Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональные изменения эритроцитов крови при патологиях печени у мелких домашних животных

□ОЗДТ'ггиьсэ На правах рукописи

Сысуева Анна Витальевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ ПРИ ПАТОЛОГИЯХ ПЕЧЕНИ У МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ

16.00.02 - Патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

О 3 И юн 2009

Москва - 2009

003472069

Работа выполнена на кафедре незаразных болезней ветеринарно-санитарного факультета ГОУ ВПО «Московского государственного университета прикладной биотехнологии» (МГУПБ).

Научный руководитель: Уша Борис Вениаминович,

заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАСХН (МГУПБ)

Официальные оппоненты: Паршин Павел Андреевич,

доктор ветеринарных наук, профессор (РУДН)

Калмыков Михаил Викторович,

кандидат биологических наук (ФГУ ЦНМВЛ)

Ведущая организация: Федеральное государственное

учреждение

"Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГУ ВГНКИ)

Защита диссертации состоится «лГ» ¿/¿¿'с^сТ 2009 г. в /Л 6С! часов на заседании диссертационного совета Д 212.149.03 при ГОУ ВПО "Московский государственный университет прикладной биотехнологии" по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина, 33.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО "Московский государственный университет прикладной биотехнологии", а также на веб-сайте Ь«р://\т\у/т5ааЬ.ги

Автореферат разослан 2009 г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. По данным отечественных и зарубежных авторов внутренние незаразные болезни составляют основную часть заболеваний собак и кошек - около 41 %, среди которых болезни печени составляют около 5 %. Наиболее часто встречаемыми патологиями печени у собак являются острый гепатит, хронический гепатит и множественные новообразования печени, у кошек - острый гепатит, липидоз и метаплазия (Уша Б.В., Беляков И.М., 1998; Денисенко В.И., Кесарева Е.А., 2006).

Патология пищеварительной системы продолжает оставаться одной из наиболее актуальных проблем теоретической и практической ветеринарной медицины. Несмотря на большие успехи в профилактике, диагностике, специализированном лечении, болезни печени остаются тяжелыми заболеваниями, нередко приводящими к падежу животных. Заболевания печени нередко сопровождаются изменениями в различных органах и системах, среди которых особое место занимает система крови. Тесная взаимосвязь печени с процессом гемопоэза обусловливается ее ведущим значением в обмене важнейших гемопоэтических факторов: железа, витамина Вп, фолиевой кислоты, эритропоэтина и других. Механизм возникновения гематологических нарушений при заболеваниях печени сложен и его изучение имеет существенное значение для целенаправленной патогенетической терапии больных с заболеваниями печени. Проведение подобных исследований по выяснению клинико-гематологических параллелей при острых и хронических заболеваниях печени во многом способствует более углубленному пониманию патогенеза и послужит основанием для дифференциальной диагностики, профилактики и эффективного лечения.

Клетки крови, будучи важнейшими компонентами внутренней среды организма, чутко реагируют на различные физиологические и патологические процессы в организме, что позволяет использовать изменения крови в качестве дифференциально-диагностического теста при самых разнообразных нозологических формах. Применение в этих целях более тонких и чувствительных методов исследования позволяет дифференцированно подойти к изменениям в системе крови при заболеваниях печени. В свете вышеизложенного становится очевидной актуальность и своевременность дальнейших комплексных исследований крови и кроветворения при патологиях печени в научных и практических целях.

Цель и задачи нсследова ния. Целью исследования является выявить закономерности морфофункциональных изменений эритроцитов крови при различных патологиях печени мелких домашних животных. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Оценить морфофункциональное состояние эритроцитов крови и особенности его изменения у животных с различными заболеваниями печени.

2. Определить нозологический профиль болезней печени собак и кошек.

3. Провести анализ корреляционной зависимости между морфофункциональными показателями эритроцитов крови и патоморфологической картиной поражения печени у собак и кошек.

Научная новизна. Впервые детально показаны возможности использования морфометрии эритроцитов для оценки функционального состояния печени.

Выявлены новые закономерности изменения эритроцитарной системы периферической крови у животных с заболеваниями печени в зависимости от стадии и степени поражения.

Практическое значение. Установлено, что при поражении печени в патологический процесс вовлекается и система крови, что существенно влияет на течение заболевания и должно учитываться при установке прогноза и назначении лечения.

Материалы исследования дают возможность более полно оценивать состояние животных с заболеваниями печени и могут служить методологической основой для применения системного анализа в лабораторной практике ветеринарных клиник.

Исследования общего клинического аназиза крови, наработка данных и умение их интерпретировать позволят быстро проводить первичное обследование большой группы животных, получать точные данные о составе и функциональной активности клеток крови, выявлять скрытые заболевания и начальные стадии заболеваний, при которых клинические признаки еще не успели развиться, а также позволят прогнозировать развитие и исход многих болезней.

Материалы и результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре незаразных болезней животных Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Морфофункциональные изменения эритроцитов крови собак и кошек при различных гепатопатиях.

2. Морфологические характеристики патологий печени собак и кошек.

3. Биохимические изменения в крови собак и кошек при некоторых заболеваниях печени.

Апробация работы. Материалы исследования доложены на Всероссийских и Международных конференциях: конференция молодых ученых и студентов "Живые системы и биологическая безопасность населения" (МГУПБ, 2006, 2007, 2008); XV Международный Московский ветеринарный конгресс (2007); VII Всероссийская выставка научно-технического творчества молодежи (Москва, 2007).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследования, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 27

рисунками. Список литературы содержит 145 источников, в том числе 35 зарубежных.

2. МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена на кафедре незаразных болезней ветеринарно-санитарного факультета Московского государственного университета прикладной биотехнологии (МГУПБ) в период с 2005 по 2008 гг.

Экспериментальная часть данной работы проводилась в ветеринарной клинике при МГУПБ "На Талалихина", а также в независимой ветеринарной лаборатории "Глобал".

Материалом для исследования служили собаки и кошки различных пород и пола в возрасте от 1 до 10 лет, принадлежащие частным лицам и имевшие симптоматические проявления заболевания печени в разной степени развития патологии. Контролем служили собаки и кошки, подобранные по принципу аналогов.

Клиническое исследование животных производили последовательно по общепринятым в ветеринарной практике методикам, которые включали в себя регистрацию поступившего на прием животного, сбор анамнеза у владельца, проведение общего и специального исследований. На основании общего исследования (осмотра, пальпации, перкуссии, аускультации и термометрии) отбирались животные с подозрением на заболевание печени и подвергались более подробному исследованию.

Гематологические методы исследования. Кровь для лабораторного исследования брали однократно натощак из подкожной вены предплечья в первые дни поступления животного в клинику до назначения лечения.

Общий клинический анализ крови выполняли на автоматическом анализаторе РСЕ-90 фирмы ERMA (Япония). Определяли следующие параметры: общее количество эритроцитов (RBC), гемоглобин (HGB), гематокрит (НСТ), средний объем эритроцита (MCV), среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН), среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците (МСНС), анизоцитоз эритроцитов (RDW), скорость оседания эритроцитов (СОЭ), общее количество лейкоцитов (WBC), общее количество тромбоцитов (PLT).

Для определения лейкоцитарной формулы использовали унифицированный метод морфологического исследования форменных элементов крови с дифференциальным подсчетом лейкоцитарной формулы. Микроскопию нативных препаратов периферической крови проводили на фазово-контрастном световом микроскопе (увеличение х 1000) производства австрийской фирмы «Лейц».

Для морфологического исследования эритроцитов мазки крови после высушивания окрашивали по Паппенгейму. Микроскопию проводили на фазово-контрастном световом микроскопе (увеличение X 1000) фирмы «Лейц».

При биохимическом исследовании в сыворотке крови определяли содержание общего белка и его фракций, общего и прямого билирубина,

мочевины, креатинина, холестерина, триглицеридов, глюкозы, активность аспартат- и аланинаминотрансфераз (АсАТ и АлАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), гамма-глутаминтрансферазы (ГГТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и а-амилазы. Анализ проводили на автоматическом биохимическом анализаторе "MARS" с помощью наборов реактивов фирм ОАО "Диакон - Диа Сис" и "Витал-Европа". Нормы биохимических показателей брали согласно используемым реактивам.

Инструментальные методы исследования. Диагностическую ультрасонографию проводили на сканере "РАСКАН" - ЭТС-0-05 в латеральной или вентродорсальной позиции животного, используя при этом конвексный датчик UT-C5.0R20 с частотой колебания ультразвуковых волн 3,5 и 7,5 МГц. При проведении УЗИ органов брюшной полости оценивали эхогенность тканей того или иного органа, эхоструктуру, а также форму, размеры, наличие или отсутствие объемных образований и свободной жидкости.

