Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфофункциональное состояние чревного сплетения и печени крыс при экспериментальной патологии и методы ее коррекции

Шакирова Диана Марселевна

МОРФОФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ЧРЕВНОГО СПЛЕТЕНИЯ И ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ И МЕТОДЫ ЕЕ КОРЕКЦИИ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Шакирова Диана Марселевеа

МОРФОФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ЧРЕВНОГО СПЛЕТЕНИЯ И ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ И МЕТОДЫ ЕЕ КОРЕКЦИИ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Работа выполнена на кафедре морфологии и физиологии человека и животных Башкирского государственного университета

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор, Калимуллина Л.Б.

Научный консультант:

доктор медицинских наук, Муфазалова Н.А.

Официальные оппоненты

доктор ветеринарных наук, профессор, Кадыров У.Г. кандидат биологических наук Мусина Л.А.

Ведущая организация

Башкирский государственный медицинский университет

Защита состоится « 2 » июля 2004 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 220.003.02 в Башкирском государственном аграрном университете [450001, г. Уфа, ул. 50-лет Октября, 34, корп.4].

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета. Автореферат разослан « 1 » июня 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.в.н., доцент

Ф.А. Каримов

з

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Циркуляция ксенобиотиков техногенного происхождения и их воздействие на организм возросли до уровня, угрожающего здоровью населения.

Производные 2,4 — дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4Д) — эффективные и наиболее широко используемые в сельском хозяйстве гербициды. В современной программе по контролю за загрязнением пищевых продуктов наиболее опасными признаны хлорорганические пестициды и их метаболиты. Острая токсичность различных представителей ХОП лежит в широких пределах и применение большей части этих препаратов ограничено [Кашапов Pill, и соавт., 2003]. Все эти соединения обладают значительной токсичностью и отдаленные последствия воздействия даже малых доз связаны с гонадотропным, эмбрио, иммуно и гепатотоксическим действием [Жамсаранова С.Д., 1994; Каюмова А.Ф., 1996; Имельбаева Э.А. и соавт., 2000].

Известно, что гепатобилиарная и иммунная системы являются наиболее уязвимыми к влиянию экотоксикантов [Мышкин В.А., 1998; Муфазалова Н.А., 2002]. Среди механизмов развития этих нарушений имеет значение повреждение иммунокомпетентных клеток [Fournie M. et al., 2000; Jeon M.S., et al., 2000; Webster D. et al., 2000; Grasman K.A. et al., 2001], активация, свободно-радикального окисления лштидов биологических мембран [Мышкин В.А., 1998; Камилов Ф.Х., 1999].

Изучение патоморфологических изменений в нервной системе при различных профессиональных интоксикациях указывает на вовлечение в процесс нервной системы в целом и обнаруживает ряд изменений во всех элементах нервной ткани; в нервных клетках, сосудах, нервных волокнах и глии [Калимуллина Л.Б., 1967; Толгская М.С., 1967]. В части работ дана комплексная оценка нервной системы и печени [Niculesku S., Mandache E., 1974; Карупу В.А., 1967; ДудкоИ.С, 1986, 1991; Байматов В.Н., 1991; Исанбаев Ч.И., 1994; Шакирова СМ., 2001].

Несмотря на многочисленные, исследования неблагоприятного - воздействия. гербицида аминной соли 2,4 - Д (2,4 - ДА) [Жамсаранова С.Д., 1994; Каюмова А.Ф., 1996; Гильманов А.Ж., 2000; Имельбаева Э.А. и соавт., 2000; Муфазалова Н.А., 2002], недостаточно изучено влияние экотоксиканта на ультраструктурную. организацию печени и ее нервного аппарата, а также возможности коррекции этого повреждающего воздействия.

Коррекция нарушений, вызванных ксенобиотиками, возможна, путем, использования препаратов, обладающих сочетанно. антиоксидантными • и иммуномодулирующими свойствами [Сибиряк СВ. и соавт., 1999; Муфазалова Н.А.,2002]

Известно, что жирорастворимый витамин, Е обладает выраженным антиоксидантным, иммуномодулирующим, мембраностабилизирующим действием, и, следовательно, представляется средства профилактики и восстановительной

группы экотоксикантов. С другой стороны, известно, что тимусные пептиды, в том числе Тактивин, наряду с иммуномодулирующим, оказывают выраженное гепатопротекторное действие.

В ряде работ показано, что сочетанное применение токоферола с иммуномодуляторами оказывает выраженное активирующее влияние на иммунную систему [Колосова Н.Г. и соавт., 1991; Del Rio М. et al., 1998; Ortuno J. et а1., 2001]. Муфазаловой Н.А. (1993) установлено, что токоферол индивидуально и в комбинации с Тактивином оказывает выраженное стимулирующее влияние на активность фагоцитарньгх механизмов защиты, которым, как известно, принадлежит центральная роль в формировании практически всех специфических и неспецифических реакций иммунной системы. Особую ценность данному направлению придает сочетание у токоферола свойств иммуномодулятора и антиоксиданта, обладающего мембраностабилизирующим эффектом [Плецитый, К.Д. 1997; Утешев Б.С. и соавт., 2001; Wang Y. et al., 1994; Lee C.Y. et al., 2000], поскольку мембраноповреждающее действие рассматривается как универсальная закономерность действия токсичных ксенобиотиков [Сетко Н.П. и соавт., 1987; Митрохин Н.М., 1996;МышкинВ.А., 1998].

Следовательно; можно было ожидать, что использование комплекса лекарственных препаратов, обладающих антиоксидантным, гепатопротекторным, иммуномодулирующим и антитоксическим действием, позволит существенно улучшить состояние гепатобилиарной и нервной системы при воздействии этой группы экотоксикантов, что и определило актуальность настоящего исследования.

Цель исследования:

структурно-функциональный анализ состояния чревного сплетения и гепатобилиарной системы при воздействии гербицида 2,4 - ДА и оценка эффективности репаративных процессов в них при индивидуальном и сочетанном применении токоферола и Тактивина.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Анализ патоморфологических и ультраструктурных изменений, формирующихся в чревном сплетении и печени при подострой интоксикации гербицидом 2,4 - ДА.

2. Исследование репаративных процессов в тканях изучаемых систем при применении витамина Е.

3. Изучение компенсаторно-приспособительных изменений, формирумых в восстановительный период при применении Тактивина.

4. Структурно-функционального анализа процессов адаптации организма при комбинированном использовании витамина Е и Тактивина.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые изучены структурные изменения в чревном сплетении при интоксикации 2,4-ДА. Углублены представления о Повреждающем воздействии гербицида 2,4-ДА на ультраструктуру гепатобилиарной системы. Впервые изучено влияние индивидуального и сочетанного применения токоферола и Тактивина на репаративные процессы в чревном сплетении и гепатобилиарной системе в восстановительный период

после воздействия гербицида 2,4-ДА и показана большая эффективность совместного использования токоферола и Тактивина для улучшения процессов репаративной регенерации в печени и чревном сплетении при подострой интоксикации гербицидом 2,4 - ДА.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Полученные данные указывают на роль ВНС в развитии интоксикации гербицидом 2,4-ДА. Они углубляют представление о мембранотропном воздействии исследованного гербицида. Выполненная комплексная оценка репаративных процессов, происходящих в чревном сплетении и печени при использовании токоферола, Тактивина и их сочетании, формирует базис для разработки схем профилактико терапевтических мероприятий.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Подострое пероральное отравлении крыс гербицидом 2,4-ДА вызывает расстройства кровообращения и некробиотические процессы в паренхиматозных элементах чревного сплетения и печени, в основе которых лежит повреждающее действие данного гербицида на цитомембраны клетки.

