Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Хламидиоз быков-оплодотворителей (эпизоотология и диагностика)

УКРАЇНСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ АГРАРНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

РГБ ОД

■ < л ' ’ На правах рукопис>т

ЛУКЯНЧУК Василь Олексійович

ХЛАМІДІОЗ БУГАЇВ-ПЛІДНИКІВ /ЕПІЗООТОЛОГІЯ І ДІАГНОСТИКА/

16.00.03 - ветеринарна мікробіологія, вірусологія, епізоотологія, мікологія і імунологія

АВТОРЕФЕРАТ дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук

Київ - 1994 р

Дисертація є рукопис.

Робота виконана в Державному науково- дослідному контрольному інституті ветеринарних препаратів та кормових добавок

Наукові керівники - доктор ветеринарних наук . Р.Х.Халадеєв

- доктор ветеринарних наук, професор . ОД.Серг і енно

. Офіційні опоненти: доктор ветеринарних наук, професор В.П. Литзин доктор'ветеринарних наук, професор В.Л.Ковальов

Провідна організація - Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини УААН '

І *1- 5 '

Захист відбудеться "ЛЧ" 1594 р. в____годин

на засіданні спеціалізованої ради Д.І20.7І.03 в Українському державному аграрному університеті за адрес та: 252127, Київ-127, вул.полк.Потєхіна, 16, а2*д.4І2

Просимо прийняти участь в засіданні ради або вислати ■Вал відгук на автореферат в двох примірниках, завірених печаткою за адресою: 252041, м.Київ-4І, вул.Героїв оборони, 15, УЩ/, сектор захисту дисертацій.

З дисертацією мопзіа ознайомитися'в бібліотеці УАУ.

Автореферат розісланий " "___________1994 р.

Вчений секретар спеціалізованої вченої ради, доктор ветеринарних наук,

професор В.А.Бортнічук

І. 'загальна, характеристика роботи

І.І. Актуальність теми. Хламідіози сільськогосподарських тварин внаслідок широкого розповсюдження, значного впливу на рівень захворпванності тварин і людей, відсутності необхідної системи протнеш зоотичног о і протиепідемічного нагляду представляють одну із серйозних проблем ветеринарії і медицини.

В результаті псракення репродуктивних органів тварин хла-мідіями, тваринництво зазнай значних збитків через недоодеркан-ня молодняка, відставанні його в рості або загибелі в перші дні киття, безпліддя маточного поголів’я /Хазипов Н.З., Гайдаров Х.З. та ін.,1984; Атамась В.А. та ін.,І986; Бортнічук В.А., 1990/.

Серйозної проблеми хламідіоз набузас у племінних господарствах, де після захворювання бугаї-плідники можуть залииййбя носіями хламідій. Саме такі бугаї-плідники, внаслідок постійної циркуляції збудника в організмі тварин і періодичного виділення його з спермою, представляють найбільпу небезпеку, оскільки це може призвести до розповсюдження інфекції на значні території і накопичення збудника хламідіозу в господарствах. Згідно з даними літератури у патогенезі-генітальної патології БРХ чітко прослідкусться зв’язок мік спермою хворого бугая і порупен-ням репродуктивної функції у корів Демадеез Р.Х,, Равилов А.З.,' та ін. ,1990; Митрофанов П.М., 1987; st« j.f cäe*oi.s.,l975/.

Доготривала персистенція хламідій в організмі тварин і виділення інфекційного агента з молоком, сечею, екскрементами, а також у великій кількості під час аборту або отелу сприяють розсіюванню хламідій в зовнішьоіфг середовищі і інфікуванню тварин. При цьому не виюшчена можливість .інфівування людей / Покровський В.І., Шаткін A.A. та ін., 1982/.

. Хламідіозний аборт великої рогатої худоби розповсюджений иайге у всіх країнах світу, де займаються розведенням цього виду тварин, такса зареєстрований в раді східних, центральних і південних областях України. Інфікованість тгарин хламідіями-в окремих-господарствах складала до 50£ /Атамась В .А., Чейно-вич Г.М. та ін., 1987/. • - .

Сироке рсзповсюдЕєізія хламідіозу ЗРХ пов'язане, в персу торгу, з тим, цо даній інфекційній г.ателегії не надаєтьса

належного значення, не проводиться своєчасна лабораторна діагностика, лікування і специфічна профілактика. .

Отже, вище викладені проблеми хламідіозу БРХ потребують проведення цілеспрямованих наукових, методичних і організаційних заходів, направлених на розробку ефективної системи проти-епізортичного натлядаг за зоонозними хламідіозами. Першочерговими завданнями в цьому напрямку е вивчення епізоотологічних особливостей хламідіозу ВРХ в різних регіонах України, вдосконалення існуючих методів лабораторної діагностики, розробка та впровадження нових, більш інформативних тестів, ефективних засобів етіопатогенетичної терапії і специфічної профілактики.

1.2. Мета і завдання досліджень. Метою роботи було вивчити ступінь розповсюдження і клініко-епізоотологіші особливості хламідіозу великої рогатої худоби, зокрема бугаїв-плідників, в тваринницьких господарствах і гоїемпідцриємствах Західних та Південних областях України, апробувати та вдосконалити методи лабораторної діагностики хламідіозів сільськогосподарських тварин, виЬначити рівень інфікованості людей, професійно зв’я-заотх з тваринами або продуктами їх переробки, хламідіями зо-онозної природи. У відповідності з поставленою метою визначено наступні завдання: .

