Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармакология и применение каротиноидов в ветеринарии и животноводстве

На правах ру!фписи

□□ЭОВ83ЭО

КУЗЬМИНОВА ЕЛЕНА ВАСИЛЬЕВНА

Фармакология и применение каротиноидов в ветеринарии и животноводстве

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Краснодар - 2007

003068390

Работа выполнена в ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии

Научный консультант: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, член-корреспондент РАСХН Антипов Валерий Александрович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Александров Игорь Дмитриевич

доктор ветеринарных наук, профессор

Слободяник Виктор Иванович

доктор ветеринарных наук

Богосьян Адам Аведисович

Ведущая организация: Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина

Защита состоится 2007 г., в ^^ часов, на

заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при Кубанском государственном аграрном университете (350044, Краснодар, ул. Калинина, 13)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Д.В.Н.

Родин Игорь Алексеевич

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

актуальность темы. Прогресс ветеринарной фармакологии обеспечивается постоянным поиском и созданием новых высокоэффективных и безопасных препаратов. Установлено, что на метаболизм и иммунную систему животных многие факторы окружающей среды - несбалансированное кормление, стрессы различной этиологии - действуют неблагоприятно. Это требует применения различных средств, которые позволяют ослабить негативное влияние стресс-факторов (Антипов В.А., 2000; Шахов А.Г., Бузлама B.C., 1990; Папуниди К.Ф., Фролов A.B., Назаров В.Р., 2002; Аргунов М.Н, 2002). В связи с этим разработка, исследование и производство биологически активных препаратов для профилактики и лечения болезней, связанных с нарушением обмена веществ, а также средств стимуляции роста и продуктивности животных является актуальным направлением ветеринарной науки.

В этом отношении перспективно использование каротина как вещества, выполняющего в организме целый ряд специфических и жизненно важных функций. Длительное время считалось, что его основная роль в биологических системах обусловлена превращением в витамин А, но в последние десятилетия установлено, что каротиноиды обладают антиоксидантными, адаптогенными, антиканцерогенными, радиопротекторными, антимутагенными и иммуномодулирующими свойствами, не связанными с их провитаминной активностью (Кузьмич Р.П., 2000; Холодова Ю.Д., Чаяло П.П., 1990; Чиркин А.А, Казарян Р.В., Поддубный Н.П., 1996; Плецитый К.Д., 1981; Сергеев А.Г., 1986; Букин Ю.В., 1995; Charleux J.L., 1996; TakatsukaN. et all., 1998). Вместе с тем в последние годы появились сведения о высокой биологической активности ликопина - каротиноида, не способного превращаться в ретинол (Капитанов А.Б., 2004; Бекетова Н.А, 1998; Кравченко JI.B., Морозов С.В, 2003; Poulsen Н.Е., 1998). В вопросе применения каротиноидов наиболее перспективно использование фармакопейной субстанции бета-каротина, полученной микробиологическим синтезом из куль-

туры гриба ШакеяЫа ¡трога (Казарян Р.В., Кудинова С.П., 1978; 1990).

Препараты каротина достаточно широко применяются в здравоохранении, однако в ветеринарии и животноводстве их использование ограничено. Слабая изученность токсикологических свойств и особенностей фармакодинамики, отсутствие схем научно обоснованного применения каротиноидов в качестве лечебно-профилактических средств сдерживает их внедрение в животноводство и ветеринарию. Учитывая перспективность данной группы препаратов, мы в соответствии с требованиями к изучению лекарственных средств, рекомендуемых для применения в ветеринарной медицине, провели комплексные исследования по определению фармако-токсикологических свойств препаратов бета-каротина и ликопина, а также обосновали их применение в ветеринарии и животноводстве. Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка, фармако-токсикологическая оценка и научно-практическое обоснование использования препаратов бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ли-ковит) в практическом животноводстве, а также их внедрение в промышленное и сельскохозяйственное производство.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

- изучить физико-химические свойства препаратов, дать характеристику параметров и методов контроля их качества;

- дать токсикологическую оценку каролина, карсела, кар-тока, ликолина и ликовита;

- выявить основные фармакологические аспекты действия каротиноидных композиций;

- определить лечебно-профилактическую эффективность препаратов в различных показаниях;

- разработать нормативную документацию по применению и контролю качества каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита.

Научная новизна работы. Впервые изучены фармако-токсикологические свойства новых препаратов из группы каро-

тиноидов - бета-каротина и ликопина, полученных микробиологическим синтезом из культуры гриба В1аке$1еа ¡трога. Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность их применения для оптимизации обменных процессов организма, увеличения его антиоксидантной защиты и неспецифической резистентности. Установлен их высокий уровень биологического действия и лечебно-профилактической эффективности при гиповитаминозе А, послеродовых заболеваниях, гипотрофии, микотоксикозах и др.

Научная новизна исследований защищена шестью решениями на выдачу патентов РФ.

Практическая значимость работы. Разработана и внедрена в производство серия препаратов бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ликовит) для стимуляции продуктивности и нормализации обменных процессов, повышения устойчивости животных к заболеваниям, обладающих высокой лечебно-профилактической эффективностью при ряде патологий крупного рогатого скота, свиней и птицы.

Разработана нормативная документация (пять технических условий и три наставления по применению), определяющая условия производства и применения препаратов, требования к качеству и методам контроля, утвержденная в установленном порядке вышестоящими структурами.

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований нашли отражение в документах, утвержденных (согласованных) Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации: каролин - Технические условия № 9141-003-41341380-01; Наставление по применению препарата каролин в ветеринарии № 13-4-03/0014 от 21.02.01; кар-сел - Технические условия № 9141-004-41341380-01; Временное наставление по применению препарата карсел в ветеринарии № 13-4-03/0019 от 21.02.01; карток - Технические условия на опытную партию № 9141-005-41341380-01; Временное наставление по применению препарата карток в ветеринарии № 13-403/0018 от 21.02.01; ликолин - Технические условия № 9283029-05766117-01; ликовит - Технические условия № 9283-028-

05766117-01; Методические рекомендации по применению препаратов каротина в ветеринарии и животноводстве (утверждены Академиком-секретарем РАСХН A.M. Смирновым 22 сентября 2004 года); Методические рекомендации по эффективным зооветеринарным технологиям повышения воспроизводства, сохранности и продуктивности животных (утверждены заместителем главы администрации Краснодарского края Н.П. Дьяченко 12 апреля 2005 г.); Методические рекомендации по комплексной этиопатогенетической фармакотерапии и профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных в условиях Краснодарского края (утверждены начальником управления Федеральной службы по ветеринарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея 11 ноября 2005 г.).

Освоено промышленное производство препаратов в ЗАО «Роскарфарм» (г. Краснодар) и ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург).

Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, явившихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого Совета Краснодарского НИВИ 1996-2006 гг.; заседаниях кафедры фармакологии КГАУ 2000-2005 гг.; заседаниях Ветфармбиосовета 1996-2005 г.г.; на международных и Всероссийских научно-практических конференциях в Москве, Краснодаре, Воронеже, Санкт-Петербурге, Казани и других городах в 1996-2006 гг. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 45 научных работ (из них 6 в рецензируемых научных изданиях), в том числе 1 монография, 2 брошюры, 5 методических рекомендаций.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

физико-химические свойства и контроль каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита;

токсикологическая оценка изучаемых препаратов бета-каротина и ликопина;

фармакологические свойства каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита;

- обоснование применения каротиноидов в качестве лечебно-профилактических средств при различных патологиях у животных и птиц;

результаты внедрения препаратов в промышленное и сельскохозяйственное производство.

Объем и стуктура диссертации. Работа изложена на 370 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 348 источников, в том числе иностранных - 197. Работа иллюстрирована 131 таблицей и 23 рисунками.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в период с 1995 по 2006 годы на базе лабораторий ветеринарной фармакологии, микологии, акушерства и гинекологии с.х. животных Краснодарского НИВИ, отдела экспертизы и стандартизации ветеринарных препаратов ВГНКИ, в хозяйствах Краснодарского края, Витебской, Ульяновской и Саратовской областей в соответствии с Государственными планами научных исследований Российской академии сельскохозяйственных наук. Диссертационные исследования являются частью следующих программ и заданий: по заданию Д. 1.01.01. с номером Госрегистрации 01.9.10.043701.; по заданию 06.02.01. с номером Госрегистрации 01.9.80.006905.; по заданию 06.01.01. с номером Госрегистрации 01.9.80.006908.

В проведении отдельных лабораторных исследований и клинических испытаний, с учетом их комплексности, принимали участие сотрудники: А.Н. Турченко, Д.Н. Уразаев, С.П. Ку-динова и др.

Основные объекты исследований - новые препараты бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ли-ковит), наработанные ЗАО «Роскарфарм» (г. Краснодар) и ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург).

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с установленным требованиями к эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов. При постановке опытов были использованы токсикологические, фармакологические, физиологические, клинические, биохимические, морфологические, иммунологические и другие методы исследований.

В экспериментальной части работы использовали 412 крыс, 9 морских свинок, 9 кроликов, 100 куриных эмбрионов, 360 свиней, 9650 особей крупного рогатого скота и 36590 птицы. Алгоритм исследований представлен на схеме.

Общетоксические свойства препаратов оценивали путем определения острой и хронической токсичности, а также возможных побочных свойств и отдаленных последствий в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР и «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).

Определение острой токсичности проводили на белых крысах, поросятах и цыплятах по методу Deishmann, Le Blank (1943). Исследуемые масляные растворы каротиноидов вводили крысам внутрижелудочно и внутримышечно, остальным видам -только внутрижелудочно. После введения регистрировали характер токсического действия, обращая внимание на поведение, двигательную активность, физиологические функции, состояние шерстного покрова, поедаемость корма животными.

Параметры хронической токсичности изучали по общепринятым методикам на белых крысах, телятах и поросятах. Препараты задавали ежедневно в дозах, превышающих условно-терапевтическую в 3 и 5 раз.

Алгоритм исследований

Получение, физико-химические свойства, разработка ТУ препаратов

бета-каротина

| I |

КАРОЛИН КАРСЕЛ КАРТОК

ликопина

I 1

ликолин ликовит

Контроль качества и стандартизация препаратов

I

Фармако-токсикологическая оценка

1 4

Фармакологические свойства препаратов

- фармакодинамика;

- фармакокинетика

Общетоксические свойства препаратов

- острая токсичность;

- хроническая токсичность;

- местно-раздражающие действие;

- патоморфологические и гистологические исследования;

- эмбриотоксическое действие;

- влияние на функции желудочно-кишечного тракта, печень и почки

Оценка лечебной и профилактической эффективности при:

- А-гиповитаминозах;

- Послеродовой патологии;

- Микотоксикозах;

- Гепатопатологиях

- Гипотрофии;

- Диспепсии;

- Бронхопневмонии;

- Стрессах

I

Санитарно-гигиеническая оценка продукции после применения препаратов

I

Производственные испытания, разработка наставлений по применению

I

Экономическая эффективность

При наблюдениях учитывали потребление корма, воды, состояние шерсти и слизистых оболочек, показатели дыхания, пульса, температуры тела. Определение массы животных осу-

ществляли в начале опыта, а затем каждые 20 дней, кровь для морфологических исследований брали 3 раза (фоновое, на 30 и 60-е сутки). В конце эксперимента проводили биохимические исследования сыворотки крови, а местно-раздражающее действие на желудочно-кишечный тракт оценивали в процессе пато-морфологического изучения при макро- и микроскопическом исследовании.

В хронических опытах на телятах оценивали влияние препаратов на функцию почек и пищеварительного тракта, для этого каждые 20 дней от животных опытной и контрольной групп собирали мочу и фекалии. В динамике устанавливали физико-химические свойства мочи (цвет, консистенцию, запах, концентрацию водородных ионов, удельный вес, содержание белка, углеводов, гемоглобина, желчных пигментов, уробилина) и фекалий (цвет, запах и консистенцию - органолептически, наличие кровяных пигментов - бензидиновой пробой, желчных пигментов, жира - окраской суданом-3, крахмала - обработка раствором Люголя, рН).

Выявление кожно-резорбтивного действия изучаемых веществ проводилось на морских свинках и кроликах по методике И.В. Саноцкого (1970) методом накожных аппликаций.

Эмбриотоксическое действие определялось на 7-суточных куриных эмбрионах путем введения препаратов в желточный мешок. На 19-е сутки инкубации по 10 яиц из каждой группы помещали в морозильную камеру. В дальнейшем в эмбрионах изучали размеры, строение внутренних органов (по Вильсону) и скелета (по Доусону).

О качестве мяса животных после применения каротинои-дов судили по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы. Для этого проводили внешнее обследование туш, органолепти-ческую оценку вкусовых качеств мяса и бульона, определение рН мяса через 1 час и 1 сутки после убоя, бактериальной обсе-мененности туш методом отпечатков с поверхности и глубоких слоев мышц, реакцию на пероксидазу, формольную реакцию и определение коэффициента кислотность-окисляемость.

О фармакодинамике препаратов судили по клиническим показателям, изменениям в белковом, липидном и углеводном, минеральном и витаминном обменах, общей неспецифической резистентности, интенсивности роста и продуктивности животных.

Фармакокинетику р-каротина изучали на птице путем определения в динамике уровней каротина и витамина А в сыворотке крови и печени, после введения каролина, а также по изменению концентраций этих веществ в яйце.

При морфологических исследованиях определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, выводили лейкоформулу по В.Г. Мухину, содержание гемоглобина (ге-моглобинцианидным методом), подсчитывали цветовой показатель, СОЭ в аппарате Панченкова, гематокрит в капиллярах - в центрифуге. Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка (колориметрически), белковых фракций (нефелометрически), каротина и витамина А (по Бессею, в модификации Анисовой), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тиосемикарбазидом), витамина Е (по цветной реакции с хлорным железом и а-дипиридилом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюкозы (фер-ментативно). Активность трансаминаз, щелочной фосфатазы, мочевую кислоту, билирубин, холестерин, общие липиды, креа-тинин - с помощью наборов фирмы «ДДС». Микроэлементный состав крови исследовался атомно-абсорбционным методом.

Для определения факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus (№ 209 Р) по И.В. Нестеровой с соавторами (1996). Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), лизо-цимную (ЛАСК) - по Д.Г. Дорофейчук, количество Т-, В-, NK-лимфоцитов методом Пирса в модификации Н.Н. Гугушвили с соавторами (2000) с прочным синим и нафтилацетатом. Содер-

жание иммуноглобулинов - методом Манчини с соавторами (1965).

Оценку показателей системы ПОЛ-АОЗ проводили в соответствии с методическими рекомендациями ВНИВИПФиТ (1997) по изучению процессов перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты организма у животных.

Комплексные исследования животных проводили с учетом условий их кормления, содержания и эксплуатации. Выявляя причины заболевания, оценивали особенности клинического проявления болезни, паталогоанатомическую картину, поставленный диагноз подтверждали лабораторными исследованиями.

При диагностике гиповитаминоза А учитывали дефицит каротиноидов и ретинола в кормах и крови, принимая во внимание стадные признаки болезни: энзоотичность, падение рождаемости, повышение заболеваемости и смертности, снижение воспроизводительной функции популяции из-за симптоматического (А-гиповитаминозного) бесплодия и гибели новорожден-ных-гипотрофиков. При исследовании больных животных оценивали их общее состояние, снижение упитанности, задержку роста и развития, изменения в деятельности органов, связанных с метаплазией и кератинизацией эпителия.

Гипотрофию телят и поросят определяли по сниженной живой массе и задержке роста и развития, плохой упитанности, подавленности сосательного рефлекса, уменьшению показателей естественной резистентности организма.

При клинической оценке послеродовых осложнений у коров и свиноматок определяли время родов, задержание последа, наличие патологических выделений (кровь, экссудат) из влагалища, ригидность и консистенцию матки устанавливали при ректальном исследовании. Послеродовые осложнения у свиноматок выявляли по синдрому ММА (метрит-мастит-агалактия).

Выбор (подбор) терапевтических средств и методик (приемов, техники) их применения при лечении больных животных осуществляли на основе этио-патогенетического диагноза, особенностей клинического проявления и тяжести течения болезни.

Полученные в опытах данные были подвергнуты биометрической обработке с помощью программного обеспечения фирм Microsoft и Carl Zeiss. Критерий достоверности определяли по таблице Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Физико-химические свойства и контроль препаратов

каротина

В результате сотрудничества Краснодарского НИВИ, ЗАО «Роскарфарм» (г. Краснодар) и ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург) разработаны новые отечественные препараты на основе бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ликовит). Бета-каротин и ликопин получены из наиболее активного их продуцента - гетероталличного гриба Blakeslea trispora, относящегося к порядку Mucorales.

На все композиции разработана научно-техническая документация, в которой" отражены требования, соблюдение которых гарантирует высокое качество препаратов и наличие активно-дейтвующих веществ, что обеспечивало рациональное их использование в животноводстве и ветеринарии. В технических условиях отражены показатели, характеризующие препараты по внешнему виду, цвету, запаху и вкусу, массовой доле действующих веществ, кислотному и перекисному числу, стерильности и безвредности. Физико-химические свойства препаратов представлены в таблице 1.

Каролин, карсел, карток представляют собой растворы бета-каротина в рафинированных и дезодорированных маслах (кукурузном, соевом, подсолнечном) с массовой долей каротина не менее 0,18%. Действующим веществом является получаемый из биомассы культуры гриба Blakeslea trispora, бета-каротин (С40Н56), выпускаемый по ФС 42-3867. В карсел дополнительно входит ДАФС-25, представляющий собой диацетофенонилселе-нид, содержащий 25% органически связанного селена с массовой долей 0,225%, а в карток - витамин Е с массовой долей

0,5%. Эти препараты выпускаются как для внутреннего, так и для парентерального введения.

