Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Лептоспироз животных в зоне Северного Кавказа

„ На правах рукописи

- Г-»

¡..¡I

БОЛОЦКИЙ Иван Александрович

ЛЕПТОСПИРОЗ ЖИВОТНЫХ В ЗОНЕ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА

16.00.03 Ветеринарная микробиология, вирусология эпизоотология, микология и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва, 1998

Работа выполнена в Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станции, на Ставропольской биофабрике и во Всероссийском Государственном научно-исследовательском институте контроля стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, в некоторых животноводческих хозяйствах Северного Кавказа.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Ю.А.Малахов.

2. Доктор медицинских наук, профессор Ю.В.Ананьина.

3. Доктор ветеринарных наук, профессор В.А.Бурлаков.

Ведущее учреждение: Ставропольская государственная сельскохозяйственная Академия

Защита диссертации состоится р¿■кТ 1998 г.

в / час, на заседании диссертационного совета Д. 120.85.0i при Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Минсельхозпрода России (123022, г.Москва, Звенигородское шоссе, д.5, ВГНКИ).

С диссертацией в виде научного доклада можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Минсельхозпрода России. Диссертация в виде научного доклада разослана

марта 1998г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринараных наук

¿ггтге

А.Козырев

диктует необходимость создания концентрированных биопрепаратов, сокращения их дозировок и обработок, более совершенных и удобных методов вакцинопрофилактики, разработки ассоциированных вакцин, обеспечивающих защиту животных сразу от нескольких опасных инфекций. В этом направлении проведен ряд успешных работ (Ю.А.Малахов, М.М.Ахмедов, 1987, Ю.А.Малахов, Г.Л.Соболева, Е.В.Сусский, 1990,В.И.Ситьков, 1997, В.И.Белоусов, 1997). Однако данная проблема требует дальнейшего разрешения.

Цель н задачи исследований. Изучить особенности эпизоотического процесса, этиологию, особенности клинического течения и вопросы иммунитета при лептоспирозе животных в зоне Северного Кавказа. Разработать и внедрить более эффективные методы терапии животных, больных лептоспирозом, усовершенствовать методы и средства вакцинопрофилактики. (Задание Главного управления ветеринарии МСХ РФ 1970 - 1990 г, Российской Академии сельскохозяйственных наук, 1990-1997 г).

В задачи исследований входило:

- исследовать эпизоотический процесс при лептоспирозе в зоне Северного Кавказа;

-изучить этиологию лептоспироза в зоне Северного Кавказа^ сельскохозяйственных (домашних) и диких животных в динамике за 1969-1997 годы;

-определить источники и пути распространения, сезонность, особенности клинического течения лептоспироза;

- изучить у животных динамику гуморальных и клеточных, специфических и неспецифических факторов иммунитета при лептоспирозе;

- исследовать иммунитет у животных при введении лептоспирозного антигена, с различными консервантами и адъювантами

изыскать эффективные химиопрепараты для санации лептоспироносительства, изучить их влияние на формирование поствакцинального и постинфекционного иммунитета у животных;

- дать экспериментальное обоснование к синтезированию и применению лептоспироцидного препарата для лечения животных, клинически больных лептоспирозом, колибактериозом, балантидиозом;

- разработать технологию производства и испытать эффективность концентрированной вакцины против лептоспироза животных;

- разработать и внедрить технологию изготовления и применения ассоциированной,инактивированной вакцины против парвовирусной инфекции, лептоспироза и болезни Ауески;

- оценить эффективность метода внутрикожной вакцинации свиней против лептоспироза;

- разработать систему мер борьбы с лептоспирозом применительно к условиям ведения животноводства на Северном Кавказе.

Выполнение поставленных задач осуществляли на протяжении 28 лет (1969 - 1997). Научно-исследовательскую работу проводили в тесном творческом сотрудничестве с учеными и специалистами Краснодарской НИВС, крайветлаборатории "Краснодарская", райветлабораториями Краснодарского края, Кубанского Госагроуниверситета, Ставропольской биофабрики и крайветлаборатории, Всероссийского Государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, Государственных Кавказского и Тебердинского заповедников, Адыгейской, Карачаево-Черкесской, Калмыцкой и Кабардино-Балкарской республиканских ветлабораторий, некоторых хозяйств региона.

В выполнении отдельных исследований принимали участие сотрудники других учреждений: В.С.Соловьева, И.Г.Серегин, Н.И. Николаенко, С.Я.Любашенко, И.К.Тутов, В.И.Дорофеев,Г.Ф.Денисенко, А.П.Сурмило, В.И.Заерко, В.А.Сергеев, Б.Н.Орлянкин, Н.И.Дашков, П.В.Сидневец, В.И.Семенцов, В.Ф.Васильев, К.В.Дружина, И.К.Белоконь, М.Ф.Резникова, А.А.Лимаренко, В.Г.Баранов, Ф.А.Бибиков, Н.А.Трошин, В.А.Антипов и др.

Научная новизна: установлена эпизоотическая ситуация лептоспироза в зоне Северного Кавказа. Определено, что инфицирование лептоспирами мелких диких животных (крысы, мышивидные грызуны, хомяки, андатры и т.д.)

составляет 32,7%, крупных диких животных (диких кабанов, барсуков, лисиц, волков, туров, оленей, сайгаков и др.) - 25,5%. Основными возбудителями являются лептоспиры серогрупп: Pomona, Icterohaemorriiagiae, Grippotyphosa, Hebdomadis, Canicola и Tarassovi.

Домашние животные (собаки, кошки) и пушные звери клеточного содержания инфицированы лептоспирами в 37,4% , сельскохозяйственные животные - в 31,7% от числа обследованных,теми же серогруппами, что и дикие животные. Установлена адаптация иктерогеморрагических лептоспир к организму сельскохозяйственных животных и перекрестное перезаражение возбудителями данной серогруппы между сельскохозяйственными (домашними) и дикими животными.

Установлено, что внутримышечное введение гентамицина по 6 мг/кг веса животного два раза в день, 5 суток , фармазина по 10 мг/кг один раз в день 4 суток, излечивает у животных лептоспироносительство. Чтобы избежать отрицательного влияния на иммуногенез,антибиотики необходимо вводить за 10 дней до или 10 дней после вакцинации.

Теоретически обосновано и проведено синтезирование эффективного препарата полимерэндофарма (ПЭФ) (Авторское свидетельство № 1238290 от 15.02.1986г) для лечения животных лептоспироносителей, колибактериоза и бапантидиоза у молодняка сельскохозяйственных животных.

Изучена динамика иммунологических реакций: титра специфических антител, лизоцима, комплемента и ОФР в организме животных при различных методах иммунизации различными лептоспирозными антигенами, что дало возможность научно обосновать конструирование эффективных концентрированной и ассоциированной вакцин.

Разработана промышленная технология изготовления концентрированной вакцины против лептоспироза животных, на основе которой создана и внедрена в практику ассоциированная инактивированная вакцина против парвовирусной инфекции, лептоспироза и болезни Ауески свиней (ПЛА, Авторское свидетельство № 1439784 от 22.07.1988 г).

Обоснована возможность и рекомендован для практического применения метод внутрикожной безыгольной вакцинации свиней концентрированными вакцинами против лептоспироза.

Практическая значимость. Изучены особенности эпизоотического процесса, этиологии и клинического течения лептоспироза у

сельскохозяйственных (домашних) и диких животных зоны Северного Кавказа, что позволило рекомендовать вакцины с определенным антигенным составом, установить сроки вакцинаций и ревакцинаций животных.

Изученная динамика специфических и неспецифических факторов иммунитета при экспериментальном лептоспирозе и вакцинации разными антигенами и разными методами позволила дать теоретическое обоснование для изготовления эффективных концентрированной и ассоциированной вакцин для усовершенствования методов специфической профилактики инфекции.

Изучено терапевтическое действие гентамицина и фармазина при лептоспироносительстве и определено их влияние на иммунитет. Разработаны эффективные схемы терапии животных при данной инфекции без угнетения поствакцинального иммуногенеза (Наставление по применению гентамицина при лептоспирозе животных № 43" У"2s от /У.-03.1998 г. Наставление по применению фармазина при лептоспирозе животных № /3 ~ У-^ от /6. 03.1998 г.). Синтезирован новый оригинальный химиопрепарат -полимерэндофарм (ПЭФ), который успешно излечивает лептоспироносительство, оказывает высокий эффект при колибактериозе и балантидиозе молодняка животных. ТУ на полимерэндофарм № 10.07.008-88 от 15.05.1988, Наставление по применению полимерэндофарма утв.ГУВ МСХ СССР 28.01.1988г. Препаратом в хозяйствах края обработано 248910 животных.

Разработана технология изготовления моно- и поливалентной концентрированной вакцины против лептоспироза, которая может использована на любом биопредприятии России, где освоено изготовление биопрепаратов против данной инфекции. (Приоритетная справка № 4313141 от 19.08.1987, временное наставление по применению от 15.02.1997 г.).

Разработана технология изготовления и вся научно-техническая документация ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной инфекции, лептоспироза и болезни Ауески свиней (ТУ на ПЛА № 10-09-50-90от 07.06.1990 г. Инструкция по изготовлению ПЛА от 17.07.1989г. Наставление по применению ПЛА УтвХУВ МСХ СССР 14.01.1987г.).

Разработан внутрикожный безыгольный метод вакцинации свиней против лептоспироза, ( временное наставление от 30.11.1992 г.)

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на конференциях и симпозиумах: Научной конференции по лептоспирозу зон Северного Кавказа и Поволжья, Краснодар, 1969. Пятой Всесоюзной конференции по лептоспирозам человека и животных, Казань, 1971. Всесоюзной конференции молодых ученых по ветеринарии, Москва, 1971. Всесоюзном симпозиуме по лептоспирозу, Москва, 1972. Всесоюзном симпозиуме ВАСХНИЛ по профилактике и мерам борьбы с лептоспирозом и листериозом сельскохозяйственных животных в г.Новочеркасске, Москва, 1972. Второй фармако-терапевтической ветеринарной конференции, г.Будапешт, 1972. Зональной научной конференции «Повышение продуктивности животноводства», Нальчик, 1972. Краевом симпозиуме "Молодые ученые и специалисты Кубани -сельскохозяйственному производству", Краснодар, 1974. Всесоюзном симпозиуме по лептоспирозу, Москва, 1975. Научно-производственной конференции: "Основные проблемы ветеринарии Северного Кавказа", Махачкала, 1976. Шестой Всесоюзной научной конференции по лептоспирозу, Москва, 1976. Всесоюзном симпозиуме по лептоспирозу, Москва, 1979. Седьмой Всесоюзной конференции по лептоспирозу, Киев, 1979. Третьей научно-производственной конференции: "Профилактика и меры борьбы с лептоспирозом сельскохозяйственных животных", Махачкала, 1981. Восьмой Всесоюзной конференции по лептоспирозам, Тбилиси,1983. Всесоюзной конференции по лептоспирозам, Львов, 1988. Седьмой Всеевропейской и девятой Всесоюзной конференции по лептоспирозу, Москва, 1990. Научной конференции, посвященной 50-летию Краснодарской НИВС, Краснодар, 1996. На годовых отчетах по НИР в Главном управлении ветеринарии МСХ РСФСР, 1970-1990. На

годовых отчетах отделения ветеринарной медицины Российской Академии сельскохозяйственных наук, Москва,1990-1997. На НТС Краснодарского краевого департамента сельского хозяйства, Краснодар, 1970-1996.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 50 печатных работ в материалах международных, всесоюзных, зональных конференций и симпозиумов, во всесоюзных журналах "Ветеринария", "Свиноводство", "Антибиотики", "Зоологический журнал"; зональном - "Сельские зори", получено два авторских свидетельства. В большинстве совместных работ автор является основным исполнителем или руководителем исследований.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Эпизоотическая ситуация по лептоспирозу животных в зоне Северного

Кавказа..

2. Этиологическая структура лептоспироза животных.

3. Иммунитет у животных при лептоспирозе.

4. Усовершенствование методов терапии животных, больных лептоспирозом..

5. Влияние антибиотиков на иммунитет при лептоспирозе.

6. Усовершенствование специфической профилактики лептоспироза

животных.

7. Мероприятия против лептоспироза в зоне Северного Кавказа.

Объем и структура доклада.

Научный доклад изложен на 56 страницах машинописи,

содержит 9 таблиц и включает следующие разделы:

I. Общая характеристика работы.

И. Собственные исследования.

III. Выводы и практические предложения.

IV. Список опубликованных работ, в которых отражены основные материалы научного доклада.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ В проведении экспериментальных работ использовали штаммы

микроорганизмов:

- диагностические штаммы лептоспир: Pomona (Pomona), Tarassovi (Perepelicin), Icterohaemorrhagiae (M-20), Grippotyphosa (Moskva V), Canicola (Hond Utrecht IV), Hebdomadis (Kabura), Sejroe (493), Poland, (Mini Szwajizak), Bataviae (HS-26), Ballum (127), Australis (les 1), Autumnalis (Akiyami 4), Pyrogenes (Salinem), Cynopteri (Vleermuis 3868), Javanica (Veldrat Bataviae 46), взятые в ВГНКИ;

производственные штаммы лептоспир: Grippotyphosa ВГНКИ-1, Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, Canicola ВГНКИ-3,Tarassovi ВГНКИ-4, Sejroe Hardjo, Pomona ВГНКИ-6, взятые на Ставропольской биофабрике;

вирулентные штаммы лептоспир: Pomona К.-111 (Mozdok), Icterohaemorrhagiae Б-76, Grippotyphosa К-126, выделенные нами от животных;

-музейные диагностические штаммы: E.Coli-1749, Streptococcus aureus - 209p, Micrococcus lisodeiticus 2669, взятые в КубГАУ.

Питательные Среды и другие материалы: бульон Хоттингера, мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар, мясопептонный печеночный бульон (среда Китт-Тароцци), среда Сабуро, дифферициально-диагностические среды (Эндо и Плоскирева), среда для культивирования лептоспир: водно-сывороточная - Уленгута, различные антибиотики и химиопрепараты.