2. Наибольшая эффективность репаративных процессов в чревном сплетении и гепатобилиарной системе после интоксикации гербицидом 2,4-ДА наблюдается при сочетанном применении токоферола и Тактивина.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Российской научно-практической конференции «Новые пробиотические и иммунотропные препараты в ветеринарии» (Новосибирск, 2003); на Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Москва-Уфа, 2003); на международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию со дня рождения засл. деятеля РФ и РБ, д. в. н., профессора Аюпова Х.В. и 55- летию кафедры паразитологии, микробиологии и вирусологии БГАУ (Москва- Уфа, 2004); на ПО научно-практической конференции преподавателей, сотрудников и аспирантов БГАУ «Достижения аграрной науки» (Уфа, 2004).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на ^¡Рстраницах машинописного текста, состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследования, выводов, практических предложений. Работа содержит^ ¡микрофотографий, & рисунков, -У таблиц. Список литературы включает<&5' источника, среди них отечественных и зарубежных.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

2.1.Материалы и методы исследования.

Эксперименты выполнены на 120 белых неинбредных половозрелых крысах массой 180-220 г обоего пола, полученных из питомника ГУП "Иммунопрепарат" (Республика Башкортостан). Эксперимент проводился два раза.

Животные содержались на стандартном рационе вивария [Западнюк И.П. и соавт., 1983]. Эксперименты выполнены с соблюдением "Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных" [1979]. Условия проведения экспериментов были идентичными для контрольных и рпытных групп. Препараты вводились в утренние и дневные часы.

Животные были разделены на 5 групп:

1 группа контроль (интактные животные); 2 группа получала гербицид 2,4 -ДА; 3 группа получала гербицид 2,4 - ДА и Тактивин; 4 группа - гербицид 2,4 -ДА и витамин Е; 5 группа - гербицид 2,4 - ДА, Тактивин и витамин Е.

Гербицид 2,4-ДА с помощью специального зонда вводили внутрижелудочно [Здольник Т.Д. и соавт., 2000]. Контрольные животные получали дистиллированную воду внутрижелудочно в том же объеме, что и при введении соответствующих препаратов.

Для затравки использовали коммерческий препарат гербицида, содержащий диметиламинные соли 2,4-Д - 50%, хлорфенолы - около 2%, в том числе 2,4-дихлорфенол — 0,25%, другие хлорорганические соединения - около 1,5%, включая диоксины в средней концентрации 30 нг/кг, в том числе ТХДД - 1 нг/кг (по данным лаборатории Уфимского АО "Химпром"). Подострое отравление моделировали ежедневным внутрижелудочным введением гербицида в дистиллированной воде в течение 28 дней в дозе 42 мг/кг, что соответствует суммарной дозе 1200 мг/кг, т.е. ЛД50 [Буслович С.Ю., 1963; Медведь Л.И., 1974; Павлов А.В., 1986].

Токоферол вводили внутрижелудочно на оливковом масле ежедневно в течение 7 дней, начиная с 29 дня после введения токсиканта, в оптимальной иммуностимулирующей и мембраностабилизирующей дозе (30% раствор токоферола ацетата, ОАО «ICN Марбиофарм», РФ, Йошкар-Ола) - 50 мг/кг [Воронов Г.Г. и соавт., 1983; Мазгутов В.З., 1987; Зверинский И.В. и соавт., 1997; ПрошинаЛ.Г., 1998].

Тактивин 0,01% раствор для инъекций (АООТ "Биомед" им. И.И.Мечникова) разводили в физиологическом растворе хлористого натрия и вводили ежедневно внутримышечно в течение 7 дней в дозе 0,25 мг/кг после окончания введения гербицида [Сибиряк СВ., 1990].

В работе были использованы следующие методы:

Морфологические исследования Материал фиксировали в забуференком растворе нейтрального 12% формалина. Изготавливали парафиновые срезы толщиной 6-7 мкм.

Для изучения цитоархитектоники и состояния базофильного вещества нейронов ганглии чревного сплетения окрашивали гематоксилином и эозином, и по методу Ниссля.

Морфометрический анализ включал измерение объема цитоплазмы и ядра нейронов, гепатоцитов. Его проводили под масляной иммерсией при увеличении 90. На препаратах, окрашенных гематоксилином и эозцном, с помощью окулярной сетки и окулярной линейки измеряли малый и большой диаметры ядра

и цитоплазмы нейронов чревного сплетения и гепатоцитов печени. Показатели-объема тел перикариона нейрона, их ядер, ядерно - цитоплазменное отношение определяли по формуле Ташке К. (1980): V = П/6хАхВ» Ядерно - цитоплазменное отношение вычисляли по формуле ЯЦО = V/V^ - VS!,

Электронномикроскопические исследования. Для исследования чревного сплетения и Печени методом трансмиссионной электронной микроскопии кусочки образцов фиксировали в 2,5% - ном глутаральдегидном фиксаторе на фосфатном, буфере Миллонига в течение 2часов, затем после промывания в фосфатном буфере под стереомикроскопом проводили препарирование ганглиев. Далее, кусочки органов вновь промывали в фосфатном буфере и дофиксировали в 1%-ном буферном растворе четырехокиси осмия в течение 1 часа и заливали в эпоксидную смолу аралдит. Ультратонкие срезы изготавливали на ультрамикротоме LKB -3 и изучали под электронным микроскопом JEM — 100S.

Биохимические исследования

Для исследования активности АЛТ, ACT и билирубина (общего и прямого)-использовали стандартные тест - наборы.

Определение активности АЛТ (КФ 2.6.1.2) проводили в сопряженной системе. В ходе первой реакции аланинаминотрансфераза катализирует трансаминирование аланина и а - кетоглутарата в пируват и L - глутамат. Далее в присутствии лактатдегидрогеназы пируват восстанавливается до лактата с параллельным окислением НАДН до НАД".

Определение активности АСТ (КФ 2.6.1.1) проводили в сопряженной системе. В ходе первой реакции аспартатаминотрансфераза катализирует трансаминирование L - аспартата и а - кетоглутарата в оксалоацетат и L глутамат. Далее в присутствии малатдегидрогеназы оксалоацетат восстанавливается до маната с параллельным окислением НАДН до НАД. Изменение оптической плотности регистрировали при 340нм.

Определение билирубина в сыворотке крови проводили по методу Иендрашика. В основе метода лежит реакция Ван ден Берга, описавшего способность билирубина давать розово-фиолетовое окрашивание с диазореактивом Эрлиха. Интенсивность образующейся окраски прямопропорциональна концентрации билирубина в растворе. Разрушение билирубин-альбуминового комплекса (свободный или непрямой билирубин) осуществляли кофеиновым реактивом, который одновременно перевидит билирубин в растворимое диссоциированное состояние. Интенсивность образующейся окраски измеряли на ФЭКе при зеленом светофильтре (563 нм), а количество билирубина определяли по калибровочному графику.

2.2. Морфофункцйональная характеристика чревного сплетения и печени у клинически здоровых животных

Нервная система, как интегрирующая, координирующая и адаптационно трофическая система, обеспечивает целостность организма и его гармоничное

единство с окружающей средой. Она осуществляет перестройку и приспособление его органов и систем к конкретным условиям существования и функционирования. Все процессы, происходящие в организме (рост, развитие, обмен веществ, размножение), их взаимосвязь и интенсивность осуществляются с участием прежде всего вегетативного отдела [Юдичев КХФ. с соавт., 1988].

В настоящее время все больше исследователей считают, что симпатическая и парасимпатическая части нервной системы находятся в реципрокных физиологических отношениях [Домбровский Б.А., 1948; Рыжих А.Ф., 1963; Попкова Г.А., 1966; Акаевский А.И, 1968; Михайлов Н.В.,. 1970].

Симпатическая нервная система иннервирует кровеносные сосуды [Кснакбаев ПК., 1948; Григорьева Т.А., 1954; Михайлов Н.В., 1985; Дудко И.С., 1991].

Чревное сплетение является крупным нервным образованием симпатической нервной системы брюшной полости, которое участвует в иннервации печени, селезенки, желудка и кишечника [Приказчикова З.И., 1971; Лобко П.И., 1976; Байматов В.Н., 1991].

Изучением структурной организации чревного сплетения занимались Миндубаев Ю.Х. (1961); Соколова М.А. (1963); Короткое А.Г. (1969); Приказчикова З.И. (1971); Лобко П.И (1976); Яшина Г.И. (1986); Малашко В.В. (1987, 1990) и многие другие.