Таблица 1 - Физико-химические свойства препаратов

Показатель КАРОЛИН КАРСЕЛ КАРТОК ликолин ликовит

Препаративная форма Прозрачная маслянистая жидкость без осадка Прозрачная маслянистая жидкость без осадка Прозрачная маслянистая жидкость без осадка Прозрачная маслянистая жидкость* Однородная пастообразная масса или маслянистый порошок

Цвет Темно-красный Темно-красный Темно-красный Красно-коричневый Красно-коричневый

Запах и вкус Специфический

Массовая доля бета-каротина, % 0,18 0,18 0,18 - -

•II- ликопина - - - 0,05-0,2 0,01-0,3

-II- ДАФС-25 - 0,225 - - -

-II- витамина Е - - 0,5 - • -

Кислотное число, мг КОН, не более 0,4 0,4 0,4 - -

Стерильность + + + - -

Количество МА и ФАМ, КОЕ в 1 мл, не более - - - 5 *105 5 х105

Сальмонеллы в 25 мл - - - Не допускаются Не допускаются

Энтеробакте-рии в 1 мл, не более • - - 300 колоний 300 колоний

Кишечная палочка в 1 мл - - - Не допускается Не допускается

* допускается осадок, исчезающий при температуре 60°С

Ликовит представляет собой обезжиренную ликопинсо-держащую биомассу с концентрацией ликопина от 0,01 до 0,3%. Ликолин - это раствор ликопина в рафинированных и дезодорированных маслах (кукурузном, соевом, подсолнечном) с массовой долей ликопина от 0,05 до 0,2%.

3.2. Токсикологическая характеристика препаратов

каротина

Изучение токсических свойств новых препаратов каротина на разных видах животных не позволило установить их основные токсические характеристики: среднесмертельную дозу (ЬО50) и дозу, вызывающую появление клинической картины токсикоза. В течение периода наблюдений установлено, что введение каротиноидных композиций в диапазоне доз от 0,94 до 36 г/кг массы тела не вызвало гибели и острой интоксикации животных и птиц, не влияло отрицательно на их общее состояние и поведение. Рефлексы оставались сохраненными. При этом нарушения функциональной активности органов пищеварения и мочеотделения не наблюдалось.

Результаты проведенной работы позволили сделать вывод о том, что каролин, карсел, карток, ликолин и ликовит обладают слабой острой токсичностью, не вызывая выраженного токсикоза в дозах до 36 г/кг массы тела и согласно ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относятся к 4-му классу опасности (незначительно опасные вещества).

Изучение хронической токсичности препаратов каротина показало, что животные хорошо переносили введение испытуемых образцов. Гибели не наблюдалось ни в одной из групп. Все находившиеся в опыте крысы были клинически здоровы, поедание пищи и прием воды не были нарушены, шерстный покров был гладким и отличался блеском. Визуальное наблюдение на протяжении всего эксперимента не выявило каких-либо изменений в поведении опытных животных в сравнении с контрольными.

Анализ динамики массы тела крыс выявил положительный ее прирост как в контрольной, так и в опытных группах. Так в группе, получавшей каролин в дозе 3 мл/кг массы тела, прирост

составил 42,4%, в группе с дозировкой каролина 5 мл/кг массы тела - 44,8%, в контрольной - 41,05%. Аналогичная ситуация складывалась и при анализе прироста массы тела лабораторных животных, участвующих в хронических опытах по изучению токсических свойств карсела, картока, ликолина и ликовита - во всех группах с добавкой препаратов животные росли интенсивнее в сравнении с контролем (разница составила от 3,7 до 8%).

Кровь крыс, участвующих в хроническом эксперименте, по морфологическим показателям практически не различалась в опытных и контрольной группах. Средние результаты содержания эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, цветового показателя и лейкоформула соответствовали норме растущих животных. Лишь в группе, получавшей карсел в максимальной дозировке, наблюдали прогрессивный лейкоцитоз, свидетельствующий о защитной реакции организма на исследуемый препарат. Исследованиями основных биохимических показателей также не выявлено достоверных различий между группами. Однако имеет место тенденция повышения уровня общего белка, ретинола и токоферола у опытных животных.

При патоморфологическом и гистологическом исследовании органов и тканей экспериментальных животных отклонений выявлено не было, лишь единичных случаях десквамация покровного эпителия в ворсинках тонкого кишечника, как у контрольных, так и у опытных крыс, по-видимому, связана с введением больших объемов изучаемых средств.

При анализе данных хронического токсикологического эксперимента на телятах, в ходе которого изучали влияние каролина на функцию почек, пищеварительного тракта и картину крови, получены данные, свидетельствующие о том, что физико-химические показатели мочи и фекалий соответствовали норме, а в крови повышалось содержание эритроцитов, общего белка (на 17,5%), каротина (в 2 раза) и витамина А (в 1,8 раза), а также наблюдалась тенденция к увеличению гамма-глобулиновой фракции сыворотки крови (в пределах нормы). Остальные показатели существенно не отличались от контрольных (таблица 2).

Таблица 2 - Влияние каролина на показатели крови телят при определении хронической токсичности (М±т; п=10)_

Показатели Опыт Контроль

Эритроциты, 1012/л 6,5 ±1,06* 6,1 ±0,44

Гемоглобин, г/л 111,2±6,1 100,3±3,1

Лейкоциты, 107л 7,06±0,17 7,1 ±0,28

Каротин, мкг% 234,1±7,36* 118,8±6,28

Витамин А, мкг% 112,3±5,32* 62,7±4,21

Общий белок, г/л 64,3±1,31* 54,7± 1,17

Альбумины, % 40,1 ±2,45 39,46±1,14

а-глобулины 14,12±1,81 14,4±1,81

Р-глобулины 15,6±0,75 17.4il.ll

у -глобулины 30,15±1,16 28,7± 1,82

Лейкоформула, %:

Эозинофилы 1,04±0,61 1,3±0,2

Базофилы 0,7±0,34 0,67±0,31

Нейтрофилы юные 0,67±0,1 0,33±0,34

Палочкоядерные 6,3±0,68 7,2±1,03

Сегментоядерные 27,3±1,03 28,5± 1,77

Лимфоциты 64,0± 1,03 62,3±2,05

*- Р < 0,01 по отношению к контролю

В хроническом токсикологическом опыте также изучали влияние каролина на функциональное состояние печени поросят. По результатам исследований сделан вывод, что дача препарата в пределах нормы повысила уровень общего белка, а количественное содержание билирубина, ферментов AJ1T и ACT у поросят опытной и контрольной группы не различались. Это указывает на то, что каролин при длительном назначении животным в дозах, превышающих терапевтические, не оказывает на печень токсического действия.

При проведении ветеринарно-санитарной экспертизы мяса поросят, которым вводили каролин, установлено, что дача препарата не изменяет вкусовых и других качеств мяса.

Изучаемые препараты, нанесенные на поверхность кожи животных, не вызывали местного раздражающего действия и общей реакции организма. В течение пяти дней эксперимента их нанесение на покровные ткани не обусловливало каких-либо

заметных изменений в местах аппликаций у опытных животных. Следовательно, разработанные препараты можно охарактеризовать как не проявляющие местно-раздражающего действия.

В результате проведенных нами исследований по оценке эмбриотоксического действия бета-каротина установлено, что препараты на его основе не обладают таким действием.

Таким образом, применение препаратов каротина исключает опасность возникновения токсикозов, что позволяет их использовать в животноводстве и ветеринарии.

3.3. Фармакологические свойства препаратов каротина

При оценке фармакологических свойств бета-каротина установили, что фармакокинетика каролина характеризуется его высокой биодоступностью для организма птицы.

Курам-несушкам, в возрасте 160-170 дней в течение месяца вводили препарат каролин из расчета 5 мл на 1 кг корма. Куры контрольной группы получали только основной рацион, представленный комбикормом заводского изготовления. В начале опыта, на 15-й и 30-й день у 5 кур из каждой группы брали яйца и кровь для определения уровня каротина и витамина А. Концентрацию аналогичных показателей измеряли также в печени после забоя птицы.

Установлено, что при введении каролина концентрация каротиноидов в крови превышала данные фоновых исследований на 15-й день в 1,6 раз, на 30-й день - в 1,76 раза. Содержание ретинола увеличилось в среднем в 1,5 раза, по окончании эксперимента уровень этих веществ сохранялся в течение 10 дней. В печени концентрация каротина у опытных кур увеличилась на 63,1% в сравнении с контролем, а витамина А - на 39,6% соответственно. При анализе динамики накопления витаминов в желтке установлено, что к 15-му дню опыта возросли концентрации витамина А на 7,45%, каротина на - 25,2%. К концу эксперимента эти показатели увеличились до 40,7% и 48,2% соответственно. В контроле существенных изменений не зарегистрировано.

Фармакодинамика каротиноидов характеризуется разносторонним и многоуровневым воздействием этих веществ на живой организм. Изучение влияния препаратов каротина на нормализацию обмена веществ, при фоновых исследованиях в крови сухостойных коров выявило снижение уровня ряда показателей от нормы у значительной части животных. Нарушения носили следующий характер: в белковом обмене регистрировалась гипопротеинемия, при этом нарушен фракционный состав белка (дисбаланс связан с низким уровнем альбуминовой фракции и повышенным р- и у-глобулиновых). Зафиксировано также снижение концентрации мочевины. Все вышеперечисленное свидетельствовало о нарушении протеинобразовательной функции печени, а ее патологическое состояние подтверждалось высокой активностью ферментов (аланин- и аспартатами-нотрансфераз).

При анализе минерального и витаминного обменов выявлено нарушение Са:Р-соотношения (за счет низкого уровня кальция и высокого фосфора), отмечено пониженное содержание в крови цинка и железа, а также уменьшение от нормы концентрации каротина и ретинола.

После применения каролина и карсела (в течение 45 дней) установлено, что у животных опытных групп достоверно возрос уровень общего белка в сравнении с группой отрицательного контроля на 8,3% (каролин) и 14,3% (карсел). Изучаемые препараты оказали стабилизирующее влияние на фракционный состав белка, так как количество альбуминов увеличилось до значений нормы. Рассматривая глобулиновые фракции, отметили, что в группе, где использовали каротиноиды, содержание Р" и у- глобулинов оптимизировалось. Количество мочевины нормализовалось, составив 3,14мМ/л и 3,56 мМ/л, что в 1,5 и 1,7 раза выше показателей контроля.

Каротиноиды оказали выраженное позитивное влияние на уровень ферментов, достоверно снижая их активность (AST - в 1,5 и в 1,7 раза, A LT - в среднем в 2 раза) в сравнении с показаниями контрольной группы, где их активность к концу эксперимента еще возросла. Анализируя данные по витаминно-

му составу крови, установили достоверное увеличение концентрации каротина в 2,2 раза и витамина А в - 1,4-1,6 раза в опытных группах, а в крови контрольных коров их уровень снизился.

Изучая показатели минерального обмена, мы не выявили влияния препаратов на уровень кальция, фосфора и магния, содержание цинка увеличилось на 20,7% и 14,9%, железа - на 28% и 39,6%. При анализе морфологических показателей выявлена тенденция к увеличению уровня эритроцитов и гемоглобина в сравнении с контролем.

При изучении уровня эндогенной интоксикации по концентрации молекул средней массы (ССМ) установлено, что к концу опыта в группе животных, получавших препараты каротина, этот показатель был ниже в 1,6-1,8 раз, в сравнении контролем.

В поздний предродовой и ранний послеродовой периоды одним из факторов, ведущих к развитию осложнений послеродового периода у коров и оказывающих неблагоприятное воздействие на потомство, является дисбаланс в течении антиокси-дантных процессов в организме животного. В генезе многих патологических состояний организма универсальным неспецифическим звеном является повреждение мембран клеток в результате перекисного окисления липидов. При этом концентрация перекисных продуктов является одним из важнейших факторов, свидетельствующим о гомеостазе всех систем организма. В связи с этим нами изучалась концентрация продуктов перекисного окисления ненасыщенных жирных кислот в крови коров, которым в период сухостоя вводился карсел в дозе 10 мл подкожно через каждые 7 дней до отела. Результаты исследований приведены в таблице 3.

Из данных, представленных в таблице, видно, что позитивное влияние карсела на показатели, характеризующие интенсивность ПОЛ у коров, проявилось в снижении концентрации всех продуктов липопероксидации. Так, в сравнении с контрольной группой ниже уровень диеновых конъюгатов - на 16,6%, кетодиенов - на 35,7%, малонового диальдегида - на 11,3% и оснований Шиффа - на 15%. Наряду с изменениями

прооксидантных процессов у коров опытной группы происходили изменения в системе антиоксидантной защиты. Так, при биохимических исследованиях мы установили, что под влиянием препарата возрос уровень каротина, являющегося представителем неферментного звена АОЗ, а в ферментном звене также имеются позитивные сдвиги, поскольку в опытной группе активность глутатионпероксидазы была выше на 22,3% аналогичного показателя у контрольных животных. Таблица 3 - Влияние карсела на уровень продуктов перекисно-го окисления липидов у коров (М±ш; п= 10)

Показатель Фон Конец опыта

Карсел Контроль

Диеновые конъюгаты, ед.оп.пл./мл.крови 0,22±0,03 0,24±0,05 0,28±0,04*

Кетодиены, ед.оп.пл./мл.крови 0,12±0,01 0,14±0,01 0,19±0,09*

Малоновый диальде-гид, мкМ/л 1,53±0,18 1,59±0,15 1,77±0,21

Основания Шиффа, ед.оп.пл./мл.крови 0,19±0,05 0,20±0,02 0,23±0,04

*- Р < 0,05 по отношению к опытной группе

Следовательно, введение стельным коровам карсела способствует ослаблению свободнорадикального окисления липидов в наиболее критический период перед родами, при этом он активизирует ферментативное и неферментативное звенья системы антиоксидантной защиты, тем самым, создавая в организме более благоприятные условия для процессов детоксикации и репарации.

В настоящее время имеются данные (Рецкий М.И., 1996,1997; Каверин H.H., 2000), что у крупного рогатого скота формирование полноценной системы антиоксидантной защиты происходит только к месячному возрасту. При этом у телят в возрасте до 10 дней она полностью еще не оформлена и характеризуется низким функциональным потенциалом как фермен-

тативного, так и неферментативного звеньев антиоксидантной системы. В связи с этим нами изучалось влияние карсела на интенсивность процесса перекисного окисления липидов у новорожденных телят через организм матери. В 1-й группе были телята от коров, которым в период сухостоя вводили подкожно карсел, по 10 мл, через каждые 7 дней, 2-я группа - от контрольных животных.

Установлено, что введение коровам карсела в сухостойный период снижает интенсивность процессов перекисного окисления липидов у новорожденных телят (таблица 4). Так, содержание первичных продуктов - конъюгированных диенов - в опытной группе было достоверно ниже, чем в контрольной, на 25,9%. В уровне же кетодиенов происходили статистически недостоверные изменения - снижение на 5,6%. Содержание оснований Шиффа достоверно не изменялось. А вот уровень малонового диальдегида в 1-й группе был ниже на 15%, и эта разница была достоверной.

Таблица 4 - Показатели продуктов перекисного окисления липидов телят при применении карсела коровам в последний период беременности (М±ш; п=10)

Показатель Опыт Контроль

Диеновые конъюгаты, ед.оп.пл./мл.крови 0,230±0,024 * 0,289±0,031

Кетодиены, ед.оп.пл./мл.крови 0,124±0,011 0,131±0,012

Малоновый диальдегид, мкМ/л 1,53±0,05* 1,76±0,07

Основания Шиффа, ед.оп.пл./мл.крови 0,38±0,07 0,41 ±0,09

*- Р < 0,05

На фоне снижения интенсивности ПОЛ атиоксидантная система адекватно реагирует увеличением своей активности. Так, активность каталазы в группе отрицательного контроля составила 28,9±1,3 мкМНг Ог/л.мин., что на 15,2% меньше, чем в опытной группе. По результатам исследований также установлено, что введение карсела увеличивает количество селенозави-симой глютатионпероксидазы на 21,1% (12,6±0,8 мМв-БН/л.мин.) по сравнению с отрицательным контролем, где изучаемый показатель составил 10,4±0,ЗмМС-8Н/л.мин. Активность СОД и ГР достоверно не отличались от показателей контрольной группы, хотя следует отметить наличие тенденции к увеличению СОД на 7,7% у опытных телят.

Таким образом, введение карсела коровам в период сухостоя снижает интенсивность накопления продуктов перекисного окисления липидов у новорожденных телят, стимулируя при этом увеличение активности антиоксидантной системы, что создает наиболее благоприятные условия для роста и развития организма животного.

Применение ликопина также оказывало усиливающее действие на ферментативное звено антиоксидантной системы. Вероятно, это связано с тем, что каротиноиды, усиливая неферментативную защиту, способствуют более экономному расходованию антиоксидантных ферментов в целом (наиболее выраженного влияния на какой-то определенный фермент нами не было установлено). Препараты увеличивают активность супер-оксиддисмутазы на 4,5-6,6%, каталазы на 2,8-4,8%, глутатион-пероксидазы - в среднем на 4,6% и глутатионредуктазы - на 4%. Введение ликопина снижает уровень в организме продуктов перекисного окисления липидов, так под влиянием препаратов в крови снизилась концентрация малонового диальдегида и оснований Шиффа.

Препараты оказывали положительное влияние на естественную резистентность животных. Инъекции каролина коровам в период сухостоя повышали на 6,8% не только процент активных фагоцитов, но и их поглотительную и переваривающую способность. Так, фагоцитарное число и процент переваривания

у коров в опытной группе по сравнению с контролем сразу после родов были выше на 8,5 и 6,8%. Бактерицидная активность сыворотки крови в опытной группе в сравнении с контролем имела тенденцию к повышению на 2,5%. При сравнении параметров лизоцимной активности сыворотки крови в динамике опыта отмечалось снижение уровня лизоцима у всех животных сразу после родов, но в опытной группе этот процесс был менее выраженным. К концу эксперимента этот показатель у коров опытных групп был выше, чем в контроле на 4,3%.