Приборы и оборудование: микроскопы: люминисцентный -"Люмам", биологический - "Биолам", с осветителями и конденсором "темного поля", реакторы, емкостью 250-2000 л, стеклянные баллоны - 18 л, рН-метры, термостаты и термальные комнаты с температурой +28(±1°С) и +37° С, холодильники с температурой +4...+2 и -70 (±5°С), центрифуги, сушильные шкафы, автоклавы АГП-7, АВТ-5, фильтры ФС-7, РФ-39, рефрактометры - УРЛ-2, фотоэлектроколориметр-ФЭК-М, весы лабораторные, пипетки, пробирки, дощечки с луночками, шприцы "Рекорд", иглы инъекционные и для взятия крови, флаконы, матры, чашки Петри, стекла предметные и покровные.

Животные: крупный рогатый скот - 676 голов, свиньи - 915, овцы -86, кролики - 455, золотистые хомячки 4-х недельного возраста массой 40-50 г - 1664, б^лые мыши -188, морские свинки по 355-400 г - 26.

В работе использозаны общепринятые бактериологические, серологические (реакция микроагглютинации (РМА), вирусологические, гистологические и биохимические методы исследования.

В процессе работы проведено 224460 серологических и 4211 бактериологических исследований материалов животных. Некоторые особенности отдельных методов исследования описаны в соответствующих разделах. Проведена биометрическая обработка всех результатов.

2. Эпизоотическая ситуация по дептоспирозу животных в зоне Северного Кавказа.

Северный Кавказ является регионом, где впервые в мире диагностирована иктерогемоглобинурия крупного рогатого скота (С.Н.Никольский, Ф.М.Десятов,Г.Ф.Марченко, 1932,1934), которая впоследствии определена как лептоспироз. После этого он стал регистрироваться во многих районах Северного Кавказа, а после и по стране. Особенно много неблагополучных пунктов по лептоспирозу было зарегистрировано в Ставропольском и Краснодарском краях, Адыгее в послевоенные годы1947-1948 г: неблагополучных пунктов - 138, заболело крупного рогатого скота - 19356 голов, пало 1650 животных. С 1948 года внедрена специфическая профилактика заболевания и количество энзоотий стало сокращаться. Лептоспироз свиней в официальной отчетности в зоне зарегистрирован с 1961 года. Если проанализировать динамику заболевания, то можно отметить волнообразность энзоотий. Значительное количество неблагополучных пунктов регистрировали в 1950-1952, в 1962-1964, 19741976,1986-1988 годах, что, очевидно, связано с высокой влажностью в эти годы, что подтверждено метеослужбой. В последние 10 лет по зоне Северного Кавказа ежегодно регистрировали у крупного рогатого скота 12-16 неблагополучных пунктов, где заболевало 550-720 голов, у свиней соответственно: 38-42, 1550-2600, у овец: 16-20, 350-420 и лошадей: 5-7,45-60 голов. В 1997 году неблагополучных пунктов у крупного рогатого скота 9, заболело 198, свиней - 35-890, у овец 4-136, лошадей - 4-127. Хотя и имеется тенденция к снижению энзоотий лептоспироза, однако заболевание еще наносит значительный ущерб животноводству и несет явную социальную угрозу.

2.1. Этиологическая структура лептоспнроза животных в динамике за 20 лет (1978-1997) у сельскохозяйственных (домашних) и диких животных по результатам серологических и бактериологических исследований.

2.1.1. Результаты серологических исследований.

Серологических исследований проведено и обработано 224460 проб, из них: 156850 (69,9%) по Краснодарскому краю; 18560(8,3%) - по Ставропольскому краю; 28710 (12,8%) - по Адыгейской; 11515 (5,1%) - по Калмыцкой: 6425 (2,8%) -по Карачаево-Черкесской; 2400 (1,1%) - по Кабардино-Балкарской республикам. Результаты исследований отражены по десятилетиям в Таблице 1. Следует отметить, что до 1978 года серологические исследования животных на лептоспироз мы проводили с лептоспирами 15 серогрупп: Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Hebdomadis, Sejroe, Poland, Bataviae, Ballum, Australis, Autumnalis, Purogenes, Cynopteri, Javanica. Однако многочисленными бактериологическими исследованиями как нашими, так и другими по всей стране была доказана эпизоотическая роль только серогрупп: Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Hebdomadis, Sejroe. Поэтому антигены только данных серогрупп и были включены в диагностические наборы для диагностики лептоспнроза в последующие годы. Мы же результаты наших исследований с антигенами серогрупп Bataviae, Ballum, Autumnalis, Pyrogenes, Australis, Cynopteri, Javanica тоже не стали включать в материалы работы, т.к. положительных проб у свиней с лептоспирами данных серогрупп было всего 3,3%; у крупного рогатого скота -2,7%, у овец -3,1%; у лошадей 2,5% от всех мелких и крупных диких животных 4,8 %. Эти реакции с редкими серогруппами лептоспир мы рассматриваем как межгрупповые, возникающие в некоторых случаях в ответ на заражение животных лептоспирами основных серогрупп.

Как видно из результатов исследования, количество положительных серологических реакций на лептоспироз у животных за последние 10 лет имеет стойкую тенденцию к увеличению с 24,3 % до 31,7 %. Причем значительно увеличилось количество положительных серологических

Таблица I

Результаты серологических исследований на лсптоспироз сельскохозяйственных (домашних) животных в зоне

Сепермого Кавказа.

Вид животных Исследовано проб Реагировали с лептоспирами серогрупп (%)

Помона Сейрое ГрипЬти-

Иктероге- Гебдома- Тарас- Кани-

моррагия дис фоза сови кола

Всего Положительных

Всего %

1978- 1987 гг.

1. Крупн.рог.ск. 47410 10667 22,5 24,2 9.9 18,2 12,1 9,3 25,1 1.2_

2. Свиньи 41215 11128 26,9 30.1 16,2 3,1 2,2 7,1 29.2 12.1

3. Овцы 6118 1346 22,0 19.3 16,2 24,1 20,8 11,4 5,1 3.1

4. Лошади 3187 637 20,0 24,3 13,2 18,3 11,0 22,1 9,1 2,0

5. Собаки 196 57 29,1 31,0 32,1 2,0 - 10,2 4,2 21.5

6. Кошки 24 6 25,0 17 33,0 - - 17,0 - 33,0

Всего: 98150 23841 24,3 26,7 13,3 11,5 7,9 8,7 25.4 6,5

1<>:< 8-1997 гг.

1. Крупн.рог.ск. 58350 18672 32,0 17,4 7,1 25,8 19,5 1,5 27,0 1.2

2. Свиньи 53013 18130 34,2 41.1 35,8 1,2 2,1 2,0 17,3 0,5

3. Овцы 9180 1952 21,3 23,7 11,2 26,2 21,5 14,2 3,1 0.1

4. Лошади 5320 1112 20,3 17,3 42,1 13,1 11,2 14,4 1,5 0,4

5. Собаки 453 189 43,4 14,5 46,2 - - 4,5 3,2 31,6

6. Кошки 186 51 27,4 12.2 45,1 - - 3,5 - 39.2

7. Нутрии 26 9 34.6 55.5 - - 11.1 - 11.1

Всего: 126510 40115 31.7 2Х.6 21.5 Ы.2 11.4 2.7 20.6 1.0

реакций у собак - на 14,3%, у крупного рогатого скота на 9,5%, у свиней на 7,3%, у кошек - на 2,4%, у овец и лошадей эти показатели остались на одном уровне. Значительно изменилась и этиологическая структура заболевания у сельскохозяйственных животных за указанный период. Так, от числа серологически положительных ведущими серогруппами были Pomona - 24,4%, Tarassovi - 25,1 %, Heldomadis - 18,2 %, Sejroe - 12,2 %, Icterohaemorrhagiae - 9,9 %, Grippotyphosa - 9,3%.

Спустя десятилетие некоторые серогруппы снизили свою роль в С.У ¡cpsifiHotc pciarcio слота J энзоотиях лептоспиршаиУмы уже находили к Grippotyphosa - 1,5%, к Pomona -

17,9%, к Icterohaemorrhagiae - 7,1%, а значительно возросла роль лептоспир

серогрупп: Tarassovi - 27,0%, Hebdomadis - 25,8%, Sejroe - 19,5%.У свиней

снизилась роль лептоспир серогрупп Tarassovi на 11,9%, Canicola на 11,6%,

Grippotyphosa на 5,1%, Hebdomadis на 1,9%. Но существенно увеличилось

количество серологически положительных находок и составило с Pomona - 41,1%,

Icterohaemorrhagiae 35,8%.

У овец снизилось количество положительных реакций к серогруппам Icterohaemorrhagiae на 5,0%, Tarassovi - на 2,0%,Canicola на 2,0%. Но увеличилось количество положительных проб к серогруппам Pomona на 4,4% и составило 23,7%, Grippotyphosa на 2,8% и составило 14,2%, Hebdomadis 2,1% -26,2%.

У лошадей снизилось количество антител к лептоспирам серогрупп Tarassovi на 7,6%, Grippotyphosa на 7,7%, Hebdomadis на 5,2%, Pomona - 3%, однако роль серогруппы Icterohaemorrhagiae возросла и составила 42,1%.

У собак и кошек резко увеличилось количество положительных РМА к антигенам серогрупп: Icterohaemorrhagiae 45,1-46,2% к Canicola - 31,6-39,2%. Не регистрировали антител к Hebdomadis и Sejroe.

Следует указать, что по отдельным краям и республикам этиология лептоспироза сельхозживотных имеет некоторые особенности. Так, у крупного рогатого скота в Ставропольском и Краснодарском краях на первое место по частоте регистрации вышли лептоспиры серогрупп Hebdomadis и Sejroe, потом Pomona, Icterohaemorrhagiae и Grippotyphosa. В Калмыкии, Карачаево-Черкесской

и Кабардино-Балкарской республиках ведущая роль определена за Tarassovi, а потом уже идут Hebdomadis и Grippotyphosa.

У свиней в Ставропольском и Краснодарском краях, в Адыгейской и Карачаево-Черкесской республиках ведущая роль принадлежит серогруппе Pomona, затем Tarassovi и Icterohaemorrhagiae. В Калмыцкой и Кабардино-Балкарской республиках ведущее место занимает серогруппа Tarassovi, затем Pomona и Icterohamorrhagiae.

У овец в Ставропольском и Краснодарском краях, Адыгейской республике ведущую роль играют лептоспиры Pomona, Icterohaemorrhagiae. В Калмыцкой, Карачаево-Черкесской и Кабардино-Балкарской республиках ведущими в энзоотиях лептоспироза являются серогруппы. Hebdomadis и Sejroe.

У лошадей в Краснодарском и Ставропольском краях, в Адыгейской республике основной процент антител устанавливали к лептоспирам Icterohaemorrhagiae и Pomona. В республике Калмыкия к Tarassovi и Pomona. В Карачаево-Черкесской и Кабардино-Балкарской республиках к Pomona и Grippotyphosa. Лептоспиры, регистрируемые в подавляющем количестве у отдельных видов животных должны включаться в состав специфических биопрепаратов, используемых в регионе.

2.1.2. Результаты бактериологических исследований.

Бактериологически нами исследован материал от 2550 животных. Кроме того, подвергли анализу данные исследования - 1287 проб краевых и республиканских лабораторий. Большая часть материала собрана (2531) при убое на мясокомбинатах, на бойнях хозяйств и у индивидуальных владельцев крупного рогатого скота, свиней, овец и нутрий. Параллельно с отбором материала для бактериологических исследований от животных брали кровь для исследования в РМА. Результаты исследований сведены в таблицу 2.

Исследования показали, что наибольшее количество изолятов лептоспир выделено от домашних животных: собак - 24,6%, нутрий - 23,8%, кошек - 12,5%, меньший процент от свиней -3,9%, овец - 3,7%, от крупного рогатого скота -2,78%, от лошадей - 0,9%. Всего выделено 192 культуры, из них - серогруппы

Таблица 2

Результаты бактериологического исследования материала от сельскохозяйственных (домашних) животных на лептоспироз на Оперном Кавказе за 1978-1997 гг.

Вид животных Исследовано Количество изолятов по серогруппам |

Всего Выделено изолятов Помо1'-> Иктероге- моррагия • Грипоти-фоза Тарас-сови Кани-кола Гебдома-дис Количество изолятов от животных с отрицательной РМА (%)

Всего %

1. Крупн.рог.ск. 1115 31/7 2,8 3/1 17/4 6/2 2 - 3 22,5

2. Свиньи 1868 73/22 3,9 73/14 26/8 - 2 2 - 30,1

3. Лошади 307 3/1 0,9 1 2/1 - - - - 33,0

4. Овцы 298 11/3 3,7 5/2 2 3/1 - - 1 27,1

5. Собаки 232 57/15 24,6 17/4 28/9 - - 12/2 - 26,3

6. Кошки 96 12/3 12,5 1 9/2 - - 2/1 - 25,0

7. Нутрии 21 5/2 23,8 1 4/2 - - - - 40,0

Всего: 3937 192/49 4,9 71/21 88/26 9/3 4 16/3 4 25,5

% культур от серонегативных животных 25,5 29,5 29,5 33/3 16,6

Примечание: в числителе общее количество выделенных культур лептоспир от животных, в знаменателе в т.ч. количество выделенных культур от животных с отрицательной РМА

15

Icterohaemorrhagiae - 88, Pomona -71, Grippotyphosa -9, Canicola - 18, Tarassovi -4 и Hebdomadis -4.

Типизацию выделенных культур проводили в реакции иммунноадсорбции с типоспецифическими сыворотками в Краснодарской НИВС и на кафедре микробиологии в Московском технологическом институте мясо-молочной промышленности. Следует отметить, что до 76% изолятов выделены от клинически здоровых сельскохозяйственных животных в неблагополучных и «благополучных» по лептоспирозу хозяйствах, причем 25,5 % всех изолятов выделено от животных с отрицательной РМА. Выделено 23,4% изолятов от животных, у которых антитела регистрировали в титре 1:10-1:100, и только у 51,4% животных-лептоспироносителей антитела регистрировали в титре 1:2001:3200. Наибольший процент серологически отрицательных лептоспироносителей отмечен у нутрий - 40%, у свиней - 30,1%, в основном у поросят 0-2 месячного возраста, у овец - 27,2%, у собак - 26,3%, у кошек - 25%, у КРС - 22,5%. У лошадей из 3 выделенных культур одна изолирована от не реагирующего на лептоспироз мерина.

