Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Характеристика микрофлоры матки свиней при эндометритах



На правах рукописи

КОНИНА АНАСТАСИЯ АНАТОЛЬЕВНА

ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОФЛОРЫ МАТКИ СВИНЕЙ ПРИ ЭНДОМЕТРИТАХ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ОМСК 2003

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Института ветеринарной медицины Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Омского государственного аграрного университета.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор Плешакова Валентина Ивановна;

Научный консультант:

заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Колычев Николай Матвеевич.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, Рудаков Николай Викторович; доктор ветеринарных наук, профессор Герунов Владимир Иванович.

Ведущее учреждение:

Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана

Защита диссертации состоится 30 декабря 2003 г. в 10:00 часов на за нии диссертационного совета Д 220.050.03 в институте ветеринарно! дицнны Омского государственного аграрного университета (64400 Омск-7, ул. Октябрьская, 92),

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Институт? терииарной медицины ОмГАУ.

Автореферат разослан 28 ноября 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, _

доцент П'Жабин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В обеспечении населения продуктами питания большое значение отводится свиноводству как отрасли наиболее скороспелого животноводства. Рентабельное свиноводство возможно только на основе его интенсификации, при максимальном использовании репродуктивного потенциала маточного поголовья, предупреждении патологии беременности, родов и послеродового периода. Вместе с тем, практика эксплуатации свиноводческих комплексов промышленного типа показала, что при круглогодовом безвыгульном содержания животных, концентратном нормированном типе кормления часто регистрируются послеродовые болезни свиноматок, протекающие в форме синдрома метрит-мастит-агалактия и послеродового катарально-гнойного эндометрита, приводящие к бесплодию свиноматок (А. В. Черкасова и др., 1978; А. Н. Гречухин, 1982; В. П. Урбан и др., 1983; Е. Л. Грвдяев, 1987; Б. С. Спиридонов, 1987; В. Д. Мисайлов, 1994; Н. И. Шуйский, 2002; N. Ringarp, 1960; Р. Fiebinger et al., 1975; N. Boilwahn, 1978).

Ряд авторов считают, что нарушение условий кормления и содержания свиней приводит к расстройствам обмена веществ, сиюкению устойчивости животных к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды, гормональным расстройствам и нарушениям репродуктивной функции (Б. С. Спиридонов, 1978; В. Д. Мнсайлов и др., 1994; К. Ehrlich, 1974; G. Amtsberg, 1984).

Непосредственной причиной развития послеродовых эндометритов у свиноматок является инфицирование матки различными микроорганизмами как в отдельности, так и в ассоциациях, на фоне снижения у животных общей и местной неспецифической резистентности (И. Ш. Мецхвари-швили, 1984; Е. JI. Гридяев, 1987; А. Г. Шахов и др., 2001; К. Kotowski, 1980; И. Berner, 1984; G. Both, 1987).

В последние годы наибольшую значимость приобрели ассоциации условно-патогенных микроорганизмов, вызывающие гнойно-воспалительные процессы у свиноматок в форме послеродовых эндометритов (А. В, Черкасова и др., 1978; H. Н. Михайлов и др., 1980; А. Н. Гречухин, 1982; В. П. Урбан и др., 1983; N. Ringarp, 1960; H. Berner, 1979).

До настоящего времени нет единого мнения о том, какие условно-патогенные микроорганизмы занимают ведущую роль в патологии репродуктивных органов самок. Недостаточно данных о роли ассоциации микроорганизмов в развитии послеродовых осложнений и влиянии этой микрофлоры на репродуктивную функцию свиней.

Все вышеизложенное послужило основанием для выбора темы научно-исследовательской работы, определения цели и задач исследования.

, ; tats

Цель исследования - определить видовой состав и основные биологические свойства микроорганизмов, выделенных от свиноматок с клиническими признаками эндометрита в послеродовой период, а также определить патоморфологические изменения в матке.

Задачи исследования:

- изучить распространение эндометритов в послеродовой период среди свиноматок в хозяйствах Омской и Тюменской областей;

- определить видовой состав и биологические свойства выделенных культур микроорганизмов;

- определить устойчивость культур к ряду химиотерапевтических препаратов;

- изучить сорбцию выделенных микроорганизмов некоторыми сорбентами в опытах in vitro;

- определить биохимические показатели крови свиноматок при эндометритах;

- установить патоморфологические изменения в матке свиней при эндометритах.

Научная новизна. Получены новые данные по распространению эндометритов в послеродовой период у свиноматок в свиноводческих хозяйствах Омской и Тюменской областей. Результаты исследований расширяют и дополняют сведения о видовом составе микрофлоры матки больных свиней. Впервые проведены сравнительные морфологические исследования матки свиней с учетом микробного пейзажа цервикально-маточного содержимого. Определена устойчивость микроорганизмов к некоторым химио-терапевти чески м препаратам. Впервые изучена сорбция выделенных микроорганизмов полисорбом ВП в опытах in vitro.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований использованы при разработке методических рекомендаций «Диагностика эндометритов бактериальной природы у свиноматок» {утверждены подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакаде-мни,.№ 5 от 8.04.2002). В лабораторную практику внедрен способ «Экспресс-метод идентификации Actinobaculum suis с применением системы Rapid ID 32 А» (рационализатоское предложение №375 от 25.03.2002 г.). Разработан способ применения полисорба ВП при лечении колибактериоза (приоритетная справка №2003125014/15(026543) от 11.08.2003 г.).

Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников н руководств по микробио-

логии. Результаты проведенных исследований используются в учебном процессе ветеринарных факультетов Уральской ГАВМ, Новосибирского ГАУ, Саратовского ГАУ им. Н. И. Вавилова, Пермской ГСХА, Алтайского ГАУ, Казанской ГАВМ им. Н. Э, Баумана, Бурятской ГСХА им. В. Р. Филиппова, Красноярского ГАУ, Омского ГАУ.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы были доложены и обсуждены на международной научн.-производств. конф. по акушерству, гинекологии и биотехнологии репродукции животных, посвященной 100-летию со дня рождения И. А. Бочарова (Санкт-Петербург, 2001); межрегиональной научн.-практич. конф. «Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях» (Барнаул, 2001); международной научн. конф., посвященной 40-летию ИВМ АГАУ «Достижения ветеринарной медицины - XXI» (Барнаул, 2002); Всероссийской научн.-производств. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); Российской научн.-практич. конф. «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2003); Региональной научн. конф. молодых ученых аграрных вузов Сибирского федерального округа (Омск, 2003); международной научн.-производств. конф. по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса (Казань, 2003); ежегодных научн.-практич. конф. профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (2001, 2002, 2003).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано восемь научных статей.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерной верстки и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами, 31 рисунком. Список литературы включает 110 источников, из них 36 зарубежных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Характеристика микрофлоры при эндометритах свиноматок в послеродовой период.

2. Устойчивость выделенных микроорганизмов к некоторым химио-терапевтическим препаратам.

3. Патоморфологические изменения в матке свиней при послеродовых эндометритах.

СОБСТВ ЕНННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы н методы

Диссертационная работа является разделом комплексной темы «Разработка методов и средств диагностики, профилактики и лечения бактериальных инфекций мочеполовых путей у свиней» (№ гос. регистрации 01.2.00100603).

Микроорганизмы. Материалом исследований служили культуры условно-патогенных микроорганизмов, выделенные от свиноматок с клиническими признаками эндометрита, в послеродовой период. В качестве контроля использовали музейные штаммы микроорганизмов.

Животные. 837 свиноматок репродуктивного возраста пород лацдрас и крупная белая, принадлежащие хозяйствам Омской и Тюменской областей. Лабораторные животные - 78 белых мышей.

Сорбенты. Полифепан, энтеросгель, зоокарб, полисорб ВП (ветеринарный пероральный).

Бактериологическое исследование. Инкубирование первичных посевов маточко-цервикал ьной слизи от больных животных осуществляли на МПА с содержанием 5-10% дефибринированной крови лошади в аэробных и анаэробных условиях при 37°С в течение 24 ч в термостате марки ТС-80МУ4.2.

Культуральные свойства микроорганизмов изучали, учитывая скорость и характер роста на плотных и в жидких питательных средах.

Морфологические и тинкториальные свойства изучали в мазках-препаратах, окрашенных по Граму, наличие спор и капсул - по Шефферу-Фултону и Ольту. Подвижность микроорганизмов определяли в препаратах «висячая капля». Измерение микробных клеток в мазках, окрашенных по Граму, проводили с помощью светового микроскопа фирмы «,1епауа1» и микрометра окулярного винтового (МОВ-1).

В зависимости от морфологических и культу рал ьных свойств культуры микроорганизмов пересевали на элективные и дифференциально-диагностические питательные среды с последующей идентификацией по биохимическим свойствам.

Резистентность выделенных культур микроорганизмов к химйоте рапе втич ее ки м средствам изучали дискодиффузионным методом. .

Заключение о родовой и видовой принадлежности выделенных микроорганизмов проводили, используя «Определитель бактерий Берджи» (1997) и «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» (М. А. Сидоров и др., 1995).

Патогенность выделенных культур микроорганизмов изучали на белых мышах, используя взвеси односуточных агаровых культур (Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae, Proteus mirabilis, E. coli, Serratia marcescens, Citrobacter freundii, Staphylococcus chromogenes, Streptococcus pyogenes, Corynebacteriwn haemolyticm, Arcanobacterium pyogenes, Neisseria flaves-cens, Micrococcus roseus, Actinobaculum suis) в физиологическом растворе, в концентрации 1,0x10 и 1,5x109 м. т. /мл, в объеме 1 мл. Животным контрольной группы вводили внутрибрюшинно физиологический раствор в том же объеме. Для эксперимента формировали 13 групп, по шесть животных в каждой. Определение LDjo/,«, проводили по методу Рида-Менча в модификации Троицкого В. J1. (1950).

Для изучения сорбции Е. coli, S. chromogenes, К. oxyioca полифепаном, энтеросгелем, зоокарбом, полисорбом ВП суспензии микроорганизмов в концентрациях 1,36х107-2,0х109 м. т. /мл смешивали с сорбентами. После экспозиции от 30 до 150 мин содержимое пробирок фильтровали через бумажный фильтр. Фильтрат в объеме 50 ¡Л высевали на плотные питательные среда (кровяной агар, Эндо) с последующим культивированием при 37°С в течение 24 ч. Подсчет колоний осуществляли с помощью камеры Вольфа-Гюгеля.

Исследование крови. Исследование гематологических и биохимических показателей крови здоровых (10 животных) и больных эндометритом свиноматок (10 животных) проводили по общепринятым методикам.

Пагоморфологическое исследование. Материалом для гистологического и гистохимического исследований служили кусочки тканей матки и лимфатических узлов, которые фиксировали в 12%-ном растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, с последующей их заливкой в парафин. Срезы толщиной 7-8 мкм изготавливали на санном микротоме марки МС-2.

Гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином, коллагено-вые волокна выявляли окраской по Маллори (Г, А. Меркулов, 1961). Гликоген выявляли по Шабадашу (1947), карбоксилированные гл и козам иноглика-ны-по Стидмену (Э. Пирс, 1962) и сульфатированные - по Шубичу (1961).