Препарат способствовал достоверному возрастанию содержания Т- и В-лимфоцитов за счет снижения №<-лимфоцитов. В опытной группе количество Т-клеток составило 61,5%, В-клеток - 27,3%, в то время как у интактных животных количество Т- и В-лимфоцитов составило 56,4% и 24,3% соответственно (разница 5,1-3%). При изучении количества иммуноглобулинов класса А и М установлено, что применение каролина способствует достоверному увеличению ^ класса А. На концентрацию класса М существенного влияния препарат не оказал.

Препараты ликопина также способствовали повышению показателей естественной резистентности животных. Так, в сравнении с контролем возросли следующие показатели: БАСК -разница составила от 5,4% до 12,2%; ЛАСК - от 4,9% до 8,2%; ФАЛ - от 3,4% до 12,4%. Влияние ликовита было более значимым.

Таким образом, введение каротиноидов нормализует показатели фагоцитарной активности нейтрофилов, уровень иммуноглобулинов, популяции активных форм Т- и В-лимфоцитов, а также бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови.

Эксперименты по определению действия каротиноидов на процессы заживления ран проведены в нескольких сериях опытов на лабораторных животных. Установлено, что применение каролина оказывало стимулирующее действие на эпи-телизацию раневой поверхности и рост грануляций, которые происходили в 2,5 раза быстрее, чем в контроле. Полное отпа-

дание корочек и заживление ран происходило на 5-7-й день в опыте и на 14-15-й день в контроле.

Во второй серии опытов изучали влияние каролина на заживление лоскутных ран. Под действием препарата раневая поверхность через 5 дней сократилось на 3,6 мм2, разница с контролем составила 80%. На 10-е сутки после снятия струпа в группе, где проводили терапию каролином, дно ран было чистым, розовым и находилось на уровне кожных краев ран. Площадь ран у животных в группе лечения сократилась на 86,3%, в контрольной на 61,5%. Полное заживление ран в опытной группе наступило на 15,6±0,3 день, в контрольной на 23,8±0,2 день.

В третьей серии опытов было проведено изучение скорости заживления термических ожогов при лечении каролином. На 5-й день исследования разница в ожоговой поверхности между опытной и контрольной группами составила 11,35%, а на 10-е сутки - 24,8%. Площадь ожога у крыс на 15-е сутки составила: 2,51 ±0,03 мм2 в группе, где применяли каролин, и 7,53±0,12 мм2 у контрольных животных.

Таким образом, проведенные исследования показали, что препарат каролин стимулирует регенерацию кожи и является ускорителем процессов клеточного размножения.

3.4. Лечебно-профилактическая эффективность препаратов

каротина

Изучение эффективности препаратов каротина проведено нами при гиповитаминозе А, гипотрофии, поражениях печени, микотоксикозах, стрессе, диспепсии, бронхопневмонии, послеродовых заболеваниях. В первую очередь речь идет о группе болезней, в этиологии и патогенезе которых существенную, иногда решающую, роль играет так называемая А-витаминная (и/или каротиновая) недостаточность.

В нескольких сериях опытов определяли профилактическое действие каролина на развитие послеродовых патологий у коров.

В первой серии опытов были сформированы 2 группы сухостойных коров-аналогов по 76 особей в каждой (1 - опыт-

ная и 2 - контрольная). Животным опытной группы подкожно вводили каролин в дозе 10 мл через каждые 7 дней до отела и 2 раза после отела. Коровы контрольной группы были интактны-ми. За животными вели клинические наблюдения во время родов и послеродовом периоде. При этом учитывали частоту задержания последа, заболеваемость острым послеродовым эндометритом, а также определяли состояние яичников через месяц после отела. У 12 коров из опытной группы и 12 из контрольной перед постановкой опыта, а затем через 15 и 30 дней после отела брали кровь для биохимических исследований, в которых определяли содержание общего белка, каротина, витамина А, общего кальция, неорганического фосфора.

В результате было установлено, что, в сравнении с контролем у коров опытной группы регистрировали меньше случаев задержания последа - на 14,5%, острого гнойно-катарального эндометрита - на 22,4%, гипофункции яичников -на 8,8%, период бесплодия был на 20 дней короче, индекс осеменения ниже на 1,0.

Биохимические исследования крови коров показали, что назначение препарата перед родами и после них оказывает существенное влияние на поддержание высокого уровня витамина А и каротина в крови, что создает благоприятные условия для течения метаболических процессов, связанных с обеспечением родового акта и нормальной послеродовой инволюции половых органов. Анализ динамики ретинола и каротина показал, что у опытных коров их уровни были выше на 14,2% и 20% соответственно, в сравнении с показателями животных контрольной группы.

При исследовании секрета из матки в послеродовом периоде установлено повышение показателей местной иммунной реактивности матки у коров опытной группы. На 4-й день после родов уровень 1дА в опытной группе был выше 2,5 раза, 1§М - в 3,3 раза, через 21 день после родов разница несколько снизилась, составив по 1£А - 1,9 раз, по 1дМ - 2 раза. Бактерицид-ность секрета у коров опытной группы была в 1,8 раз, а количе-

ство лизоцима - в 2 раза больше, чем в контроле.

Широкие производственные испытания каролина на коровах (поголовье в 3658 коров), проводили в течение 1998-2000 гг. в Краснодарском крае: АО «Лосевское» Кавказского района, АО им. Ленина Новокубанского района, АО «Надежда» Успенского района и АО «Нива» Тимашевского района. Результаты обобщенных исследований отражены в таблице 5.

Таблица 5 - Профилактическая эффективность каролина при послеродовых заболеваниях у коров в производственном опыте (М±т; п=1829) __

Патология Опытная группа Контрольная группа

Животных % Животных %

Задержание последа 162 8,8 315 17,2

Острый гнойно-катаральный эндометрит 397 21,7 643 35,1

Гипофункция яичников 437 23,8 621 33,9

Персистентное желтое тело 161 8,8 333 18,2

Продолжительность бесплодия, дней 95±2,1 108,5±2,5

Индекс оплодотворения 2,1 ±0,05 2,6±0,22

Как видно из данных, представленных в таблице, парентеральное введение каролина коровам в сухостойный и ранний послеотельный периоды оказывает положительное влияние на их воспроизводительную систему. В опытной группе коров отмечалось в 1,9 раза меньше задержаний последа, на 13,4% заболевших эндометритом, регистрировалось на 10,1% меньше случаев гипофункции яичников, на 9,4% - персистентных желтых тел, а также на 13,0 дней короче период бесплодия и на 0,5 -меньше индекс оплодотворения по сравнению с контрольной группой.

Разработка показаний к применению и изучение лечебно-профилактической эффективности карсела проводилась на коровах возраста 4-6 лет с удоем 3500-4200 кг молока. Опыт проводили в сравнительном аспекте с отдельными компонентами препарата карсел и интактными животными, при этом у отелившихся коров учитывали случаи задержания последа, появление послеродового эндометрита, мастита, функциональных расстройств половой сферы, а также длительность периода бесплодия. Для этого сформировали 4 группы по 15 коров-аналогов (по продуктивности, живой массе, времени отела). Животным первой опытной группы вводили препарат карсел в дозе 10 мл подкожно в нижнюю треть шеи в подогретом до 37°С виде за 30, 20 и 10 дней до предполагаемого отела. Второй группе коров аналогично вводили препарат каролин, третьей - препарат ДАФС-25 на рафинированном дезодорированном подсолнечном масле (3 мл) в дозе по 60 мг на одно введение. Четвертая группа коров служила интактным контролем, ей препараты не вводили. Проведя анализ результатов этого опыта, установили, что кар-сел профилактирует акушерско-гинекологические заболевания у коров. Так у животных, обработанных карселом, полностью отсутствовали случаи задержания последа, на 6,6-20% меньше коров заболело эндометритом, на 6,6-13,4% маститом, на 6,7% гипофункцией яичников и на 7 дней короче был период бесплодия, в сравнении с группами коров, обработанными препаратами каролин и ДАФС-25. А в сравнении с негативным контролем на 55,4% ниже была заболеваемость эндометритом, на 20,0% - маститом, на 26,7% - гипофункциональных состояний яичников, период бесплодия сократился на 14 дней.

В экспериментах по определению профилактической эффективности препаратов ликопина у коров опытных групп, в сравнении с контролем, меньше регистрировали: задержание последа - на 6,7-13,4%; эндометритов - на 20-26,7%; маститов -на 6,6-13,6%; на 13,3-20% случаев гипофункции яичников, на 14,7-19,5 дней короче была продолжительность бесплодия.

Таким образом, проведенные экспериментальные исследования, характеризующие специфическую активность препара-

тов каротина, показали, что эти композиции являются высокоэффективными средствами профилактики задержания последа, эндометрита, гипофункции яичников и мастита, а также сокращают период бесплодия у коров.

В ходе работы была проведена серия опытов по изучению влияния каролина на супоросных свиноматок, а через их организм на новорожденных поросят (таблица 6). Применение каролина в дозе 20 мл на животного снижает частоту возникновения синдрома ММА, в контрольной группе он зарегистрирован у 2 свиноматок, заболеваемость в опытной группе отсутствует.

Таблица 6 - Влияние каролина на свиноматок, сохранность приплода и его рост (М±т; п=12)

Показатель Группы Разница с контролем,%

опыт контроль

Количество свиноматок 12 12 -

Синдром ММА у свиноматок - 2 -

Сохранность поросят, % При рождении 100 100

На 21-й день 85,2 83,16 2,04

На 30-й день 81,48 80,19 1,29

Масса тела поросенка, кг При рождении 1,14± 0,34 1,07 ±0,4 6,5

На 21-й день 5,81± 0,51 5,52± 0,59 5,0

На 30-й день 8,48± 0,25 8,3± 0,51 2,17

Каролин оказывает благоприятное влияние на свиноматок, а через их организм - и на приплод. Поросята, рожденные животными, получавшими каролин, росли интенсивнее, чем в контроле (разница в массе тела при рождении - 6,5%, на 21-й день - 5,0%, на 30-й день - 2,17%). Выше была и сохранность в 21-й день - на 2,04%, в 30-й день - на 1,29%.

Изучение ростостимулирующего действия каролина позволило сделать вывод, что препарат способствует активизации роста и развития животных, повышению их продуктивности и сохранности. Введение каролина поросятам-отъемышам повышает их сохранность на 7,5%. Прирост массы тела поросят увеличивается при дозе 5 мл/жив на 2,05%, при дозе 7 мл - на 5,7%.

Эффективность каролина была испытана в птицеводстве на курах-несушках и на цыплятах.

Ежедневное скармливание каролина курам-несушкам из расчета 2 л/т корма позволяет получить яйцо с хорошими товарными качествами, обеспечить потребность птицы в витамине А и каротиноидах, что, в свою очередь, оказывает положительное влияние на оплодотворяемость яиц и выводимость цыплят.

При скармливании каролина средний вес яйца увеличился на 1,3%. Отмечено повышение содержания каротиноидов в желтке яиц от 10,1% до 16,9%, что оказывает положительное влияние на оплодотворяемость яиц, результаты инкубации и сохранность цыплят. Показатели инкубации для яиц, полученных от кур опытной группы, превышали данные контроля по выводимости до 7% сохранности на 1,7%, по массе суточных цыплят на-1,55%.

При добавлении к основному рациону кур-несушек каролина в течение месяца из расчета 2 л на 1 т корма, а в последующие 15 дней - 1,5 л/т в динамике определяли уровень каротиноидов и витамина А в желтке. Результаты исследований свидетельствуют о том, что добавление в рацион кур-несушек препарата бета-каротина способствует увеличению в желтке яиц уровня каротиноидов в среднем на 22,6%, витамина А - на 17,8%. Интенсивность окраски желтков возросла с 6 до 8 баллов по шкале «БАСФ» (рисунок 1).

Препарат оказал позитивное влияние также на продуктивность птицы: в опытной группе в сравнении с контролем яйценоскость была выше на 2,5%.

Опыт по изучению эффективности ликовита проводился на племенных курах-несушках кросса «Ломанн-Браун» в возрасте 160 дней. Куры контрольной группы получали основной рацион, представленный комбикормом заводского изготовления с добавкой стандартного минерально-витаминного премикса П 12, включающего витамин А по нормам ВНИТИП. Несушкам опытной группы дополнительно вводился ликовит из расчета 5 кг/т корма.

Рисунок 1 - Влияние каролина на пигментацию желтков (цвет по шкале «БАСФ» в баллах) по периодам опыта (через каждые 15 Дней)

Результаты исследований показывают, что препарат, содержащий ликопин, может успешно применяться в рационах племенной птицы для улучшения качественных показателей и товарного вида яиц, так как концентрация каротиноидов в желтке при введении ликовита повысилась в опытной группе на 18,6%. При этом по шкале Рош-веера цвет желтков яиц опытной группы при содержании каротиноидов 18-20 мкг/г соответствовал номерам 8-10, а в группе сравнения номерам 6-7.

При добавлении каролина в рацион цыплят-бройлеров в зависимости от дозировки (3 и 5 л/кг корма) масса птицы увеличился на 3,59% и 5,6%, а сохранность на 2,01% и 3,69% соответственно. Содержание каротина в печени повысилось на 6,2-7,4 мкг, а витамина А на 93,9-90,4 мкг.

При использовании каролина курам с клиническими признаками гиповитаминоза А отмечалось улучшение их общего состояния, Признаки болезни постепенно ослабевали и исчезали, при этом у птицы опытной группы был выше процент сохранности (разница с контролем на 20-е сутки составила 5,45%, на 40-е сутки - 15,46%) и интенсивность яйцекладки (на 20-е сутки - 19,97%, на 40-е сутки - 21,19%). При лабораторных исследованиях у кур, подвергнутых лечению, по сравнению с не

леченными (контрольными) происходит увеличение содержания общего белка, сахара, каротина, витамина А в сыворотке крови, а также витаминов - в печени и яйце.

Терапевтическую эффективность каротиноидов изучали при лечении гипотрофии у поросят. Назначение препарата каротина больным животным способствовало улучшению их общего состояния и аппетита, быстрому исчезновению клинических признаков заболевания, нормализации функций пораженных систем и органов, снижению процента заболеваемости и отхода. Каролин заметно ускорил время достижения животными убойных кондиций, у опытных животных оно составило 252 дня, у контрольных - 425 дней (у нормотрофиков - 221 день).

В экспериментах по определению эффективности карсе-ла при хронических микотоксикозах птицы была установлена хорошая детоксикационная активность препарата при данной патологии, что проявилось в увеличении сохранности птицы в опытной группе на 4,5% в сравнении с контролем, разница по средней массе цыплят составила 150 г.

Добавка карсела нивелировала клиническое проявление микотоксикозов, при патологоанатомическом вскрытии погибшей птицы контрольной группы отмечены признаки токсикоза (неравномерное окрашивание и дряблость печени, увеличение размеров почек, печени, желчного пузыря). В группе, где применялся препарат, резко снизилось количество изменений в печени и желчном пузыре (2 случая против 17 в контроле). Масса центральных и периферических лимфоидных органов (фабри-циева сумка, селезенка), у цыплят опытной группы выше, чем в контроле, в 1,5 и 2 раза соответственно. Исследования сыворотки крови в конце опыта показали, что введение в рацион карсела положительно влияло на обменные процессы в организме птицы. В сравнении с показателями контрольной группы у птицы, получавшей карсел, была выше концентрация следующих показателей: каротиноидов и ретинола - в среднем в 2 раза, общего белка - на 30,3%, глюкозы - на 16,8%, кальция - на 26,8% и фосфора - на 48,2%; при этом снизилось количество мочевой кисло-

ты на 42,7% и активность трансфераз - в 1,8 раза (АсАт) и 1,2 раза (АлАт) - до нормальных физиологических значений. Кар-сел оказал влияние на оптимизацию фракционного состава белка, так в опытной группе протеинограмма соответствовала показателям здоровой птицы, а в контроле дисбаланс стал более выраженным.

Изучение адаптогенного действия карсела при транспортном стрессе проводилось на курах-несушках. Птица первой группы была контрольной, а вторая группа получала карсел в дозе 10 мл/кг корма в течение 10 дней перед транспортировкой и 10 дней после нее. Кровь для лабораторных исследований брали у 10-ти кур из каждой группы: перед транспортировкой, через сутки и 10 дней после нее.

В результате установлено, что применение препарата препятствовало увеличению содержания продуктов перекисного окисления липидов после транспортировки. Так, спустя сутки после перевозки концентрация конъюгированных диенов в контрольной группе возросла на 14,5%, а в опытной - на 7,6% (разница 6,9%). Содержание малонового диальдегида у птицы контрольной группы сразу после перевозки увеличилось на 12,8%, а у кур опытной - на 2,9% (разница 9,9%) по сравнению с исходными данными. На концентрацию Шиффовых оснований препарат повлиял следующим образом: через сутки после стресс-воздействия в контрольной группе по сравнению с фоновыми показателями достоверных изменений не было, но у птицы, получавшей добавку карсела, их уровень снизился на 15,3%. Через 10 дней после транспортировки содержание первичных продуктов перекисного окисления липидов опустилось ниже фонового уровня в опытной группе, аналогичные изменения прослеживаются в динамике других продуктов ПОЛ. Так, при заключительном исследовании в контроле концентрации МДА и ОШ возросли на 26,8 и 29,6% соответственно в сравнении с фоном, а в опытной группе снизились на 11,1 и 23% при аналогичном сравнении.

