Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Клинико-морфологическое проявление хламидиоза свиней в системе "мать-плацента-плод"

На правах рукописи

ТАТАРНИКОВА Наталья Александровна

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ПРОЯВЛЕНИЕ ХЛАМИДИОЗА СВИНЕЙ В СИСТЕМЕ «МАТЬ-ПЛАЦЕНТА-ПЛОД»

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Екатеринбург - 2003

Работа выполнена на кафедре анатомии и гистологии Уральской государственной сельскохозяйственной академии, на кафедре инфекционных болезней Пермской государственной сельскохозяйственной академии, в лаборатории риккетсий и хламидий НПО «Биомед» г. Пермь.

Научный консультант - Заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Дроздова Людмила Ивановна

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук,

профессор Авзалов Фоат Зиятдинович

доктор биологических наук, профессор Вершинин Игорь Иванович

доктор ветеринарных наук, профессор Плешакова Валентина Ивановна

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-

исследовательский ветеринарный институт (г. Казань)

Защита диссертации состоится......20 ноября...............................2003 г.

в... 13.......часов на заседании диссертационного совета Д 220.067.03 при

Уральской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 620219, Екатеринбург, ул. К. Либкнехта, 42.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральской государственной сельскохозяйственной академии Автореферат разослан «20» октября..............2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, доцент , Рабовская Л. А.

г. Екатеринбург 2003

2-ооз-Д

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одним из главных факторов/решающих судьбу организма во внутриутробные периоды его жизни, является плацента. Структура плаценты находится в тесной связи с ее проницаемостью и является определенным ориентиром в познании сложнейших материнско-плодовых взаимоотношений. Заболевания матери нередко приводят к разнообразным изменениям в плаценте, нарушая ее строение и функцию, в связи с чем происходит снижение ее способности поддерживать адекватный обмен между организмом матери и плода. К числу этих заболеваний относится хламидиоз, который в последние годы все чаще регистрируется, как у животных, так и у человека. Поражение урогенитального тракта ведет к бесплодию, внутриутробной инфекции, обуславливая заболевания плода и новорожденного. Известно, что хламидии способны проникать через плацентарный барьер и инфицировать развивающиеся плоды. Тем не менее, общеизвестным фактом является и то, что в неблагополучных по хламидиозу хозяйствах рождаются жизнеспособные поросята, особенно у разовых свиноматок. В этой связи, выяснение роли плаценты в патогенезе заболевания является первоочередным для изучения патогенеза хламидиоза, выработки научно-обоснованного подхода к проведению оздоровительных мероприятий и значительного снижения экономических потерь, причиняемых данным заболеванием.

Цель и задами исследований. Цель работы - изучить патоморфогенез хламидийной инфекции на функциональной системе «мать-плод» у свиней и выработать научно-обоснованную систему мероприятий по борьбе с данной инфекцией. Задачи исследования:

1. Изучить эпизоотологическуЮ обстановку по хламидиозу животных в Пермской области.

2. Выяснить особенности течения хламидиоза в системе «мать-плод» на экспериментальных животных и установить роль плаценты в патогенезе хламидиоза.

3. Изучить морфологическое проявление вакцинного процесса у экспериментальных животных, зараженных хламидиями.

4. Изучить морфологические и ультраструктурные изменения в органах и тканях свиней при спонтанном хламидиозе.

5. Выяснить роль самцов в распространении хламидийной инфекции.

Работа выполнена на базе кафедр анатомии и гистологии УрГСХА,

инфекционных болезней ПГСХА, часть исследований выполнена в лаборатории риккетсий и хламидий НПО «Биомед» г. Пермь, в хозяйствах Пермской области и свинокомплексе «Рощинский» республики Башкортостан.

Исследования проведены в рамках программы «Морфология гисто-гематических барьеров в норме и при разных вида животных», № государственной регистрации 0196

.воздействия на организм ИРШйШШМгсть

СП

09 мд^и^тХ^

и контроль за качеством сельскохозяйственного сырья и пищевых продуктов в экологических условиях Среднего Урала», № государственной регистрации 01200 208408.

В работе использованы материалы статистической отчетности Управления ветеринарии при департаменте сельского хозяйства Пермской области.

Научная новизна работы. Нами проведены серологические, морфологические и электронно-микроскопические исследования на функциональной системе мать-плод, применительно к свиньям и в эксперименте на беременных крысах, морских свинках и их потомстве. Установлены основные закономерности развития патоморфологических и ультраструктурных изменений в органах и тканях свиноматок, хряков, поросят разного возраста, абортированных и мертворожденных плодов при спонтанном хламидиозе; у крыс, морских свинок и их плодов при экспериментальном хламидиозе в системе «мать-плацента-плод». Определены патоморфологические признаки хламидиоза для проведения его дифференциальной диагностики. Изучено морфологическое проявление вакцинного процесса у беременных морских свинок, зараженных вирулентной культурой хламидий. Электронномикроскопически установлено, что морфологические изменения после заражения предварительно вакцинированных экспериментальных животных проявляются воспалением на иммунной основе с оседанием в стенке сосудов повреждающих иммунных комплексов.

Установлена роль хряков в патогенезе хламидиоза. Впервые при электромикроскопическом исследовании спермы хряков были обнаружены ретикулярные тельца хламидий в фазе их активного размножения, что дает нам основание считать хряков основным передающим звеном во всей патогенетической цепи инфекционного хламидийного процесса. Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований позволили разработать и издать:

1.Методические рекомендации «Патогенетические основы борьбы с хламидиозом свиней», Пермь, 2003, 16 с. Рекомендации утверждены департаментом ветеринарии администрации Пермской области 17 марта 2003 года.

. 2.Учебное пособие «Морфология гисто-гематических барьеров при хламидиозе свиней», Пермь, 2003, 205 с. Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по специальности 310800 -«Ветеринария», 15 апреля 2003 года №27-5-33/864.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1.Хламидии вакцинного и полевого штаммов проникают через плацентарный, гемато-энцефалический и тестикулярный барьеры свиней, экспериментальных морских свинок и крыс и вызывают в организме этих животных инфекционно-токсический процесс.

2.Хламидии обуславливают ' нарушение фетоплацентарных связей, гибель плодов, их отторжёние и развитие патологических процессов в органах и тканях мертворожденных и новорожденных исследованных нами сельскохозяйственных и лабораторных животных.

3.Наличие ретикулярных телец хламидий, выявленных различными методами исследований (микробиологический, гистологический, электронно-микроскопический) в тканях плацентарного барьера свиней и беременных лабораторных животных, в тканях мозга у абортированных плодов и мертворожденных животных является показателем генерализации процесса как при спонтанном, так и экспериментальном хламидиозе.

^Функциональная система «мать-плод» является универсальной моделью для изучения хламидиоза.

5.Размножение хламидий в сперме хряков является одним из основных патогенетических звеньев хламидиоза, и сперма служит передаточным звеном в развитии инфекционного процесса.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных научных конференциях ПГСХА (19972003 г.); областном научно-производственном совещании по племенной работе (27 марта 2003); научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2001); IV научной конференции по актуальным вопросам ветеринарной медицины мелких домашних животных (Екатеринбург,2001); научной конференции по актуальным вопросам биологии, экологии и ветеринарной медицины домашних животных (Тюмень, 2002); Международной научно-практической конференции «Животноводство и ветеринария в XXI веке: действительность и перспективы развития» (Семипалатинск, 2002); научной конференции «Новый взгляд на проблемы АПК» (Тюмень, 2002); V Всероссийской конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Екатеринбург, 2003); Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2003); Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликована 21 работа. В журнале «Ветеринария» - 2; в материалах межвузовских, Всероссийских, Международных конференций - 16. Изданы рекомендации для производства, методическое пособие с грифом Министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 276 страницах текста компьютерной верстки. Состоит из введения, обзора литературы, описания результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 358 источников, из которых 174 иностранных. Работа иллюстрирована 3 таблицами и 196 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1.1 .Материалы

Материалом для наших исследований служили патогенные микроорганизмы (хламидии), микроорганизмы вакцинного штамма. Лабораторные животные: разнополые крысы и морские свинки, их плоды и детеныши. Свиноматки и хряки разного возраста, их плоды, мертворожденные и новорожденные поросята.

2.1 ¿.Микроорганизмы Для воспроизведения хламидийной инфекции у крыс использовали Chi. psittaci,'возбудитель пситтакоза, штамм «Лори», выделенный в 1957 г. от попугая; описание микроорганизма приведено в «Каталоге штаммов», вып.4, М.; 1962.

Для воспроизведения хламидийной инфекции у морских свинок использовали Chi. psittaci, возбудитель хламидиоза свиней, штамм «ЛС- 87», выделенный Хамадеевым Р.Х. и Хусаиновым Ф. М. в 1987 году (г. Казань) из легких свиньи и любезно предоставленный нам для исследований. Штамм хранится в лаборатории музейных штаммов и лаборатории вирусологии ВНИВИ (г. Казань).

Для изучения вакцинного процесса использовали вакцину против хламидиоза свиней, инактивированную эмульсионную, производства ВНИВИ г. Казань, серия №7, контроль №7, дата изготовления август 2001 г. Срок годности 1 год. Во флаконе 50 доз.

Исследования на крысах были проведены на базе лаборатории риккетсий и хламидий НПО «Биомед» г. Пермь.

Исследования, выполненные на морских свинках, проведены в лабораториях кафедры инфекционных болезней ПГСХА.

Исследования на сельскохозяйственных животных проведены в хозяйствах Пермской области - Пермский свинокомплекс, ТОО «Экология» г. Лысьва, ТОО «Тополь» Пермского района и Республики Башкортостан -«Рощинский свинокомплекс».

2.1.3.Схема опытов с лабораторными животными 2.1.3.1.Крысы

Исследования выполнены на 48 половозрелых крысах (40 самок и 8самцов), средняя масса самок 250 г., самцов 300 г. До начала эксперимента животные прошли профилактический карантин.

Инфекционный материал животным вводили в виде 10% взвеси, очищенной дифференциальным центрифугированием, овокультуры Chi. psittaci штамм «Лори». Инфекционный титр инокулята составил 10"7 LDjo/0,5 мл для куриных эмбрионов.

Овокультуры хламидий гомогенизировали в стерильных условиях с помощью стеклянных бус d-0,5 см., затем готовили 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе (pH -7,0).

Крыс заражали внутрибрюшинно под легким эфирным наркозом. В фиксированном положении (вниз головой) шприц вводили в основание

б

кожной складки живота, . каудальнее пупка и параллельно направлению складки. Животные были разделены на 4 экспериментальные группы. Каждая группа представлена 10 самками и 2 самцами. В первой группе заражению подверглись и с^мки и самцы. Во второй группе были заражены только самки, в третьей - самцы, а животные четвертой группы служили контролем.. Животных разных групп содержали изолированно друг от друга, с соблюдением идентичны^ условий содержания и кормления.

После заражения самок и самцов помещали вместе и вели за ними наблюдение в период беременности самок. Тестирование беременности проводили тестами производства США.

При установлении беременности из каждой группы убивали по 3 самки в первую и вторую половину сроков и после родов.

2.1.3.2.Морские свинки

Морские свинки были разделены на три группы: первая и вторая -опытные, третья - контрольная. В каждой группе по 10 самок и 3 самца. Животных первой группы до беременности вакцинировали против хламидиоза инактивированной эмульсионной вакциной производства ВНИВИ г. Казань. Перед применением вакцину подогревали на водяной бане до температуры 37°С и вводили подкожно в область лопатки в дозе 0,25 мл. Ревакцинацию проводили через 14 дней. Животных второй группы не вакцинировали.

После ревакцинации самок и самцов помещали вместе и вели наблюдение весь период беременности с определением прироста живой массы.

При установлении беременности морских свинок первой и второй групп заразили СЫ.рв^с! штамм «ЛС- 87» интраназально в дозе 0,4 мл. Инфекционный титр СЫ.рз1йаа штамм «ЛС - 87» составил мл

для куриных эмбрионов в нативном материале. Инфекционный материал животным вводили в виде 10% взвеси очищенной дифференциальным центрифугированием овокультуры хламидий.

Морские свинки третьей контрольной группы не были вакцинированы и не подвергнуты заражению хламидиозом.

2.1.3.3.Сельскохозяйственные животные

Основным объектом исследования были беременные свиноматки как разовые, так и основные, абортированные и мертворожденные плоды, новорожденные нежизнеспособные поросята и убитые с диагностической целью или для хозяйственного использования свиньи разных возрастов и их поросята.

Хряки были использованы для взятия спермы с последующим ее электронно-микроскопическим и микробиологическим исследованием. Взятие семени производили мануальным способом. Путем центрифугирования получен концентрат спермы, который был зафиксирован 2,5% глютаральдегидом и залит в эпоксидные смолы для электронно-микроскопического исследования.

От свиноматок и хряков, плодов и поросят для "гистологических и электронно-микроскопических исследовани! был взят ' идентичный таковому материал, как и от экспериментальных животных.

2.2. Методы исследования 2.2.1. Морфологические методы Для дальнейших гистологических и электронно-микроскопических исследований был взят идентичный материал от исследуемых животных и их' потомства. Кусочки паренхиматозных органов и тканей (легкие, печень, почки, сердце, головной мозг и его оболочки, лимфатические узлы, селезенка, тимус, ткани матки, плаценты и семенников) фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа, 2,5% растворе глютаральдегида. Заливку производили для гистологических срезов - в парафин, для электронно-микроскопических исследований - в эпоксидные смолы.

- 4 Одновременно с этим из указанных органов готовили мазки-отпечатки, которые окрашивали по Стемпу, для выявления элементарных телец хламидий (Stamp S., 1950).

Гистологические срезы окрашивали: гематоксилином и эозином; по ван-Гизону и по Маллори, для выявления соединительной ткани и отложения гликозаминогликанов; ткани головного мозга - по Нисслю; плазматические клетки выявляли по Браше, гликоген - реактивом Шиффа. Специфической окраской по Г. Т. Павловскому выявляли хламидии в тканях (Цинзерлинг А. В.,1992; Автандилов Г. Г., 1994).

Для электронно-микроскопических исследований кусочки тканей вырезали бритвенным лезвием в виде пластинки толщиной 0,1 см и помещали в предварительно очищенный 2,5%-ный раствор глютаральдегида. В этом растворе пластинки разрезали на кусочки величиной 0,1 мм3 и фиксировали в другой порции этого раствора в течение 4-6 часов. Далее кусочки' отмывали в фосфатном буфере и обрабатывали осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при t+4 С.

В качестве заливочных сред нами использованы аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получали на ультратоме LKB- Ш, контрастировали 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу (Б. Уикли, 1975); просматривали в электронном микроскопе ЭМВ-ЮОБР при ускоряющем напряжении 75К.

Поиск и идентификацию очагов поражения, а также отдельных сосудов и клеток осуществляли методом прицельного ультрамикротомирования путем получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А. И. Лысенко (1973).

2.2.2.Серологические исследования От всех исследуемых животных получали кровь из сосудов уха и отправляли ее для исследования в лабораторию. Диагноз на хламидиоз

был поставлен по результатам РСК и РНГА, результаты которьпс позволяют диагностировать как клинические, так, и скрыто протекающие формы заболевания.

Объекты и методы исследования представлены в таблице №1

3. ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ ПО ХЛАМИДИОЗУ ЖИВОТНЫХ В ПЕРМСКОЙ ОБЛАСТИ

Для изучения эпизоотологии хламидиоза в Пермской области были использованы статистические данные областной ветеринарной лаборатории в период с 1993 по 2000 годы. В лаборатории систематически проводились серологические исследования на хламидиоз у продуктивных сельскохозяйственных животных. Данные этих исследований приведены в таблице 2.Анализ результатов серологических исследований на хламидиоз (таблица 2) свидетельствует о том, что в течение последних лет возросло общее количество животных, обследованных на хламидийную инфекцию. Например, если в 1993 году было обследовано 67 голов крупного рогатого скота и 0 свиней, то в 1997 году исследовали кровь от 1012 голов крупного рогатого скота и 428 голов свиней. Количество животных, реагирующих положительно, было максимальным в 1993 году (20%) и минимальным в 1998 (4,6%) среди крупного рогатого скота и среди свиней соответственно в 1996 (65,4%) и 1997 (9,4%). Как следует из материалов таблицы №2, с годами возросло общее количество животных, кровь которых исследована серологически на хламидийную инфекцию, увеличилось также и количество хозяйств обследующих животных. Это свидетельствует о том, что в хозяйствах увеличивается количество абортов неясной этиологии. В то же время следует отметить, что с годами происходит снижение количества животных положительно реагирующих на хламидиоз. Данный факт, скорее всего, связан с тем, что усовершенствована диагностика заболевания (внедрение РНГА более информативной (Горовиц Э. С. и др., 1998) серологической реакции), своевременно проводятся профилактические мероприятия.