Морфологические методы исследования. Получение гистологического материала для исследования осуществляли посредством аспирационной биопсии печени по стандартной методике (Симпсон Жд. и соавт, 2003) при помощи цитопункции биопсийной иглой "Уша". Были проведены гистологические исследования 142 проб. Образцы фиксировали в 10%-м растворе формалина. Окраску гистологических срезов проводили по общепринятой методике гематоксилин-эозином. Изучение и микрофотосъемку гистологической картины проводили на микроскопе фирмы "Лейц" с использованием цифровой видеокамеры JVC при увеличении 100,200 и 400.

Для обработки полученных результатов использовали общепринятые статистические методы, а достоверность различий между контролем и опытными группами определяли по критерию Стьюдента (Глотов Н.В. и соавт., 1982; Гроссман С. и соавт., 1983; УрбахВ. Ю., 1987), при помощи пакета стандартных статистических программ, используемых при обработке биологических и медицинских данных для IBM PC.

" Достоверность различия показателей, определенных параметрическим и непараметрическими методами, считалась подтвержденной при уровне значимости «р» не выше 0,05.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Результаты клинического осмотра собак и кошек

В результате сбора анамнеза и общего исследования животных было выявлено 476 собак и 185 кошек различных пород и возраста с признаками заболевания желудочно-кишечного тракта. В ходе дальнейших лабораторных исследований крови и УЗИ было выделено 84 собаки и 58 кошек с патологиями печени. Из исследования исключались животные с сочетанными поражениями печени и почек, ярко выраженными заболеваниями селезенки, поджелудочной железы и сердечно-сосудистой системы, так как патология этих органов и систем значительно влияет на систему эритрона. Из исследования также были

исключены ' животные с различными новообразованиями печени и инфекционными заболеваниями.

Из анамнеза и при общем осмотре были выявлены следующие клинические признаки. Ведущими признаками острого поражения печени у собак были диспептический синдром, проявляющийся расстройством дефекации и рвотой; дизорексия; повышенная жажда; общее угнетение. При общем осмотре собак с острой гепатопатией выявляли повышение температуры тела на 1-2 °С, приступы колик, гепатомегалию и болезненность при пальпации эпигастральной области, потерю веса, истеричность или анемичность видимых слизистых оболочек и кожи, меркаптановый запах из ротовой полости, различные кожные манифестации (табл.1).

Таблица 1

Результаты клинического осмотра собак (п=84)

Симптом Течение болезни

Острое (п = 43) Хроническое (п=41)

всего % всего %

Потеря веса 24 55,81 31 75,61

Слизистые оболочки

анемичные 6 13,95 19 46,30

иктеричные 32 72,09 4 9,76

Дизорексия 40 93,03 26 63,41

Жажда 39 90,69 16 39,02

Рвота 38 88,37 7 17,07

Нарушение дефекации 41 95,35 27 65,85

Уменьшение размеров печени - - 5 12,19

Увеличение размеров печени 38 88,37 9 21,95

Болевой синдром 40 93,02 10 24,39

Кожные манифестации 2 4,65 26 63,41

Асцит - - 4 9,76

Ведущими клиническими признаками при хронических гепатопатиях, выявляемых из анамнеза, были также диспептический синдром, при этом рвота и нарушения дефекации были не такими частыми, как при остром течении, и отмечались периодически. Повышенная жажда отмечалась редко, в основном в период обострения, только у животных с асцитным синдромом ее регистрировали в 100 % случаях.

При общем осмотре собак с хронической гепатопатией выявляли: приступы колик, гепатомегалию и болезненность при пальпации эпигастральной области, у некоторых животных обнаруживали уменьшение границ печени, потерю веса, истеричность или анемичность видимых слизистых оболочек и кожи, меркаптановый запах из ротовой полости, увеличение объема живота (асцит), кожные манифестации (табл. 1).

При анализе анамнеза и клиническом обследовании кошек с различными заболеваниями печени были выявлены следующие клинические признаки: диспептический синдром, проявляющийся диареей, иногда запором и рвотой, в основном это были животные с острым течением гепатопатии

(холангиогепатит), анорексия, повышенная жажда, при этом у кошек с липидозом печени добровольный прием воды часто отсутствовал. Истеричность и анемичность слизистых оболочек, гепатомегалия, болевой синдром, потеря веса, вялость отмечалась у всех животных (табл. 2).

Таблица 2

Результаты клинического осмотра кошек (п=58)

Симптом Выявлено животных с клиническими проявлениями

всего %

Потеря веса 41 70,69

Слизистые оболочки

анемичные 5 8,62

истеричные 19 32,76

Дизорексия 56 96,55

Жажда 15 25,86

Рвота 17 29,31

Нарушение дефекации 21 36,21

Увеличение размеров печени 39 67,24

Болевой синдром 11 18,97

Кожные манифестации 12 20,69

Результаты биохимического исследования крови

По результатам наших исследований среднее значение аланинамминотрасферазы (АлАТ) у здоровых собак составляло 10,90±0,96 МЕ/л, у кошек — 12,8+1,2 МЕ/л. У больных животных было обнаружено достоверное повышение этого показателя, причем при острых поражениях печени, таких как острые гепатит или холангиогепатит, концентрация этого фермента была максимально высока, а при хронических течениях заболевания повышение было незначительно, или даже в некоторых случаях обнаруживалось снижение АлАТ относительно нормы при циррозе печени.

Аспартатаминотрансфераза (АсАТ) у здоровых собак составляет 13,50±0,34 МЕ/л, у кошек - 14,1+0,7 МЕ/л. По результатам исследований чаще всего отмечали повышение концентрации АсАТ параллельно с повышением АлАТ. При этом коэффициент Ритиса был, как правило, ниже 0,7.

Повышение концентрации фермента щелочной фосфатазы (ЩФ) в крови обнаруживалось практически у всех больных гепатопатией животных. Особенно интенсивно концентрация щелочной фосфатазы возрастает у собак при токсическом гепатите 226+163,2 против 66,50±0,35 МЕ/л у здоровых. У кошек обнаруживается следующая закономерность: при холангиогепатите концентрация ЩФ незначительно повышена и, как правило, более выражен рост активности АлАТ, при липидозе печени все строго наоборот - рост активности ЩФ намного превышает скорость роста активности АлАТ. Наряду с повышением концентрации фермента ЩФ обнаруживали повышение концентрации фермента гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) (табл. 3,4).

Таблица 3

Результаты биохимического анализа крови у собак с различными заболеваниями печени (М+т)

Показатели Ед. изм. Острый токсический гепатит Гепатоз Цирроз Здоровые (п=10) Норма

АлАТ МЕ/л 253,2+140,9 55,0±21,9 58,2+3,3 10,90+0,96 До 14,3

АсАТ МЕ/л 157,6+60,7 44,2+13,1 30,1+3,6 13,50+034 До 14,3

ЩФ МЕ/л 226,6+163,2 128,7+95,4 168,9+55,2 66,50^0,35 До 70

ГГТ МЕ/л 9,1+2,1 5,7+0,1 43,7+8,2 4,7+0,9 До 6,9

лдг МЕ/л 308,4+99,1 186,8+30,7 86,0+35,0 36,6+3,8 До 164

Холестерин Ммоль/л 5,6+0,7 5,7+0,5 5,7+0,1 4,25+0,43 2,5 - 6,0

Триглицервды Ммоль/л 0,4+0,1 0,7+0,1 0,4+0,1 0,17+0,3 0,15-0,84

Креатннин Мкмоль/л 112,6+10,4 76,7±11,5 63,1+6,9 89,70+3,14 44,3 -138,4

Мочевина Ммоль/л 7,1+4,6 4,9+1,2 5,1+0.6 2,2+0,2 2,2-3,0

а-амилаза Мг/(с-л) 606,0+124,4 680,1+165,8 1036,2+290,1 33,20*1,65 12,0-37,0

Общий билирубин Мкмоль/л 10,8+6,1 5,2+2,1 4,9+1,2 1,90+0,25 1,2-3,5

Прямой билирубин Мкмоль/л 1,5+0,7 0,6+0,2 0,4+0,2 0,00 ± 0,00 0,0 -0,01

Глюкоза Ммоль/л 3,9+0,7 4,6+0,6 4,7+0,9 5,10 + 033 3,4 -6,0

Общий белок г/л 67,0+4,2 64,6+3,1 60,2+10,2 72,20 ±1,6 55,1-75,2

Альбумин г/л 31,1+6,6 33,6±3,0 32,5+7,6 37,50+2,1 25,8 -39,7

Глобулин г/л 35,9+3,6 32,7±5,6 27,7+4,2 34,90+3,3 26,0-37,0

Таблица 4

Результаты биохимического анализа крови у кошек с различными заболеваниями печени (М+т)

