Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологическое обоснование применения производных тиосемикарбазона и триазола в ветеринарии

На правах рукописи

Онищук Филипп Давидович

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ТИОСЕМИКАРБАЗОНА И ТРИАЗОЛА В ВЕТЕРИНАРИИ

16.00.04. - Ветеринарная фармаколог™ с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Казань - 2000 г.

Работа выполнена в отделе модификации структуры биологически ак тивных соединений Института молекулярной биологии и генетики АН Ук раины, лаборатории молекулярной биологии Института экспериментально! патологии и терапии АМН СССР, отделе фармации Краснодарской НИВС

Научный консультант -Заслуженный деятель науки Российской Федера ции,

доктор ветеринарных наук, профессор В.А. Антипов

Официальные оппоненты -доктор биологических наук, профессор

Тремасов М.Я.

-доктор ветеринарных наук, профессор Гарипов Т.В.

-доктор ветеринарных наук, профессор Трошин Н.А.

Ведущая организация: Донской аграрный университет

Защита диссертации состоится « » I_2000 года в_

часов на заседании диссертационного совета Д - 120.15.01 при Всероссий ском научно - исследовательском ветеринарном институте (420018, г.Казань 18, Научный городок, 2. ВНИВИ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского на учно-исследовательского ветеринарного института (г.Казань).

Автореферат разослан « д- 4 » *_2000 года.

Ученый секретарь диссертационного совета 4—■г^/а^""—_Степанов В.И.

/7ЯГ& y¿<?j¿ ¿¿^ с?

/7 ffb о

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Высокая заболеваемость и гибель сельскохозяйст-шнных животных, особенно молодняка, в значительной степени препятству-:т росту отечественног о производства животноводческой продукции. Поэтому улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка бо-iee эффективных методов и средств профилактики и лечения широко рас-фостраненных заболеваний, является актуальной задачей для ветеринарной i биологической науки и практики (Андреев Е.В., Драгомир А.Б., 1978; Анд-юсов В.А., 1978; Бородой Г.П., 1981; Данилевский В.М., 1974; 1985; Дегтя->ева И.Н. и др., 1981).

В условиях интенсификации животноводства и перевода его па иро-шшленную основу возрастает роль и значение новых инфекций со сложной тиологией, обусловленной повышением вирулентности условно-патогенных шкроорганнзмов, вирусов и грибов. Болезни чаще имеют общую симтома-ику поражения респираторных путей и желудочно-кишечного тракта, приобретают характер смешанных бактериально-вирусных и грибных инфекций, тличающихся от классических форм проявления той или иной болезни с ос-ожнепным течением. Все это требует поиска и разработки новых химиоте-апевтических средств с разным механизмом антимикробного действия, об-адающих также противовирусной и антимикотнческой активностью (Нава-шн С.М., Фомина И.П., 1982).

Учитывая перспективность химиотерапевгического направления в про-леме лечения и профилактики таких заболеваний, целесообразно создание репаратов па основе высокоэффективных компонентов из различных клас-ов соединений, а также средств сочетанной фармакодинамики, обладающих дновремеино противовирусным, антибактериальным и противовоспали-сльным действиями (Кузнецова С.М., 1983).

Интенсивный поиск таких лекарственных препаратов ведется среди рганических соединений триазола, тиосемикарбазона, неприродных

нуклеозидов, производных бснзимидазола, циклических аминов, карбониль ных полиоксисоединений и других (Потопальский А.И., Лозюк JI.B. и др. 1991).

Наиболее перспективными оказались производные триазола и р - тио семикарбазона конденсированных гетероциклов (Лозюк Л.В., Оншцук Ф.Д. 1997), и, в частности, новый препарат лозеваль, в состав которого входи-морфолиний (3-метил-1,2,4-триазолил-5 тиоацетат), обладающий высоко; антивирусной активностью (Мазур И.А. и др., 1986), а также изатоний, ос новное действующее вещество которого метисазон (N-метил-изатин тиосеми-карбазон) (Rao R.A. et al, 1966).

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящего исследова ния является разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии но вых химиотерапевтических препаратов лозевапя и изатония для лечения i профилактики ряда заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы Эти лекарства являются новыми препаративными формами соответствен« морфолиния и метисазона. Для реализации этой цели были поставлены зада чи:

1. Разработать состав и изучить биологическую активность лозеваля i изатония в отношении возбудителей отдельных заболеваний животных t птицы;

2. Определить токсикологические и фармакологические свойства прс паратов;

3. Разработать показания к применению лозеваля и изатония, устано вить их лечебно - профилактическую эффективность при отдельных заболеваниях животных и птицы.

4. Разработать нормативно-техническую документацию на их приме нсние в целях внедрения в практику ветеринарии и животноводства.

Научная новизна. В результате проведенных исследований предложены два новых препарата, являющихся представителями производны>

риазола и тиосемикарбазона, изучена их антибактериальная, антимикотиче-кая и противовирусная активность в соответствии с требованиями Ветфарм-¡иокомиссин Департамента ветеринарии МС и П РФ, определены основные зармако-токсикологические характеристики; отработаны показания к приме-[ению, оптимальные схемы и дозы при лечении и профилактике наиболее 1аспространенных заболеваний пищеварительного и дыхательного тракта швотных и птицы. Научная новизна проведенных исследований подтвер-<дена положительными решениями о выдачи патентов № 99116456/13 017454) от 29.07.99 г., № 99116458/13 (017452) от 29.07.99 г.

Практическая значимость. Для практической ветеринарии предложены овые оригинальные препараты лозеваль и изатопий, обладающие высокой счебной и профилактической эффективностью при ряде заболеваний сель-кохозяйственных животных и птицы.

Практическая ценность лозеваля и изатония подтверждается положи-ельными результатами широких производственных испытаний и Наставле-ием по применению лозеваля и изатония в ветеринарии № 13-5-2/1089 от 4.11.97 г., одобренным Ветфармбиокомиссией и утвержденным Департа-:ентом ветеринарии в установленном порядке и ТУ по их контролю № 933701-10132104-98.

Внедрение результатов исследований. Производство новых огечест-гнных препаратов лозеваль и изатоний освоено АО «Биостим» (г. Сочи). В азличпых хозяйствах и сельскохозяйственных предприятиях Северного авказа обеспечено их применение в качестве высокоэффективных лечебно-рофилактических средств.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены: На заседании Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МСХ и П РФ, 1997.

На научно-практических конференциях г. Новочеркасск 1998, 1999, г. Москва, 1996; х-. Махачкала, 1998; г. Краснодар, 1999; г. Воронеж, 2000.

На заседаниях Ученого Совета Краснодарской НИВС по итогам научно-исследовательской работы за 1997-1999 гг.

На производственных совещаниях ветеринарных специалистов Краснодарского, Ставропольского, Приморского краев, Ростовской, Волгоградской обл. и других регионов РФ в 1995-2000 г.

Основные положения выносимые на защиту:

- результаты исследований биологической активности препаратов ло-зеваль и изатоний;

- результаты их фармако-токсикологических исследований;

- результаты разработки показаний к применению и изучение лечебно -профилактической эффективности лозеваля и изатония при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных и птицы;

- практические предложения по применению и внедрению лозеваля и изатония в ветеринарии.

Публикации результатов исследований. Основные материалы диссертации опубликованы в 45 научных статьях, 3 методических рекомендациях и 3 монографиях.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 400 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, предложений для практики, библиографического списка, включающего 403 источника, из них 258 отечественных авторов. Работа иллюстрирована 140 таблицами, имеет приложения.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования были проведены в условиях отдела фармации Краснодарской НИВС, отдела модификации структуры биологически активных соединений Института молекулярной биологии и генетики АН Украины, лаборатории молекулярной биологии Института экспериментальной патологии и тераиии АМН СССР, Управления ветеринарии Тбилисского района и г. Сочи, Отрадненского района Краснодарского края и районной ветеринарной лаборатории «Тбилисская» Краснодарского края, научной лаборатории АО «Биостим», а клинические опыты в условиях животноводческих козяйств Краснодарского, Ставропольского, Приморского краев и Ростов-жой области.

Экспериментальная часть работы выполнена в лабораторных условиях ia большом поголовье белых мышей и крыс, морских свинок, куриных эмбрионов, а в условиях хозяйств на цыплятах, поросятах, телятах, норках, iy-гриях, собаках, кошках. Клиническими и научно-производственными ис-1ытаниями было охвачено в общей сложности 950000 цыплят, 860 000 кур, 130 000 уток, 150 000 телят, 660 000 поросят, 29 800 норок, более 1000 собак i кошек.

При постановке экспериментов были использованы фармакологиче-:кие, токсикологические, клинические, микробиологические, вирусологиче-:кие, морфологические, молекулярно-биологические и другие методы иссле-(ований. Биологическую активность лозеваля тестировали по его антибакте-шальным, антивирусным и антимикотнческим свойствам.

Антибактериальную активность препаратов in vitro изучали на 69 итаммах 15 различных видов патогенных микроорганизмов, методом серий-[ых разведений в жидкой питательной среде. Бактериостатичсские и бакте-1ицидные свойства определяли визуально по отсутствию роста культуры в [робирках после суточной и двухсуточной инкубации при температуре 37°С. ) степени активности препарата судили по его концентрации в 1 мл пита-

тельной среды, вызывающей полное угнетение роста тест-культур. Опреде ление антимикробной активности лозеваля проводилось также с использова нием метода диффузии в агар. Антимикробную активность in vivo оценивал: по химиотсрапевтичсской эффективности при экспериментальной эшерихи озной и стафилококковой септицсмиях белых мышей при внугрибрюшинно! заражении летальными дозами микроорганизмов.

Антимикотическое действие препарата определяли методом серийны разведений на сусло-агаре и агаре Сабуро в отношении ряда грибов, возбуди телей микотоксикозов и дерматомикозов.

Противовирусное действие препаратов изучено на модели вакцинног процесса при оспе у кроликов, гриппозной пневмонии у мышей, а также м> тем выяснения отдельных сторон патогенеза заболеваний и фармакодинами ки изучаемых средств.

Экспериментальный вирусный процесс при оспе кроликов осуществл$ ли используя вирус осповакцины производства завода бактерийных препарг тов Одесского НИИ вирусологии и эпидемиологии. Специфическую нрот1 вовирусную активность препаратов изучали также в системе "куриный брион + вирус инфекционного ларинготрахеита" и при экспериментально: инфекциониом ларинготрахеите кур. Для заражения использовали вакцш ный штамм вируса инфекционного ларинготрахеита (ВИЛТ) (штамм ЦШ ИПП).

Влияние препаратов на вирус гриппа изучено на экспериментально модели гриппозной пневмонии мышей. Вирусингибирующую активность ог ределяли на культуре клеток куриных фибробластов и ыа развивающихся к) ринных эмбрионах, зараженных тест-вирусом.

Изучение селективного механизма противовирусного действия пров< дено путем определения влияния препаратов на активность ДНК-зависимы ДНК-полимераз и синтетические потенции клеток и экспрессию в них некс торых функций герпес вируса павиан (ГВП).

Отдельные стороны фармакодинамики препаратов изучали по скорости синтеза ДНК, РНК и белка, активности вирусной и клеточной ДНК - полимераз, иммунофлуоресцентному определению вирусных антигенов, пролиферативной и метаболической активности вирусинфицированных клеток 594 Б при их синхронизации с помощью ТФА и ЦГ.