Животные лептоспироносители с отрицательной РМА представляют угрозу для окружающих как источники Лептоспирозной инфекции, а так как процент таких животных высокий, то и угроза является реальной.

2.1.3. Результаты исследований на лептоспироз диких животных.

Некоторые исследователи (В.В.Ананьин, 1965, Е.В.Карасева,1980, Ю.В.Ананьина , 1980, Ю.Г.Чернуха , 1982р.А.Кирьянов, 1984) доказали, что дикие животные являются носителями лептоспир и могут быть источником возбудителя инфекции для человека и домашних животных. Для подтверждения этого положения нами с1969 по 1997 годы проведены серологические и бактериологические исследования материала на лептоспироз крупных и мелких диких животных из хозяйств Краснодарского и Ставропольского краев, Калмыкии, Адыгеи, Карачаево-Черкессии, из Кавказского и Тебердинского заповедников. Результаты исследований отражены в таблице 3.

За указанный период нами исследовано в РМА сывороток 1756, бактериологически - материала от 658 животных, в том числе от 12 видов

крупных и 4 видов мелких. От крупных животных исследовано 466 проб материала, а именно от зайцев, лисиц, кабанов, барсуков, волков, медведей, зубров, кавказских оленей, серн, косуль, туров, сайгаков. Из исследованных проб 119 (25,5%) дали положительную РМА с лептоспирами 6 серогрупп , выделено 4 культуры лептоспир. Наибольший процент реагирующих отмечен у хищников: лисиц - 37,0%, барсуков - 31,9%, волков - 25,8% и диких кабанов - 28,4%. Мы это объясняем тем, что у животных данных видов кроме контакта с инфицированными водоисточниками, тесный контакт с другими мелкими животными, возможными лептоспироносителями. Следует отметить, что у хищников в этиологии ведущее место занимают лептоспиры серогрупп Icterohaemorrhagiae, Canicola и Pomona. От барсука и лисицы выделено по культуре иктерогеморрагических лептоспир, т.е. здесь мы видим полную аналогию с этиологией заболевания, у домашних собак и кошек. У диких кабанов установлены антитела к Pomona - 57,8%, Icterohaemorrhagiae - 26,3% и Tarassovi -15.1%. Выделена культура,типированная как Icterohaemorrhagiae, т.е. полная аналогия в этиологии с домашними свиньями, где ведущими являются Pomona и Icterohaemorrhagiae.

У травоядных животных положительных РМА было гораздо меньше. У косуль -22,7%, туров - 19,4%, зубров - 18,2%, у сайгаков - 16,6%, кавказских оленей -15,8%, серн-11,8%. Причем антитела установлены к Hebdomadis - 48,0%, Grippotyphosa- 44,0% и Pomona -8,0%, что по аналогии очень близко к антигенной структуре лептоспироза домашнего крупного и мелкого рогатого скота. Особняком стоят зайцы, у них обнаружены антитела к Pomona - 80,0% , даже вьщелена культура лептоспир данной серогруппы. Мелких диких животных: крыс, мышевидных грызунов (мышь полевая, мышь домовая, мышь желтогорлая), хомяков и ондатр отлавливали на животноводческих фермах, полевых станах, скирдах, в поймах рек, лиманов, в лесах, на полях. При исследовании от них сыворотки у 32,7% выявляли антитела к лептоспирам. У серых крыс 36,0% реагирующих, причем из них 75,7% с лептоспирами Icterohamorrhagiae. От крыс выделено 36 культур данной серогруппы. К серогруппе Pomona установлены антитела в 15,6% крыс и выделено 12 культур данной серогруппы. К лептоспирам

I Таблица 3

Результаты серологических и бактериологических исследований материала от диких животных на

лсптоспироз на территории Северного Кавказа в 1969-1997 гг.

^оложительнью^сершрунлой :

Вид животных Всего .... Положительных Всего % 11омш(л Гебдомадис Грипотифоад Иктероге-морр. Каникола Тарассови

I. Зайцы 97 20/1 20,6 15/1 - 2 3 - -

2. Лисицы 89 33/1 37,0 6 3 1 15/1 8

3. Дикие кабаны 67 19/1 28,4 И - - 5/1 X

4. Барсуки 47 15/1 31,9 1 1 1 8/1 4 -

5. Туры 36 7 19,4 1 3 2 1 - -

6. Волки 31 8 25.8 2 1 - 3 2 -

7. Косули 22 5 22,7 1 2 2 - - -

8. Кавказские олеии 19 3 15,8 2 1 - ; -

9. Сайгаки 18 3 16,6 2 . 1 - - -

Ю.Ссриы 17 2 11,8 - 2 - - -

11. Медведи 12 2 16,6 - - 2 -

12, Зубры 11 2 18.2 - 1 1 - - -

Итого: 466 119/4 25,5 37/1 15 13 37/3 14 3

Положит, с серогрупп.. % - - 31.1 12,6 11,0 31,1 11.8 2.5

13. Крысы 675 243/50 36,0 38/12 2 6 184/36 11/2 2

14. Мышевидные грызуны 456 132/17 29,0 18/3 7/1 25/4 66/8 1 11/1 5

15. Хомяки 116 36/8 31,0 2 2 9/1 18/7 [Г. 5 _...

16. Ондатры 43 11/2 25.6 2 - 3 4/2 1 1

Итого: 1290 422/77 32,7 60/15 11/1 43/5 272/53 28/3 8

Положит, с серогрупп., % - - - 14,2 2,6 10,2 64.5 6.6 1.9

Всего: 1756 541/81 30,8 97/16 26/1 56/5 309/53 42/3 И

Положит, с серогрупп., % .. - 17.4 4,8 10.4 57,1 7,8 2.0

Примечание: в числителе количество животных ■О'ЧЮ'МТОМСРИА* шаменателе количество выделенных культур лелтоспир

Canicola обнаружены антитела в 4,5% выделены 2 культуры (в лептоспирозном очаге на свиньях).

В крови у 31,0% хомяков(хомяк крысовидный) обнаружены антитела к лептоспирам Icterohamorrhagiae - 50%, выделено 7 культур данной серогруппы. С серогруппой Crippotyphosa реагировало 25% проб, выделена одна культура соответствующей серогруппы.

В крови мышевидных грызунов в 29% установлены антитела к лептоспирам, Icterohaemorrhagiae - 50%, выделено 8 культур данной серогруппы; к Grippotyphosa - 18,9%, выделено 4 культуры; к Pomona -13,6%, выделено 3 культуры. Также обнаружены антитела к Canicola, Hebdomadis, Tarassovi. Выделено по одной культуре лептоспир двух первых серогрупп.

Ондатры были отловлены в поймах рек и лиманах Краснодарского края и Калмыкии. В крови этих зверьков в 25,6% обнаружены антитела, к Icterohaemorrhagiae в 36,4%, выделено 2 культуры данной серогруппы. К Grippotyphosa антитела установлены в 27,3% и в низком проценте к Pomona, Canicola и Tarassovi.

2.2. Эпизоотический процесс при лептоспирозе в зоне Северного

Кавказа.

В эпизоотологии и эпидемиологии лептоспироза в регионе Северного Кавказа есть свои особенности. Важную роль здесь играют природно-климатические условия, наличие большого количества и разнообразия диких крупных и мелких животных, насыщенность региона сельскохозяйственными и домашними животными, высокая плотность населения.

Из природно-климатических условий следует указать на длительное время положительных температур, наличие большого количества водоемов и рек, как горных, так и степных малопроточных, прудов. Наличие в большинстве зон региона богатых черноземных почв, которые чаще всего имеют нейтральную или слабощелочную реакцию -pH, сравнительно высокая влажность. Все эти факторы способствуют длительному переживанию патогенных лептоспир во внешней среде, что увеличивает возможность инфицирования животных и людей,

контактирующих с указанными объектами. Существенную роль в заболевании играют природная очаговость и хозяйственная деятельность человека.

2.2.1. Источники и пути распространения лептоспироза.

Источниками лептоспироза для сельскохозяйственных животных в регионе Северного Кавказа являются в первую очередь больные, переболевшие животные - лептоспироносители, как дикие так и домашние. Из данных таблиц 1, 2 и 3 видно, что носительство возбудителя болезни наиболее широко распространено у мелких диких животных: крыс, хомяков, мышевидных грызунов, ондатр. Они и являются основным источником возбудителя для всех остальных видов животных, в первую очередь для сельскохозяйственных и для людей, т.к. они инфицируют корма, водоемы, почву, помещения, одежду и т.д. На второе место по значимости выходят домашние животные: собаки и нутрии, особенно для человека, и на третьем месте сельскохозяйственные животные и кошки.

Следует сказать о крупных диких животных. Особую опасность представляют лисицы, дикие кабаны, барсуки, от которых выделены культуры лептоспир. Травоядные крупные животные в меньшей степени инфицированы возбудителем. Необходимо отметить и роль сайгаков в эпизоотическом процессе лептоспироза, огромные стада которых мигрируют по Калмыкии, восточным районам Ставрополья, по Прикаспийским и Северо-Казахстанским степям и имеют контакт с сельскохозяйственными животными на пастбищах и у водоемов. Из-за ограниченных исследований нам не удалось от этого вида животных выделить культуру лептоспир, но при экспериментальном заражении вирулентными лептоспирами доказана восприимчивость молодых и взрослых особей к лептоспирозу, тяжелое переболевание и гибель их. Положительные серологические реакции сайгаков установлены в 16,6% случаев. Следовательно они имели контакт с лептоспирозным антигеном и вполне могут быть источником инфекции для животных других видов.

Исследуя энзоотии лептоспироза сельскохозяйственных животных в регионе, установили, что основными являются природные очаги, где отмечали значительное количество хомяков и мышевидных грызунов,а в некоторых природных стациях и серых крыс инфицированных лептоспирами. В этих очагах

постоянно, во все времена года отмечали высокое эпизоотическое напряжение инфекции, как среди диких, так и сельскохозяйственных животных, инфицированных лептоспирами одной и той же серогруппы.

На втором месте по значимости стоят антропургические очаги. Характерным антропургическим очагом лептоспироза был свинокомбинат "Индустриальный", где массовые аборты свиноматок были вызваны лептоспирами Рошопа, а от серых крыс выделены лептоспиры 1с1егоЬаетоггЬа§1ае. В регионе часто регистрировали ситуацию, когда антропургические очаги накладывались на природные.

Основными путями распространения лептоспирозной инфекции в зоне является контакт с инфицированными лептоспирами: водой слабопроточных водоемов, кормами, непосредственный контакт с лептоспироносителями. Чаще всего легггоспирозные энзоотия крупного рогатого скота и овец регистрировали в предгорных и степных зонах по поймам рек в Краснодарском крае: Ея, Сосыка, Бейсуг, Кирпили, Кубань и Лаба в среднем и нижнем течении. В Ставропольском крае по рекам: Кума, Егорлык, Калаус, Малка, Горькая балка, Мокрая Буйвола, в Калмыкии - по Манычу, его озерам и поймам. В горной местности реки с холодной чистой водой практически не являются путем передачи инфекции, но в их поймах, где вода застаивается, часто регистрировали энзоотии лептоспироза.

Установлено, что почвы с нейтральной и слабощелочной реакцией являются благоприятными для длительного переживания лептоспир. Все черноземные почвы имеют рН среды 7,0-7,8. В западной части орошаемого земледелия Краснодарского края находятся темно-серые и серые лесостепные почвы с кислой реакцией среды (рН 4,5-5,0), а в Таманской подзоне и Черноморском побережье рН почв колеблется от 3,9 до 8,3 , там создаются неблагоприятные условия для сохранения лептоспир и энзоотии там регистрировали гораздо реже.

Для сельскохозяйственных животных важным моментом в распространении лептоспироза являлись перевозки и перегоны своевременно не вакцинированных. животных-лептоспироносителей с племенными и хозяйственными целями. Купленные животные-лептоспироносители в неблагополучных хозяйствах своевременно не исследованные и введенные в стада и гурты благополучных

хозяйств в 26% случаев были причиной лептоспирозных энзоотий. Особенно опасны хряки и быки-производители-лептоспироносители на станциях искусственного осеменеиия, когда там слабо ведется контроль и инфицированной спермой заражали свиноматок, коров, телак и т.д. (11% случаев). В хозяйствах, где не выращивают свой ремонт, свинок берут с откорма, а там возможны лептоспироносители, возникают энзоотии лептоспироза (до 9% случаев).

Перегоны молодняка крупного рогатого скота и овец в весенне-летнее и осеннее время на пастбища предгорий Адыгеи, Краснодарского и Ставропольского краев, в Карачаево-Черкессии и Кабардино- Балкарии, а также на пастбища степей (Черные земли) в Ставропольском крае и Калмыкии способствуют вспышкам лептоспирозных энзоотий (18% случаев).

2.2.2. Сезонность и особенности кпинтеского течения лептоспироза.

Анализ ветеринарной отчетности за последние 20 лет показал, что заболевание крупного рогатого скота, овец и лошадей лептоспирозом в регионе в основном регистрируется в теплое время года. В апреле-мае резко увеличивается (в 2-3 раза) не только количество неблагополучных пунктов (до 82%),но и количество заболевших животных (до 76%), когда идет на подъем температура воздуха и количество выпавших осадков. Однако смертность от лептоспироза у животных выше в холодное время года, особенно она высока в январе-феврале (до '37,3%), что можно объяснить ухудшением кормления и снижением резистентности организма в период зимовки.

На сезонность заболевания в значительной степени оказывает влияние миграция грызунов, разливы рек. Так летом 1997 года в отдельных районах Краснодарского края (Гулькевичский, Тбилисский, Северский, в Адыгее) резко возросло количество мышевидных грызунов (мыши, хомяки) на животноводческих фермах, токах и резко возросло количество заболеваний животных и людей лептоспирозом, в 1997 году по данным край СЭС заболело 1477, умерло 30 человек.

