Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Химиотерапевтическая активность хиноксидина при колибактериозе и сальмонеллезе свиней

На правах рукописи

Па ОД

ЗОЛОТОТРУБОВ Алексей Петрович

ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ХИНОКСИДИНА ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ И САЛЬМОНЕЛЛЁЗЕ СВИНЕЙ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ВОРОНЕЖ - 2000

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном инсти патологии, фармакологии и терапии РАСХН

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Ануфриев А.И.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Евглевский Ан. А.,

Ведущая организация: Белгородская сельскохозяйственная академия

Защита состоится " 21 " декабря 2000 г. в 12 час. на заседании диссертационного сов; 120.54.04 при Воронежском государственном аграрном университете им. К.Д. Глинки п ресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Воронежского государственного агр го университета им. К.Д. Глинки.

Автореферат разослан " /У-" Ко

Учёный секретарь Ефановс

диссертационного совета

кандидат ветеринарных наук, доцент Жмуров Н.Г.

П9ГС. У'лл^и^гпв, О

l

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Успех лечения при инфекционных заболеваниях животных бак-гриальной этиологии во многом зависит от правильного выбора лекарственных средств и зоевременного их применения, сочетая этиотропные, патогенетические и симптоматиче-кие препараты. Одними из основных средств борьбы с инфекционными агентами являются етибактериальные препараты, использование которых в лечебно-профилактической работе е только не ослабевает, но и постоянно расширяется.

Однако из-за широкого и зачастую их бесконтрольного применения, прежде всего ан-iGiiOTHKOß, возникла проблема резистентности к ним микроорганизмов. Эшерихии и саль-онеллы быстро приобретают лекарственную устойчивость, как в эксперименте, так и в роизводственных условиях. Кроме того, многие антибактериальные средства в отдельных пучаях оказывают негативное действие на организм. Поэтому актуален поиск высокоэф-ективных, малотоксичных антибактериальных препаратов, к которым длительное время е формируется резистентность у патогенной микрофлоры (Шендеров Б.А., Щербаков A.A., 973; Притулин П.И., 1977; Шахов А.Г., 1999; Карева Э.П., Солдатенко H.A., Зимина .Н.,1999; Аржаков В.Н., 1983; Ефанова Л.И.,1997; Павлов В.Н., 1990; Макаров В.В., Гусев ..А., Панин A.n., 2000; Аитони И., Фуревич И., Зыска В.,1988; Bertschinger Н„ 1997; Энри-га Б.. 1999; Medders W.M., Wooley R.E., Gibbs P.S., Shotts E.B., Brown J.K., 1998).

В последние годы установлено, что некоторые производные хиноксалина обладают мнительной химиотерапевтической активностью при острых бактериальных инфекциях, в эм числе и при инфекциях, трудно поддающихся терапии антибиотиками, сульфанилами-ами, нитрофуранами и другими антибактериальными средствами. Хиноксидин является дним из представителей хиноксалинов. Он эффективен в отношении многих грамотрица-ельных и грамположительных микроорганизмов, а также некоторых простейших. Извест-

0, что препарат относится к среднетоксичным соединениям (Падейская E.H., Першин Г.Н., еяозёрова К.А., 1966; Падейская E.H., Елина A.C., Першин Г.Н., Цырульникова Л.Г., Белоброва К.А., 1967; Дворянцева Г.Г., Линдеман C.B., Алексанян М.С. и др., 1990; Падейская

1.H., Полухина Л.П., Буданова Л.И. и др., 1978; Белозёрова К.А., Елина A.C., Магидсон >.Ю. и др., 1975; Елина A.C., Цырульникова Л.Г., Магидсон О.Ю., Фатнева А.И., 1968. 973; Падейская E.H., 1984; Антипов В.А., 1995; Аргунов М.Н., Тишков А.И., 1995; Даню-1енкова Н.М., Хулуп Г.Я., Спевак C.B. и др., 1987; Селиванова A.C., Бирюкова Н.П., Аугу-авичюс ЗЛО. и др., 1983; Соколов В.Д., Рабинович М.И., Горшков Г.И. и др., 1997; Маш-овский М.Д., 1998; Szynkiewich Z., Jakubowski T., Binek M., Dziaba K., Bartosz В., Stepniak 1, Wojcik U„ 1984).

В медицине хиноксидин применяют для лечения тяжелых форм гнойных воспалительных процессов, в случаях, когда инфекция вызвана микрофлорой, а также штаммами бакте рий, устойчивых к антибиотикам или когда лечение антибиотиками и другими антибактериальными препаратами неэффективно (Машковский М.Д., 1998; Падейская E.H., Першиь Г.Н., Белозёрова К.А., 1966; Падейская E.H., Елина A.C., Першин Г.Н., Цырульникова Л.Г. Белозёрова К.А., 1967; Падейская E.H., Полухина Л.П., Буданова Л.И. и др., 1978; Падейска? E.H., 1984; Данющенкова Н.М., Хупуп Г.Я., Спевак C.B. и др., 1987; Соколов В.Д., Рабинович М.И., Горшков Г.И. и др., 1997; Ашбель С.И., 1973). Что касается использования хинок сидина в ветеринарии, то этот вопрос до сих пор недостаточно разработан. Поэтому, изучение показаний к применению хиноксидина при инфекционных болезнях животных являете; актуальной задачей ветеринарной медицины.

Цель и задач» исследований. Целью наших исследований являлось изучение химио терапевтической активности хиноксидина при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят i внедрение его в клиническую практику. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить бактериостатические и бактерицидные свойства хиноксидина in vitro в от ношении некоторых музейных и полевых штаммов культур бактерий.

2. Изучить возможность адаптации эшерихий и сальмонелл к хнноксидину.

3. Изучить влияние препарата на ультраструктуру эшерихий и сальмонелл.

4. Изучить индекс защиты хиноксидина при экспериментальных инфекциях белы> мышей.

5. Провести клинические испытания хиноксидина при колибактериозе и сальмонелле зе поросят в производственных условиях и разработать показания к его применению в всте ринарии.

Исследования проведены в 1997 - 2000 гг. в соответствии с планом НИР ВНИВИП ФиТ по теме 04.03.Д5: " Создание и предложение ветеринарной практике экологическ! безопасной системы ветеринарной защиты животных от болезней органов воспроизводства молочной железы, желудочно-кишечных, респираторных болезней, нарушений обмена ве ществ и снижения общей неспецифической резистентности, включающую применение не карственных и биологически активных препаратов ".

Научная новизна. Впервые изучены антибактериальная активность хиноксидина il vitro в отношении некоторых потенциальных возбудителей инфекций свиней, и in vivo н: моделях эшерихиозной и сальмонеллёзной инфекций белых мышей; влияние препарата hi ультраструктуру эшерихий и сальмонелл; возможность адаптации их к хиноксидину; тера

ггевтическая эффективность препарата при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят и влияние его на морфологические и иммунобиохимические показатели крови больных животных.

Практическая значимость. Разработаны показания к применению хнноксидипа при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят.

Внедрение результатов исследований. Материалы диссертации вошли во I. Временное наставление по применению хиноксидииа для лечения желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят и поросят бактериальной этиологии (утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ от 10.07.2000г., № 13-5-2/2067); 2. Методические рекомендации "Комплексная экологически безопасная система зашиты здоровья животных", Москва, 2000г.

