Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунологическая, патоморфологическая оценка эффективности противобруцеллузных вакцин и совершенствование средств и методов специфической профилактики бруцеллеза животных

ЮЕРОССИЙСЮЙ Н^П10-ИССЛЕДОЧАТМЬСК111 ИНСТИТУТ с'КСПЕРЖЯТЛЛЬ'Юл (ЕТЕРПНАЕИ !ШШ Л.Р.КОВАЛЕНКО (ВИЭВ)

•ООИЙШЙ АКАДЙШ СЕЛЬСКОЖаТЙТВЕНШХ НАУК (РАСХН)

ШУИОЛОПЯЕСГ'ЛЯ, ПАТШОР/ЮЛОПКЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ [Р0ТИВ0БРУЦЕЛЛЕЗШХ ВЛКШШ И СОЗЕРПШНСТВОВДШ® СРЕДСТВ И ПЛОДОВ СПЕГЦМИЕСКа! ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ

[6.00.03 - ветеринарная .микробиология,вирусология,эпизоотология, микология и иммунология

!5.00.02 - патология,онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

2 7 Я//В №?

АЛЬБЕРТ ЯН Мкртич Погосович

МоскЕ'а - 1956

Работа выполнена ео -Всероссийском научно-всследовательском институте- экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко, в хозяйствах Республик Казахстан, Грузия и Узбекистан.

'Научные консультанты: доктор ветеринарных наук,профессор

. заслуженный деятель науки РФ К.В.ШУМИЛОВ

•доктор ветеринарных наук,профессор заслуженный деятель науки РФ в.а.шубин .

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук.профессор,заслуженный деятель' науки РСФСР Селиванов A.B.

2. Доктор ветеринарных наук,профессор Шегидевич э.а.

3. Доктор ветеринарных наук,профессор Архипов Н.И.• Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский

институт бруцеллеза и туберкулеза животных;

Защита состоится " У " в (Учасов на sace-

даниу. диссертационного Совета Д 020.28.01 по защите дассертаци! на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени я.р.Коваленко.цо адресу: 109472.г. Мооква, Кузглшнш

вйэв.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ. Автореферат разослан " Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат ветеринарных наук Ф.Г.Терешков

I. ВВЕДЕНИЕ

ктуальность проблемы. Осноеой продовольственного обеспечения на-еления планеты является ускоренный рост продуктивности скота, ровень производства продуктов животноводства играет большую роль

экономическом развитии человечества,а животные яеляются националь-ым богатством каждой страны.

Ветеринарная наука и практика стаЕят СЕоей целью сохранение и величение поголовья .животных.максимальное снижение потерь от бо-езней,повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и ек-уск полноценных продуктов животноводства для питания населения и ырья для промышленности".

>та проблема неразрывно связана с обеспечением благополучия по важ-ейшим инфекционным болезням и,в первую очередь,по бруцеллезу животных.

Основу борьбы с бруцеллезом животных составляет система орга-изационно-хозякственных и ветеринарно-санитарных мероприятий, [аряду с общими профилактическими мероприятиями большое значение в :редупревдении и ликвидации бруцеллеза имеет специфическая профи-:актика. Ее проводят с помощью различных вакцин.

Во Есем мире наибольшее распространение получила жиеэя Еакиина :з штамма 19.

' животных,иммунизированных данной вакциной,снижается количество, I.затем совсем прекращаются аборты бруцеллезной этиологии, приос-'анавлиЕается распространение бруцеллеза е стаде. В то же время у животных, привитых вакциной из штамма 19, особенно у ревакциниро-¡анных коров, нетелей и телок старших возрастов, в крови длительно ¡охраняются антитела, что мешает выявлению больных животных. Остаюсь. в стаде, они служат источником распространения возбудителя ¡руцеллеза как Енутри хозяйства, так и за его пределами. В связи ! этим исследователи продолжают работы по изысканию новых вакцин [ля специфической профилактики бруцеллеза животных. ■

Значительный Еклад в изучение бруцеллеза, в совершенствование ¡етодов и средств диагностики и специфической профилактики внесли >течестЕенные ученые: П.Ф. Эцюдовский, 'С.Н. Шшелесский, М.К. Юс-;авец, Е.С.ОрлоЕ, П.А.Вершилова, А.В.Селиванов, П.С.Уласевич, П.А. Сосилов, К;В.Шумилов, А.А.Новицкий, П.А.Триленко и многие другие.

В литературе имеются сообщения о положительных результатах подкожной иммунизации- и реиммунизации телок и взрослого крупного рога того скота вакциной из агглютиногенного штамма 19 в пониженных доз; (1-3 Ш1рд. м.к.). По мнению отдельных ученых в двле успешной имму№ прооилайтики бруцеллеза крупного рогатого скота ванную роль играет конъюнктивальный способ.введения вакцин. В то же время, среди исследователей нет единого мнения об эффективности указанных методов в борьбе с бруцеллезом животных.

Для ветеринарной науки и практики важное значение имеет также вопрос о местном (секреторном) иммунитете. Местный специфический клеточный иммунитет обусловлен Т-клетками. Материальную основу специфического секреторного иммунитета составляют антитела, относящие« главным образом, к особой форме иммуноглобулина А. Особенно велика роль местного иммунитета при применении противобруцеллезных вакцин путем их аппликации на "конъюнктиву глаза. Однако этот вопрос при бруцеллезе жиеотных изучен крайне недостаточно.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований являл< изучение -в сравнительном аспекте иммуногенных, антигенных и вирулентных свойств различных вакцинных штаммов бруцелл на крупном рогатом скоте, овцах и. морских свинках, разработка наиболее эффективных схем. иммунизации животных против бруцеллеза и на основании этого усовершенствование существующей системы противобруцеллезных мероприятий. • .

В соответствии с поставленной целью были определены задачи изучить:

- напряженность и длительность иммунитета у крупного рогатого окота, овец и морских свинок, иммунизированных различными протиео-бруцеллезными вакцинами; ■

- патоморфологические и иммунологические, в том числе иммуномор-фологические, показатели у э$их животных;

- динамику иммуноморфологических изменений и иммунологических показателей у крупного рогатого скога и овец на подкожное введение стандартных доз вакцин из различных штаммов бруцелл;

- динамику серологических реакций у крупного рогатого скота после введения пониженных доз вакцин из агглютияогенных штаммов 19 и 104 М подкожным и конъюнктивальным методами;

- эффективность различных схем подкожной иммунизации стандартной (80 млрд. м.к.), подкожной и коныонкгивальной реиммунизации пониженными дозами (3 и 5 млрд. м.к.) крупного рогатого скота вакцинами

3 штаммов IS и 101 И е лабораторных экспериментах и в хозяйствах

различной1 эпизоотической ситуацией по бруцеллезу;

пато- и ишуномор'-ологическую, иммунологическую оценку эффектив-ости иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота при подокном введении пониженной дозы вакцины из штамма 19 .в лабораторных пытах и в производственных условиях;

- пато- и иммуноморФологическую оценку -эффективности иммунизации и еиммунизации крупного рогатого скота вакцинами'из штаммов 19 и

04 М конъюнктивальным методом в экспериментальных условиях в разе сроки после ревакцинации;

состояние общего (системного) и местного (секреторного) иымуните-а у крупного рогатого скота при различных методах ^ведения вакцинах штаммов бруцелл;

- иммунологическую,е том числе иммуноморФологическую, характерис-ику Феномена толерантности и роль ишунотолерантных животных в эпизоотологии бруцеллеза;

- стабильность свойств культуры вакцинного штамма 101 *,";

Научная новизна в сравнительном аспекте, с применением иммунологических, в .том числе яммуноморфологичесгагх, методов исследо-ания на крупном рогатом скоте, оЕцах и морских сгинках изучены актогенные,вирулентные,антигенные и иммуногенйые свойства Еакцин-ых штаммов В. abortus 19, 104 М, 82, B.melitensis Rev-T, ¡9/23, 56, " К-24", " H-I2". Впервые в России изучена патоморфоло-ическая и гистохимическая характеристика органов и тканей телок, аходащихся в состоянии иммунологической толерантности, определена 'трицательная роль таких животных при проведении протквобруцеллез-ых мероприятий. В сравнительном аспекте на основании результатов атоморфологических и иммуноморфологических исследований изучен Еак-днальный процесс у крупного рогатого скота, иммунизированного вак-¡инами из штаммов 104 М и 19 и у овец, прибитых вакцинами из штаммов 19, 101 М, Рев-I и 56. В лабораторных экспериментах и в кон-'ролируемом производственном опыте изучена эффективность иммуниза-щи крупного рогатого скота стандартной (80 млрд. м.к.) и реиммуни-кщии пониженной (3 млрд. м.к.) дозами вакцины из штамма 101 М при :одкожном введении и'показана эффективность этой вакцины в борьбе

: бруцеллезом в общем комплексе протиЕобруцеллезных мер.

•Лабораторными и производственной опытами с применением патомор-блогического и иммунологического, в том чиоле иммуноморфологичес-

кого /легодов показана эффективность конъюнкгивальной иммунизации и ретадунизации крупного рогатого скота вакцинами из штаммов 19 и 1041 в профилактике и борьбе с бруцеллезом животных.

В производственных условиях установлена эпизоотологическая эффективность. поникенных доз вакцвды из штамма 19 в борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота в комплексе общих протиЕобруцеллезных мер.

Разработана новая схема иммунизации и реюлмунизации крупного рогатого скота в'целью профилактики и борьбы с бруцеллезом, включающая иммунизацию телок 3-6 мес. возраста стандартной дозой (80 млрд, м.к.) вакцины из штамма 19 или»104.М, реиммунизацию их за даа месяца до осеменения (случки-) и далее, при необходимости, ежегодную ' реиммунизацию коров пониженными дозами (3 или 5 млрд. м.к.) этих же Еакцин подкожно или-конъюнкгивально,. "

В сравнительном аспекте изучены пато- и иммуноморфологические изменения и иммунологические показатели у крупного рогатого скота, иммунизированного и реиммунизированного вакцинами из штаммов 19, 104 M Е 82 по различным схемам и -затем зараженного (с целью проверки иммунитета) ЕИруленгной культурой бруцелл.

Практическая ценность. Предложен "¡эффективный метод иммунизации и решлиунизаццц крупного рогатого скота Е'акцинами из штаммоЕ 19 и I04M в пониженных дозах конъюнктивальным и подкожным способами в комплексе мер борьбы с бруцеллезом.

•Результаты нащих исследований учтены при разработке ряда нормативных и директивных документов: Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза 'животных (утверждена 1УВ Госагро-прома СССР 10.II.1988 г.); Наставления по диагностике бруцеллеза животных (утв. 1УВ Госагропрома СССР в 1982 г.); Наставления по применению вакцины живой сухой из штамма 104 M Бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота (утв. 1УВ МСХ СССР 28 мари а 1985г Технических условий (ТУ 46-21-44-85) Вакцина сухая живая из штамма Бруцелла абортуо 104 М*против бруцеллеза крупного рогатого скота (утв. 1УВ МСХ'СССР 14.03.85 г.); Временной инструкции по изготовлена и контролю живой сухой вакцины из штамма 104 M против бруцеллеза-кру: ного рогатого скота (утв. директорами ВИЭВ и ВГНШ1 03.85 г.); Наставления по применению вакцины живой сухой из штамма 19 Бруцелла абортуо в малых дозах против бруцеллеза крупного рогатого скота (в порядке производственного испытания) (утв. ГУВ Госагропрома СССР 21.11.86 г.); Правил карантина на фермах, в хозяйствах.населенных пунктах,районах,неблагополучных по заболеванию сельскохозяйствен-

ых животных бруцеллезом и туберкулезом (уте. 1УВ Госагропрома СССР ¡0.01.87 г.); Комплексных мероприятий по оздоровлению кивотноводства страны от бруцеллеза и туберкулеза (НТС Госагропрома СССР, 1088 г.); Наставления по применен™ вакцины живой сухой из штамма 19 Бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота (утв. ГУВ Госагропрома СССР 10.II.88 г.); Рекомендаций по конъюнктиЕальному способу реиммунизации крупного рогатого скота протиг бруцеллеза вакцинами из штаммов 19 и 101 М (утв. директором ВИЭВ 28.11.88 г.); Научно обоснованной системы мероприятий по профилактике и оздоровлению поголовья сельскохозяйственных животных-от бруцеллеза (одобрены ОНКВет ВЛСШЧЛ 1990 г.); Методических рекомендаций по иммунизации против бруцеллеза нетелей -и половозрелых телок (одобрены рабочей' ко:.;..сс::ей " Профилактика бруцеллеза и туберкулеза ;:сквотных " Отделения ветеринарной медицины ВАС}НИД 28.06.90 г.); Наставления по применению киеых сухих вакцин из штампов 19 и 104 М Бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого ^кога конъюнктивальным методом (в порядке, производственного опыта ) (уте. директорами ВИЭВ и ВПКИ 30.06.89 г.); Инструкции по изготовлению и контролю вакцины сухой яиеой из штамма Бр. абортус 104 М против бруцеллеза крупного рогатого скота (утв. Г/В Госагропрома СССР 21 июня 1989 г.); Технических условий (ТУ 10-1989-89) Вакцина живая сухая из штамма Бруцелла абортус 104 М против бруцеллеза крупного рогатого скота (утв. - ГУВ Госагропрома СССР 21.06. 89 г.); Методических рекомендации по иммунизации .крупного рогатого скота против бруцеллеза конъюнктиеэльным методом (одобрены Ученым Советом ВИЗВ, протокол ИЗ от 1950 г.); Программы испытания вакцины из штамма 104 ".1 против бруцеллеза крупного рогатого скота в экспериментальных и производственных условиях (утв. директорами ВИЗВ и ВГНКИ 7.08.84, г. и одобрена Секцией " Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней животными Бюро Отделения ветеринарии ВАСЖ1Л 5.06.84 г.); Программы испытания вакцины из штамма 19 в мялок дозе против бруцеллеза крупного рогатого скота в экспериментальных и производственных условиях (одобрена Бюро Отделения ветеринарии ВАСЖ1Л 20.11.86 г. и согласована с зам. нач. ГУВ Госагропрома СССР 11.86 г.); Наставления по применению вакцины жиеой сухой против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма Бруцелла абортус 19 (утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 26.02.9Пг.).

. По разработанной нами_схеме применения вакцин из штаммов 104 М и 19 от бруцеллеза крупного рогатого скота оздоровлены II неблагопо-

лучных хозяйств е Ульяновском районе Карагандинской области Казахстана, три - в Каспском районе Грузии, четыре - в Кеменском районе Киргизии; ше'сгь хозяйств - е Нарпайском районе Самаркандской области и одно' хозяйство - е Хивинском районе Хорезмской области Узбекистана.