Статистическую обработку полученных данных проводили на ПК с помощью программы Microsoft Excel 97.

Отдельные исследования выполнены совместно с сотрудниками областной ветеринарной станции, кафедры фармакологии и токсикологии ИВМ ОмГАУ (зав. кафедрой д-р вет. наук, проф. Л. К. Герунова).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Распространение и клинические аспекты послеродовых эндометритов у свиноматок в хозяйствах Омской и Тюменской областей

В результате проведенных исследований установлено, что заболеваемость свиноматок послеродовыми эндометритами в хозяйствах разных районов варьирует. Так, максимальной она была в совхозе им. Кирова Калачинского района Омской области - 545 на 1000 животных, а минимальной в ООО «Нефтехимик-АГРО» г. Омска - 250 на 1000 животных. В ЗАО «Племзавод-Юбилейный» Тюменской области из 473 исследованных свиноматок 120 были с клиническими признаками послеродового эндометрита, что составляет 25,4% (табл. 1).

У 194-х свиноматок (72,7%) с клиническими признаками эндометрита отмечали выделение из наружных половых путей катарального, а у 74-х (27,6%) - катарально-гнойного экссудата.

В результате гематологического исследования периферической крови здоровых свиноматок после опороса установлена слабая тенденция уменьшения количества эритроцитов - 5,84±0,61х1012/л при содержании гемоглобина 112,6±б,32 г/л. У больных свиноматок количество эритроцитов увеличивалось до 6,13±0,59х1012/л (Р>0,1) при снижении содержания гемоглобина 105±7,6 г/л (Р>0,1).

Количество эозинофилов в крови свиноматок с развившимся после опороса катарально-гнойным эндометритом составляло 13,5±1,8% (Р<0,001), тогда как у здоровых животных этот показатель был значительно ниже-3,9±1,34%.

Лейкоцитарная формула крови у свиноматок с признаками эндометрита характеризовалась уменьшением палочкоядерных нейтрофилов до 1,8±1,24% (Р>0,1) при нормальном количестве сегментоядерных клеток - 44,6±7,12% (Р>0,1).

Содержание моноцитов в крови больных свиноматок уменьшалось до 0,1 ±0,18% (Р>0,1) в сравнении с показателями здоровых животных -0,6±0,6%.

Количество общего белка в сыворотке крови свиноматок при эндометритах составляло 7,21 ±0,22% (Р>0,1), что соответствовало норме.

Таблица I

Клиническое исследование свиноматок в послеродовой период

№ п/п Наименование хозяйства Исследовано животных С клиническими признаками эндометрит

I. Совхоз им. Кирова, Калач »некий р-н 22 12

2. АПФ «Омь», Калачи некий р-н 61 31

3. С. Харламове 6 3

4. С. Цветнополье 11 5

5. С. Абатское, Тюменская обл. 51 23

б. ОПХ «Новоуральское», Таврический р-н 20 9

7. АОЗТ «Племзавод Северо-Л юб и некий» 9 4

8. ЗАСХО «Измайловское», Калач и некий р-н 21 9

9. ОАО «Омский бекон», с. Лузин о 17 7

10. С. Большеречье 5 2

П. В/ч 77112А, Кормиловский р-н 21 8

12. С. Муром цево 8 3

13 ЗАО «Оша», г. Омск 48 18

14. С. Новопокровка 3 1

15. ЗАО «Племза вод-Юбилейный», г. Ишим 473 120

16. ООО «Нефтехимнк-АГРО», г. Омск 52 13

17. Мясокомбинат «Омский», г. Омск 9 -

Итого 837 268 (32,0%)

При обследовании здоровых и больных животных в 100% случаев регистрировали нарушение фосфорно-кальциевого баланса. При этом содержание кальция в крови здоровых и больных животных снижалось до 7,55±0,2б мг% и 7,85±0,4 мг% (Р>0,1), а фосфора увеличивалось до 6,77±0,35 и 5,84±0,34 мг% соответственно (РОД).

Щелочной резерв крови больных свиноматок снижался до 42,55±1,35 об.%С02 (Р>0,1), а содержание витамина А составляло 8,86±0,14 мкг% (Р<0,05) в сравнении со здоровыми животными после опороса (табл. 2).

Безвыгульное содержание супоросных свиноматок в хозяйствах, концентратами тип кормления, часто несбалансированный по питательным веществам рацион вызывали снижение общей резистентности организма

свиней, что способствовало проникновению микроорганизмов в половые пути свиноматок и развитию послеродовых эндометритов.

Таблица 2

Морфологически« к биохимические показатели крови свиноматок после опороса

Показатели крови, ед, изм. Норма Здоровые, М±т, (п=10) Больные, М±т, (п=10) . Р

Эритроциты, 10,2/л 6,0-7,5 5,84*0,61 б,13±0,59 >0,100

Гемоглобин, г/л 90-110 112,6±6,32 105±7,6 >0,100

Лейкоциты, 109/л 8,0-16,0 11,9±2,42 13,5*1,8 >0,100

Эозинофилы, % 1-4 3,9±1,34 13,5±1,8 <0,001

Палоч коядер ные, % 2-4 4,6±1,4 1,8±1,24 >0,100

Сегме нтоядер ны е, % 40-48 4б,6±5,8 44,6±7,12 >0,100

Лимфоциты, % 40-50 44,1 ±5,32 44,6±7,12 _ >0,100

Моноциты, % 2-6 0,6±0,б 0,1±0,18 >0,100

Общий белок, % 6,5-8,5 7,27±0,25 7,21 ±0,22 >0,100

Кальций общий, мг.% 10-14 7,55 ±0,26 7,85±0,4 >0,100

Фосфор неорганический, мг.% 4-6 б,77±0,35 5,84±0,34 <0,100

Щелочной резерв, обЛоССЬ 48-60 44,35±0,45 42,55± 1,3 5 >0,100

Витамин А, мкг.% 10-35 9,38±0,16 8,8б±0,14 <0,050

Видовой состав и основные ассоциации микроорганизмов при эндометритах свиноматок послеродового периода