Скорость синтеза нуклеиновых кислот и белка определяли по импульсному включению меченых предшественников 3Н-тимидипа, 3Н-уридина и 14С-белкового гидролизата хлореллы.

Токсикологические свойства препаратов изучали путем определения параметров острой и хронической токсичности, общего влияния на организм, его органы и системы местного раздражающего, аллергизирующего действия, а также вегеринарно-санитарной оценкой продуктов убоя и патоморфо-логичсскими исследованиями органов и тканей животных после назначения им изучаемых средств.

Изучение острой токсичности препаратов проводили на белых мышах, белых крысах и телятах при назначении лозеваля в разных дозах однократно внутрь и внутрибрюшинно.

О токсическом действии судили по количеству погибших животных после его применения, картине интоксикации и результатам патологоанато-мического вскрытия павших животных. Смертельную дозу определяли по Керберу, Литчфильду и Уилкинсону.

Хроническую токсичность препаратов изучали на белых крысах и телятах при введении внутрь в дозах и сроках трехкратно превышающих рекомендуемую в лечебно-профилактических целях.

При ежедневных наблюдениях учитывали клинические показатели: общее состояние, аппетит, показания дыхания, пульса и температуры тела, функции органов пищеварения и мочеотделения, динамику прироста массы тела. Во время проведения эксперимента у животных исследовали кровь общепринятыми методами, в которой определяли основные морфо-

иммунобиохимические показатели: содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, гематокритное число, цветного показателя крови, общего белка, белковые фракции и опсоно-фагоцитарную реакцию.

Количество лейкоцитов и эритроцитов определяли в камере Горяева, гемоглобина по Сали, общий белок - рефрактометрически, белковых фракций по Карпюку, фагоцитарную активность лейкоцитов - по Гостеву.

Щелочную фосфатазу определяли но методу Михлина-Шлыгина. Щелочной резерв сыворотки крови определяли по методу Н.А. Раевского.

Определение лизоцимной активности проводили нефелометрическим методом, с использованием ацетонового порошка Micrococcus lizodecticus.

Витамин С в сыворотке крови определяли по методу Н. Рой. Витамин А определяли в печени подопытных цыплят по методу О. Маслиевой. Витамин В2 определяли в печени подопытных цыплят по методу Берга, Бессей и Лоури.

Ветсринарно-санитарную оценку мяса телят и птицы (цыплят), убитых после применения им препарата проводили общепринятыми методами: внешним обследованием туш, органолептической оценкой вкусовых качеств мяса и бульона, определением концентрации водородных ионов с помощью рН метра, реакции на пероксидазу, определение бактериальной обсемененно-сти туш, формолыюй реакцией и определением коэффициента кислотность-окисляемость.

Гистологическому исследованию были подвергнуты печень, желудок, толстый и тонкий кишечники, сердечная мышца и селезенка, зафиксированные в 10% растворе нейтрального формалина. Гистосрезы готовили на замораживающем микротоме, а в отдельных случаях и из материала залитого в парафин. Окраску их производили гематоксилин-эозином.

Изучение влияния лозеваля на функциональное состояние печени было проведено на телятах месячного возраста. После применения препарата у животных брали кровь, в которой исследовали протеиносинтетическую, пиг-

лент- и ферментобразовательную функцию печени. Протеиносинтетическую функцию определяли коллоидно - осадочной пробой Таката-Ара, тимоловой тробой и с люголевским раствором. О влиянии препарата на пигментобразо-зательную функцию судили по содержанию билирубина, который определя-ш по Эндрашику, а о ферменгообразовательной функции судили по каталитической активности алапинтрансферазы (АлАТ) и аспартаттрансферазы АсАТ), которую исследовали с помощью биохимического набора «Лахема».

Функциональное состояние почек под влиянием препарата оценивали ю физико-химическим показателям мочи телят общепринятыми методами. При этом исследовали цвет, консистенцию, запах, удельный вес, концентра-дию водородных ионов при помощи рН метра, содержание белка и шьбуминов (проба Роча), наличие и количество углеводов (проба Гайнеса), келчные пигменты (проба Родина), желчные кислоты (проба Гея), -емоглобин-(бензидиновая проба Адлер-Цитрона), красящие вещества (проба Рлоренса).

Влияние лозеваля на активность пищеварительной системы изучали по )езультатам исследования физико-химических свойств фекалий телят на 1вет, запах, консистенцию, концентрацию водородных ионов (лакмусовой 5умагой), содержание белка (проба Роча), содержание углеводов (по Гайне-:у), гемоглобина (бензидиновая проба), желчных пигментов (проба Тарквея), кира и крахмала (микроскопически, общепринятыми методами).

Влияние препарата на эмбриональное развитие и генеративную функ-щю животных проводили на белых крысах путем вычисления процента ¡ред- и постимплатационной гибели эмбрионов, обнаружение аномалий и 'родств во внутренних органах и костной системе, а также изучение влияния фепарата на постнатальное развитие щенят.

Изучение аллергезирующего действия лозеваля проводили путем вос-гроизведения местной аллергической реакции - скарификационного теста, а акже анафилактического шока.

При изучении фармакодинамики препарата исследовали его влияние I течение воспалительного процесса. В этих целях были поставлены экспер! менты по антифлогистатичсскому действию препаратов и изучению его дс1 ствия на развитие воспалительного отека и па пролиферативные процесс при воспалении и проницаемость сосудов.

Лечебно-профилактическое действие препаратов изучали при забол! ваниях желудочно-кишечного тракта (диспепсия, гастроэнтерит, колибают риоз) телят, дизентерии поросят, салмонеллсзс цыплят, смешанных инфекц! ях пушных зверей, бронхопневмонии и парагриппс-3 телят, мастите и энд< метрите коров, парвовирусном энтерите собак. Заключение о положительно действии препарата делали на основании комплексных специфических юл нических, биохимических, гематологических, и иммунологических методе исследований. Лечебно-профилактическую эффективность определяли сравнении с широко применяемыми при данных показаниях препаратами отрицательным контролем. Отдельные испытания были проведены комиса онно с участием ветспециалистов и животноводов хозяйств.

Полученный во всех опытах цифровой материал подвергнут статист! ческой обработке на ЭВМ по общепринятым методам вариационной стат! стики с вычислением аргумента Стьюдента (1с1). Разница между сравнива( мыми величинами считалась достоверной при р<0,05 или = 0,05.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Характеристика препаратов

Изатоний и лозеваль - маслянистые жидкости от светло-желтого д оранжевого цвета со специфическим запахом.

Основным активно действующим компонентом изатония является м< тисазон, а лозеваля - морфолиний ацетат. Вторым составляющим компоне! том обоих препаратов является - этоний-(1,2-этилен-бис-М-диметилкарбод(

децилоксиметил-аммония дихлорид) бисчетвертичцое аммониевое соединение.

Препараты получают путем последовательного растворения мстисазо-на или морфолиния с этонием в растворителе (25% растворе диметилсуль-фоксида (ДМСО) на иолиэтилеигликолс ПЭГ-400).

Физико-химические свойства лозеваля должны соответствовать ТУ 9337-001-10132104-98.

3.2. Биологическая активность препаратов

Антибактериальное действие препаратов изучали, используя широкий спектр тест-микроорганизмов - 69 штаммов 15 видов: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium, S.weslaco, S.newport, S.abortusequi, S.gtenley, Shigella sonnei, S.flexneri, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Staphylococcus epidermidis, S.aureus, S.haemolyticus, представленные музейными и клиническими штаммами.

Проведенными исследованиями установлено, что микроорганизмы, использованные как тест-культуры, демонстрировали разную степень чувствительности к препаратам. Среди грамотрицательных бактерий существенно различались по степени чувствительности энтеробактерии. Большинство эн-геробактерий подавлялись концентрациями изатония и лозеваля от 31,5 икг/мл. Дозы изатония 31,5 мкг/мл были подавляющими для большинства штаммов бактерий E.coli и Shigella. Разные уровни подавляющих концентра-дий препаратов зарегистрированы для сальмонелл, однако для большинства 13 них она составила 15,5-31,5 мкг/мл. Изатоний угнетал рост большинства слебсиелл концентрациями выше 65-125 мкг/кг. В то же время все штаммы Pseudomonas, как клинические, так и музейные, характеризовались низкой гувствитсльиостыо к нему. Среди стафилококков наиболее устойчивыми к 1затонию и лозевалю были S.haemolyticus и клинические изоляты S.aureus.

Рост большинства представителей этого рода подавлялся препаратами в кс личестве от 31,5 мкг/мл.

Все изученные препараты в большей или меньшей степени обладал антимикробным действием, однако спектр условно патогенных и патогенны микроорганизмов, использованных в качестве тест-культур, и уровни возде! ствия на них исследуемых веществ существенно различались (табл.1).

Таблица 1

Антибактериальная активность препаратов изатоний,

лозеваль и их компонентов

Виды тест-микроорганизмов Число штаммов Минимальная подавляющая концентрация МПК, мкг/мл

Изатоний Лозеваль ДМСО Этоний дмсо- морфо-линий

E.coli 16 15,5-31,5 31,5-63 10002500 125-250 250-100

S.typhimuri um 3 31,5-63 31,5-63 2500 250 500-100

S.abortus-equi 2 31,5-63 31,5 2500 250 1000

S.weslaco 1 31,5 31,5 1000 250 500

S.newport 1 31,5 31,5 2500 250 500

S. reading 2 31,5 15,5-31,5 1000 250 500

S.stenley 1 31,5 15,5 1000 125 500

S.flexneri 3 31,5-63 31,5-63 2500 2500 500

S.sonnei 3 63-125 31,5-63 2500 2500 1000

P.vulgaris 5 250 63-250 500 500 1000

K.pneumoniae 13 63-125 63-125 10002500 125-500 500-100

S.aureus 11 31,5-125 15,5-125 10002500 31,5-125 1000

S.haemolyti cus 2 63 63 10002500 125 1000

S.epidermi-dis 2 15,5 15,5 500 31,5 500

S.pneumoniae 4 31,5-63 31,5 2500 31,5-63 1000

Наибольшая степень активности была характерна для препаратов иза-тоний и лозеваль. Отдельные компоненты, составляющие эти препараты, оказались низкоактивными.

Минимальная подавляющая концентрация диметилсульфоксида для шигелл, протеев и некоторых сальмонелл составила 2000 мкг/мл и выше. Такая же степень действия диметилсульфоксида была и на пневмококки. Другие грамположигельные кокки и энтеробактерии (E.coli и Salmonella) подавлялись концентрациями свыше 1000-2000 мкг/мл.

Композиция диметилсульфоксида и морфолиния была в 2-5 раз активнее. Для большинства стафилококков и пневмококков, протеев, шигелл, как подавляющие определены концентрации свыше 1000 мкг/мл. На бактерии рода Klebsiella эта композиция действовала в концентрациях, превышающих 500-1000 мкг/мл, Escherichia - 250-1000 мкг/мл, Salmonella - 500 мкг/мл.