Апробация работы. Материалы данной работы доложены на Всесоюзной конференции "состояние и перспективы научных исследований по" диагнос тике, профилактике туберкулеза'и бруцеллеза и меры борьбы с этими бо лезнями сельскохозяйственных животных" (Омск, 1980г.); на Республиканской научно-производственной.конференции "Современные проблемы профилактики и лечения зоояозных заболеваний и лейкозов" (Гродно, ■ 8-9 сентября 1982 г.); на 3-й Республиканской научно-практической конференции "Современные проблемы профилактики зоонозных болезней и пути их решения" (Гродно, 20-21 мая 1987 г.); на Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы-профилактики бруцеллеза и организации медицинской помощи больным" (Новосибирск, 24-25 10. 1989 г.); на научной конференции " Проблемы изыскания, синтеза и производства новых препаратов для ветеринарии" (Самарканд, 1994 г.); на научно-практической конференции "Орновные научные'исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных жиеотных, профилактика и ор. ганизация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири" (Новосибирск, 1995 г.); при ежегодных отчетах лаборатории эпизоотологии диагностики и профилактики бруцеллеза на заседании Ученого Совета ЕИЭВ (1980-1995 гг.); на заседании Ученого Совета ВИЭВ 29.12.90 г.; на межлабораторном совещании сотрудников лабораторий: эпизоотология, диагностики и профилактики бруцеллеза; эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и парагуберкулеза; иммунологии и биотехнологии; эпизоотологии, диагностики и профилактики болезней овец; бактериологии с музеем типовых культур; эпизоотологии, диагностики и профилактики патологии воспроизводства животных и сектора патомор-фологии; комплексной лаборатории по изучение лейкозов и злокачественных опухолей с.х. животных ШЭВ и лаборатории контроля, стандартизации и сертификации бруцеллезных, кампилобактериоэных и иерсиниоз-ных препаратов ВГНКИ 3.06.94 г., протокол №5.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 34 научны® статьи, изложенные в журналах "Ветеринария", "Животновод", в грудах ВИЭВ и ВПШ, в материалах Всесоюзных и Республиканских научных конференций и других научно-производственных изданиях.

Основные положения диссертационной работы,выносимые на защиту:

- сравнительные патоморфологические изменения и иммунологические, в гом числе иммуноморфологические, показатели у морских свинок,крупного рогатого окота и овец в динамике расселяемое«! и приживаемости хультур вакцинных и вирулентных штаммов бруцелл;

- эффективность иммунизации и реишунизации крупного рогатого скота юниженными дозами вакцин из штаммов 104 Ы и 19 .при подкожном их ведении патоморфологическим и иммунологическим методами в экспери-лентальных и производственных.условиях;

- оценка эффективности конъюнктивального способа'иммунизации и реим-гнизации крупного рогатого скота вакцинами из штаммов 104 М и 19 па-гоморфологическим и технологическим методами в экспериментальных и троизводственных условиях;

- иммунологическая толерантность при бруцеллезе крупного рогатого зкота;

- изучение в сравнительном аспекте изменений у животных,. иммунизированных стандартными дозами протиЕОбруцеллеэных вакцин и инфицированных вирулентными культурами бруцелл патоморфологическим и иммуно-югическим,в том числе 'иммуноморфологическим.методами;

- состояние системного и местного иммунитета у крупного рогатого жога,привитого различными щютивобруцеллезными Еакцинами подкож-■ шм и конъюнктивальным способами в принятых и пониженных дозах:

- оценка эффективности иммунизации крупного рогатого скота вакциной 13 штамма 104 М (е том числе в пониженных дозах) в хозяйствах с раз-шчной•эпизоотической обстановкой по бруцеллезу и различными спо-¡обами ведения животноводства;

- изучение динамики образования антител у морских свинок и рогатого ¡кота, иммунизированных противобруцеллезными вакцинами;

оценка иммуногенности,вирулентности и безвредности вакцинных штам-юв бруцелл патоморфологическими,гистохимическими и иымунологичес-аши методами исследований;

- роль реиммунизации крупного рогатого скота вакциной из штамма I04M» • сроки выживаемости культуры штамма IM М в сухой вакцине.

-Объем й структура диссертации. Диссертация изложена на 603-;:. ¡границах машинописного текста.иллюстрироЕана 68 таблицами и 155 рп-¡унками. Она включает введение,обзор литературы,собственные исоледо->.ания, обсуждение результатов исследований,выводи»практические пред-южения и список использованной литературы. Содержание соответствует оглавлению.Список использованной литературы включает 627 работ Ьтп-

явственных и зарубежных авторов.

••2.. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Материалы и методы исследований. Исследования проведены е 1980-I9lJ4 гг. в лаоораторки эпизоотологии,диагностики и профилактики бруцеллеза ВИЗВ.на опытной, базе Вышневолоцкого отдела ЗИоЗ.-е хозяйствах Республик Казахстан.Грузия»Киргизотан и Узбекистан. Соис-полвигеля;.'л отдельных разделов 'делились профессор К.В.ЕУшлов (ВПК2-1), -сотрудники лаборатории эпизоотологии,диагностики и профилактики бруцеллеза ВИЭВ, профессор' В.А.РомахоЕ,кандидат с.х. наук. Р.Г.Ягудин и к.в.н. В.И.Мельниченко.

■ Пато- и иммуноморфологические исследования проводили при консультации процессора В.А.Е!убина и "k.e.ií. О.В. Якушевой.

Исследования по вопросу системного и местного иммунитета проводили с профессором Ю.Н.оедоровым и при его консультации. • В работе изложены материалы по изучению: .' . - сравнительных патоморфологических и гистохимических изменений, и мунологкческих показателей, сроков .приживаемости и расселяемости вамцшных и вирулентных штаммов бруцелл у крупного рогатого скота, овец и морских свинок;

- сравнительных Ъатоморфологических изменений, иммунологических, в том числе иммуноморфологических, показателей у иммунизированных различными вакцинами, а затем инфицированных.бруцеллами морских ев нок,крупного рогатого скота и овец и у жиеотных, зараженных вирулентной культурой бруцелл без иммунного фона;

- динамики антител у крупного рогатого скота,овец и морских свинок иммунизированных"противобруцеллезными вакцинами и у животных, зара

женных вирулентной'культурой бруцелл, в сравнительном аспекте;

- стабильности свойств культуры вакцинного штамма 104 М путм пятикратного пассирования, через организм нетелей; по изучению роли ре-ишункзации крупного рогатого скота против бруцеллеза; '

- оценки,на основании данных иммунологического и патоморфологичес-кого исследований в экспериментальных условиях,эффективности перви ной иммунизации и реиммунизации крупного рогатого, скота пониженным дозами вакцин из штаммов 19 и 104 М при подкожном их введении;

- эффективности иммунизации и реиммунизации крупного рогатого ckoi вакциной из штамма 19 в пониженных дозах при'подкожном ее введении производственных условиях; '

• эффективности иммунизации крупного рогатого скота вакцинол из штам-! ;а 104 М (в том числе в пониженных дозах) в4хозяйствах с различной |Пизоотическон обстановкой по бруцеллезу;

■ в экспериментальных условиях эффективности конъюнктивальной иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота ваттной из штамма 9

• результатов испытания конъюнктивального метода реиммунизации круп-юго рогатого окота в производственных условиях;'

• состояния системного и местного иммунитета.у крупного рогатого :кота при различных методах введения противобруцеллезных вакцин;

■ иммунологической толерантности при бруцеллезе крупного рогатого ¡кота;

- перспективных схем иммунизации крупного рогатого скота против ¡руцеллеза по материалам патоморфологаческих, иммунологических, в :ом числе иммуноморфологичвских, исследований.

Патоморфологически и иммуноморфологически исследовали патологи-(еский материал от 259 голов крупного рогатого скога, 184 овец и !95 морских свинок.

Вирулентные, свойства вакцинных и вирулентных штаммов бруцелл в ¡равнигельном аспекте изучали в опытах на 525 морских свинках, 42 'оловах крупного рогатого скота и 54 ОЕцах.

Динамику антител у иммунизированных против бруцеллеза животных шучали в опытах на 427 морских свинках, 123 гол. крупного рогатого ¡кота и 54 овцах. Эффективность вакцин из штаммов 19 и 104 М в пожженных дозах при подкожном введении'в экспериментальных условиях 1зучали на 5.9 телках. Эффективность первичной иммунизации и реим-1унизации крупного рогатого скога вакциной из штамма 19 в понижен-шх дозах при.подкожном ее введении в производственных условиях про-юдилй в 12 хозяйствах Нарпайского района Узбекистана, на 11591 гол. крупного рогатого скота. Эффективность иммунизации вакциной из штамма 104 М- (в том числе в пониженных дозах) в производственных усло-эиях изучали в 35 хозяйствах 3-х районов (Ульяновского Карагандойс-сой области Казахстана, Каспского района Грузии, Кеменского района щгизии) на 72384 гол. крупного рогатого, скога.

Иммунологическую толерантность при бруцеллезе изучали в экспери-«енте на 9 телках и на 217 телках в производственных условиях (в 3-Х хозяйствах). Эффективность конъюнктивального метода иммунизации вакциной из шгамма '19 в' экспериментальных условиях изучали в

опытах на 79 телках. Состояние системного и местного иммунитета пр ■различных методах введения Еакцин изучали в опыте на 10 телках. Ко центрацию иммуноглобулинов классов А, о , М. определяли р-адиальной иммунодиффузией (РИД) по Манчини. КонъюнктиЕальную иммунизацию и р иммунизацию крупного рогатопэ скота вакцинами из штаммов 19 и 104 в производственных услоеиях изучали на 22271 гол. в 7 хозяйствах.

При проведении экспериментальной части работы было использовано • 12 штаммов бруцелл (5 - вида абортус и 7 - мелитензис), в том числ 8 вакцинных и 4 вирулентных.

Изучение- культурально-пМоро;|Ологи.ческих,тинкториальных,агглютина-бельных и других сеойств культур бруцелл проводили по методикам,' рекомендованным комитетом экспертов по бруцеллезу Международного к митета по номенклатуре бактерий ©ДО/ВОЗ (6-й доклад, 1986 г.). Для определения степени диссоциации культур использовали реакцию термо преципитации, пробу на агглютинации в водном растворе акрифлавина (1:1000) и окраску колоний по Уайт-Вялсону. Культуру каждого из из; чаемых штаммов засевали-на МПП1ТА в чашках Петри'с таким расчетом, ' чтобы получить рост отдельных ограниченных друг от друга колоний. : росшие колонии бруцелл просматривали визуально, под малым увеличением микроскопа или через лупу при естественном или искусственном освещении в прямом и косопроходащем свете. Отмечали колонии бруцел. отличающиеся по форме и прозрачности, затем их окрашивали раствора кристалл-виоле та (1:2000) длй дифференциации з -и. я-форм. Поел! этого проводили отвивку отдельных колоний. Выросшие из отвитых колоний популяции бркцелл изучали на способность агглютинации со специфическими антибруцелла сыворотками, в пробах на диссоциацию, на образование » на чувствительность к анилиновым красителям, пеш циллину, эритриголу и специфическому фагу " Тб При определении чувствительности бруцелл к пенициллину культуры двухсуточно/о ростг на агаре смывали Физиологическим раствором,доводили до концентрации I млрд. и по ода011 стандартной бактериологической петле (диаметр 2 мм) высегали на поверхность МПП1ТА,содержащего 0,5; 5; 10 и 50 единиц антибиотика в одном мл. среды. Посевы, выдерживали в термостате при 37-38°С в течение 4-х суток. Учет роста контролировали через каждые 48 часов. .

Экспериментальную часть работы на морских рвинках,крупном рогатом скоте и овцах проводили в лабораторных условиях. При этом, иммунологическим, в том числе иммуноморфологическим, патоморфологи-ческим 'и другими методами изучили.антигенные, вирулентные, иммунот пне и другие сгопотш культур бруцелл вида абортус штаммов 19, 104 И

2, 54, 3-335 и Б. мелитензис штаммов Рев-1^ 56 (К-56), НевскиЙ-12, 9/23, К-24, 498 и 499.

Вакцинацию, заражение животных вирулентной культурой бруцелл с елью проверки иммунитета, отбор проб сыЕороток крови для сероло-ического и патологического материала для бактериологического, па-оморфологического и иммуноморфологичёского и других исследований, осев материала на питательные среды, идентификацию и дют^еренциа-ию выделенных культур микроорганизмов проводили по общепринятым ¡етодикам. В качестве диагностических гестов в экспериментах и про-:зводственных опытах в хозяйствах при исследовании сыворотки крови ивогных применяли РШ.РА (классическую), пластинчатую РА, РСК.РДСК. \шерчувстЕительность замедленного типа (ГЗТ) изучали путем поста-ювки пальпебраяьноп аллергической пробы с бруцеллином ВИЭВ.

Патологоанатомическог^у,гистологическому и гистохимическому ис-¡ледованиям подвергнуты лимфатические узлы и внутренние, органы. Патологический материал фиксировали в ГО^-ном водном растворе Heir— грального формалина и жидкости Карнуа, с последующей заливкой в па-)афин или целлоидин-парафин. Гистосрезы обрабатывали гематоксилин-юзином, метиловым зеленым, пиронином (по Браше), на реакцию ШИК, ia ДНК, железо (по Перлсу), соединительную ткань (по Ван-Гизону), ретикулиновые волокна (по Футу), гликоген и нейтральные мукополисаха! зиды (по Шабадащу) и на кислые мукополисахариды (в реакции метахра-лазии толуидиновым синим).

При бактериологическом исследовании от убитых морских свинок , элали высевы из 8 лимфатических узлов и 7 органов, от овец - из 2025 лимфатических узлов и 6-7 органов, от крупного рогатого скота -30-40 объектов. Из кавдого объекта материал высевали в одну про-рку МППГГБ и две пробирки МШПТА. За посевами наблюдали 25-30 дней, читывали коэффициент высеЕаемости культур из органов морских свинок а индекс веса селезенки путем деления веса селезенки на вес животного, условно умноженного на 1000.

Для сравнительной оценки вирулентности изучаемых культур в качестве стандарта брали Еакцинный штамм 19,как слабовирулентный в трошении морских свинок и рогатого скота,. При суждении о вирулентг ости культур бруцелл учитывай! данные о местной и общей реакциях рганизма животных, результаты патоморфологических и бактериологи-еских исследований. Иммуногенезе свойства штаммов изучали на морских винках и рогатом скоте. Перед началом опытов их исследовали на бру-

целлез пг разбивали на группы-аналоги с оставлением контрольных (ин-тактных) животных.