Результаты исследований показали, что при эндометритах у свиноматок в послеродовой период в основном выделяли микроорганизмы в ассоциации (табл.3). В большинстве проб изолировали Е. coli: в ассоциации - 87,7%, в монокультуре - 12,3%. В меньшем проценте обнаруживали в ассоциации Proteus sp. (88,5%), а в большем - Staphylococcus sp. (93,7%). В виде монокультуры Streptococcus sp. изолировали в 14,5%, а в ассоциации -85,5%. Представителя семейства энтеробактерий Citrobacter sp., как правило, обнаруживали в ассоциации (91,8%), в то время как в монокультуре -8,2%. Такие микроорганизмы как Сoryne bacterium sp., Klebsiella sp., A. pyogenes, Neisseria sp., Enterobacter sp. выделяли у свиноматок реже остальных и в большинстве случаев в виде ассоциации.

Ассоциация микроорганизмов родов Рго1еиз+СИгоЬас(ег была выделена в 24 пробах, Е. соИ+РгМею - в 13 (ЗАО «Племзавод-Юбипейный»), а Е. со11 +Рго!гш+СИгоЬас!сг - в 10 (ООО «Нефтехимик-АГРО»), Ассоциации Е. соИ+Э^ерюсоссиз+51арку1ососсш выделяли в,восьми пробах (совхоз им. Кирова Калачинского района). В большинстве случаев от свиноматок выделяли ассоциации микроорганизмов, представленные двумя или тремя видами.

Таблица 3

Количественное соотношение культур микроорганизмов, выделенных при эндометритах свиноматок

Микроорганизм Монокз ^льтура В ассоциациях

Кол-во % Кол-во %

E. coli 13 12,3 93 87,7

Proteus sp. 10 11,5 77 88,5

Staphylococcus sp. 5 6,3 74 93,7

Streptococcus sp. 10 14,5 59 85,5

Citrobacter sp. 5 8,2 56 91,8

Corynebacterium sp. 3 11,1 24 88,9

Klebsiella sp. 1 4,8 20 95,2

Neisseria sp. 1 20,0 4 80,0

Micrococcus sp. - - 5 100,0

A.pyogenes - - 4 100,0

В. subtilis 1 25,0 3 75,0

Enterobacter sp. - - 3 100,0

Serratia sp. 1 33,3 2 66,7

A. suis - - 4 100,0

Из 268 проб маточно-цервикальной слизи изолированы следующие микробные культуры: Е. coli - 106 (39,6%), Citrobacter sp. - 61 (22,8%), Proteus sp. - 87 (32,5%), Klebsiella sp. - 21 (7,8%), Enterobacter sp. - 3 (1,1%), Serratia sp. - 3 (1,1%). Staphylococcus sp-79 (29,5%), Streptococcus sp. - 69 (25,7%), Corynebacterium sp. - 27 (10,1%), A, pyogenes - 4 (1,5%),. A.suis - 4 (1,5%), Neisseria sp. - 5 (1,9%), В.-subtilis - 4 (1,5) и Micrococcus sp. -5(1,9).

"Изучение патогенных свойств изолированных микробных культур в ' ' эксперименте на лабораторных животных

■'Результаты проведенных опытов показали, что при заражении белых мышей взвесями культур Е. coli и S. marcescens LDjo/мл составляла 0,5хЮ9 м. т./мл, а С. freundii - 2,5x10* м. т./мл. Для К. pneumoniae subsp. pneumoniae, P. mirabilis, С. haemolyticus LDso/мл составила 1,75x109 м. т./мл; для S. chromogenes, A. pyogenes - 1,25х109 м. т./мл. При заражении лабораторных животных взвесями культур jV flavescem, М. roseus, А. suis в концентрациях 1,0-1,5x10* м- т./мл гибель животных не регистрировали.

При патологоанатомическом вскрытии трупов мышей, зараженных культурой Е. coli, обнаруживали кровоизлияния в подкожной клетчатке и кишечнике, увеличение селезенки и печени, острое расширение сердца, наличие мелких абсцессов в селезенке, печени и легких. Аналогичную пато-логоанатомическую картину наблюдали при вскрытии трупов мышей, зараженных культурой S. marcescens.

У мышей, зараженных культурой Р. mirabilis, отмечали гемопернто-ниум, спайки между петлями кишечника, брюшиной и мочевым пузырем. В стенке кишечника, мочевого пузыря, а также в почках обнаруживали множественные мелкие абсцессы. Селезенка, печень и правое легкое были увеличены, наблюдали острое расширение сердца.

При патологоанатомическом вскрытии трупов мышей, зараженных культурой К, pneumoniae, отмечали обезвоживание организма, кровоизлияния в подкожной клетчатке. В месте введения суспензии возбудителя, стенке кишечника и в печени обнаруживали абсцессы с содержимым зеленоватого цвета. Отмечали увеличение селезенки, дистрофию печени и острое расширение сердца.

При вскрытии трупов мышей, зараженных культурой С. freundii, видимых патологоанатом и ческих изменений со стороны внутренних органов отмечено не было.

У мышей, зараженных культурой S. chromogenes, обнаруживали кровоизлияния в подкожной клетчатке. В стенке кишечника, селезенке, легких и печени регистрировали абсцессы. Отмечали увеличение селезенки, дистрофию печени, кровоизлияния под эпикардом. Аналогичные изменения наблюдали при вскрытии трупов мышей, зараженных культурой S. pyogenes.