Показатели Ед. изм. Холангиогепатит Липидоз ЗдоровьЕ (п=10) Норма

АлАТ МЕ/л 163,3+80,6 268,7±126,7 12,8+1,2 До 60

АсАТ МЕ/л 190,1+47,8 144,7+53,4 14,1+0,7 До 45

ЩФ МЕ/л 64,0+25,0 506,9+191,1 43,5+12,4 До 90

ГГТ МЕ/л 9,0+3,6 25,0+7,5 3,9+1,4 До 15

ЛДГ МЕ/л 425,9+197,8 233,1+26,1 64,9+23,7 До 155,0

Холестерин Ммоль/л 7,0+0,2 6,1±1,0 3,1+0,7 1,9-6,5

Триглицериды Ммоль/л 3,1+1,2 4,6+3,7 0,4+0,1 0,2-1,2

Креатинин Мкмоль/л 124,6+43,6 132,5+21,3 56,7+12,4 48,6- 165,0

Мочевина Ммоль/л 11,8+4,2 13,8+9,1 5,7+0,3 5,5-11,1

а-амилаза Мг/(с-л) 313,3+144,0 799,7+277,7 234,8+98,1 До 900,0

Общий билирубин Мкмоль/л 144,7+106,7 285,4+115,6 3,7+1,3 1,2-7,9

Прямой билирубин Мкмоль/л 13,2+2,5 17,8+5,2 0,1+0,1 0,1 - 1,6

Глюкоза Ммоль/л 7,9+0,7 4,2+1,4 4,5+1,1 3,4-6,9

Общий белок г/л 62,8+4,8 78,4+9,7 65,4+11,5 57,5 - 79,6

Альбумин г/л 30,0+3,2 32,7+5,3 31,7+4,3 24,5 - 37,5

Глобулин г/л 32,9+1,9 42,4+9,0 29,6+3,7 24,4 - 47,0

По нашим наблюдениям повышение активности фермента лактатдегидрогеназы (ЛДГ) было обнаружено в крови животных, у которых активность АлАТ превышает норму в 3 раза, а также в некоторых случаях вторичного гемолиза эритроцитов.

Так как у собак и кошек основная доля а-амилазы вырабатывается поджелудочной железой, то повышение уровня а-амилазы в сыворотке крови может свидетельствовать о нарушении деятельности поджелудочной железы (хронического течения панкреатита) и функциональной нагрузки печени (Меньшиков В.В., 1987). Хронический панкреатит достаточно широко распространен среди собак и часто сопутствует хронической гепатопатии

В наших исследованиях достоверное повышение количества билирубина в крови было обнаружено практически у всех животных. Особенно у собак с острым гепатитом и холестазом, у кошек при холангиогепатите и особенно при липидозе печени.

Синтетическую способность печени оценивали по количеству глюкозы, белка и его фракций, а также по концентрации мочевины. Снижение этих показателей обнаруживали в основном у старых животных с хроническим тяжелым поражением печени, таким как цирроз.

Результаты ультрасонографического исследования печени собак

Для определения характера поражения печени мы проводили ультразвуковую диагностику. Каждое заболевание имело характерные черты.

Острый токсический гепатит характеризовался следующими показателями: увеличение размера печени, контуры ровные, капсула утолщена и четко визуализируется, эхогенность паренхимы снижена, сосудистый рисунок четко выражен, однородность структуры сохранена, иногда встречались признаки острого холецистита (расширение желчного пузыря) и холестаза (расширение желчных протоков).

Гепатоз. У собак с диффузной жировой дистрофией печени ультразвуковая картина характеризовалась повышенной эхогенностью всей паренхимы печени, обеднением сосудистого рисунка и сглаживание изображения паренхиматозной структуры. У собак с крупнокапельной очаговой дистрофией печени в паренхиме определялось чередование участков с нормальной и повышенной эхогенностью. Вакуольная дистрофия характеризовалась снижением эхогенности и исчезновением сосудистого рисунка.

Цирроз характеризовался следующими ультрасонографическими признаками.

Макронодулярный цирроз: увеличение размеров печени, неровные контуры, в паренхиме имеется большое количество эхогенных образований, структура неоднородная, грубозернистая, сосудистый рисунок обеднен.

Микронодулярный цирроз: уменьшение размеров, неровные контуры, капсула визуализируется нечетко, значительное повышение эхогенности и ослабление сосудистого рисунка, спленомегалия, асцит.

У некоторых собак в паренхиме печени определялась повышенная эхогенность крупных участков, чередующаяся с участками неравномерной пониженной эхогенности. На этом фоне, как правило, определялись многочисленные срезы сосудов высокой эхогенности, что обусловлено склерозом их стенок, а также наличием расширенных вен. Важными сонографическими признаками цирроза печени (хотя и не во всех случаях) являлись спленомегалия и визуализация расширенных селезеночных вен; отек или уплотнение стенки желчного пузыря, желудка, кишечника; на конечной стадии - асцит.

Результаты ультрасонографического исследования печени кошек

Липидоз. Ультразвуковая картина достаточно специфическая. Определяли следующие признаки: увеличение размера печени, неровные контуры, повышенная эхогенность изображения печени, обеднение сосудистого рисунка и сглаживание изображения паренхиматозной структуры. Сосуды не визуализируются, изображение диафрагмы может быть как истончено, так и усилено.

Холангиогепатит. При холангиогепатите вместе с признаками воспаления желчного пузыря (утолщение стенки желчного пузыря, слоистая структура стенки) обнаруживались признаки воспаления паренхимы печени, а именно: увеличение размера печени, контуры ровные, капсула утолщена и четко визуализируется, эхогенность паренхимы неоднородна, особенно снижена вокруг желчного пузыря и желчных протоков, сосудистый рисунок четко выражен, однородность структуры сохранена, признаки холестаза (расширение желчных протоков).

Результаты гистологического исследования бноптатов печени собак

При микроскопическом исследовании биопсийного материала были получены следующие результаты.

Острый токсический гепатит, В процессе исследования было выявлено 43 собаки с острым токсическим гепатитом. При гистологическом исследовании печени мы наблюдали нарушение структуры печеночных балок. Часть гепатоцитов увеличена в размерах, имеет светлую, содержащую капельки жира цитоплазму и центрально расположенные, находящиеся в состоянии пикноза, ядра. Отмечались также очаги некроза и лизиса гепатоцитов, которые локализуются преимущественно в центральных зонах долек печени. Кровеносные сосуды расширены и переполнены кровью. Междольковая соединительная ткань инфильтрирована лимфоцитами, гистиоцитами и плазматическими клетками, граница между ней и паренхимой стерта.

Гепатоз печени. Из 28 собак, больных гепатозом, у 15 собак наблюдали диффузную смешаннокапельную жировую дистрофию, при этом жировые капли различной величины располагались диффузно по всей печеночной дольке, в центре или на периферии долек. Ядра обычно находились в центре гепатоцитов, были уменьшены в объеме, неправильной формы, часто с явлениями кариопикноза. У 4 собак обнаружили диффузную среднекапельную

жировую дистрофию, при этом капли жира средней величины располагались диффузно по всей печеночной дольке, были хорошо видны ядра гепатоцитов, смещенные к периферии клеток, некоторые ядра сплющенные. У двух животных наблюдали очаговую крупнокапельную зернисто-жировую дистрофию. При этой патологии жировая ткань почти полностью замещает печеночную паренхиму, которая становится похожей на жировую клетчатку.

При различных формах жировой дистрофии отмечалось нарушение балочной структуры долек и вакуолизация звездчатых клеток. В зоне триад и по ходу внутридольковых капилляров были видны пролифераты из лимфоцитов и гистиоцитов.

В 7 случаях мы столкнулись с вакуольной дистрофией печени. Микроскопические исследования показали, что балочное строение печеночных долек нарушено, гепатоциты набухшие, в их циоплазме имеются вакуоли, заполненные жидкостью, содержащей белки и ферменты, которые придают ей ячеистый вид. В некоторых клетках ядро, органеллы и цитоплазма отсутствуют, внутри клеточной оболочки пространство заполнено жидкостью, содержащей белки.

Цирроз печени. В результате прижизненных морфологических исследований у б собак был выявлен билиарный смешанно-узловой цирроз печени. При микроскопии срезов видна атрофия гепатоцитов, нарушено балочное строение, дольки имеют различную величину, заметно сильное разрастание соединительной ткани в области глиссоновой триады желчных ходов. Желчные капилляры переполнены желчью. Значительно расширены желчные и внутрипеченочные протоки. У 3 собак был выявлен декомпенсированный атрофический цирроз. Микроскопически заметны нарушения пластинчатого и дольчатого строения с разобщением гепатоцитов. Вокруг отдельных долек или их групп наблюдается разроет соединительной ткани. Активность процесса подтверждается выраженным некрозом гепатоцитов, большое количество скоплений гистиолимфоидных инфильтратов в различных участках узлов регенератов. У 4 собак был выявлен гипертрофический активный цирроз. Микроскопически обнаруживаются широкие прослойки соединительной ткани между печеночными дольками, а внутри долек фиброзная ткань проходит между печеночными балками.