Влияние карсела на ферменты системы антиоксидантной защиты организма птицы при транспортном стрессе проявилось

в том, что у кур контрольной группы через сутки после перевозки активность супероксидцисмутазы снижается на 29,7%, а у опытной группы - на 12,3% от фоновых значений. К концу исследований этот показатель в контроле практически вернулся к исходному уровню, а у птицы получавшей карсел даже превзошел его на 13,9%. Через сутки после стресс-воздействия активность глутатионпероксидазы снижается у интактной птицы на 17,5%, в опытной группе на 3,6%. Спустя 10 дней после перевозки в контрольной группе ее уровень практически нормализовался, а в группе с добавкой карсела повысился на 9,9% от исходного.

Таким образом, карсел предупреждает отрицательные последствия стресса и способствует сохранению продуктивного здоровья птицы.

Изучение активности препаратов каротина на моделях токсического поражения печени тетрахлоридом углерода и ге-лиотрином проводилось на белых крысах. Модель токсического гепатита получали путем введения крысам ССЦ в виде 50%-ного масляного раствора подкожно в дозе 0,4 мл/кг массы тела, 1 раз в сутки в течение 4 дней подряд. Препараты каролин и карсел вводили ежедневно, в течение 4 дней за 2 ч до введения CCI4, начиная с первого дня его введения, внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 5 мл/кг массы тела.

Установлено, что при введении каролина на фоне поражения тетрахлоридом углерода наблюдается тенденция к снижению содержания диеновых конъюгатов в печени, в то время как карсел вызывал уменьшение этих веществ почти в 2 раза в сравнении с позитивным контролем. Острая гелиотриновая интоксикация сопровождалась повышением содержания продуктов липопероксидации, введение же каротиноидов снижало уровень малонового диальдегида в 1,4-1,6 раз. Терапия препаратами каротина сопровождалась регрессом биохимических нарушений, вызванных гелиотрином и ССЦ, активность AST в крови была ниже в 1,6-1,5 раза, ALT в 1,6-1,7 раза в сравнении с таковыми у животных контрольных групп, но оставалась выше показателей интактных крыс.

Определение гепатопротекторных свойств ликовита выполнялось на 30 крысах-самцах, разделенных на 3 группы, (в качестве гепатотропного токсиканта использовали тетрахлорида углерод). Первую группу составили здоровые животные, служащие интактным биоконтролем. Животным второй и третьей групп вводили подкожно CCU в течение 10 дней из расчета 0,5 мл/кг массы тела. После этого животным 3-й группы проведен 20-дневный курс терапии ликовитом из расчета 5 г/кг массы тела ежедневно, а крысы 2-й группы служили позитивным контролем. Через сутки после последнего введения препарата крыс декапитировали под эфирным наркозом.

Основными критериями оценки состояния детоксикаци-онной функции печени являлись: поведенческий статус и выживаемость на протяжении всего опыта; уровень среднемолеку-лярных пептидов в плазме крови. Помимо этого, проводили измерение активности ALT и AST, а также определяли концентрацию общего белка и содержание продуктов перекисного окисления липидов - диеновых конъюгатов и малонового диальде-гида в сыворотке крови.

Введение ССЦ вызвало гибель 30% животных. Все выжившие крысы были малоактивными, окраска шерсти приобрела желтушный оттенок, потеря массы тела у них достигла 20%. В отличие от них, животные из группы, получавшей ликовит, были подвижны, шерсть приобрела первоначальный блеск и окраску. Летальность в этой группе была в период моделирования заболевания, а с началом приема препарата не наблюдалась.

Биохимические показатели крови свидетельствовали о значительных нарушениях метаболических процессов в печени при интоксикации ССЦ (возросла активность AST и ALT, содержание билирубина, снижение концентрации белка с одновременным увеличением среднемолекулярных пептидов и продуктов перекисного окисления липидов). Терапия ликовитом сопровождалась снижением активности AST и ALT в среднем на 64%. Препарат препятствовал развитию гипербилирубине-мии: концентрация общего билирубина снизилась на 20%, а непрямого в 1,8 раз. Под влиянием каротиноидов практически вое-

станавливался уровень общего белка до параметров нормы. В то время как среднемолекулярные пептиды, являющиеся универсальными факторами интоксикации, снизились в 1,4 раза, но были выше аналогичного показателя в группе интактных животных. Применение ликовита достоверно снижало уровень малонового диальдегида на 20,3% и диеновых конъюгатов на 19,4%. Полученные данные свидетельствует о целесообразности применения каротиноидов в качестве гепатопротекторов.

Препараты каротина были эффективны при гепатозе коров. Моделируя эксперимент, подбирали животных высокоудойных по предыдущей лактации, с преобладанием белка и недостатком углеводов в рационе, у коров присутствовали клинические признаки патологии печени: матовость и выпадение волосяного покрова, наличие алопеций, рассасывание последних хвостовых позвонков, гипотония рубца, у ряда животных - увеличение перкуторных границ печени. При фоновом биохимическом анализе функциональное нарушение печени подтвердилось следующими показателями:

- гипопротеинемией (снижение уровня общего белка до 61,3 г/л против 79-89 г/л в норме);

- дисбалансом в протеинограммах, который проявился в

снижении альбуминовой и повышении

Р- и у-глобулиновых фракций;

- низким уровнем мочевины (2,28 мМ/л против 3,3 мМ/л в норме);

- положительной тимоловой пробой;

- повышенной активностью аминотрансфераз;

- низкой концентрацией витаминов.

Сухостойные коровы (п=30) были распределены на 3 группы: I - группа контрольная; животные 2 группы получали каролин из расчета 15 мл на животное, подкожно, через каждые 5 дней; коровам 3 группы вводили карсел по аналогичной схеме.

Пробы крови отбирали у 5 коров из каждой группы в начале и в конце эксперимента (за 3-5 до родов). Эффективность действия препаратов оценивали по клиническому состоянию ко-

ров, случаям вынужденного убоя, данным морфологического и биохимического исследований крови.

Под влиянием препаратов бета-каротина в организме коров произошли следующие изменения: шерстный покров стал более прочным и блестящим, облысевшие участки частично заросли, у трех коров из пяти перкуторные границы печени пришли в норму. О репаративных процессах в печени свидетельствовали позитивные изменения в биохимических показателях опытных животных. Установлено, что содержание общего белка у коров опытных групп в сравнении с контролем было выше на 22,2-26,1%. Стабилизировался его фракционный состав, протеи-нограммы коров опытных групп соответствуют показателям здоровым животным. О нормализации белоксинтезирующей функции печени, также свидетельствует увеличение концентрации мочевины в 1,4 и 1,6 раз в крови опытных животных. Репа-ративный эффект препаратов проявился и в снижении активности индикаторных ферментов. Так, к концу эксперимента концентрация ALT составляла 0,58-0,44 мМ/ч.л против 0,96 ммоль/ч.л в контроле, a AST 0,75-0,64 мМ/ч.л против 1,18 мМ/ч.л. В то время как выраженного действия на экскреторные ферменты (ЩФ) препараты не оказали, вероятно, это связано с тем, что высокий уровень щелочной фосфатазы при фоновых исследованиях был, скорее всего, связан не с синдромом холе-стаза, а с нарушениями в костной ткани.

При анализе витаминного обмена проявилось позитивное влияние каролина и карсела на организм коров. Так в сыворотке крови возросли концентрации каротина в 1,6-1,7 раза, ретинола в 1,2-1,3 раза, токоферолов в 1,4-1,3 раза в сравнении с контролем.

Следовательно, каротиноиды оказывают положительное влияние на функциональную активность печени, что проявляется в нормализации ее белоксинтезирующей, пигменто- и .фер-ментообразующей функций. Карсел обладает более выраженными гепатопротекторными свойствами.

При использовании картока в качестве средства патогенетической терапии при постнатальных болезнях телят установ-

лено, что введенный в комплекс терапевтических мероприятий, он повышает лечебную эффективность основного лечения при диспепсии и бронхопневмонии. Телята опытных групп, которым вводился карток, выздоравливали в среднем на 2-3 дня быстрее, чем контрольные.

В ряде опытов нами проводились клинические наблюдения за состоянием телят, полученных от животных, которым вводили каротиноиды. Поскольку биологический комплекс «мать-плод-новорожденный» следует рассматривать как единую систему при разработке рациональных методов профилактики и борьбы с неонатальными болезнями, так как существует прямая зависимость между состоянием обмена веществ, уровнем естественной резистентности организма коров, внутриутробным развитием плода, состоянием здоровья и сохранностью новорожденных телят.

По результатам исследований можно сделать следующие выводы: телята из группы, матери которых получали каротино-идные добавки, меньше болели диспепсией на 18,6-30% и бронхопневмонией на 14,5-22,3%, наилучший результат получен в группе с добавкой ликовита. Животные из контрольной группы более тяжело переносили заболевания.

Результаты опытов по изучению влияния каротиноидов на организм животных и птицы свидетельствуют о необходимости использования препаратов на их основе в качестве эффективных средств этиотропной и патогенетической терапии при ряде заболеваний крупного рогатого скота, свиней, птиц.

4. ВЫВОДЫ

1. Каролин, карсел, карток, ликолин и ликовит являются новыми отечественными препаратами каротина. Содержание в них бета-каротина составляет 0,18%, а ликопина - от 0,01 до 0,3%. Контроль качественных показателей препаратов осуществляется в соответствии с утвержденными техническими условиями по органолептическим и физико-химическим показате-

лям, характеризующим их внешний вид, запах и вкус, массовую долю действующих веществ, кислотное и перекисное числа, стерильность и безвредность.

2. Препараты каротина малотоксичны для теплокровных животных и птиц (как в острых, так и в хронических опытах). Каролин, карсел, карток, ликолин и ликовит обладают слабой острой токсичностью, не вызывая выраженного токсикоза в дозе до 36 г/кг массы тела, и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относятся к 4-му классу опасности (незначительно опасные вещества). Длительное применение препаратов в дозах, превышающих лечебно-профилактические в 3-5 раз, не влияет отрицательно на общее состояние животных и другие показатели их клинического статуса, не оказывает вредного местного действия, существенно не влияет на морфо-биохимические показатели крови, не проявляет отрицательного влияния на основные виды обмена, не нарушает функций и структуру жизненно важных систем, органов и тканей, не изменяет вкусовых и других качеств мяса.

3. Фармакокинетика бета-каротина характеризуется увеличением содержания в крови витамина А (на 50%) и каротина (на 60-76%) и сохранением уровня этих веществ в течение 10 дней после последнего введения: в печени на 39,6% и 61,3%, в желтке яиц - на 40,7% и 48,2% соответственно.

4. Фармакодинамика каротиноидов характеризуется активизацией основных видов обмена веществ, в том числе, белкового - (за счет повышения уровня общего белка до 33,1% и оптимизации его фракционного состава), углеводного - (увеличение концентрации глюкозы до 86%), витаминного - (повышение уровня каротиноидов, витаминов А и Е), минерального - (при возрастании концентрации цинка на 14,9% и железа на 39,3%), а также стимуляции эритропоэза.

Препараты способствуют увеличению антиоксидантного потенциала организма за счет увеличения активности ферментов (глутатионпероксидазы на 4,6-22,3%; глутатионредуктазы - на 4,4%; супероксиддисмутазы - на 4,5-14,3% и каталазы - на 4,812,2%) при достоверном снижении всех продуктов липоперок-

сидации. Применение каротиноидов повышает естественную резистентность животных за счет увеличения процента активных фагоцитов, а также их поглотительной и переваривающей способности, бактерицидной и лизоцимной активности крови, уровня класса А и содержания активных форм Т- и В-лимфоцитов.

5. Каролин обладает выраженной профилактической активностью при послеродовых патологиях у коров. Под влиянием препарата, введенного внутримышечно 2-3 раза до и после отела с интервалом 7-10 дней, уменьшается заболеваемость коров задержанием последа (на 14,5-17,2%), послеродовым эндометритом (22,4-35,1%), гипофункцией яичников (на 8,8-33,9%), а также сокращается период бесплодия на 13-20 дней. У свиноматок препарат бета-каротина предупреждает развитие синдрома мет-рит-мастит-агалактия.

Каролин эффективен при профилактике и терапии А-гиповитаминоза животных и птицы, а также при гипотрофии поросят. Под влиянием препарата ослабляются и исчезают признаки болезни, возрастает темп прироста массы тела, оптимизируется иммуно-биохимический статус организма.

При наружном применении каролина проявляется его ра-нозаживляющая активность, он стимулирует регенерацию кожи, при этом наблюдается значительное уменьшение гиперкератоза тканей.

6. Карсел оказывает профилактическое действие при послеродовых заболеваниях коров. Так, у животных, которым парентерально вводили карсел в период сухостоя снижалось количество задержаний последа от 26,6 до 100%, при этом меньше регистрировалось эндометритов - на 6,6-55,4%, гипофункции яичников - на 10,1-26,7%, мастита - на 20%, период бесплодия сократился на 14-16,7 дней.

Карсел предупреждает возникновение стрессовой дезадаптации при транспортировке птицы и способствует сохранению ее продуктивного здоровья.

В экспериментах выявлена хорошая эффективность препарата при хронических смешанных микотоксикозах, что про-

явилось в увеличении сохранности птицы в опытной группе на 4,5%, ослаблению и исчезновению клинических признаков заболевания. При этом в крови происходило увеличение содержания каротиноидов и ретинола в среднем в 2 раза, общего белка -на 30,3%, глюкозы - на 16,8%, кальция - на 26,8% и фосфора -на 48,2% и снижение активности индикаторных ферментов до значений нормы.

Препараты каротина оказывают положительное влияние на функциональную активность печени, что проявляется в нормализации ее белоксинтезирующей, пигменто- и ферментообра-зующей функции.

7. Использование картока в качестве средства патогенетической терапии при постнатальных болезнях телят показало, что, введенный в комплекс терапевтических мероприятий, он повышает эффективность основного лечения при диспепсии и бронхопневмонии. Телята, которым вводился карток, выздоравливали в среднем на 2-3 дня быстрее, чем животные контрольной группы.

8. Препараты ликопина являются высокоэффективными средствами профилактики послеродовой патологии у коров. У животных опытных групп в сравнении с контролем меньше регистрировали: задержание последа - на 6,7-13,4%, эндометритов - на 20-26,7%; маститов - на 6,6-13,6%; случаев гипофункции яичников - на 13,3-20% и продолжительность бесплодия была -на 14,7-19,5 дней короче.

Ликовит проявил значительную терапевтическую эффективность при экспериментальном поражении печени, что свидетельствует о целесообразности его применения в качестве гепа-топротектора.

9. Применение каротиноидов способствует лучшему росту животных и птиц, повышая их сохранность. Введение в рацион птицы изучаемых препаратов позволяет получить яйцо с хорошими товарными качествами, обеспечить потребность кур в витамине А и каротине, что, в свою очередь, оказывает положительное влияние на оплодотворяемость яиц и выводимость цыплят.

10. При разработке рациональных методов профилактики и борьбы с неонатальными болезнями рекомендуется животным в последний триместр беременности применять каротиноиды, так как новорожденные из групп, матери которых получали ка-ротинсодержащие препараты, на 18,6-30% меньше болели диспепсией и на 14,5-22,3% - бронхопневмонией.

11. Материалы по фармако-токсикологической оценке и лечебно-профилактической эффективности каролина, карсела и картока рассмотрены Советом по ветеринарным препаратам Департамента ветеринарии Российской Федерации и рекомендованы к применению в ветеринарной практике. Их производство налажено в заводских условиях ЗАО «Роскарфарм». На ликолин и ликовит разработана научно-техническая документация, опытные партии препаратов выпускаются ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург).

Широкими производственными испытаниями, проведенными на территории Краснодарского края, Ульяновской, Кировской, Пензенской, Саратовской, Самарской, Нижегородской и Вологодской областей, а также в Мордовии, Чувашии, Татарстане подтверждены экспериментальные данные о биологической и лечебно-профилактической эффективности препаратов каротина, а также об экономической целесообразности их применения в ветеринарии. Так, эффективность составляет на 1 руб. затрат от 3,8 до 10 руб. прибыли.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Для практического применения в качестве лечебно-профилактических средств рекомендуется применять каролин, карсел, карток, ликолин и ликовит при послеродовых заболеваниях, гиповитаминозе А, гипотрофии, микотоксикозах, стрессовых нагрузках, для нормализации иммуно-биохимического статуса и функции печени у животных, а также повышения жизнеспособности приплода (согласно инструкций по их применению).

Результаты исследований нашли отражение в документах, утвержденных (согласованных) Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации: Наставление по применению препарата каролин в ветеринарии (№ 13-4-03/0014 от 21.02.01); Временное наставление по применению препарата карсел в ветеринарии (№ 13-4-03/0019 от 21.02.01); Временное наставление по применению препарата карток в ветеринарии (№ 13-4-03/0018 от 21.02.01); Методические рекомендации по применению препаратов каротина в ветеринарии и животноводстве (утверждены Академиком-секретарем РАСХН A.M. Смирновым 22 сентября 2004 года); Методические рекомендации по болезням селеновой недостаточности у животных и птиц (утверждены Академиком-секретарем РАСХН A.M. Смирновым 22 сентября 2004 года); Методические рекомендации по эффективным зооветеринарным технологиям повышения воспроизводства, сохранности и продуктивности животных (утверждены заместителем главы администрации Краснодарского края Н.П. Дьяченко 12 апреля 2005 года); Методические рекомендации по комплексной этиопатоге-нетической фармакотерапии и профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных в условиях Краснодарского края (утверждены начальником управления Федеральной службы по ветеринарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея 11 ноября 2005 года).

Обеспечено промышленное производство препаратов в ЗАО «Роскарфарм» (г. Краснодар) и ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург).