Антимикробная активность этония была значительно выше активности других компонентов, входящих в препарат. В отношении E.coli МПК составляла свыше 125-250 мкг/мл. На большинство испытуемых сальмонелл этоний действовал в концентрациях, превышающих 250 мкг/мл. Для K.pneumoniae амплитуда МПК была несколько шире в сторону увеличения (125500 мкг/мл). Наиболее активно этоний действовал на стафилококки (кроме S.haemolyticus) и пневмококки - от 31,5 мкг/мл.

Такая же нижняя граница минимальной подавляющей концентрации (31,5 мкг/мл) была характерна для препарата изатоний в отношении большинства тестируемых микроорганизмов. Для бактерий S.sormei и К. pneumoniae, подавляющие концентрации изатония, были выше (от 63125 мкг/мл). Самыми устойчивыми к действию изатония оказались протеи (>250 мкг/мл).

Лозеваль так же как изатоний демонстрировал разную антимикробную активность. На некоторые сальмонеллы он действовал в концентрациях, начиная с 15,5 мкг/мл. Большинство сальмонелл этот препарат подавлял в кон-

центрации 31,5 мкг/мл. Подобные данные были получены и в отношении ши-гелл.

Стафилококки и пневмококки также более чувствительны к действию лозеваля (МПК = 15,5-31,5 мкг/мл соответственно).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о более высокой антибактериальной активности препаратов изатоний и лозеваль по сравнению с входящими в их состав компонентами.

С целью сравнения особенностей формирования устойчивых вариантов микроорганизмов была проведена серия пассажей 5 тест-культур в присутствии изатония, лозеваля, ампицилина и левомицитина. Для этого было отобрано 5 представителей музейных и клинических штаммов Staphylococcus aureus 209, Staphylococcus aureus 20 k, Escherichia coli 0 127, Escherichia coli 51k, Salmonella typhimurium 11.

Формирование устойчивых вариантов бактерий к этим антибиотикам происходило на 10-15 пассаже. Чувствительность стафилококков к левоми-цетину и ампицилину была сравнима, но темпы формирования резистентных форм штаммов были различными. Клинический штамм S.aureus 20k к 5 пассажу резко снижал уровень чувствительности к антибиотикам и был устойчивым к ним на 15 пассаже. Штаммы бактерий кишечной группы (E.coli и S.thyphimurium) были отнесены к умеренно чувствительным. Однако на 10 и 15 пассажах сформировались их устойчивые варианты. Начальная не высокая чувствительность сальмонеллы дольше сохранялась в отношении левомице-тина по сравнению с чувствительностью к ампицилину.

При изучении развития устойчивости этих же тест-культур к изатонию использовали 20 пассажей, в течении которых только клинические изоляты стафилококка и кишечной палочки смогли выработать незначительную устойчивость к этому препарату. Начальные уровни чувствительности патогенных и условно патогенных бактерий также были выше, чем к антибиотикам. Не наблюдалось скачкообразное изменение чувствительности.

Было установлено, что устойчивость тест-микроорганизмов к лозевалю формируется преимущественно после 15-20 пассажа.

Тем немснсе даже к этому времени чувствительность бактерий к лозевалю оставалась довольно высокой.

Химиотерапевтическую активность лозеваля при экспериментальной стафилококковой и эшерихиозной септицемиях изучали с помощью полевых штаммов бактерий St.aureus и E.coli, которые вводили внутрибрюшшшо в дозах: летальная доза стафилококка для белых мышей 1 млрд, и кишечной папочки - 100 млн микробных клеток. Препарат задавали мышам перорально :разу после заражения их летальными дозами бактерий. Критерием оценки терапевтической эффективности служила выживаемость опытных животных за фоне гибели контрольных мышей, которым препарат не задавали.

При введении лозеваля в дозе 440 мг/кг и фуразолидона 110 мг/кг уда-зтея получить 100%-ное выживание инфицированных стафилококками мы-лей. При этом минимальными дозами, способствующими выживанию жи-ютных, в случае лозеваля является 120, в случае фуразолидона - 30 мг/кг. 1Д50 препаратов при оральном методе введения при стафилококковом сеиси-:е составляет: лозеваля 275±3,92, а фуразолидона - 56,0+3,48 мг/кг.

На кишечную палочку в условиях in vivo лозеваль и фуразолидон действовали менее эффективно, чем на стафилококк. Минимальные дозы, способствующие выживанию мышей составили в случае лозеваля - 200,0, фура-олидона - 50 мг/кг; 100%-ную терапевтическую эффективность регистриро-апи при введении опытного препарата в дозе 520,0, а контрольного - 130 1г/кг. При этом ЕД5Ц составила: у лозеваля 380,0+12,4, фуразолидона -0,0+5,6 мг/кг.

У животных, которым давали лозеваль и фуразолидон, процесс осво-ождения организма от микробных клеток происходил в более короткие срои. Количество живых бактерий, выделенных из селезенки через 24 часа попе заражения мышей и введения им препаратов, составило от 10э до 106, а у

интактных мышей - 106-107. Полное освобождение организма опытных мышей происходило в течение 8-9 суток, в то время как у контрольных животных бактерии выделялись даже спустя 10 дней.

Сравнивая динамику выделения бактерий из селезенки опытных животных обработанных лозевалем и фуразолидоном, можно отметить, что у тех мышей, которые получали новый препарат, бактерийный индекс селезенки был незначительно ниже, чем у мышей обработанных фуразолидоном. К 24 часам после введения препаратов у первых из селезенки выделялось 103 клеток стафилококков и кишечных палочек, в то время как у второй группы мышей их было 105.

Определение фунгистатических концентраций осуществляли методом серийных разведений от 18,5 мкг/мл до 1 мг/мл, используя 78 штаммов 11 видов аскомицетов и дрожжеподобных грибов: Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida lusitaniae, Candida parapsilopsis, Candida gla-brata, Cryptococcus neoformas, Geotrichum species, Aspergillus niger, Aspergillu; fumigatus, Aspergillus flavus.

Показано, что микроорганизмы, использованные в качестве тест культур, продемонстрировали разную степень чувствительности к препара там изатоний, лозеваль и их компонентам (табл. 2). Так, активность лозевал! в отношении дрожжеподобных грибов значительно превышала его МПК i отношении грибов рода Candida и составила 63-250 мкг/мл.

Аналогичная активность в отношении этих микроорганизмов была от мечена у изатония и этония, только некоторые штаммы Aspergillus nige были чувствительны к более высокой концентрации > 600 мкг/мл. В то ж< время именно эта концентрация была определена как подавляющая дл) большинства кандид. Штаммы Candida albicans, Candida krusei u Cryptococcu: neoformans были устойчивы к такой концентрации изатония и подавлялиа количествами свыше 1 мг/мл.

Самой высокой фунгистатической активностью, но сравнению с эбозначенными выше препаратами, обладал лозеваль. За исключением С. 1еоГоппап8 (> 150-600 мкг/мл), большинство дрожжеподобных и мицелиаль-шх грибов подавлялось при концентрации препарата > 37,5 мкг/мл.

Таблица 2

Антимикотическая активность препаратов

Виды тесг-микроорганизмов Число штаммов Минимальная подавляющая концентрация МПК, мкг/мл

изато-ний лозеваль этоний дмсо

Zandida albicans 24 >1000 >37,5-300 >150-1000 -

Zandida krusci 9 >1000 >37,5-300 >150-600 -

Zandida tropicalis 12 >300-600 >37,5-75 >150 >300-1000

Zandida lusitaniae 4 >300-600 >37,5 >150 -

Zandida parapsilo-;is 7 >150-600 >37,5 >75-300 >300-1000

Zandida glabrata 5 >300-600 >37,5-75 >150-300 -

Zryptococcus neo-ormans 3 >100 äl 50-600 -

jeotrichum sp. 2 >300 >37,5 >300

Aspergillus niger 5 >300-600 >37,5-150 >300 -

Aspergillus fumi-;atus 2 >300 >37,5 >150-300 -

Aspergillus flavus 5 >300 >37,5 >150-300 -

Противовирусную активность лозеваля изучали на модели осповакци-1альной инфекции кроликов. При этом показано защитное действие препара-а, выражающееся в торможении развития процесса независимо от способа [рименения. У кроликов, которым вместо препарата вводили растворитель контрольные), наблюдалось характерное развитие осповакциналыюй инфекции. К 3-му дню появлялись пустулы, достигающие максимальных раз-1еров к 7-му дню. При этом средний диаметр кожных поражений составлял 28,1 мм. На 12-й день отмечали отпадание образовавшихся корочек.

Подкожное применение препарата кроликам с осповакцинальной инфекцией обеспечило торможение развития процесса. Пустулы появлялись лишь к 6-7-му дню, подсыхали на 9-й день, а к 10-му дню образовавшиеся корочки отпали. Интенсивность кожных поражений (по отношению к контролю) составляла лишь 40,7%. К аналогичным по направленности результатам привело использование препарата методом аппликаций (табл. 3).

Таблица 3

Влияние лозеваля на развитие осповакцинной инфекции у кроликов

Способ Начало кли- Время отпаде- Размеры кож- Интенсив-

введения нических про- ния корочек, ных пораже- ность кожных

явлении, дни дни нии, мм поражений % к контролю

Подкожно 6-7 10 52,1 40,7

6 мг/кг 3

Местно, 5 10 57,7 45,1

2%-я мазь 2

Контроль (введение растворителя) 3 12 128,1 100,0

Примечание: числитель - день появления гиперемии; знаменатель - день

образования пустул. Суммарный диаметр кожных поражений

Результаты испытания активности лозеваля в отношении вируса инфекционного ларинготрахеита также свидетельствуют о наличии у него противовирусных свойств. Защитное действие препарата при применении с профилактической целью отмечено в пределах 47-69%. Так, введение препарата и вируса одномоментно предотвращало репродукцию вируса в 66-69%, а предварительное введение препарата с последующим (через 3,6,8,24 и 48 ч) инфицированием обеспечило ипгибицию репродукции ВИЛТ в среднем 6147%.

Введение препарата в биосистему спустя 3 ч после инфицирования обеспечило эффект в 61-64% случаев (в зависимости от концентрации), г применение препарата через 24-48 ч. оказалось менее эффективным и приве-

ю к торможению развития бляшек лишь в 38-48%. Таким образом лозеваль юдавляет развитие вируса инфекционного ларинготрахеита. При этом следу-;т отметить, что ингибирующее действие препарата более выражено при одновременном с инфицированием введенем и при профилактическом приме-аении.

На модели инфекционного ларинготрахеита цыплят выявлена зависимость эффекта от концентрации вещества, а также от способа его использования - применение препарата в аэрозоле при концентрациях 60 мг/м3 и в дозе 80 мг/кг при пероральном введении привело к статистически достоверному снижению заболеваемости цыплят. Аэрозольная обработка была более эффективной, чем пероральное применение лозеваля. При этом и доза его была меньшей и процент заболевших цыплят был только 16% по сравнению с контролем, где он составлял 83%.

Кроме непосредственного противовирусного действия, лозеваль и морфолиний обладают иммуномодулирующим эффектом. Установлено достоверное увеличение глобулиновой фракции белков, свидетельствующее об усилении гуморального иммунитета. Кроме того активируется и клеточный иммунитет. Так, дозы препаратов даже в 100 раз меньше терапевтических, заметно индуцировали дифференцировочные антигены. При этом увеличивается процент клеток с СДЗ-Тл (антигены зрелых Т-лимфоцитов); СД4-Тх (клетки, усиливающие синтез иммуноглобулинов В-клеток и их дифференциацию); СД7-Вл (антигены зрелых В-лимфоцитов) и НСТ-Ст (стимулированные клетки, способные восстанавливать нитросшшй тетразолий в форма-зан). Характерно, что в этих условиях значительно снижался процент клеток несущих СД8-Тс антигены.