- провести серологічне обстеження корів і бугаїв-плідни-ків на хламідіоз в тваринницьких господарствах і племпідприем-ствах Львівської, Закарпатської, Івано-Франківської, Тернопільської, Волинської, Рівненської та Одеської областях України;

- здійснити мікробіологічні і вірусологічні Досліднення-

по індикації та виділенню збудника хламідіозу із сперми і пат-матеріалу клінічно-хворих на хламідіоа або латентно-іншіксва-них бугаїв-плідаиків; ■

- встановити місце локалізації хламідій в репродуктивних органах-бугаїв-плідників; "

- апробувати і впровадити реакцію зв’язування комплементу в постановці мікро- методом'для серологічної діагностики хла-мідіозів сільськогосподарських тварин;

- виготовити корпускулярний хламідійний антиген із штаму

"Г-68” /збудник хламідіозного аборту БРХ/ і апробувати реакцію непрямої імунофлуоресценції /РНШ/ для серологічної діагностики хламідіозу великої рогатої худоби; '

' - дата порівняльну оцінку реакцій зв'язування комплементу і непрямої імунофлуоресценції при серодіагностиці ВРХ;

- црсвести порівняльні серологічні дослідження сироваток крові двох груп людей:.професійний контингент /тваринники, працівники м’ясокомбінату/ і людей, які не -мають безпосереднього контакту з сільськогосподарськими тваринами /контрольна група/;

- здійснити видоспецифічну диференціацію виялевдх в РЗК

протихламідійних антитіл в сироватках крові Людей, йрофесійно зв’язаних з тваринами; '

- вивчити чутливість перещеплюваних ліній культур клітин Ь -929, ПТ, ТЕ, СПЕВ до збудника хламідіозного аборту великої рогатої худоби /гагам "Г-88”/ при різних умовах кульїйвуваїйя.

1.3. Наукова новизна .роботи. Одержані науково-обгрунтова-ні дані про розповсюдження хламідіозу великої рогатої худоби в окремих областях Західного і Південного регіонів України.

■Вперше на реритсрії України проведені комплексні епізобто-логічні, клінічні і лабораторні дослідження по вивченню хлвмі*-діозу бугаїв-плідників. Визначена роль бугаїв-плідників і' інфі-козаної хламідіями сперми як потенційного даерела заракення збудником хламідіозу благополучного поголів’я тварин. Виділеній та ідентифікований збудник хламідіозу, вивчені його основні біологічні властивості. ■

Виявлено високий рівень інфікованості людей, професійно зв'-язаних з тваринами, хламідіями зоонозної цріфоди. Проведена видоспецифічна диференціація антитіл з корпускулярними антигенами сь.раіїгасі . Встановлена висока чутливість, специфічність і придатність "Набору антигенів і сироваток для серологічної діагностики хламідіозів сільськогосподарських тварин"

/ЗУ 10.19.27-88/ для виявлення групоспецифічних Цротихламідійних антитіл в сироватках, крові людей. Вперпе апробована реакція непрямої імунофлуоресценції для середіагностики хламідіозу великої рогатої худоби. Для її постановки виготовлений корпускулярний антиген із штаму хламідій ВРХ "Г-88".

Визначені найбільш чутливі перещеплювані лінії культур клітин до збудника хламідіозного аборту ВРХ та встановлені оптимальні умови його культивування. .

1.4. Практична цінність робота. Виконана робота дає

можливість: ■■■■.'■' \ ■

1. Рекомендувати практичній ветеринарній слукбі слідуючі

методи лабораторної діагностики хлаілідіозів сільс.ькогосподар- ' ських тварин: . . . . _

- реакцію зв’язування'комплементу в постановці мікро-

методом; . ■ .'

- реакцію непрямої мікроімунофлуоресценції /РНІФ/;

- метод діагностичного виділення і культивування збудника

хламідіозного аборту НРХ в перещеплюваних культурах клітин. ’ , . . '

2. Рекомендувати "Набір антигенів і сироваток для серологічної діагностики хлаілідіозів сільськогосподарських тварин"

/ТУ 10.19.27-88/, який випускає Херсонська біофабрика, для серодіагностики хламідісзів у людей. ■

3. Результати клініко-епізостслсгічнсго вивчення хламіді-озу бугаїв-плідкиків будуть використані при підготовці інструк--тивно-методичних документів.

1.5. Апообапія роботи. Основні положення дисертаційної роботи доповідались і - обговорювались на засіданнях Вчених Рад ДЗДКІ ветеринарних препаратів та кормових добавок /1990 - 1994/ ЕВДВІ /м.Казань, І99І-І.993/, республіканському семінарі вете-. ринарних працівників облплемоб’єднань. і племзаводів України /Полтава, 1989/, Всесоюзній науковій конференції "Епізоотологія, епідеміологія, засоби діагностики, лікування і специфічної профілактики інфекційних-захворювань спільних’для людини

і тварик". Дьвів, 1988/, Львівській обласній науково-праетич-. ній конференції "Актуальні проблеми розвитку медичної науки в сучасних-умовах" /Львів,.IS90/,-Всесоюзній науковій конференції "Проблеми наукового забезпечення тваринництва Посідав!ї /Кискніз, 1990/, Республіканській науково-практичній конферен-. ції "Біотехнологія ветеріи^ню: препаратів" /Харків, 1293/.

• 1.6. Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано

15 друкованих праць. '

Основні полекення дисертації, які виносяться на '

- захист: '

- ісіініко-епізоотологічка характеристика, хлакідіозу ЗРХ, зокрема бугаїв-пл:дників, з деяких областях Зекідесго і-Південного •регіонів'України;

- доказ етіологічної ролі хлаиідій в порушенні репродук-

тивної функції корів і бугаїв-пліднйків; виділення і ідентифікація збудника; •

- вплив хпаиідій зоонозної природи на інфіко'ванність лю-

дей, професійно зв’язаних з тваринаш або продуктами їх перероби:; . ' ■

- апробацій і порівняльна оцінка серологічних методів лабораторної діагностики - реакції непрямої імунофлуоресценції і реакції зв’язування комплементу, в постановці мікро- методом при серодіагностиці хламідіозу великої рогатої худоби;

- культивування хламідій аборту ВРХ /втаї: "Г-88"/ в.перещеплюваних культурах клітин. .