список опубликованных работ

1.Антипов В.А., Кузьминова Е.В., Уразаев Д.Н. Эффективность использования препарата «Каролин» //Материалы междунар. коорд. совещания «Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных».-Воронеж 1997.-С. 175-176.

2. Антипов В.А., Кузьминова Е.В., Уразаев Д.Н. Эффективность использования препарата каролин в свиноводстве //Материалы I междунар. симпоз. «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициоло-гии»: - Санкт-Петербург 2000.- С. 72-73.

3. Антипов В.А., Уразаев Д.Н., Кузьминова Е.В. Фармако-токсикологическая оценка препарата бета-каротина //Материалы науч.-практ. конф. «Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применения в ветеринарной практике»: - Ставрополь 2000.- С. 69 -70.

4. Антипов В.А, Уразаев Д.Н., Турченко А.Н., Кузьминова Е.В. Эффективность препарата карсел при лечении и профилактике послеродовых осложнений у коров //Вестник ветеринарии. - 2001.- №20.- С. 35-36.

5. Кузьминова Е.В. Эффективность применения препарата каролин в птицеводстве //Материалы Всеросс. науч.-практ. конф. «Студенты и аспиранты малому наукоемкому бизнесу»: Казань 2001.- С. 76

6. Антипов В.А., Турченко А.Н., Чащин A.B., Кузьминова Е.В., Уразаев Д.Н. Влияние каротина микробиологического на воспроизводительную функцию коров //Материалы науч.-практ. конф. «Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии»: - Краснодар 2001. - Т.2 - С. 89.

7. Антипов В.А., Турченко А.Н., Кузьминова Е.В., Казарян Р.В., Уразаев Д.Н. Изучение эффективности препарата каролин для лечения и профилактики послеродовых осложнений у коров //Материалы науч.-практ. конф. «Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии»: -Краснодар 2001.-Т.2.-С. 12-13.

8. Антипов В.А., Кузьминова Е.В., Уразаев Д.Н. Токсикологическая оценка препарата «Каролин» //Материалы науч.-практ. конф. «Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии»: - Краснодар 2001.- Т.1.- С. 39-40.

9. Турченко А.Н., Кудинова С.П., Токарев В.В., Лимаренко A.A., Попов Ю.И., Кузьминова Е.В. Применение каролина для профилактики акушер-ско-гинекологических заболеваний у коров //Материалы науч.-практ. конф. «Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии»: -Краснодар 2001.- Т.1.-С. 136-137.

10. Уразаев Д.Н., Антипов В.А., Кузьминова Е.В. Результаты изучения каролина в свиноводстве//Материалы науч.-произв. конф. по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии: - Казань 2001.- Ч.2.- С. 188-189.

11. Антипов В.А., Уразаев Д.Н., Кузьминова Е.В. Использование препаратов бета-каротина в животноводстве и ветеринарии: Брошюра.- Краснодар: КубГАУ 2001.-118 с.

12. Уразаев Д.Н., Антипов В.А., Кузьминова Е.В. Эффективность препарата карток при лечении и профилактике послеродовых осложнений у коров //Материалы науч.-практ конф. «Новые фармакологические средства ветеринарии»:- Санкт-Петербург 2001.- С. 40-41.

13. Уразаев Д.Н., Антипов В.А., Кузьминова Е.В. Токсикологическая характеристика картока //Материалы науч.-практ конф, «Новые фармакологические средства ветеринарии»:- Санкт-Петербург 2001- С. 115.

14. Антипов В.А., Турченко А.Н., Кузьминова Е.В., Уразаев Д.Н. Результаты изучения эффективности каролина на курах-несушках //Материалы науч.-практ. конф. «Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии»: - Краснодар 2001.- Т.1- С. 38-39.

15. Антипов В.А., Турченко А.Н., Кузьминова Е.В., Уразаев Д.Н. Токсикологическая оценка препаратов каротина с витамином Е и каротина с селеном //Материалы науч.-практ. конф. «Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии»:- Краснодар 2001.- Т.1-С. 36-37.

16. Уразаев Д.Н., Антипов В.А., Кузьминова Е.В. Оценка токсичности препарата каротина//Сб.науч.тр. ВГНКИ. - М., 2001,- Т.63, С. 214-217.

17. Кузьминова Е.В. Изучение ростостимулирующего действия препаратов ликопиновый шрот и ликопиновое масло в свиноводстве //Материалы науч.-практ. конф. «Состояние и перспективы внедрения достижений ветеринарной науки и практики в сельскохозяйственное производство»:- Вологда

2002.- С. 87-88.

18. Антипов В.А., Турченко А.Н., Кузьминова Е.В. Применение бета-каротина при воспроизводстве животных и птиц //Информационный обзор. Краснодар.- 2002.- 55 с.

19. Кузьминова Е.В. Изучение безвредности препаратов ликопиновый шрот и ликопиновое масло //Материалы науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях»:- Воронеж 2002. -С. 344-345.

20. Антипов В.А., Уразаев Д.Н., Кузьминова Е.В. Изучение эффективности каротинсодержащего препарата для лечения и профилактики послеродовых осложнений у коров //Ветеринарная практика:- Санкт-Петербург

2003.-№1.- С. 21-25.

21. Антипов В.А., Турченко А.Н., Кузьминова Е.В., Уразаев Д.Н. Применение препаратов каротина в ветеринарии и животноводстве //Методические рекомендации: - Краснодар 2003.-16 с.

22. Кузьминова Е.В., Антипов В.А., Красюков Д.В. Эффективность витатона в свиноводстве //Материалы науч.-практ. конф. «Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний животных»:- Воронеж 2004. - С.202 -205.

23. Кузьминова Е.В., Антипов В.А., Красюков Д.В. Эффективность витатона в птицеводстве //Матер, международной научно-практ. конф. «Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний животных»,-Воронеж.- 2004,- С. 205-207.

24. Кузьминова Е.В., Антипов В.А., Семененко М.П.. Изучение токсических свойств препаратов ß-каротина //Материалы науч.-практ. конф. «Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний животных»: - Воронеж 2004,- С. 207-210.

25. Кутищева Т.Г., Антипов В.А., Васильев В.Ф., Кузьминова Е.В. Влияние Т-2 токсина и афлатоксина Bi на организм птицы //Материалы международной науч.-практ. конф. «Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний животных»:- Воронеж 2004.- С. 476-471.

26. Семененко М.П., Басанкин A.B., Кузьминова Е.В. Влияние биологически активных препаратов на рост и развитие молодняка телят //Материалы Всероссийской науч.-практ. конф. «Производство пищевых продуктов в соответствии с требованиями концепции здорового питания и другие вопросы»: - Волгоград: РПК «Политехник» 2004.- С. 209211.

27. Антипов В.А., Меньшенин А.Н, Турченко А.Н., Кузьминова Е.В. Эффективные зооветеринарные технологии по повышению воспроизводства, сохранности и продуктивности животных //Методические указания: -Краснодар 2005.- 79 с.

28. Антипов В.А., Шипицын А.Г., Басова Н.Ю., Кузьминова Е.В. и др. Комплексная этиопатогенетическая фармакотерапия и профилактика болезней молодняка сельскохозяйственных животных в условиях Краснодарского края //Методические указания:- Краснодар 2005.- 24 с.

29. Антипов В.А., Турченко А.Н., Кузьминова Е.В. Применение препаратов каротина в ветеринарии и животноводстве //Методические рекомендации: - Москва 2005.- 16 с.

30. Антипов В.А., Турченко А.Н., Васильев В.Ф. Кузьминова Е.В. Болезни селеновой недостаточности у животных и птиц //Методические рекомендации:- Москва 2005,-32 с.

31. Кузьминова Е.В., Семененко М.П., Кудинова С.П. Биологически активные препараты в животноводстве //Материалы III междунар. науч.-практ. конф. «Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России»:-Дубровицы 2005.- С. 54-55.

32. Кузьминова Е.В., Антипов В.А., Кудинова С.П. Фармакологические эффекты каротинсодержащих препаратов //Материалы Всерос. науч.-практ. конф. «Совершенствование технологий производства и переработки продукции животноводства»:- Волгоград: РПК «Политехник» 2005.- С. 391394.

33. Кузьминова Е.В. Применение карсела в птицеводстве //Материалы науч.-практ. конф. «Научное обеспечение агропромышленного комплекса»:-Краснодар: ГАУ 2005.-С. 213-214.

34. Кузьминова Е.В., Жолобова И.С., Зафириди А.Г. Нормализация функции печени у крупного рогатого скота //Ветеринарный консультант. -Москва.- 2006.- С.8-9.

35. Антипов В.А., Турченко А.Н., Васильев В.Ф., Самойлов B.C., Ка-зарян Р.В., Кузьминова Е.В., Полищук J1.B. Бета-каротин: значение для животных и птиц, их воспроизводства и продуктивности //Краснодар 2006.- 91с.

36. Кузьминова Е.В., Соловьев B.C. Эффективность каротиноидного препарата при откорме свиней //Труды Кубанского аграрного университета.-Краснодар 2006.- С. 283-284.

37. Кузьминова Е.В., Семененко М.П., Трошина А.Н., Кудинова С.П. К вопросу витаминного питания птицы //Материалы науч.-практ. конф, «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях»:- Краснодар 2006.- С. 297-298.

38. Кузьминова Е.В., Семененко М.П., Ермакова Т.Н. Применение ан-тиоксидантов в птицеводстве //Материалы науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях»:- Краснодар 2006.- С. 299302.

39. Кузьминова Е.В. Влияние комбинации бета-каротина и селена на обмен веществ сухостойных коров //Материалы науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях»:- Краснодар 2006,-С. 302-304.

40. Семененко М.П., Кузьминова Е.В. Сравнительная эффективность препаратов на основе природных минералов //Материалы науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях»:- Краснодар 2006.- С. 71-74.

41. Кузьминова Е.В., Жолобова И.С., Зафириди А.Г. Нормализация функции печени у крупного рогатого скота //Ветеринарная патология.-Москва 2006.- №2 (17).- С. 140-141.

42. Семененко М., Кузьминова Е., Шипицын А.Г. Влияние препаратов карсел и моренит на биохимический статус скота //Молочное и мясное скотоводство.- Москва 2006.- №6.- С. 35-36.

43. Кузьминова Е.В., Антипов В.А. Перспективность каротинсодер-жащих препаратов в птицеводстве //Птицеводство.- Москва 2006.- №8.- С. 16.

44. Кузьминова Е.В., Семененко М.П., Антипов В.А. Карсел и моренит для профилактики послеродовой патологии у коров //Ветеринария.- Москва 2006.-№12.- С.38-41.

45. Кузьминова Е.В. Изучение токсических свойств препарата карсел //Труды Кубанского аграрного университета.- Краснодар 2006.- №3.- С. 155163.

Подписано в печать 30,03.2007 г. Формат 60x84

Бумага офсетная Офсетная печать

Печ.л. 1,5 Заказ №182 Тираж 100 экз.

Отпечатано в типографии КубГАУ 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Прогресс ветеринарной фармакологии обеспечивается постоянным поиском и созданием новых высокоэффективных и безопасных препаратов. Установлено, что на метаболизм и иммунную систему животных многие факторы окружающей среды несбалансированное кормление, стрессы различной этиологии действуют неблагоприятно. Это требует применения различных средств, которые позволяют ослабить негативное влияние неблагоприятных факторов (Антипов В.А., 2000; Шахов А.Г., Бузлама B.C., 1990; Папуниди К.Ф., Фролов А.В., Назаров В.Р., 2002; Аргунов М.Н, 2002). В связи с этим разработка, исследование и производство биологически активных препаратов для профилактики и лечения болезней, связанных с нарушением обмена веществ, а также средств стимуляции роста и продуктивности животных является актуальным направлением ветеринарной науки. В этом отношении перспективно использование каротина как вещества, выполняющего в организме целый ряд специфических и жизненно важных функций. Длительное время считалось, что его основная роль в биологических системах обусловлена превращением в витамин А, но в последние десятилетия установлено, что каротиноиды обладают антиоксидантными, адаптогенными, антиканцерогенными, радиопротекторными, антимутагенными и иммуномодулирующими свойствами, не связанными с их провитаминной активностью (Кузьмич Р.П., 2000; Холодова Ю.Д., Чаяло П.П., 1990; Чиркин А.А, Казарян Р.В., Поддубный Н.П., 1996; Плецитый К.Д., 1981; Сергеев А.Г., 1986; Букин Ю.В., 1995; Charleux J.L., 1996; Takatsuka N. et all., 1998). Вместе с тем в последние годы появились сведения о высокой биологической активности ликопина каротиноида, не способного превращаться в ретинол (Капитанов А.Б., 2004; Бекетова Н.А, 1998; Кравченко Л.В., Морозов В, 2003; Poulsen Н.Е., 1998). В вопросе применения каротиноидов наиболее перспективно использование фармакопейной субстанции бета-каротина, полученной микробиологическим синтезом из культуры гриба Blakeslea trispom диноваС.П., 1978; 1990). (Казарян Р.В., Ку- Препараты каротина достаточно широко применяются в здравоохранении, однако в ветеринарии и животноводстве их использование ограничено. Слабая изученность токсикологических свойств и особенностей фармакодинамики, отсутствие схем научно обоснованного применения каротиноидов в качестве лечебно-профилактических средств сдерживает их внедрение в животноводство и ветеринарию. Учитывая перспективность данной группы препаратов, мы в соответствии с требованиями к изучению лекарственных средств, рекомендуемых для применения в ветеринарной медицине, провели комплексные исследования по определению фармако- токсикологических свойств препаратов бета-каротина и ликопина, а также обосновали их применение в ветеринарии и животноводстве. ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Целью исследований явилась раз- работка, фармеко-токсикологическая оценка и научно-практическое обоснование использования препаратов бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ликовит) в практическом животноводстве, а также их внедрение в промышленное и сельскохозяйственное производство. В соответствии с поставленной целью решались следуюш;ие задачи: изучить физико-химические свойства препаратов, дать характеристику параметров и методов контроля их качества; дать токсикологическую оценку каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита; выявить основные фармакологические аспекты действия каротиноидных композиций; определить лечебно-профилактическую эффективность препаратов в различных показаниях; разработать нормативную документацию по применению и контролю качества каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита. НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые изучены фармако- токсикологические свойства новых препаратов из группы каротиноидов бета-каротина и ликопина, полученных микробиологическим синтезом из культуры гриба Blakeslea trispora. Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность их применения для оптимизации обменных процессов организма, увеличения его антиоксидантной защиты и неспецифической резистентности. Установлен высокий уровень биологического действия и их лечебно-профилактической эффективности при гиповитаминозе А, послеродовых заболеваниях, гипотрофии, микотоксикозах и др. Научная новизна исследований защищена дачу патентов РФ. ПРАКТИЧЕСКАЯ шестью решениями на вы- ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработана и внедрена в произ- водство серия препаратов бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ликовит) для стимуляции продуктивности и нормализации обменных процессов, повышения устойчивости животных к заболеваниям, обладающих высокой лечебно-профилактической эффективностью при ряде патологий крупного рогатого скота, свиней и птицы. Разработана нормативная документация (пять технических условий и три наставления по применению), определяющая условия производства и применения препаратов, требования к качеству и методам контроля, утвержденная в установленном порядке вышестоящими структурами. ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. Результаты исследований нашли отражение в документах, утвержденных (согласованных) Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации: каролин Технические условия 9141-003-41341380-01; Наставление по применению препарата каролин в ветеринарии Ш 13-4-03/0014 от 21.02.01; карсел Технические условия 9141-003-41341380-01; Временное наставление по применению препарата карсел в ветеринарии 13-4-03/0019 от 21.02.01; карток Технические условия на опытную партию 9141-00541341380-01; Временное наставление по применению препарата карток в ветеринарии 13-4-03/0018 от 21.02.01; ликолин Технические условия J b V 9283-029-05766117-01; ликовит Технические условия 9283-028- 05766117-01; Методические рекомендации по применению препаратов каротина в ветеринарии и животноводстве (утверждены Академиком-секретарем РАСХН А.М. Смирновым 22 сентября 2004 года); Методические рекомендации по эффективным зооветеринарным технологиям повышения воспроизводства, сохранности и продуктивности животных (утверждены заместителем главы администрации Краснодарского края Н.П. Дъяченко 12 апреля 2005 г.); Методические рекомендации по комплексной этиопатогенетической фармакотерапии и профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных в условиях Краснодарского края (утвер- ждены начальником управления Федеральной службы по ветеринарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея 11 ноября 2005 г.). Освоено промышленное производство препаратов в ЗАО «Роскар- фарм» (г, Краснодар) и ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург). АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты экспериментальных и клинических исследований, явившихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого Совета Краснодарского НИВИ 1996-2006 гг.; заседаниях кафедры фармакологии КГАУ 2000-2005 гг.; заседаниях Ветфармбиосовета 1996-2005 г.г.; на международных и Всероссийских научнопрактических конференциях в Москве, Краснодаре, Воронеже, Санкт- Петербурге, Казани и других городах в 1996-2006 гг. ПУБЛИКАЦИИ. ПО материалам диссертации опубликовано 45 научных работ, в том числе 1 монография, 2 брошюры, 5 методических рекомендаций. ОСНОВИЫЕ ПОЛОЖЕИИЯДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ: физико-химические свойства и контроль каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита; токсикологическая оценка изучаемых препаратов бета-каротина и ликопина; фармакологические свойства каролина, карсела, картока, ликолина и ликовита; обоснование применения каротиноидов в качестве лечебно- профилактических средств при различных патологиях у животных и птиц; результаты внедрения препаратов в промышленное и сельскохозяйственное производство. ОБЪЕМ и стуктурА ДИССЕРТАЦИИ. ?абота изложена HSi 370 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из следуюш,их

6. выводы

1. Каролин, карсел, карток, ликолин и ликовит являются новыми отечественными препаратами каротина. Содержание в них бета-каротина составляет 0,18%, а ликопина - от 0,01 до 0,3%. Контроль качественных показателей препаратов осуществляется в соответствии с утвержденными техническими условиями по органолептическим и физико-химическим показателям, характеризующим их внешний вид, запах и вкус, массовую долю действующих веществ, кислотное и перекисное числа, стерильность и безвредность.