Результаты гистологического исследования биоптатов печени кошек

Холангиогепатит. При исследовании 24 биоптатов печени кошек, больных холангиогепатиом, характерными признаками были явления холестаза: расширенные желчные протоки, переполненные желчью; в некоторых случаях при затяжном течении этого заболевания было замечено утолщение стенок желчных протоков и скопление вокруг них гистиоцитов, фибробластов и лимфоцитов. Обнаруживается также фиброз в портальных областях. В острую стадию течения патологического процесса вокруг желчных ходов обнаруживались скопления нейтрофилов. Отмечались также очаги некроза и лизиса гепатоцитов, которые локализуются преимущественно вдоль желчных протоков.

Липидоз печени. При гистологическом исследовании 34 биоптатов печени кошек, больных липидозом, или жировым гепатозом печени, была

обнаружена диффузная смешаннокапельная жировая дегенерация гепатоцитов без признаков воспаления и некроза. Другие дистрофические изменения (помимо ожирения) выражены слабо. В некоторых гистопрепаратах видны небольшие группы клеток с кариопикнозом. Изредка встречаются клетки с вакуолизированными ядрами, у некоторых кошек наблюдалась слабо выраженная очаговая белковая дистрофия (мелковакуолизированная зернистая цитоплазма печеночных клеток). Изредка отмечалось в синусоидах небольшое количество лимфоидных и гистиоцитарных элементов.

Результаты клинического анализа крови собак

Острый токсический гепатит. В процессе исследования было выявлено 43 собаки с острым токсическим гепатитом. Количество эритроцитов было снижено до 4,9+0,2x1012/л, количество гемоглобина составляло 12,4+3,5 г/дл, что было ниже нормы. Морфофункциональные показатели эритроцитов указывали на наличие нормоцитарной нормохромной гомогенной анемии. Средний объем эритроцитов (MCV) составлял 65,4+2,7 фл, среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) - 23,3+1,2 пг, средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС) - 34,3+1,1 %, гематокрит (Ht) - 34,0+1,5 %, индекс анизоцитоза (RDW) - 8,6+0,3 %. Встречались животные С ярко выраженной микроцитарной гипохромной анемией. Это можно объяснить тем, что животное попадало на осмотр ко врачу в более поздние сроки, и поражение печени развивалось уже несколько дней (рис. 1).

70 60 504030 Solóos

RBC MCV MCHC

Рис. 1. Морфометрия эритроцитов собакпри остром токсическом гепатите

Количество лейкоцитов в крови экспериментальных собак с острым токсическим гепатитом составило в среднем 17,0+11,3 *109/л, тогда как у здоровых животных не превышало 8,1±0,5х 109/л.

В норме у собак количество нейтрофильных гранулоцитов составляет 4772 %, у собак с острым токсическим поражением печени количество нейтрофилов достигало 81,6 %. Количество палочкоядерных нейтрофильных гранулоцитов в среднем колебалось в пределах 11,6+10,0 % при норме 1-6 %, сегментоядерных - 70,0+3,5 % от общего числа лейкоцитов при норме 50-72 %. У здоровых собак количество сегментоядерных составило в среднем 70,2+2,2 % от общего числа лейкоцитов.

Количество эозинофилов в крови экспериментальных собак составило в среднем 1,6+1,0 %, лимфоцитов - 18,0+9,2 %, что соответствовало содержанию

1

1шЁ 1ж

Шбольные Е9 здоровые

этих клеток в крови здоровых собак. Количество моноцитов и базофилов не превышало 1 % вследствие повышения процентного содержания нейтрофилов в крови при остром воспалительном процессе (табл. 5).

Таблица 5

Результаты общего клинического анализа крови собак с острым токсическим гепатитом (М+ш)

Показатым Ед. изм. Больные (п=43) Здоровые (п=10) Норма

Эритроциты(ЯВС) х 10и/л 4,9± 0,2 6,6+ 0,5 5,6-8,5

Гемоглобин (НВ) г/дл 12,4+3,5 17,0+ 0,5 13,0-19,0

Гематокрит (НТ) % 34,0± 1,5 42,0+1,5 44,0-54,0

СОЭ мм/ч 4,2± 1,5 2,0 + 0,5 2,0-3,5

МСН пг 23,3± 1,2 24,1 + 1,2 27,0-31,0

мснс % 34,3± 1,1 34,4 + 0,8 32,0-36,0

МСУ фл 65,4± 2,7 68,9 + 3,3 60,0-77,0

Ю\У % 8,6+0,3 8,8+ 0,3 7,8-9,2

Тромбоциты X 10"/л 3553+222,6 264,0 + 64,4 160,0-430,0

Лейкоциты х 10"/л 17,0+11,3 8,1 +0,5 7,0-12,0

Базофилы % 0,0±0,0 0,5+0,3 0,0-2,0

Эозинофилы % 1,6+ 1,0 1,5 + 1,1 1-10

Миелоциты % 0,0+ 0,0 0,0 + 0,0 0

Юные % 0,0 + 0,0 0,0 + 0,0 0

Палочкоядерные % 11,6+10,0 3,0+1,3 1-6

Сегментоядерные % 70,0+3,5 70,2 + 2,2 50-72

Лимфоциты % 18,0+ 9,2 25,0 + 2,2 12-30

Моноциты % 0,0+0,0 1,0 + 0,7 0-10

Гепатоз. При определении морфофункциональных показателей эритроцитов у собак с хроническим течением гепатоза нами было установлено, что изменения эритроцитов при разных формах гепатоза не существенны. В отличие от острого гепатита, при гепатозе с хроническим течением у собак развивается макроцитарная нормохромная гомогенная анемия.

Количество эритроцитов и гемоглобина у большинства животных было незначительно снижено и составляло 5,4+0,9x1012/л и 13,2+2,4 г/дл соответственно. Повышение среднего объема эритроцитов (МСУ) 76,5+3,9 фл указывает на макроцитарный тип анемии. Показатель среднего содержания гемоглобина в эритроцитах (МСН), как правило, был в пределах нормы или незначительно повышен и составлял в среднем 28,0+5,1 пг. Повышение показателя МСН происходит в связи с увеличением объема эритроцита и самостоятельного значения не имеет, а учитывается только совместно с МСУ. Индекс анизоцитоза эритоцитов (ШЗ\У) значительно отличался у каждого животного и соответствовал степени поражения печени и уровню компенсации патологического процесса (рис. 2, табл. 6).

□ болыыо я здоровью

Рис. 2. Морфометрия эритроцитовсобак при хроническом гепатгае

Таблица 6

Результаты общего клинического анализа крови собак с гепатозом

(М+ш)

Показатели Ед. нзм. Больные (п=28) Здоровые (п=10) Норма

Эритроциты (ИБС) х 10'7л 5,4± 0,9 6,6 ± 0,5 5,6-8,5

Гемоглобин (НВ) г/дл 13Д±2,4 17,0± 0,5 13,0-19,0

Гематокрит (НТ) % 39,0± 1,7 42,0 ± 1,5 44,0-54,0

СОЭ мм/ч 1,3± 1,1 2,0 ± 0,5 2,0-3,5

МСН пг 28,0± 5,1 24,1 ± 27,0-31,0

МСНС % 37,9± 5,7 34,4 ±0,8 32,0-36,0

МСУ фл 76,5± 3,9 68,9 ±3,3 60,0-77,0

% 8,9±0,6 8,8± 0,3 7,8-9,2

Тромбоциты х 107л 349,3±115,0 264,0 ± 64,4 160,0-430,0

Лейкоциты х 107л 8,7± 1.6 8,1 ±0,5 7,0-12,0

Базофилы % 0,7± 0,7 0,5 ± 03 0-2

Эозинофилы % 4,2± 2,9 1,5 ±1,1 1-10

Миелоциты % 0,0± 0,0 0,0 ± 0,0 0

Юные % 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0

Палочкоядерные % 5,5±3,3 3,0 ±1,3 1-6

Сегментоядерные % 70,0±8,0 70,2 ±2,2 50-72

Лимфоциты % 19,3± 7,2 25,0 ± 2,2 12-30

Моноциты % 1,0 ±0,5 1,0 ±0,7 0-10

Количество лейкоцитов крови при гепатозе у собак в среднем колебалось в пределах нормы и составило 8,7±1,6><1012/л, что указывает на отсутствие острого воспаления в организме. Лейкограмма была, как правило, с незначительной нейтрофилией, при этом в некоторых случаях обнаруживалось увеличение концентрации сегментоядерных клеток при нормальном или пониженном количестве палочкоядерных лейкоцитов, что указывало на арегенераторный сдвиг вправо. Это подтверждало хроническое течение болезни.