При вскрытии трупов мыигей, зараженных культурой С. haemolyticus, отмечали увеличение селезенки и печени.

У мышей, зараженных культурой A. pyogenes, при вскрытии обнаруживали абсцессы в печени и легких.

Устойчивость выделенных культур микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам

Результаты проведенных исследований показали, что большинство выделенных микробных культур высокочувствительны к цефоперазону и неопену. У патогенных и условно-патогенных стрептококков и стафилококков преобладала чувствительность к цефазолину, спектаму, ветофлоку, левотетрасульфину, офлоксацину, канамицину, гентамицину и левомице-тину. В большинстве случаев культуры стафилококков были устойчивы к мономицину, эритромицину, линкомицину и стрептомицину. Стрептококки во всех случаях резистентны к мономицину и эритромицину, в 80% случаев - к оксациллину и доксициклину.

Большинство культур энтеробактерий чувствительны к цефазолину, гентамицину, спектаму и офлоксацину и проявляли резистентность к оксациллину, олеандомицину, доксициклину, эритромицину, линкомицину и стрептомицину.

Выделенные культуры нейссерий и коринебактерий были чувствительны ко всем антибактериальным препаратам, кроме стрептомицина и доксициклина.

Изолированные культуры A. pyogenes чувствительны к оксациллину, цефоперазону, цефазолину, канамицину, гентамицину, левомицетину и офлоксацину. К доксициклину и стрептомицину резистентны 80% культур, эритромицину, олеандомицину и линкомицину - 70%.

Взаимодействие выделенных культур с различными сорбентами

Для изучения возможности санации полости матки при эндометритах с помощью сорбентов была поставлена серия опытов in vitro.

При проведении пилотного эксперимента на примере Е coli установили, что из четырех сорбентов - полифепана, энтеросгеля, зоокарба н поли-сорба ВП - наибольшим эффектом действия обладает полисорб ВП. Далее определили способность полисорба ВП сорбировать S. chromogettes и К. oxytoca. Результаты представлены в табл. 4.

Таблица 4

Взаимодействие выделенных культур с полисорбом ВП

Время, мин Е. coli S. chromogenes К. oxytoca

Количество колоний, М±ш Р Количество колоний, М±т Р Количество колоний, М±т Р

30 40,0*12,7 <0,001 26,3±4,9 <0,001 106,0±20,0 <0,001

45 24,7±1б,2 <0,001 38,0±2,7 <0,001 81,7±14,2 <0,001

60 20,3 ±16,4 <0,001 76,3± 19,7 <0,001 63,3±17,1 <0,001

Контроль 14775Ü45 12024±235 715±29

Результаты проведенного исследования показали, что максимальная сорбирующая способность полисорба ВП в отношении Е. coli и К, oxytoca проявлялась при экспозиции 60 мин, а в отношении S. chromogencs - при 30 мин.

Патоморфологические и гистохимические изменения в матке свиней

У свиноматок с клиническими признаками послеродового эндометрита, у которых из цервикальньно-маточиого содержимого была изолирована культура Е. coli, при вскрытии в полости матки регистрировали небольшое количество светлого, тягучего, мутного экссудата. Слизистая оболочка набухшая, диффузно или пятнисто покрасневшая, усеяна петехиями.

При гистологическом исследовании установили признаки острого катарального воспаления, проявившегося диффузной полиморфкоклеточной инфильтрацией рыхлой волокнистой соединительной ткани собственной пластинки эндометрия, активной пролиферацией эпителиальных клеток, их вакуолизацией. Сосуды слизистой оболочки матки кровенаполнены, их просветы расширены, а стенки отечны. В стенках сосудов микроциркуля-торного русла отмечали процессы пролиферации. Часть капилляров содержала массу агглютинированных эритроцитов. В миометрии обнаруживали выраженный отек межмышечной соединительной ткани. Серозная оболочка матки несколько утолщена в результате отека соединительной ткани под мезотелием.

Гистохимнчески в цитоплазме эпителиальных клеток и базальной мембране, в гландулоцитах и просветах маточных желез обнаруживали карбоксилированные гликозаминогликаны, а в эндотелии кровеносных со-

судов - ШИК-[юложительные вещества. Сульфатнрованные гликозаминог-лнканы отсутствовали.

У свиноматок с клиническими признаками послеродового эндометрита, из це рви кал ьно-м аточ кого содержимого которых была изолирована смешанная микрофлора (Е. coli + Proteus, Е. coli + Staphylococcus, Е. coli + Streptococcus, E. coli + Citrobacter), в матке была выявлена более выраженная со-' судистая реакция. При гистологическом исследовании наблюдали дистрофию, десквамацию и атрофию эпителия эндометрия, который из цилиндрического преобразовывался в кубический, а местами - в плоский. Обнаруживали эпителиоциты в состоянии некробиоза. Подэпителиальная рыхлая волокнистая соединительная ткань сильно инфильтрирована эритроцитами и полиморфноядерными лейкоцитами. Эпителий маточных желез в состоянии пролиферации и гиперплазии. В межжелезистой рыхлой волокнистой соединительной ткани наблюдали резкое увеличение количества пучков коллагеновых волокон. Просветы артериальных и венозных сосудов резко расширены. В миометрии регистрировали единичные и множественные геморрагии, кистозные полости. Серозная оболочка утолщена, отечна, местами в ней наблюдали переполненные кровью сосуды микроциркуляторно-го русла с диапедезными кровоизлияниями в периваскулярных участках.