2. Препараты каротина малотоксичны для теплокровных животных и птиц, как в острых, так и в хронических опытах. Каролин, карсел, карток, ликолин и ликовит обладают слабой острой токсичностью, не вызывая выраженного токсикоза в дозировках до 36 г/кг массы тела и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относятся к 4-му классу опасности (незначительно опасные вещества). Длительное применение препаратов в дозах, превышающих лечебно-профилактические в 3-5 раз, не влияет отрицательно на общее состояние животных и другие показатели их клинического статуса, не оказывает вредного местного действия, существенно не влияет на морфо-биохимические показатели крови, не проявляет отрицательного влияния на основные виды обмена, не нарушает функций и структуру жизненно важных систем, органов и тканей, не изменяет вкусовых и других качеств мяса.

3. Фармакокинетика бета-каротина характеризуется увеличением содержания витамина А (на 50%) и каротина (на 60-76%») в крови и сохранении уровня этих веществ в течение 10 дней после последнего введения, в печени на 39,6% и 61,3%», в желтке яиц на 40,7% и 48,2% соответственно.

4. Фармакодинамика каротиноидов характеризуется активизацией основных видов обмена веществ, в том числе, белкового - за счет повышения уровня общего белка до 33,1%» и оптимизации его фракционного состава, углеводного (увеличение концентрации глюкозы до 86%»), витаминного (повышение уровней каротиноидов, витаминов А и Е), минерального (при возрастании концентрации цинка на 14,9% и железа на 39,3%), а также стимуляции эритро- и гемопоэза.

Препараты способствуют увеличению антиоксидантного потенциала организма за счет увеличения активности ферментов (глутатионперокси-дазы на 4,6-22,3%; глутатионредуктазы на 4,4%; супероксиддисмутазы на 4,5-14,3% и каталазы на 4,8-12,2%) при достоверном снижении всех продуктов липопероксидации. Применение каротиноидов повышает естественную резистентность животных за счет увеличения процента активных фагоцитов, а также их поглотительной и переваривающей способности, бактерицидной и лизоцимной активности крови, уровня класса А и содержания активных форм Т- и В-лимфоцитов.

5. Каролин обладает выраженной профилактической активностью при послеродовых патологиях у коров. Под влиянием препарата, введенного внутримышечно 2-3 раза до и после отела с интервалом 7-10 дней, уменьшается заболеваемость коров задержанием последа (на 14,5-17,2%), послеродовым эндометритом (22,4-35,1%), гипофункцией яичников (на 8,8-33,9%), а также сокращается период бесплодия на 13-20 дней. У свиноматок препарат бета-каротина предупреждает развитие синдрома метрит-мастит-агалактия.

Каролин эффективен при профилактике и терапии А-гиповитаминоза животных и птицы, а также при гипотрофии поросят. Под влиянием препарата ослабляются и исчезают признаки болезни, возрастает темп прироста массы тела, оптимизируется иммуно-биохимический статус организма.

При наружном применении каролина проявляется его ранозажив-ляющая активность, он стимулирует регенерацию кожи, при этом наблюдается значительное уменьшение гиперкератоза тканей.

6. Карсел оказывает профилактическое действие при послеродовых заболеваниях коров. Так у животных, которым парентерально вводили карсел в период сухостоя снижалось количество задержаний последа от 26,6 до 100%, при этом меньше регистрировалось эндометритов на 6,6-55,4%, гипофункции яичников на 10,1-26,7%, мастита на 20%, период бесплодия сократился на 14-16,7 дней.

Карсел предупреждает возникновение стрессовой дезадаптации при транспортировке птицы и способствует сохранению продуктивного здоровья птицы.

В экспериментах выявлена хорошая эффективность препарата при хронических смешанных микотоксикозах, что проявилось в увеличении сохранности птицы в опытной группе на 4,5%, ослаблению и исчезновению клинических признаков заболевания. При этом в крови происходило увеличение каротиноидов и ретинола в среднем в 2 раза, общего белка на 30,3%, глюкозы на 16,8%, кальция на 26,8% и фосфора на 48,2% и снижение активности индикаторных ферментов до значений нормы.

Препараты каротина оказывают положительное влияние на функциональную активность печени, что проявляется в нормализации ее белоксинте-зирующей, пигмент- и ферментобразующей функций.

7. При использовании картока в качестве средства патогенетической терапии при постнатальных болезнях телят установлено, что введенный в комплекс терапевтических мероприятий, он повышает лечебную эффективность основного лечения при диспепсии и бронхопневмонии. Опытные телята, которым вводился карток, выздоравливали в среднем на 2-3 дня быстрее, чем контрольные.

8. Препараты ликопина являются высокоэффективными средствами профилактики послеродовой патологии у коров, у животных опытных групп, в сравнении с контролем, меньше регистрировали: задержание последа на 6,7-13,4%. эндометритов на 20-26,7%; маститов на 6,6-13,6%; на 13,3-20% меньше коров с гипофункцией яичников и на 14,7-19,5 дней короче была продолжительность бесплодия.

Ликовит проявил значительную терапевтическую эффективность при экспериментальном поражении печени, что свидетельствует о целесообразности его применения в качестве гепатопротектора.

9. Применение каротиноидов способствует лучшему росту животных и птиц, повышая их сохранность. Введение в рацион птицы изучаемых препаратов позволяет получить яйцо с хорошими товарными качествами, обеспечить потребность кур в витамине А и каротине, что, в свою очередь, оказывает положительное влияние на оплодотворяемость яиц и выводимость цыплят.

10. При разработке рациональных методов профилактики и борьбы с неонатальными болезнями рекомендуется животным в последний триместр беременности применять каротиноиды, так как новорожденные из групп, матери которых получали каротинсодержащие препараты, на 18,6-30% меньше болели диспепсией и на 14,5-22,3% - бронхопневмонией.

11. Материалы по фармако-токсикологической оценке и лечебно-профилактической эффективности каролина, карсела и картока рассмотрены и рекомендованы Советом по ветеринарным препаратам Департамента ветеринарии Российской Федерации к применению в ветеринарной практике. Их производство налажено в заводских условиях ЗАО «Роскарфарм». На лико-лин и ликовит разработана НТД, опытные партии препаратов выпускаются ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург).

Широкими производственными испытаниями, проведенными на территории Краснодарского края, Ульяновской, Кировской, Пензенской, Саратовской, Самарской, Нижегородской и Вологодской областей, а также в Мордовии, Чувашии, Татарстане подтверждены экспериментальные данные о биологической и лечебно-профилактической эффективности препаратов каротина, а также экономической целесообразности их применения в ветеринарии. Так эффективность на 1 рубль затрат составляет от 3,8 до 10 рублей прибыли.

7. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Для практического применения в качестве лечебно-профилактических средств рекомендуется применять каролин, карсел, карток, ликолин и лико-вит при послеродовых заболеваниях, гиповитаминозе А, гипотрофии, мико-токсикозах, стрессовых нагрузках, для нормализации иммуно-биохимического статуса и функции печени у животных, а также повышения жизнеспособности приплода (согласно инструкций по их применению).

Результаты исследований нашли отражение в документах, утвержденных (согласованных) Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации: Наставление по применению препарата каролин в ветеринарии (№ 13-4-03/0014 от 21.02.01); Временное наставление по применению препарата карсел в ветеринарии (№ 13-4-03/0019 от 21.02.01); Временное наставление по применению препарата карток в ветеринарии (№ 13-4-03/0018 от 21.02.01); Методические рекомендации по применению препаратов каротина в ветеринарии и животноводстве (утверждены Академиком-секретарем РАСХН A.M. Смирновым 22 сентября 2004 года); Методические рекомендации по болезням селеновой недостаточности у животных и птиц (утверждены Академиком-секретарем РАСХН A.M. Смирновым 22 сентября 2004 года); Методические рекомендации по эффективным зооветеринарным технологиям повышения воспроизводства, сохранности и продуктивности животных (утверждены заместителем главы администрации Краснодарского края Н.П. Дьяченко 12 апреля 2005 года); Методические рекомендации по комплексной этиопатогенетической фармакотерапии и профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных в условиях Краснодарского края (утверждены начальником управления Федеральной службы по ветеринарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея 11 ноября 2005 года).

Обеспечено промышленное производство препаратов в ЗАО «Роскар-фарм» (г. Краснодар) и ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург).

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одним из методов эффективного повышения продуктивности животных и птицы и предохранения их от заразных и незаразных болезней является использование фармакологических препаратов на основе биологически активных веществ природного происхождения. В качестве одного из наиболее активных и универсальных средств такого назначения рассматривают ка-ротиноиды.

Каротиноиды являются природными веществами, биосинтез которых осуществляется растениями и некоторыми микроорганизмами. Человек и животные не способны их синтезировать и должны регулярно получать с пищей, так как каротиноиды выполняют в организме целый ряд жизненно-важных функций. Длительное время считалось, что их основная задача в живом организме обусловлена превращением в витамин А. В настоящее время убедительно показано, что каротиноиды обладают и другими ценными специфическими свойствами, не связанными с А-витаминной активностью. В живых организмах они действуют как фотопротекторы и антиоксиданты, на молекулярном и клеточном уровне предотвращают трансформации, индуцированные окислителями, генотоксическими веществами, рентгеновским и УФ-излучением; поддерживают стабильность генома и резистентность организма к мутагенезу и канцерогенезу. Увеличивают иммунокомпетентность и контактное взаимодействие клеток, участвуют в регуляции экспрессии гена коннексина-43. Способствуют экономному расходованию антиоксидантных витаминов и ферментов, проявляют антистрессорные свойства (Букин Ю.В., 1995; Карнаухов В.Н., 1988; Сергеев A.B., 1992; Sies Н., Stahl W., Sundquist A.R., 1992).

В последние годы каротинсодержащие препараты получили широкое распространение, как в медицине, так и в животноводстве, не менее интересны они и для применения в ветеринарии при различных патологиях организма животных.

В результате сотрудничества Краснодарского НИВИ (Антипов В.А., Турченко А.Н.), ЗАО «Роскарфарм» (г. Краснодар - Казарян Р.В., Ку-динова С.П.) и ОАО «Уралбиофарм» (г. Екатеринбург) разработаны новые отечественные каротиноидные препараты на основе бета-каротина (каролин, карсел и карток) и ликопина (ликолин и ликовит). Бета-каротин и ликопин получены из наиболее активного их продуцента гетероталличного гриба Blakeslea trispora, относящегося к порядку Mucorales. На все композиции разработана научно-техническая документация (НТД), в которой отражены требования, соблюдение которых гарантировало бы высокое качество препаратов и рациональное их использование в животноводстве и ветеринарии. В ТУ отражены показатели, характеризующие препараты по внешнему виду, цвету, запаху и вкусу, массовой доле действующих веществ, кислотному числу, перекисному числу, стерильности и безвредности.

Каролин представляет собой раствор бета-каротина микробиологического синтеза в рафинированных и дезодорированных маслах (кукурузном, соевом, подсолнечном) с массовой долей каротина 0,18%.

Карсел - это масляный раствор бета-каротина и селеноорганического препарата ДАФС-25 с массовой долей каротина - 0,18% и ДАФС-25 - 0,225 %.

Карток содержит бета-каротин - 0,18% и витамин Е (альфа-токоферол) - 0,5% растворенные в растительных маслах.

Эти препараты выпускаются как в форме для внутреннего применения, так и для парентерального введения.

Ликовит представляет собой обезжиренную ликопинсодержащую биомассу гриба Blakeslea trispora, с концентрацией ликопина от 0,01 до 0,3%.

Ликолин является раствором ликопина в рафинированных и дезодорированных маслах с массовой долей ликопина от 0,05 до 0,2%).

При постоянно увеличивающемся ассортименте фармакологических средств обязательно необходимо оценивать их с точки зрения безопасности применения на практике и исключить возможное отдаленное действие на животных и человека.

Проведенное нами согласно общепринятым стандартам изучение токсикологических свойств новых каротиноидных препаратов на разных видах животных не позволило установить их основные токсические характеристики: среднесмертельную дозу (ЬБ5о) и дозу, вызывающую появление клинической картины токсикоза. В течение периода наблюдений установлено, что введение каротиноидов не вызвало гибели и острой интоксикации животных и птиц, не влияло отрицательно на их общее состояние и поведение. Рефлексы оставались сохраненными. При этом нарушения функциональной активности органов пищеварения и мочеотделения не наблюдалось.

Результаты проведенной работы позволяют сделать вывод о том, что каролин, карсел, карток, ликолин и ликовит обладают слабой токсичностью, не вызывая выраженного токсикоза в дозах до 36 г/кг массы тела и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относятся к 4-му классу опасности (незначительно опасные вещества).

Изучение хронической токсичности на крысах показало, что животные хорошо переносили введение испытуемых образцов. Гибели не наблюдалось ни в одной из групп. Все находившиеся в опыте крысы были клинически здоровы, поедание корма и прием воды не были нарушены, шерстный покров был гладким и отличался блеском. Визуальное наблюдение на протяжении всего эксперимента не выявило каких-либо изменений в поведении опытных животных по сравнению с контрольными. Животные в течение всего периода скармливания препаратов были активны в движении.

Анализ динамики массы тела крыс выявил положительный ее прирост, как в контрольной, так и в опытных группах. Так в группе, получавшей каролин в дозе 3 мл/кг массы тела прирост составил 42,4%, в группе с дозировкой каролина 5 мл/кг массы тела - 44,8%, в контрольной - 41,05%. В экспериментах по оценке хронической токсичности карсела выявлен положительный прирост в 1 опытной группе на 37,87%; во II опытной на 38,15%, в контрольной - на 35,04%. Аналогичная ситуация складывается и при анализе прироста массы тела лабораторных животных, участвующих в хронических опытах при изучении токсических свойств картока, ликолина и ликовита - во всех группах с добавкой препаратов животные росли интенсивнее в сравнении с интактной группой (разница составила от 3,7 до 8%).

У крыс, участвующих в хроническом эксперименте, по морфологическим показателям кровь опытных животных практически не отличалась от контрольных. Средние результаты содержания эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, цветового показателя и лейкоформула характерны для физиологической нормы растущих животных. Лишь в группе, получавшей карсел в максимальной дозировке, наблюдали прогрессивный лейкоцитоз, свидетельствующий о защитной реакции организма на исследуемый препарат. Исследованиями основных биохимических показателей также не выявлено достоверных различий между группами. Однако имеет место тенденция повышения уровня общего белка, ретинола и токоферола у опытных животных в сравнении с контролем.

При патоморфологическом и гистологическом исследовании органов и тканей экспериментальных животных отклонений выявлено не было, лишь единичных случаях, наблюдаемая десквамация покровного эпителия в ворсинках тонкого кишечника, как у контрольных, так и у опытных крыс, была по-видимому, связана с введением большого количества растительного масла.

При анализе данных хронического токсикологического эксперимента на телятах, в ходе которого изучали влияние каролина на функцию почек, пищеварительного тракта и картину крови, получены данные, свидетельствующие о том, что физико-химические показатели мочи и фекалий оставались в пределах физиологических норм, а в крови повышалось содержание эритроцитов, общего белка (на 17,5%), каротина (в 2 раза) и витамина А (в 1,8 раз), а также наблюдалась тенденция к увеличению гамма-глобулиновой фракции сыворотки крови при снижении альбуминовой (в пределах физиологической нормы). Остальные показатели не претерпевали существенных изменений и не отличались от контрольных.

Также в хроническом токсикологическом опыте изучали влияние каролина на функциональное состояние печени поросят. По результатам исследований сделан вывод, что дача препарата в пределах нормы повысила уровень общего белка, а количественное содержание билирубина, ферментов AJTT и ACT у поросят опытной и контрольной группы не различались. Это указывает на то, что каролин при длительном назначении поросятам в дозах, превышающих терапевтические, не оказывает на нее токсического действия. На этих же поросятах была проведена ветеринарно-санитарная экспертиза, которая показала, что применение препарата не изменяет вкусовых и других качеств мяса.

Испытуемые каротиноидные препараты, нанесенные на поверхность кожи животных, не вызывали местного раздражающего действия и общей реакции организма. В течение пяти дней эксперимента по изучению местного действия их нанесение на покровные ткани не обусловили каких-либо заметных изменений в местах аппликаций у опытных животных. Таким образом, новые препараты можно охарактеризовать как не проявляющие местно-раздражающего действия.

В результате проведенных нами исследований по оценке эмбриотоксиче-ского действия бета-каротина установлено, что препараты на его основе не обладают эмбриотоксическим действием. В то время как из литературы (Ду-шейко А.А., 1989) известно, что высокие дозы витамина А оказывают тератогенное действие. Полученные данные свидетельствуют о том, что предпочтение при составлении рационов для родительского стада следует отдавать препаратам, содержащим бета-каротин, а не витамин А.

Таким образом, применение каротиноидных препаратов исключает опасность возникновения осложнений: они не обладают местно-раздражающим действием и без специальных режимов могут назначаться перорально; у них нет эм-бриотоксических свойств, что снижает ограничение ввода препаратов в рацион племенных животных.

Следовательно, на основании результатов собственных исследований по оценке токсических свойств каротиноидных композиций можно сделать вывод о безвредности изучаемых препаратов и о возможности их использования в животноводстве и ветеринарии для фармакостимуляции роста и развития, для лечения и профилактики заболеваний животных.