Цирроз печени. Во время исследования было выявлено 13 собак с циррозом печени. Изменение эритроцитарной системы при циррозе печени были многообразны и неоднородны, зависели не только от степени активности

процесса, но и от формы цирроза. В связи с этим средние показатели параметров эритропоэза для всех наблюдаемых собак, больных циррозом, в ряде случаев были не информативны и не отражали истинного состояния той или иной стороны эритропоэза. Поэтому мы предлагаем описание морфофункциональных показателей печени по видам обнаруженного цирроза.

Гипертрофическай и атрофический цирроз печени

Анемия в этих группах выявлена у всех больных. Уровень гемоглобина колеблется от 11,2 до 14,5 г/дл, в среднем составляя 12,9+1,6 г/дл. Количество эритроцитов было также снижено 4,2+0,5*!012/л. Как видно, анемия носила нормохромный характер. Средний объем эритроцитов (МСУ) колебался от 67,5 фл при выраженной спленомегалии до 88,7 фл при декомпенсированном циррозе печени. Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) было понижено - 26,6+1,1 пг. Индекс анизоцитоза эритроцитов (¡Ш'М) был увеличен и составлял в среднем 9,4+0,3 %. Причиной увеличения неоднородности популяции эритроцитов, скорее всего, является уменьшение продолжительности жизни эритроцитов и появление в крови клеток неэффективного эритропоэза (рис. 3, табл. 7).

□ больные а здоровье

Рис. 3. Морфометрия эритроцитов собак при гипертрофическом и атрофпческом

циррозе

Таблица 7

Результаты общего клинического анализа крови собак с атрофическим и гипертрофическим циррозом печени (М+т)

Показатели Ед. Больные Здоровые Норма

изм. (п=7) (п=10)

Эритроциты (ШЗС) х 1012/л 4,2+0,5 6,60 + 0,5 5,6-8,5

Гемоглобин (НВ) г/дл 12,9± 1,6 17,0+ 0,5 13,0-19,0

Гематокриг (НТ) % 36,0+2,1 42,0+ 1,5 44,0-54,0

МСН пг 26,6+1,1 27,1 ±0,2 27,0-31,0

МСНС % 33,9+3,7 34,4 ± 0,8 32,0-36,0

МСУ фл 78,1+ 10,6 68,9 ± 3,3 60,0-77,0

МЖ % 9,4+0,3 8,8+ 0,3 7,8-9,2

Бияиарный цирроз

Анемия выявлена у 89 % больных. Содержание гемоглобина колебалась от 9,1 до 12,6 г/дл. Количество эритроцитов было 3,6+1,1 х1012/л. Цветовой

80-г

ШС НВ МСУ МСН мснс г&м

показатель у большинства больных был равен 1,0. Средний объем эритроцитов (МСУ) был в большинстве случаев увеличен - 91,3+6,9 фл, Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) было понижено - 23,8+3,2 пг. Индекс анизоцитоза эритроцитов (1Ю\У) был высокий и составлял в среднем

9,6+0,2 % (рис. 4, табл. 8).

явс № мст/ мен мснс галл/

Рис. 4. Морфочетрмя эритроцитов собакири билиарном циррозе

Таблица 8

Результаты общего клинического анализа крови собак с билиарным циррозом печени (М+ш)

Показатели Ед. изм. Больные (п=6) Здоровые (п=10) Норма

Эритроциты (ЫЗС) X 10|2/л 3,6±1,1 6,6 ±0,5 5,6-8,5

Гемоглобин (НВ) г/дл 10,8± 1,7 17,0± 0,5 13,0- 19,0

Гематокрит (НТ) % 35,0± 1,9 42,0 ± 1,5 44,0 - 54,0

МСН Пг 23,8± 3,2 27,1 ±0,2 27,0-31,0

МСНС % 32,9± 2,5 34,4 ± 0,8 32,0-36,0

МСУ фл 91,3± 6,9 68,9 ± 3,3 60,0 - 77,0

ИГМ % 9,6±0,2 8,8± 0,3 7,8-9,2

Таким образом, при билиарном циррозе печени наблюдается выраженное угнетение общего эритропоэза, на что указывает уменьшение общего количества эритроцитов. Усилен неэффективный эритропоэз. Общий эритропоэз при билиарном циррозе страдает в большей степени, чем при атрофическом и гипертрофическом. Вероятно, одной из основных причин этого является ингибирующее действие на костный мозг гипербилирубинемии. Эффективный эритропоэз изменяется в меньшей степени, о чем свидетельствует большая продолжительность жизни эритроцитов и концентрация в них гемоглобина.

Изменения некоторых параметров эритрона в зависимости от тяжести поражения печени

Учитывая то, что в группу собак, больных циррозом, входили больные с компенсированным и декомпенсированным поражением печени, причем

соотношение таких больных в подгруппах было различно,' мы проанализировали некоторые параметры эритрона в зависимости от тяжести цирротического процесса. Для получения достоверных результатов мы пользовались планиметрическим методом статистической обработки, позволяющим более точно сравнивать группы с неоднородным (не гаусовским) распределением показателей. Содержание гемоглобина и эритроцитов в периферической крови при тяжелом течении цирроза статистически ниже, чем при компенсированном. Обращает на себя внимание, что МСН больше снижено при декомпенсации цирроза - 19,8+2,1 пг. Однако разница с 26,4+1,9 пг (при субкомпенсированном циррозе) статистически недостоверна (р<0,05), что говорит о серьезном нарушении синтеза гемоглобина у всех больных циррозом печени.

Что касается остальных параметров клинического анализа крови, то при всех видах цирроза количество тромбоцитов было либо снижено, либо на нижней границе нормы.

Количество лейкоцитов оставалось в пределах нормы или незначительно ниже нормы, наблюдалась нормальная формула крови либо с арегенераторным сдвигом вправо. СОЭ во всех случаях была повышена и составляла 4,4+0,8 мм/ч.

Результаты клинического анализа крови кошек

Холангиогепатит. В ходе работы мы провели исследование клинического анализа крови 24 кошек, больных холангиогепатитом. Были выявлены следующие закономерности.

Количество эритроцитов (4,0+0,2х1012/л) и гемоглобина (13,4+4,1 г/дл) было достоверно снижено, что указывало на наличие у всех животных анемии. Морфометрические показатели эритроцитов были следующими: средний объем эритроцитов (МСУ) - 73,5+28,4 фл, среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) - 23,8+8,1 пг, средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС) - 39,5+2,5 %, индекс анизоцитоза эритроцитов (1Ф\У) -9,8+0,1 %. Такие изменения указывают на макроцитарный гипохромный гетерогенный тип анемии (рис. 5, табл. 9).

Анализ лейкоцитарного состава крови показал, что у большинства кошек отмечалось повышение общего количества лейкоцитов и в среднем составляло 19,5+7,1 х109/л, что указывает на наличие воспаления в организме. В лейкограмме количество сегментоядерных и палочкоядерных лейкоцитов было повышено и составляло в среднем 72,7+14,6 и 9,0± 4,3 % соответственно, что говорит о сдвиге лейкоформулы влево и наличии у животного острого воспалительного процесса.

Процентное содержание других видов лейкоцитов было пропорционально снижено или оставалось в норме. Показатель СОЭ был значительно повышен (12,3+6,1 мм/ч), что подтверждает наличие воспалительного процесса и анемии в организме животных.

□ больные И здоровые

[*ВС НВ МСУ МСН МСНС RDW Рис. 5. Морфометрия эритроцитов кошек при холангиогепатите

Таблица 9

Результаты общего клинического анализа крови кошек с холангиогепатитом (М+т)

Показатели Ед. изм. Больные (п=24) Здоровые (п=10) Норма

Эритроциты (ЯВС) X 10''/л 4,0+ 0,2 6,8 + 0,4 6,6-9,5

Гемоглобин (НВ) г/дл 13,4+4,1 13,0+ 2,2 8,0-15,0

Гематокрит (НТ) % 30,0+ 6,4 43,00+ 1,4 30,0-45,0

СОЭ мм/ч 12,3+ 6,1 2,0 + 0,5 2,5-3,5

МСН пг 23,8+ 8,1 15,1 ±2,2 11,0-17,0

МСНС % 39,5± 2,5 32,4 + 0,6 29,5-34,8

МСУ фл 73,5+28,4 48,9 + 4,5 41,0-56,2

1Ф\У % 9,8+0,1 8,3+ 0,9 7,5-9,2

Тромбоциты X 10у/л 292,0+129,4 334,0 + 44,8 150,0-400,0

Лейкоциты X 10у/л 19,5+ 7,1 11,1 +0,9 5,5-19,5

Базофилы % 0,0± 0,0 0,6+0,4 0-1

Эозинофилы % 0,0± 0,0 1,9+1,3 2-12

Миелоциты % 0,0+ 0,0 0,0 + 0,0 0

Юные % 0,0 ± 0,0 0,0+0,0 0-1

Палочкоядерные % 9,0± 4,3 2,0+ 1,1 0-3

Сегментоядерные % 72,7±14,6 70,2 ±2,2 35-75

Лимфоциты % 17,3± 14,6 34,0+ 5,2 20-55

Моноциты % 1,0 ±0,5 1,0+0,3 1-4

Липидоз. При исследовании было выявлено 34 кошки с жировым гепатозом или липидозом печени. Только у 9 кошек была выявлена явная анемия, при этом количество эритроцитов и гемоглобина было снижено, у остальных животных количество эритроцитов соответствовало норме или даже незначительно превышало норму, но это повышение было относительным и связано со сгущением крови вследствие обезвоживания. В среднем количество эритроцитов составляло 6,6+2,4><10'2/л, гемоглобина - 14,2+4,3 г/дл. Морфометрические показатели эритроцитов были следующими: средний объем эритроцитов (МСУ) - 42,2+6,1 фл, среднее содержание гемоглобина в