Исследование чревного сплетения крысы показало, что оно образовано путем концентрации нейронов вокруг начальной части чревной и краниальной брыжеечных артерий. В отдельных случаях мы обнаруживали скопления нейронов, направляющие нервные ветви к надпочечнику. Ганглии чревного сплетения окружаются тонкой капсулой из двух или трех слоев уплощенных периневральных клеток, между ними локализуются тонкие пучки коллагеновых волокон.

Морфометрические исследования показали, что нейроны отличаются по размеру: крупные (9329,6 мкм3), средние (4868,5 мкм3), мелкие (2632,9 мкм3) (табл.1). В ганглиях средние по размеру нейроны составляют 62%. В большинстве нейронов наблюдается высокое ядерно-цитоплазменное отношение (0,4). Ядра имеют вид светлых пузырьков, так как гетерохроматин образует очень мелкие глыбки. Размеры ядрышек коррелируют с размерами перикариона и степенью развития базофильного вещества. Иногда встречаются спаренные нейроны, которые ограничены узким межклеточным пространством друг от друга. Базофильное вещество в цитоплазме нейронов образует глыбки среднего и мелкого размера. С перикарионом нейрона контактируют 2-3 нейроглиоцита.

Ультраструктурный анализ установил, что значительную часть цитоплазмы занимает аппарат синтеза белка. Это рибосомы, полисомы и множество коротких и средней длины цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума.

Величина и форма скоплений варьирует, что согласуется со светооптическими исследованиями. В крупных нейронах цистерны ГЭР располагаются параллельно на периферии нейронов. В цитоплазме отдельных нейронов содержатся многочисленные митохондрии с хорошо развитыми кристами.

Следует отметить, что в некоторых нейронах цитоплазма имеет светлый вид из-за уменьшения количества органелл в периферической части цитоплазмы , что указывает на их различное функциональное состояние.

В чревном сплетении крысы преобладают тонкие миелиновые и безмиелиновые волокна. В безмиелиновых волокнах содержатся 4-6 осевых цилиндров. В осевых цилиндрах содержатся нейрофиламенты, микротубулы, митохондрии. Нервные волокна располагаются одиночно или пучками.

В ганглиях находятся кровеносные капилляры, образованные эндотелиоцитами удлиненной формы. В ядрах эндотелиоцитов отмечается равномерное содержание эухроматина и гетерохроматина. Поверхность эндотелиальных клеток без изменений.

Печень крысы покрыта тонкой соединительнотканной капсулой, отдающей вглубь органа очень тонкие прослойки из тонких пучков коллагеновых волокон, фибробластов. Границы печеночных долек определяются по расположению междольковых сосудов и желчных протоков, которые образовывают триады.

От центральной вены радиально расходятся печеночные балки (трабекулы), построенные из двух рядов гепатоцитов. Гепатоциты, расположенные в периферической части дольки, лучше воспринимают красители и окрашиваются более интенсивно, цитоплазма их однородная. У гепатоцитов расположенных вокруг центральных вен цитоплазма более зернистая и светлая. Клетки имеют одно, реже два, довольно крупных ядра (191,46 мкм3) с хорошо выраженной ядерной оболочкой.

Внутридольковые капилляры сливаются в центральные вены, стенка которых очень тонкая и образована одним слоем эндотелиальных клеток. Стенка междольковых желчных протоков хорошо выявляется и состоит из однослойного кубического или призматического эпителия.

Электронно-микроскопические исследования показывают, что в цитоплазме гепатоцитов располагаются многочисленные митохондрии с хорошо различимыми кристами. Цистерны ГЭР представлены развитыми канальцами с многочисленными прикрепленными и свободными рибосомами. Компоненты гладкого эндоплазматического ретикулума (ГЛЭР), комплекса Гольджи и лизосомы располагаются на билиарном полюсе гепатоцита.

Полученные данные согласуются с исследованиями многих авторов [Жаров А.В., 1975; Блюгер А.Ф. и соавт., 1989; Байматов В.Н., 1991; Дудко И.С., 1991]

2.3. Морфофункцнональное состояние чревного сплетения и печени при воздействии гербицида 2,4-ДА

Одной из актуальных медико-биологических проблем является изыскание путей коррекции повреждающего действия экотоксикантов на организм человека и животных. Производные 2,4-дихлофеноксиуксусной кислоты - эффективные и широко используемые в сельском хозяйстве гербициды - с гонадотропным, эмбрио- , иммуно- и гепатотоксическим и нейротоксическим действием [Жамсаранова СД., 1994 ;Каюмова А.Ф. 1996; Мыщкин В.АЛ998; Имельбаева

Э.А., 1999;Муфазалова Н.А., 2002].

Некоторые отделы ВНС подробно изучены при различной патологии [Швалев В.Н., 1965,1995; Швалев В.Н. и соавт., 1982; Иванов Н.М. и соавт., 1991; Ярыгин В.Н., 1994 и другие].

Известно, что благодаря общности иннервации и кровообращения органов брюшной полости при гепатозе развивается сочетанная патология, которая проявляется гепато-ренальным синдромом [Байматов В.Н., 1991].

Нами установлено, что при интоксикации 2,4-ДА в ганглиях чревного сплетения количество нейронов значительно меньше, чем в контрольной группе. Обнаруживаются нейроны средних и малых размеров. В большинстве нейронов уменьшается количество глыбок базофильного вещества и интенсивность их окрашивания, часть нейронов сморщены, имеются клетки «тени». Ядра нейронов имеют извилистые контуры и окрашены интенсивнее в связи с увеличением количества гетерохроматина. В мантийных капсулах глиоциты имеют сморщенный вид.

Часто в ганглии встречаются нейроны, тесно контактирующие друг с другом. Представляет интерес то, что клетки находятся в различном морфофункциональном состоянии.

В отдельных нейронах в чревном сплетении при воздействии токсиканта деструктивные изменения выражены в большей степени. В них количество элементов белоксинтезирующего аппарата резко снижено, сохранившиеся элементы низкой электронной плотности, что является показателем уменьшения содержания нуклеиновых кислот и белка. У плазмолеммы образуется обширная бесструктурная зона в результате слияния вакуолей. Ядро прилежащего глиоцита пикнотичное и сильно удлинено, в цитоплазме определяются вакуоли и редкие рибосомы.

В ряде нейронов гранулы липофусцина, образовавшиеся в результате деструкции мембранных органелл, локализуются либо в периферических участках, либо вблизи ядра. В глиоцитах дистрофические изменения проявляются вакуолизацией и накоплением остаточных телец.

В некоторых нейронах деструкция органелл значительная и имеются только отдельные мелкие скопления рибосом. В контактирующем глиоците в отличие от интактных ганглиев, ядро в активном морфофункциональном состоянии, гетерохроматин образует узкую полосу, хорошо видимы ядерные поры, в цитоплазме имеются многочисленные фагосомы. Возможно, глиоцит участвует в удалении деструктивных участков нейроплазмы.

В осевых цилиндрах нервных волокон обнаруживается осмиофилия, реже снижается электронная плотность. В НЛЦ изменяется строение мембранных органелл, увеличивается количество фаголизосом и крупных вакуолей. В миелиновых нервных волокнах наблюдается локальное изменение миелина со стороны аксона, либо его значительное повреждение. В межклеточном веществе коллагеновые волокна теряют электронную плотность. Фибробласты содержат крупные вакуоли, остаточные тельца.

Деструктивные изменения в нейронах чревного сплетения сопровождаются повреждением стенок кровеносных сосудов. В кровеносных капиллярах эндотелиоциты сморщенные, иногда образуются микроворсинки на базальной поверхности. Так в артерии мышечного типа внутренняя эластическая мембрана теряет извилистый контур, а иногда не просматривается. В средней оболочке сосуда ядра гладкомышечных клеток разнообразной формы, некоторые расширяются, другие деформируются. В адвентиции нарушается расположение и структура коллагеновых волокон, между пучками образуются большие щели.

К стенке артерии прилегает нервный пучок, ход осевых цилиндров извитой. Дистрофические изменения выражены в нейральном и глиальном компонентах нервных волокон.

