Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Индикация вирусов парагриппа типа З, инфекционного ринотрахеита, аденовирусов и разработка режимов дезинфекции животноводческих помещений

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ПУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ИМЕНИ ВДШИША

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ДНУЯБЫ НАРОДОВ НАУЧНО-ЛССЛЕГОВАТЕЯЬСВИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ САНИТАРИИ, ГИГИЕНЫ И ЗШОШ

На правах рукописи

КОНДРАШКОВА ЕКАТЕРИНА ДМИТШЕВНА УДК 619:576."858:614748:6ГЗ.122

ИНДИКАЦИЯ ВИРУСОВ ПАРАГРИППА ТИПА ЗГ ИНФЕКЦИОННОГО тЮТРАШГГА, АДЕНОВИРУСОВ И РАЗРАБОТКА РЕЖИМОВ ДЕЗИНФЕКЦИИ ЖИВОТНОВОДЧЕСКИХ ПОМЕЩЕНИЙ

16.00 .'03 - ветеринарная микробиология? вирусология?

эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 1991

Работа выполнена во Всесоюзном ордена Дружбы народов научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии.

Научннй руководитель - доктор ветеринарных наук, ст.научн.

сотрудник АНДРШИН Ю.И,

Официальные оппоненты- лауреат государственной премии

СССР, заслуженный деятель науки РСФСР, доктор ветеринарии наук, профессор ЗАКОШРДИН A.A. (ВНИИВСГЭ)

канд.вет.наук, с.н.с. ШШК А.Ф. (ВИЭВ) .

Ведущая организация - ВНИИВВиМ

Автореферат разослан 18 " марта 1991 г.

Защита диссертации состоится " 18 " апреля 1991 г. на заседании специализированного ученого совета (Д.120.45.01) при Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5).

С диссертацией молено ознакомиться в библиотеке ЗШШСГЭ.

Ученый секретарь специализированного ученого совета

Л .П.Пимнова

. 2 У- ..'.

ОБЩАЯ ШШШЮША РАБОТЫ Дкууальностъ теми* Одним' йз условий повышения продуктивности животноводства является проведение ветеринарно-санитарных мероприятий предусмотренных санитарными правилами по содержащий и эксплуатации животноводчески объектов? Особенно это относится к стационарно-неблагополучным очагамгде полная ликвидация хронической инфекции возможна лишь тогда; когда ветеринарная практика в полной мере будет вооружена средствами специфической и неспецифической профилактики (Поляков АД., 1979)

Многочисленные публикация последних лет свидетельствуют о широком распространении респираторных заболеваний молодняка крупного рогатого скота* Информация о роли вирусных- агентов в этиологии этих заболеваний представлена в работах ряда авторов (Сирия В.Н., Фомина H.B.» 1379; Крюков H.H., 1980; Cftecjttb M.j /Щ Петков Г., Налбавтов И., IS79; Харламбиев X., 1972)."

Согласно исследованиям в нашей стране возбудителями вирус-пых респираторных ив^экций являются вирусы инфекционного ринотра* хопта, парагриппа типа 3 , аденовирусы (1^ненков ВДЗ?, Сюрин В.Й.% 1972; Каривэва А.Д,, Данвшяа М.*0., 1983; Тищенко B.:I.J, 1983).

В различных странах шра такяе была выделеныJ идентифициро^-валы п изучэпы вируса, имеадае определенное этиологическое значение при .возникновении заболеваний органов дцхания: вирус инфекционного ранотрахеита (Jfauun i, , 1956; SUtä^rvarut-1974; Жыи, <£е.а,1$В5) вирус парагриппа типа 3 (Карадаов И7, Христова В., 1981; ЯеьШг^а, Я.С.^а, 1959)," несколько серотипов аденовируса kJtfabdfa 1959, i960; ¿й/игь&сЛ^ М?*&;Т979; Jtctto'i , IS3S; MlsA&bOi/., 1975);

Одним из путей передачи инйзкции является аэрогенный," вшш- '

чающий пылевую и капельную фазы, а также капельнне ядрышки биологического аэрозоля (Сирин В.Н., ¿976; 1985). Байтное условие функционирования пылевого механизма передачи - некоторая устойчивость указанных вирусов во внешней среде 1 Способность этих вирусов сохранять патогенность для хозяина является ключевым моментом в их диссеминадаи по воздуху Машп- а, 1987).

Для индикации вирусов, находящихся в воздухе животноводческих помещений, предложен ряд методов. Однако, известные методы не достаточно чувствительны для выделения этих вирусов из воздуха (Багдасарьян Г.А. и др.,. 1977). Поэтому разработка и усовершенствование методов индикации вирусов в воздухе животноводческих помещений имеет важное научное и практическое значение.