Объекты и методы исследования_Таблица 1

Методы исследования

Морские свинки Крысы Свиньи

Самки Самцы Плоды Самки Самцы Плоды Крысята Свйно матки Хряки Плоды Аборт, плоды Мертворож. поросята Новорожд поросята Итого

1 .Серологический (РСК, РИГА) 30 9 87 40 8 0 90 121 67 46 57 243 ' 157 955

2.Клинический 30 9 0 40 8 0 90 121 67 0 0 0 157 522

3. Патологоанатомич еский 30 9 87 40 8 98 90 121 28 46 57 243 76 933

4 Гистологический и гистохимический 30 9 87 40 8 98 90 121 28 46 57 134 157 905

5.Электронно-микроскопический 30 9 87 40 8 98 90 30 14 11 8 11 17 453

б.Микробиологическ ий 30 9 87 40 8 98 90 121 28 46 57 134 76 824

7. Метод экспериментального заражения 10 0 0 20 4 0 0 0 0 0 0 0 0 34

8.Метод экспериментальной вакцинации 10 0 0 0 0 0 0 121 0 0 0 0 0 131

9.Метод статистического анализа 30 9 87 40 8 98 90 121 67 46 57 134 157 944

Ю.Общее количество обследованных объектов 30 9 87 40 8 98 90 121 67 46 57 134 157 944

Итого 6645

Распространение хламидиоза животных в хозяйствах Пермской области

по результатам серологических исследований.

■ КРС ■ ■ '

год обследовано хозяйств количество животных положительно. . реагирующие сомнительно реагирующие

1993 9 67 14-20,1% 9-13,4%

1994 8 80 8-9,2% 10-11,5%

1995 10 130 16-12,3% 16-12,3%

1996 14 144 8-5,6% 36-25,0%

1997 , 15 230 24-10,4% 83-36,1%

1998 36 435 20-4,6% 99-22,8%

1999 38 1012 142-14,0% 265-26,2%

2000 19 221 36-16,3% 68-30,8%

Свиньи

1996 1 78 51-65,4%- 1-1,3%

1997 4 17 1-5,9% 10-58,8%

1998 10 266 25-9,4% - 39-14,7%

1999 17 428 50-22,7% 139-38,5%

2000 11 219 20-9,1% 27-12,3%

Материалы исследований отечественных и зарубежных ученых дают основание предполагать возможную роль хламидий млекопитающих в этиологии заболеваний человека, так как у людей и животных хламидийная инфекция протекает со сходной симптоматикой: пневмонии, конъюнктивиты, артриты, аборты, рождение нежизнеспособного потомства. В этой связи, нами проанализирована эпидемиологическая ситуация по хламидиозу в Пермской области в тот же статистический период, что представлено в таблице 3.

3. Эпидемиологическая ситуация по хламидиозу в Пермской области

Год Число обследованных Выявлено больных

1993 164 80

1994 310 131

1995 468 131

1996 951 204

1997 931 256

1998 922 152

1999 1097 280

2000 855 369

2001 1015 366

При изучении эпидемиологической ситуации (таблица 3). по хламидиозу в области интересным явился тот факт, что количество людей, реагирующих положительно на хламидиоз, было, так же как и у животных максимальным в 1993 году (48,78%) и минимальным в 1998 году (16,5%). Указанные данные отражены на рисунке 1.

Эпизоотология и эпидемиология хламидиоза в Пермской области

Рис. 1

Объяснением этому факту служит то, что в процессе жизнедеятельности человек чаще контактирует с крупным рогатым скотом через молоко и молочные продукты, а из результатов исследований И. А. Курбановой (1982) известно, что хламидии выделяются с молоком больных коров в течение 60 дней после заражения.

4. КЛИНИЧЕСКОЕ ПРОЯВЛЕНИЕ ХЛАМИДИОЗА У СВИНЕЙ В ХОЗЯЙСТВАХ ПЕРМСКОЙ ОБЛАСТИ И СВИНОКОМПЛЕКСЕ «РОЩИНСКИЙ» РЕСПУБЛИКИ БАШКОРТОСТАН

Заболевание свиней хламидиозом в Пермской области впервые зарегистрировано в 1996 году. При возникновении заболевания в хозяйствах отмечали аборты или рождение мертвых и нежизнеспособных поросят. Клинически каких-либо ярко выраженных симптомов перед абортом у свиноматок не обнаруживали. Отмечали лишь некоторую вялость и понижение аппетита. Аборт чаще проходил в последние недели супоросности, а если опорос проходил в срок, то часть или все поросята рождались мертвыми. Роды были длительными, после родов свиноматки долго лежали, неохотно поедали корм. У большинства свиноматок после родов возникали эндометриты, маститы, приводящие к агалактии.

У новорожденных поросят кожа была застойно гиперемирована, часто с синюшным оттенком, сосательный рефлекс слабо развит. Поросята угнетены, у большинства выражено состояние озноба, нарушена координация движений (отмечали покачивание туловища, пошатывание зада и неточные,

несоразмерные движения конечностей), поведение неестественное, повышенная возбудимость'. '• У некоторых ' поросят заболевание прогрессировало, и они в течение нескольких дней погибали. Оставшиеся в живых поросята, несмотря на активное лечебное вмешательство, росли и развивались плохо.

У больных хламидиозом поросят-отъемышей на коже появлялись темно-красные участки, которые подвергались некрозу и отторгались. У некоторых поросят развивались очаговые дерматиты. С возрастом, при обострении инфекции, у животных проявлялись признаки поражения центральной нервной системы. Животные находились в состоянии депрессии, сонливости, у них отмечали дрожание кожи, волнообразное сокращение поверхностных мышц, возникали парезы конечностей.

В патологический процесс вовлекались органы дыхания и пищеварения.

У некоторых поросят одним из первых клинических признаков развивался конъюнктивит, который также был зарегистрирован у мертворожденных и нежизнеспособных поросят. Заболевание начиналось с проявления слезотечения, светобоязни, гиперемии слизистой оболочки глаз, отека век. Отделяемое глаза вначале было серозным, а в дальнейшем слизистым и слизисто-гнойным. Экссудат вытекал из внутреннего угла глаза, скапливался в конъюнктивальном мешке, на краях век и ресниц. Часть гнойного экссудата после высыхания превращалась в корочки и глыбки, вследствие раздражения кожи гноем книзу от внутреннего угла глаза возникала мокнущая экзема.

Приведенные выше данные о клиническом проявлении хламидиоза свиней свидетельствуют о том, что возбудитель поражает весь организм. Опасность болезни заключается еще и в том, что заболевание до определенного момента протекает латентно, больные свиньи выделяют хламидий во внешнюю среду вместе с фекалиями, мочой, спермой, истечениями из родовых путей, плодными водами, абортированными плодами и плодными оболочками.

5. ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ХЛАМИДИОЗА В СИСТЕМЕ «МАТЬ-ПЛАЦЕНТА-ПЛОД» 5.1.Морфологические и ультраструктурные изменения в органах и тканях свиноматок при спонтанном хламидиозе

При морфологическом исследовании плаценты эпителий ворсин был неравномерно окрашен гематоксилином и эозином, ядра клеток в большинстве случаев в стадии некротического распада, а цитоплазма гомогенно красноватого цвета. Распад ядер происходил по типу лизиса и пикноза. В расширенных пространствах между ворсинами наблюдали фибрин в виде нежной или грубой сеточки.

Кровеносные сосуды плаценты в основном запустевшие, стенки их утолщены за счет пролиферации ее элементов, большая часть сосудов обтурирована.

Тот же процесс отмечали и в сосудистой системе собственной пластинки плаценты. В более мелких сосудах ярко выражен процесс продуктивного васкулита.

Синцитий ворсин плаценты на некоторых участках полностью оголялся, происходила десквамация эпителия.

В мышечном слое матки регистрировали рассеянную инфильтрацию, сортоящую преимущественно из микро очагов лейкоцитов. В подслизистом слрё инфильтрация нарастала, наряду с лейкоцитами обнаруживали гистиоциты и лимфоциты. Одновременно наблюдали пролиферативную реакцию в стенках сосудов микроциркуляторного русла. В просвете матки отмечали полиморфную массу, состоящую из эритроцитов, фибрина, отдельных клеток или целых симпластов клеток слущенного эпителия и полибластных оксифильных телец.

Ворсины укорочены, сохранившийся эпителий гиперхромно окрашен, в прорвете матки, наряду с конгломератами фибриноида и частицами солей извести, обнаруживали десквамированный эпителий, в виде отдельных полосок.

В тех участках, где регистрировали нарушение целостности эпителия, наблюдали обширные полиморфно-клеточные инфильтраты, содержащие эозинофилы, что свидетельствует об местной аллергизации. Вокруг сосудов микроциркуляторного русла матки эозинофильно-клеточная инфильтрация была еще более выражена, причем среди эозинофилов присутствовали дегранулированные формы, то есть шло пропитывание тканей биогенными аминами, которые освобождались при дегрануляции эозинофилов.

Подслизистая оболочка матки разрыхлена, отечна, в ее кровеносных сосудах (артериального и венозного русла) обнаруживали сеточку фибрина и некоторое количество лейкоцитов, что характерно для катарально-фибринозного или гнойно-фибринозного процессов. В участках, расположенных ближе к мышечному слою, формировались полости, заполненные оксифильной, гомогенной (или фибринозной) массой, что также является проявлением нарушения гемодинамики.

Отек и фибринозное воспаление распространялись на близлежащие крипты или маточные железы. Наиболее ярко отёк, и дезорганизация соединительной ткани были видны в стенке кровеносного сосуда и за ее пределами. Периваскулярное накопление гликозоаминогликанов сопровождалось повышением проницаемости сосудистых мембран и ярко выраженной пролиферативной реакцией в стенке сосуда.

Наряду с патологическими процессами во всех составляющих стенки матки, в эпителии маточных желез наблюдали компенсаторно-приспособительную реакцию - избыточную пролиферацию, причем в некоторых из них она была настолько ярко выражена, что размножившиеся клетки полностью закрывали просвет железы. Одним из признаков иммунобиологической реакции было наличие в матке периваскулярно расположенных плазматических клеток, ответственных за образование антител, это еще раз подтверждает ответную реакцию органа на

хламидийную инфекцию. В мазках отпечатках из матки, окрашенных по методу Стемпа, обнаружены хламидии. •

Сходные процессы наблюдали в плаценте, они характеризовались активной пролиферацией клеточных элементов стенки кровеносных сосудов, нарушением гемодинамики (тромбоз), появлением обширных пролиферативно-клеточных инфильтратов в субэпителиальном слое. Наиболее выраженную инфильтрацию регистрировали в местах отслоения плаценты, она была представлена в основном мелкими лимфоцитами, окрашенными ярко базофильно, то есть можно предположить, что последние относятся к популяции киллеров.

В печени свиноматок также резко выражены явления нарушения гемодинамики. Паренхима печени разрыхлена, венозная система расширена и заполнена плазмой. В паренхиме органа обнаруживаются рассеянные лимфоидно-клеточные инфильтраты, свидетельствующие о воспалительной реакции, а в отдельных гепатоцитах обнаружена жировая дистрофия по типу крупнокапельной.

В разных дольках печени, наряду с жировой дистрофией, обнаруживаются нарушения белкового обмена в виде зернистой дистрофии, в таких участках границы гепатоцитов не четко выражены, а цитоплазма представлена зернистой массой.

В области триады четко обнаруживается разлитой отек, в котором полностью утрачивают свою структуру сосуды и желчные протоки.

В матке свиноматок, абортировавших и затем павших, слизистая оболочка набухшая, отечная, инфильтрирована гнойно-некротическим экссудатом. В сосудах, которые расширены, обнаружены фибринозные тромбы с наличием лейкоцитов. В подслизистой оболочке - отек, представленный полостями, заполненными серозно-фибринозным экссудатом. Вся подслизистая оболочка и область маточных желез инфильтрирована лейкоцитами, среди которых встречаются эозинофилы, здесь же масса гнойных телец. По периферии складок и в просвете матки в экссудате отмечается отложение солей извести. В мышечном слое обнаруживаются полости заполненные фибрином и эозинофильно-клеточным инфильтратом.

В регионарных лимфатических узлах - явления продуктивного лимфаденита, отека и жирового перерождения. Стенка кровеносных сосудов в основном гомогенизирована, эндотелий в состоянии пролиферации, просветы сосудов сужены, большей частью обтурированы.

Мякотные тяжи не выражены, фолликулы резко редуцированы и обнаруживаются в виде небольших скоплений только в подкапсулярной зоне. При изучении ультраструктуры матки свиней, больных. хламидиозом, установили, что в очагах деструкции среди коллагеновых волокон и фибробластов встречались клетки с наличием , хламидий в цитоплазматическом матриксе. Ретикулярные формы хламвдий были обнаружены также межклеточно в отечном пространстве. Цитоплазма клеток осмиофильна, выражен перицеллюлярный отек и дискомплексация ткани с

деструкцией органелл. В очагах некроза встречались хламидии с нарушением мембраны. В капиллярах прослеживалась осмиофилия эндотелия, расплавление базального слоя, периваскулярный отек.

5.2.Морфологические изменения в органах и тканях

мертворожденных, абортированных плодов, нежизнеспособных и новорожденных поросят при спонтанном хламндиозе

У мертворожденных поросят, патологоанатомические и

гистологические изменения были обнаружены во всех исследуемых нами паренхиматозных органах и тканях и протекали как по типу дистрофических, так и по типу воспалительных. Наиболее глубокие изменения отмечены в почечной ткани, которые сводились к зернистой дистрофии эпителия извитых канальцев. Границы просвета канальцев, в большинстве случаев, не просматривались, или были неправильной формы за счет набухания эпителиальных клеток. В мозговой зоне рисунок канальцев не четко выражен, некоторые из них резко расширены и зияли, другие сжаты и атрофированы. Между канальцами, как в корковой, так и в мозговой зоне, обнаруживались клеточные инфильтраты с наличием сегменто - и палочкоядерных лейкоцитов и гнойных телец. В гломерулярном аппарате были выражены процессы пролиферации эндотелиоцитов, процесс развивался по типу экстракапиллярного гломерулонефрита.

У плодов, абортированных в возрасте 60 дней, в почках клубочки не одинаковой величины, некоторые из них очень крупные, превышающие в 1,5-2 раза основную массу клубочков, разрыхлены, фрагментированы, с ярко выраженными явлениями пролиферации и отека. В извитых канальцах дистрофические процессы в виде зернистой и вакуольной с очагами некроза эпителиальных клеток. Стенки кровеносных сосудов утолщены, не однородно окрашены с пролиферацией клеток эндотелия и адвентиции. Имеют место периваскулярные отеки и кровоизлияния.

У нежизнеспособных поросят, родившихся в одном помете с мумифицированными плодами, в почках хорошо сформирована система клубочков и канальцев. Просветы канальцев резко расширены, в них обнаруживаются белковые цилиндры. Эпителий в состоянии резко выраженной зернистой дистрофии, вакуолизации и некроза.

В печени система триады хорошо выражена, балочное строение определено, обнаруживаются перинуклеарные отеки и периваскулярные лейкоцитарные инфильтраты с наличием гнойных телец. В гепатоцитах -зернистая и вакуольная дистрофия, особенно ярко выраженная в периферических зонах гепатона. Между печеночными балками в синусоидах постоянно обнаруживаются лейкоцитарные инфильтраты.

У абортированных в возрасте 44 дней плодов печень депонирована кровью, дольки еще не сформированы, но печеночные клетки уже объединяются в печеночные балки. Система триады не обозначена, но хорошо видны крупные кровеносные сосуды типа собирательных вен. В некоторых из таких сосудов обнаруживаются фибринозные тромбы и

сладжирование эритроцитов. В гепатоцитах цитоплазма неравномерно окрашена, величина гепатоцйтбв неодинакова и ядра также разной величины. Наряду со сформированными гепатоцитами, наблюдается табель отдельных из них.

Комплекс обнаруженных нами изменений свидетельствует о несостоятельности гепато-ренальной системы мертворожденных и абортированных плодов. Наличие дистрофических и некробиотических процессов в исследуемых органах подтверждает трансплацентарное токсикогенное воздействие хламидий на организм развивающегося плода. При визуальном осмотре плодных оболочек нами установлен очаговый некроз и воспалительный отек плодной плаценты. Со стороны материнской части плаценты свиноматок, абортировавших в первой половине беременности (44 - 60 дней) были обнаружены плотные, белого цвета очажки, которые имели вид просяного зерна, в количестве 3-4 очажков на 1 см2 поверхности плаценты, что идентифицировано нами как хламидиозные гранулемы. Гистологически они представляли собой очаги округлой формы, покрытые плотной оксифильной оболочкой, полость которых выполнена грубой сетчатой структурой, похожей на губку.

У абортированных в возрасте 44 дней плодов в плодной плаценте ворсины хориона атрофированы, рисунок основного вещества усилен, кровеносные сосуды запустевшие, с разрыхленной стенкой и в большинстве сосудов она разрушена. Отмечен отек и пласты очагов некроза. Участки сохранившегося эпителия хориона в состоянии геморрагического воспаления. - -

Легкие плодов, абортированных в возрасте 60 дней, спавшиеся, рисунок бронхов разного калибра четко выражен, структура долек легкого определена. В межуточной соединительной ткани также обнаруживаются периваскулярный отек и диапедезные кровоизлияния, а в некоторых сосудах фибринозные и фибринозно-эритроцитарные тромбы.