.Количество бруцелл в кавдой вакцине определили по бактерзйному стандарту мутности'. Для иммунизации морских свинок,крупного рогатогд'скота и овец вакцины'готовили на стерильном физиологическом растворе или на специальном растворителе для сухих живых бруцеллезных вакцин и контролировали на чистоту и безвредность общепринятыми .методами.

Проверку иммунитета у киеотных во гсех опытах проводили путем прямого заражения культурами вирулентных штаммов бруцелл,минимальны! инфицирующие дозы которых'(ИД^дд) были предварительно оттитрованы на. животных соответствующего вида и возраста. Проверку иммунитета у привитых однократно животных проводили 10 минимальными заражающими дозами,а у ревакцинированных - в более жестких условиях - 50-60 заражающими дозами этой культуры.

Морских свинок и овец заражали под коку, а крупный рогатый скот - путем нанесения суспензии культуры бруцелл заражающего штамма на конъюнктиву. Изучение эффективности.иммунизации и реимыунизации крупного рогатого скйта вакциной из штамма 19 в пониженных (3 млрд. м.к.) дозах проводили в контролируемых производственных опытах в хозяйствах Республик Казахстан и Узбекистан (по одному району). В опытах использовали сухую вакцину из штамма 19, полученную из ВГНКЙ.

'Производственное испытание конъюнктивального метода иммунизации крупного рогатого скота вакцинами, из штаммов 19 и 104 М проводили в хозяйствах Ульяновского района Карагандинской области Казахогана, в колхозе " Хива " Хивинского района и колхозе, им. Кирова Шавагскогс района Хорезмской области Узбекистана.

Производственное испытание вакцины из штамма 104 М проводили в , благополучных и неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах Казахской и Грузинской Республик (по одному району), и Киргизии (4 хозяйства). Дяя иммунизации животных против бруцеллеза использовали сухую живую вакцину из штамма 104 М, производства Алма-Атинского биокомбината. Для иммунизации телок 3-6 мео.'возраста вакцину применяли в полной дозе (80 млрд. м.к.), а для ревакцинации коров- в пониженной дозе (3 млрд. м.к.) в соответствии о Наставлением по применению вакцины сухой живой из штамма 104 М Бру-целла абортус против бруцеллеза крупного рогатого окота (в порядке производственного испытания),' утвержденным ГУВ МСХ СССР 28 марта 1985 г. Полученные данные подвергали тщательному анализу и сгатисти-

ческой обработке с целью установления их досгоЕе-рности (И.А:0йеин, 1959; А.Т.Усоеич, П.Т.Лебедев,1970; Г.Ф.Лакин, 1973; Дж.Поллард, 1982; Р.Рунион,1982). Цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

Патоморфологические и гистохимические изменения,иммунологические показатели,сроки приживаемости и расселяемости культур вакцинных И вирулентных штачмоЕ Оруцелл у морских сеинок.

В опытах на 527 морских свинках патоморгологическим,иммунологическим, в той числе иммуноморфологйЧеским, методами е сраЕНительиом аспекте изучали приживаемость, расселяемость, реактогенность культур Еакцинных (Б.абортус 19 и 104 М) и вирулентных (Б. абортус &-335 и 99 М) штаммов бруцелл.-

В результате исследований."'было установлено, что на 15-й и Я8-й • дни после иммунизации I тыс. й I млрд. м.к. культуры указанных вакцинных штатов бруцелл широко расселяются в организме морских сеинок. Начиная с 64-го дня, организм животных постепенно освобождается от культур бруцелл и к 12|-му дню ео Есех случаях получены отрицательные результаты ЕысеЕОЕ.

Клеточно-проли<гератиЕные 'реакции в лим^оидны'х органах к 30-40-му дню имели наиболее выраженную картину; а пик плазмоцитзрной реакции наступал на 15-й день после ЕЕедевия культур вакцинных штзммое бруцелл. У морских' свинок, привитых вакциной из штамма Т04 ГЛ, иммуно-морфологические изменения были несколвко сильнее выражены, чем у жиеотных, иммунизированных вакциной из'штамма 19. Вирулентные культуры Э-335 и 99 М у морских сеинок пер'систируют более продолжительное время (до 180 дней), чем культуры Еакцинных штаммов 19 и 104 М (до 120 дней).

Инфекционный процесс у морских свинок, зараженных культурами Э-335 и 99 М, характеризовался слабо выраженной плазмоцитарной реакцией, глубокими дистрофическими и некротическими изменениями у животных и - носил более стойкий, длительный характер, по сравнению с -вакцинальной реакцией. '

Патоморфологические изменения, иммунологические показатели, сро-" кй прижигаемоети и расселяемости культур вакцинных штаммоЕ ору-целл у крупного рогатого скота. 1

В опытах на 125 телках изучали в сравнительном аспекте вирулентные свойства вакцинных (Б. а^ортус 19, 104 И, 82, Б. мелитензис Рев-

игаммов бруцелл.. Животным-культуры бруцелл вводили в разных дозах . и в течение £4-36 дней изучали их реактогенность, приживаемость и расселяемость, а также патоморфологические и иммун оморфологические изменения.у привитых животных.

Исследования показали, что культура вакцинного штамма 104 М в пер-ч Еые 38 дней после введения расселяется в организме телок более широко, чем культуры штаммов РеЕ-1, 19 и 82. В течение 86 дней происходит полная элиминация бруцелл вакцийных штаммов из организма иммунизированных животных.

Иммуноморфологические изменения наиболее сильно были Еыражены у телок, иммунизированных Еакцкнами из штаммов Рев-1 и 104 М.

Проведенные исследования показали, что ьсе изучаемые культуры, вакцинных штаммов бруцелл являются для телок слабовирулентными, так как они .не вызывали' в лимфатических уздах и паренхиматозных органах изменений ,лхарактерных для бруцеллеза и организм аивотных в течение 86 дней -полостью'освобождается от культур, введенных в больших дозах (100 млрд. м.к.).

Патоморфологические изменения, иммунологические показатели, сроки расселяемости и приживаемости культур вакцинных и вирулентных штаммов оруцелл у овец.

Б опыте на 1)4 ярках изучали в сравнительном аспекте иммунологические, в том числе иммуноморфологические, показатели, сроки расселяемости и приживаемости культур вакцинных (Б. аборгус 19, 104 М, Б. мелитензис Рев-1, 56) и вирулентного (Б. мелитензис 498) штаммов бруцелл. ,

Ярок иммунизировали: культурами штаммов 19, 104 М, 56 в дозе 40 млрд. м.к.,, Рев-1 - в дозе 3 млрд. м.к. и вирулентного штамма 498 также в дозе 3 млрд. м.к. В качеотве контроля использовали пат-материал от трех интактных ярок аналогичного возраста, порода и упитанности.

Исследования показали, что культура бруцелл в организме овец расселяется очень быстро. Так, через 6 дней после введения культур от всех ярок были Еыделены бруцеллы, а при исследовании на 30-й день

- от 33,3% отеотных, привитых вакцинами из штамм'ов" 104 М, Рёв-1 и 56 и от 66,6^ животных, прибитых вакциной из штамма 19. Все три ярки, зараженннекультурой штамма 498, к этому сроку оставались инфицированными.

При исследовании Еакцинироганных овец через 87 дней культур бруцелл ни в одном случае выделено не было.

При гистологическом исследовании наиболее выраженные изменения наблюдали на 15-й день после вакцинации, в период широкого обсеменения организма жиеотных бруцеллаыи.'

Вакцины из штаммов 104 М и-Рев-1 обусловливали более выраженную иммуноморфологическую реакцию, чем вакцины из штаммов 19 и 56. При этом'ослабление плазмоцитарной реакции на 30-;' и 87-е сутки шло менее интенсивно у ярок, привитых двумя первыми вакцинами. К .

87-му дню после иммунизации вакцинами из изучаемых штаммов бруцелл, когда из паренхиматозных органов и лимфатических узлов животных культуры бруцелл не высевались, отмечали значительный спад плазмоцигарной реакции. При этом количество плазматических клеток было выше нормы (вакцины из штаммов Рев-1, 101 М и 56) или приближалось к норме (вакцина из штамма 19).

Наиболее выраженная плазмоцитарная реакция' наблюдалась у овец, привитых вакциной из штамма РеЕ-1. Пик ее в регионарных лимфоузлах этих животных наступал на 15-й день после иммунизации,-когда количество плазмобластов было 34,3 ^ 0,88, незрелых плазмоцитов - 89 ± !

Зрелых плазмоцитов - 81 - 5. Однако, наибольшее количество плазмобластов у этих овец находили в регионарном лимфоузле на 6-Й день после' прягпкш (58,3 - 3,7), что в 25,раз больше, по сравнению с контролем. По выраженности плазмоцигарной реакции у вакцинированных овец, за Еакциной из штамма Рев-1 идет вакцина из штамма 104 М. Плазмоцитарная реакция у овец, иммунизированных вакциной из слабо-агглюгиногенного штамма 56,отличалась от реакции на другие вакцинные препараты тем, что она медленно нарастала и также медленно угасала.

Все цифровые данные, за исключением отдельных ( Р/10,1 и 0,2), достоверны ( Р^. 0,05 и 0,001).

Инфекционный процесс у овец, зараженных вирулентным штаммом Б. мелитензис 498, характеризовался более глубокими изменениями, чем у жиеогных, иммунизированных вакцинами из штаммов 19, 104 М, Рев-1 й-56. Клеточно-пролиферативные процессы в лимфатических узлах и

паренхиматозных органах носили более Еираженный характер. Часто формировались гранулемы. В состав гранулем еходйли, е основном, гистиоциты; ретикулярные метки, эпителиоиды,-единичные нейтрофильные

* ' __

и аозинофильные лейкоциты, а такие плазматические клетки. В центре отдельных гранулем наблюдали"кариорнксис и некроз клеточных элементов. .

Анализируя результаты данного опыта, можно сказать, что самыми реактогенныш и Екрулентными из изучаемых культур бруцелл для овец являются Б. мелитензис 498 (вирулентный), Б. мелитензис Рев-I и Б. аборгус 104 Г.! (вакцинные). " .

Определение минимальной инфицирущей дозы вирулентной культуры ,В. abortus 54. Одним из условии при проведении экспериментальных работ, связанных с определением напряженности и продолжительности иммунитета^ создаваемого у животных тем или иным вакцинным препаратом, является установление шнимальной.инфицирующей дозы, вызывающей заражение •100$ '(ВД100) интактных животных, .аналогичного Еозраста и физиологического состояния. ,

В связи с этим нами был проведен опыт на 10 нетелях для определения минимальной заражающей дозы вирулентной культуры B.abortaa 54.•Животных разделили на пять групп (по два je каздой) и заразили указанной культурой в дозах: 50, 250 тыс., 1,25, 6,25, 7,5 млрд. м. к. Через 37-дней.после' заражения нетелей убили и провели бактериологическое исследование.

Результаты исследования показали,что минимальная заражающая доза штамма 54 составила 250 тыс. м.к. '

При бактериологическом исследовании патматериала от 10 нетелей, их телят и плодов было выделено всего 44 культуры, которые огнеоены к роду Brucella , виду abortus.

При гистологическом исследовании патмаз.¿риала от'нетелей, зараженных вирулентной культурой в. abortua 54, в лимфатических узлах, паренхиматозных органах и матке наблвдали глубокие изменения с формированием множественных бруцеллезных- гранулем с некрозом в центре. Эти данные свидетельствуют о высокой остаточной вирулентности для крупного рогатого скота титруемой культуры Б. абортуо 54.

Сравнительные патоморТюлогические изменения и иммунологические, в том числе иммуномороологические, показатели у иммунизироЕан-ных различными вакцинами и инфицированных бруцеллами морских свинок и у животных, зараженных вирулентной культурой оруцелл без иммунного (¿юна.

и опытах на 67 морских свинках изучали иммуногенные свойства культуры штамма 104 М, выращенной из сухой вакцины. Вакцину вводили подкожно в области паха в дозе I млрд. м.к. Иммунитет проверяли через 90 дней после вакцинации путем.прямого заражения животных вирулентной культурой Б.абортус 54'-в дозах 50 м.к. (10 ИД^оо^ (опыт Н) и 25 м.к. (5 ПД100) (опыт ^2).

При этом установлено,что в первом опыте количество иммунных морских сеинок составило 89,4$, во втором опыте - 100$.

При.гистологическом и гистохимическом исследовании патологического материала от вакцинированных морских свинок, противостоящих заражению вирулентной культурой бруцелл, установлены однотипные изменения, характерные для вакцинального процесса. 'Отчетливо выступали пролифератиЕНо-гиперпластические изменения в лимфоидных органах, хорошо выраженная' плазмоцитарная реакция. У Есех животных контрольных групп при бактериологическом исследовании установлен генерализованный инфекционный'процесс, а при иглмуноморфологическом исследовании - слабо Еыра^енная плазмоцитарная реакция в лимфатических узлах и селезенке, глубокие некротические и дистрофические изменения, диффузные гранулематозные явления и.нарушения обменных процессов.

Сравнительные патоморфологические.изменения и иммунологические, в -том числе иммуноморуологаческие, показатели у ишунизирован-- ного различными вакцинами, а затем инфицированного оруцеллами крупного рогатого скота и у животных, зараженных вирулентной культурой оруцелл оез иммунного фона.

. В опыте на 20 телках 3-6 мес. возраста в сравнительном аспекте изучали иммуногенные свойства вакцин из штаммов Б.абортус 19, 104 М в дозе 80 млрд. м.к. и Б. мелитензио РеЕ-1 в дозе 10 млрд. м.к.

Исследования показали< что через 12'мес. после вакцинации имму-ногенность вакцины из штамма 19 составила 80$, а шйлмов 104 М и .' Рев-1 - 100$. Все контрольные телки заразились (генерализованная инфекция). '

Иммуноморфологическая реакция была сильнее выражена у животных,

привитых вакцинами из штаммов 104 М и Рев-1 и затем зараженных вирулентной культурой бруцеАл и значительно слабее выражена | телят, иммунизированных вакциной из штамма 19. У телок контрольно группы, зараженных вирулентной культурой бруцелл без' иммунного Фона и у одного животного, у которого был прорыв иммунитета (вакцина из штамма 19), в лимфатических узлах и " паренхиматозных органах находили боле выраженные изменения, чем это наблюдали у иммунных телок. Нередко отмечали резкре истощение дал' оцпг&'лн ткани глякотвых гяжей и за« мецешхе их иекоах^ихили. Прп отоа плаамоцитарвая реакция была выражена значительно слабее.