Светооптические исследования печени показали, что по сравнению с контрольной группой животных отмечаются выраженные нарушения гемодинамики в виде застойной гиперемии центральных вен и синусоидных капилляров. В последних часто отмечаются явления стаза, очагового тромбоза с кровоизлиянием в перисинусоидные пространства. Также наблюдаются значительные расширения перисинусоидных пространств. В цитоплазме гепатоцитов различных зон обнаруживается достаточно равномерно распределенная мелкокапельная и пылевидная жировая дистрофия.

Полнокровие вен и синусоидных капилляров сопровождается спазмом портальных артерий. В печеночных дольках характерен полиморфизм ядер гепатоцитов по сравнению с контрольной группой. Значительные изменения выявлены во внутрипеченочных желчных протоках. Они характеризуются расширением просвета и пролиферацией эпителия. Морфометрические исследования показали увеличение объемов ядер и уменьшение объема цитоплазмы (табл.2). Ядра становятся более светлыми в связи с уменьшением размера глыбок гетерохроматина и появлением мелких вакуолей. В стенках синусоидных капилляров увеличивается частота встречаемости ЗРЭ, в большинстве из них наблюдаются деструкция ядер и акрпление остаточных структур, что свидетельствует о значительном снижении их функциональной активности. Вдоль синусоидных капилляров располагаются группы лимфоцитов. В гепатоцитах наблюдается образование зернистого материала. Картины некроза обнаруживаются в области центральной вены. Часто центральная вена в печеночной дольке располагается эксцентрично. В некоторых дольках нарушается балочное строение гепатоцитов.

Ультраструктурный анализ показал, что в гепатоцитах наиболее выражены изменения размеров, формы, электронной плотности митохондрий. Также отмечается уменьшение количества крист, что приводит к снижению их функциональной активности. В гепатоцитах повреждаются цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума, уменьшается число свободных полисом.

Наши исследования согласуются с данными Мусиной Л.А. (1999), которая установила, что наиболее существенные изменения наблюдаются в содержании

жировых включений. Жир откладывается в виде мелких и крупных капель, образовавшихся в результате слияния жировых включений. Между каплями жира располагаются вакуоли различных размеров, образовавшихся путем резкого расширения просветов цистерн эндоплазматического ретикулума.

2. 4. Морфофункциональное состояние чревного сплетения и печени при интоксикации 2,4-ДА и последующей коррекции токоферолом

Универсальным механизмом повреждающего действия веществ, обладающих неспецифической токсичностью, является развитие оксидативного стресса, который влечет за собой активацию процессов свободнорадикального окисления, и мембранотоксический эффект, проявляющийся в нарушении структуры и функциональной активности мембран [Митрохин Н. М., 1996; Мышкин В. А., 1998; Иноятова Ф.Х., Хакимов 3. 3., 1999].

С учетом механизмов повреждающего действия гербицида 2,4 — ДА в качестве средства корригирующей терапии нами был выбран жирорастворимый витамин Е, обладающий, как известно, антиоксидантным, мембраностабилизирующим, иммуномодулирующим, гепатопротекторным действием. Установлено уменьшение содержания витамина Е в организме при воздействии экотоксикантов [Конь И.Я. 1986; Щепанский О.В., Давлетов Э.Г., 1998; Leo M. A. et al., 1986].

При коррекции токоферолом в ганглиях чревного сплетения крысы количество нейронов значительно меньше, чем у животных контрольной группы. Кроме того, отмечаются значительные бесструктурные зоны, образовавшиеся в результате лизиса нейронов, нервных волокон, коллагеновых волокон. При окраске гематоксилином и эозином выявляются более четкие контуры нейронов, чем при интоксикации. В ядре усиливаются процессы синтеза РНП, кариоплазма имеет более интенсивную окраску, чем цитоплазма. Ультраструктурный анализ показал разнообразие формы, размеров нейронов и уровня компенсаторно-приспособительных изменений.

В отдельных нейронах белоксинтезирующий аппарат заполняет цитоплазму. Цистерны ГЭР группируются в тельца Ниссля. Встречаются нейроны с крупными вакуолями в различных участках цитоплазмы. Ядра неправильной формы и извилистой кариолеммой, что повышает площадь соприкосновения ядра с цитоплазмой и увеличивает возможности обмена веществ. Встречаются нейроны с большими липофусциновыми гранулами, образующимися в результате разрушения цитомембран.

Нами установлено усиление метаболизма в кровеносных капиллярах. На их люминальной и базальной поверхностях образуются микроворсинки, некоторые отпочковываются и переходят в межклеточное пространство и плазму.

При использовании токоферола в нервных волокнах отмечены положительные изменения. Осевые цилиндры средней электронной плотности в связи с увеличением числа нейрофиламентов и микротубул. Однако в большинстве митохондрий регистрируется просветленный матрикс и укороченные кристы. В мантийных капсулах отмечены гипертрофированные глиоциты, что также

свидетельствует об их активизации.

В печени гепатоциты полигональной формы и мелкозернистой цитоплазмой. Очаговая мелкозернистая жировая дистрофия наблюдается в гепатоцитах, располагающихся вокруг центральных вен, несколько реже в промежуточной зоне. Некроз гепатоцитов отмечается редко. Отмечено обеднение гликогеном гепатоцитов, располагающихся в области центральных вен. В гепатоцитах, располагающихся в периферической части печеночной дольки, насыщенность гликогеном умеренная. Следовательно способность к детоксикации печени животных данной группы понижена.

В ядре гепатоцитов отмечается большое количество РНП-гранул по сравнению с группой, где не проводилась коррекция. Очаги регенерации локализуются в перинуклеарной и периферической частях цитоплазмы. В митохондриях часть матрикса светлая, а остальная часть содержит кристы различной длины. В гепатоцитах цистерны ГЭР локализуются рядом с митохондриями. Включения гликогена при электронномикроскопическом анализе не обнаруживаются.

В сосудах сохраняются застойные изменения. Синусоидные капилляры расширены, цитоплазма эндотелиоцитов уплощена, митохондрии набухшие, с укороченными кристами имеются вакуоли и липидные капли различных размеров.

Таким образом, индивидуальное применение токоферола обеспечивает частичную компенсацию деструктивных изменений в чревном сплетении и печени в условиях интоксикации гербицидом 2,4-ДА.

2.5. Морфофункциональное состояние чревного сплетения и печени при интоксикации 2,4-ДА и последующей коррекцией Тактивином

К настоящему времени получен ряд препаратов, основанных на тимусных гуморальных факторах: тимозин, тимопоэтин, тимусный гуморальный фактор, тималин, Тактивин и др. [Арион В.Я., 1987].

Препараты тимуса с успехом применяются при хронических заболеваниях печени [Подымалова С.Д. и соавт., 1992].

Препараты тимуса повышают аденилатциклазную активность и накопление цАМФ в клетках, что усиливает их созревание и дифференцировку [Мартынов В.Ф. и соавт., 1986].

Шевчук Н.Е. (2002) обосновала целесообразность избирательного применения иммунокорригирующих препаратов пептидов тимуса (Тактивин, тималин, тимоген) в комплексной терапии тяжелого течения офтальмогерпеса при втором типе иммунного ответа, которое характеризуется значимым снижением числа Т-хелперов, иммупнорегуляторного индекса, увеличением числа клеток, экспрессирующих рецептор апоптоза, а также выраженным повышением уровня IL-lp,TNF-a и ^-6.

Разницына ВА- (1994) установила, что иммуномодуляторы Тактивин и миелопид при их предварительном введении животным положительно влияют на морфофункциональное состояние органов нейроэндокринной системы при

экспериментальном пастереллезе, усиливая в них компенсаторные процессы.

Наши исследования показали, что в чревном сплетении в условиях интоксикации гербицидом 2,4 - ДА и коррекции Тактивином количество нейронов меньше, чем в контроле, имеются клетки с едва видимыми границами. Окрашивание полутонких срезов метиленовым синим выявило наличие в ганглиях бесструктурных зон различных размеров, образовавшихся в результате некротических процессов в нейронах, глиоцитах и внеклеточном матриксе.

В проходящих нервных волокнах наблюдается увеличение количества НЛЦ, их ядра гипертрофируются, увеличивается длина и ширина, количество эухроматина. Встречаются сморщенные глиоциты.