3.3. Токсические свойства препарата

В результате изучения токсических свойств препаратов исследована их острая и хроническая токсичность и отдельных их компонентов - этония, морфолиния, метисазона и растворителя (25% димексида в ПЭГ-400).

Установлено, что ЛД50 лозеваля для белых мышей при пероральном введении составила 3975 мг/кг., а для крыс - 10000 мг/кг. Для изатония в аналогичных условиях эти дозы были примерно в 1,5 раза выше.

Хроническая токсичность препаратов исследована на беспородных крысах, которым вводили 10 ежедневных внутрибрюшинных инъекций в дозе 1/10 ЛД50. Установлено, что к концу курса введения все животные выживали, чувствовали себя удовлетворительно. Только при введении субтоксических доз у них появлялся понос, моча окрашивалась в розовый цвет, животные были вялыми.

В терапевтических дозах препараты не влияют на красное кроветворение. Однако в субтоксических дозах и увеличения кратности введения (480 мг/кг) оно угнетается. Дозы, близкие к терапевтическим (80 мг/кг) после 5-ти ингаляций несколько увеличивали количество лейкоцитов. Повышенные же дозы (480 мг/кг), как и увеличение кратности введения до 10 инъекций, вызывало снижение количества лейкоцитов. Спустя 10 дней после прекращения курса все показатели восстанавливались, а количество лейкоцитов увеличивалось, однако находилось в пределах физиологической нормы.

В этих же дозах препарат вызывает умеренную эозинопению, которая к концу эксперимента характеризуется нерезким увеличением. Содержание тромбоцитов недостоверно колебалось. Анализ миелограмм также не обнаруживал убедительных отклонений от нормы. Полученные результаты свидетельствовали об отсутствии гематотоксичсского действия у препаратов в терапевтических дозах.

Влияние изатония и лозеваля на внутренние органы и системы животных изучалось по действию на функциональную активность пищеварительной и мочевыделителыюй систем. Установлено, что в терапевтических дозах препараты не оказывают побочного действия на желудочно-кишечный тракт и систему мочеотделения у телят.

Установлено, что введение препаратов в терапевтических дозах не вызывает нарушения функций печени. Количество билирубина, грубодисперст-ных белков сыворотки крови, аминотрансфераз у телят опытной и контрольной групп существенно не отличались.

Изучение влияния аэрозольных ингаляций лозеваля на массу внутренних органов крыс показало, что после 10 ингаляций в дозах 80 и 480 мг/кг веса достоверно большие показатели были только для селезенки и надпочечников. Спустя 10 дней после курса обработки препаратами эта тенденция сохраняется, но разница с контролем недостоверна. Масса других органов не изменялась (табл.4).

Таблица 4

Влияние ингаляций лозеваля на живую массу

и массу внутренних органов белых крыс

Показатель Контроль 10 ингаляций в дозе, мг/кг Через 10 дней после курса ингаляции в дозе, мг/кг

80 480 80 480

Масса животных, г 180 ± 2,3 175 ±3.9 181 ±8,9 172 ±4,0 180 ±2,9

Печень, г 7,5 ± 0,6 5,66 ±0,39 7,36 ± 0,32 5,38 ± 0,49 8,42 ±0,12 Р < 0,02

Легкие, г 1,5 ±0,14 1,52 ±0,11 1,78 ±0,19 0,92 ±0,16 2,1 ±0,058

Сердце, мг 900 ± 74,4 880 ±34 780 ± 49 788 ± 50 867 ± 33

Селезенка, мг 790 ± 52 860± 121 880 ± 132 900 ±70 1367 ±33

Почки, г 1,6 ±1,2 1,48 ±0,086 1,42 ±0,02 1,47 ±0,037 1,46 ±0,133

Надпочечники, мг 64,8 ±6,2 80 ± 7 80,4 ±4,2 76 ±5,1 71 ±4,1

О фармакодинамике лозеваля и изатония судили по распределению их основных действующих веществ в органах и тканях и скорости выведения веществ из организма (табл.5).

Результаты показали, что основная масса АДВ выделялась с мочой в первые 3-6 часов. Через 24 часа препарат в моче не обнаруживался. Максимальное количество морфолиния накапливалось через 3 часа в почках, мышцах. В печени обнаруживались лишь незначительные количества. Через 12 часов в органах и тканях обнаруживаются лишь его следы. Сходные результаты были получены и для изатония, однако время выделения его увеличивалось до 24 часов.

Таблица 5

Динамика распределения морфолиния в органах и тканях

Объект исследова ния Содержание морфолиния, мкг/кг

Зч 6ч 9ч 12 ч 24 ч 48 ч

Моча 133,66± 0,44 134,0± 0,18 125,7± 1,15 25,65± 0,88 следы следы

Кровь 2,2±0,24 1,73+0,5 1,66±0,31 0,26±0,13 - -

Почки 5,39± - 0,47 • ■ 5,05± 0,24 3,47± 0,72 - - -

Мышцы 2,05±0,23 1,43+0,31 1,33±0,28 0,1 ±0,07 - -

Печень - 0,47±0,12 0,58±0,15 - - -

Мозг 1,92+0,62 2,08±0,16 0,99+0,41 - -

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии кумулятивных свойств у изученных препаратов.

При исследовании аллергизирующего (по скарификационному тесту на кроликах), эмбриотоксического (на эмбрионах крыс линии Вистар) и мутагенного действия (по тесту Эймса) показано, что препараты аллергизирую-щим действием не обладают. Эмбриотоксический эффект зависит от дозы и длительности введения, при этом терапевтические дозы не влияли на плодо-

витость и жизнеспособность эмбрионов. Только субтоксические дозы приводили к частичной гибели плодов, не вызывая аномалий их развития. Это согласуется с результатами, полученными при изучении мутагенного действия препаратов. Если тиофосфамид взятый в качестве контроля для сравнения стимулировал появление ревертантов, то в аналогичных условиях лозеваль в дозах превышающих терапевтические этими свойствами не обладал.

3.4. Фармакологические свойства препарата

При изучении фармакологических свойств проведены исследования молекулярно-биологических механизмов противовирусного действия препаратов в опытах in vitro на клеточных культурах модели лимфопролифератив-ного процесса - человеческой культуры P3HR-1 и обезьяньей суспензионной культуре 594-S выделенной из селезенки погибшего от лимфомы павиана гамадрила. Эти клеточные культуры характерны тем, что в их геноме присут-:твует латентный вирус ГВП.

Использованные нами молекулярно-биологические методики позволяли изучать влияние препаратов на скорость синтеза клеточных ДНК - по активности клеточной ДНК - полимеразы;

- скорость синтеза только вирусной ДНК - по активности вирусной ЦНК - зависимой ДНК - полимеразы (табл. 6).

- иммунофлуоресцентные методы с мечеными моноклональными антителами позволяли изучать инфекционные свойства вируса.

- уровень включения меченых предшественников синтеза ДНК , РНК и 5елка свидетельствовал об метаболической активности самих клеток.

О скорости синтеза клеточных ДНК полимераз судили по импульсному включению Н3-тимидина /на мг белка.

Для контроля сравнения были взяты ИДУ и ТФА известные препараты «бирательно блокирующие клеточную полимеразную активность.

При этом установлено, что препараты лозеваль, морфолиний и в меш шей степени изатоний также значительно тормозили эту активность. Эт тенденция сохранялась до 48 часов.

Аналогичные результаты были получены и при изучении активност вирусной ДНК-полимеразы. Контролем сравнения в этих опытах служил индукторы вирусной полимеразы ТФА+ЦГ, а также отдельно ТФА и ИДУ.

Таблица 6

Активность вирусной ДНК полимеразы в клетках культуры 594 Б после действия препаратов

Индуктор 24 часа 72 часа

имп/мин/103 клеток % имп/мин/10 клеток %

Контроль ин- 56,4+0,6 100 53±5,2 100

тактныи

Контроль по- 706,0+16,6 1176,6 24,6+2,5 46,4

сле ТФА+ ЦГ <0,001 <0,02

ИДУ 598+10 996,5 7,0±0,6 13,2

<0,001 <0,001

ТФА 445,8±9,8 743,3 32,0±3,3 60,4

<0,001 <0,05

Изатоний 4,3±10,3 7,6 2,6±0,05 4,9

<0,001 <0,02

Лозеваль 1,2+0,05 2,1 0,5±0,004 0,8

<0,001 <0,001

Морфолиний 1,4±0,09 2,5 0,45+0,002 0,7

<0,001 <0,001

Установлено, что на фоне значительной индукции вирусной ДНК не лимеразы (более в 10 раз ее активность превышала контроль для ТФА+ЦГ, также для ИДУ), в присутствии изучаемых препаратов она почти полносты выключалась, особенно спустя 72 часа от начала контакта с препаратам1 Поведенные иммунофлуоресцентные исследования показали, что после ко1 такта клеточной культуры с индукторами вирусной активности, процент в*

руссодержащих клеток достоверно увеличивался. Напротив, после контакта клеток с исследуемыми препаратами количество зараженных клеток было меньше, чем в контроле. Так, если спустя 96 часов после воздействия ИДУ процент вируссодержащих клеток увеличился в 2 раза, то исследуемые препараты почти полностью блокировали размножение вируса.

Следует отмстить, что на метаболическую активность самих клеток препараты существенно не влияли. Правда, наблюдалось некоторое угнетение синтеза ДНК и РНК в среде с лозевалем и изатонием. Однако это было временным явлением и в последствии, после внесения в свежую питательную среду, клетки восстанавливают свои синтетические потенции.

3.5. Разработка показаний к применению препаратов

Лечебно-профилактическое действие препаратов изатоний и лозеваль изучено в клинических и производственных испытаниях при различных заболеваниях в широких географических регионах - Краснодарском, Ставропольском, Приморском краях, Ростовской, Волгоградской и других областях.

Показано профилактическое и лечебное действие этих препаратов при респираторных заболеваниях телят, при гастроэнтеритах цыплят и поросят, при диспепсии телят, эндометритах коров и гнойно-некротических поражениях молодняка крупного рогатого скота. Проведены аналогичные исследования при кишечных патологиях пушных зверей (норок, нутрий), домашних животных - собак, кошек, пчел. Во всех случаях терапевтический эффект достигался 85-95%.

Установлено, что оптимальная терапевтическая доза препаратов составляет при внутреннем применении 100 мг/кг массы тела при 1-2-кратном назначении в день на протяжении 5-7 дней. При аэрозольных обработках доза препаратов равняется 1 мл/м3 помещения однократно в день в течении 3-5 цней подряд.

Сравнивая лечебную эффективность изатония и лозеваля при бронхопневмониях, бронхитах, парагриппе-3 у телят с другими препаратами установили, что даже 3-4-х кратные аэрозольные обработки изучаемыми препаратами давали стойкий терапевтический эффект. При этом и среднесуточные привесы в этих группах были заметно выше, чем при лечении традиционными лекарствами (габл.7).