В связи с широким распространением вирусных респираторных инфекций большую значимость приобретает разработка методов борьбы с возбудителями на путях их передачи.

Вопросы инактивации /л м'1го респираторных вирусов двзинфи- :: цирующими средствами до настоящего времени изучены недостаточно {ЛллЛ^^ 1983; ЖшЛг1ё., 1985; 1986).

Ветеринарная практика еще не имеет научно-обоснованных.режимов дезинфекции животноводческих помещений при . респираторных инфекциях парагриппа типа 3, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции). . • . ... л - .

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось изучение распространения вирусных респираторных инфекций телят в промкомплексах, разработка метода индикации вирусов в. воздухе животноводческих помещений и режимов дезинфекции.

В связи с этим были поставлены следующие задачи: - изучить распространение возбудителей вирусных респираторных заболеваний телят в животноводческих хозяйствах; .

'•■■-•:V- 4 - ' ■ '

- проззсти Ейдасвдаа вщгссз шгфокдаоппого рпютрахэдаа* шраграппа тага 3, ададавЕйуссв з воздав жгаотководаоскш: помещений;

- изучить вирулшщдасо дэйствиэ ряда дозикфектантов в отно-шэниа вирусов шфэкадонного рапотрахеага, парагрншга типа 3?

. адэновйкгсаГ

- разработать реши дезинфекции животноводческих тошце-иаЗ пра вирусных респираторных заболеваниях."

. Нстчная новнрда? Впервые уработан катод андякищп вирусов в воздуха зиеотноеодчсскег помещений то содержании щушого рогатого слота о использованием япдкостного циклона; конотщташ ВНЙИВС. Изучен» варулиодщоэ действие ряда новых и традзциогтш: дезЕнфицвдрыдах средств в стпошенпа вирусов инфекционного рано— . трахеита, аарагршща тша 3 а аденовируса.'.

Получено нслоаительЕез решение БНЙЙГШ по заязаз Я 4703203 с приоритетом от I4.XI.89 г. на двгззфтхщхяяЗ препарат влввлт ; и способ ^эшфвгщаа обьектсз вэтвркпаряого надзора? Материалы . по щшэнений алкялша аопяи во Временные наставления 8 £544-3 по .примэненио лизола санитарного, №рки"алкшшн" в ветеринарии? утв? 1УВСССР 22 августа 1990 г."

; Драктаческая ценность работы.' Использование;предложенного метода .индикации вирусов позволяет выделять вируса парагриппа ?ипа 3, инфекционного ринотраяеита, аденовирусы в воздухе кивот^-

НОВОДЧбСКИХ П0М9Щ9НИЙ.

/ Результаты изучения вирулвдйдкого действия ряда дезинфек-тантов вошли, в "Рекомендации по профилактике инфозящонного рнно-трахеита/^шфзкцнонного пустулезного вульвовагннита --.уушюго рогатого. скота в хозяйствах Свэрдшвской обдаем"? одобренные вет.

15 *

отделон Агр5Щ»шшлекного коштете Свердловской с&каста? учэнкм советом ШВС и на заседании агропромышленного коштета Ю.'П.ЭОг? j B0*Bpeu9KH00 наставление Л 044-3 по применению лизола санитарного карка "алкшшн" в ветеринарии", утв. ГУВ СССР 22 августа 1990 г?

дтроНария тботн." Материалы диссертации были доложены на:

- научно-производственной конференции "Достижения ветеринарной наука в передового опыта - животноводству Нечерноземной зоны РСФСР*7 (Горький, 1968)}

- научно-производственной конференции "Проблемы экология" (Горький, 1990);

- z5uu.il научной конференции, посвященной 50-летию Свердловского сельскохозяйственного института (Свердловск, 1990)?

О0ъем щботр ц публикация? Диссертация состоит из введения," обзора литературы? собственных исследований? обсуждения? выводов? практических предложений; списка использованной литературы;' включающей 165 источников, в том числе 84- иностранных? Работа изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц, I рисунок. По материалам диссертации опубликовано 6 работ,'

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

^аториал q мвуодн исследования. Работу проводили в животноводческих хозяйствах Свердловской области - совхозе им." Свердлова Артшского района," совхозе Щелцунскпй Сысертского района/ племобъ-единении "Свердловское".

Лабораторные исследования проводили в лаборатории дезинфекции ВНИИВС, в отделе эпизоотологии Свердловской НИВС.