При оценке фармакологических свойств (3-каротина установили, что фармакокинетика каролина характеризуется высокой биодоступностью этого вещества для организма птицы. Так, при введении каролина концентрация каротиноидов превышала данные фоновых исследований на 15 день в 1,6 раз, а на 30 день в 1,76 раза и эта разница была достоверной. Содержание ретинола в сыворотке опытной птицы превышало данные фоновых исследований в среднем, в 1,5 раза, в контрольной группе колебания были незначительны. В печени концу эксперимента концентрация каротина у опытных кур увеличилась на 63,1% в сравнении с контролем, а витамина А на 39,6% соответственно. При анализе динамики накопления витаминов в желтке установлено, что к 15 дню опыта возросли концентрации витамина А на 7,45%, каротина на 25,2%. А к концу эксперимента эти показатели увеличились на 40,7% и 48,2% соответственно. В контроле существенных изменений не зарегистрировано.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о хорошей биологической доступности каротина из препарата каролин, достаточной для того чтобы восполнить потребности организма в каротине и витамине А.

Фармакодинамика каротиноидов свидетельствует о разностороннем и многоуровневом воздействии этих веществ на живой организм. Препараты оказывали положительное влияние на естественную резистентность животных. Инъекции каролина коровам в период сухостоя повышали процент активных фагоцитов на 6,8%, аналогичная ситуация прослеживалась и в динамике поглотительной и переваривающей способности нейтрофильных грану-лацитов. Так, фагоцитарное число и процент переваривания у коров в опытной группе по сравнению с контролем сразу после родов были выше на 8,5 -6,8%.

Следовательно, обладая стимулирующим влиянием на активность клеток иммунной системы, каротин является фактором адаптации животного к родам и послеродовому периоду.

Нашими исследованиями также установлено, что бактерицидная активность сыворотки крови в опытной группе по сравнению с контролем была выше на 2,5%. При сравнении параметров ЛАСК в динамике опыта отмечалось снижение активности лизоцима у всех животных сразу после родов, но в опытной группе этот процесс был менее выраженным. К концу эксперимента данный показатель у опытных коров был выше, чем у интактных животных на 4,33%. Препарат способствовал достоверному возрастанию содержания Т- и В-лимфоцитов за счет снижения №С-лимфоцитов. В опытной группе количество Т-клеток составило 61,5%, В-клеток - 27,3%, в то время как у интактных животных количество Т- и В-лимфоцитов составило 56,4% и 24,3% соответственно (разница 5,1 - 3%). В гуморальном звене иммунитета мы определяли содержание иммуноглобулинов класса А и М, анализ этих данных позволяет сделать вывод о том, что каролин способствует достоверному увеличению 1% А. На концентрацию М существенного влияния препарат не оказал.

Таким образом, на протяжении срока исследований у животных опытной группы регистрировали положительную динамику показателей, характеризующих естественную резистентность. И хотя наши опыты подтверждают данные о том, что в послеродовый период происходит снижение иммуно-биохимических показателей, у опытных коров благодаря применению каролина данный процесс сглаживается.

Препараты ликопина способствовали повышению показателей естественной резистентности животных, так в сравнении с контролем возросли следующие показатели: разница составила по БАСК от 5,4% до 12,2%; по ЛАСК от 4,9% до 8,2%; по ФАЛ - от 3,4% до 12,4%. Влияние ликовита было более значимым.

Таким образом, испытуемые каротиноидные препараты способствуют повышению естественной резистентности животных. Они поддерживают на верхней границе физиологической нормы показатели фагоцитарной активности нейтрофилов, уровень иммуноглобулинов, популяции активных форм Т- и В-лимфоцитов, а также бактерицидную и лизоцим-ную активность сыворотки крови.

При изучении фармакодинамических эффектов каротиноидных препаратов оценивалось влияние этих веществ на систему ПОЛ-АОЗ. В результате установлено, что парентеральное введение каролина новорожденным телятам оказывает тормозящее влияние на интенсивность перекисного окисления ли-пидов. Так, содержание первичных продуктов - конъюгированных диенов снизилось на 14,3 % в сравнении с контролем. Ферментативное звено АОЗ реагировало на введение каролина следующим образом: активность СОД достоверно увеличилась в опытной группе на 14%, это, вероятно, происходит за счет цинксодержащей супероксиддисмутазы, так как имеется существенная зависимость между активностью фермента и обеспеченностью организма цинком и медью. Мы в своих опытах подтвердили данные ряда исследователей о том, что каротин способствует более высокому уровню цинка в организме. Активность ГПО также повышалась под влиянием препарата на 22,3% и эта разница была достоверной. В оценке каталазы мы не выявили значимых изменений между группами.

Таким образом, применение каролина здоровым новорожденным телятам приводит к повышению антиоксидантного потенциала организма, что очень важно в этот переходный период, когда животные подвержены воздействию различных стресс-факторов.

Позитивное влияние карсела на показатели, характеризующие интенсивность ПОЛ у коров, проявилось в снижении концентрации всех продуктов липопероксидации. Так, в сравнении с контрольной группой у опытных животных было зарегистрировано снижение уровня ДК - на 16,6%, КД - на 35,7%, МДА - на 11,3% и ОШ - на 15%.

Наряду с изменениями прооксидантных процессов ПОЛ у коров опытной группы происходили позитивные сдвиги в системе антиокси-дантной защиты. Так, при биохимических исследованиях мы установили, что под влиянием препарата возрос уровень каротина, являющегося представителем неферментного звена АОЗ. В ферментном звене также выявлено положительное влияние композиции, поскольку в опытной группе активность глута-тионпероксидазы была выше аналогичного показателя интактных животных на 21-22%, глутатионредуктазы на 4,4%, а каталазы на 12%.

Следовательно, введение стельным коровам карсела способствует менее выраженной активации свободнорадикального окисления липидов в наиболее критический период перед родами, что впоследствии способствует улучшению антиоксидантного потенциала у новорожденных телят.

Применение ликопина оказывает потенцирующее действие на ферментативное звено антиоксидантной системы. Вероятно, это связано с тем, что, усиливая неферментативную защиту, каротиноиды способствуют более экономному расходованию антиоксидантных ферментов в целом, так как наиболее выраженного влияния на какой-то определенный фермент нами не было установлено. Препараты увеличивают активность супероксиддисмутазы на 4,5 -6,6%, каталазы на 2,8 - 4,8%, глутатионпероксидазы, в среднем, на 4,6% и глутатионредуктазы на 4%. Повышая антиоксидантный статус организма, ликопин снижает в организме уровень продуктов перекисного окисления липидов, что нашло подтверждение в результатах опыта - под влиянием препаратов в крови снизились концентрации малонового диальдегида и оснований Шиффа.

В экспериментах по определению действия каротиноидов на процессы заживления ран установлено, что применение каролина оказывало стимулирующее действие на эпителизацию раневой поверхности и рост грануляций, которые происходили значительно быстрее, чем в контроле (в 2,5 раза). Полное отпадание корочек и заживление ран происходило на 5 - 7 день в опыте и на 14 -15 день в контроле.

При воспроизведении лоскутных ран через 5 дней раневая поверхность под действием препарата каротина сократилось на 3,6 мм2 разница с контролем составила 80%. На 10 сутки после снятия струпа в группе, где проводили терапию каролином, дно ран было чистым, розовым и находилось на уровне кожных краев ран. Площадь ран сократилось в группе лечения на 86,3%>, у контрольных животных на 61,5%. Полное заживление ран в опытной группе наступило на 15,6±0,3 день, у контрольных животных заживление произошло на 23,8±0,2 день.

При изучении скорости заживления термических ожогов при лечении каролином на 5 день исследования разница в ожоговой поверхности между опытной и контрольной группами составила 11,35%, а на 10 сутки 24,8%. Площадь ожога у крыс на 15 сутки составила: 2,51±0,03 мм в группе где применяли каролин и 7,53±0,12 мм2 у контрольных животных.

Следовательно, препарат каролин стимулирует регенерацию кожи и является ускорителем процессов клеточного размножения.

Действие каротиноидов на обмен веществ организма животных проявилось в том, что под влиянием этих соединений достоверно возрастает уровень общего белка на 12-22,9%. Изучаемые препараты оказывают стабилизирующее влияние на фракционный состав белка (при нарушении протеи-нограммы), при котором достоверно увеличивается количество альбуминов до нормальных физиологических значений при оптимизации концентрация и у- глобулинов. В опытах, где дисбаланс белковых фракций не был ярко выражен, фармакодинамический эффект каротиноидов проявился в увеличении в пределах нормы фракции иммуноглобулинов.

При нарушении протеинсинтетической функции печени под влиянием препаратов каротина возрастает уровень мочевины до нормальных физиологических значений.

Каротиноиды оказывают выраженное позитивное влияние на уровень ферментов, так снижалась активность А Б Т - в 1,5 раза, А ЬТ - в 2 раза, при изначально завышенных уровнях этих веществ.

Анализируя данные по витаминному составу крови, установили достоверное увеличение концентраций каротина в 1,7-2,1 раза и витамина А в 1,6-1,7 раза в группах животных, получавших каротинои-ды.

Изучая показатели минерального обмена, мы не выявили влияния препарата на уровни кальция, фосфора и магния, а количество цинка значительно увеличилось на 27,2%. С достоверной разницей возросло и содержание железа на 39,3%.

При анализе гематологических показателей выявлена тенденция к увеличению уровня эритроцитов на 14,3% и гемоглобина на 8,6 %.

При изучении влияния каротиноидов на уровень эндогенной интоксикации по концентрации молекул средней массы (ССМ) установили, что к концу опыта в группе животных, получавших карсел, этот показатель снизился в 1,6 раз, а в группах с добавкой препаратов ликопина, в среднем, на 15%.

При оценке фармакодинамических эффектов каротина на состояние липидотранспортной системы, показатели перекисного окисления липидов, белковый обмен, активность некоторых ферментов при лечении больных ин-фильтративной формой туберкулеза легких препаратом каролин установлено, что химиотерапия оказывает гепатотоксический эффект, это проявляется в виде задержки в кровеносном русле ЛПВП измененного состава, увеличением активности аланин- и аспартат- аминотрансфераз, щелочной фосфата-зы, гаммаглютаминилтрансферазы. Введение каролина в схему лечения оказывает выраженное гепатопротекторное действие (нормализация состава ЛПВП, уменьшение активности аминотрансфераз, щелочной фосфатазы, гаммаглютаминилтрансферазы).

Препараты бета-каротина как лечебно-профилактические средства испытаны нами при широком спектре заболеваний, в первую очередь, при болезнях, в этиологии и патогенезе которых существенную, иногда решающую, роль играет, так называемая, А-витаминная (и, или каротиновая) недостаточность.

Витаминная недостаточность может быть ведущим этиологическим и (или) патогенетическим фактором заболевания и являться одним из составных элементов этиологии и (или) патогенеза болезни. Классическим примером патологии первого рода могут служить а(гипо)витаминозы, в том числе, гиповитаминоз А. Витаминная недостаточность как основная составляющая полиэтиологического заболевания отмечается, в ряде случаев, при алиментарной дистрофии, миокардозе, нефрозе, ге-патозе, кетозе и других болезней. Витаминная недостаточность как спутник основной болезни накладывает определенный отпечаток на ее патогенез, течение и исход. Примером могут служить «А-гиповитаминозные» неонаталь-ные неинфекционные (незаразные) желудочно-кишечные и респираторные болезни, течение и исход которых во многом зависит от выраженности А-витаминной недостаточности в организме молодых животных (Б.М. Анохин, 1991), а именно, при гиповитаминозе А, гипотрофии, поражении печени, ми-котоксикозах, стрессе, диспепсии, бронхопневмонии, послеродовых заболеваниях.

Исследования показали, что этиолого-патогенетический диагноз болезни обеспечивает этиологически и патогенетически обоснованное применение каротиноидных препаратов и, таким образом, способствует решению терапевтических задач. Анализ материала, накопленного в процессе экспериментальных исследований и клинических наблюдений, свидетельствует о том, что лечебно-оздоровительные функции каротиноидов, введенных в организм больного животного, зависят от нозологической единицы, от особенностей этиологии и патогенеза болезни. При гиповитаминозе А препараты бета-каротина действуют в двух направлениях. Во-первых, они устраняют причину заболевания (дефицит каротина в рационе) и, во-вторых, оказывают благоприятное влияние на патогенез болезни, способствуя восстановлению «витаминного» статуса организма. При применении картока в формировании витаминного статуса животного принимает участие и витамин Е (токоферол).

В проведенных исследованиях установлено, каролин, карсел и карток при применении с профилактической целью предотвращают развитие гиповитаминоза А у поросят, кур- несушек и цыплят. Под влиянием препаратов у птиц повышается содержание в крови каротина, витамина А и токоферола.

При использовании каролина курам с клиническими признаками гиповитаминоза А отмечалось улучшение общего состояния птиц. Признаки болезни постепенно ослабевали и исчезали. У птиц, подвергнутых лечению, по сравнению с контрольными, не леченными, происходит увеличение общего белка, сахара, каротина, витамина А в сыворотке крови, каротина и витамина А в печени и яйце.

При других патологиях, характеризующихся более или менее выраженной А-витаминной недостаточностью, препараты бета-каротина выполняют вспомогательную, но этиологически и патогенетически важную роль (И.П. Кондрахин, 1991). Восполняя дефицит каротина и витамина А в организме, они, тем самым, способствуют более «полному» и более быстрому выздоровлению животных.

Все каротиноидные препараты оказались эффективными средствами профилактики послеродовых осложнений у коров (эндометрит, гипофункция яичников и др.). Применение каролина в последние сроки беременности и сразу после родов позволяет сократить частоту развития акушерско-гинекологической патологии у коров, при этом меньше было зарегистрировано следующих заболеваний: задержание последа было - 70%; острого послеродового эндометрита на 8,4-22,4%; на 10% меньше наблюдалось коров с гипофункциональным состоянием яичников; на 7,5-9,4% меньше коров с персистетнтным желтым телом; на 0,5-1,0 - ниже индекс оплодотворения; на 13-29 дней короче период бесплодия. Биохимические исследования крови коров показали, что назначение препарата перед и после родов оказывает существенное влияние на поддержание высокого уровня витамина А и каротина в крови, что создает благоприятные условия для течения метаболических процессов, связанных с обеспечением родового акта и нормальной послеродовой инволюции половых органов. Анализ динамики ретинола и каротина показал, что в опытных группах их уровни были выше на 14,2% и 20% соответственно, в сравнении с показателями интактных животных.

При исследовании секрета из матки в послеродовом периоде установлено повышение показателей местной иммунной реактивности матки у коров опытной группы. На 4 день после родов уровень .^А в опытной группе был выше 2,5 раза, в 3,3 раза, через 21 день после родов разница несколько снизилась и составила по - в 1,9 раз, по - в 2 раза. Бактерицидность секрета у коров опытной группы была в 1,8 раз, а количество лизоцима в 2 раза больше, чем у контрольных животных. По-видимому, это связано, во-первых, с провитаминной активностью каротина, так как витамин А регулирует образование мукополисахаридов всех слизистых и, в том числе, полисахаридов их секретов. Во-вторых, сам каротин, стимулируя увеличение у-глобулиновой фракции, повышает уровень

Аналогичная ситуация при предупреждении послеродовой патологии прослеживается по всем изучаемым препаратам, особенно эффективен кар-сел, так как задержание последа в ряде случаев он профилактировал на 100%), острогый послеродовой эндометрит до 55%; коров с гипофункциональным состоянием яичников снижалось в 2 раза, а с маститом в 1,9 раз.

Таким образом, назначение коровам в сухостойный период и после родов каротиноидов обеспечивает выраженный позитивный эффект в обмене витамина А и каротина, белка и его фракций, некоторых иммунологических показателей, что положительно сказывается на функционировании репродуктивной системы животных.

Ввиду того, что биологический комплекс «мать-плод-новорожденный» следует рассматривать как единую систему при разработке рациональных методов профилактики и борьбы с неонатальными болезнями, так как существует прямая зависимость между состоянием обмена веществ, уровнем естественной резистентности организма коров, внутриутробным развитием плода, состоянием здоровья и сохранностью новорожденных телят.

По результатам исследований можно сделать следующие выводы: телята из группы, матери которых получали каротиноидные добавки, меньше болели диспепсией на 18,6-30% и бронхопневмонией на 14,5-22,3%, наилучший результат получен в группе с добавкой ликовита. Животные из контрольной группы более тяжело переносили заболевания.

При изучении влияния каролина на супоросных свиноматок, а через их организм на новорожденных поросят установлено, что повышается молочность свиноматок, хотя на крупноплодность поросят препарат влияния не оказал. Масса поросят в возрасте 21 день была выше, чем у контрольной группы на 5%, но к 30-дневному возрасту этот показатель снизился до 2,17%. Препарат снизил частоту возникновения синдрома ММА. В контрольной группе он зарегистрирован у 2-х животных, заболеваемость в опытной группе отсутствует.

Различия сохранности поросят между опытной и контрольной группами (в 21 день на 2,04% и в 30 дней на 1,29%) свидетельствуют о том, что добавка в рацион каролина повышает жизнеспособность поросят.

В ходе проведенных исследований при назначении каролина порося-там-отъемышам были получены достаточно высокие для производственных условий показатели сохранности 7,5 и 5%.

Увеличился так же и прирост массы тела (на 5,1% и 5,7%) при внутреннем применении в сравнении с контролем, а внутримышечная инъекция препарата увеличила этот показатель на 2,05%. Сохранность в этой группе была выше в сравнении с интантными животными на 7,5%.

Применяемые в промышленном свиноводстве технологии (ранний отъем молодняка, интенсивное использование свиноматок и др.) и возникающие стрессы усиливают потребность свиней в витаминах. Прежде всего это относится к витамину А, который повышает устойчивость животных к заболеваниям и стресс-факторам, способствует росту и сохранности молодняка. Поэтому при раннем отъеме поросят в корма необходимо вводить витаминные добавки. Потребность взрослых свиней, ремонтного и откармливаемого молодняка в витамине А может быть удовлетворена за счет включения в рационы кормов, богатых бета-каротином.