В другом опыте шлмуногенные свойства Еакцины из штамма 104 М . изучали на 14 разновозрастных телках.

При проверке иммунитета через 2 года и 3 мес. после однократной иммунизации в 5-6 мес. возраоте экспериментальному заражению противостояло 50$ животных. В группе животных, однократно привитых в возрасте 18 мес. , при заражении через 14 мес., иммунных было 60$. . •Все 5' телок контрольной группы заразились.

В данном опыте низкая иммуногенность вакцины из штамма 104 М в первой группе обгоняется тем, что срок'после иммунизации до заражения (2 года и 3 мес.) был слишком большой ц иммунитет у'подопытных- животных к этому времени ослабевает.

В третьем опыте характер -иммуномопфологических изменен:»!, продолжительность и напряженность иммунитета после прививки вакцинами из ыта::лоЕ 19 и 104 1,1 е сравнительном аспекте изучали на 50 телках 2-7 мес. Еозраста.

Иммунитет проверяли через 400 и 581 день после- вакцинации путем прямого заражения вирулентной культурой Б. абортус' 54 в дозе 200 млн. м.к. Убой подопытных и контрольных коров для бакгериолотгчес-кого и иммуноморфологического исследований проводили.через 33-37 дней после заражения вирулентной кулвтурой Зруцелл.

Исследования показали, что через 400 дней после иммунизации из 7 коров группы №1, привитых вакциной из штамма 19 в дозе 20 млрд. м.к., иммунными оказались дае головы (28,6%), а из 6 животных, иммунизированных той же гакциной в дозе 60 млрд. м.к., заражению противостояли 2 коровы (33,3$) или'-в среднем по двум дозам 30,9$. Из животных гр. ^2 (вакцина из штамма 104 М), привитых дозами 20 и 60 млрд. м.к., заражению противостояло соответственно из 8 гол. -

5 (62,5$) и из 7 - 3 (42,9/2) или в среднем-по обеим дозам - 52,7$.

Таким образом, вакцина из штамма 104 М вызвала у привитых животных более напряженный иммунитет (52,7$), чем Еакцина из штамма [9 (30,9/2).

К 581-му дню после иммунизации у Есех 14 коров из. групп Щ и $2 шмунитет уже был утрачен и поэтому все животные после введения вирулентных бруцелл не противостояли заражению..-

В четвергом опыте иммуноморфологкческие изменения и напряженность иммунитета изучали на II телках 5-6 мес. Еозрасга, привитых вакциной из штамма 104 1,1 в дозе' 80 млрд. м.к.

Исследования показали, что количество иммунных жиеотных через 225 дней после вакцинации составило 83,3/2 (5 гол. из 6).

В пятом опыте на 45 телках 6-7 мес. возраста изучали иммуноген-ные свойства Еакцин из штаммов Б. мелитензис Рев-1, Б. абортус 104 М в дозах 40 и 100 млрд. м.к. и Б. абортус 82-е дозе 100 млрд. м.к. Иммунитет проверяли через I год 8,5 мес. после иммунизации.

Исследования показали, что вакцина из штамма Рев-1 в дозе 40 млрд. м.к. вызгала стойкий иммунитет у большего количества животных (33,3/2), по сравнению с Еакцин ой из штамма 104 М (14,3/2), примененной в той же дозе. В группах телок, привитых большими дозами этих штаммов (100 млрд. м.к.)«противостояло экспериментальному заражению' почти равное количество животных (Еакцина из штамма Рев-1 -50$, 104 М - 55,3$). Вакцина из штамма 82 оказалась малоиммуноген-ной - экспериментальному заражению противостояло только 10$ пркЕктых жиеотных.

. Имцуноморфологическое исследование .патологического материала от 120 телок и коров (по четырем опытам), зараженных вирулентной культурой Б. абортус 54 после иммунизации Еакцинами из штаммов 19, 104М, 8*2 и Рев-1 показало, что клеточная реакция, особенно плазмоцитар-ная, сильнее Еыражена у крупного рогатого скота, прибитого вакцинами из штаммов Рев-1 и 104 М, по сравнению с вакцинами из штаммов 19 и82.

Таким образом,исследования 140 гол. крупного рогатого скота в йгГти опытах показали, что наиболее иммуногенными для этого вида животных из числа изучаемых являются вакцины из штаммов 104 ГЛ и Рев-1.

Сравнительные патоморфологические изменения и шмунологичес-кие, в том числе цлмуноморшологические, показатели у вакцинированных различными вакцинами, а затем инфицированных оруцел-лами ОЕец и у животных.,зараженных вирулентной культурой ору-целл без иммунного фона..

Иммуногенные свойства различных вакцин в сравнительном аспекте изучали в опыте lia 223 ярках. Вакцины из штатов 104 M и Рев-1 (убитая Еакцйа) животным вводили в дозе 10 млрд. м.к., 19 и 89/23 - 20, К-24 и H-I2 - '40, Рев-1 - 2, 56 - 32 млрд. м.к.

Иммунитет проверяли через 4 мес. 23 дня после вакцинации. Убой жиеотных для бактериологического и иммуноморфологического исследований проводили через 37-45 дней после, заражения.

.Исследования показали, что наиболее.иммуногенными для овец являются вакцины из штаммов Рев-1, 89/23 и 104 М. Заразились все 28 животных контрольной группы. Вакцина из штамма 89/23 у овец вызывает более выраженные имму-номорфологические изменения, чем вакцины из штаммов 19 и 104 М, но более слабые в сравнении со штаммом Рев-1.

Наиболее ишунсгенными и безвредными для овец являются вакцины из штаммов Рев-1, 89/23 и 104 М, иммуногенность которых составила 90, 77,3, и 70,6% соответственно.

Динамика антител у морских свинок, иммунизированных противо-бруцеллезными иакцинами и у животных, зараженных вирулентной культурой оруцелл. !

В трех опытах на 427 морских свинках изучали антигенные свойства культур вакцинных (Б.абортус 19 и 104 М) и вирулентной (3-335) штаммов бруцелл.

Если у морских свинок, иммунизированных вакциной из штампа 19 в дозе 10 м.к. антитела в сыворотке крови не еыяёляются вообще, то у животных, привитых вакциной из штамма 10" М, через 38 дней после иммунизации в- сыворотке крови всех животных были обнаружены агглю-тининзны и когдплементсеязыЕающие антитела.

У морских свинок, зараженных вирулентной культурой Э-335 титры РА и РОК были значительно выше, чем у привитых культурами слабовирулентных штаммов 19 и 104 М, при этом они удерживались значительно дольше, до 180-го дня после введения.

Исследования показали, что культура вакцинного штамма 104 М для морских овинок несколько более антигенна, чем культура вакцинного

штамма 19, но менее антигенна, чем культура вирулентного штамма 3-335. ' ' *

Динамика антител у крупного рогатого скота, иммунизированного противобруцоллезными вакцинами и у животных, зараженных вирулентной культурои оруцелл.

Динамику антител у крупного рогатого скота, иммунизированного различными вакцинами бруцелл в сравнительном аспекте изучали в опытах па 199 телках.

В одном опыте на 72 телках 2-7 йес. Еозраста через 15 дней после вакцинации у гсех животных,.иммунизированных вакцинами из штаммов 10-1 ТЛ и 19, обнаружили агглютинины в высоком титре (1321 и 1662 МЕ/мл соответственно). Положительная рдг-С получевя ;; 32,5$ животных, привиты:: гг::,-диной кз пгаша J.04 II и у 51,7$, пр:гвитых вакцяноЛ из . штамма 1Г. В более отдаленные сроки после вакцинации агглютинины и комплементсЕязывающие антитела обнаруживали в большом проценте случаев у животных, привитых-вакциной из штамма 19.

В другом опыте при сравнении ангигннных свойств вакцин из штаммов 19, 104 М и Рев-I установили, что средние титры агглютининов по группе ниже всего были.у телок, привитых вакциной из штамма 104 М. Они составили: через 7, 15 и 30 дней после•иммунизации 24, 580 и 180 МЕ/мл соответственно. У .животных, иммунизированных вакциной из . штамма 19, урогень антител в эти сроки был значительно выше - 260, . 1040 и 240, а по -группе 3 (шт. Рев-I) - еще Еьше - 1440, 880 и 520 МЕ/мл соответственно.

Процент положительно реагирующих в РОК жиеОтнкх почти всегда меньше-Есего был у телок, привитых вакциной из штаг ta 104 'I.

В опыте на 59 телках изучали динамику антител в течение .652 дней после иммунизации вакцинами из штаммов 104 М, 82 и Рев-1.

Результаты опыта позволяют заключить, что при испытании на телках вакцин из штаммов 104 М и Рев-I в дозе 100 млрд. м.к. сущест- . Еенной разницы в их агглютиногенных свойстЕах.не отмечено. Угасание диагностического титра РА по группе телок, иммунизированных вакциной из штамма 82, наступал о через I месяц после вакцинации, а у . привитых Рев-I и 101 М - через 4 месяца..

Результаты опытов•показали, что уровень антител и сроки их пер-систенции в сыворотке крови телок после иммунизации Еакцинами из штаммов 19, 101 М, 82 и Рев-I зависит от дозы вакцины, кратности ее введения, срока исследования й агглюгиногенности препарата. Самой низкой антигенностью для крупного рогатого скота из изуча- ,

емых вакцин обладают вакцины из штаммов 82 и IQ1 И.

Динамика антител у овец, клмунизкрованных прогпвобруцеллезными Еакциками и у животных, зараженных вирулентном культурой оруцел; и опыте на Ь4 япках изучали в сравнительном аспекте антигенные свойства вакцин из пгаммоЕ 10, 104 М, Рев-1, 56 и вирулентной культуры Ei мелитензис 428.

Если у ярок," привитых вакциной из штамма рев-I через 6,15,30, 50 и 87 дней*'или зараженных вирулентной культурой 498, через 6,10, 15 и 30 дней после введения культур агглютинины в сыворотке крови персистировали у гсех животных* (1005»), а у животных, иммунизированных вакциной из штамма 19, при исследовании через 6,15,30,50 и 87 дней после прививки реагирующих в РА было несколько меньше овец (100,0; 100,0; 80,0; 100,0 и 50,Ofs соответственно), то у иммунизированных вакциной из штамма 104 М, при исследовании в те же сроки, агглютинины персистирйвали в сыворотке крови еще у меньшего количества ярок (100,0; 100,0; 100,0; 66,6 и 33,3$ соответственно). Антисенность Еакцины из'слабоагглютиногенного штамма 56 была самой низкой.

КомплементсЕязывавдие антитела также больше всего персистиро-вали в сыворотке крови ярок, зараженных культурами штаммов 498 и Рев-I. Дерев 10,-15 и 30 дней после заражения вирулентной культурой 428 Есе ярки реагировали е РДСК положительно"(100$), а из привитых ейкциной из штамма Рев-I через 6,15,30,50 и 87 дней реагировало 25,0; 88,8; 100,0; 100,0 и 66,6$.соответственно.

Таким образом, результаты данного опыта показали, что вакцина из штамма 104 М для ярок менее антигенна, чем .вакцины иэ штаммов 19 и РеЕ-1.

Антигенность вирулентной культуры из штамма 498 была самой высокой. Самый низкий уровень агглютининов и самый короткий срок их персистенции в сыворотке крови наблюдали у ярок, иммунизированных олабоагглютиногенным'диссоциированным штаммом 56.

Цифровые 'данные обработаны статистически, различия достоверны ( Р — 0,05) •'

Изучение стабильности свойотв культуры вакцинного штамма 104 М путем пятикратного пассирования через организм нетелеп. испытание свойств исходной культуры штамма ил м и культуры этого же штамма, полученной пооле каждого последовательного пас-оирования через организм нетелей со сроком стельности 3,5-7 месяцев, проводили по методике, предложенной Комитетом экспертов по

таксономии бруцелл ОАО/ВОЗ.

Дифференциальные свойства и характер роста изучали на питательных срздах в присутствии эритригола, пенициллина, а также тиошша и Фуксина. Для контроля были взяты исходные культуры 104 ГЛ, вакцинных штаммов Рев-1 и 19 п полегие культуры Б. абортус,-Б. мелитензис, Б. супс. Стабильность ceoHctb (стойкость аттенуации) штамма проверяли пятикратными последовательными пассажами через' организм десяти ветслей. Полученные после каждого из пяти пассирований культуры изучали в сравнении с исходной культурой штамма 104 М по куль-тупальнo-i.iо рфологкче ским, биохимическим, антигенным, вирулентным и

ДРУГИМ СЕОЙСТЕаМ.

До начала опытов и перед убоем животных на.24—11-й день после введения субкультур сыворотки крови нетелей исследовали на бруцеллез в РЛ.РДСК и РБП.

После убоя паренхиматозные органы и лимфатические узлы-животных и их плоды подвергали пагоморфологпческому и бактериологическому исследованиям.

По окончании четвертого и пятого пассирований культуры штамма 104 ;л на нетелях, антигенные и вирулентные свойства ее в сравнении с исходной изучали в двух опытах на морских свинках.

. . при исследовании нетелей после каждого из пяти последовательных пассирований культуры штамма 104 ГЛ, наблюдали однотипные доброкачественные патоморфологические изменения, свойственные вакцинальному процессу.

Полученные данные подтверждают стабильность ослабленной вирулентности культуры данного штамма.

Культурально- морфологические, тинкториальные, антигенные и вирулентные свойства культуры штамма 104 ГЛ, а также ее чувствительность к краскам, пенициллину и эритритолу после пяти последо-дователышх пассирований через организм нетелей и затем через организм морских свинок оставались неизменными. . ,

Контроль сроков выживаемости культуры штамма 104 ГЛ е сухой -:-

- Одним из определяющих факторов, влияющих на создание напряженного иммунитета у животных' после прививки живой вакцины против бруцеллеза,- является количество жизнеспособных клеток бруцелл в применяемой дозе препарата.

Нами е течение двух лет изучалась выживаемость бруцелл в опыт-

л. О.