Гистохимически установлено, что в эпителии и базальной мембране происходит уменьшение ШИНеположительных веществ и карбоксилиро-ванных гликозаминогликанов. В рыхлой соединительной ткани, а также эндотелии кровеносных сосудов, обнаруживали ШИК-положительные вещества и кислые гликозаминогликаны.

Наиболее ярко выраженные патоморфологические изменения наблюдали у свиноматок с клиническими признаками эндометрита, у которых из; цервикально-маточного содержимого была изолирована смешанная микрофлора, включающая более двух видов микроорганизмов {Е. coli + Proteus + Staphylococcus, Е. coli + Klebsiella + Citrobacter, E. coli + Streptococcus + Staphylococcus, E .coli + Proteus + Citrobacter, E. coli + Proteus + Citrobacter + Corynebacterium, E. coli + Streptococcus + A. pyogenes + Micrococctis).

Гистологически установлен некроз эпителия эндометрия, пролиферация эпителиоцитов, а также гиперплазия и десквамация слизистой оболочки. Эпителий значительно инфильтрирован эозинофильными лейкоцитами и лимфоцитами, Базальная мембрана эпителия местами фрагментирована. В подэпителиальной рыхлой волокнистой соединительной ткани наблюдали склеротизацию соединительнотканного компонента, выпадение гемоси-дерина. Просветы сосудов микроциркуляторного русла слизистой оболочки-резко расширены с фрагментацией или истончением стенок, их спадением

■ ' ■ -II.,. ,, ■/< ->.

и зарастанием соединительной тканью. Реже в сосудах обнаруживали тромбы. Маточные железы в состоянии атрофии, переполнены секретом. Гландулоциты желез некротизированы и замещены волокнистой соединительной тканью. Кровеносные сосуды находились на разных стадиях скле-ротизации. В мышечной оболочке волокна разрыхлены и фрагментирова-ны. Граница между мышечной и серозной оболочками нечеткая. Наблюдали отек и утолщение серозной оболочки, наличие соединительнотканных рубцов, а также процессы склеротизации серозной оболочки.

Гистохимически в цитоплазме эпителиальных клеток и базальной мембране слизистой оболочки матки в меньшем количестве обнаруживали ШИК-положительные вещества. Сульфатированные гликозаминогликаны обнаруживали в эндотелии и адвентиции кровеносных сосудов. Повышенное содержание гликопротеинов и карбоксил и рованных гликозаминогли-канов отмечали на всем протяжении слизистой оболочки. В цитоплазме миоцитов мышечной оболочки наблюдали резкое уменьшение количества гликогена, ШИК-положительных веществ.

ВЫВОДЫ

1. Эндометриты бактериальной этиологии регистрируются в хозяйствах Омской и Тюменской областей в среднем у 32% свиноматок репродуктивного возраста преимущественно в первые двое-трое суток после опороса. Сезонность болезни не выражена.

2. Возникновение эндометритов у свиноматок в послеродовой период сопровождается гипокальциемией (7,85±0,4 мг%), снижением уровня витамина А в сыворотке крови (8,86±0,14 мкг.%), а также увеличением количества эозинофилов (13,5±1,8%) и уменьшением щелочного резерва крови (42,55±1,35 об.%С02).

3. Микробный пейзаж цервикально-маточного содержимого больных свиноматок представлен чаще Е. coli в ассоциации с другими микроорганизмами (87,7%), реже монокультурой (12,3%). Наиболее часто в роли ас-социантов выступают Proteus (88,5%), Staphylococcus (93,7%), Streptococcus (85,5%) и Citrobacter (91,8%).

i 4. У свиноматок, из цервикально-маточного содержимого которых была изолирована монокультура, чаще регистрировали катаральный эндометрит, при выделении ассоциаций микроорганизмов - катаральн о - гной ное воспаление.

5. На энтеробактерии наиболее выраженное бактерицидное действие оказывают антибиотики группы цефалоспоринов, макролидов и аминоглнко-

зндов. У патогенных и условно-патогенных стафилококков и стрептококков в большинстве случаев преобладает чувствительность к цефалоспори-нам, амнноглнкозидам и фторхинолонам.

6. Изолированные культуры Е. coli, К. oxytoca и S. chromogenes индифферентны к неселективным сорбентам полифепану, энтеросгелю и зоокарбу. Полисорб ВП обладает выраженной сорбционной активностью in vitro в отношении Е. coli и К. oxytoca (в концентрации 1,36x10' м. т. /мл) при экспозиции 60 мин, в отношении S. chromogenes - при 30 мин.

7. Заражение белых мышей выделенными культурами микроорганизмов {Е. coli, S. marcescens, Р. mir ab His, К. pneumoniae stibsp. pneumoniae, S. chromogenes, S. pyogenes) приводит к появлению кровоизлияний в подкожной клетчатке, увеличению селезенки и печени, острому расширению сердца и возникновению абсцессов во внутренних органах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны методические рекомендации «Диагностика эндометритов бактериальной природы у свиноматок», утверждены подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, Кг 5 от 8.04.2002.

2. Подана заявка на изобретение «Способ лечения колибактериоза» (приоритетная справка № 2003125014/15(026543) от 11.08.2003 г.).

3. Материалы диссертационной работы могут быть использованы:

- в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по микробиологии, эпизоотологии и патологической анатомии;

- в научно-исследовательских учреждениях ветеринарной медицины при решении вопросов диагностики, профилактики и лечения болезней репродуктивных органов свиней.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Конина А, А. Биохимические свойства микроорганизмов, выделенных при эндометритах свиноматок //Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях: Материалы межрегион, науч.-практ. конф. - Барнаул, 2001. - С. 116-118.

2. Плешакова В. И., Зигунов В. В., Конина А. А. Микрофлора при патологии мочеполовых органов у свиноматок //Материалы международной, на-

учио-производствен ной конференции но акушерству, гинекологии и биотехнологии репродукции животных, посвящен. 100-летию со дня рождения И. А. Бочарова. -СПб, 2001. -С. 105-107.