1.6. Обсяг і структура дисертації. Матеріали дисертації викладені наШ сторінках машинописного тексту і включають: вступ / €егер/, огляд літератури /ЗЪсГ0р /, власні досліднен-ня /ЦТіпр./, сбговсрення результатів дсслідкень ///еТсР■ /, висновки і практичні пропозиції /Чстир. /. Робота ілюстрована і? таблицями і рисунками. Список літератури включає 225 дке-рел, в тему числі 104 іноземних. В додап^у прєставлено £ до-куиентів, які підтверджують результати окремих етапів .роботи, їх наукову і практичну цінність. '

2. ВЛАСНІ ДОСЛІДШШ ; \

2.1. Патеріали і ме»оди досліджень. *

Робота проводилась протягом 1985-1994 років по державних та відеших планах в лабораторії контролю біологічних препаратів ДВДКІ ветеринарних препаратів та кормових добавок і.в лабораторії хламідіозів Львівського ВДІ епідеміології і гігієни.

.Игтеріслаїяі для ■ досліджень слуттош: 1473 сироватки- ярові великої рогатої худобі; із молочно-товарних господарств і плем-лідприснств Львівської, Закарпатської, Івано-Франківської, Тернопільської, Волинської, Рівненської та Одеської областей України; 120 проб нативкеї і глибокопаморскеної сперми бугаїь-плідників та патматсріа-і /сім'яники, придати:, сім’япроводи, .простата, уретра, печінка, селезінка та ін./ від вимусено забитих тварин; 871 сироватка крові лвдей, професійно зв’язаних з твариназі 'і продукшзі їх переробки; 2440 сироваток кроз: донорів /контрольна група лтздей/; етам хламідіЛ аборт:/ зелн-

- в -

кйї рогатої худоби "Г-88", виділений Р.Х.Хаиадеевим і §.М.Ху>-' ' саїновим від абортованого плоду корови /Казань,1983/ і люб’язне представлений нам для робота.

В роботі використовувались: 6-7-декні курячі зародки, морсьни свинки, перещеплювані культури клітин Ь-929, ПТ, ТЕ., СПЕВ, а такок зсультуральні середовища 199, ЇГЕА, нормальна і фетальна сироватки ВРХ, розчини трипсина, версена,. барвники, . антибіотики та ін. . •

■ Для проведення лабораторних досліджень'матеріалів застосовували набори діагностикумів: "Набір антигенів і сироваток для серологічної діагностики хламідіозів сільськогосподарських тварин" і "Набір фяуоресцугачих імуноглобулінів та контрольних сироваток для лабораторної діагностики хламідіозів сільськогосподарських тварин, виробництва Херсонської біофабрики; діагностичні набори "аааяуіей " фірмиогіаа М*дгюз1а.сг,ФІНЛЯНДІЯ і *ЗСІ-икме* ,СПІА, а також "Діагностикум хламідійний сухий для РЗК і РНЗК", виробництва Одеського підприємства бактерійних препаратів. '

Видоспецкфічну диференціацію протихламідійних антитіл, виявлених в сироватках крові людей, професійно зв’язаних з тваринами, проводили в реакції непрямої імунофлуоресценції з кор-пускулярниш антигенами Оирвіиаеі /птам'Т-88/, виготовлений нами в лабораторних умовах і /штамюту /, а такси сь«тгасіющ»ііз /штам Ви-434, серотип І£ •/, люб’язно представлені нам А.А.Шат-кіним і В .Н. Панкратовой /ЦЦІ епідеміології і мікробіології ім.Н.2.Гамалеї/ для апробації і роботи. 1 . -

Лабораторні дослідження проводили у відповідності, з "Методичними рекомендаціями по лабораторній діагностиці хламідіозів сільськогосподарських тварин" затв.ГУВ Дср-сагропрому СРСР,І986 і "Рекомендаціями по лабораторній діагностиці зоонезних хяамі-діозів" наказ М3 УРСР .'.'569 від 22.10.86р. "0 мера:: по организации борьбы 'с хламидиезньыи, шкеплазменнЕйи и зфогенитальны-ыя зируенши инфекциями". Епізоотологічне обстежений неблагополучиях по абортах' господарств здійснювали відповідіо "Методических указаний по эпизсстологическсму обследованию" /К.А.Ба-кулоз, Г.Г.Юрков, 1985/.

Кроз для серологічних 'досліджень у тзаркн брали з ярешої вени в кількості 5-7 ші в стерильні пробірки і доставляли в

лабораторію ке пізніше 20-24 год. з моменту взяття, відділяли сироватку і зберігали цри 44°С. '

Сперму від серопозптизних бугаїв-плідників доставляли в лабораторію з термосі з льодом або з посудині Д’юара з рідким аз сто:.!. '

Кусочки репродуктивних органів бугаїв-плідників відбирали .стерильними -інстругіекташ з пеніцилінові флакони і зберігали до проведення досліджень в замороженому стані.

Виділення збудника хламідіозу проводили на 6-7-деиних курячих зародка::, шляхом їх зараження в жовтковий мішок і проведення серіґких пасажів по класичноі.іу методу, запропонованому Н.Сох /1933/.

Летальну дозу збудника для курячих зародків ЭДДдф/0,3,щ визначали по Рід;' і Иекчу /1959/.