ной серии сухой япвой вакцины из штамма 104 U,хранящейся в ампу-■«. лах под Еакуумом в условиях холодильника при температуре 2-8°С. Вакцину-испытывали на выямваемость бруцелл перед лиофюшзацией, а затем'сразу после сушки и 'спустя 4,12 и 24 мес. хранения в холодильнике при температуре 2-86 . Концентрация микробных клеток в I шг бактериальной масоы в. жидкой Еакцине перед лиофилизацией составила 180 млрд. м.к. ,

Исследование показало, что при определении количества жизнеспособных клеток в готовой Еакцине сразу после сушки было установлено, что в I -ля содержится Ц§,8 млрд. живых бруцелл, то есть . в процессе лпофилизации погибло 36,6? клеток, что следует учитывать при изготовлении вакцины.

Испытание выакваеиосги бруцелл в сухсй 'гг:вой гаяцгне из пта\2да 101 Ivi,'проведенное через 4,12,24 мес. после ее изготовления и хранения при температуре "2-8°б, показало, что количество жизнеспособных бруцелл в I г/л не отличалось от исходного.

Таким образом, хранение лиофилизированной в специальной среде, высушивания вакцины из штамма 104 М в условиях холодильника при температуре 2-8°С надежно обеспечивает сохранность жизнеспособности микробных клеток в течение двух лет со дня изготовления (срок наблюдения).

Значение реиммунизации крупного рогатого скота против бруцеллеза. г ! "

~Т>ля опыта использовали 19 телок, 9 из которых иммунизировали ■ вакциной из штамма 104 М в возрасте 5-6 мес., 5 - в Еозрасте 18 мес. и 5 были контрольными (неЕакцинированными). Вакцину животным вводили в дозе 100 млрд. м.к. Через I год и 39 дней пять телок из привитых в 5-6 мес. возрасте реиммунизировали этой же вакциной в

той же дозе. Одновременно вакцинировали 5 телок 18 мес. возраста. Иммунитет проверяли через 2 года и 3 мес. госле однократной вакцинации телок 5-6 мес. возраста и через I год и 2 мес. после ре-•. иммунизации или однократной вакцинации в возрасте 18 мес. Подопыт-. ных и контрольных телок заражали конътактивально йирулентной культурой Б.абортус 54 в дозе 5 млн. м.к. (20 H%qo)» Убой и бактериологическое исследование вакцинированных и контрольных животных проводили через 40-41 день после заражения.

Исследования показали,что через 2 года и 3 мес. после однократной иммунизации в 5-6 мес. возрасте экспериментальному зара-

жению противостояло 50$ телок. Ревакцинация погасила количество иммунных жиеотных до 80$.

В группе животных, прибитых однократно е возрасте 18 мес., через 14 мес. иммунных было 60$. Все пять телок контрольной группы заразились. ■ ■

Таким образом, исследованиями установлено, что ревакцинация привитых вакциной из штамма 104 М телок значительно (30$) усиливает иммунитет и является целесообразной.

Оценка, на основании данных иммунологического и патоморфоло-гического исследовании, е экспериментальных условиях э;;хуектиЕности ; первичное иммунизации и реиммунизации крупного .рогато1"о скота пониженными дозами вакцин из штаммов 1и и 104 ¡VI при подкожном их введении.

ицешсу э^ектиЕНости первичной иммунизации и реикмунизации крупного рогатого скота пониженными дозами вакцин из штаммов 19 и 104 М при подкожном их введении проводили в деух лабораторных опк-г тах на 42 телках. Опыты показали, что первичная подкожная иммунизация телок в возрасте 3-5 мес. вакциной из .штамма 19 и'ли 104 М в дозах 80 млрд. м.к. с последущей ежегодной реиммунизацией пониженными дозами этих' же вакцин создает у жиеотных напряженный и достаточно продолжительный иммунитет и является перспективной. У крупного рогатого скота, реиммунизироЕанного пониженной дозой указанных вакцин уровень антител в сыворотке крови почти в даа раза ниже и срок перси'стенции значительно короче, чем у жиеотных, реиммувдзиро-ванных полной дозой этих Еакцин.

При гистологическом и гистохимическом исследовании патматериала от животных, привитых как вакциной из штамма 19, так и 104 М, независимо от дозы йу ль туры, в лшфоидных органах на фоне гиперпла-. зии -наблюдали выраженную плазмоцитарную реакцию. Бруцеллезные гранулемы, глубокие тканеЕые нарушения отсутствовали.

Щенка эффективности иммунизации и реимнунизацик крупного ро-гатигО скота вакциной из штамма 19 в пониженных дозах при под-.кожном ее введении в производственных условиях. Изучение эффективности иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота ' пониженной дозой вакцины из штамма i9 проводили в контролируемом производственном опыте а'12 неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах Нарпайского района Самаркандской области Узбе-

кистана с общим поголовьем скота 11591 гол.

Вакцину применяли по схеме: молодняк 3-5 мес. возраста иммунизировали стандартной дозой Еакцины из штамма 19 подкожно. Через 2025 дней сыворотки крови иммунизированных тёлок исследовали в РА с целью выявления иммунотолерантных животных. Отрицательно реагирующих телок иммунизировали этой же вакциной повторно и вновь исследовали на бруцеллез через 20-25 дней. Всех телок, давших отрицательные результаты при повторном исследовании перегодили в группы откорма, с последующим убоем на мясо. За два месяца до случки (осеменения) , далее ежегодно - реиммунизация той же вакциной в поношенной дозе (3 лллрд. м.к.) подкожно.

В ходе испытания установлено, что уровень антител, выявляемых в РА и РСК в сыворотке крови крупного рогатого скота при применении ■пониженных доз Еакцины из штамма Б. аборгус 19 был в 2-3 раза ниже, продолнигельность персисвенции антител значительно короче, чем у животных, иммунизированных этой же вакциной в стандартной дозе (80 млрд. м.к.). Через 4 мес. у телок 3-6 мес. возраста и через 9 мес. после приеиеки пониженной дозой вакцины из штамма 19 у коров и телок случного возраста, поствакцинальные серологические реакции сохранялись лишь у отдельных жиеотных. Особенно быстро угасали комплементсЕЯЗЫЕащие антитела. •

Во всех хозяйствах Нарпайского района за 3 года испытания пониженной дозы вакцины'из шт. 19 было привито 23 тыс. гол. крупного рогатого скота, в том числе вакцинировано или реЕакцинпровано телок перед случкой и коров пониженной дозой 13 тыс. голов. Применение Еакцины из шт. 19'в пониженной дозе в общем комплексе против обру целлез'ных мер позволило за _ -3 года оздероЕить хозяйства Нарпайского района от бруцеллеза крупного рогатого скота. .

Таким образом, производственное испытание пониженных доз вакцины из шт. 19 при подкожном ее введении подтвердило ранее поду- . ченные данные лабораторных опытов об эффективности пониженных доз для первичной иммунизации и реишунизации крупного рогатого скота в общем комплексе противобруцеллезных мер.

Эффективность иммунизации крупного рогатого скота вакциной из штамма Б. абортус 104 Ы (в том числе в пониженных дозах; в хозяйствах с различной эпизоотической обстановкой по бруцеллезу, производственное испытание вакцины из шт. 104 м проводили е 35' хозяйствах Ульяновского района Карагандинской области Казахстана, Каспского района Грузии и Кеменского ' района Киргизии с общим по-

головьем скога 70584 гол. Из 35 хозяйств 18 били неблагополучными по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Вакцину из штамма 101 М применяли по ехеме: всех телок (с 3-х мео. возраста), нетелей и коров исследовали на бруцеллез серологичесч ки (РШ,РА,РСК), положительно реагирующих изолировали и сдавали на мясо. Телок 3-5 мес. возраста иммунизировали подкожно стандартной дозой (80 млрд. м.к.) препарата и в неблагополучиях по бруцеллезу хозяйствах через 20-25 дней после вакцинации исследовали в РА ил:: РШ на пмгдунологлческую реактивность. Телок перед случка': к коров . иммуппзплоЕали подкожно пониженной дозой (3 млрд. м.к.) вакцины из шт. 104 М. Через 12-14 мес. после прививки жиеотных-реиммунизиро-вали подкожно вакциной из шт. 104 М е дозе 3 млрд. м.к.

За 4,5 года в 35 хозяйствах вакциной из штамма 104 ГЛ иммунизировали и реиммунизировали 168476 голое крупного рогатого скота. . С применением вакцины в общем комплексе протиЕобруцеллсзннх мер оздоровлены Есе 18 неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатог<) скота хозяйств и сохранено благополучие остальных. Как показал опыт, иммунизация завозимых телок и нетелей пониженной дозой (3 млрд. м.к.) или стандартной дозой (80 млрд. м.к.) вакцины из шт. 104 М не вызывает абортов и других отрицательных последствий и надежно защищает это поголовье от заражения бруцеллами на весь период стельности.

Оценка в экспериментальных условиях эдаекгиЕности конъюнкти-вальной иммунизации и реиэдунизациа крупного рогатого скота вакциной из штамма 19. I "

В опыте на 19 телках 3-5 мес.'возраста изучали эффективность коньюнктивальной иммунизации и реиммунизации вакциной из штамма"19. Животных разделили на три группы и иммунизировали вакциной из от. 19 подкожно в дозе 80 млрд. м.к. (группа I), животных второй группы .иммунизировали этой же вакциной коньюнктивально в дозе 5 млрд. м.к. Телок гр. 3 не вадщинировали (контроль.).

При исследовании сывороток крови телок, привитых подкожно, агглютинины обнаружены через 5 дней, а у вакцинированных коньюнктивально - через 15. Пик агглютининов приходился-на 15-й день, а снизились они ниже диагностического уровня у привитых подкожно через 4 мео., а'у вакцинированных конъюнктивально - через 62 дня после иммунизации. _ • ' .

ЙомплеменгсЕязывавдие антитела у телок второй группы с 62-го дня полностью исчезли и не появились до конца наблюдения (390-й день). У жиеотных же первой группы они улавливались до 91-го дня

включительно.

Через 13 мес. после прививки всех подопытных телек реиммунизи-роЕали конъшктивалыю вакциной из штамма 19 в дозе 5 млрд. м.к. Серологические исследования показали, что антигенный ответ у животных 1-й группы был значительно сильнее,.чем у телок группы 2.

С целью проверки иммунитета через 12 мес. после ревакцинации подопытных и контрольных животных заразили вирулентной культурой Б. абортус 54 в-дозе II млн. м„к. (44 ИД10д).

Результаты бактериологического исследования показали, что все 7 коров 1-й группы были иммунными (100?), а в группе 2 искусствённо-му заражению вирулентной культурой бруцелл противостояло 6 из 7 (85,7$).

При ишуноморфологическом исследовании в лимфатических узлах •коров опыишх групп отмечали гиперпластические изменения. Просветы краевых синусов сужены, заполнены лимфоцитами, плазматическими клетками и макрофагами.

В печени, почках и легких - повышенное содержание лимсопдных клеток,среди которых много пироиинофильных и эозинофилов. Образования гранулем в лимфатических узлах и паренхиматозных органах не наблюдали. В почках сохранена нормальная гиогоструктура.

У коров контрольной группы в лимфатических узлах наблюдали образование гранулем с признаками кариорекоиса.

Сравнительное изучение иммуногенности вакцины из штамма 19 на крупном рогатом скоте при разных методах введения показало, что наиболее эффективной является первичная подкожная иммунизация этой Еакциной телок в возрасте 3-5 мес. в дозе 80 млрд. м.к. с реимму-низацией ею конъюнктивальным методом в дозе 5-млрд. м.к. через 13 мес. (100$ иммунных животных). . *

Двукратная с интервалом'е- 13 мес. конъюнктиЕальная иммунизация телок в дозах по 5 млрд. м.к. вакцины из штамма 19, несколько менее эффективна (85,7? иммунных животных).

Результаты испытания конъюнктивального метода реиммунизации

крупного рогатого скота в производственных условиях.

Положительные результаты лабораторных опытов по изучению эффек- . тивности конъюнктивального метода иммунизации позволили перейти к испытанию данного метода в производственных условиях.

Испытание конъюнктивального метода иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота Еакциной из штамма 19 проводили в колхозах

" Правда " Нарпайского района СамаЕкандской области, им. Кирова Шаватского района и " Хива " Хивинского района Хорезмской области ' Узбекистана, а вакциной из штамма 101 M - в совхозах " Ульяновский", им. XX партсъезда, " Цу энецкий1.' и им. Свердлова Ульяновского радона Карагандинской области Казахстана. В указанных хозяйствах тлелось 22271 гол. крупного рогатого скота.

Вакцины из агглютиногенных штаммов 19 и 104 M применяли по схеме: телок 3-5 мес. возраста иммунизировали названными вакцинами подкожно в дозе 80 млрд. м.к., телок случного возраста.и коров иммунизировали или реиммунизировали конъюнктивально пониженной дозой (5 млрд. м.к.) Еакцины. В-дальнейшем животных ежегодно реимыунизи-* ровали конъюнктиЕальным методом после предварительного исследования на-бруцеллез и изоляции положительно реагирующих.

За три года испытания в семи хозяйствах привили вакцинами из штаммов 19 и 104 М:

телок 3-6 мес. Еозраста стандартной дозой (80 млрд. м.к.') 37485 голов, реиммунизировали конъюнктивально телок перед случкой и ко-* ров 84 тыс. голов.

Все шесть- хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу крупного ро-. гатого скота, оздоровили от-этой болезни с применением в общем комплексе противобруцеллезных мер вакцин из штаммов 19 и 104. M конъюнктивальным способом. В колхозе игл Кирова (благополучный по бруцеллезу крупного рогатого скота) сохранено благополучие по этой болезни.

Результаты производственного опыта подтвердили данные, полученные в экспериментальных условиях о коротком сроке персис^енции антител в сыворотке крови крупного рогатого скота после реиммуниза-ции конъюнктивальным методом, низком их урогне, и что конъгонкти-вальный способ иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота , вакцинами из агглютиногенных штаммов 19 и 104 M в дозах 5 млрд. м. к.'значительно снижает проявление реактогенных свойств этих вакцин, обеспечивает создание йапряженного и длительного (1-1,5 года) иммунитета у привитых животных и позволяет добиваться оздоровления неблагополучных по бруцеллезу хозяйств.

Состояние системного и местного иммунитета у 'крупного рогатого скота при различных методах введения противооруцеллезных вакцин. : - . , | !

Т целью изучения местного иммунитета у десяти телок 3-5 мес.

возраста, иммунизированных подкожно вакцинами-из штаммов 19, 104 М и 82, определяли динамику иммуноглобулинов А, и и М в слезе и носовом секрете.

Через год после первичной тамунпзацни телок Есех групп репм-мунизировали и через 13 мес. после реиммунизации провели поетор-ную реиммунизацию вакциной из штамма 19 конъюнктивалышм методом в дозе 5 млрд. м.к. ■ Количество иммуноглобулинов определяли до вакцинации, после ревакцинации к повторной ревакцинации.