При оценке эффективности в птицеводстве на курах-несушках и на цыплятах было установлено, что ежедневное скармливание каролина курам из расчета 2 л/т корма позволяет получить яйцо с хорошими товарными качествами, обеспечить потребность в витамине А, что, в свою очередь, оказывает положительное влияние на оплодотворяемость яиц и выводимость цыплят.

При скармливании каролина средний вес яйца увеличился на 1,3%. Отмечено повышение содержания каротиноидов в желтке яиц от 10,15% до 16,9%, что оказало положительное влияние на оплодотворяемость яиц и результаты инкубации, сохранность цыплят. Показатели инкубации для яиц, полученных от кур опытной группы, превышали данные контроля по выводимости на 2,47%-6,8% сохранности на 1,7%, по весу суточных цыплят на 1,55%.

При добавлении каролина в рацион кур-несушек улучшился товарный вид получаемых яиц (на 2 балла по шкале ВНИИТИП). При добавлении каролина в рацион цыплят-бройлеров в зависимости от дозировки масса тела увеличилась на 3,59% и 5,6%, а сохранность на 2,01% и 3,69% в сравнении с контрольной группой. Содержание каротина в печени увеличилось на 6,2-7,4 мкг, а витамина А на 93,9-90,4 мкг.

Назначение каротиноидов при гипотрофии поросят способствовало улучшению их общего состояния и аппетита, быстрому исчезновению клинических признаков заболевания, нормализации функций пораженных систем и органов, снижению процента заболеваемости и отхода, лучшему росту и развитию животных.

В экспериментах на птице по выяснению эффективности карсела при микотоксикозах была установлена хорошая активность препарата при данной патологии, что проявилось в увеличении сохранности птицы в опытной группе на 4,5% в сравнении с контролем, разница по средней массе цыплят составила 150 грамм. При патологоанатомическом вскрытии погибшей птицы контрольной группы отмечены признаки токсикоза (неравномерное окрашивание и дряблость печени, увеличение в размерах почек, печени, желчного пузыря). Добавка карсела нивелировала клиническое проявление микотоксикозов, в группе, где применялся препарат, почти отсутствуют изменения в печени и желчном пузыре (2 случая против 17 в контроле). Масса органов, участвующих в иммунной защите организма (фабрициева сумка, селезенка), у цыплят опытной группы, выше, чем в контроле в 1,5 и 2 раза соответственно. Исследования сыворотки крови в конце опыта показали, что введение в рацион карсела положительно влияло на обменные процессы в организме птицы. В сравнении с показателями контрольной группы у птицы, получавшей карсел, была выше концентрация следующих показателей: каротиноидов и ретинола в 2 раза, общего белка на 30,3%, глюкозы на 16,8%, кальция на 26,8% и фосфора на 48,2%; снизилось количество мочевой кислоты на 42,7%) и активность трансфераз - в 1,8 раза (АсАт) и 1,2 раза (АлАт) до нормальных физиологических значений. Карсел оказал влияние на нормализацию фракционного состава белка, так в опытной группе протеинограмма соответствовала показателям здоровой птицы, а в контроле дисбаланс стал более выраженным.

При изучении адаптогенного действия карсела при транспортном стрессе установлено, что применение препарата препятствовало увеличению содержания продуктов перекисного окисления липидов после транспортировки. Так, спустя сутки после перевозки концентрация конъюгированных диенов (КД) в контрольной группе возросла на 14,5%, а в опытной - на 7,6% (разница 6,9%). Содержание малонового диальдегида у птиц контрольной группы сразу после перевозки увеличилось на 12,8%, а у кур опытной группы на 2,9% (разница 9,9%), по сравнению с исходными данными. На концентрацию Шиффовых оснований препарат повлиял следующим образом: через сутки после стресс-воздействия в контрольной группе по сравнению с фоновыми показателями достоверных изменений не было, но у птицы, получавшей добавку карсела, их уровень снизился на 15,3%). Через 10 дней после транспортировки содержание первичных продуктов перекисного окисления липидов опустилось ниже фонового уровня в опытной группе, аналогичные изменения прослеживаются в динамике других продуктов ПОЛ. Так, при заключительном исследовании в контроле концентрации МДА и ОШ возросли на 26,8 и 29,6% соответственно, в сравнении с фоном, а в опытной группе снизились на 11,1 и 23% при аналогичном сравнении.

Влияние карсела на ферменты системы антиоксидантной защиты организма птицы при транспортном стрессе проявилось в том, что у кур контрольной группы через сутки после перевозки активность супероксиддисму-тазы снижается на 29,7%, а у опытной группы - на 12,3%» от фоновых значений. К концу исследований этот показатель в контроле практически вернулся к исходному уровню, а у птицы, получавшей карсел, даже превзошел его на 13,9%». Через сутки после стресс-воздействия активность глутатионперокси-дазы снижается у интактной птицы на 17,5%, в опытной группе на 3,6%. А спустя 10 дней после перевозки в контрольной группе ее уровень практически нормализовался, а в группе с добавкой карсела повысился на 9,9% от исходной.

Следовательно, в условиях повышенной генерации в организме активных форм кислорода, когда цепной самоиндуцирующийся механизм сво-боднорадикальных реакций выходит за пределы стационарного уровня, кар-сел проявляет ингибирующее действие на них. Оба составляющих препарата (каротин и селен) следует относить, прежде всего, к адаптогенам животного мира, учитывая, что активные формы кислорода, пероксиды и гидроперокси-ды накапливаются преимущественно в условиях окислительного стресса, являясь универсальным последствием любого его вида. Именно поэтому роль этих веществ во многом заключается в адаптации к окислительным стрессам при частичном выходе организма за пределы оптимальной, «разрешенной» ему природой зоны равновесия с атмосферным кислородом. Они как бы расширяют границы этой зоны и помогают организму относительно безопасно существовать в условиях интенсификации окислительных процессов.

Таким образом, изучение карсела на птице в качестве адаптогена при транспортном стрессе показали, что он предупреждает отрицательные последствия стресс-реакции, не допускает возникновения стрессовой дезадаптации, способствует сохранению продуктивного здоровья птицы.

При изучении активности каротиноидных препаратов на моделях токсического поражения печени ССЦ и гелиотрином, как потенциальных гепа-топротекторов установлено, что при введении каролина наблюдается тенденция к снижению содержания ДК в печени, в то время как карсел вызывал резкое уменьшение ДК (почти в 2 раза) по сравнению с содержанием этих продуктов в печени животных контрольной группы. Исследуемые препараты также снижали уровень МДА в печени, в сравнении с позитивным контролем. Причем, в группе с карсел ом эффект был более выраженным. Установлено, что острая гелиотриновая интоксикация сопровождается повышением содержания продуктов липопероксидации в 2,2 раза, при ССЦ - гепатите -более чем в 2,5 раза. Введение карсела снижало уровень МДА в 1,4 - 1,6 раз. Терапия карселом сопровождалась регрессом биохимических нарушений, вызванных гелиотрином и ССЦ при введении карсела активность AST в крови была ниже в 1,6-1,5 раза, ALT в 1,6-1,7 раза в сравнении с таковыми у животных контрольных групп, но оставалась выше показателей интактных крыс. Активность ЩФ повысилась в 1,4-1,7 раза, а коэффициент AST/ALT возрос с 0,8 до 1,1.

При определении гепатопротекторных свойств ликовита установили, что введение ССЦ вызвало гибель 30% животных, потеря массы тела у них достигла 20%). В отличие от них, животные получавшие ликовит, были подвижны, шерсть вернула первоначальный блеск и окраску, летальность в этой группе была в период моделирования заболевания, а с началом приема препарата отсутствовала. Биохимические показатели крови свидетельствовали о значительных нарушениях метаболических процессах в печени при интоксикации ССЦ (возросла активность AST и ALT, содержание билирубина, снижение концентрации белка с одновременным увеличением среднемолекуляр-ных пептидов и продуктов ПОЛ).

Терапия ликовитом сопровождалась снижением активности AST и ALT, в среднем, на 64%, а активность ЩФ повысилась в 1,8 раз. Препарат препятствовал развитию гипербилирубинемии: концентрация общего билирубина снизилась на 20%, а непрямого в 1,8 раз. Под влиянием каротиноида практически восстанавливался уровень общего белка до нормальных физиологических параметров. В то время как среднемолекулярные пептиды, являющиеся универсальными факторами интоксикации, снизились в 1,4 раза, но были выше аналогичного показателя в интактной группе. Применение ликовита достоверно снижает уровни МДА на 20,3%, ДК на 19,4%.

Таким образом, каротиноидные препараты проявили значительную терапевтическую эффективность при экспериментальном поражении печени, что свидетельствует о целесообразности его применения в качестве гепато-протекторов.

Препараты каротина оказались эффективны при гепатозе сухостойных коров (предположительно паренхиматозная дистрофия печени) и гепатодист-рофии свиней. Под влиянием препаратов в организме больных коров произошли следующие изменения: шерстный покров стал более крепким и блестящим, облысевшие участки частично заросли, у трех коров из пяти перкуторные границы печени пришли в норму. О репаративных процессах в печени свидетельствовали позитивные изменения в биохимических показателях опытных животных. Установлено, что содержание общего белка у коров опытных групп, в сравнении с контролем, было выше на 22,2 -26,1%. Стабилизировался его фракционный состав, протеинограммы коров опытных групп практически соответствовали показателям здоровым животным. О нормализации белоксинтезирующей функции печени свидетельствовало увеличение концентрации мочевины в 1,4 и 1,6 раз в крови опытных животных. Репара-тивный эффект препаратов проявился и в снижении активности индикаторных ферментов. Так, к концу эксперимента концентрация ALT составляла 0,58 - 0,44 мМ/ч.л против 0,96 ммоль/ч.л в контроле, a AST 0,75 - 0,64 мМ/ч.л против 1,18 мМ/ч.л. В то же время как выраженного действия на экскреторные ферменты (ЩФ) препараты не оказали, вероятно это связано с тем, что высокий уровень щелочной фосфатазы при фоновых исследованиях был скорее всего связан не с синдромом холестаза, а с нарушениями в костной ткани, что подтверждается размягчением хвостовых позвонков.

При анализе витаминного обмена проявилось позитивное влияние каролина и карсела на организм коров, так в сыворотке крови возросли концентрации каротина в 1,6 - 1,7 раза, ретинола в 1,2 - 1,3 раза, токоферолов в 1,4 - 1,3 раза, в сравнении с аналогичными показателями контрольной группы.

Следовательно, изучаемые препараты оказывают положительное влияние на функциональную активность печени, что проявляется в нормализации ее белоксинтезирующей, пигментной ' и ферментообразующей функций. Причем карсел обладает более выраженными гепатопротекторными свойствами.

При использовании картока в качестве средства патогенетической терапии при постнатальных болезнях телят установлено, что введенный в комплекс терапевтических мероприятий, он проявляет выраженную лечебную эффективность при диспепсии и бронхопневмонии. Опытные телята, которым вводился карток, выздоравливали в среднем на 2-3 дня быстрее, чем контрольные.

Обобщая результаты опытов по изучению влияния каротиноидов на организм животных и птиц, можно утверждать, что наиболее типичным проявлением является более интенсивное увеличение массы тела у растущих животных; возрастает жизнеспособность организма не только у животных, получавших каротиноиды, но и у полученного от них потомства; у коров значительно лучше протекает беременность, роды, послеродовой период, нормализуется половой цикл, в связи с этим, последующее осеменение является более успешным; по результатам гематологических исследований крови наблюдается увеличение уровня каротина, витамина А и Е, общего белка, уровня у-глобулинов, а при нарушении протеинограмм отмечается нормализация белковых фракций, в морфологическом составе крови регистрируется увеличение содержания эритроцитов со слабым повышением гемоглобина. По иммунологическим показателям отмечено повышение способности нейтрофилов к поглощению и перевариванию антигенного материала, увеличению бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, а также процентного содержания Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов за счет снижения ТЧК и в том числе наблюдается достоверное повышение местной иммунной реактивности матки.

В основе биологической полифункциональности каротиноидов лежат физико-химические свойства системы делокализованных П-электронов. Прежде всего, такая система может служить отличным проводником электронов. Другим важнейшим свойством системы сопряженных ненасыщенных связей является ее способность быть как хорошим донором, так и хорошим акцептором электронов (Пюльман Б., 1965).

В результате каротиноиды образуют сложные полимолекулярные комплексы с белками, липидами и другими химическими компонентами клетки, а также осуществляют защиту клеток от разрушительного действия синглетного кислорода и других свободных радикалов, ультрафиолетового облучения и ионизирующей радиации.

Один из основных механизмов защитного действия каротиноидов на организм животных от воздействия экзогенных и эндогенных неблагоприятных факторов связан с их свойством дезактивации высокореактивных свободных радикалов кислорода, ксенобиотиков и перекисей. Каротин является важным элементом антиоксидантной защиты организма. Известно, что процессы свободнорадикального (перекисного) окисления липидов в организме не только играют важную роль в нормализации физиологии и биохимии клетки, но и выступают как универсальное неспецифическое звено механизмов развития различных патологических состояний. Избыточное же накопление различных продуктов ПОЛ, деструктивно влияя на биологические мембраны, изменяя активность большого количества ферментов, затрагивает важнейшие биохимические процессы в организме, определяющие основные проявления его жизнедеятельности. Строгая регламентация реакций ПОЛ обеспечивается согласованным функционированием механизмов системы антиоксидантной защиты (АОЗ), контролирующей уровень в организме активных форм кислорода, свободных радикалов и молекулярных продуктов перекисного окисления липидов.

Ведущее место в неферментативном звене системы АОЗ организма принадлежит каротиноидам. Многочисленные исследования свидетельствуют о его способности гасить свободные радикалы и нейтрализовать активные формы кислорода. Особенно эффективен каротин против синглетного кислорода - особой формы активированного кислорода с возбужденным электроном, занимающим более высокую орбиталь, по сравнению с обычной. Синг-летный кислород опасен не только тем, что за сверхкороткое время сам может повреждать ДНК, но и тем, что инициирует цепные реакции размножения других свободных радикалов. Способность каротиноидов прерывать ход цепных реакций обеспечивает, тем самым, роль своеобразного фильтра в клетке и предохраняет ее от поражения. Эти же свойства каротина способствуют дестабилизации мембраны злокачественных клеток.

Результаты ряда исследователей (Карнаухов В.Н., 1988 и др.) позволили разработать представление о участии каротиноидов в окислительном метаболизме клеток. В клетках каротиноиды принимают участие в формировании иного, чем митохондрии, энергопроизводящего органоида, названного каротиноксисомой, функцией которого является энергообеспечение клеток в гипоксических условиях. Также каротиноиды связаны с выполнением такой биологической функции, как транспорт кислорода через биологические мембраны. С другой стороны, нельзя исключать и провитаминные свойства каротина, так как витамин А регулирует в митохондриях процессы окислительного фосфорилирования, активность лизосомальных ферментов и улучшает проницаемость биологических мембран.

Таким образом, каротиноиды стимулируют обменные процессы на клеточном уровне. Позитивное влияние каротина на воспроизводительную систему коров связано, во-первых, с тем, что он оказывает стимулирующие влияние на клеточное деление, увеличивая количество метозов; во-вторых, положительно действует на эмбриональный овогенез; в-третьих, он нормализует А-витаминный обмен и это способствует поддержанию морфологической специфики различных форм эпителия, улучшает биосинтез стероидных гормонов (при недостатке витамина А нарушается биосинтез половых гормонов, что приводит к нарушению полового цикла, процесса размножения и беременности).

Характерным в действии каротина является активация белкового обмена, это отражалось в стойкой тенденции увеличения концентрации общего белка в сыворотке крови. Объясняется это тем, что каротиноиды нуждаются в переносчике и при транспортировке они связываются с белком образуя комплексы, причем белковая часть представлена глобулинами. Нормализация А-витаминного обмена также играет свою роль, так как при недостатке витамина А нарушается включение аминокислот в синтез белка. По сложившемуся мнению, лекарственные средства, стимулирующие белковый синтез, повышают неспецифическую резистентность организма, а также увеличение доли у-глобулиновой фракции, связанной с иммунным ответом организма, говорит об иммуннокорректирующем действии каротина.

Установленое в эксперименте увеличение процентного содержания Т-лим-фоцитов и В-лимфоцитов согласуется с данными К.Д. Плецитова (1995), который, анализируя динамику численности иммуннокомпетентных клеток при приеме бета-каротина, сделал вывод, что каротин стимулирует диффе-ренцировку Т- и В-лимфоцитов. Об этом свидетельствовало уменьшение числа малодифференцированных О-лимфоцитов с параллельным возрастанием Т- и В-лимфоцитов. Эффект действия каротина не представлялся возможным объяснить его А-провитаминными свойствами, так как прием бета-каротина не сопровождался повышением уровня ретинола в плазме, а содержание каротина возрастало. Также достаточно аргументированным является предположение, что в основе иммуннорегуляторного действия бета-каротина лежат его антиоксидантные свойства, препятствующие иммуннотоксическо-му действию продуктов перекисного окисления липидов. А увеличение концентрации витамина А ведет к улучшению состояния эпителия слизистых и бактерицидной активности их секретов.

Обобщая результаты опытов по изучению влияния каротиноидов на организм животных и птиц можно утверждать, что эти препараты обладают разносторонней фармакологической активностью и могут быть использованы в качестве средств этиотропной и патогенетической терапии. Проведенные исследования показали высокую биологическую и лечебно-профилактическую эффективность препаратов каротина при ряде заболеваний крупного рогатого скота, свиней, птиц.

331