В ядрах нейронов крупные, интенсивно окрашенные ядрышки, что отражает высокий уровень синтеза РНК. В большинстве нейронов глыбки базофильного вещества имеют оформленные контуры и располагаются преимущественно в перинуклеарной зоне, так как регенерация белоксинтезирующего аппарата обусловлена интенсивным синтезом рРНК. Глыбки базофильного вещества вариабельны по размеру и интенсивности окрашивания.

Ультраструктурный анализ выявил большое количество РНП-гранул в кариоплазме. В перинуклеарной зоне нейрона ярко выражены компенсаторно-приспособительные изменения и увеличение синтеза белка. В нейронах обнаруживаются крупные скопления цистерн ГЭР и обилие сводных полисом. Цистерны ГЭР умеренно расширены, что свидетельствует о высоком уровне синтеза белка. Митохондрии располагаются группами, в них просветляется матрикс, внутренняя мембрана образует короткие выступы, что отражает дефицит энергетических функций нейронов. В цитоплазме деструктивные изменения представлены вакуолями различных размеров и скоплениями липофусциновых гранул. Таким образом, можно сделать заключение, о том, что компенсаторно-приспособительные изменения в нейронах происходят с различной интенсивностью. Положительные изменения обнаруживаются в нервных волокнах. В осевых цилиндрах появляются рибосомы, митохондрии, мелковезикулярные образования, являющиеся, по-видимому, синаптическими пузырьками.

Кровеносные сосуды проходят между клеточными скоплениями и представлены в большем количестве, чем в чревном сплетении крыс при интоксикации.

В печени у животных данной группы хорошо видны печеночные дольки, лейкоцитарные инфильтрации незначительные. Ядра гепатоцитов в большинстве случаев имеют равные размеры. В ядрах содержатся крупные ядрышки, что свидетельствует об усилении синтеза рибонуклеопротеидов. В области триад отмечаются скопления лимфобластов, лимфоцитов и макрофагов. Ядра у большинства клеток светлые, что отражает усиление синтетических процессов. В области центральных вен в ряде печеночных долек сохраняются отечные гепатоциты со слабо видимыми клеточными границами. В ряде гепатоцитов наблюдается вакуолизация цитоплазмы. В синусоидных капиллярах хорошо

видимы эндотелиоцигы и ЗРЭ. Диаметр просвета синусоидных капилляров вариабелен и при приближении к центральной вене расширяется.

Ультраструктурный анализ подтвердил светооптические исследования. Часто в ядрах гепатоцитов содержится два ядрышка, компактный компонент из фибриллярного материала окружен кольцом гранулярного компонента, состоящего из рибонуклеопротеидных гранул. Гетерохроматин располагается периферически в виде узкой полосы вдоль кариолеммы, также хорошо видимы ядерные поры. В цитоплазме гепатоцитов вокруг ядра располагается большое количество рибосом, восстанавливается количественное содержание цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, в цистернах просвет слабо выражен. Представляет интерес наличие тесной связи между энергетическим и белоксинтезирующим аппаратами. В цитоплазме ряда гепатоцитов отмечаются бесструктурные зоны, образовавшиеся в результате вакуолизации митохондрий, резкого, нарушения диаметра цистерн эндоплазматического ретикулума. Морфометрические исследования установили относительное приближение показателей объема ядер и цитоплазмы гепатоцитов к уровню контроля.

Таким образом, применение Тактивина оказывает нормализующее влияние на морфофункциональное состояние гепатобилиарной системы и чревного сплетения в условиях подострой интоксикации 2,4-ДА

2. 6. Морфофункциональное состояние чревного сплетения и печени при интоксикации 2,4-ДА и последующей сочетанной коррекции токоферолом и Тактивином

Несомненно, одним из ведущих механизмов гепатотоксического действия гербицида 2,4 - ДА, как и других экотоксикантов подобного типа, является активация свободно-радикального ПОЛ и, как следствие, мембранотоксичеркое действие, нарушение энергетического и пластического обмена [Имельбаева Э.А., 1998; Мышкин В.А., 1998; Муфазалова Н.А., 2002]. Эти же механизмы лежат в основе повреждающего воздействия на организм ряда лекарственных препаратов, особенно цитостатиков.

В ряде исследований показано, что сочетанное применение токоферола и Тактивина выраженно снижает гематологическую, инфекционную, гастроинтестинальную и печеночную токсичности у больных лимфомой Ходжкина ИБ стадии в условиях проведения противоопухолевой терапии [Муфазалова Н.А., 2002; Дорофеева Н.В., 2003]. Это особенно ценно, так как известно, что значительная гепатотоксичность противоопухолевых препаратов часто является причиной прерывания и даже прекращения эффективного лечения онкологических больных.

Показана эффективность сочетанного применения витамина Е и Тактивина с целью коррекции важных побочных эффектов циклофосфана, одного из основных противоопухолевых препаратов: нарушения количественных и качественных показателей функционирования фагоцитарного звена неспецифической, резистентности, активности микросомальных ферментов печени

морфофункциональных нарушений гепатобилиарной системы [Муфазалова Н.А., 2002].

В наших исследованиях показано, что у животных, получавших с целью коррекции комбинацию «Тактивин + витамин Е» количество нейронов относительно больше, чем в ганглиях крыс, где использовали коррекцию индивидуально Тактивином или токоферолом. Ядра у части нейронов окрашиваются интенсивнее, чем в контроле, что является показателем высокого уровня синтеза РНК и способствует активизации обменных процессов в цитоплазме. Нейроны неправильной формы в связи с образованием многочисленных конусов роста регенерирующих дендритов.

Ультраструктурный анализ выявил, что в ряде нейронов цитоплазма заполняется умеренно или сильно расширенными цистернами ГЭР, имеются вакуоли различных размеров, образовавшихся в результате деструкции митохондрий. В отдельных нейронах мало органелл, обеспечивающих синтез белка.

Исследование нейрон - глиальных взаимоотношений показало, что активизируются обменные процессы между нейроном и контактирующими с ним глиоцитами. В последних гипертрофия цитоплазмы обусловлена увеличением количества органелл: рибосом, цистерн гладкого эндоплазматического ретикулума, митохондрий. Микроворсинки, образующиеся на их поверхности, впячиваются в цитоплазму нейрона, в результате чего увеличивается площадь соприкосновения.

В ганглиях чревного сплетения повышается количество безмиелиновых волокон, образовавшихся благодаря усилению внутриклеточной регенерации нейронов. В осевых цилиндрах хорошо развиты нейрофиламенты, микротубулы и митохондрии. В миелиновых волокнах наблюдаются изменения миелинового слоя, в отдельных НЛЦ обнаруживаются протофиламенты, митохондрии, свободные рибосомы.

В кровеносных капиллярах усиливаются метаболические процессы в ядре и цитоплазме эндотелиоцитов. Увеличивается объем цитоплазмы и количество митохондрий, рибосом и микропиноцитозных везикул.

В печени у животных данной группы хорошо видимы печеночные дольки, лимфоцитарная инфильтрация незначительна. Хорошо просматриваются синусоидные капилляры и ЗРЭ. Большинство гепатоцитов имеет четко очерченные контуры.

Ультраструктурный анализ показал, что комбинация препаратов оказывает выраженное влияние на компенсаторно-приспособительные процессы в печени. В цитоплазме гепатоцитов увеличивается количество удлиненных митохондрий с многочисленными кристами, что отражает активность окислительно-восстановительных процессов. Плотность расположения митохондрий в гепатоцитах различна. На васкулярном полюсе плазмолемма гепатоцитов образует многочисленные микроворсинки, что обусловливает

активизацию обменных процессов с синусоидными капиллярами. В гепатоцитах

обнаруживаются липидные капли различных размеров, то есть присутствуют признаки жировой дистрофии.