Исследования показали, что количество иммуноглобулинов <$ , "М и А в слезе у телок, реиммунизированных пониженной дозой вакцины из штамма 19 конъюнктиеэльно по фону первичной подкожной иммунизации этой же вакциной в стандартной дозе (труппа I), резко возросло, по сравнению с данными, полученными до вакцинации.

После повторной ревакцинации произошло дальнейшее увеличение содержания секреторных иммуноглобулинов в слезе телок. Через .I, 2, 4 глее, и I год после повторной ревакцинации содержание е слезе составило соответственно 2,37; 2,94; 3,92 и 5,34 мг/шг. иммуноглобулина класса М значительно меньше - 0,41; 0,59; 0,61 и 1,63 и иммуноглобулина класса А - 2,37; 2,46; 3,11 и 4,25 мг/мл.

У телок группы 2, дважды_реиммунизированных пониженной дозой вакцины из штамма 19 конъюнктивально по фону первичной иммунизации вакциной из штамма 104 М в стандартной дозе подкожно, уровень иммуноглобулинов & и М е слезе.было несколько ниже, чем у телок группы I, а концентрация иммуноглобулина А - значительно выше (Р /-0,05).

Количество иммуноглобулинов е .слезе телок группы 3, яванцы ре-иммунизироЕанных конъюнктивально вакциной ив штамма 19 в пониженной дозе (5 млрд. м.к.) по фону подкожной иммунизации вакциной из штамма 82 в. стандартной дозе (100 млрд. м.к.) при исследовании в те же сроки после ревакцинации, было несколько больше, чем у животных группы I и группы ,2.

Количество .иглмуноглобулинов в -, М - и А - классов в секрете Носовых полостей телок, значительно ниже, чем это наблюдали в слезе.

Исследования показали, что количество иммуноглобулинов в сек- ■• ретах у телок после реиммунизации против бруцеллеза конъюнктиваль-ним методом увеличивается в течение длительного периода, времени, что свидетельствует о выработке местного иммунитета против этой инфекции, помимо системного (общего) иммунитета.

Иммунологическая толерантность при бруцеллезе крупного рогатого скота. ; 1 ' : ; ' " Учитывая Еажность вопроса о толерантности, мы изучили е лабораторных опытах и е неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах явление иммунологической толерантности у крупного рогатого скота при бруцеллезе. -

С этой целью серологически исследовали на бруцеллез сыворотки крови от 35 телок 10-45 днегного Еозраста, родившихся от больных бруцеллезом коров. Из 35 телок в РЛ, РБП ,РСК на бруцеллез реагировало положительно только три животных е Еозрасте 20-22 дней, которых взяли_в опыт. Животных заразили конъюнктивально вирулентной культурой Б. абортус 54 в дозе 60 млрд. м.к. (группа I). Через.7 дней после заражения у одной телки в сыворотке крови агглютинины отсутствовали (перед заражением они персисгироЕали в тигре 100 Щ/мл) и отрицательная реакция в РА у этого животного сохра- • нилась до конца опыта. У двух других телок титры в РА снизились в два раза и на.седьмой день после заражения составили соответствен* но 50 и 100 МЁ/мл (перед заражением тигры были соответственно 100 и 200 МЕ/мл ).

На 7,15, 30, 60 и 75 дни после заражения животных вирулентной культурой бруцелл в РСК реагировало одно животное из трех, а тигр комплеменгсЕЯзыЕающих антител не превышал 5 МЕ/мл. Через 90 дней после заражения животных,.в опыт взяли еще трех телок четырех месячного возрвста (группа 2), полученных от здоровых коров, невакцинированных против бруцеллеза. Сыворотки крови телок исследовали на бруцеллез серологически (РА, РСК и ЕБП) о отрицательными результатами.

Всех телок обеих групп иммунизировали подкожно агглютиноген-ной вакциной из штамма 19 в'стандартной дозе (80 млрд.. м.к.). Через 7, 15, 30, 45, 60, 75, 90 и 120 дней после вакцинации сыворотки крови прибитых животных'исследовали на бруцеллез серологически. ■•

При сравнении результатов'серологических исследований сыеоро-ток 'крови-телок двух групп нами был установлен феномен частичной иммунологической толерантности у животных, сенсибилизированных в раннем возрасте вирулентной культурой бруцелл (группа I). В указанные Еыие сроки после иммунизации количество реагирующих в РСК, РА и уровень титра цочти. всегда были .более высокими у телок, не

подвергавшихся сенсибилизации до иммунизации (группа 2). Средний тигр агглютининов в этой группе равнялся 216,6; 666,6; 233,3; 183,3; 66,6; 50,0; 66,6 и 0 МЕ/мл соответственно, а у телок 1-й группы эти показатели были значительно ниже и составили соответственно 66,6; 166,6; 83,3; 66,-6; 83,"3; 33,3; 33,3 и 0 ЫЕ/мл. у

Таким образом, введение агглюгиногенной вакцины жиеотным, сенсибилизированным в раннем возрасте вирулентной культурой бруцелл, не только не повысила уровень агглютининов в сыворотке крови, а наоборот вызвало значительное снижение их.

Следовательно, Зерез 120 дней после иммунизации у всех шести животных в РА, РСК, РБП были получены отрицательные результаты. В этот период в опыт взяли еще трех интактных (контрольных) телок в возрасте 7 мес. (группа 3). Сыворотки крови контрольных жиеотных исследоЕа-ли на бруцеллез серологически с отрицательными результатами.

ЗКивотных трех груш (9 голов) заразили коньюнктивально.вирулентной культурой Б. абортус 54 е дозе 250 млн. м.к. Через 30 дней после заражения телок исследовали на бруцеллез серологически и убили для бактериологического и патодоорфологаческого исследований. При исследований 3 телки контрольной группы (группа 3) во всех грех иммунологических реакциях реагировали положительно, а при бактериологическом исследовании от них выделены культуры бруцелл '(генерализованная инфекция). У телок группы 2 иммунный ответ был более слабым. У одной телки из этой группы из регионарных лимфоузлов выделили три культуры заражзвщего штамма бруцелл. От двух .других ге-лок этой группы культура заражающего штамма не была выделена, следовательно они были иммунными.

У жиеотных группы I, подеергаЕшихсй сенсибилизации е раннем возрасте, проявилась выраженная иммунологическая толерантнооть.

Данный опыт показал, что серологический метод диагностики-для животных контрольной группы (гр. Ш) оказался эффективным, подЕер-давшим 100$ зараженность животных бруцеллезом. 1 Заражение толерантной телки из группы I не повлияло.на ее иммунологическую реактивность. Серологические реакции для животных этой группы оказглись безрезультатными.

У телок группы I при гистологическом и гистохимическом исследовании изменения выявляли только е регионарных месту заражения лимфа- ■ тйчеоких узлах. Корковое плато, мякотные -тяжи подчелюстных, заглоточных и околоушных (регионарных) лимфоузлов были умеренно или слабо

выражены. В мякотных тяжах превалировали лейкоциты, -Дифофолликулы в селезенке чаще в спокойном состоянии. Крупноклеточной пролиферации не отмечали. В лимфоидных органах плаэмоцитарная реакция Еыраже-на слабо. У деух телок из трех исследованных группы 2 в регионарных лимфоузлах отмечали более выраженную гиперпластическо- пролифе'ра-тиеную реакцию.

В отдаленных'лимфоузлах наблюдали аналогичные изменения, но слабее Еыраженные. В паренхиматозных органах изменения'выражены слабо. У телок группы 3 и у одной из группы 2 в лимфатических узлах я селезенке на фоне.слабо выраженной гиперплазии выявляли Еыраженные про-лифераты из макрофагов, иногда с формированием эпителиоидных гранулем, в отдельных случаях с некрозом .в центре.

Второй опыт по изучению иммунологической толерантн(?с.тя у крупного рогатого скота проводили в трех неблагополучных и трех благо-полочных по бруцеллезу хозяйствах.

Из неблагополучных по бруцеллезу 3-х хозяйсте е опыт взяли 217 телок 3-6 мес. возраста (группа I), а из благополучных - 210 телок аналогичного возраста (группа 2). Телок иммунизировали агглютпно-генной вакциной из штамма 104 М и через' 20 дней после прививки сыворотки крови животных исследовали в РА на бруцеллез. При этом, среди телок 1-й группы, выращенных в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах наблюдалось большое количество толерздтных, которые на введение агглютиногенной^вакцины не отвечали вырботкой антител или у них выявлялась РА в значительно низких титрах, по сравнению с таковыми, выращенными в благополучных по бруцеллезу хозяйствах.

Иммунологическая толерантность нами изучена также в хозяйствах Ульяновского района Карагандинской области Казахстана, Хивинского района Хорезмской области, Нарпайского района Самаркандской области Узбекистана, Каспского района Грузии и Кеменского района Киргизии.

■Исследования показали, что в неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах у больных бруцеллезом коров могут рождаться иммунотолерантные'кчбруцеллам телята, которые являются носителями бруцелл и представляют большую эпизоотическую опасность, как.источник бруцеллеза.

Перспективные схемы иммунизации крупного рогатого скота против бруцеллеза по материалам патоморпологических, иммунологических, в том числе иммуноморфологическихг исследовании. Опыт проводили на 70 телках 3-6 мес. возраста, которых разде-

оо.

лили на шесть групп и привили вакцинами из штаммов Б. абортуо 19, 104 М и 82 (табл.1).

Через 6 мес. после первичной иммунизации провели повторную вакцинацию яквотиых третьей группы, а через 12 мес. - ревакцинацию телок всех групп. Через 6 мес. после ревакцинации телки были случены.

При сравнительном изучении антигенности вакцин после первичной :: иммунизации телок е возрасте 3-5 мес. наиболее выраженный антигенный отЕег наблюдали у животных, привитых подкожно полной дозой_ (80 млрд. м.к.) вакцины из штамма 19 (группы I и 2), которые на 16-й день после Еакцинации при исследовании Есе дали положительную РА (средний титр 800 МЕ/мл).

Антигенность вакцины из штамма 104 М при подкожном введен™ полной дозы (80 млрд. м.к.) (группа 4) при исследовании сыворотки крови животных указанный Еыые срок бь!ла почти два раза ниже, чем у животных 1-й и 2-й групп (средний титр агглютининов 421 Ш/мл), а у привитых вакциной из теш 82 (группа 5) еще ниже (средний титр - 133 МЯ/мл).

Из 12 телок, привитых путем аппликации вакцины из штамма 19 на конъюнктиву глаза (группа 3), при исследовании на 16-11 день агглютинины в сыворотке крови выявили только у 58,3? животных в титре от 25 до 100 МЕ/мл (средний титр по группе 31 МЕ/мл).

•Снижение титра агглютининов ниже диагностического у животных в группах I и 2 наступало на 360т-й день, а е группах 4 и 5 - на 90-й день и в группе 3 - на 60й день.

КомплеменгсвязыЕагацие антитела еыяеляли в сыворотке кроеи отдельных животных 1-й и 2-й групп уже на 7-й день после иммунизации, на 16-й день - у 100?, телок, а на 120-й день Есё животные этих^групп реагировали в РСК отрицательно. При исследовании телок 4-й и 5-й групп положительная РСК отмечалась на 10-й день у 83? и 58? соответ-. ственно, с достижением максимального уровня на 16-й день (91,7? и-83,4?) и сохранилась до 120-го дня у животных группы 4 и до 45 дней - в группе 5 (8,3?). У животных, вакцинированных конъйнкгивально (группа 3) комплементоЕязыЕающие антитела выявляли только на 30, 45 и 60-й дни (16,6?, 58,1? й 24,9? соответственно).

После первой ревакцинации наиболее Еыраженный по Еысоте титра агглютининов и по длительности антигенный отЕет проявился у животных группы I. Средний титр агглютининов при исследовании через 16 дней составил 179 ЫЕ/мл. Антигенный ответ у животных 2-й группы был

значительно ниже. Средний уровень агглютининов в сыворотке крови на 16-й день составил 35 МЕ/мл.

После трехкратного (с интервалом в б.мес.) нанесения'вакцины из штамма 19 на конъюнктиву глаз- (группа 3) в дозе 5 млрд. м.к. уровень агглютининов в сыворотке крови был .минимальным (8-10 МЕ/мл). • Почти аналогичный антигенный отгет отмечали у животных группы 4. У телок, иммунизированных вакциной_из штамма 82 подкожно в дозе 100 млрд. м.к. по фону первичной иммунизации в той же дозе (группа 5) средний титр агглютининов был максимальным (57 МЕ/мл) на 10-й день, причем у большинства ниеотных (91,7$) он составил ниже 100 ГТЕ/.мл.

При исследовании сыворотки йрови в РСГ[ установили, что на 16-й день после ревскцинацпп поло:х:телыше реакции подучены у 100$ и сохранялись до 352-го дня у 8,3$ вивотных группы I (срок наблвде-ния). Б группах 2, 3 и 4 на 16-й день реагировало соответственно 18,6$, 8,3$ и 8,3$, а начиная с 34-го дня до конца срока наблюдения комплемеитсвязывавдие антитела в сыЕоротке крови этих животных отсутствовали. У животных группы 5 максимум комплементсЕязывающих' антител выявляли на 16-й день (у 63$ животных) и на 34-й день (18$), в последующие сроки положительная РСК отсутствовала.

С целью проверки иммунитета через 12 мес. после ревакцинации 30 подопытных (по 6 животных из каждой группы) и 5 контрольных (ин-тактных) нетелей экспериментально заразили вирулентной культурой Б. абортуо 54 в до'зе 7-млн. м:к. (28 ИД100):

Результаты бактериологического исследования показали, что в группе I все нетели противостояли заражению (100$ иммунных животных) в группах 3 и 4 иммунными оказались 83,3$ яивогнйх, в группах 2 и 5 - 66,6$. . .

Оставшихся животных через 17 мес. после ревакцинации реимму-низировали повторно. • .

.Сравнительное изучение динамики антител в сыворотке крови у • животных в разные сроки (от 7-го дня до 27(>-го) показало, что уровень агглютининов вtзависимбсти от вакцины и способа ее введения практически не отличался от такового, наблюдаемого после первой ревакцинации.

С целью проверки напряженности'иммунитета через о 9 мес. после повторной ревакцинации 27 подопытных и 5-контрольных (интактных) коров заразили коныонктивально культурой Б. абортус 54 в дозе 7 млн.

М.К.'