Результаты, полученные при лечении лозевалем птицы и поросят при гастроэнтеритах, а также телят при диспепсии по сравнению с широко применяемыми препаратами показали более высокую терапевтическую эффективность лозеваля. Например при лечении цыплят лозевалем (препарат задавали в корм в дозе 0,2 мл/кг суммарного живого веса) процент гибели составлял 0,4-2. В группах, где лечение проводили биовитом-80 или сульгином погибло 1,2-6,8% цыплят.

Таблица 7

Влияние препаратов на прирост массы тела при лечении телят больных парагриппом-3

Се- Наименование Количе- Возраст Среднесуточный прирост мас-

рия препаратов ство го- (мес.) сы тела

лов г в % к

контролю

Лозеваль 114 2-3 318,5 417,5

1 Бициллин-3 25 206,7 270,9

Тетрациклин 25 и 200,5 264,2

Контроль 25 76,3 -

Лозеваль 200 2-3 376,2 418,0

2 Тетрациклин 25 307,4 314,5

Норсульфазол 30 !1 250,3 283,1

Контроль 25 II 90,0 -

Лозеваль 7 2-3 312,4 305,0

3 Иодинол 7 II 280,6 274,0

Контроль 7 102,4 -

Лозеваль по сравнению с другими препаратами был более эффективен при гастроэнтерите поросят и диспепсии телят.

Отмечено высокое профилактическое действие лозеваля на молодняке птицы, особенно в первые дни после посадки цыплят, в цехе выращивания (табл.8). Так, если в контрольных залах процент падежа за первые 6 дней составлял в среднем 3,9%, то в залах, где цыплята были 3-х кратно обработаны аэрозолем лозеваля в концентрации 1 мл/м3, этот процент почти в 2 раза меньше (2,1%). При этом выздоровление животных наступало после 5-7 кратного применения препаратов.

Но еще большие отличия в сохранности цыплят были установлены в последующие 6 дней, когда в контрольных залах процент падежа составил в среднем 2,7, а в опытных только 0,6% (почти в 5 раз меньше).

Таблица 8

Выживаемость птицы после обработки лозевалем

№№ птичников Кол-во посаженной птицы Препараты Погибло за первые 6 дней % надежа Погибло за последующих 6 дней % падежа

11 55000 Контроль 1515 2,8 1504 2,7

12 »1 и 2405 4,4 1231 2,4

22 • 1 и 2281 4,2 1734 3,2

Всего в 4-х птичниках 8386 5815

В среднем па 1 птичник 2097 3,9 1454 2,7

8 55000 Лозеваль 856 1,6 315 0,5

7 ti Лозеваль 1088 2,0 508 0,9

28 51300 Лозеваль 1317 2,6 292 0,5

Всего в 3-х птичниках 3261 1115

В среднем на 1 птичник 1087 2,1 338 0,6

Препараты оказались эффективными при акушерско-гинекологической патологии, в частности при эндометритах и маститах коров.

Изатопий и лозеваль особенно зарекомендовали себя при смешанны инфекциях мелких домашних животных и пушных зверей, вызванных сал! монеллами, пастереллой, кишечной палочкой и кокковой микрофлорой.

Экономическая эффективность препаратов при различных показания составила на каждый рубль затрат от 3 до 8 рублей прибыли.

Следует отметить положительное влияние изученных препаратов и продуктивность животных и птицы. В птичниках, где снижалась яйценос кость, вызванная хроническими инфекциями, некачественными кормам после обработок лозевалем и изатонием яйценоскость восстанавливалась, не вышалась сохранность и увеличивались привесы.

Таким образом, в результате проведенных исследований можно сделат заключение, что препараты изатоний и лозеваль являются малотоксичным! дешевыми и эффективными отечественными химиотерапевтическими сред ствами, обладающими разносторонним фармакологическим действием, в то числе комплексной антимикробной, противовирусной, антигрибной и имм} номодулирующей активностью. Они могут с успехом применяться с лечеС ной и профилактической целью при различных заболеваниях сельскохозя! ственных животных и птицы.

4. ВЫВОДЫ

1. Препараты лозеваль и изатоний представляют собой комбинирова! ные препараты новых классов химических соединений. Активно действук щим веществом лозеваля является морфолиний - производное триазола (; метил - 1,2,4-триазолил-5-тиоацетат), а изатония - метисазон (1Ч-метил-изати (З-тиосемикарбазон) - соединение тиосемикарбазона.

Наряду с этими ингридиентами лозеваль и изатоний включает в себ этоний (1,2-этилен-бис-аммония дихлорид) и растворитель, состоящий у 25% раствора диметилсульфоксида (ДМСО) в полиэтиленгликоле (ПЭГ-40(Г

Препараты получают путем последовательного растворения указанных сомпонентов в соответствии с технологическими регламентами по их произ-юдству.

2. Лозеваль и изатоний обладают выраженной, широкого спектра (сйствия антибактериальной активностью по отношению к кишечной палоч-;е, золотистому стафилококку, клебсиелле, сальмонелле, протею. Мини-1альная подавляющая концентрация (МПК) по отношению к указанным цтаммам составляет 28-69 мкг/мл.

Препараты проявляют определенную эффективность при их внутрен-гем введении при экспериментальной эшерихиозной и стафилококковой сеп-ицемиях. ЕД50 при заражении золотистым стафилококком составляет 75±3,92 мг/кг и кишечной палочкой 380+12,4 мг/кг.

Процесс освобождения организма белых мышеи от микроорганизмов од влиянием препаратов происходит в течение 6-9 суток.

3. Препараты обладают выраженной противовирусной активностью в тношении вирусов гриппа А, оспы кроликов, герпесинфекции, вируса ин-»екционного ларинготрахеита. Защитное действие препаратов составляло 2,3 - 98,6 %.

4. Механизм противорусного действия препаратов заключается в бло-ировании вирусной полимеразной активности, отвечающей за синтез вирус-ых нуклеиновых кислот. Следствием этого является торможение процесса азмножения вирусов, с потерей их инфекционных свойств.

5. Лозеваль проявляет выраженную антимикотическую активность в тношении аскомицетов и дрожжеподобпых грибов. Фунгистатическое дей-гвие препаратов по отношению кандид и аспергилл проявляется в концен-рации >37,5-300 мкг/мл.

6. Лозеваль является малотоксичным препаратом для лабораторных и зльскохозяйственных животных и птицы. Его ЛД50 для белых мышей при

внутреннем введении составляет 3975 мг/кг; ЛД50 изатония для крыс равняется 10000 мг/кг массы тела.

При длительном многократном введении препаратов в оптимальных 1 трехкратных терапевтических, а также субтоксических дозах, они не оказы вают выраженного токсического влияния на организм животных, в том чиош морфофункциональных изменений систем органов и тканей, процессь пищеварения и мочеотделения, функции печени, а также физико-химически! свойства и вкусовые качества мяса.

Препараты не проявляют эмбриотоксического, тератогенного и аллер газирующего действия, мутагенной и канцерогенной активности.

7. Лозеваль и изатоний проявляют разностороннюю фармакологиче скую активность. Наряду с выраженным антибактериальным, антивирусньи и фунгицидным действием оказывают противовоспалительное, ранозажив ляющее и иммуномодулирующее действие.

8. Фармакокинетика препаратов характеризуется быстрым всасываю: ем в организм их активно действующих веществ, распределением в крови внутренних органах и последующим выведением в течение 24 часов, в ос новном с мочей.

9. Лозеваль является эффективным этиопатогенетическим средство; при различных заболеваниях органов пищеварения, дыхания, акушерскс гинекологической и хирургической патологии, а также других инфекци (в том числе и смешанных) сельскохозяйственных животных и птиць Профилактическая эффективность лозеваля при диспепсии и гастроэнтерита телят составляет 81,9-84,6%, гастроэнтерите поросят - 94,2-96,8 %, гастроэ1 терите цыплят - 98-99,6%, гастроэнтерите норок и нутрий - 97,2-98,5 %.

Профилактическое действие препарата при колибактериозе телят, Д1 зинтерии поросят и салмонеллез цыплят равнялось 87,1-95,9 %. Лечебш эффективность препарата при этих процессах была 98-99,6%.

Лечебное действие лозеваля при парагриппе-З и бронхопневмонии телят составила 87,3-91,2 %, артритах крупного рогатого скота травматической этиологии в 92,2-94,8 % случаев. Применение препарата при эндометритах коров было положительным в 91-96% и мастите 82,3-85,6 % случаев.

При лечении смешанной бактериальной инфекции порок (пастерсллез, салмонеллез, энтеротоксемия), эффективность его применения составила 95,9%, а при смешанной инфекции нутрий (пастсреллез, стреитакоккоз) -93,4-98,2%.

10. Изатоний показан для профилактики и лечения диарейных заболеваний животных и птицы. Эффективен для профилактики диспепсии телят (в 80% случаев), гастроэнтерите поросят (82-92%) и цыплят (в 85,4%), колибак-гериозе телят (94,3 %) и поросят (86,7%).

При лечении диспепсии телят он проявил лечебное действие в 96 % :лучаев. При гастроэнтерите поросят оно составило 98%. Терапевтическая эффективность при гастроэнтерите цыплят равнялась 96%.

При лечении парагриппа-3 изатоний проявил в 92,3-95,7 % лечебную эффективное! !, после 4-7 сеансов аэрозольного применения.

Эффективность лечения эндометритов коров изатонием составила 94%.

11. Назначение препаратов больным животным способствовует увсли-шшго привеса животных в среднем на 8-44%, их общего состояния и аппетита, быстрому изчезновепию клинических признаков заболевания, отдель-1ых морфо-иммунобиохимических показателей крови.

Применение препаратов при заболеваниях животных и птицы экономически выгодно, его экономическая эффективность составляет от 3 до 8 зублей на 1 рубль затрат.

12. Промышленное производство лозеваля и изатония осуществляет \0 «Биостим» г. Сочи. Положительные результаты их широких производст-¡енных испытаний позволили широко внедрить препараты в практику кивотноводства и ветеринарии Краснодарского и Ставропольского краев,

Ростовской области и других регионов Российской Федерации в соответствии с Наставлениями по их применению, утвержденными в установленном порядке Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Ветеринарной практике и животноводству рекомендуются новые отечественные препараты комплексного действия лозеваль и изатоний для профилактики и лечения заболеваний животных и птицы инфекционног о и незаразного происхождения.

Применение лозеваля регламентируется Наставлением по применению лозеваля, утвержденного Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ от 24.11.97 г. № 13-5-2/1089.

Применение изатония проводится в соответствии с Временным настав-лсЕшем по применению № 432-3 от 31 января 1989 года.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Онищук Ф.Д. Действие продуктов модификации тиофосфамида на синте: ДНК в клетках. Сб. "Вирусы рака и лейкоза", М, 1981, с. 182-184.

2. Бесядецкая Е.И., Семенюк Т.Н., Потопальский А.И., Ивасивка C.B., Онищук Ф.Д. Фосфорилированные этиленамидные производные урацилов. Химико-фармацевтический фурнал, 1982, 10, с.33-39.

3. Онищук Ф.Д. Чувствительность обезьяньих суспензионных лимфоидных линий к действию препаратов. В кн. Материалы Всесоюзной конф. с.78-80. 1983.

4. Агрба В.З., Онищук Ф.Д., Бубеник Я. Изучение некоторых биологических характеристик лимфоидных линий клеток. Вопросы вирусологии, 1983, № 1, с.85-91.