Виявлення антитіл в сироватках крові тварин і людей проводки в реакції зв’язування комплементу в постановці мавро- ■ і міпро- методами, а таксяг. в реакції непрямої іцунофлусресцен-

Морфологічні і тинктсріальні .властивості, групозу анти- ‘ генну специфічність виділених збудників вивчали методами сзіт--СЗОЇ мікроскопії, ІМутіофлуСрЄСЦЄКЦІЇ і серологічно. При цьому, застосовували методіізабаралення мазків-відбитків по Стемпу, ■лакіазелло і Романовськсгс-Гімзи. Імунсфлуоресцектний метод проводили як в прямій, так і в непрямій модифікації. Виявлення ісік.іідійнсго антигену з мазках-відбитхах вваяали специфічний, їкцо з контрольних препаратах, які були оброблені від’ємною сироваткою і флусресцуичиш хламідійними інуноглебуяіиаш,' ви-талялк яскравфвічення гранул• гсіаиідіЙного антигена, а в препа-адтач:, оброблених пінною сироваткою і флуоресцуючими імуно-глобулінами, яскрава флуоресценція була відсутня / Хазипов Н.З., ?айпаров Х.З., Хамадеев Р.Х. та ін.',1984/. .

З метою вивчення- патогенності виділених ізолятів 105? сус-іензіз інфікованих жовткових мішків курячих- зародків в дозі І мл зводили з черевну порошину морських свинок. У випадку загибелі тзарин проводли мікроскопічне дослідження паренхіма-

?ОЗІДІХ СрГСКІВ. ' "

Культизузання с будника аборту великої рогатої худоби . ^тал "Ґ-88"/ здійсш:вати в перещеплюваних -культурах клітин . j- 929 /:.згпачі фібробласти/, ПТ /перещеплювана лінія клітин ■

кирки теляти/, ПК /перещеплювана лінія клітин трахеї ембріона корови/ і- СПЕВ /перещеплювана лінія клітин нирки ембріона свині/. Культури клітин одержали в ВЩІЕВ /м.Москва/ і Львівському 2ЩІ епідеміології і гігієни. Культури вирощували в матрацах із нейтрального■ сгла з використанням позивних середовищ 199 і'ІГЛА, додаванням І0£ сироватки великої рогатої- худоби. При пересівах клітини знімали з.стінок матраців за допомогою 0,02^ розчин;?- версена і трипсина у співвідношенні 9:1. Суміш, яка містила І,2*10® - 2,0*10^ клітин в І мл культурального середовища з І0£ сироватки ВРХ, розливали по І мл в плоскодонні пробірки з нейтрального скла, які ¿на дні містили покривні скельця. Чзрез 24-48 годин нснопар клітин . на покривних скельцях інфікували птаысм хламідій "Г-88".

Оцінку результатів зарагення клітин проводили через 48 і 72 години після внесення інфекційного матеріалу. При цьому для забарвлення препаратів застосовували метод ¡.¡ая-І’рмнвальда Гімзи. Препарати вивчали в світловому мікроскопі /сб.90,ск.7/ підраховуючи середню кількість цитоплазматичних включень хламідій в 30-ти полях зору ксглого препарату / А.А.Шаткік,

І.І.Мавров, 1983/.

2.2.-РЕЗгаЬТАТИ!Д0СЛІД;ЗЖ. '

2.2.1.-Клініко-епізоотологічне спостереження, хлам і діозу

• - бугаїв-плідників в деяких областях України

Вивчення клініко-елізоотолсгічних особливостей хламідіо-зу великої рогатої худоби, зокрема бугаїв-плідників, проводили в неблагополучна по абортах молочно-товарних господарствах і плекпіддриемствах Львівської, Закарпатської, Івано-і&ран ківської, Тернопільської, Волинської, Рівненської та Одеської областях України.

■ В реакції зв’язування комплементу з групоспецкфічтшм ::ла мідійним антигеном'досліджено 1089 сироваток крозі корів і 384 сироватки крові бугаїв-плідників. При цьому встановлено, що в залежності від епізоотичного стану в господарства::, серо позитивність до збудника хламідіозного аборту була різна і коливалась у корів від 3,7£ до 44,6" з середніми титрами анрк тіл 3,0І0,23іо92; у бугаїв-плідників від 5.4^ до 21,7^ з ти&-

зами антитіл 3,5Í0,2?ieg g і складає в середньому 8,3w і 14,0^ відповідно. Отже, по даних серологічних досліджень ступінь пораження хдамідіозом бугаїв-плідників був в 1,6 раза вищий чіж корів. ■ ' '

Результати виділення збудника із сперш і патматеріалу ■ зеропозитивних бугаїв-гсіідшків підтвердили дані попередніх серологічних досліджень. В мазках сперми, забарвлених по ме-году Стемпа, в аести випадках з 23-х виявляли дрібні кокопо-дібні мікроорганізми, які по морфологічних і тинкторіальних властивостях були ідентичні із збудником хламідіозу. Титри' -иамідіГзшх антитіл з сироватках крові даних бугаїв-плідюг-ків не перевищували рівня 1:5. Методом прямої імунофлуорес-ценції зслаїлі дійний антиген виявили в 4-х пробах сперми. При цьому спостерігали чітку яскраво-зелену флуоресценцію збудника, розкиданого по всьому полі зору препарату. Застосування ЦІаГНССТИКуМІЗ ДЛЯ ІЇЛуНОфлусреСЦеНТНОЇ МІКРОСКОПІЇ " CS»l8aer»9t-" фірми Orion Diagnostica ,'ЗІНЛЯНДІЯ: і "gSJJfflESt ", СЖ ПІДТВврДИЛО попередні результати мікроскопії. Частота виявлення хламідій і рівні титрів специфічних антитіл■мали обернену залежність.

В 7І,4£ випадків хламіді; виявлялись в спермі бугаїз-плідш-і-кіз при титрах зіламі дійних антитіл- в сирозатці крові 1:5 і в 28,6% випадків при титрах антитіл 1:10 і вище. При мікроскопії мазків-відбитків репродуктивних органів серолозктивних корів в 33,3¡j препаратів виявили морфологічні структури збудника і специфічну флуоресценцію хламідійного антигена при обробці препаратів флуоресцуичими зсіаиідійними імуноглобулінами.