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 6 научных статьях.

Обьём н структура диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследовании, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список литературы.

Работа иллюстрирована 16 таблицами и 25 рисунками. Список литературы включает 267 источников, в том числе 223 отечественных и 44 иностранных автора.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. О широком спектре антибактериальной активности хиноксидииа.

2. О высокой эффективности хиноксидииа как химиотерапевтического средства при колибактериозе и сальмонеллёзе поросят.

3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Настоящая работа выполнена в отделе микробиологии, вирусологии и иммунологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии в 1997 - 2000 гг. в соответствии с планом НИР института по теме: "'Создание и предложение ветеринарной практике экологически безопасной системы ветеринарной защиты животных от болезней органов воспроизводства, молочной железы, желудочно-кишечных, респираторных болезней, нарушений обмена веществ и снижения общей неспецифической резистентности, включающую применение лекарственных и биологически активных препаратов".

Хиноксидин относится к веществам, практически не растворимым в воде и спирте. В связи с этим предварительно была отработана методика его растворения в воде с использованием натрия лимоннокислого и натрия гидрокарбоната. При постоянном взбалтывании в

приборе "ELPAN (water bath shaker) type 357" и температуре 55° С препарат растворяли в тс чение 3-4 часов до 0,5 %-й концентрации ex tempore.

Антимикробную активность хиноксидина определяли методом серийных разведений жидкой питательной среде. В качестве тест-культур в работе использовали референтные (м> зейные) и полевые (эпизоотические) штаммы потенциальных возбудителей желудочнс кишечных и респираторных инфекций. Минимальную бактериостатическую концентрацш (МБСК) устанавливали с учётом признаков роста микроорганизмов на мясо-пептоннног бульоне (МПБ).

Для определения минимальной бактерицидной концентрации (МБЦК) препарата из по следних пробирок с МПБ, где не было помутнения среды, делали посевы в чашки Петри н плотные питательные среды (МПА). Инкубацию проводили в термостате при температур 37° С в течение 24 - 72 часов.

При определении чувствительности пастерелл и гемофил к препарату, к питательны! средам добавляли до 7 % дефибринированной крови. Результаты учитывали в течение дней.

Для изучения воздействия хиноксидина на субмикроскопические структуры бактери альной клетки в опыте in vitro использовали культуры Е. coli 866 и S. choleraesuis в фазе ло гарифмического роста. Суточные культуры указанных микроорганизмов пересевали в МПЕ из расчёта 200 тыс. микробных клеток на 1 мл питательной среды, после чего культивирова ли в течение 5 часов в условиях усиленной аэрации при постоянном взбалтывании в прибор ELP AN type 357. Следующим этапом было добавление хиноксидина в минимальной бакте риостатической и минимальной бактерицидной концентрации к 5-часовой культуре бакте рий. а также в количестве, в 4 раза превышающем минимальную бактерицидную концентра цию. В качестве контроля исследовали культуры сальмонелл и эшерихий без добавлена препарата.

Опытные и контрольные образцы, после 3-х и 6-ти часового воздействия хиноксиди ном, центрифугировали в течение 30 минут при 1500 об./мин. на центрифуге Опн-3 УХЛ Осадок отмывали 4 раза в изотоническом растворе натрия хлорида. После этого, к получен ному осадку добавляли 2,5 % глутаральдегид на s-коллидиновом буфере и выдерживали та ким образом в течение 1 часа. Затем, осадок центрифугировали в течение 10 минут при 3001 об./мин., отмывая его 10 % раствором сахарозы 5 раз по 20 мин. Для постфиксации исполь зовали четырёхокись осмия. Фиксированный материал обезвоживали в восходящих концен трациях этанола, после чего осадок заключали в смесь эпоновых смол. Срезы готовых oöpai цов делали на ультратоме 4КВ-380А и контрастировали уранилцитратом и цитратом свинц:

Полученные препараты просматривали в поле зрения электронного микроскопа ТЕБЬА-500 при ускоряющем напряжении 90 кВт.

Для изучения возможности адаптации и реадаптации эшерихий и сальмонелл к хинок-сидину проводили их культивирование в мясо-пептонном бульоне (МПБ), содержащем возрастающие концентрации препарата, а также в МПБ, не содержащем хиноксндин. Всего было сделано 50 пассажей. Степень увеличения устойчивости исследуемых микроорганизмов определяли по коэффициенту резистентности, который соответствовал отношению максимальной, не препятствующей росту бактерий, концентрации препарата к исходной. Также учитывали изменения культурально-морфологических свойств и ферментативной активности эшерихий и сальмонелл.

Кроме того был определён индекс специфической защиты хиноксидина на моделях эшерихиозной и сальмонеллёзной инфекций белых мышей линии ВАЬВ С 57/6, массой 18 -20 г. Лабораторных животных предварительно проверяли на носительство сальмонелл. Перед заражением животных указанными возбудителями определяли минимальную 100%-ю летальную дозу (ОЬМ) суточных культур микроорганизмов. Мышей заражали взвесью бактерий внутрибрюшинно. Препарат вводили рег оя, в виде 0,5 % раствора. Индекс специфической защиты (эффективности) препарата определяли по формуле В.Д. Белякова (1961). Для определения специфичности гибели лабораторных животных проводили бактериологическое исследование крови, взятой из камер сердца, а также лёгких, печени, селезёнки и почек.

Клинические опыты по изучению химиотерапевтической активности хиноксидина проводили на поросятах-сосунах 3-7 дневного возраста и поросятах группы доращивания 2-4 месячного возраста, в зимне-весенний период в условиях специализированных хозяйств но доращиванию и откорму ТОО 'Тихий Дон" Острогожского района и ТОО "Вншневское" Верхнехавского района Воронежской области. Поросят-сосунов содержали совместно со свиноматками в станках типовых свинарников-маточников, а поросята 2-4 месячного возраста - группами по 15 - 20 голов, в станках, безвыгульно, в типовых помещениях. Кормление подопытных животных осуществлялось в основном механизированным способом. Тип кормления - концептратный с добавлением корнеплодов и компонентов животного происхождения, водопой - вволю. Рационы сбалансированы по основным питательным веществам, витаминам, макро- и микроэлементам согласно действующим нормам.

Клинический эксперимент проводили с учётом требований к врачебно-биологическому эксперименту (И.Т. Фролов, 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдения одинаковых условий кормления и содержания подопытных животных в период исследова-

ний. Для исключения случайных результатов проводили несколько повторных экспериментов.

При определении клинического статуса больных поросят проводили измерение ректальной температуры, устанавливали частоту и характер пульсовой волны, макроскопически исследовали носовые истечения, методами осмотра, бимануальной пальпации и перкуссии оценивали состояние печени, тонкого и толстого отделов кишечника, а также проводили макроскопическое исследование фекалий (учитывали частоту дефекации; количество фекалий, выделяемое за одну дефекацию и за сутки; их консистенцию, форму; цвет, запах и наличие таких примесей, как кровь, слизь, гной и т.д.).