В селезенке мертворожденных поросят фолликулы слабо развиты, содержат небольшое количество лимфоцитов, рыхло расположенных вокруг центральных артерий. Рисунок трабекул четко выражен и усилен на фоне обедненной ретикулярной ткани красной пульпы селезенки. Пульпа малокровна, а клетки и волокна ретикулума четко обозначены. Пульпарные кровеносные сосуды расширены и резко гиперемированы. Капсула селезенки утолщена. Местами в капсуле обнаруживается рассеянная полиморфно-клеточная инфильтрация, особенно выраженная в периваскулярной зоне. Процесс можно характеризовать как врожденный иммунодефицит.

Дольки тимуса четко обозначены, но в большинстве из них наблюдается хаотичное расположение слоев. В корковой зоне тимуса обнаруживаются конгломёраты темно-синего цвета, представленные погибшими лимфоцитами, склеенными в единую базофильную массу

В мозговой зоне в тельцах Гассаля видны явления роговой дистрофии и некроза.

В тимусе абортированных плодов (возраст 44 дня) корковая и мозговая зона не четко выражены, дольки не определены. Тимус рыхло заселен лимфоцитами, в месте формирования мозговой зоны видна оксифильная рыхлая соединительная ткань с единичными клетками.

Селезенка этих плодов богата эритроцитами, хорошо видны мегакариоциты, фолликулы еще не сформированы, но очаги экстрамедуллярного кроветворения хорошо выражены. Превалирует выраженный рисунок формирования соединительно-тканной и ретикулярной стромы, в то время как структуры, отвечающие за иммунный статус организма, не развиты. В селезенке мертворожденных поросят отмечено разрыхление пульпы, усиление рисунка ретикулярной стромы и трабекул.

. Анализ результатов наших исследований свидетельствует о подавлении формирования в органах иммунной системы как Т-, так и В- зависимых зон у мертворожденных и абортированных плодов, полученных от свиней зараженных хламидиозом.

В печени поросят, абортированных в позднем сроке беременности, строение долек не просматривалось, межуточная соединительная ткань в виде широких пластов, очаги экстрамедуллярного кроветворения выражены незначительно, мегакариоциты единичны. В соединительно-тканной строме печени регистрировали лимфоидно-клеточные инфильтраты, как признак ответной воспалительной реакции, хотя орган не достиг физиологической зрелости. В содержимом пролиферата наблюдали появление единичных эозинофилов, свидетельствующих об аллергизации организма. Сосуды, расположенные в соединительно-тканной строме, растянуты, эндотелиальные клетки деформированы, ткань вокруг сосудов разрыхлена и пропитана плазмой - признак нарушения проницаемости сосудов.

В селезенке регистрировали повышенное образование соединительнотканных структур, при этом очаги экстрамедуллярного кроветворения были хорошо выражены, но имели более рассеянный тип, чем в норме. Морфологическая структура селезенки свидетельствовала о ранней ее индурации уже у плода.

Альвеолы легких хорошо сформированы, однако некоторые из них расширены и напоминали легкие новорожденного, просветы их были заполнены сеточкой фибрина. Такую же картину наблюдали и в просвете кровеносных сосудов.

При проведении патологоанатомических и гистологических исследований органов и тканей новорожденных поросят, установлено прямое токсическое действие хламидий, которое проявлялось в виде тяжелых дистрофических процессов, приводящих к нарушению обмена веществ и гибели новорожденных животных.

Зарегистрирована прямая связь между патологическими процессами, развивающимися у свиноматок и новорожденных поросят. Как у тех, так- и других отмечали нарушение гемодинамики. В печени были резко выражены отек, плазморрагия, гемосидероз тканей, что свидетельствует о внутрисосудистом и внесосудистом гемолизе эритроцитов. В селезенке, как признак иммунодефицита, наблюдали редукцию лимфоидных фолликулов. На их месте сохранялась только центральная артерия с . узким ободком лимфоидных клеток. В почечной ткани отмечали отек в корковом слое, канальцы в очагах отека были разрушены. Оставшиеся отдельные эпителиальные клетки «плавали» в отечной жидкости, которая была богата фибрином.

Обнаруженные нами патологические процессы в тканях плацентарного барьера, в организме матери, плода и новорожденного, а также выявление хламидий во всех составляющих плацентарного барьера и органах плода, свидетельствует о беспрепятственном проникновении данного микроорганизма через плацентарный барьер и развитии хламидийной инфекции в организме матери и плода.

6. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ ХЛАМИДИОЗ В СИСТЕМЕ «МАТЬ-ПЛАЦЕНТА-ПЛОД» У КРЫС 6.1 Гистологичекие и ультраструктурные изменения в тканях плацентарного барьера, в органах крыс матерей в разные периоды беременности и морфологическая реакция тканей и органов плодов крыс

Экспериментальный хламидиоз, согласно методике исследований, был воспроизведен на беременных крысах. В эксперименте участвовали крысы обоего пола, причем для выявления степени патологического воздействия со стороны матери и со стороны отца, заражение их проводили по следующей схеме. Заражение отцов и матерей одновременно, заражение только матерей и, наконец, заражение только отцов, четвертая группа - незараженные животные, служила контролем.

При гистологическом исследовании в матке беременных крыс всех трех опытных групп наблюдается разрыхление и отек собственного слоя слизистой оболочки. В просвете желез постоянно обнаруживается гомогенная оксифильная масса, а вокруг желез, резко выраженная, эозинофильно-клеточная инфильтрация. Мышечные слои при этом разрыхлены. Между ними находится значительное количество гистиоцитарных элементов, нейтрофильных лейкоцитов и единичных крупных клеток с оксифильной цитоплазмой и бесформенным базофильным плотным ядром. Сосуды слизистой оболочки, большей частью, зияющие запустевшие, или со следами плазмы. Периваскулярно обнаруживается рассеянная полиморфно-клеточная инфильтрация, преимущественно состоящая из эозинофильных лейкоцитов в случае заражения обоих родителей.

В тканях собственной пластинки хориона просветы сосудов резко расширены, лакуны заполнены кровью, где можно видеть повышенный

гемолиз эритроцитов и выпадение гемосидерина. Местами эндотелий лакун истончен и разрушен и на их месте образуются полости с обрывками эндотелия.

При изучении изменений в паренхиматозных органах крыс и их плодов отмечена' своеобразная закономерность параллельного поражения органов матери и плода всех экспериментальных групп. Так при исследовании печени крыс всех опытных групп обнаружена в той или иной степени выраженная жировая дистрофия гепатоцитов.

В печени крыс- матерей жировая дистрофия гепатоцитов представлена как мелко-, так и крупнокапельным процессом, расположенным на периферии дольки. Из-за появления крупных капель жира мембраны клеток разрушаются и граница гепатоцитов не везде выражена. Ядра гепатоцитов либо резко уменьшены базофильны, однородны, либо увеличены в полтора два раза слабобазофильны с выраженной зернистостью хроматина. В центролобулярных гепатоцитах сохранилось бледно-розовое окрашивание цитоплазмы эозином, но и здесь четко выступают процессы зернистой дистрофии. Постоянно обнаруживаются и процессы нарушения гемодинамики. Вследствие этого развивается центролобулярный очаговый некроз, но, тем не менее, деструктивные процессы выходят на первый план и характеризуются как альтеративно-деструктивный гепатоз. Это свидетельствует о резко выраженном токсическом воздействии хламидий на организм, как матери, так и плода, наиболее рельефно выступающем в группах, где были заражены только матери и оба родителя одновременно.

При исследовании тканей почек, легкого, мозга постоянно обнаруживались признаки токсического воздействия. Клеточные инфильтраты во всех исследуемых органах, кроме матки, были незначительны, но постоянны, тем не менее, трудно охарактеризовать данный процесс как воспалительный. Хотя все компоненты воспаления - альтерация, экссудация и пролиферация имели место, но два последних были настолько ничтожны, что альтерация буквально затушевывала их. Из полиморфно-клеточных инфильтратов, которые выявлены во всех исследуемых органах, но наиболее значимые в тканях матки, постоянно присутствовали эозинофильные лейкоциты, что свидетельствует об аллергической реакции организма. Наряду с этим, при исследовании почек изменения клубочкового и тубулярного аппарата идентифицированы нами как иммунокомплексный гломерулонефрит.

При исследовании препаратов, окрашенных по Павловскому, во всех исследованных органах обнаружены хламидии, но наибольшая их плотность обнаружена в тканях матки, плаценты и хориона, на втором месте стоят ткани легкого, затем почек, печени, головного мозга, селезенки. Прослежена четкая зависимость усиления патологических процессов при одновременном заражении самца и самки.

Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что при экспериментальной хламидийной инфекции у крыс в системе «мать - плод» развивается комплекс патологических процессов, относящихся в основном к

инфекционно-токсическому воздействию хламидий на организм матери и плода. Наиболее значительные патологические изменения развиваются в тканях беременной матки, независимо от того, кто из родителей был заражен, но комплекс процессов усиливался при заражении обоих родителей. Дистрофические, некробиотические процессы, поражение сосудистых мембран и эозинофильно-клеточные инфильтраты свидетельствуют о развитии воспаления на иммунной основе по варианту гиперчувствительности немедленного типа.

При исследовании органов крысят экспериментальных групп так же обнаружены патологические, и компенсаторно-приспособительные процессы, особенно наглядно выраженные в печени.

У плодов и новорожденных крысят, отец которых был заражен хламидиозом, в печени при окраске реактивом Шиффа отмечены процессы полного исчезновения гликогена и ярко выраженной жировой дистрофии. В печени плодов и новорожденных постоянно выявляли значительное количество мегакариоцитов. Орган был депонирован кровью, очаги экстрамедуллярного кроветворения не четко очерчены, в основном представляли собой рассеянную массу клеток. В печени появляются бесцветные, не воспринимающие окраску эритроциты, что свидетельствует об анемии. В межуточной соединительной ткани хорошо выражена периваскулярная макрофагальная реакция с наличием единичных эозинофилов. Звездчатые ретикулоэндотелиоциты при этом увеличены в объеме, их ядра набухшие, хорошо контурированы, что характеризуется как компенсаторно-приспособительный процесс органа в условиях патогенного воздействия на организм матери. Эпителиальные клетки печени прозрачные, как бы выполнены вспененной массой. Ядра гепатоцитов бледно окрашены, и вся структура печени представлена в виде тонкой паутинной сеточки с очерченными кровеносными сосудами и клетками кроветворной ткани. Это еще раз указывает на процесс резкого снижения количества гликогена в паренхиме органа и подтверждено окраской препаратов на гликоген реактивом Шиффа.

При ультрамикроскопическом изучении матки крыс, не зараженных хламидиозом (контрольная группа) обнаружили, что среди равномерно расположенных как в поперечном, так и в продольном сечении коллагеновых волокон встречались эпителиальные клетки, а также их отростки с хорошо развитыми органеллами и ядром с равномерным распределением хроматина.

В матке у крыс из первой экспериментальной группы, в которой заражению подвергались самки и самцы, обнаружили очаги деструкции, в которых выявлено расплавление коллагеновых волокон, а в отростках эпителиальных клеток разрушение органелл, а также деструкцию фибробластов. Наблюдалось разволокнение стенки капилляров с осмиофилией и вакуолизацией эндотелия, набуханием, а местами расплавлением базального слоя.

В матке крыс второй группы, в которой заражению были подвергнуты только самки, в эпителиальных клетках хорошо развит гранулярный эндоплазматический ретикулум, цистерны и канальцы умеренно расширены. Отмечалась осмиофилия матрикса митохондрий, их кристы не везде просматривались. В цитоплазме отмечено наличие большого количества лизосом. В отростках эпителиальных клеток - иммунные комплексы. Ядра гиперхромны с маргинацией хроматина.

В матке крыс третей группы, в которой заражению подвергались только самцы, отмечалась резкая вакуолизация эпителиальных клеток с образованием обширных полостей, деструкцией органелл, осмиофилией митохондрий, разрывом цитоплазмы и выходом органелл в отечное пространство. Ядра гиперхромны. В очагах некроза обнаружены аутофагосомы. В очагах расплавления остатки, обрывки клеток, органелл, отек ткани, масса осмиофильных включений. Отмечена гибель эпителиальных клеток, фибробластов, коллагена.

Таким образом, анализируя и сопоставляя обнаруженные нами процессы в системе «мать-плацента-плод» при экспериментальном воспроизведении хламидийной инфекции можно с уверенностью утверждать, что все звенья этой единой системы претерпевают изменения, причем в большинстве случаев они носят необратимый характер.

7. МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ПРОЯВЛЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИНФЕКЦИОННОГО И

ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ХЛАМИДИЙНОГО ПРОЦЕССА У МОРСКИХ СВИНОК

7.1. Морфология экспериментального хламндийного инфекционного

процесса

В соответствии с методикой исследования этой группы животных, мы ставили цель выяснить влияние хламидий патогенного штамма не только на организм беременного животного и его потомства, но и проследить ответную иммунную реакцию организма при условиях заражения патогенной культурой хламидий, без предварительной иммунизации животных.

У морских свинок, не вакцинированных против хламидиоза, и зараженных штаммом ЛС-87 в начале беременности, во всех взятых для исследования органах отмечены в разной степени выраженности патологические процессы. Так в корковом слое почек наблюдается пролиферация и гиперплазия эндотелиальных и мезангиальных клеток клубочка. Утолщение базальных мембран эндотелия, геморрагическое пропитывание и некроз эпителия извитых канальцев. В мозговой зоне почек отмечен продуктивный процесс, переходящий в склеротический. В очагах некроза, обнаруженных здесь, происходит коллагенизация соединительнотканной основы почек.

Процессы коллагенизации волокон межмышечной рыхлой соединительной ткани, одновременно с зернистой дистрофией миокардиоцитов, прослеживаются и в сердце.

В легких отмечены периваскулярные полиморфно-клеточные инфильтраты с выраженной макрофагальной реакцией, отек стенки и разрыхление периваскулярной соединительной ткани, расширение межальвеолярных капилляров и гемолиз эритроцитов в них. Как компенсаторно-приспособительный процесс постоянно обнаруживались эмфизематозные участки.

В матке были выражены разрыхление и отек мышечного слоя, во всех ее слоях отмечены скопления макрофагов с мелкозернистыми ядрами, а в просвете матки - гнойно-геморрагический экссудат. Маточные железы расширены, отмечается гиперсекреция слизи в них.

В головном мозге обнаружен очаговый некротический распад ткани, при этом большая часть нейронов гомогенизирована, окрашена однородно, гиперхромно.

В печени подкапсулярная зона отечна и разрыхлена. Резко выражена зернистая и вакуольная дистрофия гепатоцитов, встречаются очаги некротического распада гепатоцитов, нарушается балочная структура печени, стенки артерий триады гомогенизированы, с пери васкулярн ыми кровоизлияниями.

В селезенке обращает на себя внимание уплотнение лимфоидных фолликулов, отсутствие выраженных центров размножения, перифолликулярная макрофагальная реакция и резкое кровенаполнение красной пульпы.

Анализ полученных нами данных свидетельствует об яркой ответной реакции организма, проявляющейся как патологическими, так и в некоторой степени компенсаторно-приспособительными процессами, причем следует отметить что ответная реакция проявилась не в виде «малой болезни», соответствующей проявлению прививочного иммунитета, а по сути инфекционного патологического процесса.

7.2. Морфология поствакцинального хламидийного процесса с последующим инфицированием беременных морских свинок

Вакцинацию экспериментальных морских свинок производили подкожно в область левой лопатки дважды с интервалом 14 дней. На первой неделе беременности свинок заразили интраназально вирулентным штаммом. Вторая группа беременных морских свинок заражена данным штаммом без предварительной вакцинации. При наблюдении за животными было выявлено прерывание беременности у одной из десяти морских свиной второй группы на 19 день после заражения. По окончании эксперимента морские свинки и их детеныши были убиты и исследованы патологоанатомически, гистологически, и электронномикроскопически. Со всех паренхиматозных органов, матки, плаценты- и, органов плода были

сделаны мазки - отпечатки, которые окрашивали по Стемпу для выявления хламидий.

Микроскопирование мазков - отпечатков дало устойчивое присутствие хламидий в тканях плаценты, как материнской, так и детской ее частей и в ткани легкого, в других паренхиматозных органах они или отсутствовали, либо встречались единичные экземпляры.

Сравнительные исследования животных первой группы, предварительно вакцинированных и второй, зараженных, не вакцинированных морских свинок, показало генерализацию процесса у последних и локальную обсемененность у морских свинок первой группы, причем в органах плодов хламидии были обнаружены только у животных второй группы.

В печени морских свинок, вакцинированных перед заражением, ярко выражена пролиферативная реакция звездчатых ретикулоэндотелиоцитов, очаги микронекроза, воспалительный процесс с периваскулярной клеточной инфильтрацией.

В мозге выявлены периваскулярные клеточные муфты и явления нейронофагии, как признак воспалительной реакции ткани мозга.

В матке, наряду с патологическими, выявлены процессы восстановления клеток эпителия, характеризующиеся появлением молодых форм эпителиальных клеток с крупными ядрами и хорошо выраженными зернышками хроматина.

В миокарде всех исследуемых животных постоянно обнаруживали полиморфно-клеточные инфильтраты.