Для изучения распространения возбудителей вирусных респираторных инфекций исследовали в динамике 4272 парные пробы сыворотки крови телят, быков на наличие антител к вирусам парагриппа типа 3

■ • --в - . •■. в реакции торможения гемагглютанацин; к аденовирусам и вируса» инфекционного ринотрахеита в реакция нейтрализации, Постановку реакции гемагглютинации осуществляет при использования антигена^ реакции нейтрализации - при. постоянной дозе вируса (100 ТШ^ду^) по методика, описанной Лярстга 3. (1980)?

Также с целы» диагностики исследованы 41 проба,патологического материала (легкие, трахея," лимфоузлы)? 190 проб носовых смывов, 328 проб спермы," 115 проб фекалий.' Выделенный вирус инфекционного ринотрахеита и аденовирус идентифицировали в реакция нейтрализации со специфической гипарищунной сывороткой в коночном разведении 1:10. Вирус парагриппа типа 3 идентифицировали в реакции торможения геиадсорбции по методике; описанноЗ Соколовым М.И. (1965).

Индикацию вирусного аэрозоля в воздухе животноводческих по-* .мощений проводила в три этапа: I) концентрация вируса с помощью жидкостного циклона* входящего в комплект для отбора проб воздуха КОШ- /? конструкции ВШШВС{ 2) выделение вирусов катодом культивирования в культуре клеток?, 3) идентификация вируса по общепринятым в вирусологии методикам.' •

Для подтверждения достоверности ^глмуральных и антигенных свойств выделенных вирусов;; последние исследовались параллельно с вакцинными штаммами вируса инфекционного ринотрахеита вакцины ТК-А (ВИЭВ) Bg, вируса парагриппа типа 3; выделенный из вакцины "Параван", со штаммом аденовируса В-ГО

Инфекционный титр вируса определяли по цитопатогшщу действию в пробирочных 2сультурах клеток; выраженных в ШДдд/ил по методу Яи><1 /■ Cuul Ж.; (W/J.

Культуру клеток готовили общепринятым методом.4 Вирус парагриппа типа 3 накапливали в культуре клеток почки эмбриона ко-

V ':7 ■ __ --'

рош и гэ субкультуре; вирус ипфбкцаозшгз ранограхаата в культур ; ре клеток почки эмбриона коровы; легких эмбриона коровы а их субкультурах; аденовирус.в яульт;^ клеток тестм^глов бычка и ее

субкультуре Г ■ •'■V".'.-';

Накопление проводила внесением вируса в однолитровые матрасы о культурой клеток из расчета 100 ТОДздДп* Поддерясиваэдими средами использовали гидролизатлактальбумина на растворе Хенкса, ¡вреду 199: : . • '

Заражение культуры клеток вируссодеркащим материалом прово-дилй общепринятым методом.

Определение вируяндидной активности химических средств про^ водили методом "разведения", описанном Методе- '

логически он разрабатывался в два этапа: I) определяли порог до. тотоксичности дезинфицирующего средства а устанавливали гаэнцент- ; рацип препарата; при которой клетки сохраняли способность проду-пировать вирусы; 2 У определяли внигдицшщооть препаратов? то еоть способность снигать титр вируса на 3 йр а боле® в трех последовательных пассацах; Жл'

Всего было испытано 19 дезивфацируившх средств : формальде^ гид; глутаровый альдегид? дазонол? перекись водорода^ молочная кислота, кальций гипохлорит нейтральный (марки Б); йодариэтнлен-гликоль» едкий натрей; фенолятнатрия;селицд; ыетаЦйц', мэтансул>-фоаманодихлор^ надуксусвая кислота, ФАК-*1, ПВК.'алкйяан) эрахонд; лесной бальзам, отвар кори Определение содержания действующего вещества в растворах препаратов, определение дезинфицирующее активности хймичеоких средств проводили согласно "Мэтодиче-сквм указаниям по контролю качества дезинфекции объектов? подаём; аазцих ветеринарному надзору"; утверхдеяным ГУВ Госагропрома СССР

- 8. ~ .

Препараты, обладашдаевирулицидным действием, испытывали на искусственно контаминированных тест-объектах. В качестве тест-объектов использовали деревянные! бетонные, метлахские пластины, размером 15x15 см. На тест-объекты наносили вирусную суспензию с инфекционным титром не мене? 6 ^ для вируса инфекционного ринотрахеита, 7 ^ для вируса парагриппа типа 3; 5 ^ для аденовируса, и 0,3 г стерильного навоза крупного рогатого скота. Раствор испытуемого препарата,, начиная с 0,1% концентрации, наносили путем мелкокапельного орошения из расчета 0,5 л/м? I После истечения экспозиции и обработки раствором нейтрализатора," соскобленным вируссодеряащим материалом заражали культуру клеток?