Таблица 1

Морфометрические показатели объема цитоплазмы и объема ядра, ядерно-цнтоплазменного отношения [ЯЦО] нейронов чревного сплетения, мкм3

Группа животных Виды нейронов Умцит± Утцит ЯЦО

1 Крупные 9329,60 ± 666,40 1564,20 ±111,73 • 0,20

Средние 4868,50 ±73,75 1381,80 ±20,94 0,44

Мелкие 2632,90 ± 131,64 831,30 ±41,56 0,43

2 Средние 2477,34 ± 309,66 162,34^20,28 0,07

Мелкие 1147,45 ± 12,47 324,14 ±3,52 0,09

3 Крупные 6385,10 ±212,83 1481,25 ±49,38 0,32

Средние 4403,58 ±157,27 1233,09 ±44,03 0,41

Мелкие 2668,88 ±63,54 803,46 ±19,13 0,42

4 Крупные 5480,01 ± 195,71 2424,36 ±86,58 5,51

Средние 4629,95 ±110,23 2035,14 ±48,45 0,88

Мелкие 2631,50 ±87,71 1274,55 ±42,48 1,02

5 Крупные 7620,19 ± 293,08 1625,14 ±62,50- • 0,30*».

Средние 4444,10 ±116,95 1123,06 ±29,55 0,39

Мелкие 2377,62 ± 66,04 865,98 ±24,05 0,82

Примечание (здесь и далее):

1 группа — контроль [интактные животные]

2 группа - животные при подбстрой интоксикации 2,4-ДА

3 группа - при коррекции витамином Е

4 группа - при коррекции Тактивином

5 группа - при сочетанной коррекции витамином Е и Тактивином

В синусоидных капиллярах размеры ядер звездчатых ретикулоэндотелиоцитов увеличиваются, в них крупные ядрышки, в кариоплазме возрастает содержание эухроматина. В результате активизации пластинчатого комплекса образуются группы первичных лизосом, крохме них имеются свободные рибосомы, митохондрии микропузырьки и вакуоли.

В стенке артерий хорошо просматриваются внутренняя эластическая мембрана и ядра гладких миоцитов, в венах меньше выражены застойные явления. Сокращается количество лимфоцитов в области центральной вены и триад.

Таким образом, сочетанное использование Тактивина и токоферола в условиях подострой интоксикации 2,4-ДА более выраженно влияет на скорость восстановления структурной организации чревного сплетения и гепатобилиарной системы, чем их индивидуальное применение.

Таблица 2

Морфометрические показатели объема цитоплазмы и объема ядра

3

гепатоцитов печени, мкм

Группа животных Умцит ± V тцит ± V т я

1 1023,96 ± 10,23 191,46 ± 1,91

2 575,22 ± 5,75 227,75 ± 2,27

3 576,83 ± 5,76 172,15 ± 1,72

4 670,61 ± 6,70 201,36 ±2,01

5 700,03± 7,00 208,13 ±2,08

2. 7. Биохимические показатели функционального состояния печени в норме, при экспериментальной патологии и коррекции токоферолом, Тактивином и

их сочетанном применении

Ежедневное введение гербицида 2,4-ДА вызывало изменения гепатобилиарной системы, что подтверждается данными биохимических исследований.

На 7 сутки от начала ежедневного введения 2,4 - ДА выявлено повышение содержания в периферической крови АЛТ (до 127,49% по отношению к контролю), что может свидетельствовать о повышении проницаемости клеточных мембран гепатоцитов. Это сопровождалось развитием гипербилирубинемии: концентрация общего и прямого билирубина увеличилась до 200,13% и 143,19% соответственно. На 14 сутки сохранялась трансаминаземия (содержание АЛТ составило 176,23% по отношению к контролю) при незначительном снижении уровня общего билирубина (174,33% по отношению к контролю), который

оставался значительно выше нормы. На 28 сутки было зарегистрировано значительное повышение уровня и ACT (до 128,37% по отношению к контролю) на фоне сохраняющегося повышения уровня АЛТ (до 132,41%), что является отражением повреждающего воздействия гербицида на клеточные и субклеточные мембраны гепатоцитов. Также на 28 сутки сохранялась гипербилирубинемия (содержание общего и прямого билирубина составило 123,24% и 134,87% соответственно по отношению к контролю). К 36 суткам наблюдения содержание билирубина снижалось, но не нормализовалось, Гиперферментемия также уменьшалась, но не устранялась (содержание АЛТ составило 121,03%, a ACT -122,16% по отношению к контролю).

Применение токоферола значительно ослабляло повреждающее действие гербицида. Так, витамин Е устранял индуцированную гербицидом трансаминаземию на 36 сутки наблюдения: содержание АЛТ в сыворотке крови составило 92,35%, a ACT - 101,77% по отношению к контролю. Также нормализовалось содержание прямого билирубина (96,05%). Однако уровень общего билирубина оставался несколько выше нормы (118,66% по отношению к контролю).

Использование Тактивина с целью коррекции негативного влияния 2,4 - ДА также оказывало позитивное влияние: содержание АЛТ в сыворотке крови составило 119,85%, a ACT - 86,85% по отношению к интактным животным. Применение Тактивина устраняло индуцированную гербицидом билирубинемию (урозень общего билирубина снижался до 109,61%, а прямого - до 117,61%).

Сочетанное использование токоферола и Тактивина оказывало большее нормализующее влияние на показатели функциональной активности гепатоцитов. Об этом свидетельствует полное устранение гиперферментемии на 36 сутки наблюдения: содержание АЛТ составило 99,62%, a ACT - 95,09% по отношению к контролю. Также нормализовалось содержание билирубина, как общего, так и прямого, что составило 101,68% и 112,24% соответственно по отношению к контролю. Следует отметить, что индивидуальное и сочетанное с токоферолом применение Тактивина более эффективно, чем токоферол при изолированном применении, устраняло индуцированную гербицидом билирубинемию.

Полученные данные свидетельствуют о гепатозащитном влиянии токоферола, Тактивина и их комбинации в условиях интоксикации гербицидом 2,4 - ДА.

ВЫВОДЫ

1. Подострое пероральное отравление крыс гербицидом 2,4-ДА вызывает выраженные расстройства кровообращения и некробиотические изменения в чревном сплетении и печени; повышение активности исследованных ферментных систем:

а) в чревном сплетении определяется значительное сокращение киличества нейронов, их хроматофобия, лизис мембран ГЭР, уменьшение числа рибосом, накопление остаточных телец, осмиофилия осевых цилиндров нервных

волокон на фоне полнокровия, стаза, пикноза ядер эндотелиальных клеток и отека НЛЦ;

б) в печени обнаружены выраженные нарушения гемодинамики в форме венозного полнокровия, стаза, мелко- и крупнокапельная жировая дистрофия гепатоцитов, некроз печеночных клеток района центральной вены, расширение просвета и пролиферация эпителия междольковых желчных протоков. В области триад локализуются бчаговые лимфо-гистиоцитарные инфильтраты.

в) гербицид 2,4-ДА вызывает значительное повышение уровня АЛТ, ACT и выраженную билирубинемию.

2. Коррекция токоферолом повреждающего воздействия гербицида 2,4-ДА проявляется:

а) в чревном сплетении уменьшением числа полнокровных сосудов, отека стромы, укрупнением ядрышка, увеличением количества глыбок базофильного вещества, канальцев ГЭР в перинуклеарной зоне, увеличением количества и просветлением матрикса в митохондриях, укрупнением липофусциновых гранул в нейронах;

б) в печени компенсаторно-приспособительные процессы выражены ярче. Их проявлением является значительное уменьшение числа гепатоцитов в состоянии некроза, увеличение количества печеночных клеток с базофшшей цитоплазмы и формирование скоплений митохондрий. Крупное ядрышко и повышение плотности канальцев ГЭР определяются в гепатоцитах на периферии долек;

в) снижением трансаминаземии, прямого билирубина и сохранением повышенного уровня общего билирубина.

3. Применение Тактивина снижает повреждающий эффект гербицида 2,4-ДА, это находит отражение:

а) в чревном сплетении в увеличении числа нейронов, при уменьшении очагов запустения, базофилии цитоплазмы нервных клеток нарастании плотности расположения канальцев ГЭР, наличие крупного содержащего гранулярный компонент, ядрышка, в формировании групп митохондрий. В осевых цилиндрах наблюдается появление рибосом и мелких везикулярных образований, митохондрий, при снижении выраженности сосудистых расстройств;

б) в печени - в гипертрофии ЗРЭ, появлении скопления макрофагов, лимфобластов и лимфоцитов в области триад на фоне явлений внутриклеточной регенерации гепатоцитов и эпителия желчных протоков;

в) в устранении билирубинемии, сопровождающейся снижением активности АЛТ и ACT.