В почках - активный интракапиллярный гломерулит и зернистую дистрофию эпителия извитых канальцев.

В органах и тканях плодов патологические процессы в основном касались расстройства гемодинамики. В печени плодов морских свинок данной опытной группы, наряду с усилением рисунка ретикулярной стромы, орган был депонирован кровью с наличием в нем компактных и разлитых кровоизлияний. Обширные кровоизлияния встречаются и в ткани головного мозга. Селезенка так же была резко депонирована кровью. В почках отмечена гиперемия сосудов разного калибра.

Сравнительные морфологические исследования органов матери и плода, а также тканей плацентарного барьера, показали существенные отличия в развитии патологических процессов у разных групп экспериментальных животных. Так у зараженных не вакцинированных животных во всех исследованных органах выявлены в основном альтеративно-экссудативные процессы с акцентом на альтерацию, в то время как у предварительно вакцинированных - преобладали экссудативно-пролиферативные и компенсаторно-приспособительные процессы, свойственные воспалению на иммунной основе. Но в том и другом случае электронномикроскопически в стенках кровеносных сосудов плацентарного барьера выявлены иммунные комплексы, свидетельствующие о повреждающем действии штамма хламидий. Это свидетельствует о том, что при хламидиозе у беременных

морских свинок матка является «шоковым органом». Вторым из органов, по выраженности патологических изменений, является мозг, в основном у абортированных плодов и новорожденных: В нем постоянно выявлялись процессы очаговых некрозов - у зараженных и явления нейронофагии - у предварительно вакцинированных. л

Анализ полученных нами данных свидетельствует о высокой вирулентности и патогенности штамма ЛС- 87 для беременных морских свинок. Предварительная вакцинация животных предохраняет организм от развития инфекции, ■ тем не менее, морфологические признаки после заражения носят черты воспаления на иммунной основе с оседанием в стенке сосудов повреждающих иммунных комплексов, усиленной избыточной пролиферации, приводящей в конечном итоге к склеротическим процессам.

8. МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА ГЕМАТО-ЭНЦЕФАЛИЧЕСКОГО БАРЬЕРА ПРИ СПОНТАННОМ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХЛАМИДИОЗЕ

При гистологическом исследовании оболочек и тканей мозга постоянно обнаруживались признаки токсического воздействия, которые проявлялись процессами микронекроза основного вещества мозга, гибелью нейронов. Клеточные инфильтраты, которые в основном обнаружены в оболочках мозга, были незначительны, но постоянны, тем не менее, трудно охарактеризовать данный процесс как воспалительный. При наличии всех компонентов воспаления (альтерация, экссудация и пролиферация) альтерация была наиболее выраженной. При исследовании мозга, как матери, так и плодов постоянно наблюдались явления перинуклеарного, перицеллюлярного и периваскулярного отека, обнаруживались периваскулярные клеточные муфты, наряду с этим наблюдалось разрыхление вещества мозга.

У мертворожденных поросят, мать которых не была вакцинирована против хламидирза, ,в тканях головного мозга обнаружены очаги размягчения, которые представлены вакуольной дистрофией и разрыхлением ткани. Имели место участки, значительно инфильтрированные клетками макро- и микроглии. При окраске по . Нисслю обнаруживали перИнуклеарный, перицеллюлярный и периваскулярный отек, некоторые клетки резко уплотнены, гиперхромны, темно-синего цвета с четко очерченными контурами. Кровеносные сосуды зияли, гиперемированы. Эпендима утолщена. В веществе мозга встречались узелки, состоящие из клеток микроглии, расположенные под эпендимой. Периваскулярные клеточные муфты в основном представлены пролиферирующими эндотелиоцитами и частично клетками микроглии.

В головном мозге плодов, абортированных в 3,5 месяца, наблюдали разрыхление ■ основного вещества, периваскулярные отеки микроциркуляторного русла. В нервных клетках отмечали деформаций, гомогенизацию ядра и явление нейронофагии клетками глии, как признак воспалительной реакции ткани мозга - энцефалит.

В головном мозге поросят, родившихся с клиникой расстрьйства ЦНС, резко выражены явления отека, повреждения всех структур мозга, некроз нервных клеток - появление клеток- теней и гиперхромных нервных клеток неправильной формы, т.е. отмечаются разные варианты гибела нервных клеток. Ярко выражены явления альтерации тканей головного мозга, что четко прослеживается при окраске гематоксилином и эозином и, особенно, при окраске по Нисслю.

У нежизнеспособных поросят, родившихся в одном ■ помете с мумифицированными плодами, в сосудах головного мозга прослеживаются явления гиперемии, периваскулярно - очаги кровоизлияний, гибели нейронов, очаги некроза мозгового вещества и появление сетчатой губчатой структуры в отдельных участках мозга. При окраске по Нисслю видно неравномерное окрашивание нейронов, перицеллюлярный отек, явления хроматолиза нервных клеток.

При окраске препаратов по Павловскому и при микроскопировании их под иммерсией большее обсеменение хламидиями выявлено в оболочках мозга, и незначительное - в веществе мозга.

Электронномикроскопически в тканях мозга обнаружены очаги расплавления, отека и дискомплексации ткани. В очагах расплавления видна гибель нейронов, которая характеризовалась нарушением ядерной и цитоплазматической мембран с выходом ядерного содержимого и деструкцией органелл. Наиболее глубоким изменениям были подвержены лизосомы и митохондрии. Образование фагосом имело место, но ни в одной из них хламидий не было обнаружено.

Наряду с этим, деструктивным процессам подвержена стенка сосудов микроциркуляторного русла. Эндотелий был представлен в виде узкой полосы в которой не представлялось возможным дифференцировать органеллы. Кроме того, нами выявлены процессы гиалиноза стенки капйлляров, что гистологически не просматривается. Периваскулярно постоянно имели место деструкция миелиновых волокон и периваскулярный отек. Основным признаком поражения гемато-энцефалического барьера является, обнаруженный, нами феномен внедрения элементарных патогенных телец хламидий в стенку капилляра, что является одним из патогенетических признаков данного заболевания.

Ультраструктурные изменения в ЦНС носили очаговый характер. Наблюдались дистрофические изменения в нейронах и глиальных элементах, а местами очаги некроза и расплавления ткани. У нейронов отмечался разрыв и полное отсутствие цитоплазматической мембраны, исчезновение рибосом и полисом, деструкция органелл, появление лизосом и аутофагосом, нарушение ядерной мембраны, неравномерное распределение хроматина и выход ядерного материала в цитоплазматический матрикс. Имел место перицеллюлярный отек.

В очагах расплавления отек, дискомплексация ткани, кровоизлияния, гибель нейронов, глиальных клеток. В белом веществе гибель миелина, отек,

образование обширных полостей. На месте гибели нейронов отек и кровоизлияние. В капиллярах - эндотелий в виде узкой полосы осмиофилен, какие - либо органеллы дифференцировать не представляется возможным. Базальный слой неравномерен, местами разрыхлен. Периваскулярно - отек, деструкция и дезорганизация ткани.

Отмечались деструктивные изменения коллагеновых и эластических волокон мягкой мозговой оболочки. Среди коллагейовых волокон встречались фибробласты осмиофильного вида, а также кровоизлияния. Между волокнами обнаружены единичные, а также группы ретикулярных форм хламидий имеющие овальную, круглую форму зернистого вида, ограниченные мембраной. Встречались единичные элементарные тельца с плотным нуклеотидом, окруженные мембраной.

Таким образом, при электронно-микроскопическом исследовании оболочек и вещества мозга были обнаружены изменения, от дистрофических до деструктивных, которые носили очаговый характер. В очагах отмечалась деструкция органелл до гибели нейронов и окружающей ткани, очаги расплавления, дискомплексации ткани, отек, кровоизлияния, гибель миелина, образование полостей в белом веществе. Наблюдалось нарушение гемато-энцефалического барьера с деструкцией всей стенки капилляра, внедрением хламидий и периваскулярным отеком. Тяжелые очаговые изменения в оболочках и веществе мозга обусловлены не только наличием хламидий, но и, возможно, воздействием токсинов, образующихся при отеке и распаде тканей.

9.МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ОРГАНИЗМЕ САМЦОВ-КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ ХЛАМИДИОЗОМ И СЕМЕННИКАХ У ХРЯКОВ, СЕРОЛОГИЧЕСКИ РЕАГИРУЮЩИХ НА

ХЛАМИДИОЗ

При проведении эксперимента на крысах, наряду с самками, были изучены изменения в организме самцов, зараженных вирулентной культурой хламидий. Исследованы паренхиматозные органы - печень, почки, селезенка, сердечная мускулатура, легкие, лимфатические узлы и семенники. :

При исследовании печени отмечены дистрофические, воспалительные и компенсаторно-приспособительные процессы в разной степени выраженности. Процессы, характерные для гепатоза, были представлены зернистой дистрофией гепатоцитов, которая на периферии долек была, наиболее выраженной в виде некроза отдельных гепатоцитов и групп клеток, одновременно проявлялась и компенсаторно-приспособительная реакция органа в виде компенсаторной гипертрофии клеток. В других случаях, наряду с зернистой дистрофией, была наиболее выражена жировая дистрофия гепатоцитов от мелкокапельной до крупнокапельной жировой инфильтрации. При этом наблйдали активизацию звездчатых ретикулоэндотелиоцитов, пролиферацию соединительно-тканных элементов

в системе триады. Одновременно с этим, в некоторых печеночных дольках наблюдался цирротический патологический процесс по типу гипертрофического цирроза, когда элементы соединительной ткани разрастались внутри долек и изолировали друг от друга отдельные гепатоциты или группы их.

В почках крыс-самцов патологический процесс отмечен как в корковой, так и в мозговой зоне. В нефроцитах эпителия извитых канальцев, наряду с зернистой дистрофией, были выражены микронекротические процессы отдельных эпителиальных клеток. Одновременно с этим были отмечены процессы вакуольной дистрофии нефроцитов извитых канальцев. Здесь же можно было видеть отек периваскулярных и перитубулярных пространств с одновременным набуханием стенки кровеносных сосудов и накоплением серозной жидкости в просвете капсулы Боумена-Шумлянского. В корковой зоне почек были выявлены нарушения гемодинамики в виде застойной гиперемии сосудов или обширных очагов кровоизлияний, в которых эритроциты находились в состоянии гемолиза и отмечено выпадение пигмента гемосидерина. Как признак воспалительного процесса в корковой зоне почек постоянно обнаруживались периваскулярные и перитубулярные полиморфноклеточные инфильтраты, состоящие преимущественно из лимфоидных клеток, нейтрофильных лейкоцитов и макрофагов, в извитых канальцах при этом были обнаружены конгломераты мочевого песка и камней. В мозговой зоне почек постоянным признаком было резкое расширение просвета прямых канальцев, одни из них были запустевшими, в других обнаружены белковые цилиндры. Перитубулярно просматривалось размножение' соединительно-тканных элементов, что характерно для хронического воспалительного процесса.

В лимфоидных органах - селезенке и лимфатических узлах в основном были выявлены гиперпластические процессы.

В легких основной патологический процесс обнаружен в бронхах в виде катарального бронхита и резко выраженной перибронхиальной полиморфноклеточной инфильтрации, состоящей преимущественно из клеток лейкоцитарной группы. Периваскулярно выявлены плотные полиморфноклеточные инфильтраты, а внутрисосудисто, наряду со сладжированием эритроцитов, также обнаруживались скопления лейкоцитов и макрофагов.

В миокарде всех исследуемых экспериментальных животных имели место различные расстройства гемодинамики в виде резкого расширения венозных кровеносных сосудов и формированием в них тромбов, разлитых и обширных очаговых кровоизлияний с выпадением гемосидерина.

При гистологическом исследовании семенников контрольных и опытных животных выявлены различные процессы. Если в семенниках контрольных незараженных животных обнаружены физиологические процессы спермиогенеза, то в семенниках экспериментальных самцов-крыс постоянно выявлялись изменения, характерные для серозного экссудативного воспаления.

При гистологическом исследовании семенников хряков, положительно реагирующих на хламидиоз в реакции связывания комплемента и реакции непрямой гемагглютинации, выявили комплекс патологических процессов связанных с нарушением спермиогенеза, а также дистрофические и склеротические изменения. У хряков контрольной' группы," при отрицательных серологических реакциях, после кастрации в семенниках были выявлены процессы физиологического спермиогенеза.

У хряков экспериментально-производственной группы в' интерстициальной зоне сёменников обнаружен очаговый некроз, и отложение солей извести в очагах некроза, в некоторых семенных канальцах также отмечены некротические процессы с последующим их обызвествлением. В межуточной соединительной ткани и непосредственно в стенке кровеносных сосудов наблюдается активная пролиферативная реакция, что делает стенку сосудов утолщенной, просвет их неправильной формы, эндотелиоциты принимают перпендикулярное положение к базальной мембране. Наряду с этим в интерстиции постоянно обнаруживался как периваскулярный, так и внутритканевой отек и разрыхление, что свидетельствует о повышении проницаемости сосудистых мембран, изменении РН среды в кислую сторону в связи с накоплением там кислых гликозаминогликанов. Непосредственно в канальцах были обнаружены изменения в клетках Сертолли, они или непропорционально делились, или соединялись в отдельные конгломераты (многоядерные симпласты), окрашенные гематоксилином базофильно. Одновременно с этим, у этого и у других хряков постоянно отмечались процессы ослабленного спермиогенеза, а клетки Лейдига при этом претерпевали разрушения по типу кариопикноза и кариолизиса.

При ультраструктурном изучении спермы среди массы хлопьевидного материала обнаружены ретикулярные тельца хламидий, которые имели различную форму: округлую, овальную, неправильную. Хламидии имели неравномерно плотную мембрану, ограничивающую мелкозернистый с фибриллярными структурами матрикс.

Наряду с известными образованиями встречались ретикулярные тельца по нескольку экземпляров в поле зрения, неопределенной формы с закругленными контурами, в цитоплазме .которых на фоне разрежения матрикса содержалось множество мелких шаровидных или овальных структур. Большая часть их была окружена плотной однослойной мембраной. Другая, меньшая часть имела трехслойную мембрану, состоявшую из двух темных слоев, разделенных светлым. Содержимое структур было аналогично цитоплазме больших хламидий. В одних хламидиях такие структуры занимали примерно, половину цитоплазмы, в других - полностью всю цитоплазму. Встречались структуры, которые имели более осмиофильную мембрану, и матрикс, располагались рядом с хламидией, соприкасаясь с её мембраной. Эти структуры можно идентифицировать как элементарные Тельца. Некоторые ретикулярные тельца были нафаршированы «дочерними» тельцами и в местах их

скоплений наблюдалась деструкция и лизис мембраны с выходом этих структур во внеклеточное пространство. У части ретикулярных форм видны вытянутые отростки, которые отпочковываются с образованием мелких телец.

Таким образом, можно предположить, что наличие массы «дочерних» образований в ретикулярных тельцах говорит об их репродукции в теле хламидий, а также происходит отпочковывание телец от «материнской» клетки.

Такая массивная репродукция, вероятно, зависит от выраженной метаболической активности ретикулярных форм, а сперма является элективной средой для данного процесса.

При электронно-микроскопическом изучении сперматозоидов наблюдалось разрежение и деформация ядра головки и шейки. Отмечалось нарушение клеточной оболочки по всему телу, которое выражалось в отслаивании, лизисе и обволакивании тела вокруг гомогенной массой.

ВЫВОДЫ

1. Впервые осуществлено изучение краевой эпизоотологии по хламидиозу свиней в условиях Пермской области, на базе которой установлен уровень максимальной и минимальной их инфицированности, что составляет соответственно 65,4% (1996 г.) и 9,1% (2000 г.).

2. Инфекционный процесс в организме спонтанно больных хламидиозом беременных свиноматок морфологически характеризуется развитием патологических, иммуноморфологических, аллергических и компенсаторно-приспособительных реакций в тканях плацентарного барьера, иммунокомпетентных и паренхиматозных органов.

3. Комплексными исследованиями, с использованием клинических, патоморфологических, микробиологических, гистологических, гистохимических, электронномикроскопических методов, у супоросных свиноматок установлен выраженный тропизм хламидий к тканям плацентарного барьера, обуславливающий в дальнейшем его проницаемость для хламидий полевого и вакцинного штаммов («Лори», «ЛС-87»).

4. Морфологические изменения, зарегистрированные в тканях плацентарного барьера спонтанно зараженных свиней, органах абортированных, мертворожденных и нежизнеспособных плодов характеризуются значительными повреждениями стенки сосудов микроциркуляторного русла, дистрофическими и некробиотическими процессами, что способствует сенсибилизации организма.

5. Выявление хламидий в тканях хориона, головном мозге и паренхиматозных органах у спонтанно и экспериментально зараженных животных свидетельствует о повышенной проницаемости плацентарного барьера для хламидий, генерализации инфекционного процесса у плодов и нарушении фетоплацентарных связей.

6. Клинически у свиноматок хламндиоз проявляется абортами в последние недели супоросности, рождением мертвых и нежизнеспособных поросят. У новорожденных поросят отмечаются признаки нарушения деятельности центральной нервной системы с развитием атаксии.