Для изучения влияния хиноксидина на морфологические и иммунологические показатели крови и общую неспецифическую резистентность организма подопытных поросят брали соответствующие пробы из сосудов хвоста. В крови определяли содержание эритроцитов и лейкоцитов на счётчике частиц Культер Каунтер (пр-во Франция), количество гемоглобина - гемоглобннцианидным методом и с помощью гемометра Сали. Кроме того, выводили лейкоцитарную формулу методом дифференциального четырёхпольного подсчёта 200 лейкоцитов под иммерсионной системой микроскопа в мазках крови, окрашенных по методу Рома-новского-Гимза (определяли процентное содержание каждого вида лейкоцитов). В качестве показателей уровня общей неспецифической резистентности организма устанавливали: бактерицидную активность сыворотки крови - по методу О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), комплементарную активность - по О.В. Бухарину и Н.В. Васильеву (1974), лизоцим-ную активноть - по К.А. Каграмановой и З.В. Ермольевой (1966), фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число - по B.C. Гостеву (С.И. Плященко. В.Т. Сидоров, 1979). Определение общего белка в сыворотке крови проводили рефрактометрическим методом, учитывая коэффициенты преломления. Содержание белковых фракций устанавливали методом Олла и Маккорда в модификации С.А. Карпюка (1962), качественное определение иммуноглобулинов - методом Манчини (1974). Содержание суммарных иммуноглобулинов - по А.Д. Мак Юан с соавт. (1970).

Вскрытие павших поросят и патоморфологический анализ изменений в органах и тканях осуществляли в соответствии с методикой, используемой в морфологии (A.A. Авроров с соавт., 1984).

Диагноз на колибактериоз и сальмонеллёз устанавливали комплексно с учётом результатов эпизоотологических, клинических, патологоанатомических, бактериологических, а также серологических (на сальмонеллёз) исследований. При постановке диагноза исключали вирусные и паразитарные инфекции. До и после применения средств химиотерапии (хинок-

сидин и диоксидин) проводили бактериологическое исследование патологического материала (кровь из сердца, лёгкие, печень, почки, селезёнку, брыжеечные лимфоузлы), взятого от павших и убитых с диагностической целью животных, больных колибактериозом и сальмо-неллёзом. Патологический материал исследовали не позднее 2-3 часов после его взятия.

Посевы патологического материала проводили на обычные (МПА, МПБ) и селективные (Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфит-агар) питательные среды. Кроме того, проводили некоторые биохимические тесты с использованием среды Олькеницкого (трёхсахар-ный агар) и агара Симмонса. Посевы инкубировали в термостате при 37° С в течение 18 - 24 часов, после чего определяли культуральные свойства выделенных микроорганизмов. Несколько типичных колоний каждого вида бактерий отсеивали в пробирки на скощенный МПА для дальнейшего изучения. Также учитывали тинкториальные (окраска по Граму) и биохимические свойства (утилизация углеводов, образование кислоты, индола и сероводорода) чистых культур общепринятыми в бактериологии методами. Патогенность выделенных микроорганизмов определяли на белых мышах. Наблюдение за лабораторными животными вели в течение 10 дней, учитывали заболеваемость и падёж. От павших мышей реизолирова-ли соответствующие монокультуры. Видовую принадлежность бактерий устанавливали с помощью "Определителя D. Bergey" (1997) и "Определителя зоопагогенных микроорганизмов" под редакцией Сидорова М.А. (1995).

Идентификацию выделенных энтеробактерий проводили, согласно "Методическим рекомендациям по выделению и идентификации условно-патогенных энтеробактерий и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных (1990)". Серологическую типизацию сальмонелл и эшерихий проводили в реакциях агглютинации с О- и Н-агглютинирующими сальмонеллёзными сыворотками и О-колисыворотками согласно "Наставлению по применению агглютинрующих О-колисывороток" (1980 г.) и "Методическим указаниям по применению сальмонеллёзных мо-норецепторных О- и Н-агглютинирующих адсорбированных сывороток для идентификации сальмонелл" (1978 г.).

Чувствительность выделенных культур микроорганизмов к антибактериальным средствам (пенициллин, тетрациклин, стрептомицин, канамицин, гентамицин, эритромицин, лево-мицетин, цефазолин, полимиксин, оксациллин, цефаЛотин, ампициллин, рифампицин, лино-комицин, фурадоннн, фурагин, нетилмицин, тобрамицин, карбенициллин, цефуроксим, диоксидин) определяли методом индикаторных бумажных дисков в чашках Петри с плотной питательной средой (МПА). Результаты определения чувствительности к антибактериальным препаратам оценивали по величине зоны задер:кки роста.

Исследование сывороток крови от больных поросят проводили 2-3 раза с интервалом в 14 дней в реакции агглютинации с сальмонеллёзным и эшерихиозным антигенами, которые готовили из полевых штаммов возбудителей. Культуры высевали на МПА. Из полученных суточных культур микроорганизмов готовили взвесь на изотоническом растворе натрия хлорида с концентрацией микробных клеток - 2 млрд./мл по оптическому стандарту мутности. Изучение токсичности хиноксидина проводили в отделе патологии и фармакологии ВНИ-ВИПФиТ. В процессе эксперимента определяли острую и хроническую токсичность препарата, а также эмбритоксическое и тератогенное действие с использованием общепринятых методик. Изучение влияния хиноксидина на ультраструктуру эшерихий и сальмонелл проводили в отделе физико-химических исследований ВНИВИПФиТ. Статистическую обработку полученных данных проводили общепринятыми методами (Е.К. Меркурьева, 1964) с использованием персонального компьютера IBM.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Антимикробная активность хиноксидина

Из музейных штаммов самую высокую чувствительность к хиноксидину проявили Е. coli 866 (минимальная бактериостатическая концентрация составила 7,8 мкг/мл, а минимальная бактерицидная концентрация - 15,6 мкг/мл), а также S. choleraesuis и S. breslau (минимальные бактериостатические концентрации составили соответственно 7,8 и 15,6 мкг/мл, а минимальные бактерицидные концентрации - 15,6 и 31,25 мкг/мл). Концентрации хиноксидина, задерживающие рост пастерелл и действующие бактерицидно, были соответственно 7,8 (15,6) мкг/мл и 31,25 мкг/мл. Среднюю чувствительность к препарату выявили у таких серовариантов сальмонелл, как S. typhimurium и S. dublin (минимальная подавляющая рост концентрация - 31,25 мкг/мл, а минимальная бактерицидная концентрация - 62,5 мкг/мл).

Наиболее устойчивым к препарату оказался золотистый стафилококк (минимальная подавляющая рост концентрация - 62,5 (125) мкг/мл, а минимальная бактерицидная концентрация - 250 (500) мкг/мл).