Паралельно з мікроскопічними дослідженнями цими ж пробами були заражені 6-7-денні курячі зародки. В результаті дзо-кратних пасажів сперш серопозитивних бугаїв-пліднтсів в семи випадках із 23-х спостерігали специфічну загибель інфікованих зародків, на 5-8-дні після зараження. При мікроскопії мазків-відбитків жовткових мішків їдячих зародків, які загинули на 6-7-день після первинного .зараження, в трьох пробах сперми був ідентифікований збудний1'зйіамідіозу. Необхідно підкреслити, цо хлалідії виділені і ідентифіковані в основному від бугаїв-плідників, в сироватках крові.яких виявлялись антитіла до ’ групоспецифічного хламідійного антигену в титрах 1:5. .

Результати клінічного сСстекення серопозитивних в РЗК ■ бугаїв-шіідкикіБ свідчили про латентний характер протікання хламідійної інфекції. Тільки в 4-;: бугаїв спостерігали незначну припухлість сім’яників, зниження кількості сперміїв та їх рухливості, а такси наростання титру протихламідійних антитіл до рівня 1:40-1:60. При паталого-гнатомічнсму дослідженні у всіх тварин констатували орхіт;. .

В результаті проведеиня/лабораторно-діагностичких досліджень репродуктивних і паренхіматозних органів бугаїв-ппідгансів, ■які включали-світлову і люмінесцентну мікроскопів мазків-від-бімків, а також виділення збудника на курячих зародках, вдалось ізолювати і ідентифікувати збудника хламідіозу із сім’яників бутак-плідника.за■кличкою ’Фермер".

Наділений ізолят хлаіїідій викликав загибель- курячих зародків-на 6-В-ий день після зараження і при цьоі.у накопичувався в жовткових ціпках в титрі ІО^’ЧЩзд/С^Змл, був патогенним, ■для морських свинок /в 40% тварин викликав їх загибель при введенні Б черевну порокішну 2МЛ ОВОкулЬТурИ хламідій/, а у тварин, які втаїли, виробку кгмплементзв’нзутих хламідійннх антитіл в титрах 1:16-1:32. .

Таким чином, одержані дані клініко-епізсотслсгічних і лабораторних досліджень свідчать про широке розповсюдження хла-мідіозу серед корів і бугаїв-плідників в окремих областях Західного і Південного регіонів України і призводить до значних економічних збитків в господарства::, що підтверджено проведеними розрахунками економічних втрат пяешіідарпгілсгв від хламтдіо-зу. В даному випадку сумарні економічні втрати склали 42&сн. 450гис.ідті», а проведені оздоровчі і лікувальні заходи дали можливість зменшити ■ їх в 1,5 рази.

2.2.2. Вплив хламідій великої рогатої худобі: на

ікйіковакність людей, професійно зв'язаних ' з тваринами

' 3 метсз вивчення впливу хлсмідій зоснсзксї природі; на

ікфікованкість лцзвй б реакції зв'язування комплементу з групоспецифічнии хламідійнкм антигеном досліджено 071 сироватку крові людей, які кавть • безпосередній контакт з сіль-

ІЗ -

ськогосподарськнмк ТЕаринапи або продуктами jx переробки /тва-рімнппі, працівники Львівського м'ясокомбінату/, а такон 2440 дрсб сироваток крові донорів /контрольна група/. В результаті •серологічних до сліпень- компдементзв’язуші аникгіла до групо-спецпфічного хланідійного антигену виявлено у 15,3^ тваринників в середи:;: титрах 3,5І0,2І - 4,8±0,54ів9?,і.у 13,3^ працівників Львівського м’ясокомбінату в середні}; титрах антитіл 3,6^0,34 - 4,2-0,44ісдр і у 4,7=- донорів в титрах 3,0±0,І4 -3,2-0,24 logj,. Б анамнезі людей, в сироватках ігрові я кас виявлялись цреткхламідійні антитіла, часто відмічали пневмонії, иск 'шкткві ти,' захроравашя урегенітальнеї систем не виясненої етіології.

Внаслідок проведено; видоспецифічної диференціації антитіл в реакц: ї непрямої і;.г'ноа,!усресценції з корпускулярними антигенами csupsittaci /отам "Г-88"/ і /птамкяу / тась.«гас*!>»а«л /штам Ш-434, серстип L ?/ встановлено: в 76,6£ досліджуваних сироваток крові людей, професіґяо зв’язаних з тваринами і продуктами їх переробки, визначались антитіла до антигену із . птаму "Г-Є8" в середніх титрах 6,4^0,53ход 0, в 60,ЇЙ до антигену із птаму Lory, в середніх титрах 5,7І0,25ісдо і в 23,3£ .сироваток до антигенуOutrsebeasti* /серотип І g/ в титрах 5,0-0,41 іод9. З 16,% випадків вони виявились від'ємними з усіма корцускг’лярними антигенами. При використанні гомологічне діагностиігл.іів /птами "Г-88" і1017 / процєвзг позитивно реагуючих сироваток і цифрові значення рівнів накопичення■ специфічних імунеглобулінів значно перевидасть відповідні показники до антигену гетерелогічного вид;7' /птам L .,/. Таким чином, ' паралельне застосування в РК13 тест-антигенів двох видів хламі-дій по різниці в рівнях накопичення специфічна: антитіл до одного і до другого антигену дас могливість проведал: диференціацію імунної вітшепіді у хворих зошегшмї і антрепонепкггд! хлаиідіозами.