7. Выявленные при экспериментальном и спонтанном хламидиозе дистрофические, некробиотические процессы, поражение сосудистых мембран и эозинофильно-клеточные инфильтраты являются морфологической верификацией иммунопатологии в виде гиперчувствительности немедленного типа.

8. Сочетание гнойно-некротического процесса в матке, плаценте, хорионе и своеобразного «губчатого перерождения» в головном мозге, а также формирование гранулем в тканях плацентарного барьера патогномоничны для хламидийной инфекций- и могут служить морфологическим диагностическим тестом на хламидиоз.

9. Сравнительное изучение патоморфологии инфекционного процесса у экспериментально зараженных морских свинок патогенным штаммом хламидий после предварительной вакцинации и без нее указывает на приобретение стойкого иммунитета и предотвращение развития глубоких, необратимых изменений в организме иммунизированных беременных животных.

10. При экспериментальной хламидийной инфекции у крыс в системе «мать-плод» развивается комплекс патологических процессов, обусловленных инфекционно-токсическим воздействием хламидий на организм матери и плода. Наиболее значительные патологические изменения обнаруживаются в тканях беременной матки, независимо от того, кто из родителей был заражен, но усиление процессов отмечено при заражении обоих родителей.

11. Ультрамикроскопически установлена обсемененность спермы больных хряков хламидиями, которые вследствие их токсического, повреждающего действия вызывают структурные изменения в строении половых клеток.

12. Морфофункциональная система «мать-плацента-плод» является уникальным объектом и предлагается нами в качестве универсальной модели изучения патогенеза хламидиозов животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты исследований использованы при разработке практических рекомендаций, предложенных для практического использования, куда вошли:

• Мероприятия по диагностике хламидиоза свиней.

• Мероприятия по предупреждению возникновения хламидиоза свиней.

• Мероприятия по оздоровлению свиней от хламидиоза. Рекомендации одобрены и утверждены. Департаментом ветеринарии.

администрации Пермской области.

Создана коллекция гистологических препаратов по хламидиозу свиней для студентов 4 курса факультета ветеринарной медицины Пермской и Уральской государственной сельскохозяйственной академии.

Выпущено Учебное пособие с грифом Министерства сельского хозяйства с гистологическими и электронномнкроскопическими иллюстрациями патологического процесса при экспериментальном и спонтанном хламидиозе, которое может быть полезно как практическим ветеринарным специалистам, студентам ветеринарных факультетов, так и научным сотрудникам, занимающимся проблемами инфекционной патологии и хламидиоза в частности.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Н. Г. Махова, В. В. Шатохин, Н. А. Татарникова, В. И. Агеева, Л. В. Сычева. Система ведения животноводства АПК Пермской области.- Пермь, СПУ «МИГ», 2000. 82 с.

2. Л. И. Дроздова, Н. А. Татарникова, А. Е. Оборин. Морфология плацентарного барьера свиней при хламидиозе. /Материалы научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (часть 1), Казань, 2001. С. 134 - 135.

3. Л. И. Дроздова, Н. А. Татарникова. Морфология экспериментального хламидиоза крыс./ Актуальные вопросы ветеринарной медицины домашних животных. -Екатеринбург, 2001. С. 73 - 75.

4. Н. А. Татарникова. Морфология внутренних органов плода свиньи при хламидиозе. /Актуальные вопросы биологии, экологии и ветеринарной медицины домашних животных. - Тюмень, 2002. С. 112-113.

5. Н. А. Татарникова, А. А. Беккер, П. А. Былев, Л. Н. Шулепова. Эпизоотология хламидиоза животных в Пермской области. /Материалы десятого Московского международного ветеринарного конгресса (11 - 13 апреля 2002 года).- Москва, 2002. С. 257.

6. Н. А. Татарникова. Морфология печени крыс при экспериментальном хламидиозе.// «Животноводство и ветеринария в XXI веке: действительность и перспективы развития»/ Материалы международной научно-практической конференции (19- 21 сентября 2002г.).- Семипалатинск. С. 45 - 46.

7. Н. А. Татарникова, Л. И. Дроздова. Морфология плацентарного барьера свиней при хламидиозе в Пермской области /Ветеринария, 2002, № 8. С.22 -24.

8. Н. А. Татарникова. Клинико-эпизоотическое проявление хламидиоза свиней в Пермской области // Вюник аграрно! науки Причорномор'я/ Випуск 5(19).- Миколаев, 2002. С.174 -175.

9. Н. А. Татарникова, Л. И. Дроздова, Р. X. Хамадеев. Морфогенез экспериментального и поствакцинального хламидиоза у беременных морских свинок.//Новый взгляд на проблемы АПК /Конференция молодых ученых, декабрь 2002 года. - Тюмень, 2002. С.106 -108.

10. Н. А. Татарникова. Морфогенез плаценты при хламидиозе свиней. Там же, с. 108-109.

11. Н. А. Татарникова, О. В. Кочетова. Клиническая и патологоанатомическая картина хламидиоза свиней в свиноводческих хозяйствах Пермской области и Башкирии. //Актуальные вопросы ветеринарной медицины/ Материалы Российской научно-практической конференции (Новосибирск, 13-14 февраля 2003 года).- Новосибирск, 2003. С. 67-69.

12. Л. И. Дроздова, Н. А. Татарникова. Морфология гепато-ренальной системы свиней, мертворожденных и .абортированных плодов при хламидиозе.//Материалы 5 Всероссийской конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных».- Выпуск 5. -Екатеринбург. 2003. С. 129 -131.

13. Н. А. Татарникова, Л. И. Дроздова. Морфология гемато-энцефалического и плацентарного барьеров при хламидиозе у свиней. //Там же, с 131 - 134.

14. Н. А. Татарникова. Эпизоотические и эпидемиологические особенности хламидиоза в Пермской области.// Там же, с. 134 - 137.

15. Н. А. Татарникова. Клиническое проявление хламидиоза свиней в хозяйствах Пермской области.// Там же, с. 139 - 143.

16. Л. И. Дроздова, Н. А. Татарникова. Сравнительная морфология плацентарного барьера морских свинок при бруцеллезе и хламидиозе.//Материалы Международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса (часть 1).Казань. 2003. С. 43-45.

17. Н. А. Татарникова. Плацентарный барьер при хламидиозе.//Ветеринария, 2003. №6. С.20-24.

18. Н. А. Татарникова, Л. И. Дроздова. Роль плаценты в патогенезе хламидиоза свиней. //Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 17 -19 сентября). Москва, 2003. С. 127 -128.

19. Л. И. Дроздова, Н. А. Татарникова. Морфология и ультраструктура гемато-энцефалического барьера при экспериментальном хламидиозе/Гам же, с. 61- 62.

20. Л. И. Дроздова, Н. А. Татарникова. Морфология гисто-гематических барьеров при хламидиозе свиней.- Пермь, 205 с.

21. Н. А. Татарникова, Л. И. Дроздова. Патогенетические основы борьбы с хламидиозом свиней (методические рекомендации). Пермь, 2003.16 с.

нюпюгекх ;

I» эдд на ,

! !

Р167

)

Актуальность проблемы. Одним из главных факторов, решающих судьбу организма во внутриутробные периоды его жизни, является плацента. Структура плаценты находится в тесной связи с ее проницаемостью и является определенным ориентиром в познании сложнейших материнско-плодовых взаимоотношений. Заболевания матери нередко приводят к разнообразным изменениям в плаценте, нарушая ее строение и функцию, в связи с чем происходит снижение ее способности поддерживать адекватный обмен между организмом матери и плода. К числу этих заболеваний относится хла-мидиоз, который в последние годы все чаще регистрируется, как у животных, так и у человека. Поражение урогенитального тракта ведет к бесплодию, внутриутробной инфекции, обуславливая заболевания плода и новорожденного. Известно, что хламидии способны проникать через плацентарный барьер и инфицировать развивающиеся плоды. Тем не менее, общеизвестным фактом является и то, что в неблагополучных по хламидиозу хозяйствах рождаются жизнеспособные поросята, особенно у разовых свиноматок. В этой связи, выяснение роли плаценты в патогенезе заболевания является первоочередным для изучения патогенеза хламидиоза, выработки научно-обоснованного подхода к проведению оздоровительных мероприятий и значительного снижения экономических потерь, причиняемых данным заболеванием.

Цель и задачи исследований. Цель работы — изучить патоморфогенез хламидийной инфекции на функциональной системе «мать-плод» у свиней и выработать научно-обоснованную систему мероприятий по борьбе с данной инфекцией.

Задачи исследования:

1. Изучить эпизоотологическую обстановку по хламидиозу животных в Пермской области.

2. Выяснить особенности течения хламидиоза в системе «мать-плод» на экспериментальных животных и установить роль плаценты в патогенезе хламидиоза.

3. Изучить морфологическое проявление вакцинного процесса у экспериментальных животных, зараженных хламидиями.

4. Изучить морфологические и ультраструктурные изменения в органах и тканях свиней при спонтанном хламидиозе.

5. Выяснить роль самцов в распространении хламидийной инфекции.

Работа выполнена на базе кафедр анатомии и гистологии УрГСХА, инфекционных болезней ПГСХА, часть исследований выполнена в лаборатории риккетсий и хламидий НПО «Биомед» г. Пермь, в хозяйствах Пермской области и свинокомплексе «Рощинский» республики Башкортостан.

Исследования проведены в рамках программы «Морфология гисто-гематических барьеров в норме и при разных видах воздействия на организм животных», № государственной регистрации 01960 013289 и «Безопасность и контроль за качеством сельскохозяйственного сырья и пищевых продуктов в экологических условиях Среднего Урала», № государственной регистрации 01200 208408.

В работе использованы материалы статистической отчетности Управления ветеринарии при департаменте сельского хозяйства Пермской области. Научная новизна работы. Нами проведены серологические, морфологические и электронно-микроскопические исследования на функциональной системе мать-плод, применительно к свиньям и в эксперименте на беременных крысах, морских свинках и их потомстве. Установлены основные закономерности развития патоморфологических и ультраструктурных изменений в органах и тканях свиноматок, хряков, поросят разного возраста, абортированных и мертворожденных плодов при спонтанном хламидиозе; у крыс, морских свинок и их плодов при экспериментальном хламидиозе в системе мать-плацента-плод». Определены патоморфологические признаки хлами-диоза для проведения его дифференциальной диагностики. Изучено морфологическое проявление вакцинного процесса у беременных морских свинок, зараженных вирулентной культурой хламидий. Электронномикроскопически установлено, что морфологические изменения после заражения предварительно вакцинированных экспериментальных животных проявляются воспалением на иммунной основе с оседанием в стенке сосудов повреждающих иммунных комплексов.

Установлена роль хряков в патогенезе хламидиоза. Впервые при электромикроскопическом исследовании спермы хряков были обнаружены ретикулярные тельца хламидий в фазе их активного размножения, что дает нам основание считать хряков основным передающим звеном во всей патогенетической цепи инфекционного хламидийного процесса.

Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований позволили разработать и издать:

1. Методические рекомендации «Патогенетические основы борьбы с хламидиозом свиней», Пермь, 2003, 16 с. Рекомендации утверждены департаментом ветеринарии администрации Пермской области 17 марта 2003 года.

2. Учебное пособие «Морфология гисто-гематических барьеров при хламидиозе свиней», Пермь, 2003, 205 с. Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по специальности 310800 - «Ветеринария», 15 апреля 2003 года №27-5-33/864.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Хламидии вакцинного и полевого штамма проникают через плацентарный, гемато-энцефалический и тестикулярный барьеры свиней, экспериментальных морских свинок и крыс и вызывают в организме этих животных инфекционно-токсический процесс.

2. Хламидии обуславливают нарушение фетоплацентарных связей, гибель плодов, их отторжение и развитие патологических процессов в органах и тканях мертворожденных и новорожденных, исследованных нами сельскохозяйственных и лабораторных животных.

3. Наличие ретикулярных телец хламидий, выявленных различными методами исследований (микробиологический, гистологический, электронно-микроскопический) в тканях плацентарного барьера свиней и беременных лабораторных животных, в тканях мозга у абортированных плодов и мертворожденных является показателем генерализации процесса, как при спонтанном, так и экспериментальном хламидиозе.

4. Функциональная система «мать-плод» является универсальной моделью для изучения хламидиоза.

5. Размножение хламидий в сперме хряков является одним из основных патогенетических звеньев хламидиоза, и сперма служит основным передаточным звеном в развитии инфекционного процесса.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных научных конференциях ПГСХА (19972003 г.г.); областном научно-производственном совещании по племенной работе (27 марта 2003); научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2001); IV научной конференции по актуальным вопросам ветеринарной медицины мелких домашних животных (Екатеринбург,2001); научной конференции по актуальным вопросам биологии, экологии и ветеринарной медицины домашних животных (Тюмень, 2002); международной научно-практической конференции «Животноводство и ветеринария в XXI веке: действительность и перспективы развития» (Семипалатинск, 2002); научной конференции «Новый взгляд на проблемы АПК» (Тюмень, 2002); V Всероссийской конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Екатеринбург, 2003); Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2003), Всероссийской научно-методической конференции по морфологии животных (Уфа, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликована 21 работа. В журнале «Ветеринария» - 2; в материалах межвузовских, Всероссийских, Международных конференций - 16. Издана одна методическая рекомендация, одно методическое пособие с грифом Министерства сельского хозяйства Российской Федерации, объемом 13 печатных листов. 205 страниц.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 276 страницах текста компьютерной верстки. Состоит из введения, обзора литературы, описания результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 358 источников, из которых 174 иностранных. Работа иллюстрирована 3 таблицами и 196 рисунками.

выводы

1. Впервые осуществлено изучение краевой эпизоотологии по хламидиозу свиней в условиях Пермской области, на базе которой установлен уровень максимальной и минимальной их инфицированности, что составляет соответственно 65,4% (1996 г.) и 9,1% (2000 г.).

2. Инфекционный процесс в организме спонтанно больных хламидиозом беременных свиноматок морфологически характеризуется развитием патологических, иммуноморфологических, аллергических и компенсаторно-приспособительных реакций в тканях плацентарного барьера, иммунокомпетентных и паренхиматозных органов.

3. Комплексными исследованиями, с использованием клинических, патоморфологических, микробиологических, гистологических, гистохимических, электронномикроскопических методов, у супоросных свиноматок установлен выраженный тропизм хламидий к тканям плацентарного барьера, обуславливающий в дальнейшем его проницаемость для хламидий полевого и вакцинного штаммов («Лори», «ЛС-87»).

4. Морфологические изменения, зарегистрированные в тканях плацентарного барьера спонтанно зараженных свиней, органах абортированных, мертворожденных и нежизнеспособных плодов характеризуются значительными повреждениями стенки сосудов микроциркуляторного русла, дистрофическими и некробиотическими процессами, что способствует сенсибилизации организма.

5. Выявление хламидий в тканях хориона, головном мозге и паренхиматозных органах у спонтанно и экспериментально зараженных животных свидетельствует о повышенной проницаемости плацентарного барьера для хламидий, генерализации инфекционного процесса у плодов и нарушении фетоплацентарных связей.

6. Клинически у свиноматок хламидиоз проявляется абортами в последние недели супоросности, рождением мертвых и нежизнеспособных поросят. У новорожденных поросят отмечаются признаки нарушения деятельности центральной нервной системы с развитием атаксии.

7. Выявленные при экспериментальном и спонтанном хламидиозе дистрофические, некробиотические процессы, поражение сосудистых мембран и эозинофильно-клеточные инфильтраты являются морфологической верификацией иммунопатологии в виде гиперчувствительности немедленного типа.

8. Сочетание гнойно-некротического процесса в матке, плаценте, хорионе и своеобразного «губчатого перерождения» в головном мозге, а также формирование гранулем в тканях плацентарного барьера патогномоничны для хламидийной инфекции и могут служить морфологическим диагностическим тестом на хламидиоз.

9. Сравнительное изучение патоморфологии инфекционного процесса у экспериментально зараженных морских свинок патогенным штаммом хламидий после предварительной вакцинации и без нее указывает на приобретение стойкого иммунитета и предотвращение развития глубоких, необратимых изменений в организме иммунизированных беременных животных.

10. При экспериментальной хламидийной инфекции у крыс в системе «мать-плод» развивается комплекс патологических процессов, обусловленных инфекционно-токсическим воздействием хламидий на организм матери и плода. Наиболее значительные патологические изменения обнаруживаются в тканях беременной матки, независимо от того, кто из родителей был заражен, но усиление процессов отмечено при заражении обоих родителей.

11. Ультрамикроскопически установлена обсемененность спермы больных хряков хламидиями, которые вследствие их токсического, повреждающего действия вызывают структурные изменения в строении половых клеток.