Полевые штаммы микроорганизмов также как и музейные, обнаружили высокую чувствительность к хиноксидину. Концентрация препарата 7,8 мкг/мл оказывала бактерицидно< действие, а 3,9 мкг/мл - бактериостатический эффект на такие культуры, как Е. coli 078, 08 015 и P. mirabilis. Многие из полевых штаммов кишечной палочкй (Е. coli 026, 0147 и 0141 02, 0111) не росли в МПБ при содержании хиноксидина - 7,8 и 15,6 мкг/мл, а добавлена его к питательной среде в количестве соответственно 15,6 и 31,25 мкг/мл вызывало гибел! микроорганизмов. Некоторые серологические варианты кишечной палочки (0142, А20 i

149) обладали средней чувствительностью к хиноксидину, (минимальная бактериостатиче-ая концентрация составила 31,25 мкг/мл, а минимальная бактерицидная концентрация -,5 мкг/мл). Такой же уровень чувствительности был у полевого штамма S. choleraesuis. БСК и МБ„К в отношении полевого штамма S. enteritidis составили 62.5 мкг/мл. Довольно фаженную активность хиноксидин обнаружил при воздействии на Н. Pleuropneumonie IBeK - 31,25 мкг/мл, МВД - 62,5 мкг/мл). Для Р. vulgaris МБСК и МБЦК составили 31,25 ;г/мл. Наиболее высокой резистентностью к хиноксидину обладал полевой штамм синег-1ЙНОЙ палочки (МБСК - 62,5 мкг/мл, а МБЦК - 125 мкг/мл).

Исходя из полученных данных, можно заключить, что хиноксидин в опытах in vitro за-комендовал себя как препарат широкого спектра антимикробного действия, обладающий юокой активностью в отношении большинства тестируемых музейных (референтных) и шевых (эпизоотических) культур микроорганизмов.

3.2 Изучение адаптации эшерихий и сальмонелл к хиноксидину

В опыте определяли возможность повышения устойчивости Е coli 866 и Salm, choleraeis к хиноксидину. Предварительно проводили контрольное определение антимикробной тивности препарата в отношении указанных культур бактерий методом последовательных зведений в жидкой питательной среде, устанавливая минимальную концентрацию хинок-[дина, подавляющую рост микроорганизмов в МПБ.

Для изучения адаптации указанных культур бактерий к препарату проводили их куль-[вирование в мясо-пептонном бульоне (МПБ), содержащем возрастающие суббактериоста-[ческие концентрации хиноксндина.

Развитие устойчивости бактерий к препарату происходило плавно н увеличилось в те-:ние 25 пассажей от 7,8 мкг/мл до 125 мкг/мл (коэффициент резистентности = 16) у Е. coli от 7,8 мкг/мл до 62,5 мкг/мл (коэффициент резистентности = 8) у Salm. chol. suis. После ¡-го пассажа увеличение устойчивости эшерихий и сальмонелл к хиноксидину останавли-лось. После 10-го пассажа у эшерихий и сальмонелл отмечали изменения исходных куль-•рально-морфологических и биохимических признаков.

Для решения вопроса о стабильности приобретённых свойств у эшерихий и сальмо-;лл были проведены последовательные пассажи полученных адаптированных штаммов на ПБ, не содержащем хиноксидин. Минимальная бактериостатическая концентрация хинок-[дина в отношении кишечной палочки длительно не изменялась и оставалась на уровне 15 мкг/мл в течение 10 пассажей. В течение последующих 10 пассажей происходило бы-рое снижение МБСК препарата до первоначального уровня (7.8 мкг/мл). У сальмонеллы леньшение резистентности к хиноксидину отмечали уже после 5 пассажа, к десятому - она

равнялась 31,25 мкг/мл. Восстановление прежней чувствительности сальмонелл к хинокси дину регистрировали через 15 пассажей (МБСК - 7,8 мкг/мл). Чувствительность к хинокси дину, культуральные и биохимические свойства адаптированных бактерий возвращались i исходным через 20 пассажей у Е coli 866 и через 15 пассажей у Salm, choleraesuis.

3.3. Изучение действия хиноксидина на ультраструктуру эшерихий н сальмонелл

Изучены субмикроскопичсские изменения в клетках энтеробактерий, возникающие пс влиянием различных концентраций хиноксидина с учётом длительности его воздействия, качестве исследуемых культур были взяты кишечная палочка (Е. coli 0142) и с&чьмонел; (S. choleraesuis).

На продольных срезах, до обработки, Е. coli имела вид палочки (на поперечных срез; округлая) с закруглёнными концами. При изучении структуры клеточной стенки (КС) выя лялись наружная (пластинчатый слой) и низкой электронной плотности внутренняя (рига ный слой) мембраны КС. Базальная мембрана ригидного слоя не обнаруживалась, что хара терно для бактерий, находящихся в логарифмической фазе роста. Пластинчатый слс представлен одноконтурной линией или приобретал извилистые очертания. Цитоплазмат: ческая мембрана (ЦМ) была представлена одноконтурной линией, а у делящихся клет( трёхслойной.

Цитоплазма бактериальных клеток, имела вид гранулярной структуры высокой эле тронной плотности, внутрицитоплазматические включения отсутствовали. Ядерный алпар: (нуклеоид) у большинства бактерий был отчётливо отграничен от цитоплазмы (осмиофобн: зона с тонкими осмиофильными фибриллами ДНК) и занимал центральную часть клетк Амитотическое бинарное деление бактериальных клеток осуществлялось путём перетяжки.

Контрольная клетка сальмонеллы имела строение, типичное для этого вида бактери В отличие от эшерихий, у Salm, choleraesuis структура КС и ЦМ просматривалась более чё ко. В их цитоплазме можно было наблюдать мелкие одиночные осмиофильные включени локализованные чаще всего вблизи нуклеоида.

При воздействии хиноксидина в течение 3 часов в концентрации 15,6 мкг/мл (МБи' наблюдали изменение ультраструктуры кишечной палочки. В цитоплазме появлялись мн жественные электронно-плотные включения разной величины, располагающиеся диффузн у многих клеток отмечали формирование вакуолей. Электронная плотность гранулярно компонента цитоплазмы значительно увеличивалась, нуклеоид не дифференцировался. И

менення в КС проявлялись в уменьшении электронной плотности пластинчатого слоя, в некоторых местах происходило разрушение пластинчатого и ригидного слоев.

При увеличении времени воздействия хиноксидином до 6 часов в бактериальных клетках отмечали в основном те же изменения, что и при 3-х часовом воздействии, и возрастала степень их выраженности. Деструктивные изменения замечали в ЦМ, местами происходило полное ее разрушение. В некоторых клетках образовывались крупные включения волютина и гликогена. Обнаружение на наружной мембране КС бактериофагов свидетельствует об инактивации системы фагового репрессора, который способствует репродукции бактериофага, что является косвенным признаком массового лизиса клеток Е. coli.

При увеличении концентрации хиноксидина до 62,5 мкг/мл (4МБЦК) и 3-х часовом времени воздействия происходило практически полное разрушение КС и ЦМ. Нуклеоид не дифференцировался. Цитоплазма полностью утрачивала гомогенную структуру, происходил лизис гранулярного компонента и формирование крупных глыбчатых структур. В некоторых клетках различали множественные электронно-плотные включения разной величины.

Увеличение времени воздействия хиноксидином на эшерихии до 6 часов (концентрация препарата 62,5 мкг/мл) приводило к ещё более глубоким изменениям ультраструктуры клеток. Происходили практически полный лизис гранулярного компонента цитоплазмы, а также выраженные деструктивные изменения КС и ЦМ, что приводило к значительной деформации самих клеток, которые полностью утрачивали форму палочек.