эритроците (МСН) - 22,3+1,7 пг, средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС) - 33,5+3,8 %, индекс анизоцитоза эритроцитов (ЯО1^ -9,3+0,1 %. Эти показатели указывают на наличие у кошек, больных липидозом, нормоцитарной нормохромной иногда микроцитарной гипохромной гомогенной (в некоторых случаях гетерогенной) анемии. У некоторых кошек была обнаружена нормоцитарная гетерогенная анемия, что бывает при ранней стадии недостаточности железа, витамина В|2 и фолиевой кислоты. Все это указывает на то, что при липидозе печени у кошек развиваются разные формы анемии, в зависимости от того, какая функция печени больше пострадала (рис. 6, табл. 10).

явс нв мсу нсн мснс

Рис. 6. Морфометрия эритроцитов кошек при липидозе печени

Таблица 10

Результаты общего клинического анализа крови кошек с липидозом

(М+ш)

Показатели Ед. изм. Больные Здоровые Норма

(п=34) (п=10)

Эритроциты (ЛВС) X 10и/л 6,6+2,4 6,8 + 0,4 6,6-9,5

Гемоглобин (НВ) г/дл 14,2+ 4,3 13,0+ 2,2 8,0-15,0

Гематокриг (НТ) % 26,2+ 6,6 43,00 + 1,4 30,0-45,0

соэ мм/ч 22,8+21,3 2,0 ± 0,5 2,5-3,5

МСН пг 22,3+ 1,7 15,1 + 2,2 11,0-17,0

МСНС % 33,5+ 3,8 32,4 + 0,6 29,5-34,8

МСУ фл 42,2+6,1 48,9 + 4,5 41,0-56,2

% 9,3+0,1 8,3+ 0,9 7,5-9,2

Тромбоциты X 107л 571,7+3353 334,0 + 44,8 150,0-400,0

Лейкоциты х 107л 27,3+ 12,1 11,1 +0,9 5,5- 19,5

Базофилы % 0,4+0,1 0,6 + 0,4 0- 1

Эозинофилы % 6,3+1,2 1,9 + 1,3 2-12

Миелоциты % 0,0+ 0,0 0,0 + 0,0 0

Юные % 0,0 + 0,0 0,0 + 0,0 0-1

Палочкоядерные % 9,0+4,3 2,0 + 1,1 0-3

Сегментоядерные % 83,0+5,0 70,2 + 2,2 35-75

Лимфоциты % 10,0+4,2 34,0+ 5,2 20-55

Моноциты % 0,0 + 0,0 1,0 + 0,3 1-4

Анализ лейкоцитарного состава крови показал, что у большинства кошек отмечалось повышение общего количества лейкоцитов и в среднем составляло 27,3±12,1х109/л, что указывает на наличие воспаления в организме. В лейкограмме количество сегментоядерных и палочкоядерных лейкоцитов было повышено и составляло в среднем 83,0±5,0 и 9,0±4,3 % соответственно, что говорит о сдвиге лейкоформулы влево и наличии у животного воспалительного процесса.В отличие от кошек, больных холангиогепатитом, большое количество сегментоядерных лейкоцитов указывает на длительное течение заболевания с тенденцией перехода в хроническое течение.

Процентное содержание других видов лейкоцитов было пропорционально снижено или оставалось в норме. Показатель СОЭ был значительно повышен (22,8±21,3 мм/ч), что подтверждает наличие воспалительного процесса и анемии в организме животных.

Морфология эритроцитов при патологии печени у собак и кошек

Для полной оценки состояния эритроцитарной системы у больных животных мы проводили исследование морфологии эритроцитов в мазках крови. Были обнаружены следующие формы эритроцитов.

Эхиноциты - эритроциты с множественными выступами в виде колючек, равномерно распределенных по всей поверхности клеточной мембраны. Они могут появляться при неправильной подготовке препарата и по многим другим причинам, но иногда встречаются при нарушениях обменных процессов, в том числе и печени.

Акантоциты - на поверхности имеют множественные выпячивания разной величины. Возникают они при нарушении соотношения холестерина и фосфолипидов в клеточной мембране эритроцитов. Встречаются при токсических поражениях печени, циррозе печени, метастазах в печень и нарушении обмена липидов. В нашем исследовании были обнаружены у собак с острым токсическим поражением печени, циррозом печени и у кошек при холангиогепатите.

Кератоциты - клетки с двумя большими выступами. Причиной появления этих форм является образование вакуоли, которая потом лопается. Обнаруживали при заболеваниях печени, протекающих с сильной интоксикацией, это в основном острые токсические поражение печени.

Монетные столбики - слипание эритроцитов вследствие нарушения реологии крови, чаще можно встретить в мазках крови кошек. Могут также образовываться в процессе приготовления мазка, поэтому не всегда их обнаружение говорит о патологии. В нашем исследовании монетные столбики мы встречали в мазках крови кошек с сильным обезвоживанием. Таким образом, можно предположить, что появление этих форм эритроцитов связано со сгущением и нарушением реологии крови.

Тонкие макроциты (планоциты) характеризуются увеличенным диаметром и нормальным объемом. Форма их обычно круглая. Часто встречаются вместе с мишеневидными клетками (кодоцитами).

Кодоциты - эритроциты, у которых центральная часть представлена темным кругом, вокруг которого определяется светлое кольцо с периферической зоной, окрашенной аналогично центральной части эритроцита.

Такая специфичность окрашивания эритроцита обусловлена неравномерностью распределения в нем гемоглобина и утолщением его плазмолеммы. Образование кодоцитов и планоцитов связано с повышенным содержанием холестерола и лецитина в мембране. Эти формы наблюдались при болезнях печени, вызванных интоксикациями, такие как острый токсический гепатит у собак и холангиогепатит у кошек.

Книзоциты - перегородчатые клетки. Причина образования такая же, как и у кодоцитов. Часто обнаруживались в одном мазке вместе с кодоцитами.

Стоматоциты - клетки с центральной зоной просветления овальной формы в виде рта. Наблюдались при циррозе печени у собак и холангиогепатите у кошек.

Все обнаруженные измененные формы эритроцитов позволяли косвенно судить о характере и тяжести течения патологического процесса и существенно дополняли клиническую картину.

ВЫВОДЫ

1. Морфофункциональные характеристики эритроцитов крови отражают функциональное состояние печени собак и кошек. Эритроцитометрия является скрининговым методом оценки функционального состояния организма при патологиях печени.

2. В крови собак с острым токсическим поражением печени анемия имеет микроцитарный, гипохромный и гомогенный характер. Происходит снижение количества эритроцитов - 4,9+0,2x1013/л, гемоглобина - 12,4+3,5 г/дл, МСУ - 65,4+2,7 фл, МСН - 23,3±1,2 пг, 1Ш\У - 8,6+0,3 %.

3. При гепатозе и циррозе печени чаще всего отмечается макроцитарный нормохромный тип анемии. При атрофическом и гипертрофическом циррозе среднее количество эритроцитов составляет - 4,2+0,5 х 1012/л, гемоглобина -12,9+1,6 г/дл, МСУ - 78,1+10,6 фл, МСН - 26,6±1,1 пг, ЛОХУ - 9,4+0,3 %. При билиарном циррозе среднее количество эритроцитов составляет -3,6+1,1х10'2/л, гемоглобина - 10,8±1,7 г/дл, МСУ - 91,1±6,9 фл, МСН -23,8+3,2 пг, RDW - 9,6+0,2 %.

4. В крови кошек макроцитарная гипохромная гетерогенная анемия регистрируется при холангиогепатите. Количество эритроцитов составляет -4,0+0,2хЮ|г/л, гемоглобина - 13,4+4,1 г/дл, МСУ - 73,5+28,4 фл, МСН -23,8+8,1 пг, ЮЖ - 9,8+0,1 %.