Исследования показали, что через 5 мес. после повторной ревакцинации коровы,■привитые четырехкратно пониженной дозой (5 млрд. м. к.) вакцины из штамма 19 конъюнктивально (группа 3) и коровы, привитые в 3-5 мес. Еозрасте стандартной дозой (80 млрд. м.к.) вакцины из штамма 104 М и дважды реиммунизированные конъюнктивально пониженной дозой \5 млрд. м.к.) той же вакцины (группа 4), Есе ( 100$) были иммунными. Из животных, привитых е 3-5 мес. возрасте подкожно стандартно1 дозой вакцин» из штамма 19 и затем дважды реиммунизиро-Еанных конъюнктивально дозой 5 млрд. м.к. той же вакцины (группа2), и из животных, трижды привитых подкожно вакциной из штамма 82 в дозе 100 млрд. м.к. (группа 5), иммунными оказались 80$ коров. Несколько большее число иммунных короЕ (83,3$) было в группе I.

При голмуноглорфологическш исследовании установили, что у кивот-■ ных группы I через 43 дня после заражения вирулентной культурой ' бруцелл, наиболее выраженные, изменения выявляли в регионарных месту заражения лимфоузлах (околоушных, подчелюстных и заглоточных). Корковое плато хорошо выражено, границы фолликулов плохо просматриваются, мякотные тяжи умеренно выражены, содержат многочисленные плазматические клетки, лимфоциты, отдельные эпителиоидные и ретикулярные- клетги.-Аналогичные клетки в разных сочетаниях выяеляли в синусах. В остальных лимфоузлах и селезенке изменения выражены слабее. Бруцеллезные гранулемы и некротические изменения отсутствовали. " У нетелей 2-й и 3-й групп изменения в лимфатических узлах и паренхиматозных органах были аналогичными с таковыми у животных 1-й группы. Гистологические и гистохимические изменения у животных 4-й группы были менее выраженными, чем это имело место у нетелей I, 2 и 3-й групп. • о

Так, в лимфатических узлах фолликулы были расположены, в основном, субкапсулярно, но находились преимущественно в 3-й и 4-й ста- . днях развития. В отдельных же лимфоузлах они малочисленны, корковый слой часто истончен. Мякотные -тяжи, наоборот, часто хорошо выражены, содержат большое количество плазматических клеток. В красной пульпе селезенки мало лимфоцитов. На этом фоне хорошо выражнна макрофа-гальная реакция. Фолликулы же часто сильно гиперплазироЕаны. Плаз-, моцитарная реакция также хорошо выражена, того пиронинофильных клеток. ■ ' .

В печени, легких, почках и оердце - лимфоидноклеточные скоп-лення, среди которых много плазмоцитов.

Схема иммунизации и реиммунизации телок вакцинами из штаммов Б. абортус 19, 104 M и 82

Груша Вакцина ПерЕичная иммунизация Ревакцинация' Повторная ревакцинация

животных- 23 штамма колич; телок: 4 « способ Еве-:Доза дения Еак- :(млрд. цин : м.к.) • колич: телок: • » способ введения вакцин доза (г.шрд. м.к. ) колич телок способ введения вакцин доза (млрд. м.к.)

I 19 / 12 подкожно •80 12 подкожно 3 • 6 подкожно о W о I£>

о , 19 12 подкожно 80 12 конъюнкт. 5 6 конъюнктив. 5

3* . 19 12 конъюнктив. 5 12 конъюнктив. 5 5 конъюнктив. 5

4 . - 104 M 12 подкожно 80 12 конъюнктив. 5 • 5 конъюнктив. .5

5. 82 12 . подкожно • 100' • 12 подкожно 100 6 подкожно 100

6 контроль 10 не вакцинир. не ревакцтйфованы ' не ревакциниров.

Количество плазматических клеток в регионарных (подчелюствых, околоушных, заглоточных), отдаленных (паховых) -лимфоузлах и селезенке нетелей, реиммунизированных против бруцеллеза, а затем зараженных вирулентной культурой бруцелл (проверка иммунитета через 12 мес. после ревакцинации)

Контроль Номера Региовар- : Отдален. Селезенка •

(интакт- групп ные лимфо- : лимфоузлы

ные) узлы (сред;

колич. клет; •

I 210 183 195 '

2. 160 140 155

35 3 • 190 ' 160 180'

4 175 170 185 .

5 165 130 150

6 ' 60 46 52

Аналогичные изменения, но .значительно слабее Еыраженные, набг лкщали у нетелей группы 5.

Динамика плазмоцигарной реакции, (юс общее кол1гчество) в регионарных и отдаленных лимфоузлах и селезенке животных, реиммунизированных . и повторно реиммунизированных Еакцинами из штаммов 19, 1В4 М и 82 показаны в табл. 2 и 3. . '

Цифровые данные обработаны отатистически. Все данные статистически достоверны (при 0,05 или 95? достоверности).

Результаты имцуноморфологическях исследований показали, что у подопытных коров всех пяти групп гистологические изменения носили доброкачественный характер, были аналогичными, отличаясь лишь по " степени выраженности плазмоцитарной и других клеточных реакций в лимфатических узлах и паренхиматозных органах. В лимфатических узлах и внутренних .органах коров контрольной группы, зараженных вирулентной культурой бруцелл без предварительной вакцинации, наблюдали незначительное-увеличение количества плазматических клеток пр сравнению с нормой, у половины нетелей этой группы в отдельных лимфоузлах и паренхиматозных'органах (чалда е селезенке и печени) наблюдали формирование бруцеллезных гранулем.

Количество плазматических клеток в регионарных (подчелюстных, околоушных, заглоточных ), отдаленных (паховых) лимфоузлах и селезенке коров, повторно ревакцинирОЕанных против бруцеллеза, а затем зараженных вирулентной культурой бруцелл (проверка иммунитета.через 9 мес. после■повторной ревакцинации)'

Контроль Номера регионарные • лимшоузлы (среднее ко- Отдаленные

1интакт- лич. плазма!-. Селезенка .

• клеток)- лимфоузлы-

рые) . групп •

37 .

I 174 155 ' 167

2 170 139 '151

3 234 174 . 190

4 218 186 - '197

5 163 . 130. 148

6 •68 53 .58

Исследования показали, что наиболее эффективными являются схемы: ...

- первичная подкожная'иммунизация телок в ЕозрастеЗ-5 мес. агглзо: тиногенной вакциной из штамма 19 или 104 М в дозе 80 млрд. м.к.

с последующей ежегодной реиммунизацией конъюнктивальным методом в дозе 5 млрд. м.к. этих же вакцин;

- двукратная с интервалом' в 6 мес. конъюнктивальная иммунизация телок 3-5 мес. возраста о последующей ежегодной реиммунизацией также конъюнктивально в дозе 5 млрд. м.к. вакцины из штамма 19 или 104- М.

4.

ЙВОДЫ

I. По результатам сравнительного патоморфологического и иммунологического исследования крупного рогатого скота,-привитого вакцинами из штаммов в. abortus 19, 104 М и 82 по различным схемам установлено, что .наиболее эффективной является первичная иммунизация телок в возрасте 3-5 месяцев вакциной из штамма в.abortus 104 М в дозе 80 млрд. м.к. подкожно с последующей'конъгонктиЕальной

реиммунизацией их.перед случкой в дозе 5 млрд. м.к. и, при необходимости, реиммунизации корое через 1-2 года после последней прививки*

2. Вакцина из штамма в. abortus Т04 М в дозе 80 млрд. м.к. при подкожном ЕЕедении Еызываег е лимфоидных органах крупного рогатого скота более Еыраженрые иммуноморфологические изменения и создает более напряженный иммунитет, чем вакцина из штамма в. abortus If, что связано с ее несколько большей остаточной Еирулентностью.

3. У телок,"иммунизированных подкожно стандартной дозой (80 млрд. м.к.) агглютиногенных вакцин из штаммов Т9 или 104 М, реиммунизиро-ванных пониженными дозами этих' же вакцин коныонкгиеэльно (5 млрд." м. к.) или подкожно (3 млрд. м.к.) при исследовании через 36-43 дня после заражения вирулентной культурой бруцелл отмечается более выраженная иммуноморфологическая реакция, е лимфатических углах и селезенке, чем у зараженных вирулентной культурой бруцелл жиеотных без иммунного фона. ■ .

4. Вакцина из штамма В, melitensls Hev_l вызывает у крупного рогатого скота иммувологическую перестройку организма и создает иммунитет, не уступающий по напряженности иммунитету, создаваемому

■ вакцинами из штаммов в. abortus 19 и м- Однако, учитывая, что штамгл в- meiitonsis обладает более высокой вирулентностью, более опасен для человека, иммунизировать им крупный рогатый скот нецелесообразно.

5. КоньюнктиЕальный 'способ иммунизации (реиммунизации) крупного рогатого скота в дозе 5 млрд; м.к. Еакциной из штамма в. abortus 104 М вызывает иммунологическую, е том числе иммуноморфологическую, перестройку организма животных, создает напряженный и продолжительный иммунитет', не уступающий таковрму при подкожном ЕЕедении о препарата е стандартной дозе (80 млрд. м.к.).

6. У телок, иммунизированных подкожно стандартными дозами вакцин из штаммов В. abortus 19, 104 М и 82 и дважды реиммунизиро-ванных коньюнктивально вакциной из штамма 19 в дозе 5 млрд. м.к. -наряду с выработкой общего (системного) иммунитета, характеризующегося иммуноморфологической перестройкой Еторичных органов иммуно-поэза (лимфатических узлов и селезенки) и появлением в сыворотке кро^ ей агглютининов и комплементсвязывающих антител, создается и местный (секреторный) иммунитет, проявляющийся повышением в слезной жидкости и носоеом секрете (е зависимости от схемы иммунизации) уровня

иммуноглобулине® классов & е 8-21,3 и 7-8 раз, з 2,5-5,3 и 1,53, Л- Е 2,4-5 и 0,5-3 раза соответственно, а также кмцу ногдорфол о-гической перестройкой организма животных и появлением .в сыворотке крови специфических антител.

7. У вакцинированных.против бруцеллеза крупного рогатого скота, овец и морских сеинок и у животных, зараженных вирулентной культурой бруцелл после иммунизации, изменения ограничиваются пммуномор- '

; дологической перестройкой периферических органов иммунопоэза, в то время, как для жяеотНых, инфицированных вирулентной культурой бруцелл на неиммунном фоне, характерно-формирование эпителиоидно- гис-тиоцитарных гранулем, нередко с'некрозами в центре в лимфатических узлах, реже.в паренхиматозных органах и развитие дистрофических изменений в печени и почках.

8. При подкожной иммунизации и реиммунизации крупно'го рогатого скота агглгатиногенной вакциной из штамма в. abortos 1.04 М Б пониженной дозе (3 млрд. м.к.) происходит иммувоморфологическая'перестройка вторичных органов иммунопоэза и ЕырабатыЕается напряженный и длительный иммунитет. При этом агглютинины и комплементсвя-зывающие антитела в сыворотке крови животных выявляются е меньшем количестве и исчезают из организма раньше, чем у иммунизированных той же вакциной в принятой дозе (80 млрд. м.к.).

9. Комплексными патоморфологическими и иммунологическими, е то числе иммуноморфологическиш, и сследованиями овец установлено, что вакцины из штаммов В. oelitensis Bev4, 89/23 и в- abortus 104 М создают напряженный иммунитет соответственно у 90,0ч, 77,3 и 70,6$ привитых животных. • - '

10. У имгдунологически. толерантных к бруцеллам телок при введении гомологичного антигена не развивается иммуноморфологическая перестройка в лимфоидных органах и не вырабатываются специфические

. антитела а сыворотке крови. Такие животные представляют эпизоотическую опасность, как источник бруцеллеза.

11. Иммуноморфологическая картина в лимфатических узлах и паренхиматозных органах овец,привитых вакцинами из штаммов в. abortus 19, 104 М," 82, в. mentáosle 56, 89/23, К-2.4, "Невский-12"

и последующем зараженных вирулентной культурой в. ineli'ten3iB характеризуется-цлазмоцитарной реакцией, очаговой или диффузной крупноклеточной пролиферацией, отсутствием гранулем, необратимых некротических процессов и носит сходный характер. Выраженность

этих изменений зависит от степени Еирулентнос-ти вакцинных штаммов.

12. Учитывая феномен толерантности, ео всех неблагополучных хозяйствах по бруцеллезу крупного рогатого скота необходимо телок в 3-5 месячном возрасте иммунизировать только вакцинами из штаммов бруцелл, находящихся'е S - Форме, с тем," чтобы через 20-25 дней после иммунизации их исследовать на бруцеллез. Телок, давших отрицательные результаты, иммунизировать повторно той ке вакциной и вновь исследовать на бруцеллез через 15-20 дней. Всех телок, дэе-ших отрицательные результаты после повторной прививки перегодить в группы откорма, с Ьоследующим убоем на мясо.

13. Результаты исследований показали более высокую иммуноген-ность вакцины из штамма В. melitensie Eev-1 дал мелкого рогатого скота, по сравнению с другими, изученными нами вакцинами, в.связи с чем применение ее в комплексе профилактических и оздоровительных

ч

мероприятий целесообразно. .

14. Реишунизация' телок Еакциной из шташа В. abortus 104 М через 12 месяцев после иммунизации значительно (30?) усиливает иммунитет и является целесообразной.

15.- Вактша из штачмаВ. abortus 02 вызывает у иммунизированного крупного рогатого скота выраженную иммуноморфологическую перестройку лимфоиднoii системы, слабую антигенную реакцию и создает .иммунитет у 66,6-83,3? вакцинированных животных в срок на 0-12 месяцев.

16. У морских свшок, привитых вакциной их шташа в. abortus 104 м и зараженных вирулентной культурой бруцелл,.противостоящих экспериментальному заражению, наблюдаются пролиферативно-гипер-пластические изменения е лимфатических узлах и паренхиматозных органах, выраженная Плазмоцитарная реакция. В отдельных случаях формируются гранулемы," но без признаков некроза и некробиоза, без нарушения обменных процессов.. • .

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По результатам.проведенных исследований вновь разработано или пересмотрено 23 директивных и нормативных документа, утвержденных -ГУВ МСХ СССР, 1УВ Госагропрома СССР, 1УВ МСХ и продовольствия СССР, Департаментом ветеринарии РФ или другими директивными орга-. нами в установленном порядке. ■

I. Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации Сру-

целлеза животных (1982, 1988).

2. Наставление по диагностике бруцеллеза животных (Т982,Т°88).'

3. Наставление по применению вакцины жиеой сухой из штамма 104М Еруцелла абортус протиЕ бруцеллеза крупного рогатого скота (1985).