5. Дьяченко А.Г., Онищук Ф.Д., Тимановская В.В. Экспрессия трансформирующих свойств вируса ГВП клетками. В кн. Материалы Всесоюзной конф. Сухуми, 1983, с.52-53.

Гарасько С.И., Онищук Ф.Д., Алексевич 51.И. Гистохимическая оценка функционального состояния надпочечников. В кн. Материалы Всесоюзной конф. Тбилиси, 1983, т.2, с.70-71.

Василия Л.И., Гарасько С.И., Онищук Ф.Д. 6-пиперидинометилен-б-метилурацила гидрохлорид, синтез и биологические свойства. Тез.докл. 4 съезда фармацевтов УССР Запорожье, 1984, с.152.

Онищук Ф.Д., Агрба В.З., Дьяченко А.Г., Потопальский. Анализ вирусин-гибирующей и антиметаболической активности алкилирующих соединений в культуре лимфоидных линий обезьян. В кн. Злокачественные лим-фомы, М. 1986, с. 191-193.

Дьяченко А.Г., Онищук Ф.Д., Харашвили Ю.В. Экспрессия трансформирующей активности вирусов литического цикла. В кн. Злокачественные лимфомы, М. 1986, с.132-137.

). Агрба В.З., Онищук Ф.Д., Бубеник Я. Подходы к классификации лимфоидных суспензионных линий клеток павианов. В кн. Злокачественные лимфомы, М. 1986, с. 145-149.

. Агрба В.З., Тимановская В.В., Онищук Ф.Д. Получение и характеристика постоянных лимфоидных суспензионных клеток приматов. Цитология, 1987, № 9, с.1071-1072.

L Лапин Б.А., Дьяченко А.Г., Онищук Ф.Д. Установление перевиваемой лимфобластоидной клеточной линии. Докл. АН СССР, 1988, т.278, № 2, с.472-474.

>. Онищук Ф.Д., Сокольский С.С., Мельник В.И., Лозюк Л.В. Изатизон и его лекарственные формы при заболеваниях пчел. Методические рекомендации. Краснодар, 1996, с.11.

. Чувиров Г.Н., Онищук Ф.Д., Потопальский А.И. Применение препарата "лозеваль" в комплексном лечении герпетической инфекции. В сб. "Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммуно-фармакологии" от 28-31/1-97 г., М.1997, с.521.

15. Лозюк Л.В., Онищук Ф.Д. Медикаментозная терапия вирусных инфекций животных. Киев, "Наукова думка", 1997,159 с.

16. Лозюк Л.В., Онищук Ф.Д., Потопальский А.И. Изатизон и его лекарственные формы при заболеваниях пчел. Методические рекомендации., Краснодар 1998, c.l 1.

17. Ветошкин A.B., Кузина Н.В., Онищук Ф.Д. Препарат лозеваль при лечении инфекционных и незаразных заболеваний мелких домашних животных. Тез. 1-й регион.конф. "Актуальные проблемы ветеринарной медицины" Донской Госагроуниверситете, п.Персиановский, 1998, с.80-81.

18. Мирошниченко В.П., Онищук Ф.Д. Лечение инфекционных заболеваний мелких животных с помощью нового препарата лозеваль. Там же, с.82-83.

19. Смирнова Э.А., Онищук Ф.Д. Изатизон и лозеваль при лечении инфекционных и неинфекционных заболеваний мелких домашних животных. Там же, с.83-84.

20. Онищук Ф.Д. Антимикробное действие противовирусных препаратов. Вестник ветеринарии, Ставрополь, № 10 (4/98), с.66-69.

21. Онищук Ф.Д., Мирошниченко В.П. Терапевтическая активность препарата лозеваль при респираторных заболеваниях молодняка крупного рогатого скота. Инф.Листок № 280-98, Краснодар, 1998 г.

22. Оншцук Ф.Д., Ралка И.П., Куклев В.А. Лечебно-профилактическое действие нового препарата лозеваль при желудочно-кишечных заболеваниях поросят. Инф.Листок № 274-98, Краснодар, 1998 г.

23. Онищук Ф.Д., Мирошниченко В.П. Эффективность препарата лозеваль при лечении смешанных инфекционных заболеваний пушных зверей. Инф.Листок № 273-98, Краснодар, 1998 г.

24. Онищук Ф.Д., Мельник В.И., Мирошниченко В.П., Масько Е.Э. Применение препарата лозеваль для профилактики и лечения инфекционных заболеваний пчел. Инф. Листок № 265-98, Краснодар, 1998 г.

25. Фисснко СЛ., Онищук Ф.Д., Куненков К.А. Эффективность препарата лозеваль при гнойно-некротических процессах у коров. Инф.Листок № 279-98, Краснодар, 1998 г.

26. Мирошниченко В.П., Антипов В.А., Онищук Ф.Д. Препарат лозеваль при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний поросят. Ма-тер.научно-производственная конф. "Актуальные вопросы профилактики и лечении г. Махачкала, 1998 г., с.64-65.

27. Мирошниченко В. П., Антипов В.А., Онищук Ф.Д. Лекарственный препарат лозеваль при выращивании птицы. Там же, с. 67-68.

28. Онищук Ф.Д., Мирошниченко В.П. Лозеваль при лечении инфекционных заболеваний пушных зверей. Вестник ветеринарии № 11 (5/98), с.66-69, Ставрополь.

19. Онищук Ф.Д., Саженев В.Н., Таймасуков A.A. Лозеваль - новый лечебный препарат. Птицеводство, № 1, 1999, с.27-28.

Ю. Онищук Ф.Д., Косюк И.В. Сроки формирования резистентности микроорганизмов к изатизону и лозевалю. Ставрополь, Вестник ветеринарии № 12(1/99) с.66-71.

51. Варес Э.Я., Оншцук Ф.Д. Пародонтоз, Дрогобич, Издательство "Видрод-жения", 1999, 78 с.

12. Онищук Ф.Д., Домбровская И.В., Мирошниченко В.Г1. Антнфунгалыгое действие противовирусных препаратов изатизон и лозеваль. Инф.Листок № 137-99, Краснодар.

13. Таймасуков A.A., Онищук Ф.Д., Мирошниченко В.П. Применение препарата лозеваль в птицеводстве. Инф.Листок № 136-99, Краснодар.

¡4. Лозюк Л.В., Онищук Ф.Д., Лозюк P.M. Медикаментозная терапия вирусных инфекций животных. Методическое пособие, Ставрополь, 1999 г., 94с.

>5. Мирошниченко В.П., Онищук Ф.Д. Лечебная эффективность препарата лозеваль при респираторных заболеваниях молодняка кре /Труды Кубанского агроуниверситета, 1999, с. 102.

36. Онищук Ф.Д. Антифугальное действие препаратов изатизон и лозеваль Вестник ветеринарии № 16, 2/2000, с.45-47.

37. Онищук Ф.Д., Мельник В.Н., Лозюк Л.В., Масько Е.Э. Изатоний и его лекарственные формы при заболеваниях пчел. Методические рекомендации Краснодар 1999 г., с.13.

38. Онищук Ф.Д., Таймасуков A.A., Макрушин А.Б. Эффективность новогс препарата лозеваля в птицеводстве. Вестник ветеринарии, № 16, 2/2000 с.89-91.

39. Онищук Ф.Д., Терехов Г.Н. Поможет птице изатоний. Сельские зори, JSi 5-6, 2000 г., с.31-32.

40. Масько Е.Э., Онищук Ф.Д., Мельник В.Н., Мирошниченко В.П. Препарат и лечение инфекционных заболеваний нчел. Сельские зори, № 7-8, 2000 г. с.17-18.

41. Онищук Ф.Д., Терехов Г.Н. Эффективность изатония при инфекциошюх лариготрахеите птиц. Материалы Международной конф. г. Воронеж 2000г., с.93.

42. Терехов Г.Н., Онищук Ф.Д. Применение изатония при желудочно-кишечных заболеваниях у птнц. Материалы Международной конф. г. Воронеж, 2000 г., с. 134.

43. Онищук Ф.Д., Лозюк P.A. Лекарственное средство для профилактики г лечения вирусных болезней животных. Патент на изобретение № 99116456 /13 от 19.05.2000 г.

44. Онищук Ф.Д., Лозюк Л.В., Домбровская И.В. Иммуномодулятор лозеваль. Патент на изобретение № 99116458/13 от 05.07.2000 г.

45. Онищук Ф.Д. Лозеваль в ветеринарной практике (характеристика фарма-ко-токсикологических свойств и биологической активности нового препарата). Вестник ветеринарии № 17 (3/2000), с.77-81.

Актуальность темы. Высокая заболеваемость и гибель сельскохозяйственных животных, особенно, молодняка, в значительной степени препятствует росту отечественного производства животноводческой продукции. Поэтому улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка более эффективных методов и средств профилактики и лечения широко распространенных заболеваний является актуальной задачей для ветеринарной и биологической науки и практики (Андреев Е.В., Драгомир А.Б., 1978; Андросов В.А., 1978; Бородой Г.П. 1981; Данилевский В.М., 1974; 1985; Дегтярева И.Н. и др., 1981).

Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии и профилактике, позволяющей значительно снизить наносимый ими экономический ущерб (Дымко Е.Ф., 1992; McKercher S., 1978). Для этого используют различные фармакологические средства, наибольшее распространение из которых получили антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны (Амирбеков М.А. и др, 1985; Гладенко И.И. и др., 1977, Головизниц Ю.В. 1980: Жамантаев А и др, 1980; Качанова С.П., 1979; Ковалев В.Ф. и др, 1988; Aronson A.Z., 1980; Brumfitt М., 1979; Conzelman Y.M., 1980; Larson Z., 1980). Однако их эффективность в последнее время значительно снизалась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пассажирования и усиления их вирулентных и антигенных свойств. Устойчивые формы патогенных возбудителей болезней, в качестве новой биологической популяции циркулируют в природе и инфицируют животных и птицу, что существенно затрудняет их профилактику и терапию (Агроник С.Е., 1976 Антипенко В.П., Антипов A.B., 1978; Виолин Б.В., 1988; Дымко Е.Н, 1992, Завьянцев В.Е., 1977; Зуева B.C.

1970; Коняев М.Т. и др., 1979; Лебедева М.Н., Водопаева С.Д. 1972; Под-копаев В.М. и др., 1977; Светоч Э.А., Шунисов М.К., 1975; Тришкина Е.Т., 1975; Anderson R.C. et al 1975; Benveniste R., Davis J.s 1973; Chang W.H.f Carter G.R., 1975; Clapper W.E. et al., 1956).

В условиях интенсификации животноводства и перевода его на промышленную основу возрастает роль и значение новых инфекций со сложной этиологией, обусловленной повышением вирулентности условно-патогенных микроорганизмов, вирусов и грибов. Болезни чаще имеют общую симтома-тику поражения респираторных путей и желудочно-кишечного тракта, приобретают характер смешанных бактериально-вирусных и грибных инфекций, отличающихся от классических форм проявления той или иной болезни с осложненным течением. Все это требует поиска и разработки новых хи-миотерапевтических средств с разным механизмом антимикробного действия, обладающих также противовирусной и противогрибной активностью (Навашин С.М., Фомина И.П., 1982).