Воздействие хиноксидином на сальмонеллы в течение 3-х часов в концентрации 15,6 мкг/мл (МБ„К) вызывало деструкцию цитоплазматического матрикса, что выражалось в формировании множественных электронно-плотных включений и увеличении осмиофильно-сти или осмиофобности гранулярного компонента цитоплазмы. Нуклеоид не дифференцировался. У многих клеток отмечали разрушение ЦМ и КС: расслоение, деформацию, местами лизис.

Увеличение времени воздействия хиноксидином иа сальмонеллы до 6 часов в концентрации 15,6 мкг/мл сопровождалось повышением количества лизированных бактериальных клеток. Иногда обнаруживали только фрагменты КС. Сохранившиеся клетки были значительно деформированы, обнаруживали множественные крупные электронно-плотные внут-рицитоплазматические включения, нуклеоид у большинства сальмонелл не дифференцировался. Местами наблюдали лизис ЦМ и ригидного слоя КС, пластинчатый слой приобретал извилистые очертания. У некоторых бактерий происходил практически полный лизис цитоплазмы, с формированием крупных одиночных глыбчатых структур.

Воздействие на сальмонеллы хиноксидином в .течение 3-х часов в концентрации 62, мкг/мл (4МБ,JK) приводило к более глубоким изменениям ультраструктуры бактерий, ув( личивалось количество поражённых клеток. Отмечено формирование вакуолей, образован!] множественных электронно-плотных включений, уменьшение электронной плотности цитс плазмы, локальное разрушение ЦМ и КС. Нуклеоид не дифференцировался. В поле зренн встречали большое количество лизированных, значительно деформированных бактериал! ных клеток. По периферии лизированных клеток были локализованы остатки цитоплазма» ческого матрикса.

При увеличении времени воздействия хиноксидином на сальмонеллы до 6 часов в то же концентрации препарата (62,5 мкг/мл) большинство бактериальных клеток оказались ли зированными. Остатки гранулярного компонента цитоплазмы были локализованы по пери ферии клеток. Происходило практически полное разрушение ЦМ. Остатки цитоплазмы был представлены крупными электронно-плотными глыбчатыми структурами. Большую част клетки занимали обширные электронно-светлые участки. Нуклеоид не дифференцировало происходила дезинтеграция ЦМ и КС. У сохранившихся бактериальных клеток также на блюдали лизис и дезинтеграцию ЦМ и КС. Нуклеоид не дифференцировался, большую част клетки занимают элею ронно-светлые зоны, заметно снижение электронной плотности цитс плазмы по сравнению с контролем.

Таким образом, полученные результаты проведённых электронно-микроскопически. исследований свидетельствуют о выраженном деструктивном воздействии хиноксидина концентрациях 15,6 и 62,5 мкг/мл при 3-х и 6 часовой экспозиции на клеточную стенку, ци топлазматическую мембрану, а также на цитоплазму и нуклеоид эшерихий и сальмонелл.

3.4. Индекс специфической защиты хиноксидина при экспериментальных инфекциях

белых мышей

Индекс защиты хиноксидина изучали при экспериментальных эшерихиозной и сальмо неллёзной инфекциях белых мышей. Для заражения использовали полевые штаммы Е. col 08 и S. choleraesuis, выделенные от павших поросят. Препарат вводили per os из расчёта 1' мг на кг массы тела

Наибольшую активность хиноксидин проявил при эшерихиозной инфекции. Одно кратное введение препарата через 3 и через 6 часов после заражения обеспечивало 100%-i индекс защиты. Через 12 часов после инфицирования этот показатель составил 83%.

При сальмонеллсзнон инфекции наибольший защитный эффект был достигнут при введении препарата через 3 (83%) и 6 часов (66%) после инфицирования. Через 12 часов после заражения индекс зашиты составил 50%.

В контрольных группах мышей, которые не подвергались обработке хиноксидином, падёж составил 100%. Из крови сердца, лёгких, печени, почек и селезёнки реизолировали исходные культуры.

Таким образом, наиболее выраженное (83-100%) протективное действие хиноксидин эказывает при эшерихиозной инфекции. Несколько ниже (50-83%) индекс защиты препарата оказался при сальмонеллёзной инфекции белых мышей.

3.5. Лечебная эффективность хиноксидииа при колибактернозе поросят

Лечебную эффективность хиноксидииа изучали в трёх сериях опытов на поросятах 3 -7 дневного возраста, больных колибактериозом.

Колибактсриоз проявлялся в септической и энтеритной формах. У больных животных зтмечали снижение или отсутствие аппетита, нарастающее обезвоживание, прогрессирующее угнетение и другие признаки поражения центральной нервной системы на фоне токсикоза. Поражение сердечно-сосудистой системы выражалось в цианозе, анемии и различных зидах тахиаритмий. У многих поросят отмечали профузный понос, испражнения жидкие 'серовато-белого или жёлто-серого цвета) с пузырьками газа, иногда со слизью. При патоло-■оанатомическом вскрытии павших поросят-сосунов с прижизненными признаками коли-зактериоза изменения главным образом находили в желудочно-кишечном тракте (острый <атарально-геморрагическому гастроэнтероколит) с преимущественной локализацией процесса в тонком отделе кишечника. Иногда желудок павших поросят был наполнен неболь-лнм количеством сгустков створоженного молока. У некоторых животных отмечали крово-1злияния на слизистых и серозных покровах (чаще на слизистой желудка, тонкого отдела опиечника, под эпикардом, на эндокарде и брюшине). Брыжеечные лимфатические узлы увеличены, на разрезе сочные с покраснением. В некоторых случаях отмечали дистрофию 1ечени (увеличеиие органа в размерах и желтовато-серый цвет паренхимы).

При бактериологическом исследовании патологического материала (кровь из сердца, лечень с желчным пузырём, почки, брыжеечные лимфатические узлы) от 1 павшего и 2 убитых с диагностической целью поросят (в каждом опыте) из крови сердца, лёкгих, брыжееч-шх лимфоузлов и желчного пузыря были выделены культуры Е. coli 0141, 0147 и 0149. мтогенные для белых мышей. Выделенные культуры тестировали на предмет чувствитель-гости к антибактериальным препаратам.

Из испытанных средств рост кишечной палочки выделенной от поросят, принадлежа щих ТОО "Вишневское", задерживали только цефазолин, канамнцин, цефалотин, нетилми цин, юбрамицин и диоксиднн. К другим препаратам (фурадонин, фурагин, линкомицин рифампицин, цефуроксим, гентамицин и полимиксин) она оказалась среднемувствителько; или совсем не чувствительной (оксациллин, эритромицин, ампициллин, рифампицин, лин комицин, фурадонин, стрептомицин, тетрациклин, левомицетин, фурагин, карбенициллин гентамицин, пенициллин, цефуроксим, полимиксин).

Е. coli, выделенная от поросят, принадлежавших ТОО "Тихий Дон", была чувствительна только к 5 препаратам: к канамицину, ампициллину, фурадокику, полимиксину и диоксидину, другие антимикробные средства (цефазолин, цефалотин, фурагин, нетилмицин тобрамицин, гентамицин, цефуроксим) задерживали рост культуры в меньшей степени. Остальные (оксациллин, эритромицин, рифампицин, линкомицин, стрептомицин, тетрациклин, левомицетин, карбенициллин, пенициллин) не проявляли активности. Проведенные исследования показали, что эшерихии обладали множественной трансмиссивной лекарственной устойчивостью по отношению к большинству препаратов, принадлежащих к разным группам химиотералевтических средств,

В предварительных опытах на больных колибакгериозом поросятах была определена оптимальная терапевтическая доза хиноксидина. При сравнительной оценке лечебной и экономической эффективности различных доз препарата (5; 7,5; 10; 12,5 и 15 мг/кг массы тела) наиболее оптимальной оказалась доза 10 мг/кг при двукратном применении в сутки.