У свиней сезонность в заболевании лептоспирозом выражена в меньшей степени, а там где круглогодичное, безвыгульное стационарное содержание - она совсем не выражена.

Значительный ущерб болезнь все же наносит свиноводству за счет массовых абортов, мертворождений, прохолостов свиноматок и смертности молодняка в подсосный и отъемный периоды (до 40%).

Лептоспироз животных в регионе в основном протекает бессимптомно. Иногда нам удавалось регистрировать клинические проявления болезни. Характерную лептоспирозную энзоотию мы наблюдали у лошадей на территории Государственной заводской конюшни (ГЗК). У крупного рогатого скота только в 2-5% случаев регистрировали характерные клинические признаки у взрослых животных. У 12-28% коров отмечали аборты за 60-20 дней до ожидаемого отела (совхоз Восход , Новокубанского района). У других сразу после отела отмечали повышение температуры тела на 1,5-2° выше нормы, кровавую мочу, желтуху, иногда некрозы кожи на вымени, ушных раковинах, пониженный аппетит, атонию преджелудков, жажду. Падеж достигал 8-16% от числа заболевших. Часто регистрировали поражение глаз в виде конъюнктивитов и кератоконъюнктивитов. Характерную клиническую картину заболевания мы отмечали у крупного рогатого скота чаще вызванную возбудителями серогрупп: Icterohaemorrhagiae, Pomona. Лептоспиры серогруппы Grippotyphosa чаще вызывали повышение температуры тела, угнетение, иногда некрозы кожи, но желтухи мы не наблюдали. Лептоспироз у крупного рогатого скота может протекать одновременно с бруцеллезом, паратифом, тейлериозом, туберкулезом и диплококковой инфекцией у молодняка.

У свиней отмечали острое, подострое, хроническое и бессимптомное течение. Первые три формы регистрировали у поросят. Бессимптомное заболевание чаще протекало у свиноматок и хряков. У свиноматок болезнь проявлялась в виде массовых абортов за 5-20 дней до ожидаемых опоросов. Чаще абортировали разовые (проверяемые) свиноматки, иногда это были массовые мертворождения. Через несколько дней после аборта животные приходили в охоту, покрывались, но в 30-40% оставались неоплодотворенными. В этот период у них отмечали высокие тиры антител и лептоспироносительство.

В одном из хозяйств Краснодарского края мы наблюдали лептоспироз свиней, вызванный лептоспирами серогруппы Canicola, источником явились

бродячие собаки. Болезнь протекала в виде абортов за 8-22 дня до ожидаемых опоросов. Плоды были мертвыми на 100% у 18 свиноматок и на 40-60% у 8 свиноматок из 65 опоросившихся. У 16% плодов плодные оболочки были желтушны.

Характерная клиническая картина болезни отмечена у домашних собак, вызванная лептоспирами серогрупп: Icterohaemorrhagiae и Canicola, и протекала с повышением температуры тела, угнетением, желтухой, кровавой мочой, последующей гибелью. У больных отмечено интенсивное нарастание специфических антител и выделение лептоспир с мочой. С увеличением количества домашних и бродячих собак, увеличивается их роль как источника лептоспироза для человека и животных.

3. Иммунитет у животных пли лептоспнрозе. В процессе работы мы ставили следующие задачи: - изучить в динамике у животных , инфицированных лептоспирами, появление и накопление специфических гуморальных и клеточных факторов иммунитета, а также неспецифических показателей (ОФР, лизоцим, комплемент), выяснить в какой степени участвуют отдельные органы и ткани в иммунном ответе. Изучить иммунный ответ у животных при разных методах введения различных лептоспирозных антигенов с разными консервантами и адъювантами. Все это для того, чтобы научно обосновать и экспериментально доказать возможность конструирования наиболее иммунногенных специфических биопрепаратов против лептоспироза. Все опыты проводили на кроликах и свиньях.

3.1. Специфические и неспецифические факторы иммунитета у животных, инфицированных лептоспирами.

Опыт был поставлен на 50 поросятах 2,5 месячного возраста, 28 из которых внутрибрюшинно заразили лептоспирами серогруппы Pomona (штамм К-111, 2 см3- 150 млн 10 LD50), а 22 оставались здоровыми и служили контролем. Затем через 3, 6, 10, 20, 30, 60 и 90 дней по 4 подопытных и 3 контрольных поросенка убивали, отбирали материал и проводили исследования. Инфицированные поросята легко переболевали с повышением температуры тела на 1-1,5°С в течение 3-4 дней. Результаты исследований отражены в таблице 4.

Таблица 4

Динамика показателей иммунитета у поросят при экспериментальном лептоспирозе

Показатели иммунитета Уровень показателей после инфицирования лептоспирами через, дней

До заражения 3 6 10 20 30 60 90

I. Антитела в сыворотке крови (РИА) - 1:12 ±2' 1:80 + 23" 1:120 ±31** 1:1120 ± 121 1:1208 ± 142 1:1120 ±87* 1:910±62

2. Антитела в экстрактах органов (РМА). - 1:80 + 8* 1:260 ±85** 1:880 ± 15** 1:1104 + 146 1:960 ±72 1:690 ±45' 1:460 ±29*

3. Титры лизоцима в сыворотке 1:162 + 24 1:90 ±9* 1:148+12 1:40 + 8" 1:150± 14 1:36 + 6" 1:146+18 1:80 ±8" 1:140+12 1:170 + 25' 1:130 ± 12 1:180 + 30 1:148 ± 14 1:166 ±24 1:160 ±22

4. Титры комплемента в сыворотке 0,075-0,1 0.095 + 0.2* 0,075+0,2 0.1+0.1* 0,07 + 0,1 0.09 ± 0.2* 0,7 ±0,1 0.08 ±0.2 0,07 ±0,2 0.6 ±0,1 0,065 ±0,2 0.04 ±0.1* 0,65 ±0,1 0,06 ± 0.08 0,075 ±0,2

5. Фагоцитарный индекс 1,1-1,0 5.5+1.2" 1,1 ±0,1 8,5 ±2" 1,2 ±0,2 6,8 ±1,5" 1,1 ±0,1 5,1 ± 1" 0,9 ±0,1 5.0+1.6" 1,2 ±0,2 2.3 ± 1* 1,1 ±0,1 1.4 ±0.5* 1,1 ±0,2

6. Общий белок в сыворотке, г/л 71 ± 10 66+15 70+12 56 ±17* 72 + 14 42 + 19" 76 ±35 64 ±18* 74 ±30 71 ±26 73 ±24 78 ±31 74 ±30 79 ±40 76 ±35

7. Гамма - глобулины, г/л 16,6 + 2 21,7 ±4 18±4 22 + 5* 17 + 3 24,3 ± 8" 16 + 2 29 + 12" 17± 3. 28 + 10** 17 ±3 27 ± 11* 18 ±4 . 28 ±12* 17,5 ±4

8. Лейкоциты крови, 1-Ю'/л 28,0 ± 2 32.2 ± 4 30,8 ± 5 36.6 ± 5* 29,5 + 5 40.6 ±12* 31,2 ±4 42,8 ±15* 28,6 ± 3 43 ± 14* 26,8 ±2 40.8 ± 10* 30,2 ±4 40,2 ±12 34,2 ±4

9. Эритроциты крови, 1- 101г/л 6,1 ±2 5,6+1,2 6,1 ±2 4,2 ± 1* 6,2 ±2 4,4 ±1,2* 6,2 ±2 5.4+1.2* 6,08 ±2 6.6 ±2.1* 6,4 ±2,4 6,1 ±2 6,3 ± 2,2 6.4 ±2.4 6,4 ±2,4

Примечание: В числителе показатели иммунитета опытных поросят, в знаменателе показатели поросят контрольной группы, т.е.

здоровых, не инфицированных ; * Р< 0,05; " Р< 0,02

Исследованиями материалов от поросят установлено значительное снижение эритроцитов (с б до 4,5x1012/л), наиболее интенсивное на 6- 10-й день с момента заражения, но уже к 30 дню количество эритроцитов восстанавливалось до нормы. Уменьшалось содержание гемоглобина на 6-10 день на 45-50%, но к 30 дню уровень его восстанавливался. Количество лейкоцитов в крови опытных поросят увеличивалось до 32,6-46x109/л. В лейкоцитарной формуле отмечали увеличение лимфоцитов на 50-60%, а эозинофилов - на 20-30%, значительное снижение количества сегментно-ядерных нейтрофилов и моноцитов, но зато возросло количество юных и палочкоядерных нейтрофилов, т.е. налицо был сдвиг ядра влево. Общий белок сыворотки крови у подопытных поросят уменьшался к 6-10 дню на 30-38%, но к 60 дню его уровень восстанавливался до нормы. Значительно уменьшалось содержание альбуминов (на 40-60%).Содержание у -глобулинов увеличивалось на 50-60% по сравнению с контролем. Особенно интенсивное увеличение этой фракции глобулинов наблюдали на 20-30 день после заражения, т.е. прямо пропорционально накоплению специфических антител. К 10 дню увеличивалось (на 30-40%) содержание р-глобулинов. До 10-20 дня в глсбулиновой фракции преобладали глобулины М, а с 20 дня и далее глобулины Б. Кислотная емкость сыворотки крови в первые 20 дней после заражения имела тенденцию к уменьшению на 20-30 г/л.

Агглютинины у подопытных поросят выявляли с 3-го дня, их титры постепенно увеличивались и достигали максимума к 20-30 дню (1:1100+ 121 -1:1208+142), а затем постепенно начинали снижаться.

Антитела в экстрактах органов и тканей выявляли несколько раньше, чем в сыворотке крови и максимальных титров они достигали к 6-10 дню, а затем постепенно снижались. Наивысшие титры зарегистрированы в лимфоузлах: регионарных, тазовых, паховых, подчелюстных, в селезенке, легких , надпочечниках. К 30 дню титр антител в экстрактах снизился - 1:960 +72.

Превентивные свойства для золотистых хомячков сыворотки крови поросят были высокими (80-90%) даже через 30-60 дней после инфицирования.

Гистологическими исследованиями установлена бластотрансформация ретикулярных клеток в малодифференцированные, переходные и плазмобласты в первые 10 дней после заражения.

При люминисцентном исследовании отпечатков органов подопытных поросят наблюдали специфическое свечение клеток, производящих проиволептоспирозные антитела. У плазмоцитов, плазмобластов, реже у лейкоцитов ярко светилась зернистая протоплазма. Эти клетки появлялись с 3 дня после заражения, достигали пика на 6 день, а затем их количество снижалось. И на 30-60 день во многих органах они уже не выявлялись. Много клеток зарегистрировано в селезенке, тазовых и паховых лимфоузлах, в тимусе, надпочечниках, в месте введения лептоспир. В меньшем количестве (на 40%)в других лимфоузлах и легких. Не обнаружено антителосинтезирующих клеток в скелетных и сердечных мышцах, в костном мозге, мало их было в почках.

Из неспецифических показателей иммуногенеза очень вариабельной оказалась фагоцитарная активность лейкоцитов крови. Уже через 3 дня после заражения она увеличилась в 5,5 раз, а к 6 дню в 8,5 раз, начиная затем постепенно волнообразно снижаться. Уровень комплемента в сыворотке поросят снижался до 6 дня после инфицирования, а затем к 20-30 дням восстанавливался до нормы. Лизоцим в сыворотке крови к 6 дню после заражения поросят снижался на 75%, к 10 дню - на 92%. В дальнейшем шло увеличение его уровня .

В эксперименте доказано, что самой ранней защитной реакцией являлась фагоцитарная активность лейкоцитов крови. У 2,5 месячных поросят, инфицированных лептоспирами, специфические антитела формировались в первые 6-10 дней в лимфоидных и паренхиматозных органах. Максимальное накопление антителосинтезирующих клеток, а также антител в экстрактах органов подопытных поросят регистрировали на 10-14 дней раньше, чем пик специфических антител в сыворотке крови. Установлена динамика содержания лизоцима и комплемента.

3.2.Иммунный ответ при различных методах введения антигена.

Опыты поставлены на 56 кроликах, разделенных на 7 равных групп. Им вводили однократно по 2 см3 убитого антигена (150 млн) подкожно,

внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, перорально, аэрогенно (внутрь), по 0,2 см3 концентрированного внутрикожно, одна группа оставалась контрольной, им вводили физраствор. У большинства подопытных животных антитела наивысшего титра достигали к 20 дню после вакцинации. Самый высокий титр антител отмечали у кроликов, которым антиген вводили внутривенно, внутрибрюшно, - немного ниже при внутрикожном, затем внутримышечном аэрогенном введении и совсем низким при подкожном и пероральном введении.

При внутрикожном введении антигена титр антител был в 1,2 раза выше, чем при внутримышечном, что дало основание испытать этот метод на сельскохозяйственных животных.

3.3. Иммунный ответ при введении различных лептоспирозных антигенов.

Вначале опыты проводили на кроликах (48), которых разделили на 12 групп и им по группам вводили по 2 см3 (150 млн.. убитых лептоспир) разных антигенов: разрушенный ультразвуком, феноловый, гретый, формалинизированный, с гидроокисью алюминия, с хлористым кальцием, с алюминиевыми квасцами, с хлористым кальцием вместе с алюминиевыми квасцами, с комбинированным адъювантом (глицерин+ гидроокись алюминия) концентрированный в 10 раз /0,2см3, концентрированный с техническим маслом -50% и с 30% гидроокисью алюминия. Полученные результаты на кроликах мы продублировали на поросятах. Для этого было отобрано 60 поросят 2,5-3 месячного возраста, которых также разделили на группы и по группам ввели те же антигены, что и кроликам (по 5 см3 и концентрированный по 1 см3).

Установлено, что наиболее высокий титр (в 2-3 раза выше) антител и более продолжительное время он сохранялся, а также превентивные свойства сыворотки были более высокими у поросят, которым применяли антигены, консервированные формалином, с адъювантами: гидроокисью алюминия - 30%, техническим маслом - 50%.