Для отбора проб воздуха использовали жидкостной циклон комплекта для отбора проб воздуха (К0ПВ-1), конструкции ВШИВО; В качестве сорбирующей жидкости использовали питательные среды 199; Хенкса, гидролиза® лактальбумина с антибиотиками. Для работы циклона использовали пылесос, мощностью 400-600 Вт.' При мощности двигателя 600 Вт и коэффициенте захвата эффективная производительность циклона составляла 0,5x600=300 л/ман; Отбор пробы в I м3 воздуха проводили в течении 3-3»5 минут.

Влакную дезинфекцию проводили путем орошения стен и полов животноводческих помещений из расчета 0,5-1,0 л/м?.

Эффективность дезинфекции в опытах подверядали вирусологическими исследованиями; Контролем служили деревянные й бетонные тест-объекты с нанесенной на них вируссодержащей смесью^

Оценка экономической эффективности препаратов; предлагаемых для дезинфекции помещений при инфекционном рияотрахегте," парагриппе типа 3, аденовирусной инфекции проведена в соответствии с "Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", одобренной НТО МСХ СССР 24 апреля 1980 г.*

РЕЗУЛЬТАТЫ ШИЩДОРАНИЙ

Изучение распространения острых респираторных ', вирусных заболеваний крупного рогатого скота в хозяйствах Свердловской облао*и

С целью изучения распространения острых респираторннхинфак-ций в совхозе им.' Свердлова Артинского района наш был проведан диагностический убой четырех больных телят? От них был подучен патологический материал для проведения исследования на выделение вируса? С этой же целью от больных животных получали пробы ¿Особых секретов; в количестве 80.

В результате вирусологических исследований из патологического материала четырех телят i" 20 носовых смывов больных животных был выделен и идентифицирован в реакции нейтрализации вирус caí- . рагриппа типа 3.J В первый день поступления телят в хозяйство обнаруживались единичные животные £ признаками респираторного заболевания. В дальнейшем, за короткое время (2-3 месяца) перебой левало до 50£ телят,' : ,,." ' .'.'•;

В начале заболевания и через 30 дней после завоза? от боль- / ных телят получали 1000 проб-сыворотки крови и исследовали их в j динамике на наличие антител к вирусам. В результате исследований у 155? телят с клиникой респираторного заболевания выявлен прирост антител к вирусу парагриппа типа 3 в 4 раза.' • :

Аналогичными исследованиями вирус парагриппа типа 3 был обнаружен в пробах фекалий; Было исследовано 50 проб. г .

При вспышке респираторного заболевания в совхозе Явлинский Сысергского района было исследовано 372 пробы сыворотки крови на наличие антител к вирусам, патологический материал от 4 вынужденно забитых телят, 60 проб носовых смывов, 20 проб фекалий.* По результатам исследований в данном хозяйстве были диагностированы

- хо -

инфзкщошшй рипотрахопт, парагрши тзна 3; аденовирусная инфекция.

При обследовании парные проб- сыворотки крови 164 быков плем-обьедннеяия "Свердловское", неблагополучного по ИРТ/ИПВ выявлен 4-х кратный прирост антител к указанному вирусу. При исследовании 328 проб спермы вирус бая обнаружен у трех быков." Такке было исследовано 45 проб фекалий, 50 проб носовых смывов.'

Таким образом; в совхозе ям. Свердлова была диагностирована инфекция парагриппа типа 3 при обнаружении возбудителя в 95,2$ исследованных; проб патологического материала, в 25$ проб носовнх смывов, в 14$ проб фекалий,при выявлений 4-х кратного прироста антител в 15$ исследованных проб сыворотка. В сойхозе Щелиунский была диагностирована.: смешанная вирусная инфекция инфекционного ринотрахеита, парагриппа типа' 3, аденовирусной инфекции при наибольшем проценте выявлений аденовируса; составляющего при исследовании патологического материала - 55$, носовых смывов - 11,6$, проб фекалий - 30$, при выявлении 4-х кратного прироста антител в 10 ¿495? исследованных проб сыворотка^ В племобъединении "Свердловское" бал" диагностирован инфекционный ринотрахеит/пустулез-ный вульвовагинит при обнаружении возбудителя в 1055 проб исследованных носовых смывов, 0,9$ проб спермы, в И",1% проб фекалий, при 4-х кратном приросте антител в 10,3$ исследованных проб сыворотки крови.