Учитывая перспективность химиотерапевтического направления в проблеме лечения и профилактики таких заболеваний, целесообразно создание препаратов на основе высокоэффективных компонентов из различных классов соединений, а также средств сочетанной фармакодинамики. обладающих одновременно противовирусным, антибактериальным и противовоспалительным действиями (Кузнецова С.М., 1983).

Интенсивный поиск таких лекарственных препаратов ведется среди органических соединений триазола, тиосемикарбазонов, неприродных нук-леозидов, производных бензимидазола, циклических аминов, карбонильных полиоксисоединений и других (Потопальский А.И., Лозюк Л.В., Миролюбо-ва А.Н. и др., 1991).

Наиболее перспективными оказались производные триазола и ß - тиосемикарбазонов конденсированных гетероциклов (Лозюк Л.В., Онищук

Ф.Д. 1997), и. в частности, новый препарат лозеваль. в состав которого входит морфолиний (3-мешл-1.2,4-1рназолнл-5 тиоацетат), обладающий высокой антивирусной и антимикробной активностью (Мазур И.А. и др., 1986). а также изотонии основное действующее вещество которого метисазон (Rao R.A. et al, 1966)

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящего исследования является разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии новых химиотерапевтических препаратов лозеваля и изатония для лечения и профилактики ряда заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы. Эти лекарства являются новыми препаративными формами соответственно морфолинин и ыешеазопа. Для реализации этой цели были поста лепи задачи:

1. Разработать состав и изучить биологическую активность лозеваля и изатония в отношении основных возбудителей отдельных заболеваний животных и птицы;

2. Определить наиболее специфические токсикологические и фармакологические свойства препаратов;

3. Разработать показания к применению лозеваля и изатония, установить их лечебно - профилактическую эффективность при отдельных заболеваниях животных и птицы.

4. Разработать нормативно-техническую документацию на их применение в целях внедрения в практику ветеринарии и животноводства,

Научная новизна. В результате проведенных исследований предложены два новых препарата, являющихся представителями производных триа-зола и тиосемикарбозонов, изучены их биологическая активность и. в частности, антимикробная, и антигрибная; в соответствии с требованиями Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МС и П РФ, определены их основные фармако-токсикологические характеристики; отработаны показания к применению, оптимальные схемы и дозы при лечении и профилактике наиболее распространенных заболеваний пищеварительного и дыхательного тракта.

Практическая значимость. Для практической ветеринарии предложены новые оригинальные препараты лозеваль и изатоний, обладающие высокой лечебной и профилактической эффективностью при ряде заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы.

Практическая ценность лозеваля и изотония подтверждается положительными результатами широких производственных испытаний и Наставлением по применению лозеваля в ветеринарии, одобренным Ветфармбиоко-миссией и утвержденным Департаментом ветеринарии в установленном порядке.

Внедрение результатов исследований. Производство новых отечественных препаратов формы лозеваль и изатоний освоено АО «Биостим» (г. Сочи).

В условиях животноводческих и птицеводческих хозяйств Северного Кавказа обеспечено их применение в качестве высокоэффективных лечебно-профилактических средств.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены:

На заседании Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МСХ и П РФ, 1997.

На научно-практических конференциях г. Новочеркасск 1998. 1999. г. Москва, 1996; г. Махачкала. 1998; г. Краснодар. 1999; г. Воронеж. 2000.

На заседаниях Ученого Совета Краснодарской НИВС по итогам научно-исследовательской работы за 1997-1998 гг.

На производственных совещаниях ветеринарных специалистов Краснодарского, Ставропольского, Приморского края, Ростовской, Волгоградской обл. и других регионов РФ в 1995-2000 г. (/

На защиту выносятся: *

- результаты исследований биологической активности препаратов ло-зеваль и изатоний;

- результаты их фармако-токсикологических исследований;

- результаты разработки показаний к применению и изучение лечебно - профилактической эффективности лозеваля и изатония при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных и птицы;

- практические предложения по применению и внедрению лозеваля и изатония в ветеринарии.

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 45 научных статьях и 3 монографиях.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка более эффективных методов и средств профилактики и лечения широко распространенных заболеваний является актуальной задачей для ветеринарной и биологической науки и практики (Андреев Е.В., Драгомир А.Б., 1978; Анд-рюсов В.А., 1978; Бородой Г.П., 1981; Данилевский В.М., 1974; 1985; Дегтярева H.H. и др., 1981).

Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии и профилактике, позволяющей значительно снизить наносимый ими экономический ущерб (Дым-ко Е.Ф., 1992; McKercher S., 1978). Для этого используют различные фармакологические средства.

Однако их эффективность в последнее время значительно снизалась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пассажирования и усиления их вирулентных свойств. Устойчивые формы возбудителей, в качестве новой биологической популяции циркулируют в природе и инфицируют животных и птицу, что существенно затрудняет их терапию (Агроник С.Е., 1976, Антипенко В.П., Красильников А.П., 1982; Антипов В.А., 1978; Виолик Б.В., 1988; Дымко Е.Н, 1992, Завьянцев В.Е., 1977; Здева B.C. и др., 1970; Коняев М.Т. и др., 1979; Лебедева М.Н., Водопаева С.Д., 1972; Подкопаев В.М. и др., 1977; Светоч Э.А., Шунисов М.К., 1975; Тришкина Е.Т., 1975; Нечаева Л.А. и др, 1981; Auderson R.C. et al 1975; Benveniste R., Davis J., 1973; Chang W.H., Carter G.R., 1976; Clapper W.E. et al., 1956).

В условиях интенсификации животноводства и перевода его на промышленную основу возрастает роль и значение новых инфекций со сложной этиологией, обусловленной повышением вирулентности условно-патогенных микроорганизмов, вирусов и грибов. Болезни чаще имеют общую симтоматику поражения респираторных путей и желудочно-кишечного тракта, приобретают характер смешанных бактериально-вирусных и грибных инфекций, отличающихся от классических форм проявления той или иной болезни с осложненным течением. Все это требует поиска и разработки новых химиотерапевтических средств с разным механизмом антимикробного действия, обладающих также противовирусной и противо-грибной активностью (Навашин С.М. Фомина И.П. 1982).

В связи с этим, является перспективным разработка лечебно-профилактических препаратов, обладающих комплексной фармакодинамикой, и в частности, проявляющих одновременно антимикробное, противовирусное, фунгицидное и противовоспалительное действие. К числу таких препаратов относятся органические соединения триазола, тиосемикарбазонового ряда, неприродных нуклеозидов, производных бензимидазола, циклических аминов (Потопальский А.И., Лозюк Л.В., 1996).

Наиболее перспективными оказались производные триазола и (3 - тио-семикарбазонов конденсированных гетероциклов (Лозюк Л.В., Онищук Ф.Д., 1997).

Наряду с этим широкое применние в ветеринарии и медицине нашли бичетвертичные соединения аммония (этоний, тионий, додецоний и др.), обладающих одновременно антимикробной активностью и моющими свойствами. Данные компоненты в сочетании друг с другом проявляют синергиче-ское действие.

Лозеваль и изатоний получают путем последовательного растворения морфолиния (3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетил). или метисазона этония (1,2-этилен-бис-аммония дихлорид) поверхностно активного вещества в растворителе 25% раствора диметилсульфоксида (ДМСО) в полиэтиленгликоле (ПЭГ)-400.

При изучении биологической активности лозеваля и изатония установлено, что препараты обладают выраженными антимикробными свойствами по отношению к кишечной палочке, золотистому стафилококку, сальманел-лам. стрептококку и менее активен к протею, значительным противовирусным действием по отношению к вирусу возбудителю оспы кроликов, вирусу гриппа А, вирусу инфекционного ларинготрахеита кур и др.

Наряду с этим препараты, особенно лозеваль обладают выраженным фунгицидным действием против целого ряда грибов - возбудителей микозов и дерматомикозов.

Препараты проявляют и определенную химиотерапевтическую активность при пероральном введении при экспериментальной стафилококковой и эшерихиозной септицемиях. Они обеспечивали 100% выживание инфицированных стафилакокком мышей при внутреннем введении 440 мг/кг. ЕД50 ло-зеваля при заражении белых мышей летальной дозой золотистого стафилококка составила 275±3,92 мг/кг. Эти показатели в отношении эшерихиозной септицемии были соответственно 520 и 380±12,4 мг/кг.

При определении динамики развития инфекционного процесса и освобождения организма от патогенных бактерий, показало, что обработка инфицированных животных лозевалем не дала полного стерилизующего эффекта. Количество живых бактерий, выделенных из селезенки через 24 часа после заражения мышей и введения им препарата составила от 103-Т05, против 10бп

10 у интактных животных.

Полное освобождение организма от бактерий происходило в течение 89 суток, тогда как в контроле их выделяли даже спустя 10 дней.

Антимикробная активность этония в отношении указанных штаммов проявлялась в концентрации 125-250 мкг/мл, а сочетание морфолиния с ДМСО - 250-1000 мкг/мл.

Таким образом, антимикробная активность лозеваля и изатония была достаточно высокой, в то время как отдельно взятые составляющие его компоненты, были низкоактивными. Это свидетельствует об усилении активности препарата при сочетанном использовании его инградиентов и синергизме их действия.

Штаммы микроорганизмов при воздействии на них лозеваля и изато-ния, медленнее чем к другим препаратам (ампицилин, левомицетин) привыкают к лозевалю. При изучении развития устойчивости золотистого стафилококка, кишечной палочки и салмонеллы, установлено, что только полевой штамм кишечной палочки Е.сой 51к смог выработать устойчивость штаммов, но тем не менее, чувствительность оставалась достаточно высокой. В то же время привыкание к ампицилину и левомицетину у отдельных штаммов стафилококка и кишечной палочки вырабатывалась к 10-15 пассажу, у салмонеллы к 10-му.

В экспериментах при изучении специфической противовирусной активности лозеваля в опытах на модели осповакцинального процесса у кроликов установлено защитное действие препарата при его профилактическом применении при воздействии концентрации вещества 1,25, 2,5 и 5 мг/л.

При этом отмечено торможение развития процесса независимо от способа применения препарата. Пустулы образовывались лишь к 6-7 дню, мелкие подсыхали на 9-й день, а к 10 дню, образовавшиеся корочки отпадали. Интенсивность кожных поражений по отношению к контролю составляла лишь 40,7%.

Аналогичные результаты были получены и при применении препаратов методом апликаций. В контрольной группе (без применений препарата) отмечалась 100% интенсивность кожных поражений, их размеры составляли в среднем 128,1 мм, клинически проявления регистрировали уже на 9-й день опыта, отпадение же корочек происходило на 12-й день эксперимента. Под воздействием лозеваля повышалось содержание эритроцитов и происходила нормализация количества лейкоцитов. При этом побочных явлений, в результате применения препарата не отмечено.

Вирулицидное действие препаратов подтверждено и в экспериментах по его влиянию на течение инфекции вызванное герпес вирусом штамм ЦНИГП, в системе (куриный эмбригюн+вирус инфекционного ларинготра-хеита).

Защитное действие лозеваля при применении с профилактической целью проявлялось в 47-69% случаев, при одновременном введении препарата и вируса репродукция вируса предотвращалась в 66-69%, а при предварительном введении препарата, в среднем - 47-61%.