Антиген, консервированный фенолом, вызывал у подопытных животных формирование агглютининов в 1,2 раза ниже, чем консервированный формалином.

Таким образом, при введении в организм лептоспирозных антигенов разрушенных ультразвуком, гретых или фенолизированных образуется менее напряженный и продолжительный иммунитет, чем при введении инактивированного формалином (корпускулярного).

Введение корпускулярного антигена с более крупными частичками обеспечивало более высокий иммунный ответ. Как указывали А.К.Адамов и Н.И.Николаев (1966 ) Tripaty, (1976 ) иммунологически активные антигены содержатся в стенках бактерий (целых клеток), поэтому не разрушенные микробные клетки вызывали образование более напряженного иммунитета, что достигалось инактивацией антигена формалином.

Адъюванты, введенные вместе с антигеном, на длительное время задерживали антиген на месте введения, задерживали гидролиз его тканевыми ферментами, усиливали воспалительную реакцию на месте введения, стимулировали фагоцитоз и способствовали более интенсивному иммунному ответу. В наших опытах более высокие антигенные и иммуногенные свойства вызывали концентрированные антигены с адъювантами: техническим маслом, гидратом окиси алюминия.

Для конструирования эффективных противолептоспирозных вакцин необходимо использовать консервант, менее разрушающий микробную клетку (формалин) и добавлять адъюванты: гидрата окиси алюминия 30% или минеральное масло - 45-50%.

4. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ТЕРАПИИ ЖИВОТНЫХ, БОЛЬНЫХ ЛЕПТОСПИРОЗОМ. 4.1. Изыскание лептоспироцидных препаратов IN VITRO.

Задачей являлось изыскание антибиотиков или химиотерапевтических препаратов, которые при малой экспозиции обладали бы высокими бактерицидными свойствами в отношении лептоспир in vitro, с целью их дальнейшего использования их in vivo. Для изучения бактерицидных свойств мы

отобрали ряд антибиотиков отечественного и зарубежного производства, лечебные красители, нитрофураны, противомалярийные препараты, спирохетоцидные средства и др. Для определения чувствительности методом последовательных серийных разведений использовали диагностические и вирулентные, выделенные от животных, лептоспиры 5 серогрупп: Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola и Icterohaemorrhagiae.

Исследованиями установлено, что испытуемые препараты в отношении лептоспир in vitro оказывали различное бактерицидное действие. Оно проявлялось на одно разведение ниже, чем бактериостатическое. Из исследованных антибиотиков наиболее бактерицидными при 24 часовой экспозиции оказались: тилан, гентамицин в концентрации 5 мкг/см3 ; фармазин - 10 мкг/см3 , стрептомицин, левомицитина сукцинат натрия, неомицин, канамицин- 15 мкг/см3, окситетрациклин, дибиомицин - 20мкг/см3 , пенициллин, бициллин -3, эритромицин - 30 мкг/см3 , олахиндокс, родамин, тиамутин, байтрил - 40, полимиксин -50 мкг/см3 . Химиопрепараты также при 24 часовой экспозиции проявили бактерицидные свойства в следующих концентрациях: бриллиантовый зеленый -0,5 мкг/см3 , азидин (беренил) - 10 мкг/см трипофлавин, новарсенол, миарсенол, аминоакрихин - 40 мкг/см3 , трипановый синий -70 мкг/см3, сульфантрол, хингамин - 500 мкг/см3 , аминарсон, диметилсульфоксид, фурациллин - 1 мг/см3 , эмтрил - 25 мг/см3 . Сочетания антибиотиков не вызывали заметного усиления бактерицидных свойств по сравнению с действием какого-нибудь одного антибиотика. Кроме того в опытах не установлено значительного различия в действии химиопрепаратов и антибиотиков на свежевыделенные от больных животных и диагностические штаммы лептоспир.

4.2. Синтезирование сложного лептоспнроцндного препарата.

Ввиду того, что хороший лептоспироцидный эффект in vitro показали лечебные краски, нами сделана попытка синтезировать новый препарат с включением одного из самых бактерицидных красителей бриллиантовой зелени. После длительных поисков и экспериментов был получен сложный химиопрепарат-полимерэндофарм (ПЭФ-авторское свидетельство 1238290), который при

дальнейшем изучении оказался эффективным при лептоспирозе, дизентерии и колибактериозе молодняка животных.

Полимерэндофарм в своем составе содержит мочевинно-формальдегидный конденсат, комплексонат монойодита висмута и трилона-Б, норсульфазол, фуразолидон и бриллиантовый зеленый. Это - порошок зеленого цвета, без запаха, вяжущего вкуса, в воде медленно растворяется с зеленым окрашиванием, раствор стабилен в комнатных условиях до суток. Препарат в организме животного гидролизуется под воздействием желудочного сока и нейтрализует токсины, а освобождающиеся антимикробные вещества (бриллиантовый зеленый, фуразолидон и др.), входящие в состав оказывают бактерицидное, пролонгированное действие на микроорганизмы: энтеропатогенные эшерихии, сальмонелл, лептоспир и др. При испытании in vitro на лептоспир ПЭФ оказывал бактерицидное действие при 24 часовой экспозиции в концентрации 40-50 мкг/см3

4.3. Испытание лептоспнроцидиых препаратов на животных.

Вначале опыт провели на 70 золотистых хомячках, которых внутрибрюшинно заражали вирулентным штаммом лептоспир К-111 серогруппы Pomona по 0,2 см3 - 10 LDJ(|. Со второго дня после заражения хомячкам стали вводить препараты (внутримышечно): фармазин, гентамицин, азидин, бициллин -3 и стрептомицин (для контроля) в терапевтических дозах, ПЭФ водили перорально. В опыте установлено, что фармазин в дозе 10 мг/кг массы животного один раз в сутки 4 дня, гентамицин в дозе 6 мг/кг массы 2 раза в сутки и 5 дней, азидин в дозе 3 мг/кг один раз в сутки, 3 дня, стрептомицин по 25 мг/кг веса один раз в сутки и 4 дня, ПЭФ по 100-150 мг/кг внутрь обеспечивали стопроцентную ликвидацию лептотспироносительства у зараженных хомячков. Бициллин - 3 лептоспироносительства не ликвидировал.

Для проведения опытов на сельскохозяйственных животных подобрали хозяйства неблагополучные по лептоспирозу, где отбирали животных -лептоспироносителей (методом микроскопии мочи) делили на группы и по группам вводили препараты до полной ликвидации лептоспировыделения, контролируя микроскопией проб мочи и посевами ее на питательные среды. В

трех хозяйствах было использовано 290 свиноматок и подсвинков. Результаты опытов отражены в таблице 5.

Установлено, что для ликвидации лептоспироносительства у свиней необходимо вводить внутримышечно один из препаратов: фармазин по 10 мг/кг массы животного один рай в сутки 4 дня; гентамицин по 6 мг/кг массы животного 2 раза в сутки 5 дней, полимерэндофарм (ПЭФ) по 100-150 мг/кг массы животного перорально с водой или кормом 1-2 раза в сутки 5 дней. Азидин у свиней дал эффективность 85%, при увеличении дозы вызывал токсические явления. Бициллин - 3 не ликвидировал лептоспироносительства ни у одного вида животных.

Для испытания эффективности отобранных препаратов на крупном рогатом скоте в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах было взято 320 телок и коров-лептоспироиосителей, разделили их по группам и вводили указанные препараты.

Установлено, что для ликвидации лептоспироносительства у крупного рогатого скота необходимо вводить внутримышечно один из препаратов: фармазин по 10 мг/кг массы животного один раз в сутки 4 дня, гентамицин по 6 мг/кг массы 2 раза в сутки 5 дней, азидин по 3 мг/кг массы один раз в сутки 3 дня, полимерэндофарм перорально по 100-150 мг/кг массы 1-2 раза в сутки 5 дней. Некоторые из этих препаратов испытывали при лептоспирозе на собаках. Установлено, что фармазин, гентамицин и стрептомицин оказали стопроцентный лечебный и лептоспироцидный эффект в тех же дозах и при той же кратности, что и у сельскохозяйственных животных. Учитывая результаты опытов нами разработаны и утверждены временные наставления по применению гентамицина и фармазина при лептоспирозе животных. Синтезированный препарат ПЭФ оказал хороший терапевтический и лептоспироцидный эффект у свиней и крупного рогатого скота. Однако эффективность данного препарата еще выше при дизентерии свиней и других желудочно-кишечных заболеваниях: колибактериозе, сальмонеллезе молодняка сельскохозяйственных животных, поэтому в наставлении по его применению рекомендовано применять внутрь также и при

Таблица 5

Результаты испытания лептоспироцидных свойств препаратов на животных -лептоспироносителях.

Наименование препарата Метод введения Доза на I кг массы животного, мг Кратность Излечено лептоспироносителей, %

В сутки Дней Хомячки Свиньи Крупн. рог. скот Собаки

1. Тилан В/м 5 1 4 100 100 100 Н/и*

2. Фармазин В/м 10 1 4 100 100 100 100

3. Гентамицин В/м 6 2 5 100 100 100 100

4. Стрептомицин В/м 25 1 4 100 100 100 100

5. Бициллин - 3 В/м 25 1 4 90 80 70 90

6. Полимер-эндофарм Перора-льно* 100-150 1-2 5 100 100 100 Н/и

7. Азидин В/м 3 1 3 100 85 100 Н/и

* - препарат не испытывали. Препарат ПЭФ давали с водой или кормом

этих заболеваниях по 100-150 мг/кг массы животного 1-2 раза в день 5 суток. С профилактической целью препарат рекомендуем давать по 100 мг/кг внутрь 3-4 дня.

5. ВЛИЯНИЕ АНТИБИОТИКОВ НА ИММУНИТЕТ У ЖИВОТНЫХ ПРИ ЛЕПТОСПИРОЗЕ.

Опыты проводили на кроликах, телятах и свиньях, которых инфицировали лептоспирами или вакционировали против лептоспироза и в разное время от иммунизации им по группам вводили антибиотики, оказавшиеся наиболее лептоспироцидными в наших опытах: фармазин, гентамицин, стрептомицин в лечебных и ударных (завышенных в 2 раза) дозах. Из показателей иммунитета

3S

определяли уровень специфических антител и защитные свойства сыворотки крови. В опыте использовано 105 кроликов и 225 поросят 2,5-3-х месячного возраста, 35 телят 3-х месячного возраста и 450 золотистых хомячков. Поросятам вводили поливалентную вакцину ВГНКИ против лептоспироза в дозе 5 см3 телятам - 6см3, кроликам - 2см3. Кровь для исследования брали через 15-30 дней после вакцинации. Отдельные группы поросят инфицировали вирулентными лептоспирами серогруппы Pomona штамм К-111 внутрибрюшинно по 4 мл-(320 млн) 10 LD50.

Результаты на кроликах и поросятах получены аналогичные, поэтому прокомментируем их на поросятах (таблица 6).

В группах животных, которым вводили антибиотики в лечебных дозах одновременно с вакцинацией отмечено снижение уровня антител на 50-60%, защитных свойств сыворотки - на 30-40%.

Установлено, что титр антител, превентивная активность сыворотки крови у подопытных животных не снижаются, если антибиотики (стрептомицин, фармазин и гинтамицин) вводили полным курсом е терапевтических дозах (рекомендованных ранее) за 10-12 дней до вакцинации. Также результаты получены при введении полного курса антибиотиков спустя 10 дней после вакцинации.

Интенсивное снижение на 30-40% титра антител и 20-30% защитных свойств сыворотки отметили в группе животных, которым вводили антибиотики через 2 дня после вакцинации. Снижение показателей иммунитета отмечено на 15-20% даже при введении антибиотиков через 5 дней после вакцинации. И только спустя 10 дней после вакцинации введение антибиотиков в терапевтических дозах

достоверно не влияло на формирующийся поствакцинальный иммунитет. Наиболее сильное снижение уровня антител на 7050%, защитных свойств на 40-50% мы отмечали при введении антибиотиков кроликам и поросятам через 5 дней после инфицирования их лептоспирами.

з*

Таблица 6

Влияние антибиотиков на формирование иммунитета у свиней при лептоспирозе

и вакцинации

№ п/п Сроки введения Препаратов К-во ж-х в гр. Показатели иммунитета через 30 дней после введения препаратов

Стрептомицин Фармазин Гентамицин

1. За 10-12 дней до вакцинации 25 100/90 100/90 100/90

2. За 5 дней до вакцинации 25 80/70 70/80 80/80

3. Одновременно с вакцинацией терапевтические дозы 25 50/60 40/50 56/60

4. Одновременно с вакцинацией ударные дозы 25 30/40 35/30 35/40

5. Спустя 2 дня после вакцинации 25 70/70 60/60 66/70

6. Спустя 5 дней после вакцинации 25 90/80 80/70 90/90

7. Спустя 10 дней после вакцинации 25 100/90 90/80 100/90

8. Через 5 дней после заражения лептоспирами 25 50/40 30/40 45/50

9. Контроль, только вакцинированы 25 100/90 100/90 100/90

Примечание: в числителе титр антител в % к контролю, взяты за 100%. В знаменателе защитные свойства сыворотки в % выживших хомячков.

При анализе результатов исследования по разным антибиотикам отмечено, что применение фармазина почти во всех случаях снижало на 10-15% уровень антител и защитные свойства сыворотки сильнее, чем другие антибиотики. Стрептомицин и гентамицин угнетали формирование иммунологических показателей примерно в одинаковой степени.

з<Г

Аналогичные результаты получены и на телятах. Установлено, что применение исследуемых антибиотиков поросятам и телятам в дозах в два раза превышающих терапевтические - снижало показатели формирующегося иммунитета до 30-40% по сравнению с контролем.

^УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЛЕПТОСПИРОЗА У ЖИВОТНЫХ 6.1. Концентрированная вакцина против лептоспнроза животных

Чтобы повысить эффективность вакцины была поставлена задача изготовить к испытать концентрированную вакцину против лептоспнроза животных, которую совместно с В.А.Сергеевым, А.П.Сурмило, В.И.Семенцовым и др. готовили следующим образом: производственные штаммы лептоспир шести серогрупп, выращивали на водно-сывороточной среде, добавляли формалин до 0,2-0,25%-ной концентрации выдерживали при температуре-24-28 С в течение 18-24 часов, смешивали культуры лептоспир всех серогрупп в реакторе, где их осаждали с помощью стерильного 40% полиэтиленгликоля, доводя концентрацию до 7-10% и 1,5% ЫаС1. Потом отстаивали в реакторе 18-24 часа и при постоянном перемешивании, антиген центрифугировали (сепарировали) в проточной центрифуге (СГО-ЮО) при 10 000-15 000 об/мин. Полученный осадок (сконцентрированный обычно в 100-120 раз) суспендировали стерильным забуференным физраствором до концентрации!5-20 раз. Опытным путем установили, что эта концентрация антигена является оптимальной. К полученной гомогенной массе антигена добавляли 30-35% адъюванта 6% гидроокиси алюминия (ГОА) при непрерывном помешивании. Опытным путем сотрудники ВГНКИ и мы доказали, что эта концентрация адъюванта является оптимальной. После добавления адъюванта концентрацию лептоспирозного антигена получали 10-12 к первоначальному объему с содержанием 800-950 млн. лептоспир в см\ Затем добавляли формалин, доводя его концентрацию до 0,2-0,25% по формальдегиду. Полученную вакцину фасовали во флаконы и этнкетировали. Для испытаний было изготовлено по 5 серий опытных поли- и моновалентных вакцин. Испытание проводили на хомячках, кроликах, поросятах 2,5- месячного возраста.

зб

свиноматках, телятах 3 месячного возраста и ярках 6 месячного возраста. Хомячкам вакцину вводили по 0,05 см3 , кроликам по 0,5 см3 , поросятам и телятам по 1,0 см3 , яркам по 0,5, свиноматкам по 2,0 см3 . Вакцины вводили внутримышечно. Для контроля брали производственную поливалентную вакцину ВГНКИ и вводили ее подопытным животным в дозах, предусмотренных наставлением . Результаты сведены в таблицу 7. Активность препаратов определяли по титру антител, превентивным свойствам сыворотки вакцинированных животных.

Установлено, что концентрированная поливакцина в объеме 0,05 см3 создавала у 91,1% иммунизированных хомячков иммунитет против лептоспироза. Концентрированные моновакщты Pomona и Icterohaemorrhagiae создавали у 100% иммунизированных хомячков иммунитет против гомологичной культуры. Поливалентная вакцина ВГНКИ у хомячков создавала иммунитет у 57,7% зверьков. Сыворотка крови кроликов, иммунизированных шестивалентной концентрированной вакциной защищала хомячков в 88,9%, титр антител был 1:1200. Сыворотка кроликов^ иммунизированных четырехвалентной концентрированной вакциной^ защищала 95,6% хомячков, титр антител был 1:1800, а иммунизированных моновакцинами Pomona и Icterohaemorrhagiae защищала 100% хомячков, титр антител был 1:2373+120, поливалентной вакциной ВГНКИ соответственно 44,4%, 1:660+8Ч- Сыворотка крови поросят, иммунизированных четырехвалентной концентрированной вакциной через 25 дней предохраняла 100%, через 90 дней - 100% хомячков, титр антител соответственно был 1:120+14, 1:40+8. В то время как у поросят, иммунизированных поливалентной вакциной ВГНКИ сыворотка предохраняла хомячков 60%, 70% титр антител регистрировали 1:48±4, 1:20±2. Немного выше указанные показатели были у опытных свиноматок, иммунизированных концентрированной поливакциной и на 20-50% выше у иммунизированных, концентрированными моновакцинами Pomona и Iterohaemorrhagiae.

Таблица 7

Результаты сравнительного испытания антигенных и нммуногснных свойств концентрированной вакцины против лептоспнроза на животных разных видов

Вил вакиииы Объема; Живот- Хомяч- Показатели имч>иитста через дней .

и в см ных а группе ков в опыте 25 90

~ — Титр антител Защити, и сы ворот. Титр антител Зашитн с-вз сывор.

Хомяки:

1. Кона 4 валент. 0,05 45 45/41 не исследовал. 91,1 не исследовал. -

2. Кони моноваки. 0,05 54 54 / 54 100

3. Вакцнна.ВГНКИ 0,2 45 45:26 51.7 •

Кролики:

1. Кони, 6 валент. 0.5 п 30 45/40 1:1200:46' 88.9 и нсслелосад.

2. Кони. 4 валект. 0,5 25 45/43 Г. 1800 ±68' 95,6

3. Кони моноваки. 0.5 30 45: 45 1:23731129* 100

4. Вакинна, ВГНКИ 5.0 10 45 20 1 660184 44.4 -

Поросята:

1 Кони. 4 валент. 1,0 25 30'28 1:120114- 100 1:4018- 100

-» Вакцина. ВГНКИ 6.0 15 30, 17 1:4814 60 1:2012 70

Свиноматки:

1 Конц. 4 валент. 10 30 28 1:160124' 100 |:40±5* 100

2 Кони. моноваки. 2.0 25 ЗО'ЗО 1:320128' 100 1:60110- 100

3. Вакинна. ВГНКИ 10.0 10 30 / 22 1:5814 80 12512 90

Телята:

1. Кони. 4 валент. 1.0 25 30 ' 26 1:240126- 90 1:90115 100

2 Кони, моноваки. 1.0 25 30/28 1:360147- 100 1:120116 100

3. Вакинна, ВГНКИ 4.0 10 30/ 19 1:180119 60 1:8018 80

Овцы 'ярочки '

1. Кони. 4 валент. 0.5 30 30 . 26 1 80+5.1» 100 1:30+2.2 90

2. Вакинна. ВГНКИ 3.0 20 30/ 17 1:40*2 60 1:20+0.8 70

Примечание : в графе "Количество хомячков в опыте" в числителе - взято хомячков в опыт, в

знаменателе - количество хомячков, выживших после заражения лемтоснирами. г е.

ИММУННЫХ.

* Р< 0.05

за

Результаты испытания на телятах и овцах показали, что титр антител у животных этих видов и защитные свойства сыворотки крови сохранялись до 6 месяцев. Наиболее высокие показатели дали концентрированные моновакцины Pomona и Iterohaemorrhagiae (на 40-50% выше) по сравнению с поливалентной вакциной ВГНКИ.

Концентрированная вакцина имеет следующий состав:

1. Антиген (смесь антигенов серогрупп Pomona, Tarassovi, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa, Sjeroe, Canicola сконцентрированный в 15-20 раз 70-65%/67,5% (810-1080 млн.лептоспир в см3 )

2. Адъювант (6% гидрат окиси алюминия) - 30-35% (32,5%)

3. Консервант-формалин (в пересчете на формальдегид) - 0,2-0,25%

Применением технологических приемов, хотя и известных, но ранее не применяемых для производства лептоспирозных вакцин, нами разработан способ промышленного приготовления концентрированной поли, а также моновакцин против лептоспироза животных, обладающей высокой эффективностью. При этом в предлагаемую поливакцину можно включать антигены сразу 6 серогрупп лептоспир, распространенных в стране. Испытание на стерильность и безвредность опытных микросерий проводили общепринятыми методами. Только в хозяйствах Краснодарского края опытными сериями концентрированной вакцины против лептоспироза иммунизировано 146 тысяч свиней и 51429 голов крупного рогатого скота. Вакцина не давала никаких осложнений и создавала напряженный иммунитет.

6.2. Ассоциированная, ннактивированная вакцина против болезней свиней ШЛА).

Была поставлена задача: разработать технологию ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной инфекции, лептоспироза, болезни Ауески и хламидиоза (ПЛАХ), обладающей высокой иммуногенностью. Вначале разрабатывали технологию и готовили документацию на четырехвалентную вакцину против указанных инфекций. Было изготовлено и испытано на практике несколько серий вакцины, которые оказались высокоиммуногенными. Но ввиду того, что хламидиозный антиген готовился на

Украине и впоследствии создались определенные трудности с его получением для изготовления ПЛАХ, он был исключен из состава биопрепарата. Вакцина стала трехвалентной с составом антигенов: парвовирусной инфекции, лептоспироза и болезни Ауески свиней (ПЛА). Работу проводили совместно с В.А.Сергеевым, Б.Г. Орлянкиным, Г.Ф.Денисенко, А.П.Сурмило и др.(1987) следующим образом.

Производственные штаммы, используемые на Ставропольской биофабрике для производства коммерческих вакцин: парвовирусной инфекции (ПВС) и болезни Ауески (ВБА) выращивали в суспензионной культуре перевиваемых клеток почки поросят (линия ППК). Культивирование продолжали 18-48 часов пока концентрация исходных вирусов достигала титра 108,5 - 10ад - ТЦД5(/см3 . Активность вируса ПВС в РГА достигала титра 1:2048-1:8192. Производственные штаммы лептоспир выращивали в условиях принятых на биофабриках для производства коммерческой поливалентной вакцины ВГНКИ, т.е. на водно-сывороточной среде. Выращенные культуры трех возбудителей раздельно инактивировали формалином в 0,20-0,25%-ной концентрации. Концентрирование каждого инактивнрованного антигена проводили раздельно в реакторах полиэтиленгликолем (ПЭГ), в гипертоническом растворе поваренной соли по выше описанной методике. Полученный осадок антигенов после центрифугирования сконцентрированный в 30-50 раз с соблюдением асептических условий собирали и помещали в один общий реактор, смешивая по объему в соотношении ПВС, ВБА и лептоспир 1:1:3. Полученную массу антигена разбавляли 1:1 забуференным физраствором (1/15М) с содержанием 0,2% формальдегида. К смеси добавляли охлажденный до 10-15° С масляный адъювант (80-83% минерального масла и 17-20% ланолина) в соотношении 1:1. Полученную смесь пропускали через коллоидную мельницу до получения гомогенной массы, фасовали во флаконы. При отработке технологии было изготовлено описанным способом 5 серий ассоциированной вакцины, которые затем проверяли на аитигенность и иммуногенность к входящим в состав антигенам существующими методами контроля. Для сравнения одновременно испытывали коммерческие серии моновалентных вакцин.

Иммуногенность опытной вакцины в отношении ВБА проверяли на овцах, которых вакцинировали внутримышечно, а через 15 дней заражали летальной дозой контрольного штамма ВБА. Результаты испытаний отражены в таблице 8.

Установлено, что все 20 овец, иммунизированных ассоциированной вакциной в объеме 1 и 2 см3 ,с содержанием 20''° ТЦД5</см3 оказались иммунными. Четыре овцы, вакцинированные производственной ГОА вакциной в дозе 1 мл при заражении пали, а из 4 вакцинированных 2 см3 -выжили 2. Антигенность 5 опытных серий в отношении ПВС проверяли на 20 кроликах, которым внутримышечно вводили по 1 см3 вакцины и через 21 день определяли титр антител в РТГА. Ассоциированная вакцина обладала большей иммуногенностью (таблица 8), чем производственная моновакцина.

Антигенность и иммуногенность пяти опытных серий ассоциированной вакцины в отношении лептоспир проверяли на хомячках и кроликах. Хомячкам внутримышечно вводили вакцину в дозах 0,1 и 0,2 см3 с содержанием 450 млн/см3 , а через 25 дней заражали летальной дозой вирулентных лептоспир. Для контроля использовали коммерческую поливалентную вакцину ВГНКИ. Установлено, что ассоциированная вакцина в дозе 0,1-0,2 мл защищала всех 20 хомячков от лептоспироза. Сыворотка вакцинированных кроликов в объеме 0,1 см3 защищала 100% хомячков, а в дозе 0,02 мл -80% от летальной дозы лептоспир. Коммерческая поливакцина против лептоспироза защищала от гибели 35% хомячков, а сыворотка вакцинированных кроликов обладала протективным эффектом на 20%. Ассоциированная вакцина вызывала у кроликов образование специфических антител в 8,3 раза выше, чем обычная производственная. Контроль на активность лептоспирозного антигена в ассоциированной вакцине по предложению ВГНКИ проводится как и обычной поливалентной вакцины, т.е. внутривенным введением вакцины кроликам по 0,75 см3 .Ассоциированная вакцина, изготовленная по предлагаемой технологии, в своем составе содержит в %:

1. Смесь концентрированных инактивированных антигенов: ПВС-9-10%, ВБА-9- 10%, лептоспир 27-30%.

Таблица 8

Сравнительное испытание ассоциированной инактивированной вакцины против болезней свиней (ПЛА)

Вид проверяемого антигена Метод исследования Вид животных К-во ж-х в гр Объем препарата, см3 Титры антител Заражено животных Выжило животных

Ассоцииров. вакцина Коммерческая вакцина Ассоцииров. вакцина Коммерческая вакцина

Вирус болезни Ауески Заражение овцы 10 1,0 - - 10/10 4/0

10 2,0 - - 10/10 4/2

Вирус парвовир. болезни Вакцинация кролики 20 1,0 1:536 + 84' 1:192 ±28 '

. Лептоспирозный Вакцинация хомяки 10 0,1 - - 10/10 10/2

10 0,2 - - 10/10 10/5

Вакцинация кролики 20 1,0 1:1350 ±96" 1:162 ± 16

Защити, св-ва сыворотки кроликов хомяки 10 0,02 10/8 10/0

10 0,1 - - 10/10 10/4

Примечание: в последних двух графах в числителе количество животных взятых в опыт для заражения, в знаменателе количество животных, выживших после заражения, т.е. иммунных, Р< 0.05; " Р< 0.02

)

2. Забуференный физраствор 50-55%.

Соотношение компонентов в вакцине в %: смесь антигенов 45-50%, масляный адъювант -55-50%.

Используя,ранее не применяемые технологические приемы, разработан и внедрен способ, позволяющий готовить на биофабриках вакцину сразу против трех инфекций: парвовирусной, лептоспироза и болезни Ауески, обладающую высокой специфической эффективностью (Авторское свидетельство № 1439784 от 22.07.1988г). Применение данного препарата свиньям в несколько раз снижает количество прививок и связанных с ними стрессовых явлений у вакцинированных, повышает в 5-10 раз производительность труда ветеринарных специалистов, а также резко сокращает расходы (в 7-9 раз), связанные с транспортировкой и хранением вакцины.