4. Технические услоеия (ТУ 46-2т-44-85) "Вакцина сухая живая из штамма Еруцелла абортус 104 М против бруцеллеза крупного рогатого скота" (1985).

5. Временная инструкция по изготовлению и контролю живой сухой вакцины из штамма 104 М против бруцеллеза крупного рогатого скота (1985).

6. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины сухой живой

из штамма Б. абортус 104 М протиЕ бруцеллеза крупного.рогатого скота (1989). •

7. Технические условия (ТУ 10-19-89-89) "Вакцина жлеэя сухая

аз штамма Еруцелла абортус 104 М против бруцеллеза крупного рогатого скота (1989). ' '

Материалы исследований учтены при составлении:

8. Наставления по применению Еакцины живой сухой из штамма 19 Еруцелла абортус в малых дозах против бруцеллеза крупного рогатого скота (в порядке производственного испытания) (1986).

9. Наставления по применению вакцины живой сухой из штамма 19 Еруцелла абортус против бруцеллеза крупного.рогатого скота (1988).

10. Рекомендаций по конызнктивальному способу реиммунизации крупного рогатого скота против бруцеллеза вакциной из штамма 19 или 104 М (1988). •

11. Наставления по применению жиеых сухиЗс вакцин из штаммов 19 и 104 М Еруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота конъюнктивальным методом (в порядке производственного опыта) (1989). .

12. Методических рекомендаций по иммунизации против бруцеллеза нетелей и половозрелых телок (1990).

13. Методических рекомендаций по иммунизации крупного рогатого скота против бруцеллеза конъюнктивальным методом (1990).

14. Программы иопытания вакцины из штамма 104 М против бруцеллеза крупного рогатого скота в экспериментальных и производственных условиях (1984). .

15. Программы испытания вакцины из. штамма 19 в >далой дозе против. бруцеллеза крупного рогатого окота в экспериментальных и производственных, условиях С-198(5). '

16. Наставления по применению вакцины живой сухой против бру-

целлеза сельскохозяйственных животных из штамма Б. абортус 19 (1996)

17. Дополнения к комплексному плану основных мероприятий по оздоровлению животноводческих хозяйств Каспского района Грузии от заболе вания крупного рогатого скота бруцеллезом на 1985-1990 годы (1985).

Результаты, наших- исследований также нашли отражение в:

18. Плане основных мероприятий по оздоровлению животноводческих хозяйств страны от заболеваний жиеотных бруцеллезом и туберкулезом на 1981-1988 гг'. (1981).' '

19. Правилах карантина на фермах, в хозяйствах, населенных пунктах, районах, неблагополучных по заболеванию сельскохозяйственных животных бруцеллезом и туберкулезом (1987).

20. Комплексных мероприятиях по оздоровлению животноводства страны от бруцеллеза и туберкулеза (1988).

• 21. Научно обоснованной системе мероприятий по профилактике и оздоровлению поголовья сельскохозяйственных животных от бруцеллеза (1990)

22. Вакцина из штамма -104 М внедрена в хозяйствах Карагандинской области Казахстана в профилактике и борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота в комплексе общих противобруцеллезных мер (приказ по

■ обл. ветогделу # 376-АВ от 21 января 1992 г.).'

23. Разработка по применению подкожного и коньюнктивального методо! иммунизации и реиммунизации крупного рогатого' скота вакциной из штамма 19 е малых дозах в профилактике и борьбе с бруцеллезом в общем комплексе противобруцеллезных мер успешно внедрена в хозяйствах Нар-пайского, Самаркандского, Джамбайского и Пайарыкского районов Самаркандской области, Хивинского и Шаватского районов Хорезмской области Республики Узбекистан (справка Главного управления ветеринарии с гос-ветинспекцией Узбекской ССР И 221-2"9/180 от 21.02.94 г.). э

6. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Альбертян М.П. Иммуноморфологические реакции у телят при вакцинации против бруцеллеза. Ветеринария, № ю, 1971, с. 40-41.

2. Шумилов К.В., Альбертян М.П. Иммунологическая реакция на вакцинные штаммы бруцелл различной вирулентности у овец. Ветеринария, № 10 1972, с. 58-61;

3. Альоертян М.П. Иммуноморфологические реакции у морских свинок, . привитых штаммами в. abortus 104 М, 19 и зараженных вирулентной культурой в. abortus 3-335. Труды ВИЭВ, т. 47, М., 1978, с. 71-'

4. Шумилов К.В., Альбертян М.П., Ромахов В.А., Бондаренко В..

3., Клочков Л.А., Вриов В.■■.;>., ХохолеЕ П.С). Изучегае вавдинп из птеи-т 104 M в экспериментальных к производственных условиях..Сб. " Сое-' тояние и перспективы научных исследований по диагностике и профилактике туберкулеза и бруцеллеза и меры борьбы с этими болезнями с.х. животных" (Материалы Всесоюзной научной конференции. Омск, 1980).

5. Клочков A.A., Шумилов К.В., Ромахов В.А., Альбергян М.П. Изучение сеойсгв Еакцинного штамма 104 М, пассированного через организм нетелей и морских свинок. Бюлл. ВИЭВ, вып. 43, М.,• 1981, с. 4750.

6. Альбергян М.П. Сравнительное патоморфологическое изучение органов телок, привитых культурами штаммоЕ в. abortiia- 104 H и 19 и зараженных вирулентной культурой в. abortus 54. Ешл. ВИЭВ, еып. 42,М., K8I, с. 64-69. . • ■

•7. Щ/аилон К.В., Альбертян М.П., ГСдочков A.A., Ромахов В. А., Мельниченко B.Ii. Значение ревакцинации телят ппотиЕобруцелдезн'ой эакциной В. abortus 104 M. Тезисы докладов Республиканской туч-' ю-произЕодстЕенной конференции. Г. Гродно, 1982, с. I00-101.

8.' Шумилов К.В., Альбертян М.П., Клочков A.A., Ромахов В.А. апологические свойства вакцинного штамма Бруцелла абортус 104 М. лр. ВИЭВ, г. 57, 1983, с. 42-47.

9. Шумилов К.В., Альбертян М.П., Клочков- А.А,. Ромахов В.А. :ммунизация телок малой .дозой вакцины из' штамма Бруцелла абортус

04 М. Бюлл. ВИЗВ, еып. 51, 1983, М. , с. 71-74.

10;. Щумилов К.В., Касьянов А.П., Ромахов, В.А., Альбертян М.П., лочков А.А,. Акулов A.B., Косилов И'.А., Ноеицкий A.A. 'Результаты учения Еакцинного штамма -В. abortus 104 M Тр. ВИЗВ,т. 61, И.," 984, с. 10-21. ■

11. Щгмилов К'.В., Альбертян М.П.,'Клочков-A.A., Ромахов В.А. гецифическая профилактика бруцеллеза крупного рогатого скота. Сб. ?. ШИШ, 1984, M., с. 8-14.

12. Ермилов К.В., Альбертян М.П., Клочков A.A., Ромахов В.А. Закцины против бруцеллеза крупного рогатого скота. Ветеринария, И2, 584, с. 26-28. •

13. Ромахов В.А., Клочков A.A., Лльбертян М.П., Касьянов А.Н., '.льниченко В.И.-,. Шумилов К.В. Иммуногеннйе свойства'^акЦины из 'амма в. abortus 104 M в опытах на.м'орскиЗс свинках. Тр. ВИЭВ, т.

M;, IS85, с. 7-II.'

14. Клочков Л.Л., Ромэхое В.А., Лльбертян М.П., Касьянов А.Н., Шумилов К. В. О сроках выживаемости культуры штаммав. abortus!С4 Г.1 в сухой вакцине. Болл. ВГОВ.еып. 59, М., 1985, с. 3-5.

15. Альбертян М.П., Ромахов В.А., Клочков A.A., Касъянов А. П., Мельниченко B.II. Антигенные и вирулентные .сеойстеэ культур штамма

В. abortus 104'М в опыте на морских СЕинках. Тр. ВИЗВ,т. 62, М., 1985, с. 128-132.

16. !^;лилов К.В., УласеЕич П.С., Ромахов В.А., Альбертян М.П., Клочков A.A., Косилов И.А. Результаты изучения вакцины из штамма

В. abortus 104 Сб. Сиб.' отдел. ВАСХНИЛ, Сб. научн. тр. ДВЙШШ, 1985, с. 20-21.

17. Лльбертян М.П. Стабильность свойств вакцинного штамма В. abortus 104 LI при пассировании через организм нетелей (по дан. ним патоаорфологпи). Бшл. КГ;В,еып. 64, Ii., 1987, с. 71-73.'

18. Касъянов А.Н., Альбертян И.П., Ромахов В.А., Клочков A.A., Шумилов к.В. Динамика содержания антител в сыЕоротке крови' телок, иммунизированных различными дозами вакцины из штамма Бруцелла абор-тус 104 М. Республ.- / научно-практич. конференция "Современные .проблемы праиплактшси зоонозных болезней и пути их решения", г. Гродно, 1987, с. :Э8-=Ю9.

19. Бельченко В.Б., Альб'ертян М.П., Ромахов В. А., ПУшглов К. В., _Рождественокий H.A.,• Бенников В.Н. Результаты применения Еакцивы

кз штамма 104 М протиБ бруцеллеза крупного рогатого скота в хозяйствах Ульяновского района Карагандинской области. Всесоюзная конференция "Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организация медицинской помощи больным.". Новосибирск, 1989, с. I80-I8I.

20. Ромахов В. А., Альбертян М;П., Гринько В.П., Яраев ЬГ., Назарова С.А., Данияров А.Д. Эпизоотологическая эффективность Еак-цины из штамма 19 в малой дозе против бруцеллеза крупного рогатого скота в хозяйствах Самаркандской области Узбекокой ССР, Всесоюзн.. г. конфер. "Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организация медицинской помощи больным". Новосибирск,1989, с. 167-168.

21. Гринько В.К., Шевченко Н.Х., Альбертян М.П;., Назарова С. А., Яраев Р.Г.-, Истамов И.И., Абдуллаева м.Р. Изучение эффективности иммунизации крупного рогатого скота вакциной из штамма 19 'в малой дозе. Всесоюзная конфер. " Актуальные вопросы профилактики -бруцеллеза и организация медицинской помощи больным". Новосибирск,' 1989, с. 169-170. ' ■

22. Альбертян М.П., Рог,'.ахов В.Л., КасъяноЕ Л.Н., Тягунина Е.А., Ягудин Р.Г., Слепцов Е.С., Шумилов IC.B. Иммуногенность вакцин из штаммов В. abortua 19, 104 Id и 82 для крупного рогатого скота при различных схемах применения^ Волл. ВИЗВ, еып. 73-74, М., 1990, с. 97-103. • ;

23. ромахов В.А., Касъянов А.Н., Альбертян П.П., Ягудии Р.Г., Тягунина Е.А., Слепцов Е.С. 'Ъллунологическая реактивность телят, полученных от короЕ, реиммунизированных вакцинами из штаммов 19, 104 : М и 82. Билл. ВИЗВ, еып. 73-74, М., с. 104-108.

24. Альбертян М.П., Ромахов В. А-., Касъянов А.Н., Яхудлн Р.Г., Тягунина Е.А., 'Слепцов Е.С."'(ВИ0Й), Ермилов К.В." (ВП1КИ). Иммунологический ответ организма крупного рогатого скота, привитого против бруцеллеза вакцинами из штаммоЕ в. abortos 19,. 104 М и 82 по различным схема»,1. Тр. ВИЭВ, т. 69, М., 1091, с. 24-32. .'

25. Альбертян М.П., Яраев Р.Г. Вакцина из птамма 12 при _конъ-юнктивальном методе введения против бруцеллеза крупного рогат'ого окота. Научная конфер. "Проблемы изыскания, синтбза и производства новых препаратов для ветеринарии", Самарканд, 1994, с. 13.

26. Альбертян М.П., Вакцина из штамма 104 М Б. абортуо. Нэучн. конфер. "Проблемы изыскания, синтеза и производства новых препа-рагов'для ветеринарии", Самарканд, 1994, с. 13.

27. Альбертян М.П. Конътактивальннй метод иммунизации п репшуш: зации крупного рогатого скота вакцинами из штаммов 19 и 104 М. Калужский центр научно-техническфй информации. Информационный листок tó 58-94, 1994, с. 1-4. ■ # . '

28. Альбертян М.П. Профилактика "бруцеллеза крупного рогатого зкота. Калужский центр научно-технической информации. Информационный листок JÍ59-94, с. 1-3.

29. Альбертян -М.П* Бруцеллез опасен. Ж. йавогновод, М., £7-8, [995,. с. 14-15. '

30. 'Альбертян М.П. Гистологические и гистохимические показатели у телок, ишунохолерантных. к бруцеллам. Научно-практич. конф. 'Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза зельскохозяйственных животных, профилактика и организация меропри-1тий по ликвидации болезней в регионе Сибири", Новосибирск,1995,

J. 109. • , '

31. Альбертян М.П. Йммуноморфологические изменения у крупного рогатого скота, вакцинированного против бруцеллеза по различным

схемам. Научно-практическая конференция "Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных жи-■вотных,профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири".Новосибирск, 1925, с. ПО.

32. В.А.Ромахов,'М.П.Альбертян, Р.Г.Йгудин, B.C.Ефремов, Е.С. Слепцов, Н.Т.Кобяков, А.А.Хоч Изучение антигенных, вирулентных и иммуногенных свойств штамма Br. sujs 6® на овцах при разных методах ее введения. Инфекционные и инвазионные болезни животных в условиях Якутии. Научно-техничеокий бюллетень. Выпуск I. Новосибирск, IS96,c. 5-8.

33. Ромахов В.А., Альбертян М.П., Ягудин Р.Г., Мельниченко В.И., Слепцов Е.С., Кобяков Н.Т., Хоч A.A. .Изучение фенотипических свойств бруцелл из штаммов 2 и 61 Вг. suis биовар I. Инфекционные и инвазионные болезни животных в условиях Якутии. Научно-технический бюллетень. Выпуск I. 'Новосибирск,1996,с. 8-10.

34. Ромахов В.А.,' Альбертян М.П., Ягудин Р.Г., Мельниченко В.И., Слепцов Е.С., Кобяков Н.Т., Хоч A.A. Сравнительное изучение фенотипических свойств штаммов Вг. suis биовар 4. Инфекционные и инвазионные болезни животных в условиях Якутии. Научно-технический бюлетень. Выпуск I. Новосибирск, 1996, с. 10-12.