Выделение вирусов ПГ-З, ИРГ, АДВ из воздуха

животноводческих помещений

Отбор проб воздуха животноводческих помещений совхоза им? Свердлова, где содержались больные телята, проводили при помощи жидкостного циклона, конструкции ВНИГОС с использованием пылесоса, мощностью 400 Вт. Возраст телят 2-6 месяцев.' Объем помещения

- и -

- 7000 м3. Пробы отбирались ежемесячно в течение года? Всего было отобрано и исследовано 150 проб;

Выделение вирусов проводили на кулыуре клеток- ночки эмбриона коровы и ее субкультуре, к которой адаптирован вирус парагриппа типа 3, при проведении? последовательных пассажей!;

Идентификацию вируса парагриппа типа 3 проводили в реакции нейтрализации с постоянной дозой сыворотки.4 Была использована парагршпозная сыворотка для РТГА и РН предприятия по производству бактерийных и вирусных препаратов Свердловского НИИ вирусных инфекций,' тип 3; титр РН 1:640, серия 22? контроль 285;'

Титр выделенного вируса составил 7 ^ ' i по нультуралышм и антигенным свойствам вирус идентичен вирусу парагриппа типа 3, обнаруженному вцэобах патологического материала.*

Отбор проб воздуха животноводческих помещений племобьедине-ния Свердловское, где содержались быки в возрасте от двух до пяти лет, проводили с использованием жидкостного циклона и пылесоса, мощностью 600 ВтГ Объем помещений 1000, 4000, 6000 мэ; . Пробы отбирались ежемесячно в течении года.' Всего было отобрано и исследовано 70 проб.

Вирус выделяли при проведении 7 последовательных пассажей в' культуре клеток почки эмбриона коровы, легких эмбриона коровы и их субкультурах^ которым адаптирован вирус ИРТ/ЙПВ.

Идентификацию вируса ЙРТ/ИПВ проводили в реакции нейтрализации с постоянной дозой сыворотки. Была использована специфическая сыворотка для РН и РДП Привошской биофабрики,: серия I, госконтроль I, дата изготовления С7.06.87 г.

Титр выделенного вируса составил 6 ^ . По культуралышм и антигенным свойствам вирус идентичен вирусу ИРТ/ШВ, обнаруженному в сперме, носовых смывах;

Отбор проб воздуха проводили в животноводческих помещениях совхоза Щелнунский, где содержались болыше телята 2-4 месячного возраста. При наличии смешанной вирусной инфекции в данном хозяйстве исследование 50 проб воздуха позволило выделить при проведении 7 пассажей в культуре клеток тестикулов бычков и идентифицировать в реакции нейтрализации аденовирус. По ^ультуральным и антигенным свойствам выделенный вирус идентичен, вирусуобнаруженному в пробах патологического материала, титр вируса составил 5 .

На основании проведенных исследований разработан метод индикации возбудителей вирусных респираторных заболеваний телят в воздухе животноводческих помещений при помощи жидкостного циклона, конструкции ВНИИВС.

.... Результаты индикации вирусов - возбудителей острых респираторных заболевший представлены в таблице I.*

Таблица I .

Выделение вирусов ПГ-3, ИРТ, АЙВ из воздуха : животноводческих помещений

: Исследуемое !--Наяичи? возбудителя #---_-я

хозяйство ; ИРТ , : ПГ-3_: . АДВ_

IКол-во:Вирус: % :Кол-во:Виргус: •% :Кол-во:Вирус: % ;исслед:обнар: :исслед:обнар: :исслед:обнар: *

Племобъеданеняе • .

Свердловское 70 65 86,6

Совхоз ЯМ.1 ' Свердлова

150 143 95 ,'3

Совхоз ^ „

Щел^гнскии 50 45 уи

- 13 -

Из таблицы I видно, что вирус инфекционного рннотрахеита обнаружен в 66,6$, вирус парагриппа типа 3 - в 95е3$,' аденовирус - в 90$ исследованных проб воздуха. Обнаружение вирусов • ИРТ, ПГ-З, АДВ в воздухе животноводческих помещений с помощью жидкостного цшоюна, конструкции ВНИИВС указывает на высокую эффективность метода индикации.

Определение инфекционности вирусов парагриппа типа 3, инфекционного ринотрахеита, аденовируса, выделенных из патологического материала, спермы, вовдуха.

Определение инфекционности вирусов парагриппа типа 3 проводили по цитопатическоку действию в культуре клеток почки эмбриона коровы и ее субкультуре; вирусов инфекционного ринотрахеита - в культуре клеток почки эмбриона коровы, легких эмбриона коровы и их субкультурах, аденовируса - в культуре клеток тестикулов бычков и ее субкультуре. Для подтверждения достоверности культуральных и антигенных свойств вирусов, выделенных из патологического' материала, спермы, воздуха, последние исследовались параллельно с цгзейными штаммами вирусов ИРТ, ПГ-З, АДВ. Полученные.результаты свидетельствуют о том, что титр выделенных вирусов составил для ИРТ - 106 ТЦ%оЛдл; для ПГ-З -107 ГаЕ50/'Ш1; для аденовируса - Ю5 ТЦП^д^. Титр музейных штаммов вирусов составил для ИРТ - 105 для ПГ-З -

Ю5 ГАЕ50(/ш1; для аденовируса - ХО5'5 ТЦД50//ш. .