5. У кошек с липидозом печени морфофункциональные показатели эритроцитов указывают на наличие нормоцитарной нормохромной иногда микроцитарной гипохромной гомогенной анемии. Количество эритроцитов составляет - 6,6+2,4х1012/л, гемоглобина - 14,2+4,3 г/дл, МСУ - 42,2+6,1 фл, МСН - 22,3+1,7 пг, - 9,3+0,1 %.

6. Изменение клинико-биохимических показателей крови прямопропорционально степени повреждения гепатоцитов и не зависит от вида воспаления и дистрофии. Диагностическую значимость имеют количество и активность показателей АсАТ, АлАТ, ЩФ, ГГТ, ЛДГ, билирубин, глюкоза, белок и его фракции, холестерин и триглицериды.

7. Ультрасонографическое исследование печени позволяет определить характер поражения и провести дифференциальную диагностику: гепатита, цирроза, липидоза и холангиогепатита.

8. Достоверным методом диагностики различных патологий печени собак и кошек является прижизненная биопсия. При исследовании биопататов печени установлен следующий нозологический профиль у собак: острый токсический гепатит - 51,2 %; гепатоз - 33,3 %; цирроз - 15,5 %; у кошек: липидоз - 41,4 %; холангиогепатит- 58,6 %.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сысуева A.B. Использование проточной цитометрии для диагностики заболеваний мелких домашних животных / A.B. Сысуева, Б.В. Уша // Живые системы и биологическая безопасность населения: материалы V Международной научной конференции студентов и молодых ученых - М.: МГУПБ, 2006. - С. 258259.

2. Сысуева A.B. Исследование эритроцитов крови при патологиях печени у собак и кошек с помощью проточной цитометрии / A.B. Сысуева, Б.В. Уша // Научно-техническое творчество молодежи: материалы VII Всероссийской выставки. - М.: ВВЦ, 2007. - С. 156-159.

3. Сысуева A.B. Исследование морфофункциональных изменений эритроцитов крови при патологиях печени у мелких домашних животных / A.B. Сысуева, Б.В. Уша Н Ветеринарная клиника. - Екатеринбург, 2008. - №1(68). - С. 12-14.

4. Сысуева A.B. Исследование системы эритрона у собак и кошек при патологиях печени / A.B. Сысуева // Российский ветеринарный журнал. - М., 2008. -№4.-С. 7-9.

5. Сысуева A.B. Изменение морфометрических показателей эритроцитов крови при патологиях печени у собак и кошек / A.B. Сысуева, Б.В. Уша // Ветеринарная медицина. - М., 2008. - №4. - С. 21.

6. Сысуева A.B. Методологические основы оценки клинико-морфологических показателей эритроцитов крови домашних животных: методические указания для самостоятельной работы студентов специальностей 110500,110501,111201 / A.B. Сысуева, Б.В. Уша. - М.: МГУПБ, 2008. - 35 с.

Подписано в печать 12.05.09 Усл. печ. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ09/04

МГУПБ. 109316 Москва, ул. Талалихина, 33.

ООО «Полисувенир», 109316 Москва, ул. Талалихина, 33.

Тел. 677-03-86

По данным отечественных и зарубежных авторов внутренние незаразные болезни составляют основную часть заболеваний собак и кошек - около 41 %, среди которых болезни печени составляют около 5 %. Наиболее часто встречаемыми патологиями печени у собак являются острый гепатит, хронический гепатит и множественные новообразования* печени, у кошек - острый гепатит, липидоз и метаплазия (Уша Б.В., Беляков И.М., 1998; Денисенко В.И., Кесарева Е.А., 2006).

Патология пищеварительной системы продолжает оставаться одной из наиболее актуальных проблем теоретической и практической ветеринарной медицины. Несмотря на большие успехи в. профилактике, диагностике, специализированном лечении, болезни печени остаются тяжелыми заболеваниями, нередко приводящими к падежу животных. Заболевания печени сопровождаются изменениями в различных органах и системах, среди которых особое место занимает система крови. Тесная взаимосвязь печени с процессом гемопоэза обусловливается ее ведущим значением в обмене важнейших гемопоэтических факторов: железа, витамина Bi2, фолиевой кислоты, эритропоэтина и других. Механизм возникновения гематологических нарушений при заболеваниях печени сложен и его изучение имеет существенное значение для целенаправленной патогенетической терапии больных с заболеваниями печени. Проведение подобных исследований по выяснению клинико-гематологических параллелей при- острых и хронических заболеваниях печени во многом способствует более углубленному пониманию патогенеза и послужит основанием для дифференциальной диагностики, профилактики и эффективного лечения.

Новый уровень методических приемов потребовал пересмотра и углубления наших знаний о сущности и динамике патологических процессов в организме, ликвидации разрыва между так называемыми "функциональными" изменениями и морфологическими, "органическими повреждениями" ткани в процессе становления и развития болезни. Поэтому одной из основных задач теоретической ветеринарии* является изучение ранних морфофункциональных изменений в организме, отражающих начальные этапы- становления, патологического процесса; выяснение характера и динамики патологических изменений органов и тканей в течение болезни, выявление связей* между характером морфологических и функциональных изменений органов и показателей крови. С целью оценки и повышения эффективности тех или иных лечебно-профилактических мероприятий возникает необходимость морфологического контроля за биологическими процессами в организме животных (ЖаровsA.B'., Жарова Ю.П., 2006). Несомненно, что детальное прижизненное- изучение морфогенеза должно служить- подспорьем в клинической практике при решении* вопросов диагноза и прогноза болезни.

Клетки крови, будучи важнейшими компонентами внутренней среды организма, чутко реагируют на различные физиологические иг патологические процессы в организме; что позволяет использовать изменения крови в качестве дифференциально-диагностического теста при самых разнообразных нозологических формах. Применение в этих целях более тонких и чувствительных методов исследования позволяет дифференцированно подойти к изменениям в системе крови при заболеваниях печени. В свете вышеизложенного становится очевидной актуальность и своевременность, дальнейших комплексных исследований крови и кроветворения при патологиях печени в научных и практических целях.

Цель исследования выявить закономерности морфофункциональных изменений эритроцитов крови при различных патологиях печени мелких домашних животных.

Задачи исследования

1. Оценить морфофункциональное состояние эритроцитов крови и особенности его изменения у животных с различными заболеваниями печени.

2. Определить нозологический профиль болезней печени собак и кошек.

3. Провести анализ корреляционной зависимости между морфофункциональными показателями эритроцитов крови и патоморфологической картиной поражения печени у собак и кошек.

Научная новизна

1. Впервые детально показаны возможности использования морфометрии эритроцитов для оценки функционального состояния печени

2. Выявлены новые закономерности изменения эритроцитарной системы периферической крови у животных с заболеваниями печени в зависимости от стадии и степени поражения.

Практическое значение

Установлено, что при поражении печени в патологический процесс вовлекается и система крови, что существенно влияет на течение заболевания и должно учитываться при установке прогноза и назначении лечения.

Материалы исследования помогут более полно оценивать состояние животных с заболеваниями печени и могут служить методологической основой для применения системного анализа в лабораторной практике ветеринарных клиник.

Исследования общего клинического аназиза крови, наработка данных и умение их интерпретировать позволят быстро проводить первичное обследование большой группы животных, получать точные данные о составе и функциональной активности клеток крови, выявлять скрытые заболевания и начальные стадии заболеваний, при которых клинические признаки еще не успели развиться, а также позволят прогнозировать развитие и исход многих болезней.

Материалы и результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре незаразных болезней животных Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Морфофункциональные изменения эритроцитов крови собак и кошек при различных гепатопатиях

2. Морфологические характеристики патологий печени собак и кошек

3. Биохимические изменения в организме собак и кошек при некоторых заболеваниях печени

Апробация работы

Материалы исследования доложены на конференциях:

1. Конференция молодых ученых и студентов "Живые системы и биологическая безопасность населения" (МГУПБ 2006, 2007, 2008 гг.)

2. XV Международный Московский ветеринарный конгресс (2007 г-)

3. VII Всероссийская выставка научно-технического творчества молодежи (Москва, 2007 г.)

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК.

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 1.1. Система эритрона

Впервые понятие эритрона предложил в 1913 г. A. Boycott, выделив красные клетки в специфическую ткань организма. В 1929 г. автор высказал мнение, что эритрон включает в себя циркулирующие эритроциты крови и костный мозг. По современным представлениям эритрон является одной из важнейших систем кроветворной ткани, происходит от плюрипотентной стволовой клетки, включает в себя ранние предшественники эритроидного ряда, но не чувствительные к эритропоэтину; эритропоэтинчувствительные клетки; морфологически идентифицируемые, синтезирующие гемоглобин ядросодержащие клетки (пролифирирующие и непролифирирующие); ретикулоциты и зрелые эритроциты (Козинец Г.И., Быкова И.А., 1983).