12. Морфофункциональная система «мать-плацента-плод» является уникальным объектом и предлагается нами в качестве универсальной модели изучения патогенеза хламидиозов животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ

1.Мероприятия по диагностике хламидиоза свиней

1.1. Хламидиоз свиней диагностируют на основании эпизоотологических данных:

1.1.1.наличие источника инфекции и многолетнее хроническое течение хламидиоза среди различных половозрастных групп животных неблагополучного хозяйства после заноса возбудителя и первичного клинического переболевания;

1.1.2.многообразие форм передачи и путей заноса возбудителя хламидиоза: хламидии передаются как вертикально - от матери к плоду, так и горизонтально - через респираторные и пищеварительные органы, а также через контаминированную хламидиями пыль и сперму;

1.1.3.различные клинические формы проявления хламидиоза в неблагополучных хозяйствах: от спорадических до массовых абортов, мертворождений, вагинитов и менингоэнцефалитов, сопровождающихся гибелью животных, а также в виде массовых пневмоний, энтеритов, конъюнктивитов у молодняка;

1.1.4.участие в этиологии заболевания животных штаммов хламидий, обладающих разными биологическими свойствами, которые часто не имеют перекрестного иммунитета и вызывают у животных в одних неблагополучных хозяйствах преимущественно аборты, пневмонии и энтериты, в других - менингоэнцефалиты и конъюнктивиты, в третьих -полиартриты и другие симптомы болезни;

1.1.5.формирование у животных в результате клинического или латентного переболевания хламидиозом достаточно напряженного противохламидийного иммунитета, обусловливающего в неблагополучных хозяйствах снижение уровня заболеваемости животных в начальном периоде развития эпизоотического процесса;

1.1.6.периодические с интервалом 4-7 лет обострения течения хламидийной инфекции в неблагополучных хозяйствах, связанные с выбытием иммунных животных и снижением группового противохламидийного иммунитета, которая проявляется увеличением количества абортов и мертворождений у маток, пневмоэнтеритов, конъюнктивитов и полиартритов у молодняка и повышение уровня серопозитивности животных к возбудителю хламидиоза.

Выяснение эпизоотической ситуации осуществлять путем ретроспективного анализа архивных материалов, отчетных данных СББЖ и ветеринарных лабораторий, а также собственных эпизоотических обследований неблагополучных ферм, хозяйств и районов. 1.2.Хламидиоз свиней диагностируют на основании лабораторных исследований

1.2.1.Микроскопическое обнаружение хламидий - размеры морфологических форм возбудителя позволяют обнаружить их при обычной световой микроскопии под иммерсионной системой. Окраску препаратов проводят различными методами, но лучше всего хламидии дифференцируются от клеточных структур и других микроорганизмов по модифированному методу Стемпа с использованием карбол-фуксина и по Романовскому-Гимзе.

Готовят мазки - отпечатки прикладыванием хорошо обезжиренного предметного стекла к поверхности исследуемых органов. Затем их просушивают, фиксируют и окрашивают.

1.2.2.Выделение возбудителя на различных биологических моделях.

1.2.3.Выявление нарастания специфических антител в серологических реакциях (РСК, РИГА, ИФА).

1.3.Для исследования на хламидиоз в ветеринарные лаборатории направляют патологический материал от павших или вынужденно убитых и абортировавших животных: кусочки паренхиматозных органов, лимфатических узлов, семенников, пораженной плаценты и влагалищные выделения, пробы эякулята не менее 1 мл или замороженной спермы не менее 4 гранул, сыворотку крови в объеме 3-5 мл. Отобранный материал упаковывают во влагонепроницаемую тару и в течение 24 часов доставляют в лабораторию. Учитывая, что хламидии инактивируются при высокой температуре, материал транспортируют в замороженном или охлажденном виде в герметически закрытой посуде. Лабораторные исследования осуществляют согласно «Методических указаний по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных», утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 30 июня 1999 г.

2.Мероприятия по предупреждению возникновения хламидиоза свиней

2.1.Запретить ввод (ввоз) животных из пунктов, неблагополучных по хламидийной инфекции.

2.2.Комплектование стада производить только здоровыми животными из собственных племенных репродукторов или закрепленных хозяйств -поставщиков благополучных по инфекционным болезням.

2.2.1.Свиней, предназначенных на племенные цели и для ремонта маточного стада товарных репродукторов, за месяц до вывоза карантинируют.

2.2.2,Отбор свиней, подлежащих ввозу на комплекс, осуществляют зооветспециалисты комплекса.

2.2.3 .Перевозят свиней специально оборудованным транспортом комплекса.

2.2.4.Всех животных, поступающих на комплекс, клинически осматривают и проводят термометрию.

2.2.5.Принятое поголовье свиней карантинируют 30 дней с закреплением отдельного персонала по уходу за ними.

2.2.6.В период карантина запрещается перегруппировка поголовья.

2.2.7.После освобождения карантинного помещения проводят его дезинфекцию.

2.2.8.Перевод животных из карантина разрешен по специальному указанию главного ветврача.

2.2.9.Свиней, доставленных на комплекс из собственного репродуктора подвергают санитарной обработке и помещают в секции для содержания ремонтных свинок.

2.3.9.Для обеспечения технологического процесса в производственной зоне необходимо выделить специальный внутрифермский транспорт.

2.3.10.Животных подлежащих убою, перевозят на бойню специальным транспортом.

2.3.11.Туши от вынужденно убитых подвергают бактериологическому исследованию.

2.4.Строгое соблюдение технологии ведения свиноводства:

2.4.1.Обеспечение работы по принципу «все занято - все свободно» с продолжительностью санитарного перерыва между технологическими циклами производства не менее 5 суток.

2.4.2.Для кормления использовать доброкачественные, сбалансированные по питательности, минеральным добавкам и витаминам корма.

2.4.3.В цехе репродукции во время опросов маток установить влагонепроницаемые емкости для сбора последов и мертворожденных плодов.

2.4.4.Осуществлять диспансеризацию маточного поголовья. Вести регистрацию всех случаев абортов, преждевременных родов, рождения слабого и нежизнеспособного приплода. Абортировавших свиноматок обследуют лабораторными методами. Хряков - производителей 2 раза в год исследовать на хламидиоз. С серопозитивными животными поступать согласно пункта 3.3. настоящей инструкции.

З.Мероприятия по оздоровлению свиней от хламидиоза

3.1.При установлении диагноза на хламидиоз свиней хозяйство (ферму) объявляют неблагополучной по этой болезни, в нем вводят ограничения по этой болезни и проводят мероприятия по оздоровлению по плану, утвержденному руководителем хозяйства.

3.2.Следят за соблюдением режима предприятия закрытого типа. По условиям ограничений запрещают ввоз в хозяйство (на ферму) и вывоз свиней в другие хозяйства, перегруппировку неблагополучного свинопоголовья, а также посещение неблагополучной фермы лицами, не связанными с обслуживанием животных.

3.3. Убивают положительно реагирующих по серологии хряков производителей и клинически больных свиноматок.

3.4. Для специфической профилактики болезни в хозяйстве все возрастные группы свиней подвергают профилактической вакцинации против хламидиоза животных. Животных иммунизируют согласно наставлению по применению вакцины. Серонегативных хряков-производителей вакцинируют 2 раза в год с интервалом 6 месяцев; клинически здоровых свиноматок и ремонтных свинок вакцинируют за 21 -28 дней до осеменения или случки; молодняк вакцинируют в возрасте 3-6 месяцев. Вакцинацию животных против хламидиоза проводят в течение 3 лет до полного оздоровления хозяйства.

3.5. Перед вакцинацией животных подозрительных по заболеванию подвергают стерилизации антибиотиками тетрациклинового ряда: скармливают групповым методом биовит 40, 80,120 в дозе 5 мг (чистого хлортетрациклина) на 1 кг массы в течение 10 дней или окситетрациклина гидрохлорид грунулированный в дозе 25 — 30 мг на 1 кг массы тела с интервалом 12 часов в течение 5-6 дней; окситетрациклина гидрохлорид в/м через 12 часов в дозе 7000 ЕД на 1 кг массы животного в течение 7 суток или макролидов.

3.6.Поголовье свиней, подвергнутое профилактической вакцинации против хламидиоза, не подлежит исследованию на хламидиоз с диагностической целью. 4 раза в год цитологическим методом исследуют сперму хряков- производителей на наличие хламидиий, окрашивая ее по методу Павловского. У родивших свиноматок на 1-3 дни после родов исследуют цитологическими методами влагалищную слизь. При обнаружении хламидий поступают согласно пункта 3.3. этой инструкции.

3.7.Животных на убой вывозить на специально оборудованном транспорте.

3.8. Проводить санитарные дни на ферме 1 раз в месяц. Абортированные плоды, плодные оболочки, трупы собирают во влагонепроницаемую тару, а затем вывозят в отведенные места для утилизации.

3.9.Текущуюю дезинфекцию осуществляют: горячим (80 градусов) 3% -ным или холодным (20 градусов) 4%- ным раствором едкого натрия; 2% хлорамина.

3.10. Навоз обеззараживают биотермически.

3.11.ВСЭ производят согласно действующим правилам.

3.12.Лицам, занятым на прямом производстве, необходимо дважды в год проходить обследование на хламидиоз и соблюдать правила личной гигиены.

3.13.Ограничения снимают через 30 дней после выздоровления больных (прекращение абортов, мертворождений и других клинических признаков болезни) и проведения заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Актуальность выбранной нами темы исследования определяется тем, что хламидиоз является антропозоонозным заболеванием и представляет серьезную угрозу не только для животных, но и для человека. Основная опасность болезни заключается в том, что возбудитель способен к внутриклеточному паразитированию и длительной персистенции в живом организме. У человека и животных хламидии вызывают аборты, рождение ^ мертвого и нежизнеспособного потомства. Родившиеся живыми отстают в развитии, у них развиваются клинические признаки поражения нервной и других систем организма. Решение проблемы сохранения здорового приплода связано с глубоким и всесторонним изучением внутриутробного развития животного. Беременность является одним из загадочных феноменов иммунологии репродукции. Воспроизводство потомства стоит на одном из первых мест в иерархии жизненно важных функций млекопитающих 0 (Ширшев С. В., 2002). Общепризнано структурно-функциональное единство системы «мать-плацента-плод», поэтому оценка состояния плаценты позволяет понять механизм различных нарушений, возникающих в организме антенатального периода развития, что и объясняет пристальное внимание исследователей к этому провизорному органу.

Высокая чувствительность организма антенатального периода к действию различных неблагоприятных факторов, в том числе хламидии, • обуславливает необходимость всестороннего и углубленного изучения влияния этих микроорганизмов на систему «мать-плацента-плод».

Барьерная функция плаценты проявляется только в физиологических условиях. При воздействии патологических факторов она нарушается, и плацента становится проницаемой для таких веществ, которые в обычных условиях через нее не проходят.

Доказательством прохождения хламидий из организма матери в ® организм плода является обнаружение их в плаценте.

При ультрамикроскопическом исследовании тканей плацентарного барьера крыс, зараженных культурой хламидий (штамм Лори), установили, что основным местом пребывания хламидий были эндотелиальные клетки кровеносных сосудов материнской части плаценты.

Известно, что слой эндотелиальных клеток внутри кровеносных # сосудов формирует полупроницаемый динамический барьер между содержимым сосудов и окружающими их тканями. Эндотелиальные клетки в норме плотно прилегают друг к другу и слабо взаимодействую с клетками, циркулирующими в крови; исключение составляет эндотелий специальных сосудов, например эндотелий венул лимфатических узлов. Воспалительные цитокины, вирусы и факторы роста, влияющие на свойства эндотелиальных клеток, могут изменять барьерные функции эндотелия, нарушая изоляцию ® между плазмой крови и интерстициальной жидкостью ткани (Богачева Н. В. и соавт., 2002). Среди прочих патологических агентов, приводящих к дисфункции эпителия, хламидии занимают особое место.

В эндотелиальных клетках кровеносных сосудов материнской части плаценты нами были обнаружены процессы активного размножения хламидий с образованием элементарных и инициальных телец и сосредоточением их как в стенке капилляров, так и в перикапиллярных ^ пространствах. Наряду с этим, в стенке кровеносных сосудов постоянно обнаруживались конгломераты иммунных комплексов антиген-антитело, при этом, проницаемость капилляров резко повышалась и перикапиллярно происходило накопление коллагена.

Патогенные механизмы воздействия хламидий на сосудистую стенку представляются следующими. Микроорганизм содержит, по крайне мере, три ^ белка теплового шока (heat shock proteins, Hsp), которые синтезируются в клетках всех организмов в ответ на температуры выше оптимальной. Белки теплового шока необходимы для защиты клеток от теплового повреждения и нормализации функций клетки после прекращения теплового воздействия (Курганов Б. И., 2002). Многие молекулярные шапероны известны как белки теплового шока, которые обладают антигенными свойствами и стимулируют клеточный иммунологический ответ (Ward М. Е., 1995). Данный белок играет важную роль в иммунопатогенезе персистирующей инфекции и поддержании постоянной воспалительной реакции. Белок теплового шока ведет: а) к антигенной перегрузке организма и запуску вторичного гуморального ответа с гиперпродукцией IgG и IgA; б) к активации реакции гиперчувствительности замедленного типа, обусловливая инфильтрацию слизистых оболочек лимфоцитами и моноцитами; в) к стимуляции запуска аутоиммунного перекрестного ответа, так как является подобием белков эукариот; г) к эффекту теплового шока у клетки-хозяина, стимуляции развития стресс-реакции у микроорганизма, проявлением которой является остановка клеточного цикла на стадии РТ (Koehler L. et al.,1994; Nettelnbreker E. et al.,1994; WardM. E., 1996).

Бактерия способна персистировать и размножаться в макрофагах, гладкомышечных и эндотелиальных клетках, стимулируя продукцию цитокинов, в том числе фактора некроза опухолей и интерлейкина-1 (Ward М. Е., 1995). Как большинство грамотрицательных бактерий, хламидии имеют в своем составе липополисахариды, являющиеся основным компонентом клеточной мембраны. Эти липополисахариды образуют с антителами макроорганизма циркулирующие иммунные комплексы. Иммунные комплексы депонируются в сосудистой стенке, вызывая местное воспаление и прокоагулянтные изменения (Linnanmaki Е. et al., 1993).

Согласно современным представлениям, отложения в стенке сосудов микроциркуляторного русла комплементарно связанных иммунных комплексов (антиген+антитело) составляют основную причину сосудистых и тканевых поражений, обусловленных аллергическими реакциями организма. Под их влиянием активизируется система комплемента, а это в свою очередь, вызывает хемотаксис и скопление полиморфноядерных лейкоцитов, приводящих к освобождению повреждающих компонентов — медиаторов воспаления (Серов В. В. и соавт., 1981; Мо1ас1 а1., 1994).

Повреждающее действие иммунных комплексов проявляется в двух направлениях: во-первых, они выступают как индукторы воспаления, действующие локально; во-вторых, они обладают способностью блокировать иммунологические эффекторные механизмы. Разнообразие иммунопатологических реакций, индуцируемых иммунными комплексами (ИК), определяют условия, от которых зависит преобладание реакций ГНТ или ГЗТ в момент того или иного заболевания. В. В. Серов (1981) среди этих условий главным считает особенности самого ИК, прежде всего в отношении содержания комплемента количественного соотношения антитела с антигеном (при избытке антигена наступает ГНТ, а при избытке антител ГЗТ), а также продолжительности антигенной стимуляции, то есть персистенции РЖ. Следовательно, выявленные нами электронной микроскопией РЖ в стенках сосудов микроциркуляторного русла приводят к изменениям сосудистой проницаемости, а также подавлению иммунологических механизмов защиты, дают право утверждать об участии ГЗТ в качестве одного из важнейших патогенетических факторов в развитии хламидиозной инфекции.

Сосредоточение хламидий в стенке капилляров приводит к гипертрофии эндотелиальных клеток, что особенно заметно в мелких сосудах. Часть эндотелиоцитов слущивается в просвет сосудов и, разрушаясь, способствует дополнительной генерализации инфекции по организму. Другие же сохраняются и даже увеличивают синтез гликогена. Однако гипергликемия клеток вызывает снижение в них образования N0 (окись ^ азота) как за счет ингибирования NO-синтаз, так и за счет снижения их экспрессии. При этом низкий уровень оксида азота приводит к повышению тонуса сосудов, свертываемости крови и снижению иммунитета (Серая И. П., Нарциссов Я. Р., 2002). В организме повышается выработка простагландинов - вазоконстрикторов, гликолизированных белков, молекул адгезии эндотелия и факторов роста тромбоцитов. В сумме, это повышает проницаемость сосудов, способствуя ускорению слущивания клеток в капиллярах, ослаблению связей между клетками, усилению адгезивных свойств эндотелиоцитов с миграцией через него различных клеточных элементов из крови в ткани и выработке ими коллагена IV и фибронектина (Paston L., Taylor Р. D., 1995). В результате этого происходит нарушение проницаемости сосудов, способствуя дополнительному выходу из крови в ткани различных компонентов крови, и в конечном итоге образованию тромбов. ф Усиление данных процессов свидетельствует о том, что возбудители хламидиоза приобретают более выгодные условия их адгезирования к эндотелию, используя при этом его углеводные компоненты, что дает возможность к дальнейшему пересеву патогенна на другие эндотелиоциты, не подвергнутые инфицированию. При этом нарушение функции эндотелия приводит не только к развитию тромбоза сосудов, но и склеротических изменений последних. Склерозированию стенки сосудов способствует и Ф выработка эндотелием коллагена (Сорокин Е. В., Карпов Ю. А., 2001).