Определение порога цитотоксичности растворов дезинфицируетцих препаратов

В соответствии со схемой первичного отбора дезинфицирующих средств на первом этапе определяли порог цитотоксичности препаратов и устанавливали при каждой концентрации пробирочные культуры клеток сохраняют етзнестойкость и способность проецировать

■•■■'й V'-.- 14 .-. ■

вирусы. Всего было поставлено 450 опытов с использованием 2000 пробирок с культурой клеток ГОК,1 СТОК; ЛЭК; СЛЭК, ТБ; СТБГ Концентрация испытуемых растворов колебалась от 0;01 до 50£.' Всего было исследовано 19 препаратов и 4 нейтрализатора." . В результате проведенных исследований установлено,' -что наибольшим цитотоксическим действием обладают алкилин, перекись водорода, ГОК - перекись водорода с катионно-активным ШВ.; Их раствора не токсичны для адльтурн клеток ПЗК, СПЭК, ЛЭК, СЯЗК, ТВ, СТБ в 0,01$ концентрации. Наименьшим цитотоксическим действием обладают растворы метаадда и гипосульфита натрия.' Остальные исследуемые препараты проявляли, цитоксическое действие в диапазоне 0,1-0,5£ концентрации. -

Изучение вирулицвдного действия ряда дазинфектантов

Нами были проведены исследования по выявлении наиболее вирулицидиых химических средств в отношении вирусов инфекционного ршютрахеита.парагриппа типа 3, аденовируса^ Всего было поставлено 500 опытов по первичному отбору химических дезинфици-, рующих- средств в которых использовали пробирочные "культуры клеток. С казщым препаратом исследования проводились в . присутствии и в отсутствии оргаяическбго вещества. Органическим веществом служила нормальная сыворотка крупногорогатого скота для виру. сологических исследований. Для определения вирулипидного дейст-вйя препарата в условиях пробирки смешивали равные объемы вирусной суспензии и дезинфектанта двойной концентрации.* Предварительно исследуемый вирус титровали до конечного разведения для вируса ИРТ/ШВ - до Ю"6; вирус ПГ-3 до ИГ7; аденовирус до 10"5 с контролем вируса и дезинфектанта.....': V • ' •

'Сншхение титра исследуемого вируса определяли по разности

- 15 -

между титром контроля» получаемом в стерильной воде в отеутст-' вии дезинфектанта и титром остаточного вируса через 60 минут контакта о дезинфектантом при температуре +18+20°С.

В соответствии с принятой методикой оценки действия химических средств на вирусы," вирулицидными считали препараты, обладающие способностью сникать титр вируса на 3^ и более в трех последовательных пассажах при температуре +18+20°С (т.е: на

Таким образом из 19 исследуемых дезинфицирующих средств стабильным вирулицидным действием обладают алкшган, ФАК-1, ме-тансульфоаминодихлор, надуксусная кислота, формальдегид, глута-ровый альдегид, дезонол, молочная кислота, ПВК, едкий натрий; йодтриэтиленгликоль, активированная перекись водорода, КЕН(Б), фенолят натрия.

Разработка режимов дезинфекции

Препараты, обладающие вирулицидным действием испытывали на тест-объектах с нанесенной на нцх вируссодержащей смесью. Экспозиция I, 2, 3, 24 часа. После обработки нейтрализатором соскобленный вируссодержащий материал обрабатывали по методике получения вируссодержащего материала и заражения культуры клеток,' С учетом цитотоксического действия проводили не менее трех последовательных пассажей. Контролем служили соскобы с контами-шрованных тест-объектов, обработанных водой и раствором нейтрализатора; Опыт на тест-объектах проводили трехкратно. Лозу препарата считали эффективной при условии отсутствия ЩЩ в культуре клеток и наличия ЦОД вируса в контроле.' Результаты проверки дезинфекционной активности химических средств на тест-объектах» контаминированных вируссодержащей смесью представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты проверка дозня&оетдазнной активности химических оредотв на тест-объектах, контамини-ровашшх вируссодертцэй смэсьзо

Исследуемое Шредельш ш:Расход:Экспоз, ;,:Темп.' ; : Результат

химическое• :конц:ЛВ|/ Е :р-ра, :час гр^-ра ; •

средотво • * • ГР лм « •VI/ до • • ' • :°с ; : 'У

Формальдегид 0,5-1,0 0,5-1^3 3 18-20 не обеззараж."