3. Конина А. А., Семенов А. В. Лечение свиноматок, больных метрит-мастит-агалактией //Материалы Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 2002.-С. 42-43.

4. Конина А. А. Послеродовые эндометриты свиноматок (клинический и микробиологический аспекты) //Проблемы и перспективы развития науки в Институте ветеринарной медицины ОмГАУ: Сб. науч. тр. - Омск, 2002. -С. 119-121.

5. Конина А. А. Чувствительность культур микроорганизмов, выделенных при эндометритах у свиноматок, к химиотерапевтическим средствам //Достижения ветеринарной медицины - XXI: Материалы междунар. науч. конф., посвящ. 40-летию ИВМ АГАУ. - Барнаул, 2002. - Ч. 2. С. 208.

6. Конина А. А., Семенов А. В., Зигунов В. В. Микрофлора, выделенная от свиноматок при синдроме мастит-метрит-агапактия (ММА) //Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Материалы Рос. науч.-практ. конф. -Новосибирск, 2003. - С. 83-85.

7. Плешакова В. И., Конина А. А. Некоторые патоморфологические изменения при послеродовых эндометритах бактериальной этиологии у свиноматок //Аграрная наука России в новом тысячелетии: Материалы регион, науч. конф. молодых ученых аграрных вузов Сиб. федер. округа. - Омск, 2003. - С. 170-172.

8. Плешакова В. И., Конина А. А., Семенов и др. Некоторые этиологические и эпизоотологические особенности инфекции мочеполовых органов и молочной железы свиноматок //Материалы международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса. - Казань, 2003. - Ч. 1.-С. 109-115.

Per. №46. Сдано в набор 26.11.03. Подписано в печать 27.11.03 Печать на ризографе. Бум. офсетная. Формат 60x54 1/16. Печ. л. 1,25 Уч.-изд. л. (1,1). Тираж 100 экз. Заказ 194

Типография филиала издательства И8М ОмГАУ, Омск-7, Октябрьская, 92

1213 3 4

Актуальность темы. Для решения проблемы обеспечения населения продуктами питания большое значение отводится свиноводству как отрасли наиболее скороспелого животноводства. Рентабельное ведение свиноводства возможно только на основе его интенсификации, при максимальном использовании репродуктивного потенциала маточного поголовья, предупреждении патологии беременности, родов и послеродового периода.

Вместе с тем, практика эксплуатации свиноводческих комплексов промышленного типа показала, что при круглогодовом безвыгульном содержании животных, концентратном нормированном типе кормления и размещении большого поголовья на ограниченных площадях, часто регистрируются послеродовые болезни свиноматок, протекающие в форме синдрома метрит-мастит-агалактия и послеродового гнойно-катарального эндометрита, приводящие к снижению или прекращению секреции молока, высокой заболеваемости и гибели новорожденных поросят (А. В. Черкасова и др., 1978; А. Н. Гре-чухин, 1982; В. П. Урбан и др., 1983; Е. JI. Гридяев, 1987; Б. С. Спиридонов, 1987; В. Д. Мисайлов, 1994; Н. И. Шумский, 2002; N. Rin-garp, 1960; P. Fiebinger et al., 1975; N. Bollwahn, 1978).

Снижение производства свинины, бесплодие и малоплодие свиноматок, их частая выбраковка обусловлены высокой заболеваемостью маточного поголовья.

Ряд авторов считают, что нарушение условий кормления и содержания свиней приводит к расстройствам обмена веществ, снижению устойчивости животных к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды, гормональным расстройствам и нарушениям репродуктивной функции (Б. С. Спиридонов, 1978; В. Д. Мисайлов и др., 1994; К. Ehrlich, 1974; G. Amtsberg, 1984).

В развитии послеродовых болезней свиноматок важная роль отводится микробному фактору (И. Ш. Мецхваришвили, 1984; Е. JI. Гридяев, 1987; А. Г. Шахов и др., 2001; К. Kotowski, 1980; Н. Berner, 1984; G. Both, 1987).

Возбудителей, вызывающих болезни репродуктивных органов у животных, принято подразделять на специфические и неспецифические. К группе специфических относят возбудителей кампилобакте-риоза, трихомоноза, хламидиоза, лептоспироза, бруцеллеза; к неспецифическим - различные условно-патогенные микроорганизмы: стафилококки, стрептококки, эшерихии, вульгарный протей, синегной-ную палочку и т. д.

В последние годы наибольшую значимость приобрели ассоциации условно-патогенных микроорганизмов, вызывающие гнойно-воспалительные процессы у свиноматок в форме послеродовых эндометритов.

До настоящего времени нет единого мнения о том, какие условно-патогенные микроорганизмы занимают ведущую роль в патологии репродуктивных органов самок. Недостаточно данных о роли ассоциации микроорганизмов в развитии послеродовых осложнений и влиянии этой микрофлоры на репродуктивную функцию свиней.

Все выше изложенное послужило основанием для выбора темы научно-исследовательской работы, определения цели и задач исследования.

Диссертационная работа является разделом комплексной темы ИВМ ОмГАУ «Разработка методов и средств диагностики, профилактики и лечения бактериальных инфекций мочеполовых путей у свиней» (№ гос. регистрации 01.2.00100603).

Цель исследования - определить видовой состав и основные биологические свойства микроорганизмов, выделенных от свиноматок с клиническими признаками эндометрита в послеродовой период, а также определить патоморфологические изменения в матке.