4. Структурно-функциональный анализ показал, что сочетанное использование токоферола и Тактивина для коррекции воздействия гербицида 2,4-ДА оказывает выраженный эффект на компенсаторно-приспособительные процессы:

а) в чревном сплетении на фоне мелких очагов запустения определяется равномерное распределение нейронов, обладающих четкими контурами, крупными базофильными глыбками в цитоплазме. В нейронах определяется светлое с крупным ядрышком ядро, равномерное распределение ГЭР, скопления

митохондрий с хорошо выраженными кристами. Наблюдается усиление нейроно-глиальных взаимоотношений и явлений ангиогенеза;

б) в печени репаративные процессы находят проявление в гипертрофии ЗРЭ, наличии лимфогистиоцитарных инфильтратов в междольковой соединительной ткани, нормализации структурной организации гепатоцитов, эпителия желчных протоков;

в) комбинированное использование Тактивина и токоферола приближает активность АЛТ и ACT к контрольной группе животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Токоферол и Тактивин рекомендуются в качестве средств коррекции гепато- и нейротоксических эффектов гербицида 2,4-ДА, как в индивидуальном, так и в комплексном их использовании.

2. Полученные данные указывают на необходимость проведения профилактических мероприятий у рабочих, занятых в производстве гербицида 2,4-ДА.

3. Полученные данные о морфофункциональном состоянии печени и чревного сплетения при интоксикации 2,4 - ДА могут быть использованы в учебном процессе, медицине, ветеринарии, а также при написании справочников и учебной литературы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Муфазалова Н.А., Шакирова Д.М. Морфофункциональная характеристика печени крыс после воздействия 2,4 -DA -гербицида и коррекции витаминами А и Е //В сб. «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных». - М. - 2003., С.306-307.

2. Шакирова Д.М. Морфофункциональная характеристика солнечного сплетения при использовании витаминов А.Е, и Т-активина //В сб. «Новые пробиотические и иммунотропные препараты в ветеринарии». — Новосибирск-2003., С.64-65.

3. Шакирова Д.М., Шакирова СМ. Ультраструктура печени и солнечного сплетения крыс после воздействия 2,4-ДА гербицида //В сб. «Современные проблемы иммуногенеза, теории и практики борьбы с паразитарными и инфекционными болезнями сельскохозяйственных животных». - М. - Уфа. -2004., С. 319-320.

4. Шакирова Д.М., Шакирова СМ. Светооптическая характеристика печени при воздействии 2,4-ДА гербицида и ее коррекция //В сб. «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии». - Томск. - 2004., Т.З, №3. - С.439.

5. Шакирова Д.М., Муфазалова Н.А. Гепатотоксические эффекты гербицида 2,4-ДА //Мат-лы ПО научно-практической конференциипреподавателей, сотр.-ков, аспир-овуниверситета,Уфа.-С. 151-153.

6. Шакирова Д.М., Муфазалова Н.А. Коррекция токоферолом гепатотоксических эффектов гербицида 2,4-ДА //Мат-лы 110 научно-практической конференции преподавателей, сотр.-ков, аспир-ов университета, Уфа. - С. 154 -156.

Список сокращений используемых в диссертации

2,4 - ДА аминная соль 2,4 - дихлорфеноксиуксусной кислоты

АЛТ аланинаминотрансфераза

ACT аспартатаминотрансфераза

ВНС вегетативная нервная система

ГЭР гранулярный эндоплазматический ретикулум

ГЛЭР гладкий эндоплазматический ретикулум

ЗРЭ звездчатый ретикулоэндотелиоцит

Е витамин Е

лд50 доза, вызывающая гибель 50 % животных

НАД никотинамидадениндинуклеотид

НЛЦ нейролеммоцит

ПОЛ перекисное окисление липидов

РНК рибонуклеиновая кислота

рРНК рибосомальная рибонуклеиновая кислота

РНП рибонуклеопротеид

Т Тактивин

ХОП хлорогранические пестициды

ЯЦО ядерно - цитоплазменное отношение

№ 0261 от 10 апреля 1998 года Подписано в печать 31 05 2004 г. Формат 60x84 Бумага типографская

Гарнитура Тайме Уел печ л 1,05 Тираж 100 экз Заказ №393 Издательство Башкирского государственного аграрного университета Типография Башкирского государственного аграрного университета Адрес издательства и типографии 450001, г Уфа, ул 50 лет Октября, 34

1157 7 4

Циркуляция ксенобиотиков техногенного происхождения и их воздействие на организм возросли до уровня, угрожающего здоровью населения.

Производные 2,4 - дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4Д) - эффективные и наиболее широко используемые в сельском хозяйстве гербициды. В современной программе по контролю за загрязнением пищевых продуктов наиболее опасными признаны хлорорганические пестициды и их метаболиты. Острая токсичность различных представителей ХОП лежит в широких пределах и применение большей части этих препаратов ограничено (Кашапов Р.Ш. и со-авт., 2003). Все эти соединения обладают значительной токсичностью и отдаленные последствия воздействия даже малых доз связаны с гонадотропным, эмбрио-, иммуно- и гепатотоксическим действием (Жамсаранова С.Д., 1994; Каюмова А.Ф., 1996; Имельбаева Э.А. и соавт., 2000).

Известно, что гепатобилиарная и иммунная системы являются наиболее уязвимыми к влиянию экотоксикантов (Мышкин В.А., 1998; Муфазалова Н.А., 2002). Среди механизмов развития этих нарушений имеет значение повреждение иммунокомпетентных клеток (Fournie М. et al., 2000; Jeon M.S., et al., 2000; Webster D. et al., 2000; Grasman K.A. et al., 2001), активация свободно-радикального окисления липидов биологических мембран (Мышкин В.А., 1998; Камилов Ф.Х., 1999).

Изучение патоморфологических изменений в нервной системе при различных профессиональных интоксикациях указывает на вовлечение в процесс нервной системы в целом и обнаруживает ряд изменений во всех элементах нервной ткани: в нервных клетках, сосудах, нервных волокнах и глии (Кали-муллина Л.Б., 1967; Толгская М.С., 1967). В части работ дана комплексная оценка нервной системы и печени (Niculesku S., Mandache Е., 1974; Карупу В.А., 1967; Дудко И.С., 1986, 1991; Байматов В.Н., 1991; Исанбаев Ч.И., 1994;

Шакирова С.М., 2001).

Несмотря на многочисленные исследования неблагоприятного воздействия гербицида аминной соли 2,4 - Д (2,4 - ДА) (Жамсаранова С.Д., 1994; Каюмова А.Ф., 1996; Гильманов А.Ж., 2000; Имельбаева Э.А. и соавт., 2000; Муфазалова Н.А., 2002), недостаточно изучено влияние экотоксиканта на ультраструктурную организацию печени и ее нервного аппарата, а также возможности коррекции этого повреждающего воздействия.

Коррекция нарушений, вызванных ксенобиотиками, возможна путем использования препаратов, обладающих сочетанно антиоксидантными и иммуно-модулирующими свойствами (Сибиряк С.В. и соавт., 1999; Муфазалова Н.А., 2002).

Известно, что жирорастворимый витамин Е обладает выраженным антиок-сидантным, иммуномодулирующим, мембраностабилизирующим действием, и, следовательно, представляется весьма перспективным в качестве средства профилактики и восстановительной терапии при воздействии данной группы экотоксикантов. С другой стороны, известно, что тимусные пептиды, в том числе Тактивин, наряду с иммуномодулирующим, оказывают выраженное ге-патопротекторное действие.

В ряде работ показано, что сочетанное применение токоферола с иммуно-модуляторами оказывает выраженное активирующее влияние на иммунную систему (Колосова Н.Г. и соавт., 1991; Del Rio М. et al., 1998).