Макрофагальная реакция тканей матки и плаценты, больных хламидиозом свиноматок и экспериментально зараженных животных, была достаточно сильно выражена, причем в их цитоплазме обнаружены в основном инициальные тельца, которые считаются не патогенными, тем не менее, структура макрофагов была настолько сильно повреждена, что в ф основном можно было видеть погибшие по типу пикноза макрофаги.

Известно, что макрофаги составляют вторую по численности ^ популяцию иммунокомпетентных клеток в децидуальной оболочке (около

20%). Макрофаги представляют собой естественные резидентные клетки матки и плаценты (Hunt J. S.,1989). Этими клетками богаты децидуальная и фиброзная ткани, непосредственно прилегающие к плаценте (Bulmer J.N., Johson P. М., 1984). Популяция фетальных макрофагов находится в экстраплацентарных мембранах между мезенхимальной стромой амниона и хориона (Lessin D. L. et al.,1988), а также в ассоциации с мембранами желточного мешка (Wood G. W., 1980 ).

Их роль в иммунных реакциях трудно переоценить. Макрофаги продуцируют более ста биологически активных веществ или цитокинов, которые регулируют функции практически всех систем организма (Зубова С. Г., Окулов В. Б., 2001). Участвуя в поддержании иммунного гомеостаза и координируя иммунные реакции в системе мать-плод, макрофаги ф децидуальной оболочки обладают более выраженной супрессорной активностью, чем макрофаги других тканей. Кроме того, в децидуальной оболочке отсутствуют B-лимфоциты, поэтому макрофаги играют основную роль в защите от инфекций (Березовский Ю. С., 2001).

Макрофаги являются основным депо антигена в организме, в них антиген превращается в пригодную для восприятия лимфоцитами форму и может сохраняться в макрофагах в таком состоянии годами (Учитель И. Я., 1970). Антиген, связанный с макрофагами, способен вызывать не только первичный, вторичный ответы, но и гиперчувствительность замедленного темпа (Unanue J., Feldman F., 1971). Продуцируя монокины, макрофаги регулируют защитные реакции и участвуют в развитии специфического иммунитета. Хламидии поглощаются периферическими моноцитами и, таким образом, происходит их распространение по всему организму. Моноциты Ф оседают в тканях и превращаются в тканевые макрофаги. Тканевые макрофаги могут сохранять жизнеспособность в течение нескольких месяцев до года и более (Маянский Д.Н., 1981). Являясь при этом антигенными стимуляторами^ они способствуют образованию фиброзных гранулем в здоровой ткани.

В наших исследованиях при просмотре препаратов плаценты в местах расположения скоплений макрофагов происходило накопление массы грубого белкового субстрата, который имел своеобразную сетчатую структуру. Макроскопически в тканях плацентарного барьера так же как при бруцеллезе, туберкулезе были выявлены беловатые образования типа гранулем, но при гистологическом исследовании, обнаружена их грубая «губчатая» структура, что было выявлено только при поражении плаценты хламидиями.

Наиболее эффективно защищает от распространения инфекции очаг хронического воспаления, или гранулема, - проявление раздражения СМФ, результат усиленной миграции моноцитов из костного мозга в кровь, а оттуда на периферию, в те места, где повышена концентрация хемотоксинов, источником которых служат, прежде всего, сами активированные макрофаги. С точки зрения диалектики гранулемы следует рассматривать не только как патологический процесс в банальном смысле, нарушающей структуру и функцию органа, но и как своеобразный инструмент резистентности к инфекции (Маянский А. Н., Маянский Д. Н., 1989).

Образование гранулем свидетельствует о высоких защитных силах организма, в этом случае патологический процесс сосредотачивается на ограниченных территориях, идет борьба макро- и микроорганизма - сложный процесс становления клеточного иммунитета (Дроздова Л. И., 1995).

При гистологическом исследовании тканей плацентарного барьера по характеру инфильтрации было выделено две стадии развития патологического процесса. В первую стадию, которая зарегистрирована у вынужденно убитых свиноматок, во всех случаях была отмечена активная ® нейтрофильно-клеточная инфильтрация, которая в виде рассеянных или плотных инфильтратов располагалась периваекулярно и непосредственно в просвете кровеносных сосудов ткани материнской части плаценты. Макрофагальная реакция в данный период была слабо выражена. Одновременно с этим, в зоне контакта появлялись очаги некроза эпителия слизистой оболочки матки и эпителия хориона по типу лизиса и пикноза.

Ф Вторая стадия, выявленная у абортировавших свиноматок, характеризовалась сменой клеточной инфильтрации в сторону преобладания лимфоидно-ютеточной, причем в основном это были большие лимфоциты. По данным ряда исследователей (Вард M. Е., 1996; Ward M. Е.,1996; Su H.,Caldwell H. О.,1995; Thomas M. et al.,1996; Ghaem-Maghami S. et al., 1996) иммунный ответ при хламидийной инфекции носит преимущественно Т1-хелперный характер (в работах, демонстрирующих активацию одновременно # и Т1 и Т2-хелперного звена при хламидийной инфекции in vivo подчеркивается ведущая роль Т-хелперного ответа) и ему принадлежит решающая роль в выздоровлении.

Продуктами активации Т-хелперного звена являются: а) интерлейкин-2 (ИЛ-2) - истинный Т-клеточный лимфокин (индуктор), стимулирующий пролиферацию клонов Т-клеток; б) фактор некроза опухоли-р (ФИО- 3); этот лимфотоксин стимулирует рост диплоидных фибробластов, приводя к повышению продукции гликозоаминогликанов, коллагена и белков основного вещества соединительной ткани, способствуя фиброобразованию. Пролиферацию фибробластов также активирует интерлейкин-1 (ИЛ-1), вырабатываемый активированными макрофагами (Thomas M. et al., 1996).

При исследовании тканей плацентарного барьера абортировавших свиноматок нами обнаружены единичные плазмобласты, и довольно Ф значительное количество эозинофилов и макрофагов. У этих животных зарегистрировано резкое изменение стенки кровеносных сосудов в виде мукоидного и фибриноидного набухания, пролиферации эндотелиоцитов, отложение гликозоаминогликанов как в самой стенке, так и в разрыхленной соединительной ткани, что подтверждает, приведенные выше, данные, полученные другими учеными.

Электронномикроскопически в стенке сосудов этой зоны постоянно обнаруживались конгломераты иммунных комплексов антиген-антитело. Кроме того, соединения клеток эпителия вместо десмосомальных переходили в соединения типа «слипания», что характерно для адгезии клеток эпителия в месте контакта детской и материнской плацент.

У свиноматок при повторной беременности усиливались эти процессы, что связано с сенсибилизацией, показателем которой являлась прогрессирующая эозинофилия и очаговые некрозы тканей плацентарного барьера.

Хламидиозный плацентит сопровождался хронической недостаточностью плаценты, обусловленной наличием большого количества фибриноида, тромбозом интервиллезного пространства, массивным кальцинозом.

Ультраструктурные изменения подтвердили результаты гистологических исследований и характеризовались явлениями деструкции, отека, дискомплексации ткани органа и обнаружением в матке свиньи хламидий.

Возбудитель заболевания, проявляя тропизм к репродуктивной системе, у супоросных свиноматок преодолевает плацентарный барьер, вызывает заболевание плодов, вследствие чего часть их погибает в утробе матери. Доказательством этому являются результаты наших исследований, проведенных в хозяйствах Пермской области и на свинокомплексе «Рощинский» республики Башкоркостан. Основными клиническими признаками хламидиоза у свиноматок являются аборты во второй половине ^ беременности и рождение мертвых или нежизнеспособных поросят, что объясняется более глубокими и тяжелыми поражениями, связанными с внутриутробной инфекцией плода и развитием патологических процессов во внутренних органах. У абортированных плодов наблюдали отеки подкожной клетчатки в области подгрудка и живота, которые приобретали вид студнеподобного инфильтрата. Кожа в области головы и конечностей синюшна, в грудной и брюшной полости скопление жидкости красноватого цвета.

У мертворожденных поросят и абортированных плодов гистологические изменения обнаружены во всех исследуемых паренхиматозных органах и тканях. Они представлены дистрофическими и некробиотическими процессами, что подтверждает трансплацентарное токсикогенное воздействие хламидий на организм развивающегося плода, ф вследствие чего в нем развивается инфекционный патологический процесс.

В настоящее время исследователи считают, что в поддержании системы мать-плод играет роль не только организм матери, но и плода. Развивающаяся система иммуногенеза у плода проявляет способность осуществлять иммунологические реакции и именно в этот период онтогенеза появляется механизм распознавания своих и чужеродных антигенов. Иммунная система плода функционирует в сложной ситуации. С одной стороны, она обеспечивает внутренний гомеостаз самого плода, с другой стороны, будучи еще не зрелой, но подвергающейся антигенному воздействию организма матери, она должна быстро адаптироваться и реагировать на эти воздействия (Хлыстова 3. С. и др., 2002). В этом отношении особую опасность представляет внутриутробная инфекция со стороны организма матери в антенатальный период развития плода, когда его ф иммунная система не достигает окончательной зрелости и в таком состоянии не может справиться с повышенной антигенной нагрузкой (атакой) со стороны организма матери.

Судя по морфологическим изменениям лимфоидных органов (гипоплазия лимфоидных фолликулов селезенки, лимфатических узлов, разрушение телец Гассаля в тимусе), в начальной стадии хламидиоза у плодов развивается иммунодефицитное состояние. На этом фоне у них возникает генерализованная хламидийная инфекция с повреждением гемато-^ тканевых барьеров. Надо полагать, что в развитии иммунодефицитного состояния при хламидиозе определенное значение имеют изменения клеточной кинетики, нарушения функции макрофагально-гистиоцитарной системы. Хламидии обнаружены нами в цитоплазме макрофагов лимфатических узлов, селезенки, пораженных органов, а также в эпителиоретикулоцитах тимуса. Под патогенным действием хламидий указанные клетки и органы часто подвергнуты тяжелым дистрофическим изменениям.

Особо хотелось бы остановиться на проникновении хламидий через гемато-энцефалический барьер. Гемато-энцефалический барьер всегда был в медицине и ветеринарии предметом многочисленных экспериментов и клинических исследований и до сих пор привлекает к себе всеобщее внимание. Исследователями школы Л. С. Штерн было установлено, что этот барьер выполняет многообразные функции, определяя избирательность и

• проникновение веществ из крови в цереброспинальную жидкость и обратное прохождение того или иного вещества.

П. А. Самохин и сотрудники (1993) впервые показали высокую тропность хламидийной инфекции к ММО и сосудистым сплетениям головного мозга плодов. Позднее эти данные были подтверждены С. А. Зворыгиным (1999).

Наши исследования, проведенные на абортированных и мертворожденных плодах, их матерях, а также в эксперименте на крысах выявили в оболочках и тканях мозга значительные морфологические изменения. При гистологическом исследовании оболочек и тканей мозга постоянно обнаруживались признаки токсического воздействия, которые проявлялись процессами микронекроза основного вещества мозга, гибелью нейронов. Клеточные инфильтраты, которые в основном обнаружены в оболочках мозга были незначительны, но постоянны, тем не менее, трудно охарактеризовать данный процесс как воспалительный. Хотя все компоненты воспаления - альтерация, экссудация и пролиферация имели место, но два последних были настолько ничтожны, что альтерация буквально затушевывала их. При исследовании мозга как матери, так и плодов постоянно наблюдались явления перинуклеарного, перицеллюлярного и периваскулярного отека, наряду с этим наблюдалось разрыхление вещества мозга.

При окраске препаратов по Павловскому и при микроскопировании их под иммерсией большое обсеменение хламидиями выявлено в оболочках мозга, и незначительное в веществе мозга.

Электронномикроскопическими исследованиями в оболочках мозга выявлены плотные скопления как элементарных, так и ретикулярных телец хламидий. Элементарные тельца имели вытянутую форму, однородный по плотности нуклеотид и четко различимую мембрану. Ретикулярные тельца округлой формы разных размеров, гранулярного или сетчатого вида.

В тканях мозга обнаружены очаги расплавления, отека и дискомплексации ткани. В очагах расплавления видна гибель нейронов, которая характеризовалась нарушением ядерной и цитоплазматической мембраны с выходом ядерного содержимого и деструкцией органелл. Наиболее глубоким изменениям были подвержены лизосомы и митохондрии.

Образование фагосом имело место, но ни в одной из них хламидий не было обнаружено.

Наряду с этим, деструктивным процессам подвержена стенка сосудов микроциркуляторного русла. Эндотелий был представлен в виде узкой полосы в которой не представлялось возможным дифференцировать органеллы. Периваскулярно постоянно имели место деструкция миелиновых волокон и периваскулярный отек. Основным признаком поражения гемато-энцефалического барьера является, обнаруженный нами, феномен внедрения элементарных патогенных телец хламидий в стенку капилляра, что является одним из патогенетических признаков данного заболевания.

Таким образом, при спонтанном хламидиозе свиней и экспериментальном хламидиозе крыс и морских свинок наблюдалось нарушение тканей гемато-энцефалического барьера с деструкцией всей стенки капилляра, внедрением в нее хламидий и периваскулярным отеком. Тяжелые очаговые изменения в оболочках мозга и ЦНС характеризовались не только наличием хламидий, но и возможно обусловлены токсическим действием (распад ткани, отек). Причиной столь глубоких нарушений могли стать макрофаги, которые при активации секретируют большое количество разнообразных цитокинов, оказывающих различное влияние, как на нервное волокно, так и на саму нервную клетку (Зубова С. Г., Окулов В. Б., 2001).

При рассмотрении клинических особенностей течения хламидийной инфекции у поросят, родившихся живыми, мы обратили внимание на наличие неврологической симптоматики в виде повышенной возбудимости, гиперстезии кожных покровов, нарушения координации движений, когда поросята принимали позу «сидячей собаки». Экспериментально установлено, что еще до появления клинических симптомов хламидиоза у животных в ЦНС наступают изменения дегенеративного характера, которые выражаются в атрофии, вакуолизации и кариолизисе клеток, что ведет к значительному разрушению нервной ткани в мозге.

Таким образом, внутриутробный хламидиоз у мертворожденных, абортированных плодов и нежизнеспособных поросят сопровождается выраженными гемореологическими нарушениями в оболочках и веществе мозга. Возникновение застойного полнокровия, интенсивной плазморрагии и отека тканей, очагов кровоизлияния вместе с токсическим воздействием на структурные компоненты оболочек мозга и его вещество хламидий, мигрирующих сюда из крови, является основой, с одной стороны, дистрофических и некробиотических процессов, с другой - слабых фибропластических и репаративных реакций, проявляющихся формированием гранулемоподобных структур.

Следовательно, можно с уверенностью сказать, что при хламидиозе у свиней нарушен гемато-энцефалический барьер, призванный выполнять защитную функцию и являться тем анатомо-физиологическим приспособлением организма, который регулирует обмен веществ в мозге. По данным литературы хламидиозный энцефаломиелит редко встречаемая форма поражения молодняка животных. В нашей стране впервые это заболевание у крупного рогатого скота было установлено Гафаровым X. 3. (1986). По результатам его исследований у крупного рогатого скота ведущим признаком при данном заболевании является поражение головного мозга, приводящее к появлению нервных симптомов.

И. Н. Ксенз (1999) при экспериментальном хламидиозе поросят обнаружил гистологические изменения в тканях головного мозга, в виде нарушения конфигурации нервных клеток, увеличения их ядер, утолщения стенок кровеносных сосудов, отека мозговой ткани.

Классической «моделью» физиологической иммуносупрессии является беременность. Сочетание инфекции и беременности представляется неблагоприятным и сопровождается ростом материнской и перинатальной заболеваемости и смертности. К числу таких инфекций, вызывающих иммуносупрессивное состояние организма матери, можно отнести и хламидийную инфекцию. Поэтому интересным, на наш взгляд, представляется изучение ответной иммунной реакции беременного организма при условиях заражения его патогенной культурой хламидий без предварительной вакцинации животного. Мы провели такого рода исследование на морских свинках, не вакцинированных против хламидиоза, и зараженных внутри назально штаммом ЛС-87, депонированным 26 апреля 2000 года, выделенным Р. X. Хамадеевым и Ф. М. Хусаиновым из легкого свиньи в 1987 году. В организме инфицированных беременных морских свинок развивались выраженные иммуно- и патоморфологические процессы сопровождающиеся яркой иммунологической перестройкой. Патологические изменения выявлялись в виде сосудистых, дистрофических и некротических расстройств, пролиферации лимфоидно-макрофагальных клеточных элементов в органах и тканях. Эти изменения свидетельствуют об яркой ответной реакции организма, проявляющейся как патологическими, так и в некоторой степени компенсаторно-приспособительными процессами, причем следует отметить что ответная реакция проявилась не в виде «малой болезни», соответствующей проявлению прививочного иммунитета, а по сути инфекционного патологического процесса.

Первоисточником и основным резервуаром хламидиоза в хозяйстве являются больные, переболевшие животные и свиньи с латентным течением инфекции. В эпизоотическом отношении они наиболее опасны и представляют собой источник рассеивания возбудителя во внешней среде, выделяющегося со всеми секретами и экскретами.