В первом опыте по изучению терапевтической эффективности хиноксидина было сформировано две группы животных с выраженными клиническими признаками колибакте-риоза. Поросятам (п=11) первой группы хиноксидин применяли в дозе 10 мг/кг в течение 7 дней 2 раза в сугки. Лечение животных (п=10) второй группы проводили диоксидином по аналогичной схеме. Химиотерапевтические средства вводили перорально в виде взвеси на 5% растворе глюкозы, индивидуально, в объёме 5 мл на 1 животное.

В период лечения, а также после него в течение 23 дней за поросятами вели клиническое наблюдение за общим состоянием, учитывали температурную реакцию, длительность и течение болезни, сроки, в которые наступало выздоровление, а также падёж и среднесуточный прирост массы тела (на 1-й и 30-й дни эксперимента).

Проведенными исследованиями установлено, что хиноксидин является эффективным терапевтическим средством при колибактериозе поросят. Применение его обеспечивает выздоровление 90,9 % животных. Этот же показатель в базовом варианте (диоксидин) был ни-

ке - 80.0 %. Среднесуточный прирост массы тела в опытной группе (122,7 г) был больше, гем в базовом варианте (108,3 г).

Во второй опыт было взято 20 больных колибактериозом животных. Поросятам шытной группы (п=10) применяли хиноксидин, а животным (п=10) базового варианта - дн-жсидин по той же схеме и в тех же дозах, что и в первом опыте.

Терапевтическая эффективность хиноксидина составила 90,0 % и по этому показателю эн превосходит базовый вариант (70,0 %). Применение его обеспечивало и более высокий :реднесуточный прирост (151,7 г), в базовом варианте он составил 123,3 г.

В третьем опыте было также сформировано две группы животных с выраженными слиническими признаками колибактериоза. Животным первой (п=29) и второй (п=28) групп »ответственно применяли хиноксидин н диоксидин по той схеме и в тех дозах, что и в предыдущих опытах.

В третьем опыте, как и в предыдущих экспериментах, установлено, что хиноксидин является эффективным средством при колибактериозе поросят. Терапевтическая эффективность хиноксидина составила 89,7 %, а диоксидина - 71,4 %. Среднесуточный прирост массы тела в опытной группе был 126,7 г, в базовом варианте - 103,3 г.

Проведённые исследования указывают на необходимость и целесообразность широкого использования хиноксидина при колибактериозе поросят в производственных условиях.

3.6. Лечебная эффективность хиноксидина при сальмонеллёзе поросят

Терапевтическую эффективность хиноксидина при остром и подостром течении саль-монеллёза изучали на поросятах в возрасте 2-4 месяцев. Диагноз на сальмонеллёз устанавливали с учётом результатов эпизоотологических, клинических, патологоанатомических. бактериологических и серологических исследований.

При остром течении болезни отмечали подъём температуры тела животного до 41 -4Ь5° С, иногда до 42° С (лихорадка постоянного типа), постепенно нарастающее угнетение и ухудшение аппетита. Кроме того, регистрировали признаки поражения желудочно-кишечного тракта, проявляющиеся болезненностью брюшной стенки и диареей. В фекалиях обнаруживали большое количество слизи, у некоторых поросят отмечали присутствие крови и пузырьков газа в кале. У большинства больных животных присутствовали признаки серозного конъюнктивита, а также выраженный цианоз в области кончиков ушей, шеи и дистапь-ных частей конечностей. У некоторых поросят интоксикация сопровождалась рвотой.

При подостром течении сальмонеллёза к признакам поражения желудочно-кишечного тракта присоединялись симптомы бронхопневмонии, сопровождающиеся выраженной каш-

левой реакцией, катаральными и гнойно-катаральными истечениями из носовой полости, по-липноэ и одышкой, ремитирующей лихорадкой. У некоторых животных, наблюдали признаки истощения и дерматиты.

При вскрытии павших и убитых с диагностической целью поросят находили типичные для сальмонеллеза морфологические изменения. При остром течении характерным было наличие катарального воспаления слизистых оболочек преимущественно тонкого и толстого отделов кишечника, также встречались эрозивно-язвенные поражения. Менее выраженные явления находили и в желудке. Интоксикацию и сепсис подтверждали кровоизлияния на слизистых и серозных покровах (чаще на эпикарде, эндокарде, лёгочной и костальной плевре, а. кроме того, на слизистой желудка и кишечника). Во всех случаях отмечали увеличение селезёнки, края её закруглены, на разрезе зернистость, капсула напряжена, цвет органа более тёмный, чем у здоровых животных. Лимфатические фолликулы кишечника и регионарные мезентериальные лимфатические узлы увеличены.

При подостром течении болезни истощение было более выраженным, изменения в лёгких определялись как гнойно-катаральные, некротизирующие пневмонии, к которым нередко присоединялись плевриты и перикардиты. Как характерный признак регистрировали днф-теритический тифлоколит. Выраженные дистрофические явления отмечали в печени и в меньшей степени в почках и селезёнке. Кроме этого в печени обнаруживали милиарные серовато-белые очаги некроза. Сердечная мышца дряблая с глинистым оттенком.

При бактериологическом исследовании патматериала (лимфатические узлы, кровь сердца, паренхиматозные органы) была выделена Salmonella choleraesuis, патогенная для белых мышей. Выделенные культуры микроорганизмов тестировались на предмет чувствительности к антибактериальным химиотерапевтическим средствам.

Средняя чувствительность проявлялась по отношению к оксациллину, фурадонину, фурагину,гентамицину и в одном случае к канамицину. Таким образом, можно сделать вывод, что выделенные сальмонеллы обладали множественной лекарственной устойчивостью в отношении антибактериальных препаратов, принадлежащих к разным группам средств химиотерапии.

При исследовании 20 сывороток крови больных поросят с сальмонеллёзным антигеном в реакции агглютинации к нему выявлены антитела в титрах от 1:150.

В предварительных опытах была определена оптимальная терапевтическая доза хинок-сидина при сальмонеллёзе поросят. При сравнительной оценке различных доз препарата (5; 7,5; 10; 12,5 и 15,0 мг/кг) наиболее экономичной и эффективной оказалась доза 10 мг/кг при назначении её 2 раза в сутки.

I 18

Для проведения первого опыта по изучению лечебной эффективности было сформи-зваио две группы больных животных. Поросят первой группы (п=15) лечили в течение 7 -ток, используя хиноксидин. с кратностью дачи препарата с кормом 2 раза в сутки. Лечение горой группы поросят (п=15) осуществляли диоксидином (базовый вариант), с такой же эатностью использования. Разовая доза препаратов составляла 10 мг на 1 кг массы тела жирного. Препараты применяли в смеси с кормом.