2,0 0,5 3 18-20 обеззаражено

ГлутаровыЙ 0,5 о;5 3 18-20 не обеззараж?

альдегид 1,0 0,5 3 18-20 обеззаражено

КШ (шрки Б) 1,0-2,0 0,5 3 18-20 не обеззараж.

3,0 0,5 3 18-20 обеззаражено

Едкий натрий 2,0 0,5 3 . 70-80 не обеззараж Г

3,0 0,5 24 70-80 обеззараж.'"

4,0 0,5 3 70-80 обеззаражено

Переквоь водо- 2,0 0*5 3 18-20 не обеззараж?

рода 4,>0-5,0 0,5 3 18-20 обеззаражено

Фенолят натрия 2,0-4,0 0,5-1,0 3 ' 18-20 не обеззараж;

5,0 0,5 3 18-20 обеззаражено

Явзотая 5,0 0,5 3 \ 18-20 не обеззараж?

7,0 0,5 24 18-20 обеззаражено

Ю/ 0,5 5 18-20 обеззаражено

АШШШ- > 2,0 0,5-1,-0 3 18-20 не обеззараж?

3,0 0,5 24 18^20 обеззаражено

4,0 (5,5 ч 3 18-20 обеззаражено

Надуксусная 0,3 0,5 3 18-20 не обеззараж?

кислота 0,5 0,5 3 ¿8-20 обеззаражено

ФАК-1 0,5 ; 0,5-1,0 3 • 18-20 не обеззараж?

1,0 0,5 3 18-20 обеззаражено

пвк 2,0 0,5-1,0 3 * 18-20 не обеззараж?

3,0 0,5 24 . 18^20 обеззаражено

4,0 0,5 з 38-20 обеззаражено

Контроль (вода) 1,0 . 3 18-20

- - - — -

? Г '

Для производственных испытаний был отобран препарат алки-лин. Дезинфекцию проводили во' время вспышки парагриппа типа 3 в совхозе им.Свердлова."

Поверхности орошали дезинфекционной установкой -Комарова (ДУК) из расчета 0,5 лА? поверхности. Температура водного раствора препарата +20°С. Кратность обработки I раз в неделю.1

Контролем служили деревянные и бетонные тест-обьекты с нанесенной на них вируссодержащей смеоью.

Таким образом, по результатам лабораторных и производственных опытов по отработке режимов дезинфекции установлено, что обеззараживание поверхностей, с нанесенной на. них вируссодержа-щей смесью достигается при применении 2$ раствора формальдегида; I$ р-ра глутарового альдегида; раствора кальция гипохлорит нейтрального (марки Б) с содержанием 3$ активного хлора; 4$ раствора едкого натрия; 4% раствора активированной перекиои водорода; 5$ раствора фенолята натрия; 10$ эмульсии дезонола; 4% раствора алкилина; 0,5$ раствора надуксусной кислоты; 1,0$ раст-ворвФАК-1; 4$ раствора ПВК, при расходе растворов 0,5-1,0 лД? поверхности и экспозиций 3 часа. Обработку животноводческих помещений вышеперечисленными,растворами необходимо проводить I раз в неделю в отсутствии животных.

Экономическая эффективность- применения

дезинфицирующих препаратов

При расчете экономической эффективности сравнивали затраты на базовый препарат формальдегид и рекомендуемые препараты при обработке 1000 ^поверхностей.

Экономический эффект применения дезонола для дезинфекции при вирусных респираторных инфекциях составил 14 копеек; фенолята натрия - 3 рубля 78 копеек.

- 18 -

-ВЫВОДЫ

1. При изучении распространения вирусных респираторных инфекций в сохозе гл. Свердлова била диагносцярована инфекция парагриппа типа 3 (ПГ-З); в племобъединении "Свердловское" -инфекционный ринотрахеит/пуотулезный вульвовагинит (ИРТ/ИПВ);

в совхозе Щелкунский - смешанная вирусная инфекция ПГ-З, ИРТ/ИПВ, АДВ.

2. Установлена взаимосвязь между выделением возбудителей респираторных вирусных инфекций (ПГ-З, ИРТ/ИПВ, АДВ) из воздуха животноводческих помещений, где содержатся больные животные, и наличием соответствующих вирусов в организме животных.

3. Впервые доказана возможность индикации возбудителей ПГ-З, ИРТ/ЙПВ, АДВ в воздухе животноводческих помещений с использованием жидкостного циклона комплекта для отбора проб воздуха (КОПВ-1), конструкции ВНИИВС.

4. Вирус ПГ-З выделяли в. 95,3$ исследованных проб возду-. ха животноводческих помещений, где содержались больные парагриппом животные; вирус, ИРТ/ИПВ - в 86,6$, аденовирус - в 90$ проб соответственно.