Задачи исследования: изучить распространение эндометритов в послеродовой период среди свиноматок в хозяйствах Омской и Тюменской областей; определить видовой состав и биологические свойства выделенных культур микроорганизмов; определить устойчивость культур к ряду химиотерапев-тических препаратов; изучить сорбцию выделенных микроорганизмов некоторыми сорбентами в опытах in vitro; определить биохимические показатели крови свиноматок при эндометритах; установить патоморфологические изменения в матке свиней при эдометритах.

Научная новизна. Получены новые данные по распространению эндометритов в послеродовой период у свиноматок в свиноводческих хозяйствах Омской и Тюменской областей. Результаты исследований расширяют и дополняют сведения о видовом составе микрофлоры матки больных свиней. Впервые проведены сравнительные морфологические исследования матки свиней с учетом микробного пейзажа цервикально-маточного содержимого. Определена устойчивость микроорганизмов к некоторым химиотерапевтическим препаратам. Впервые изучена сорбция выделенных микроорганизмов полисорбом ВП в опытах in vitro.

Практическая значимость работы. Результаты исследований использованы при разработке методических рекомендаций «Диагностика эндометритов бактериальной природы у свиноматок» (утверждены подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, № 5 от 8.04.2002). В лабораторную практику внедрен способ «Экспресс-метод идентификации Actinobaculum suis с применением системы Rapid ID 32 А» (рационализатоское предложение №375 от 25.03.2002 г.). Разработан способ применения поли-сорба ВП при лечении колибактериоза (приоритетная справка № 2003125014/15(026543) от 11.08.2003 г.).

Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников и руководств по микробиологии. Результаты проведенных исследований используются в учебном процессе ветеринарных факультетов Уральской ГАВМ, Новосибирского ГАУ, Саратовского ГАУ им. Н. И. Вавилова, Пермской ГСХА, Алтайского ГАУ, Казанской ГАВМ им. Н. Э. Баумана, Бурятской ГСХА им. В. Р. Филиппова, Красноярского ГАУ.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы были доложены и обсуждены на международной научно-производственной конференции по акушерству, гинекологии и биотехнологии репродукции животных, посвященной 100-летию со дня рождения И. А. Бочарова (Санкт-Петербург, 2001); межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях» (Барнаул, 2001); международной научной конференции, посвященной 40-летию ИВМ АГАУ «Достижения ветеринарной медицины - XXI» (Барнаул, 2002); Всероссийской научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002); Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2003); Региональной научной конференции молодых ученых аграрных вузов Сибирского федерального округа (Омск, 2003); международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса (Казань, 2003); ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (2001, 2002, 2003).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано восемь научных статей.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерной верстки и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами, 31 рисунком. Список литературы включает 110 источников, из них 36 зарубежных авторов.

125 ВЫВОДЫ

1. Эндометриты бактериальной этиологии регистрируются в хозяйствах Омской и Тюменской областей в среднем у 32% свиноматок репродуктивного возраста преимущественно в первые двое-трое суток после опороса. Сезонность болезни не выражена.

2. Возникновение эндометритов у свиноматок в послеродовой период сопровождается гипокальциемией (7,85±0,4 мг%), снижением уровня витамина А в сыворотке крови (8,86±0,14 мкг.%), а также увеличением количества эозинофилов (13,5±1,8%) и уменьшением щелочного резерва крови (42,55±1,35 об.%С02).

3. Микробный пейзаж цервикально-маточного содержимого больных свиноматок представлен чаще Е, coli в ассоциации с другими микроорганизмами (87,7%%), реже монокультурой (12,3%). Наиболее часто в роли ассоциантов выступают Proteus (88,5%), Staphylococcus (93,7%), Streptococcus (85,5%) и Citrobacter (91,8%).

4. У свиноматок, из цервикально-маточного содержимого которых была изолирована монокультура, чаще регистрировали катаральный эндометрит, при выделении ассоциаций микроорганизмов -катарально-гнойное воспаление.

5. На энтеробактерии, выделенные от больных свиноматок, выраженное бактерицидное действие оказывают антибиотики группы цефалоспоринов, макролидов и аминогликазидов. У патогенных и условно-патогенных стафилококков и стрептококков в большинстве случаев преобладает чувствительность к цефалоспоринам, аминог-ликозидам и фторхинолонам. и стрептомицину. Стрептококки резистентны к мономицину и эритромицину.

6. Изолированные культуры Е. coli, К. oxytoca и S. chromogenes индифферентны к неселективным сорбентам полифепану, энтеросгелю и зоокарбу. Полисорб ВП обладает выраженной сорбционной активностью in vitro в отношении Е. coli и К. oxytoca (в концентрации 1,36х 107 м. т. /мл) при экспозиции 60 мин, в отношении S. chro-mogenes - при 30 мин.

7. Заражение белых мышей выделенными культурами микроорганизмов (Е. coli, S. marcescens, P. mirabilis, К. pneumoniae subsp. pneumoniae, S. chromogenes, S. pyogenes) приводит к появлению кровоизлияний в подкожной клетчатке, увеличению селезенки и печени, острому расширению сердца и возникновению абсцессов во внутренних органах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны методическим рекомендациям «Диагностика эндометритов бактериальной природы у свиноматок», утверждены подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхоза-кадемии, № 5 от 8.04.2002.

2. Подана заявка на изобретение «Способ лечения колибак-териоза» (приоритетная справка № 2003125014/15(026543) от 11.08.2003 г.).

3. Материалы диссертационной работы могут быть использованы: в учебном процессе при чтении лекций и проведении ла-бораторно-практических занятий по микробиологии, эпизоотологии и патологической анатомии; в научно-исследовательских учреждениях ветеринарной медицины при решении вопросов диагностики, профилактики и лечения болезней репродуктивных органов свиней.