К настоящему времени предприятиями биологической промышленности России изготовлено и использовано более 200 000 доз ассоциированной, инактивированной вакцины, против болезней свиней. Вакцина не давала никаких осложнений.

6.3. Виутрикожная вакцинация против лептоспироза.

Имеющийся ряд данных о выполнении кожей иммунологических функций (А.М.Безредка,1925, Р.Вегк^гезБег, 11Л^е1паг,1982) и наши предварительные данные побудили нас испытать в условиях ферм на свиньях внутрикожную вакцинацию против лептоспироза.

При наличии в ветеринарной практике автономных инъекторов на пружинном взводе (ИБВ-0,2, БИ-7, "Овод" и др.), рассчитанных на внутрикожное введение препарата в объемах 0,1-0,2 см3 , изучение безыгольного метода внутрикожной вакцинации животных оказалось не сложным.

Нами изучалась возможность внутрикожного введения свиньям безыгольным инъектором предложенных нами концентрированной и в качестве контроля поливалентной коммерческой вакцины ВГНКИ и ассоциированной вакцины ПЛА.Усгановлено, что вязкость указанных вакцин позволяет их вводить безыгольным внутрикожным методом.

Опыты проводили совместно с В.И.Семенцовым, И.К.Белоконь, В.Ф.Ваасильевым и К.В. Дружина в начале на 25 свиноматках. Животным первой группы вводили внутрикожно по 0,4 см3 , второй группы по 0,2 см3 , третьей внутримышечно 2 см3 концентрированной вакцины, четвертой - по 0,4 см3 внутрикожно ассоциированной ПЛА и пятой, контрольной вводили по 10 см3 поливалентной вакцины ВГНКИ. У подопытных животных через каждый месяц в течение полугода брали кровь и исследовали на наличие специфических антител и превентивные свойства сыворотки.

Установлено, что у свиноматок в первой и четвертой групп титр противолептоспирозных антител составлял 135-150% по сравнению с таковыми 3-й группы, и держались до 6 месяцев. У животных второй группы титр составлял 75-80% от титров третьей группы и сохранялись до 4 месяцев. Титр антител животных пятой контрольной группы составлял 20-25% от титра антител животных третьей группы и сохранялся до 3 месяцев. Защитные свойства сыворотки крови подопытных животных были выражены следующим образом: I-я, 3-я и 4-я группы - 100%, 2-я группа - 80% и 5-я - 50%. Второй опыт по аналогичной схеме был проведен на поросятах-отьемышах 2,5 мес.в количестве 140 голов. Результаты исследований сведены в таблицу 9. Результаты опыта совпали с полученными на свиноматках.

Отмечено, что в опытных группах, где концентрированную и ассоциированную ПЛА вакцины вводили внутрикожно по 0,2-0,4 см3 (150-280 млн )ро 1см3 внутримышечно, специфические антитела сохранялись у животных в сравнительно высоких титрах до 6 месяцев. Превентивные свойства сыворотки были хорошо выражены при всех способах введения вакцин, причем в группах, где вакцины вводили внутрикожно они были выше на 10-15%. Массовая вакцинация свиней внутрикожным методом была проведена в хозяйствах четырьмя вакцинами: концентрированной, ассоциированной инактивированной ПЛА, изготовленных по нашей технологии, концентрированной вакциной ВГНКИ (Ю.А.Малахов, Г.Л.Соболева, В.И.Ситьков, патент 2030915, 1990г). и обычной поливалентной вакциной ВГНКИ. Внутрикожным безыгольным методом было иммунизировано

4 V

Таблица 9

\

Результаты внутрикожной вакцинации поросят против лептоспироза

Вид вакцины № гр. К-во животных Метод введения Объем вакцины, см3 Дни взятия крови после вакцинации

28 120 180

Концентрированная, сер. 14 I 20 В/м 1,0 97,4 141,6 110,6

2 20 В/к 0,2 197,8 130,0 166,6*

3 20 В/к 0,4 227,6* 168,3* 154,6*

Ассоциированная, ПЛА, сер.7 4 20 В/к 0,4 210,5* 145,4* 140,0*

Поливалентная ВГНКИ, сер.55 5 20 В/м 2+3 100,0 100,0 100,0

6 20 В/к 0,2 85,1 25,0 44,0

7 20 В/к 0,4 113.8 13,3 91,3

Примечание: за 100% взяли уровень титра антител контрольной группы №5 поросят, которым

вводили поливалентную вакцину ВГНКИ по действующему наставлению 2+3 мл. * Р< 0,05

в двух хозяйствах Краснодарского края 8108 поросят отъемного возраста и 1240 свиноматок. Никаких осложнений при вакцинации не зарегистрировано. При выборочном исследовании показателей иммунитета получены аналогичные результаты, как и при первоначальном опыте. Концентрированная вакцина ВГНКИ показала одинаковый титр противолептоспирозных антител и уровень защитных свойств сыворотки крови с нашими концентрированной и ассоциированной - ПЛА вакцинами. В течение последних 2-х лет в хозяйствах, где применили внутрикожный метод вакцинации, не регистрировали энзоотий лептоспироза, а там, где применяли ассоциированную инактивированную вакцину ПЛА не регистрировали болезни Ауески.

Внутрикожная вакцинация свиней против лептоспироза концентрированной вакциной создает у них достаточно напряженный и продолжительный иммунитет,

4<Г

поэтому данный способ с успехом может быть использован в практике. Безыгольный метод внутрикожной вакцинации свиней против лептоспироза сокращает расход вакцины как минимум в 5 раз и повышает производительность труда ветработников в 8-10 раз по сравнению с внутримышечной иммунизацией. При вакцинации безыгольным внутрикожным методом место введения антигена не играет существенной роли. Безыгольная иммунизация животных с помощью отечественных безыгольных инъекторов позволяет исключить "игольные инфекции", решить задачу экспрессности.

7. МЕРОПРИЯТИЯ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА В ЗОНЕ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА

Материалы наших исследований использованы при составлении "Инструкции о мероприятиях по профилактике и оздоровлению животных от лептоспироза" (Утверждены ГУВ МСХ РФ 23.06.1992г. № 22-3/40).

В процессе изучения этиологии лептоспироза сельскохозяйственных животных в зоне Северного Кавказа установлено, что у крупного рогатого скота основными возбудителями инфекции являются лептоспиры серогрупп:, Sjeroe (Hardjo), Pomona ,Hebdomadis, Tarassovi; у свиней: Pomona, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi; у овец: Hebdomadis, Pomona, Sjeroe, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae; у лошадей: Icterohamorrhagiae, Pomona, Grippotyphosa, Hebdomadis и Sjeroe.

, Для специфической профилактики лептоспироза у каждого вида сельскохозяйственных животных в зоне Северного Кавказа вакцины должны содержать антигены лептоспир, установленных в процессе исследований и перечисленных выше. Вакцинация в неблагополучных хозяйствах должна проводиться ежегодно , регулярно до полной ликвидации бессимптомных форм и лептоспироносительства.

Установленная сезонность лептоспироза позволила рекомендовать вакцинацию и ревакцинацию в неблагополучных и угрожаемых хозяйствах по срокам и временам года у крупного рогатого скота, т.е. в весенний и осенний периоды, когда животные перемещаются на отгонные пастбища и когда они возвращаются на стойловое содержание.

Свиней, лошадей и домашних животных вакцинировать по необходимости в любое время года, т.к. у них не отмечено сезонности.

Рекомендованы мероприятия, предупреждающие возникновение и распространение инфекции в зависимости от природно - климатических условий региона.'

Для серологической диагностики лептоспироза животных в зоне определен набор диагностических штаммов лептоспир из семи серогрупп: Рошопа, 1с1егоЬаешоггЬа£1ае, Опрро1урЬо5а, НеЬсЬта&Б, 8]егое, Тагаэзоу! и Сатсо1а.

Для диагностических целей в краевых, республиканских и некоторых районных лабораториях внедрен бактериологический метод исследования материала от павших и вынужденно убитых, подозреваемых в заболевании лептоспирозом животных.

Для успешной терапии животных, больных лептоспирозом и ликвидации у них лептоспироносительства подобраны и испытаны антибиотики: гентамицин и фармазин, разработаны схемы применения с учетом влияния их на поствакцинальный иммунитет.

Синтезирован сложный препарат-полимерэндофарм, который ликвидирует лептоспироносительство, оказывает хороший терапевтический эффект при лептоспирозе, балантидиозе, колибактериозе молодняка сельскохозяйственных животных.

Для успешной вакцинопрофилактики лептоспироза у животных в регионе разработана и апробирована в промышленных условиях технология изготоаления концентрированной моно- и поливалентной вакцины.

Разработана и внедрена технология изготовления ассоциированной инактивированной вакцины против парвовирусной инфекции, лептоспироза и болезни Ауески свиней (ПЛА).

Указанные вакцины при дозе в 2 см3 взрослым, а молодняку 1 см3 создают не менее напряженный и продолжительный иммунитет против лептоспироза, чем обычные вакцины, используемые в практике. При этом значительно сокращается расход биопрепарата и средств на транспортировку и хранение их и значительно повышается производительность труда ветеринарных специалистов.

Применением данных вакцин достигнута ликвидация 16 очагов лептоспироза и лептоспироносителей у животных в этих очагах.

Разработан и широко апробирован внутрикожный метод вакцинации свиней концентрированными вакцинами против лептоспироза и ассоциированной (ПЛА) с помощью безыгольных ннъекторов. При использовании данного метода создается напряженный и продолжительный иммунитет, позволяющий надежно защищать свиней от лептоспироза.

Разработанные и внедренные в хозяйствах региона вышеперечисленные приемы, методы и средства для диагностики, терапии и специфической профилактики лептоспироза с учетом зональных особенностей многократно предлагались в 6 рекомендациях, 3 - плакатах, многочисленных информационных листках, лекциях и семинарах (Краснодар, 1970,1974,1982, 1988,1990г).

Считаем, что все это в т.ч. и увеличение объема диагностических исследований по РМА в 1,3 - 1,5 раза сыграло значительную роль по региону Северного Кавказа в существенном снижении (в 8-10 раз) за последние 10 лет количества неблагополучных пунктов и количества заболевших и павших от лептоспироза сельскохозяйственных животных, а, следовательно, и, снижения экономического ущерба наносимого народному хозяйству данной инфекцией (с 10 до 1,1 млрд. руб.).

III. ВЫВОДЫ

1. Лептоспиры в условиях Северного Кавказа циркулируют в природных и антропургических очагах. Инфицированность лептоспирами серых крыс, ондатр, мышевидных грызунов колеблется от25,6% до 36,0%. У крупных животных в природных стациях (кабаны, барсуки, олени, сайгаки и др.) от 11,8 до 37%. Зараженность сельскохозяйственных животных колеблется от 20,3% (у лошадей) до 34,2% (у свиней). Зараженность собак составляет 43,4%, кошек-27,4%. 2. Этиологическая структура лептоспироза в природных и антропургических очагах ро результатам серологических и бактериологических исследований представлена лептоспирами серологических групп: Pomona, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa, Hebdomadis,Tarassovi, Sjeroe и Canicola и принципиально не отличается от других регионов страны. Характерной особенностью является

высокий процент положительных серологических реакций и выделение иктерогеморрагических лептоспир. У мелких диких животных в природных очагах количество положительных реакций составляет 64,6%, у крупных диких животных - 31,1%.

У сельскохозяйственных животных количество положительных РМА к иктерогеморрагическим лептоспирам за 10 лет возросло с 13,3% до 21,3%, что свидетельствует о процессе активной адаптации лептоспир данной серогруппы к организму сельскохозяйственных животных ( в т.ч. и человека) и о перекрестном перезаражении этими лептоспирами между различными видами животных.

3. Эпизоотический процесс за последние 20 лет характеризуется сокращением числа энзоотии с клиническим проявлением инфекции в 8-10 раз и продолжающемся ростом количества бессимптомно переболевших животных-лептоспироносителей, что свидетельствует о процветании популяций лептоспир и следовательно о необходимости ужесточения противоэпизоотических мероприятий.

4. Установлена высокая зараженность лептоспирами на территории городов собак -43,4%, от которых изолировано 57 культур, из них серогруппы Icterohamorrhagiae - 28, Pomona 17 - и Canicoia -12. Кошки активно вовлечены в эпизоотический процесс, их инфицированность по показаниям РМА составила 27,4%, выделено 12 изолятов, из них: Icterohamorrhagiae - 9, Canicoia - 2, Pomona -1.

5. Основными путями распространения инфекции в регионе является водный фактор, контакт с лептоспироносителями, перемещение животных лептоспироносителей с племенными и хозяйственными целями, искусственное осеменение маток семенем лептоспироносителей.

Факторами, способствующими распространению заболевания являются повышенная влажность, длительность теплого периода времени, pH почв в местах выпасов.

Сезонность инфекции установлена у крупного и мелкого рогатого скота и пик ее приходится на весенне-летний период.

If3

6. Определена динамика специфических и неспецифических, гуморальных и клеточных факторов иммунитета у животных при лептоспирозе. Установлено, что самой ранней защитной реакцией является фагоцитарная активность, уже к 3 дню после инфицирования она возрастала в 5,5 раза.

7. Наиболее иммунногенными в опытах были лептоспирозкы^ антигены, консервированные формалином, концентрированные в 10-12 раз с адъювантами: гидратом окиси алюминия - 30% или техническим маслом 50%, при внутривенном (в убывающем порядке), внутрибрюшном, внутрикожном и внутримышечном введении.

8. Терапевтическая эффективность при лептоспироносительстве у животных помимо стрептомицина достигается внутримышечным введением гентамицина 6 мг/кг два раза в сутки 5 дней, фармазина 10 мг/кг один раз в сутки 4 дня. Антибиотики: стрептомицин, гентамицин, фармазин во избежании угнетения поствакцинального противолептоспирозного иммунитета следует применять за 10 дней до или 10 дней после вакцинации.