За животными в течение 30 дней вели клиническое наблюдение, учитывали общее со-ояние, динамику, длительность и течение болезни, сроки реконвалесценции, а также со-мнность поголовья, падёж и среднесуточный прирост массы тела. В начале и на 15-й дни :сперимента у 10 животных опытной и контрольной групп брали кровь из сосудов хвоста 1я проведения морфологических, иммунологических и серологических исследований.

К концу лечения количество выздоровевших животных в опытной группе было 14 (93,3 ), в базовом варианте - 12 (80 %) животных. Взвешивание поросят в конце эксперимента жазало, что хиноксидин обеспечивал более высокие показатели среднесуточного прироста 1ссы тела по сравнению с диоксидином (соответственно 200 и 133,3 г).

Во втором опыте было сформировано две группы по 15 поросят. Применение хинок-щина и диоксидина соответственно животным первой и второй групп осуществляли по той схеме, что и в первом опыте.

За животными в течение 30 дней вели клиническое наблюдение по такому же принци-как и в первом опыте. На 1, 15 и 30 дни эксперимента от 10 животных каждой группы >али кровь из сосудов хвоста для проведения морфологических, иммунологических и серо->гических исследований.

Лечебная эффективность хиноксидина (93,3 %) превосходила таковую у диоксидина 6,6 %). Результаты взвешивания подопытных животных в конце эксперимента показали, о наиболее выраженный прирост массы тела был в группе животных, которым вводили [ноксидин (среднесуточный прирост массы тела составил 283 г), в базовом варианте -З.Гг.

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что хиноксидин является эффек-вным лечебным средством при сальмонеллёзе поросят.

3.7. Изучение влияния хиноксидина па морфологические и иммунологические показатели крови больных сальмонеллёзом поросят

В ходе первого эксперимента по определению терапевтической эффективности хи-1ксидина изучали его влияние на морфологические и иммунологические показатели крови льных сальмонеллёзом поросят.

Полученные, данные свидетельствуют о позитивных изменениях многих показател< крови поросят в процессе лечения хиноксидином. В конце лечения произошло увеличен! количества эритроцитов с 5,2±0,25 до 5,44±0,21 млн/мкл и гемоглобина с 95,6±2.82 1 100,04±3,60 г/л. Кроме того, препарат способствовал повышению показателей общей несп цифической резистентности организма. Об этом свидетельствовало повышение комплеме тарной с 19,55±1,56 до 29,08±3,84 %, бактерицидной с 23,52±4,20 до 37,73±3,92 % и лиз цимной активности сыворотки крови с 9,23±1,29 до 9,96±0,60 %, а также фагоцитарнс активности лейкоцитов с 76,4±0,74 до 78,0±0,89 %, фагоцитарного числа с 6,79±0,29 1 8,09±0,42 и фагоцитарного индекса с 5,22±0,35 до 6,18±0,34 %.

Количество лейкоцитов до (14,63±2,16 тыс/мкл) и после (15,72±2,78 тыс/мкл) лечен! не выходило за пределы физиологических показателей.

Снижение процентного содержания лимфоцитов с 55,0±3,52 до 53,0ьЗ,62 % и увелич ние количества моноцитов до показателей, присущих здоровым животным (с 1,83±0.66 , 2,4±0,45 %), является благоприятным прогностическим признаком и указывает на фазу р конвалесценции.

Снижение количества общего белка сыворотки крови до лечения по сравнению с но мой (60,53±1,98 г/л) указывает на потери белка на почве гастроэнтеропатии, вызванной сЬо1егаезшз. Поэтому повышение этого показателя до 61,05±2,26 г/л после проведенной т рапии свидетельствует о косвенном положительном влиянии хиноксидина на устранен: длспротеинемии и, следовательно, на течение инфекционного процесса.

В базовом варианте (терапия диоксидином) изменения исследованных показател> крови во многом схожи с результатами, полученными при применении животным хинокс дина. Преимущество хиноксидина выражалось в более активном влиянии на такие показал ли общей неспецифической резистентности, как бактерицидная активность сыворотки кров фагоцитарное число и фагоцитарный индекс.

Во второй серии опытов также изучили влияние хиноксидина на морфологические иммунобиохимические показатели крови, а также на общую неспецифическую резнете! ность организма в сравнении с диоксидином. Исследования проводились в начале лечеш на 15 и 30 день опыта.

Полученные данные во втором опыте отражают сходную с первым экспериментом д намику изменений исследуемых показателей.

При оценке полученных результатов спустя 30 дней с момента начала лечения больш животных отмечали повышение количества эритроцитов с 4,8±0,23 до 6.9±0.51 млн/м! особенно в последние 15 дней эксперимента, и небольшое увеличение содержания гемог:

ина с 86,5±1,73 до 87,6±3,03 г/л, показатель гематокрита на 30-й день исследования крови ыл несколько снижен (с 31,25±2,09 до 30,6±0,93 %) в отличие от его же уровня на 15-й день следования (33,4±0,81 %). Аналогичные изменения наблюдали и при анализе результатов, злученных в базовом варианте (терапия диоксидином), а именно: повышение количества штроцитов (от 4,8±0,23 до 6,02±0,61 млн/мкл) с идентичной опытной группе динамикой. В гличие от группы животных, в которой применяли хиноксидин, при использовании днокси-та отмечали некоторое понижение содержания в крови гемоглобина с 86,5±1,73 до !,8±2,81 г/л. Хиноксидин способствовал снижению количества лейкоцитов - с 21,7±1,19 до >,46±2,49 и 13,4±1,44 тыс/мкл, что можно считать благоприятным прогностическим при-[аком, свидетельствующем о реконвалесценции. В группе поросят, леченных диоксидином, шичество лейкоцитов снижалось только на 15-й день эксперимента (с 21,7± 1.19 до '.24±2,41 тыс/мкл), а к концу опыта (на 30-й день) опять превышало физиологические преды (20,76±4,52 тыс/мкл).

Нентрофилия, сопровождающаяся увеличением палочкоядерных и сегментоядерных 'йтрофилов (фоновые показатели), указывает на остро протекающий инфекционный проке и вторичную кахексию. Поэтому, нормализация этих показателей свидетельствует о вы-женном терапевтическом эффекте, полученном при использовании хиноксидина (соответ-венно с 4,25±0,75 до 2,4±0,68 и 3,2±0,73 %) и сегментоядерных (соответственно с 48.6±2,84 42,8±3,27 % и 47,8±3,62 %) нейтрофилов. Незначительное повышение количества моно-!Тов в периферической крови до нормы после лечения хиноксидином (1,75±0,52; 2,2±0.37; !±0,66 % - моноцитарная защитная фаза) указывает на затухание инфекционного процесса, ¡пользование диоксидина в групповой терапии сальмонеллёза практически не влияло на намику изменения количества моноцитов у подопытных животных (1,75±0,52; 1,6±0.51; >±0,59 %). В базовом варианте зарегистрировали лимфопению спустя 30 дней после лече-я с уменьшением количества клеток почти в 2 раза, что может быть связано с иммуноде-щитным состоянием поросят. У поросят опытной группы количество лимфоцитов остава-сь в пределах физиологических показателей на протяжении всего опыта.

Содержание общего белка в процессе выздоровления увеличивалось у животных в обе-группах: с 59,16±3,35 до 62,09±0,99 и 68,73±6,01 г/л - в опытной группе, и с 59,16±3,35 63,48±3,44 и 69,73±8,01 г/л - в базовом варианте.