Основной функцией системы эритрона является продукция и поддержание на достаточном уровне общей массы эритроцитов, содержащих важнейший дыхательный пигмент — гемоглобин. Эритропоэз как гемопоэз в целом является одной из самоподдерживающихся систем организма, в котором, наряду с образованием необходимого числа ядросодержащих эритроидных клеток с последующим вызреванием их в эритроциты, происходят процессы старения и гибели клеток. Разрушению подвергаются как старые, функционально неполноценные эритроциты, так и часть ядросодержащих клеток костного мозга (Козинец Г.И. с соавт., 1976; Finch С. et al., 1977). Процесс внутрикостномозгового лизиса эритроидных ядросодержащих клеток носит название неэффективного эритропоэза. В более широком смысле под неэффективным эритропоэзом, кроме разрушения эритробластов, понимают также еще и выход в периферическую кровь неполноценных эритроцитов (Козинец Г.И., Быкова И.А., 1983).

Характерной чертой популяции эритрона является ее пространственная неоднородность. Зрелые клетки циркулируют в крови, а пролиферация, дифференциация и созревание их происходит в кроветворных органах (Bessis М., 1978).

Формирование распределения клеток по параметрам

Распределение клеток по возрасту

Современная гематологическая техника позволяет измерять не только средние величины параметров популяции клеток, но и распределения по параметрам. Детальный анализ популяции эритроцитов показывает, что* даже в норме эритроциты одного организма не являются полностью подобными друг другу ни морфологически, ни биохимически (Rettig М.Р., Low P.S., Gimm J.A., Mohandas N., Wang J. and Christian J.A., 1999). Уже на стадии созревания клетки ^ имеют естественное распределение по объему w по концентрации гемоглобина (Lew V.L., Raftos J.E., Sorette М., Bookchin R.M. and Mohandas N., 1995). Время жизни зрелого-эритроцита в кровяном русле'у всех животных составляет около 120 дней, в течение которого клетка "записывает" состояние организма.

Существует несколько естественных маркеров, по которым отличают старые эритроциты от молодой популяции.

По некоторым данным у эритроцита мыши к концу жизни в кровотоке увеличивается отношение молекул белка полосы 4,1 а/4,lb от 0,3 до 1,0 и более (Mueller T.J., Jackson C.W., Dockter М.Е. and Morrison M., 1987). По другим данным более надежным маркером возраста является отношение 4,la/(4,la+4,lb) (Lasch J., Kullertz G. and Opalka J.R., 2000). Методом биотинилирования in vivo эритроцитов собаки было показано, что данный параметр пригоден только для идентификации молодых клеток и принимает максимальные значения в середине жизни клеток.

Процентное содержание устойчивой фракции гликозилированного гемоглобина (HbAlc) в клетке по отношению к общему содержанию гемоглобина (HbAl) также нередко используется как возрастной маркер.

В процессе неферментативного образования гликозилированного гемоглобина на протяжении всей жизни эритроцита, который in vivo можно считать необратимым, процентная доля HbAl возрастает с 9,5 до 17 %. Существует эмпирическая формула, связывающая процентное содержание HbAlc с концентрацией глюкозы в крови, использующаяся для контроля среднего уровня глюкозы в крови за предыдущий месяц при диабете.

С возрастом на мембране клетки идет кластеризация белка полосы 3. При этом каждый кластер служит посадочным местом для IgG, выполняя роль так называемого "антигена зрелости", по которому макрофаги распознают зрелые клетки и удаляют их из кровотока (Singer J.A., Jennings L.K., Jackson C.W., Dockter M.E., Morrison M. and Walker W.S, 1986).

Помимо этого, с возрастом в клетках происходят неспецифические изменения. Увеличивается плотность эритроцитов, что иногда служит приблизительным маркером зрелости. Возможно, как следствие уплотнения клеток, изменяется концентрация ионов и неорганических элементов: концентрация К , С1 уменьшается, Са и серы увеличивается. |

Концентрация Na и Mg~ остается неизменной (Cameron I.L., Hardman W.E., Smith N.K., Fullerton G.D. andMiseta A., 1993).

Распределение клеток no индексам

Для эритроцита типичными измеряемыми морфологическими параметрами (индексами) являются показатель преломления, который практически полностью определяется концентрацией гемоглобина, и объем. г

11

Значения гематологических индексов монотонно меняются для индивидуальной клетки в ходе ее жизни в кровотоке. Поэтому при исследовании любого нового параметра (содержание ионов, маркеров возраста клетки и т.п.) традиционным является обсуждение его качественной зависимости от гематологических индексов.

Постановка вопроса о происхождении и описании распределения эритроцитов по индексам концентрацией гемоглобина и объема в норме делалась неоднократно разработчиками гематологических анализаторов. В результате был сделан качественный вывод, что распределение складывается из соответствующих уширений в процессах рождения и созревания клеток, природа и величина которых неизвестны до настоящего времени. Просуммируем факты, известные из литературы.

Эритроциты здоровых индивидуумов схожи между собой по форме и отличаются по размеру. При рождении? распределение эритроцитов по объему близко к логнормальному (McLaren С.Е., Brittenham G.M. and Hasselblad V., 1986) и, по-видимому, такое распределение характерно не только для эритроцитов, но и для многих других клеток. "Логнормальность" распределения обусловлена механизмом деления (в данном случае — стволовых предшественников, из которых образуются эритироциты и другие клетки): комбинация»мультипликативного процесса деления и гауссова распределения доли объемов пары клеток, получающихся в результате деления.

Однако макроскопическая схема жизни и старения клеток разных видов разная, эритроциты человека, собаки и лошади имеют схожую продолжительность существования в кровеносной системе (110-120 дней), малую вероятность случайного элиминирования, эритроциты мыши и кролика существенно меньше по объему (до полутора раз), чем эритроциты собаки и кошки, имеют схожий индекс сферичности, меньшее время жизни (50-60 дней), высокий процент случайных потерь около 0,5 % в день (т.е. порядка 30 % на протяжении жизни).

В работе П.А. Тарасова (2002) выделено две фазы в процессе старения эритроцита. Такое разделение до сих пор никем не проводилось, но в пользу него свидетельствует набор косвенных фактов. Рассмотрим их подробнее.

В работе (Rettig М.Р., Low P.S., Gimm J.A., Mohandas N., Wang J. and Christian J.A., 1999) посредством биотинилирования эритроцитов собаки in vivo с последующим выделением через интервалы времени на магнитных бусах, меченых авидином, было показано, что появление связанного мембраной мономера гемоглобина и возрастание поверхностно связанного IgG происходит после около 80 дней нахождения клетки в русле.

Используя разделение клеток комбинацией методов центрифугирования, в работе (Willekens F.L., Bosch F.H., Roerdinkholder-Stoelwinder В., Groenen-Dopp Y.A. and Werre J.M., 1997) приведены зависимости основных индексов от процентного содержания фракции HbAlc в клетке. Из приведенных данных на качественном уровне видно, что в первой половине жизни объем эритроцита уменьшается, но количество гемоглобина в клетке остается постоянным, концентрация гемоглобина растет. Во второй половине жизни объем продолжает уменьшаться, концентрация гемоглобина слабо растет, оставаясь почти постоянной.

Таким образом, на протяжении всей жизни происходит уплотнение клетки. В первой части жизни клетки процесс идет без потери гемоглобина, затем появляются нарушения в мембране, и начинается процесс образования везикул, которому сопутствует выход гемоглобина из клетки.

С возрастом клетки возрастает степень ее сферичности. Площадь клетки уменьшается посредством везикуляции. Состав гемоглобина везикул напоминает таковой у старых клеток.

Во второй части жизни (80-120 дней) объем уменьшается примерно на 10 %, полное количество гемоглобина (Hbz — сумма нормального и гликозилированного) уменьшается, концентрация гемоглобина слабо растет или постоянна, площадь эритроцита уменьшается, суммарное количество гликозилированного гемоглобина примерно постоянно, возрастает число посадочных мест IgG примерно до 150-200. После чего старый эритроцит распознается макрофагами и уничтожается иммунной системой.

Способам обработки данных, получаемых на гематологических анализаторах, посвящена серия работ математиков. Основное развиваемое направление - диагностика анемии по анализу распределений на двумерной карте измеряемых индексов. При этом никаких предположений о функции распределения в норме' и патологии не делается, а анализ ведется из «общих соображений» по методу Байеса. Эта задача- остается предметом обсуждения и по сей день (Catlin S.N., Abkowitz J.L. and Guttorp P., 2001).

2. Результаты исследования вошли в учебно-методическое; пособие «Методологические основы оценки клинико-морфологических показателей эритроцитов крови домашних животных» и используются при чтении лекций и проведения лабораторных занятий по курсу незаразных болезней животных.