг. четко прослеживается преобладание Т-2 токсина (37% всех выделений монотоксинов), охратоксина (20%), зеараленона (17%) и фумонизина В1 (7%), что, прежде всего, связано с благоприятными условиями для роста и токсинообразования грибов родов Pénicillium sp., Aspergilus sp., Mucor sp., Fusarium sp.

37%

При этом установлено содержание одного токсина в 36,5% всех проб, сочетание двух токсинов в 39% случаев, трех — 14,7%), четырех - 9,8% исследованных проб (табл. 1).