Муфазаловой Н.А. (1993) установлено, что токоферол индивидуально и в комбинации с Тактивином оказывает выраженное стимулирующее влияние на активность фагоцитарных механизмов защиты, которым, как известно, принадлежит центральная роль в формировании практически всех специфических и неспецифических реакций иммунной системы.

Особую ценность данному направлению придает сочетание у токоферола свойств иммуномодулятора и антиоксиданта, обладающего мембраностабилизирующим эффектом (Плецитый, К.Д. 1997; Утешев Б.С. и соавт., 2001; Lee

C.Y. et al., 2000), поскольку мембраноповреждающее действие рассматривается как универсальная закономерность действия токсичных ксенобиотиков (Сетко

H.П. и соавт., 1987; Митрохин Н.М., 1996; Мышкин В.А., 1998). Следовательно, можно было ожидать, что использование комплекса лекарственных препаратов, обладающих антиоксидантным, гепатопротекторным, иммуномодулирующим и антитоксическим действием, позволит существенно улучшить состояние гепатобилиарной и нервной системы при воздействии этой группы экотоксикантов, что и определило актуальность настоящего исследования.

Цель исследования: структурно-функциональный анализ состояния чревного сплетения и гепатобилиарной системы при воздействии гербицида 2,4 -ДА и оценка эффективности репаративных процессов в них при индивидуальном и сочетанном применении токоферола и Тактивина.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

I. Анализ патоморфологических и ультраструктурных изменений, формирующихся в чревном сплетении и печени при подострой интоксикации гербицидом 2,4 - ДА.

2. Исследование репаративных процессов в тканях изучаемых систем при применении витамина Е.

3. Изучение компенсаторно-приспособительных изменений, формирумых в восстановительный период при применении Тактивина.

4. Структурно-функциональный анализ процессов адаптации организма при комбинированном использовании витамина Е и Тактивина.

Научная новизна работы.

Впервые изучены структурные изменения в чревном сплетении при интоксикации гербицидом 2,4-ДА. Углублены представления о повреждающем воздействии гербицида 2,4-ДА на ультраструктуру гепатобилиарной системы. Впервые изучено влияние индивидуального и сочетанного применения токоферола и Тактивина на репаративные процессы в чревном сплетении и гепатобилиарной системе в восстановительный период после воздействия гербицида 2,4-ДА и показана большая эффективность совместного использования токоферола и Тактивина для улучшения процессов репаративной регенерации в печени и чревном сплетении при подострой интоксикации гербицидом 2,4 — ДА.

Теоретическая и практическая значимость.

Полученные данные указывают на роль ВНС в развитии интоксикации гербицидом 2,4-ДА. Они углубляют представление о мембранотропном воздействии исследованного гербицида. Выполненная комплексная оценка репара-тивных процессов, происходящих в чревном сплетении и печени при использовании токоферола, Тактивина и их сочетании, формирует базис для разработки схем профилактико - терапевтических мероприятий.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Подострое пероральное отравление крыс гербицидом 2,4-ДА вызывает расстройства кровообращения и некробиотические процессы в паренхиматозных элементах чревного сплетения и печени, в основе которых лежит повреждающее действие данного гербицида на цитомембраны клетки.

2. Наибольшая эффективность репаративных процессов в чревном сплетении и гепатобилиарной системе после интоксикации гербицидом 2,4-ДА наблюдается при сочетанном применении токоферола и Тактивина.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на Российской научно-практической конференции «Новые пробиотические и иммунотропные препараты в ветеринарии» (Новосибирск, 2003); на Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Москва-Уфа, 2003); на международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию со дня рождения засл. деятеля РФ и РБ, д. в. н., профессора Аюпова Х.В. и 55- летаю кафедры паразитологии, микробиологии и вирусологии БГАУ (Москва -Уфа, 2004); на 110 научно-практической конференции преподавателей, сотрудников и аспирантов БГАУ «Достижения аграрной науки» (Уфа, 2004). Публикации: По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

ВЫВОДЫ

1. Подострое пероральное отравление крыс гербицидом 2,4-ДА вызывает выраженные расстройства кровообращения и некробиотические изменения в чревном сплетении и печени; повышение активности исследованных ферментных систем: а) в чревном сплетении определяется значительное сокращение количества нейронов, их хроматофобия, лизис мембран ГЭР, уменьшение числа рибосом, накопление остаточных телец, осмиофилия осевых цилиндров нервных волокон на фоне полнокровия, стаза, пикноза ядер эндотелиальных клеток и отеке НЛЦ; б) в печени обнаружены выраженные нарушения гемодинамики в форме венозного полнокровия, стаза, мелко- и крупнокапельная жировая дистрофия гепатоцитов, некроз печеночных клеток района центральной вены, расширение просвета и пролиферация эпителия междольковых желчных протоков. В области триад локализуются очаговые лимфо-гистиоцитарные инфильтраты. в) гербицид 2,4-ДА вызывает значительное повышение уровня AJIT, ACT и выраженную билирубинемию.

2. Коррекция токоферолом повреждающего воздействия гербицида 2,4-ДА проявляется: а) в чревном сплетении уменьшением числа полнокровных сосудов, отека стромы, укрупнением ядрышка, увеличением количества глыбок базофильного вещества, канальцев ГЭР в перинуклеарной зоне, увеличением количества и просветлением матрикса в митохондриях, укрупнением липофусциновых гранул в нейронах; б) в печени компенсаторно-приспособительные процессы выражены ярче. Их проявлением является значительное уменьшение числа гепатоцитов в состоянии некроза, увеличение количества печеночных клеток с базофилией цитоплазмы и формирование скоплений митохондрий. Крупное ядрышко и повышение плотности канальцев ГЭР определяются в гепатоцитах на периферии долек; в) снижением трансаминаземии, прямого билирубина и сохранением повышенного уровня общего билирубина.

3. Применение Тактивина снижает повреждающий эффект гербицида 2,4-ДА, это находит отражение: а) в чревном сплетении в увеличении числа нейронов, при уменьшении очагов запустения, базофилии цитоплазмы нервных клеток, нарастании плотности расположения канальцев ГЭР, наличие крупного содержащего гранулярный компонент, ядрышка, в формировании групп митохондрий. В осевых цилиндрах наблюдается появление рибосом и мелких везикулярных образований, митохондрий, при снижении выраженности сосудистых расстройств; б) в печени - в гипертрофии ЗРЭ, появлении скопления макрофагов, лимфобластов и лимфоцитов в области триад на фоне явлений внутриклеточной регенерации гепатоцитов и эпителия желчных протоков; в) в устранении билирубинемии, сопровождающейся снижением активности АЛТ и ACT.

4. Структурно-функциональный анализ показал, что сочетанное использование токоферола и Тактивина для коррекции воздействия гербицида 2,4-ДА оказывает выраженный эффект на компенсаторно-приспособительные процессы: а) в чревном сплетении на фоне мелких очагов запустения определяется равномерное распределение нейронов, обладающих четкими контурами, крупными базофильными глыбками в цитоплазме. В нейронах определяется светлое с крупным ядрышком ядро, равномерное распределение ГЭР, скопления митохондрий с хорошо выраженными кристами. Наблюдается усиление нейроно- глиальных взаимоотношений и явлений ангиогенеза; б) в печени репаративные процессы находят проявление в гипертрофии ЗРЭ, наличии лимфогистиоцитарных инфильтратов в междольковой соединительной ткани, нормализации структурной организации гепатоцитов, эпителия желчных протоков; в) комбинированное использование Тактивина и токоферола приближает активность AJIT и ACT к контрольной группе животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Токоферол и Тактивин рекомендуются в качестве средств коррекции гепато- и нейротоксических эффектов гербицида 2,4-ДА, как в индивидуальном, так и в комплексном их использовании.

2. Полученные данные указывают на необходимость проведения профилактических мероприятий у рабочих, занятых в производстве гербицида 2,4-ДА.

3. Полученные данные о морфофункциональном состоянии печени и чревного сплетения при интоксикации 2,4 — ДА могут быть использованы в учебном процессе, медицине, ветеринарии, а также при написании справочников и учебной литературы.