Серьезную опасность заражения представляет инфицированная сперма производителей при естественном и искусственном осеменении.

Stellmacher H. et al.(1983) из спермы и ткани семенников больных хряков удавалось выделить хламидии. В результатах исследований Пермских ученых И. Г. Абаниной (1999), В. А. Четвертных (2001) отмечено, что при внутрибрюшинном заражении экспериментальных животных хламидии проникают в подвздошные лимфатические узлы и семенники и там размножаются в макрофагах, ретикулярных клетках лимфатических узлов, клетках Сертоли семенных канальцев. Свои предположения авторы подтверждают результатами, полученными микробиологическими и гистологическими методами.

Нами при проведении гистологических исследований семенников хряков и экспериментальных животных (крыс) выявлен комплекс изменений не только отдельных клеток, но и всех тканей семенников. Повреждающее действие хламидий на семенники хряков и крыс характеризовалось сосудистыми расстройствами, выражающимися в гиперемии мелких и крупных сосудов со стазом крови в них и тромбозом. Аналогичные закономерности - наличие сосудистых нарушений десквамативно-пролиферативного характера в семенниках при риккетсиозах отметили П. Ф. Здродовский и Е. М. Голиневич (1972) Вокруг сосудов образуется лимфоидная инфильтрация и возникают явления отека интерстициальной ткани семенника.

Тромбозы в сосудах приводят к циркуляторной ишемии, что подтверждается и данными И. М. Порудоминского (1968), Т. С. Блиновой (1971), Е. Ф. Мельман, Б. А. Грицуляк (1974). Следствием нарушенного кровообращения является гипоксия тканей семенника. Все это отрицательно сказывается на функционировании органа. Наиболее чувствительными к инфекции оказываются сперматоциты 1 порядка, сперматиды и клетки Сертоли. Стволовые клетки и сперматогонии более устойчивы и погибают лишь при полной отслойке спермиогенного эпителия. В половых клетках появляется вакуольная дистрофия, кариопикноз и кариорексис. Часть клеток ® полностью гибнет. В просвете канальцев обнаруживается большое количество клеточного детрита, «белковые шары», а также отторгшиеся клетки спермиогенного эпителия. Одновременно происходит дезинтеграция клеток в пласте, в результате чего обнажаются клетки Сертоли. Учитывая важную роль сустентоцитов в процессах сперматогенеза, можно полагать, что их поражение хламидиями является одним из главных звеньев олиго - или даже - аспермии, развивающихся у больных животных и человека. Однако все патоморфологические изменения в тканях семенников больше обусловлены разрушением структур гемато-тестикулярного барьера, идущих повсеместно. В результате в ткани извитых канальцев мигрируют лимфоциты и даже наблюдается плазмоцитогенез.

В связи с отеком, гипоксией тканей семенников и поражающим действием хламидий страдают и клетки Лейдига. Вокруг них нередко Ф обнаруживаются лимфоциты. При этом в них начинается кариорексис, вакуолизация цитоплазмы. Клетки теряют связи друг с другом и многие из них погибают. Все это не может не приводить к нарушениям гормонообразующей функции гландулоцитов, а недостаток тестостерона сказывается на процессах сперматогенеза. В ходе эксперимента в семенниках гнездно выявлялись также многоядерные клетки. Как указывали В. X. Апсалямов, А. Н. Бажанов и В. А. Савенко (1993), эти изменения возникают в Ф результате нарушения клонально-синцитиального принципа организации развивающихся половых клеток и являются одним из критериев гипоксического повреждения сперматогенного пласта.

В некоторых случаях характер изменений в семенных канальцах соответствовал некрозу с петрификацией, причину этого мы видим в прямом токсическом действии хламидий на спермии, которые вызывают глубокие морфологические изменения последних и служат ведущим фактором ® повреждения и нарушения гемато-тестикулярного барьера.

Появление полиморфно-клеточных инфильтратов в тканях семенника, дистрофические изменения и гибель клеток спермиогенного эпителия, отторжение их в просвет канальцев, появление клеток лимфоидного ряда в тканях извитых канальцев свидетельствуют о возможности аутоиммунного механизма поражения органа при хламидийной инфекции. Возникает ^ сочетанное поражение структуры и функции семенников. Эти изменения оказываются сходными с обнаруженными В. М. Бреслером и В. М. Шубиным (1971), изучавших процессы поражения тканей семенников аутоиммунного характера. Нарушение структур гемато-тестикулярного барьера при аутоиммунных процессах отмечается также в работах С. С. Райциной (1970).

При окраске препаратов по Павловскому в сперматогенном эпителии были выявлены хламидии, а при электронномикроскопических ^ исследованиях спермы хряков обнаружены ретикулярные тельца хламидий.

Хламидии имели различную форму: округлую, овальную, неправильную, с неравномерно плотной мембраной, ограничивающей мелкозернистый с фибриллярными структурами матрикс. Встречались как одиночные ретикулярные тельца хламидий, так и по нескольку экземпляров в поле зрения, неопределенной формы с закругленными контурами, в цитоплазме которых на фоне разрежения матрикса содержалось множество мелких • шаровидных или овальных структур. Большая часть их была окружена плотной однослойной мембраной. Другая, меньшая часть, имела трехслойную мембрану, состоящую из двух темных слоев, разделенных светлым слоем. Содержимое структур было аналогично цитоплазме больших хламидий. В одних хламидиях такие структуры занимали примерно половину цитоплазмы, в других - полностью всю цитоплазму.

Имелись структуры, которые имели более осьмиофильную мембрану и ® матрикс, располагались рядом с хламидией, соприкасаясь с ее мембраной.

Эти структуры нами идентифицированы как элементарные тельца. Некоторые ретикулярные тельца были нафаршированы «дочерними» тельцами и в местах их скоплений наблюдалась деструкция и лизис мембраны с выходом этих структур во внеклеточное пространство. У части ретикулярных форм были видны вытянутые отростки, которые отпочковываются с образованием мелких телец.

Таким образом, можно предположить, что наличие массы «дочерних» образований в ретикулярных тельцах говорит о их репродукции в теле хламидий, а также происходит отпочковывание телец от «материнской» клетки. Такая массивная репродукция, вероятно, зависит от выраженной метаболической активности ретикулярных форм, а сперма является элективной средой для данного процесса. Считаем, что ретикулярное тельце ф это та форма микроорганизма, в которой обеспечивается длительное его существование в живом организме. Хламидии в семеннике находятся только в виде ретикулярных телец (не инфекционная форма), а при попадании их в эякулят происходит их активное размножение путем бинарного деления, то есть сперма является тем материалом, который способствует активному процессу деления хламидий, а семенники являются хранилищем возбудителя. Если наше предположение верно и резервуаром латентной инфекции у хряков Ф действительно служат семенники, то каким же образом этой системе удается в течение месяцев или даже лет сохранять хламидии в состоянии временного прекращения активности и почему при этом хламидии сохраняют способность проявлять патогенные свойства?

Наличие в сперме только ретикулярных телец хламидий позволяет предположить, что у хряков хламидиоз протекает в виде персистентной ф инфекции.

В результате длительного пути совместной эволюции (коадаптации) многие паразитарные системы выработали «эволюционную мудрость», суть которой заключается в сохранении популяции хозяина ради сохранения популяции паразита. С одной стороны, под действием возбудителя в организме хозяина развивается и иммунитет, и иммунологическая толерантность; с другой, факторы иммунитета обеспечивают изменчивость паразита с целью его уклонения от защитных механизмов хозяина (Бухарин О. В., 1997).

Под действием хламидий в сперматогенном эпителии развиваются дегенеративные процессы, приводящие к изменению морфологии половых клеток, то есть появлению аномальных форм спермиев.

При электронно-микроскопическом исследовании сперматозоидов мы обнаружили разрежение и деформацию ядра головки и шейки. Отмечали нарушение клеточной оболочки по всему телу, которое выражалось в отслаивании, полном исчезновении, а также встречались участки осмиофилии. Имел место лизис структур и обволакивание вокруг гомогенной массой.

Таким образом, в результате экспериментальной хламидийной инфекции у крыс и спонтанного хламидиоза у хряков в семенниках возникают изменения, приводящие к олиго - и асперматогенезу, в связи с нарушением иммунологического контроля над процессами развития половых клеток при нарушении гормонобразующей функции семенников, но мы не исключаем непосредственное повреждающее действие хламидий на спермии, что доказано электронно-микроскопическими исследованиями. В литературе появились сообщения о том, что хламидии способны прикрепляться к сперматозоидам и в виде «наездников» могут достигать не только маточных труб, но и попадать в брюшную полость и вызывать перитонит и перигепатит.

При проведении эксперимента на крысах были изучены изменения в организме самцов, зараженных вирулентной культурой хламидий. Исследованы паренхиматозные органы - печень, почки, селезенка, сердечная мускулатура, легкие, лимфатические узлы.

В печени отмечены дистрофические, воспалительные и компенсаторно-приспособительные процессы. При этом наряду с зернистой и жировой дистрофией гепатоцитов наблюдали активизацию клеток Купфера, которая вызывала повреждение гепатоцитов, так как под действием хламидий происходит активная продукция макрофагом свободных радикалов, оказывающих разрушающее действие на гепатоциты (Зубов С. Г., Окулов В. Б., 2001). Подтверждением сказанному является обнаруженный нами цирротический патологический процесс по типу гипертрофического цирроза.

В миокарде всех исследованных экспериментальных животных имели место различные расстройства гемодинамики. По последним данным, полученным в экспериментах на мышах канадскими исследователями, поверхностный белок хламидий имеет сходную антигенную структуру с мышиным миозином. В результате иммунного ответа на хламидийную инфекцию запускается аутоиммунная реакция на собственный миозин (Berger А.,1999) и возникает воспаление сердечной ткани.

Таким образом, семенники играют не маловажную, а возможно основную роль в персистенции возбудителя, обеспечивая циркуляцию его в организме отца, а ткани плацентарного барьера матери и плода являются передаточным звеном.

Современная и надежная профилактика хламидиоза способна обеспечить стойкое благополучие поголовья от данного заболевания. Мы провели испытание инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиоза свиней с последующим заражением беременных морских свинок вирулентным штаммом хламидий.

Хламидийный вакцинный процесс вызывает значительные иммунобиологические, а равно и иммуноморфологические сдвиги в организме животных. Морфологическая перестройка, представленная в виде «малой болезни», повторяет некоторые черты инфекционного процесса, но в меньшей степени выраженные. В организме привитого животного развивается воспаление на иммунной основе с оседанием в стенке сосудов повреждающих иммунных комплексов, усиленной избыточной пролиферации, приводящей в конечном итоге к склеротическим процессам.

При оценке иммунологического состояния организма необходимо учитывать, что иммунологические, как и другие физиологические процессы, составляют основу жизнедеятельности и направлены на поддержание структурно-функционального единства организма (Учитель И. Я., 1970), а исход этого процесса полностью определяется соотношением таких компонентов, как количество поступивших во внутреннюю среду организма антигенов, степень их связывания во внутренней среде и выраженность ответной реакции специализированной системы иммуногенеза (Кундрюкова Л. И., 1986).

В период беременности между организмом матери и развивающимся плодом возникают сложные иммунные взаимоотношения, проявляющиеся определенными иммуноморфологическими изменениями. У вакцинированных животных, когда процесс иммуногенеза еще не завершился, наслоение беременности вызывает дополнительную антигенную нагрузку на организм. В организме беременного животного происходят изменения в обмене веществ и начинает развиваться плод.

По мнению Д.Тейлор-Робинсон, П. Е. Хей (1998) преобладание персистентных форм хламидий у беременных женщин связано с повышением количества эстриола, которое во время беременности повышается в 10 раз, при том концентрация активного эстрадиола не меняется. Если предположить, что существует гормональная регуляция уровня метаболизма

• хламидий у женщин, то концентрация эстриола при беременности может быть ингибитором роста хламидий. В пользу гормональной регуляции свидетельствует также то, что изоляцию хламидий в культуре клеток у женщин легче проводить во вторую фазу цикла, накануне менструации, а не в овуляцию, на фоне гиперэстрогении (Гасанова Т. А., 2001).

Мы при своих исследованиях не проводили изучение гормонального фона у беременных свиноматок, но анализ заболеваемости и частота хламидиозных абортов у разовых и основных свиноматок дают основание считать, что у основных свиноматок происходит сенсибилизация организма к персистирующим хламидиям и стабильность их гормонального фона вместе предопределяют развитие гиперчувствительности немедленного типа и как следствие этого аборт. Причем существующее положение на свинокомплексе, когда не проводится систематизированного лечения хламидиоза, приводит к ф тому, что свиноматки абортируют не во второй половине супоросности, а в период беременности в 40 - 60 дней, что еще раз подтверждает сенсибилизацию организма животного персистирующими формами хламидий.

Главными эффекторными клетками в борьбе с внутриклеточными возбудителями являются макрофаги, ИК-клетки и Т-лимфоциты. Их микробицидные и цитотоксические свойства резко повышаются под

• влиянием а- и у-интерферонов, ФНО, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-12 и других цитокинов, продуцируемых после активации антигенами возбудителя этих же 3 популяций клеток. Первой клеткой, с которой встречается возбудитель, преодолевший слизистые или кожные покровы, является тканевой макрофаг.

Макрофаги поглощают опсонизированные микробы, убивают их (далеко не всегда), активируются и синтезируют цитокины. От макрофага зависит

• развитие раннего индуцибельного ответа, осуществляющего защиту организма от микроба в первые 96 ч инфекционного процесса и ^ заключающегося в синтезе ряда указанных монокинов, а также иммунного адаптивного ответа, осуществляющего защиту организма от инфекции на поздних стадиях инфекционного процесса и заключающегося в развитии гуморального (синтез специфических антител) и клеточного (образование популяции антиген специфических Т-лимфоцитов), иммунного ответа (Janeway С. A., Travers Р., 1997). Макрофаг, захвативший микроб, активизируется и синтезирует ряд монокинов, которые повышают функциональную активность новых моноцитов/макрофагов, нейтрофилов и NK-клеток. Этот макрофаг, расщепив с помощью своей ферментной системы микроб, представляет его антигенные детерминанты Т- и В-лимфоцитам, индуцируя тем самым развитие гуморального и клеточного ответа и продуцируя некоторые цитокины, необходимые для его развития (Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., 1999).

Наряду с активацией Т1-хелперного звена также идет выработка большого количества цитокинов в макрофагах с последующей активацией «респираторного взрыва». Но выбрасываемые при этом свободные радикалы не способны повредить «жесткую» клеточную стенку как ЭТ хламидий, прочность которых обеспечивается за счет антиоксидантной роли дисульфидных (-S-S-) связей между структурными белками МОМР, так и РТ. Прочность последних обусловлена полисахаридной микрокапсулой, ф устойчивой к супероксидному радикальному окислению. Вместо микробицидного действия активные формы кислорода приводят к активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) и повреждению двойного слоя мембран собственных клеток.

К цитокинам, вырабатываемым агапвированными макрофагами относится у- интерферон (у-ИФ). Высокие дозы у-ИФ полностью ингибируют 0 рост хламидий. Низкие дозы, наоборот, индуцируют развитие морфологически аберрантных форм включений (Wyrick Р. В. et. al., 1994; Campbell L. A. et. al„ 1993).

Фагоцитоз хламидий тканевыми макрофагами осуществляется с помощью псевдоподий, тогда как для других клеток, не являющихся профессиональными фагоцитами, характерна инвагинация участка плазмалеммы с адсорбированным элементарным тельцем в цитоплазму и образованием фагоцитарной вакуоли. Особенностью элементарных телец является их способность стимулировать свой эндоцитоз чувствительной клеткой, а также ингибировать слияние лизосом с фагосомой, содержащей хламидии в клетке-хозяине, что препятствует реализации лизосомальной активности и деструкции хламидий фаголизосомной системой эукариотической клетки, способствуя, следовательно, внутриклеточному выживанию возбудителя (Мавзютов А. Р., 2002).

Активированные макрофаги продуцируют фактор некроза опухоли (ФНО), который опосредованно через ИЛ-1 активирует пролиферацию основных клеток соединительной ткани, способствуя фиброобразованию, а также повышает адгезивную способность лимфоцитов по отношению к эндотелию сосудов и реактивирует макрофаги. Избыточная продукция ФНО активированными макрофагами может привести к прерыванию беременности вследствие возможных деструктивных изменений и циркуляторных нарушений в плаценте (Воронин Е. С. и др., 2002).

Обнаруженные нами изменения в морфо-функциональной системе «мать-плацента-плод» при хламидиозе у свиней и в эксперименте у беременных морских свинок и крыс и их потомства, выявили своеобразный, закономерно развивающийся патологический процесс, свидетельствующий о взаимоотношениях макро- и микроорганизма. Учитывая всю гамму вариабельности хламидий, приспособление их к изменяющимся условиям внутренней среды организма восприимчивого животного, вырисовывается классическая картина приспособления путем трансформаций и выживания вида микроорганизма, независимо от среды обитания, то есть от вида животного, в организме которого он находится. Комплекс выявленных нами патологических процессов в организме матери и плода у свиней, морских свинок и крыс, можно отнести к патогномоничным для хламидиоза.