Количество альбуминов в крови поросят, леченных хиноксидином, практически не из-нялось и оставалось в пределах физиологических показателей (соответственно 43,93±2,86; ,74=с2,08 и 43,99±1,82 %), а в крови животных, леченных диоксидином, заметно снижалось 30-й день исследования периферической крови (с 43,93±2,86 до 35,90±2,85 %). Возмож-

ной причиной, объясняющей гнпоальбуминемию, может быть рецидив инфекции или ра личные осложнения, возникшие после переболевания поросят сальмонеллёзом (нарушен) всасывания белков в кишечнике, гепатопатии). Увеличение процентного содержания глобулинов до нормы на 15-й день опыта (с 11,43±0,63 до 15,32±1,53 %) свидетельствует благоприятном воздействии хиноксидина на протеинограмму крови больных поросят. Изм нение количества Y-глобулинов происходило в пределах физиологических показателей.

Значительно повышалась комплементарная активность сыворотки крови поросят опы ной группы (с 17,78± 1,43 до 85,05±4,24 %), в базовом варианте уровень её активности 6i ниже более чем в 2 раза. Хиноксидин также оказывал более выраженное чем диоксид! влияние на показатели клеточного иммунитета: ФАЛ, ФЧ и ФИ.

Изучение динамики титров антител в реакции агглютинации с сальмонеллёзным ант геном показало, что применение обоих препаратов сопровождается значительным снижен ем титров специфических антител, причём это свойство было более выражено у хиноксиди (с 1:150 до 1:20 в первом опыте и с 1:16,7 до отрицательного результата во втором опыте).

Кроме того, терапия больных сальмонеллёзом поросят хиноксидином ведёт к бо; значительному снижению титров нормальных агглютининов в сыворотке крови животнь чем лечение с использованием диоксидина. К концу первого эксперимента у поросят от ной группы наблюдалось снижение титров нормальных антител в 3,5 раза, а в базовом ва[ анте - в 2 раза. Во втором опыте это соотношение составляло - 1,7 к 1,03.

ВЫВОДЫ

1. Хиноксидин in vitro является высокоактивным антибактериальным препаратои концентрации 3,9 - 62,5 мкг/мл в отношении потенциальных бактериальных возбудите] желудочно-кишечных и респираторных болезней свиней.

2. Повышение устойчивости эшерихий и сальмонелл при культивировании их на с дах, содержащих суббактериостатические концентрации хиноксидина, не достигает высо го уровня. Коэффициент резистентности в процессе 25 пассажей в отношении Е. coli сос вил 16, а Salm, choleraesuis - 8. Чувствительность к хиноксидину восстанавливаете: эшерихий в течение 20, а у сальмонелл - 15 пассажей при ежедневных пересевах на epej не содержащих препарат.

3. При электронно-микроскопическом исследовании Е. coli 08 и Salm, choleraesuis еле воздействия на них хиноксидином обнаружены деструктивные процессы в клеточ стенке, цитоплазматической мембране, цитоплазме и нуклеоиде микроорганизмов, привс щие к их гибели.

i 22

4. Однократное применение хиноксидина через 3, 6 и 12 часов после заражения белых лцей эшерихиями обеспечивало их высокий индекс зашиты соответственно 100 %. 100 % 33 %. При сальмонеллёзной инфекции этот показатель был ниже и составил 83 %. 66 % и %.

5. Применение хиноксидина в дозе 10 мг/кг 2 раза в сутки индивидуально в течение 7 ей при колибактериозе поросят обеспечивает их выздоровление в 89,7-90,9% случаев.

6. Применение хиноксидина в дозе 10 мг/кг 2 раза в сутки групповым способом с кор-IM в течение 7 дней при сальмонеллёзе поросят обеспечивает их выздоровление в 93,3% учаев.

7. Терапия больных сальмонеллёзом поросят хиноксидином способствует нормалпза-и морфологических и иммунологических показателей крови, характеризующееся увеличе-ем содержания эритроцитов и гемоглобина, а также повышением показателей клеточного >4, ФИ. ФАЛ) и гуморального (бактерицидной, комплементарной и лнзоцимной активно-и сыворотки крови) иммунитета.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Материалы диссертации вошли в Нормативно-техническую документацию на хч-ксидин: а) Временное наставление по применению хиноксидина для лечения желудочно-шечных и респираторных заболеваний телят и поросят бактериальной этиологии (утвер-1ено Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ от 10.07.2000г., № 13-5-2/2067);

Методические рекомендации "Комплексная экологически безопасная система зашиты оровья животных", Москва. 2000г.

2. Для лечения больных колибактериозом поросят рекомендуется применять хинокси-IH в дозе 10 мг/кг два раза в сутки в течение 7 дней.

3. Для лечения больных сальмонеллёзом поросят рекомендуется применять хинокси-IH в дозе 10 мг/кг два раза в сутки в течение 7 дней.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шахов А.Г., Золототрубов А.П., Бригадиров Ю.Н., Ануфриев А.И., Голубцов A.B. шнические испытания препаратов хиноксалина при колибактериозе поросят // Пути повы-:ния продуктивности животных (Материалы научно-практической конференции профес-рско-преподавательского и аспирантского состава зооинженерного и ветеринарного фа-льтетов), Воронеж, Изд. "Истоки", 1998. - Вып. 4. - С. 46 - 47.

2. Шахов А.Г., Золототрубов А.П., Бригадиров Ю.Н., Ануфриев А.И., Голубцов / Лечебная эффективность хиноксидина при бронхопневмониях поросят // Пути повыше продуктивности животных (Материалы научно-практической конференции профессор' преподавательского и аспирантского состава зооинженерного и ветеринарного факультет Воронеж, Изд. "Истоки", 1998. - Вып. 4. - С. 47 - 49.

3. Шахов А.Г., Золототрубов А.П., Бригадиров Ю.Н., Ануфриев А.И., Голубцов , Химиотерапия сальмонеллёза поросят // Пути повышения продуктивности животных (М риалы научно-практической конференции профессорско-преподавательского и аспирант го состава зооинженерного и ветеринарного факультетов), Воронеж, Изд. "Истоки", 199 Вып. 4. - С. 49 - 50.

4. Золототрубов А.П. Антимикробная активность хиноксидина в отношении некотс музейных и полевых культур бактерий // Актуальные проблемы и достижения в областт продукции и биотехнологии размножения животных (Международная нау производственная и учебно-методическая конференция), Ставрополь. 1998. - С. 68 - 69.

5. Золототрубов А.П. Антибактериальная активность хиноксидина при эксперш тальных инфекциях белых мышей // Теоретические и практические аспекты возникновен развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях (Материалы ждународной конференции, посвященной 30-летию ВНИВИПФиТ), Воронеж, 2000. - Т. С. 177.

6. Золототрубов А.П. Изучение возможности адаптации и реадаптации эшерих! сальмонелл к хиноксидину // Теоретические и практические аспекты возникновения и рс тия болезней животных и защита их здоровья в современных условиях (Материалы ме: народной конференции, посвященной 30-летию ВНИВИПФиТ), Воронеж, 2000. - Т. 2. 177- 178.