5. Цитотоксичебкое действие формальдегида, глутарового альдегида, дезонола, перекиси водорода, молочной кислоты, кальция гилохлорита нейтрального (марки Б),' йо дтриэтшгенгликоля, едкого натрия, фенолята натрия, селмида, метацида, метансуль-фоаминодихлора, надуксусной кислоты, ФАК-1, ПВК, алкиляна, эра-ганда, лесного бальзама, отвара коры ду<5а для культур клеток почки эмбриона коровы, легких эмбриона коровы, тестикулов> бычков и их субкультур проявляется при 0,1-0,5% концентрации растворов препаратов.

6. При изучения вирулицидаого действия исследуемых дезин-фектантов установлено, что стабильным вирулицидным действием в отношении вирусов ПГ-З, ИРТ/ЙПВ; АДВ обладают препараты: алкилан, ФАК-1, метансульфоаминодахлор, надуксусная кислота,-формальдегид, глутаровый альдегид, дэзонол, молочная кислота;' ПВК; КГНСБ); едкий натрий, йодтриэтиленгликоль, фенолят натрия» активированная перекись водорода.

7.' Обеззараживание тест-объектов с нанесенной на них вирус-содержащей смесью и влажная дезинфекция животноводческих помещений достигается при использовании одного из оледухщих дезинфици-. рутах средств: 2% раствора формальдегида; 1% раствора глутарово-го альдегида} раствора кальция гнпохлорит нейтрального (марки Б) с содержанием 3% активного хлора; 4% раствора едкого натрия;

45? раствора активированной перекиси водорода; 5% раствора фенолята натрия; 4% раствора алкилина| 10% эщульоии дезонола^ 0,5$ раствора надуксусной кислоты; 1,0% раствор ФАК-1{ раствор ПВК при расходе растворов 0,5-1,0 лД^, экспозиции 3 часа.

8. Экономический эффект применения дезокола длядезинфек-ции Енвотноводческих помещений при вирусных респираторных инфекциях составил 14 копеек; фенолята натрия - 3 рубля 78 копеек на 1000 ъР поверхностей. .:.../.• .

Предложения для практики

1. Временное наставление $ 044-3 по применению лизола санитарного, марки "алкилин" в ветеринарии, утв. ШЗ СССР 22 авгус-

* > ' ■ \ ' • ■

та 1990 г.' '

2. Рекомендации по профилактике инфекционного ринотрахои-V та/инфекцаошого пустулезного вульзовагишгта крупного рогатого

скота в хозяйствах,Свердловской области. Одобрены вет.отделом

Агропромышленного комитета Свердловской области, ученым советом Свердловской НИВС и на заседаний НТО при агропромышленном комитете. Свердловск, 1991 г;

Список опубликованных работ по теме

диссертации.

; I; Семенченко О.Г., Татарчук А.Т.,' КОндрашкова Е.Д; Характер процесса при ринотрахеите крупного рогатого скота // Уральские Нивы, 1988, £ 8, с.35.

2. Семенченко О.Г., Татарчук А.Т., Кондрашкова Е.Д. Этиологические и эпизоотологические фактор вирусных респираторных заболеваний телят в хозяйствах Среднего Урала // Тезисы докладов научно-производственной конференции "Достижения ветеринарной науки и передового опыта - животноводству Нечерноземной зоны РСФСР". Горький. 1988. НИВИ нечерноземной.зоны. РСФСР, с.24-25;

3. Дезинфицирующий препарат алкилин и способ дезинфекции объектов ветеринарного надзора защищены авторским свидетельством. Получено положительное решение ВНИИГПЭ по заявке № 4783908/ 15-137440 с приоритетом от 14.11.89 г,

4. Кондрашкова Е.Д., Игнаткин В.И., Семенченко О.Г.; Андрюнин Ю.И. Технология экспресс-выделения вирусных антигенов из воздуха животноводческих помещений // Тезисы докладов научно-производственной конференции "Проблемы экологии". Горький, 1990. НИВИ Нечерноземной зоны РСФСР.

5. Кондрашкова Е.Д. Устойчивость вирусов инфекционного ринотрахеита, парагриппа типа 3 к различным дезинфектантам // Тезисы докладов ХХХШ научной конференции',' посвященной 50-летию Свердловского СХИ. Свердловск. 1990. Ветеринарный факультет;' с.87.

- 21 -

6. Коддрашкова Е.Д., Андашн Ю.И. Режимы дезинфекции при острых респираторных вирусных инфекциях крупного, рогатого скота // Уральские Нивы, 1990, Л 12, с.19-2б.?

ВНИМВСГЭ 1911 г. Зак. К 100 вкз7