Висока серспозитивиість тваринників і працівників м’ясокомбінату до збудгпїка хлакідіозу, з порівнянні з іігсими категоріям,: населення, а такет проведена видоспецийічна диференціація спецкфічшіх антитіл, свідчать про те, ejo хламідії зосновної, природи представляють потенційну/ небезпеку здоров’ю лздей,

професійно зв’язаних з тваринами або продуктами їх переробки.

При проведенні серологічних досліджень встановлена висока чутливість, специфічність і придатність "Набору антигенів і сироваток для серологічної діагностики хламідіозів сільськогосподарських тварин" /ІУ 10.19.26-88/, який випускає Херсонська біофабрика, для вивчення специфічних хламідійних антитіл в сироватках крові людей. '

2.2.3. Порівняльна серологічна діагностика хламідіозу

бугаїв-плідників в реакції зв’язування комплементу І реакції непрямої мікроімуко&луоресценції Серологічна діагностика хладіідійних інфекцій сільськогосподарських тварин здійснюється пляхої.і постановки реакції зв’язування комплементу /РЗК/ з ірупоспецифічним хламідійним антигеном. Будучи найбільп доступиш.! і достовірним методом ретроспективної діагностики хламідіозів, РЗК в макромодифікації має цілий ряд суттєвих недоліків: трудомісткість, великі об’єми дорогих інградієнтів, значні затрати робочого часу на підготовку лабораторного посуду та ін. ' ■

В зв’язку з цим, нами апробований і модифікований мікро— метод постановки РЗК а об’ємі 0,15 мл, цо дає можливість пос-таппви! реакції в гсюнпетах для й^ислогічівп: досліджень, застосування автоматичних мікропіпетск для розподілу компонентів реакції. Сцрецена так® схема титрування комплементу. ’ '

При порівняльному дослідженні 826 сироваток крові корів,

384 сироватки крові бутаїв-плідликів і 871 сироватки крові 'лв-дей в РЗК з хламідійним антигеном в макро- і цікро- модифікаціях, процент позитивно реагуючих, тварин і людей як в макро- .

методі, так і в мікро-.методі постановки реакції був близький ■ ,

по величині- і складав відповідно 12,25 і 12,20. При цьому тит-

ри специфічних антитіл находились на одному рівні. Отгє, результати мікро- і макро- методі з постановки РЗК співпадають.

Аналізуючи багаточисельні літературні джерела, в яик більпість авторів вказують на значні переваги реакції нецря-мої мікроімунофлусресценці'ї при проведенні відповідних ціле-нацравлених серологічних досліджень /Шаткін A.A., Мавров 1.1., 1983; Кутова В.В., Соколов B.B,I9S0; Орфіла ЗІ. ,I9S0; waag J.F., Crajretca J»T., 197V

ми провели апробацію даного серологічного методу для діагностики хламідіозу великої рогатої худоби.

Відсутність промислового виробництва корпускулярних антигенів для постановки PHIS спонукало нас до виготовлення- антиген;' в лабораторних умовам. З цією метою використали птам хла-нідій ВРХ "Г-88" /збудник хлаїгідісзного аборт;-' корів/.

Ка початку досліджень в якості специфічного антигену використовували 3-5^ суспензію оболонок жовткових мішків курячих зародків, інфікованих хламідіями. Однак, даний антигенний матеріал містив значну кількість ткаиаших елементів, ліпідів і часто давав неспецифічну реакцію. Б подальшому готували корпускулярний антиген шляхом диференційованого центрифугування дотріялуючись методики В.А.Лблонської, І .В.Тарасевич /1984/, але при цьо’.гу одержали антиген з низькою специфічною активністю. То’.у в основу технології виготовлення антигену ззяли схему очисти: хламі дій від ткаїп-ашнх елементів жовткової оболонки курячого зародка оапрспсновга^ Р.Х.Хоиадеедал та ІН./І988/.

Виготовлення антигену включало слідуючі основні етапи:

- одержання біомаси хламідій шляхом зарахення б-7-дених їдячих зародків в повтковий мішок станом хламідій ВРХ "Г-88";

- розмел бісмаси, концентрація і очистка хламідій шляхом диференційованого центрифугування;

- інактивація хламідій 0,5^j розчином фенол;';

- стандартизація антигенного матеріалу по оптичній густині за допомогою фстоелектрокаїсриметра.

Контрольний антиген готували аналогічним метода-: із иеінфікованих ІЗ-декнкх г;фячях зародків.

Реакцію непрямої мііфоіі:;люотуересценці:' ставили на прел-метгаз: скельцях, дотримуючись методшзі, розроблено'.' в лабора-теоії хламідіозів ЩІ епідетліології і міігрсбіслсгії ім.Н.2.Га-маїеї /В.Н.Панкратова, А .А .Еатк:*?, 1983/.

При порівняльному серологічному дослідженні 384 сілроваток Іфові бугаї в-пл і дні'.к і в в РЗК з ірупоспецифічгасл хламідійним антигеном і з PHIS з виготовлений корпускулярним антигеном /птам "Г-88"/, специфічні хламі дійні антитіла виявили в 14,ОТ' сироватка-: ігрові в РЗК і з I7,4fj - в РНЮ. При цьсі.у середні титри антитіл в реаіщії непрямої мікроім;т*офлуоресценції в Z-3 пази були виці в порівнянні з РЗК і складали 8,6І0,32іоз £ /PHIS/ і"з,5І0,27Юд2 /РЗК/. "

’ Отримані нами результати свідчать про специфічність і більш високу чутливість реакції непрямої мікроімунофлуорес-ценції з порівнянні з РЗК при серодіагностиці хламідіозу ЕРХ. Виявлення флуоресцуотих хламідійних антитіл, які не оіксують— ся з реакції зв'язування комплементу з групсспецлфічним хла-мідіЯшш антигеном, з РНї<3 досягається, очевидно, за рахунок зв’язування їх з видоспецифічнши антигенами, локалізованими на поверхні ретикулярних і елементарних тілець хламідій, які не руйнуються при виготовленні корпускулярних антигенів.