9. Синтезирован препарат полимерэндофарм, который оказывает эффект при лептоспироносительстве, балантидиозе и колибактериозе молодняка сельскохозяйственных животных. Препарат вводится перорально с водой или кормом по 100-150 мг/кг массы животного ежедневно в течение 5 дней.

10. Разработана и испытана промышленная технология изготовления концентрированной моно- и поливалентной вакцины против лептоспироза животных путем осаждения лептоспир полиэтиленгликолем с гипертоническим раствором хлористого натрия и последующим центрифугированием.

11. Создана и внедрена в практику ассоциированная инактивированная вакцина против парвовирусной инфекции, лептоспироза и болезни Ауески свиней.

12. Внутрикожная вакцинация свиней против лептоспироза концентрированными вакцинами безыгольными инъекторами обеспечивает формирование иммунитета большей напряженности и продолжительности по сравнению с внутримышечной иммунизацией. Сокращается расход вакцины и затраты труда в 5-10 раз.

5 О

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Материалы и разработки использованы при составлении "Инструкции о мероприятиях по профилактике и оздоровлению животных от лептоспироза (утверждены ГУВ МСХ РФ 23.06.1992г, № 22-3/40).

2. Предлож .н антигенный состав лептоспир для вакцин с целью специфической профилактики лептоспироза для каждого вида сельскохозяйственных животных в зоне Северного Кавказа.

3. Разработаны схемы лечения животных лептоспироносителей гентамицином и фармазином (временное наставление по применению гентамицина при леотоспирозе животных №/3 утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ /£,03.1998 г. Временное наставление по применению фармазина при лептоспирозе животных № /¿-Ч-'Л утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ /6. 03.1998 г.

4. Внедрен: препарат полимерэндофарм для лечения животных больных лептоспирозом, балантидиозом и колибактериозом (ТУ 10.07.008-88 от 21.04.1988 г. Наставление по применению полимерэндофарма утв. ГУВ МСХ СССР 28.01.1988г).

5. Вакцина ассоциированная инактивированная против парвовирусной инфекции, лептоспироза и болезни Ауески (ТУ 10-09-50-90 от 7.06.1990 г. Временное наставление по применению ассоциированной инактивированной вакцины (ПЛА),утвержденное ГУВ МСХ СССР 14.01.1987г.).

6. Временное наставление по применению концентрированной вакцины против лептоспироза животных (утв. 15.02.1997 г).

7. Временное наставление по внутрикожной (безыгольной) вакцинации свиней против лептоспироза (утв. 30.11.1992 г.)

IV. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Болоцкий И. А., Дарьелко П.М. "Влияние стрептомицина на иммунологические реакции у свиней, привитых лептоспирозной вакциной// Тр.Ставропольского СХИ, вып.29, Ветеринария,- Ставрополь, 1968,41-44.

2. Ушмаев Н.Л., Болоцкий И.А., Спдисвец П.В. Серологические исследования на лептоспироз сельскохозяйственных животных в Краснодарском крае// Мат.докл.научн. конф. по лептоспирозам зон Северного Кавказа и Поволжья-Краснодар, 1969, 162-166.

3. Болоцкий И.А. Профилактика лептоспироза, о сезонности заболевания животных//Зон.Ж.Сельские Зори, 1970, № 1,47-48.

4. Болоцкий И.А. Влияние природно-географических условий на распространение лептоспироза у животных в Краснодарском крае // Бюлл. научн.технич.инфор. вып. 2, Краснодар, 1970,36-39.

5. Болоцкий И.А. Лептоспироз животных и борьба с ним.// Брошюра, 1000 экз. Краснодар, 1970,48 стр.

6. Болоцкий И.А. К эпизоотологии лептоспироза //Ж.Ветеринария, 1971, № 2, 65-66.

7. Болоцкий И.А. Особенности лептоспироза свиней на Кубани//Ж.Свиноводство, 1971, № 7, 31.

8. Болоцкий И.А. Особенности эпизоотологии и клинического течения лептоспироза животных на Кубани// Тр.5-й Всесоюзн. научн.конф.по лептоспирозам человека и животных, "Лептоспирозы", Казань, 1971,249-252.

9. Болоцкий И.А, Этиологическая роль возбудителей группы Hebdomadis в возникновении лептоспирозных заболеваний сельскохозяйственных животных на Кубани// Тез.докл.Всесоюзн. конф.молод.учен. по ветерин.- Москва, 1971, 30-31.

10. Болоцкий И.А. Влияние стрептомицина на иммунологические

реакции и, на состояние белковых фракций сыворотки крови опытных животных при вакцинации против лептотспироза//Тр. Краснодарской НИ ВС "Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных", Краснодар, 1971, т.4, 291-294.

И. Болоцкий И.А., Сидневец П.В. Этиологическая структура лептоспироза сельскохозяйственных животных на Кубани// Тр.Краснодарской НИВС "Болезни сельскохозяйственных животных", т.№ 5, Краснодар,1972,36-39.

12. Болоцкий И.А. Некоторые биологические свойства у лептоспир //Мат.симп.по лептоспирозу, Москва, 1972, 18-19.

13. Болоцкий И.А., Косиков А.М. Новые вакцины против лептоспироза//Зон.Ж.Сельские Зори, 1972, № 10, 53.

14. Сидневец П.В,Болоцкий И.А. Вопросы краевой эпизоотологии лептоспироза животных на Кубани //Мат. симп.ВАСХНИЛ по профил. и мерам борьбы с лептоспир.и листериоз.сельскохоз. ж-х - Новочеркасск, М. 1972, 7-9.

15. Болоцкий И.А. Опыт борьбы с лептоспирозом сельскохозяйственных животных в некоторых хозяйствах Кубани//Мат.Симп. ВАСХНИЛ по профил.и мерам борьбы с лептоспир.и листериоз.сельскохоз. ж-х- Новочеркасск, М. 1972,41-42.

16. Болоцкий И.А., Куидрюков А.И., Корягин О.П. Терапевтическая эффективность некоторых препаратов при лептоспирозе животных//Вторая фармако-терапевт.ветеринар.конф., Будапешт, 1972,46-47.

17. Болоцкий И.А. Сравнительная эффективность некоторых химиопрепаратов при лептоспирозе крупного рогатого скота и свиней //Учен.запис.Кабардино-Балкарского унив-та, Нальчик, 1972,т.2, 17-18

18. Болоцкий И.А., Сидневец П.В., Хицунов Л.П. К эпизоотологии лептоспироза//Ж.Ветеринария, 1973,№ 7, 46-47.

19. Болоцкий И.А.,Усикова С.М., Александров В.Н. О роли некоторых диких животных в эпизоотологии лептоспироза на Кавказе// Зоологический журнал, вып.7,1974, 1107-1109.

20. Любашенко С.Я., Серегин И.Г., Ахмедов М.М., Болоцкий И.А.

Серологическая характеристика штаммов лептоспир//Ж.Ветеринария, 1974, № 10,61-62.

21. Болоцкий И.А., Сидневец П.В. Рекомендации по диагностике, терапии и профилактике лептоспироза животных в Краснодарском крае //Краснодар, 1074, 1982,1986гг по 30 стр.

5J

22. Болоцкнй И.А., Коршунова JI.H., Шилякин K.B. Динамика антителообразования у свиней при лептотспирозе //Ж.Ветеринария, 1975, № 9, 50-52.

23. Болоцкий И.А., Косиков А.М.,Сидневец П.В. Вопросы эпизоотологии, терапии и специфической профилактики лептоспироза сельскохозяйственных животных на Кубани //Тр.Краснодарской НИВС, т.6, 1975, 76-79, Краснодар.

24. Болоцкий И.А., Кундрюков A.B., Шилякин В.К. Специфические и неспеифические факторы защиты у животных, вакциони рованных против лептоспироза//Тр.Краснодарской НИВС,т.6, Краснодар, 1975, 85-87.

25. Болоцкнй И.А., Сидневец П.В.,Кундрюков А.И. Об испытании некоторых химиопрепаратов при лептоспирозе животных.//Мат. симп.по лептоспирозу, МЛ 975,47-49.

26. Болоцкий И.А. Влияние некоторых антибиотиков и химиопрепаратов на лептоспир In vitro// Ж.Антибиотики, 1975, № 11, 1011-1012.

27. Болоцкнй H.A., Коршунова Л.Н., Шнлякин В.К. Содержание комплемента в сыворотке крови поросят при лептоспирозе //Мат. симпоз."Молодые ученые и специалисты Кубани - сельскохозяйственному производству", Краснодар, 1974, 63-64.

28. Болоцкий И.А., Косиков A.M., Сидневец П.В. Вопросы рациональной вакцинопрофилактики лептоспироза животных // Мат. научн.-практ.конф. "Основные проблемы ветеринарии Северного Кавказа", Махачкала, 1976. 36-38.

29. Болоцкий И.А.,Кундрюков А.И., Терещенко Н.Я., Шилякин В.К. Уровень лизоцима у свиней при лептоспирозе//Ветеринария, 1976, № 4, 55-56.

30. Сидневец П.В., Болоцкин И.А.,Порхунов Г.П. Изучение устойчивости лептоспир к спермосану-3 и низким температурам //Тез.докл.6-й Всесоюзн.научн.конф. по лептоспирозу "Лептоспироз", М.1976, 29-30.

31. Коршунова Л.Н., Болоцкий И.А. Особенности иммуноморфологических изменений- в органах свиней при экспериментальном лептоспирозе//Тез.докл.6-й Всесоюзн.научн.конф. по лептоспирозу "Лептоспироз", М. 1976,90-91.

32. Болоцкий И.А., Коршунова Л.Н., Шилякин В.К. Динамика неспецифических факторов защиты у свиней при лептоспирозе//Тез.докл.6-й Всесоюзн.науч.конф.по лептоспирозу "Лептоспироз", М. 1976, 164-165.

33. Болоцкий И.А., Кундрюков А.И., Терещенко Н.Я. Влияние специфической сыворотки на иммунологическую реактивность животных при лептоспирозе//Тез.докл.6-й Всесоюзн.научн.конф. по лептоспирозу "Лептоспироз", М.1976,188-190.

34. Болоцкий И.А., Коршунова Л.Н., Шилякин В.К. Формирование специфического иммунитета у свиней, инфицированных лептоспирами/ЛГез.док.б-й Всесоюз.конф.по Лептоспирозу, М. 1976,190-191.

35. Болоцкий И.А.Эффективность некоторых антибиотиков и хим.препаратов при лептоспирозе животных/ЛГр.Северо-Кавказского НИВИ, вып. 19, Проблемы ветеринарии Северного Кавказа", Новочеркасск, 1977,41-47.

36. Болоцкий И.А. Методы диагностики лептоспироза животных //Ж.Ветеринария, 1979, № 1,44-46.

37. Болоцкий И.А., Сндневец П.В. Исследование антигенных и иммуногенных свойств некоторых лептоспирозных вакцин на животных//Сб.труд.Универс.Дружбы народов им.П.Лумумбы "Актуальные проблемы лептоспироза", М.1979, 39-40.

38. Сидневец П.В., Болоцкий И.А. Опыт борьбы с лептоспирозом на племпредприятиях Краснодарского края//Сб.тр.Универс.Дружбы народов им.П.Лумумбы "Актуальные проблемы лептоспироза" М.1979,105-106.

39. Болоцкий И.А. Сравнительная оценка лептоспирозных моновакцин на овцах //Тез.докл.7-й Всесоюзн.конф.по лептоспирозам "Лептоспирозы", Киев,1979, 223224.

40. Сидневец П.В., Болоцкий И.А. Роль лептоспир некоторых сероваров в этиологии лептоспироза животных на Кубани/ГГез. докл.7-й Всесоюз.конф.по лептоспирозам, Киев, 1979,154-155.

41. Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Резникова М.Ф. Изучение эффективности лептоспирозных вакцин на сельскохозяйственных животных//Тез.докл.8-й Всесоюз.конф.по лептоспирозам "Лептоспирозы", Тбилиси,1983,271-272.

42. Семенцов В.И., Болоцкий И.А., Резникова М.Ф. Особенности эпизоотологии лептоспироза животных//Ж.Ветеринария, 1986, № 3,3 0-31.

43. Болоцкий И.А.,Семенцов В.И., Резникова М.Ф. Профилактика лептоспироза//Зон.Ж.Сельские зори,1988, № 1, 46-47.

44. Бибиков Ф.А.,Болоцкий И.А. Профилактика и лечение болезней поросят в хозяйствах Краснодарского края. Болезни, вызываемые бактериями и хламидиями. Рекомендации, Краснодар, 1988,60 страниц.

45. Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Васильев В.Ф. Особенности лептоспироза на свиноводческом комплексе в Краснодарском крае// Матер.Всесоюзн.конф.по лептоспирозам, Львов, 1988, 149-150.

46. Ситьков В.И.Дутов И.К., Болоцкий И.А., Семенцов В.И

Особенности лептоспироза сельскохозяйственных животных в Ставропольском и Краснодарском краях//Матер.научн.конф. 50-летию Краснодарской НИВС, Краснодар, 1996,95-97.

47. Болоцкий И.А., СемеицовВ.И., Васильев В.Ф. Особенности лептоспироза свиней в Краснодарском крае.//там же, 37-39.

48. Бибиков Ф.А., Булаикии А.Л., Мурый А.А., Болоцкий И.А.

Способ получения препарата для лечения желудочно-кишечных заболеваний//Авторск.свидет.№ 1238290 от 15.02.1986г.

49. Сергеев В.А., Орлянкин Б.Г., Сурмило А.П., Бондаренко А.Ф., Болоцкий И.А. Способ получения ассоциированной инактивированной вакцины против болезней свиней//Авторск.свидет. № 1439784 от 22.07.1988г.

50. J.A. Boldtsky, J.K. Belokon, B.J. Sementsov, V.F. Vasiliev,

K.V. Drugjna: "Intradermal vaccination of Sows against Leptospirosis" (Внутрикожная вакцинация свиней против лептоспироза) Leptospirosis VII European and IX USSR leptospirosis research conference Moscow, february 20-22, 1991. Moscow,1990, 72.