Введение лозеваля в биосистему спустя 3 часа после инфицирования обеспечило эффект в 61-64%, применение же его через 24-48 часов оказалось эффективным лишь в 38-48%.

Наиболее эффективным оказалось аэрозольное применение препарата в дозе 60 мг на 1 м3 камеры (16,6%). При пероральном введении эффективность составила 33,3%.

Наименьшей активностью препарат обладал при одновременном аэрозольном и пероральном введении в половинных дозах.

Изучение вируснейтрализующей активности сыворотки крови контрольных и опытных цыплят показало, что вируснейтрализующие антитела при применении лозеваля возрастают в значительной степени.

При изучении антигрибной активности лозеваля в отношении 78 штаммов 11 видов аскомицетов и дрожжеподобных грибов рода Candida, Criptacoccus, Geotrichum и Aspergillus, установлено выраженное фунгиста-тическое действие препарата.

При этом лозеваль обладал достаточно высокой активностью, которая проявлялась по отношению к Candida в концентрации 37,5-300,0 мкг/мл, Aspergillus и Geotrichum - 37,5-150,0. Криптококки оказались наиболее устойчивыми и они были чувствительны к препарату в концентрации 150600 мкг/мл.

Механизм протививирусной активности исследованных препаратов связан с угнетением вирусной ДНК полимеразы. вирусных антигенов, про-лиферативной активности клеток, снижения синтеза клеточной ДНК, РНК и белка.

Препараты препятствуют включению в процесс синтеза 3Н-тимидина, 3Н - уридина. 14С - гидролизата белка.

Токсикологическими исследованиями на лабораторных, сельскохозяйственных животных и птице установлено, что лозеваль и изатоний являются малотоксичными препаратоми.

Лозеваль при внутреннем назначении больным мышам и крысам оказался малотоксичным препаратом. Его ЛД50 составила соответственно 37503950 мг/кг массы и 10000 мг/кг. Испытание препарата на телятах также подтвердили его малую токсичность. При этом летальная доза вызывающая гибель 50% телят при внутреннем применении составила 12500 мг/кг массы.

ЛД50 для мышей при внутрибрюшинном введении составляет 1200, а белых крыс 2000 мг/кг.

Клиническая картина отравления животных сопровождалась угнетением общего состояния, одышкой и остановкой дыхания. Паталогоанатомиче-ская картина павших животных характеризовалась отеком внутренних органов.

Длительное многократное назначение препаратов внутрь, внутри-брюшшинно и аэрозольно в терапевтических и субтоксических дозах не оказывает выраженного токсического влияния. На протяжении всего срока эксперимента животные и птица оставались подвижными, с сохраненным аппетитом и удовлетворительным общим состоянием. Колебания температуры тела, пульса, и частота дыхания как у опытных, так и у контрольных животных были схожими и оставались в пределах физиологических границ на протяжении всего срока эксперимента. При этом нарушений функциональной деятельности органов центральной неврной системы, сосудистой системы, периферических нервных структур не происходит. Не отмечается серьезных отклонений и основных морфобиохимических показателей периферической крови.

Препараты не влияют отрицательно на красное и белое костномозговое кроветворение и лимфопоэз, что свидетельствует об отстутствии их гемоток-сического действия.

Процессы пищеварения и мочеотделения под влиянием различных доз лозеваля и изатония протекали нормально и существенно не отличались от таковых контрольных животных. При этом различий физико-химического состава фекалий и мочи у опытных и контрольных животных не установлено. Эти показатели были характерными для данного вида животных.

Результаты проведенных исследований показали также на отсутствие нарушений протеино-синтетической, пигмент- и ферментообразующей функции печени. Так. количественное содержание билирубина, грубодис-персных бежов сыворотки крови, ферментов АлАТ и АсАТ у телят опытной и контрольной групп было одинаковым.

Взвешиванием внутренних органов (сердца, печень, почки, тонкий и толстый кишечник) установлено, что средняя масса опытных животных существенно не отличалась от таковых животных контрольной труппы с незначительным увеличением массы печени и кишечника.

Длительное назначение препаратов беременным животным не влияло отрицательно на течение беременности и процесса оплодотворения, в т.ч. на эмбриональное развитие и в постнатальный период жизни плодов.

Воспроизведением у кроликов с помощью препаратов местной аллергической реакции методом спецификационного теста и анафилактического шока не установлено его аллергизирующего действия.

При вскрытии и наружном осмотре животных убитых после применения им препаратов, не выявлено видимых изменений покровных тканей и внутренних органов. Гистологические исследования последних также не показали изменений их структуры, что свидетельствует об отстуствии токсического действия на органы и ткани животных.

При ветеринарно-санитарной оценке мяса животных и птицы получавших лозеваль и изатоний, по всему комплексу физико-биохимических показателей, не установлено отрицательного действия на качество и вкусовые свойства мяса. Микробиологически е характеристики последнего у опытных животных не отличались от животных в контроле. Проведенными исследованиями установлено и отсутствие серьезных различий аминокислотного состава мяса между животными и птицей получавших лозеваль, изатоний и контролем.

Фармакологическими исследованиями показано, что фармакодинами-ка препаратов обусловлена выраженной антимикробной, антивирусной и противогрибной активностью, а также положительным влиянием на отдельные механизмы общей не специфической резистентности. Препараты, проявляют определенное противовоспалительное действие, которое выражается в предупреждении или уменьшении воспалительного отека, некоторого снижения проницаемости кровеносных сосудов, а также стимуляцию регенеративных процессов в форме активизации лимфо-гистиоцитарных клеток, ускорение заживления раневого процесса.

Фармакокинетика препаратов характеризуется быстрым всасыванием в желудочно-кишечном тракте и после аэрозольного применения распределением в крови и внутренних органах и последующим выведением из организма. При этом основная масса активно-действующих веществ морфолиний и метисазон выводится с мочей в первые 3-6 часов. Через 12 часов в органах и тканях обнаруживаются их следы, а через 24 часа они выводится полностью.

Многочисленными клиническими испытаниями установлено, что препараты обладают выраженной лечебной и профилактической активностью при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных и птицы.

Отработанные в предварительных экспериментах, с учетом терапевтической и экономической эффективности и токсических свойств лозеваля установлено, что оптимальная терапевтическая доза препаратов является 1,5-2 мл на 10 кг массы при двукратном ежедневном внутреннем назначении до выздоровления, а профилактическая - 1 мл на 10 кг массы тела животного при однократном ежедневном его назначении в течение от 2 до 10 дней при разных показаниях.

Профилактическая эффективность лозеваля при диспепсии и гастроэнтерите телят составила 81,9-84,6%, а при гастроэнтерите поросят - 94%, гастроэнтерите птицы (цыплят) - 98-99,6% и гастроэнтерите норок и нутрий-100%. При сравнении препарата с другими лекарственными средствами его действие было выше.

Эффективность препарата лозеваль при профилактике колибактериоза телят и поросят также дизентерии поросят и сальмонеллезе цыплят оказалась высокой и составила 87-100%.

Лечебная эффективность препарата при диспепсии телят и гастроэнтеритах поросят составила 91-100%. Выздоровление больного молодняка наступало на 3-5-й дни лечения. Лозеваль обладал высокой эффективностью и при лечении цыплят бройлеров, которая составила 98-99,6%.'

Лозеваль был эффективным при респираторных заболеваниях молодняка крупного рогатого скота (бронхопневмонии и парагриппа-3). Так, при ингаляционном назначении препарата при парагриппе-3 и бронхопневмонии, его лечебное действие составило 97.3-100%.

Использование препарата лозеваль в хирургической патологии и, в частности, при артритах крупного рогатого скота травматической этиологии, при местном и комплексном его назначении, препарат оказался эффективным в 100% случаев.

Применение препарата в акушерско-гииекологической практике при эндометрите и мастите коров было положительным и составило при эндометрите 91-96° о и мае гиге 84.3? о.

Испытания препарата в качестве лечебного средства при смешанной бактериальной инфекции норок (пастереллез, салмонеллез, эптеротоксемия) показали его высокую лечебную эффективность составившую 95,9%,

При смешанной же инфекции нутрий пастереллез стрептококкоз препарат оказался эффективным в 93-98,296 случаев.

Назначение препарата больным и здоровым животным и птице с целью профилактики и лечения заболеваний способствовало улучшению их общего состояния и аппетита, быстрому исчезновению клинических признаков того или иного заболевания, нормализации функций пораженных систем и органов, снижению процента заболеваемости и отхода, лучшему росту и развитию животных и птиц. При этом пробочных явлений от применения препарата, как больным, так и интактным животным не регистрировали.

По всем опытным группам среднесуточный прирост массы тела животных и птицы превосходил показатели контрольных групп в среднем на 844%.

Применение лозеваля в профилактических и лечебных целях при самых различных заболеваниях отмечено положительное влияние его на кровь, при этом отмечено его положительное действие на различные морфо-иммуно-биохимические показатели, в том числе на эритрогемопоэз, в отдельных сериях опытов показатели белкового обмена и. в частности, общего белка и у-глобулиновой фракции сыворотки крови, а также усиления фагоцитоза микроорганизмов нейтрофилами и увеличение числа фагоцитирующих лейкоцитов,

В результате комиссионных клинических испытаний лечебно-профилактической эффективности лозеваля и изатоиия проведенных в условиях целого ряда животноводческих и птицеводческих хозяйств Тбилисского.

Тимашевского, Отрадненского, Лабинского, Выселковского и других районов Краснодарского края. Ростовской области. Ставропольского края и других регионов страны подтверждена высокая эффективность препаратов в различных показаниях, в т.ч. инфекционном ларинготрахеите, болезни Гамборо, микоплазмозе, колибактериозе и аспергилезе кур.

Кроме того показано высокое лечебное и профилактическое действие препаратов при других желудочно-кишечных респираторных, хирургических и акушерско-гинекологических заболеваниях крупного рогатого скота, свиней, пушных и мелких животных, пчел по сравнению с препаратами сравнения и негативным контролем.

При этом препараты способствовали быстрому улучшению общего состояния и аппетита животных, исчезновению клинических признаков заболевания, восстановлению продуктивности животных, повышению их резистентности, ускорению роста и развития.

При этом каких-либо побочных и токсических явлений препараты не оказывали.

Применение лозеваля и изатония экономически выгодно. Экономическая эффективность их использования при различных заболеваниях животных составляет от 3 до 8 рублей на один рубль затрат.

Промышленное производство препаратов осуществляется АО «Биостим» г. Сочи.

Широкие производственные испытания проведенные в условиях животноводческих и птицеводческих хозяйств Краснодарского и Ставропольского краев, Ростовской области и других регионов Северного Кавказа подтвердили их высокую эффективность при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных и птицы. При этом лечебно-профилактическая эффективность препаратов, в основном, совпала с результатами экспериментальных испытаний.

Применение лозеваля регламентируется Наставлениями по его применению, утвержденного в установленном порядке Департаментом ветеринарии МСХиП РФ № 13-5-2/1089 от 24.11.97 г.

Таким образом, препараты лозеваль и изатоний являются малотоксичными и эффективными средством, обладающим разносторонним фармакологическим действием в том числе, комплексной антимикробной, противовирусной и антигрибной активностью с высокой лечебно-профилактической эффективностью при многих заболеваниях сельскохозяйственных животных и птицы различной этиологии.