■■ 2.2.4. Культивування збудника хлзмідіозного абор-. ту великої рогатої худоби з перекепяованих . культурах клітин '

■Проблема культивування хламідій з культурах клітин кволіться, головним чином, до попуку найбільш чутливих ліній клітин і оптимальних у«ов вироцувааня мііфосргаиізма.

Нами проведені дослід:' по і^іьтивузаяко "ембріонального" птаїїу хламідій ЕР}; "Г-88" в перецегквваних культурах клітин І> - 929 /мишачі фібробласта/, ПТ /перещеплювані лінії клітки нирки ембріона корони/, 25 /перецешговані лінії клітин трахеї ембріона корови/ і СПЕЗ /перецеїшзвані лінії клітин нирки свині/. Враховуючи той факт, 50 більшать представіп;кіз вік:з ' «ирзітсі і ОиіяжаюмШ нездатні в стгсідартнїіх 2-чісвах інфікувати і розмножуватись в культурах клітин, провели дослід»: по оцінці ефективності трьох методів культивування ;сіам:дій:

■ стандартні умови, методу. .примусової адсорбції матеріалу на монстр клітин за допомогою центрифугування і псоднанш цен-три&тування інфекційного матеріалу на моиссар клітин, попередньо обробленого ДЕАЕ-декстрансм.

З стандартних умовах. культнзувалня і .зараження клітин збудником хлаиг діезу ВРХ одернано слідили; результати: їй і тини СІЕЗ і Ш виявились нечутаїсими до хяауідій, а інфікуоча активність стану "Г-88" клітин І» -929 і ПТ дуте. обмелена /при мікроскопії препаратів виявляли поодинокі цитоплазматичні • включення :-тамідій/. ' ■ • ■ ■

■ Більш продуктивний методом культивування збудника .був метод примусової адсорбції матеріалу на моноиар клітин за допомогою центрифугування. Через 48 годин після зараження в

клітинах Ь -929 г ПТ, забар&лених по ¡.Іай-Грізпвалиду-Гімзи, при мікроскопії виявляли шошшні цитоплазматичні включення хламідій, неправильної форми з щільною упаковкою морфологічних структур мікроорганізма. Цитопатичного ефекту в клітинах, як правило, не спостерігали. Поодинокі цитоплазматичні включення хламідій виявлялись таксз і в клітинах: СПЕВ та ТЕ.

Попередня .обробка моношару клітин ДЕАЕ-декстраном /90мкг/мл/ дала можливість підвищити ефективність інфікування хйамідіяш культур клітин її - 929 і ПТ маґпе в два рази, а клітин їй, в три рази. Клітини СПЕВ виявились мало чутливими до збудника гсламідіозу ВРХ /птг.м"Г-88"/. Здатність хламідій інфікувати клітини була пропорційна дозі інфікуючого матеріалу.

Таким чином, найбільп чутливими перещеплюваними культурами клітин до збудашса хламідісзного .аборту великої рогатої худоби є клітини Ь -929 і ПТ, а оптимальніш методом культизузан-ня хламідій є метод примусової адсорбції мікроорганізму на монопар клітин за допомогою центрифугування, поєднаного з попередньою обробкою клітин ДЕАЕ-декстраном. ■ .

В II С II 0 В КИ ■

1. Хлачідіоз великої рогатої худоби шроко розповсвдкений в тваринницьких господарствах і племпідприемствах Західних і південних областях України; при цьому серопозитивяість до збудника хламідіозу в різних господарствах коливалась: у корів від 3,7% до 44,6% та у бугаїв-плідників від 5,4% до 21,7$ і складала з середньому 8,3% і 14,0% відповідно.

2. Дг.ерелом хламідіГщої інфекції в ішемпідпризмствах с латентно-інфіковоні бугаї-плідники-, збудник в яких виявляється з спермі, сім’яниках і сім’япровідюос шляхах. Використання сперми від таких тварин для відтворення стада мене призвести до шзсисго рсзпсвсюркення хламі діозної інфекції.

3. Із сім’яників серопозитивких бугаїв-плідників виділені 4 ізоляти, які виявились татогеншмі для курячих зародків

і морські:: свинок. Ізольвані біологічні агенти по морфологічних, ткнкторіальнік культуральгаїх і антигенних властивостях ідентифіковані як• представники роді? сзаавуаіа,- - ’

4. На основі порівняльних серологічних досліджень'.сироваток кров: тваринників, працівників м’ясокомбінату і вядоспе-

. : - 18 - ■ • " цифічної даферещіації- проаихяамідійяих. антитіл в РНШ з корпускулярними антигенами сь.р*ііісі показана моезшвість хяанідії? зоснсзног природи інфікувати людей, професійно зв'язаних з тваринами і про диктаті їх переробки- При цьому серопозитивкість дг неї груш- людей була в три рази вида в порівнянні з контрольної групою ЛЕДЄЙ, які не мали безпосеретщього контакту з сільськогосподарськими тваринами і складала 15,ЗЙ і 4,7^' відповідно.

5. Встановлена висока. чутливість, специфічність і придатність "Набору антигенів і сир сваток для. серологічної діагности-

- ки хламідіозів сільськогосподарських тварин" ЛУ 10.15.27-88/, розробленого' БЕЩВІ ’ /и.-Казань/ і. який -впрсбляс Херсонська біо-фабрика, для виявлення групоспеіріфічних хламідійних антитіл б сироватках крові людей.'-.' .

- б. Розроблена мікремодифікація постанови! РЗК в ллаїшетах для імунологічних досліджень, цо дає можливість з більпоіз точні ств розподіляти-компоненти реакції, економно• їх використовувати, скоротити час да її проведення. При порівняльних серологічних дослідженнях сироваток крові тварин і годей результаті: макро- і запропонованого мікро- метода постановки РЗК співпала-

■ЮТЬ. • . - . -

7. Вперш для .серодіапгостИЕй хламідіозу великої рогатої

худоба апробована реакція непрямої цікроіцунофлусресцепції. Длі її постановш, з використання,! штаму збздника хламідіозкого . ' аборту корів "Г-88", виготовлений корпускулярний специфічний антиген. Порівняльними серологічними дослідгеннямп сироваток .крові бугаїв-плідників встановлена-''специфічність і більа-вкзо-ка чутливість РНІШ в порівнянні з РЗК. . ■ ■

8. Визначені найбільп чутливі перезеїстван: лінії іфхьтур

• клітин /І -.929 і ПТ/ для культивування збудника хяамідіозного аборту корів- Апробований• нами' метод .примусової, адсорбції" хла-мідій з допомогою центрифугування і попередньою обробкою мско-пару клітин ДЕАЕ-декстраном, моке з успіхом'використовуватись

.для діагностичного виділення хламідій із патматєріглу, вивчення їх біологічних властивостей і -чутливості до лр отих^ам - ^ Л— них препаратів. .

9. Проведений розрахунок економічної ебєктпек~сті ветеринарних заходів при хламідіові фгаїв-плідажів 'свідчить про те

' цс хламідіоз -вавдаз значних економічних збитків господарствам, а своєчасне проведення оздоровчих і лікувальних -заходів дас всгливість їх зменшити в 1,5 рази.

' пршичнг прогозиц: ї -

1. Розроблена наші і схвалена Головним управлінням вете-

ринарної-иедіарап; з дерх.вет. інспекцією' України "Настанова о лабораторної діагностики' хламідіозів сільськогосподарських гварик". '

2. Підготовлений і виданий інформаційний лист "Спрощений лікрометод постановки реакції зв’язування комплементу'”."037-93.

3. Результати клініко-епізоотологічнсгс вивчення хламі-тіозу бугаїз-плідників з племпідприомствах України будуть зи-Ессристанг цря підготовці інструктивно-методичних документів.

Зміст дисертації опублікований -в ІЗ роботах, найбільш зааливі із яких слідуоті: .

1. Изучение хлакидиозов зо Львовской- области. /АЛЗ.Верби-їєц, Н.А.Виноград, З.АЛукьяіщук и др./ Хлаїдаджінне инфекция:

36 .научных трудов НШ эпидемиологии к микробиологии им.Я.З.Га-.талеи.-Москва, 1966.-С.89-92. .

2. Цитологический тест при диагностике офтальмохзамидяоза

/З.А.Лукьякчук, И.Г.Кордснец/.//Рекомендации по результата:.! заучкюс исследований.-Львов, 1937.-С. 14-15. .

3. Хлакадиозв з Западном регионе УССР. /А.В.Вербинец, '

I.И.Сергеенко, И.К.Авдосьева, Н. А.Виноград, З.А.Лукьянчук и зр./.'//Эпизоотология, эпидемиология^, средства диагностики, гераппн и слзц.продилактики инбекц.. болезней, общих для человека и ¡пивотннх: Тез.докл.Всесовзной • конференции.:-Львов, ■

[988.-С.ПО. > " ' ' .*

4. Распространение хламидай среди-коров-дсноров и реципиентов /А.И.Сергеенко, И.К.Авдосьева, М.И.Иванив..., В.А.Лукьян-зук и др./.// Эпизоотология, эпидемиология, средства диагнсс-гик::, терапии и спец.профилактики. инйекц.болезней,- общих для человека и ответных: Тез.докл.Всесоюзной конференции.-Львов, 1983.X.130.

5. Распре странен:: е хлаїзцзісз'ов среди'--людей'к' сельскохо-зяйственяЕсс жзс-таых з Западном регионе УССР /А.В.Вербикец, Ї.А.Вхшсград, З.А.Лухьянчук, И.К.Авдосьева/.//Актуальные проблеми развитая гзе;пщшісвей науки з современных условиях: Тез . дс:с".п?.;-тзіо-практ:гсескоП конференции.-Львов, 1990.-С. 101.

6. Ііг-лісфлусресцєнтннй метод обнаружения хламшшй в реп-

родуктивншс органах быков /А.И.Сергиенко, И.К.Авдосьева, . В.А.Лукьанчук и др./.// Проблемы научного обеспечения животного, ства Молдавии: Тез.докл.Всесоюзной конференции.-Кишинев, І990.-С.95.

7. Сравнительная, оценка специфической активности хлаыидий-ньгх антигенов /И.К.Авдосьева, В.АЛукьянчук, Л.Д.Беклешова/. //Совершенствование методов госконтроля ветеринарных препаратов Тез.докл.Всесоюзной конференции.-Москва, І99І.-С.95.

8. Спрощений иікрометод постановки реакції зв’язування

комплементу /І.К.Авдосьєва, В.0.Лук’янчуг:/.//Інформаційний лист Львівський "ЦЕЛЫ, 1993.-!Х>87-93. .

9« Usage of dosed local hgrpertensia (ELH) eethod is tlie tretamt of sterility by Chlamidia trachomatis /o.Slu*hinska, C.0aati7i», I.Stujmicky,

V»Lutynchui/.// 8-th Congress of associatin of gynaecologists arxd obstetri-cians,-Ljnbljaaa.. Slovenia«—1993*~C»—156«

10, Reproductive failure in womb vomen -with Chlamydia trachomatis in» fection /о. SluihinskA, V€ Lukyuchut et.il./«// 2-ой world tingress of perinatal ctedicioe«- Some, Ealy, t9«Z4 •eptcbi>cr^1S53*~S.';E5.