Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологические свойства суспензии на основе триклабендазола и её терапевтическая эффективность при фасциолёзе крупного рогатого скота

На правах рукописи

Напалкова Вера Владимировна

Фармако-токсикологнческие свойства суспензии на основе триклабендазола и её терапевтическая эффективность при фасцнолёзе крупного рогатого скота

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

О 5 ДЕК 2008

Москва 2008

003454246

Работа выполнена в отделе качества и стандартизации лекарственных средств для животных и биологически активных препаратов Федерального государственного учреждения Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, на базе ОПХ «Манихино» (ФГУ «ВГНКИ») Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору (Россельхознадзор) Министерства сельского хозяйства Российской Федерации и животноводческих хозяйствах РФ.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Владислав Евгеньевич Абрамов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Тамара Самуиловна Новик (ВИГИС)

Кандидат ветеринарных наук Елена Владимировна Лысенко

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

[« № » декабря 2008 года в /^""^часоЕ

Защита диссертации состоится <уС ' » декабря 2008 года в часов на заседании диссертационного совета Д 220.011.01. при Федеральном государственном учреждении «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»), Адрес: Россия, 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, д.5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ВГНКИ».

Автореферат разослан 2008 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, доцент, > ^У^Р Заслуженный ветеринарный врач РФ ^ йз Ю.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одним из наиболее опасных гельминтозных заболеваний, наносящий огромный экономический ущерб животноводству, является фасциолёз крупного рогатого скота.

Ущерб от фасциолеза крупного рогатого скота складывается за счет снижения молочной и мясной продуктивности, выбраковки пораженной паразитами печени, ухудшения качества продукции (A.M. Сазанов, 1991; П.П. Диденко, 1993; Р.Т. Сафиуллин, 2002 и другие).

Литературные данные свидетельствуют о том, что фасциолёз широко распространён во многих странах мира и является частью мировой экологической и продовольственной проблемы, рассматриваемой ФАО, ВОЗ, МЭБ. На территории Российской Федерации и стран СНГ показатели заражённости крупного рогатого скота в зависимости от климато-географических зон составляют от 3,6% до 37,0% и более (В.В. Горохов, 1989; В.А. Душкин,1995; В.В. Кузьмичёв, 1997).

Актуальность этой проблемы объясняет то неослабевающее внимание, которое уделяют отечественные и зарубежные исследователи совершенствованию мер борьбы с фасциолезом, включая разработку новых аитигельминтных средств (С.В.Березкина, 1992; И.А.Архипов, 1998; I. Fairweather; J.С. Вогау,1999).

В настоящее время для борьбы с фасциолезом жвачных животных используется значительное количество аитигельминтных средств разной химической природы. Так, выраженным трематоцидным действием обладают замещённые фенолы (нитроксинил), салициланилиды (оксиклозанид, рафоксанид, клозантел), бензимидазолы (альбендазол), сульфонамиды (клорсулон), хлорированные углеводороды (гексихол, политрем, куприхол, антитрем), дифенилсульфиды (битионол) (М. Davis, 1966; W.H. Jones, 1966; Н. Mrozik et al., 1969; Van de Bosche et al„ 1979; R.A. Knight, M. Colglazier, 1976; D.A. Ostlind et al., 1977; Т.П. Веселова, И.А. Архипов, М.Б. Мусаев, 1995; Т.П. Веселова, М.В, Дорошина, И.А.Архипов, 1987; А.К. Журавец, 1968).

Большинство препаратов указанных химических групп, применяемых в ветеринарии, вызывая гибель половозрелых гельминтов, как правило, не эффективны при острой форме фасциолёза, вызванной миграцией и проникновением в печень большого количества молодых фасциол, которые травмируют стенки кишечника, сосуды и печень, вызывая кровоизлияния и воспалительные процессы, способствуют проникновению в органы и ткани патогенной микрофлоры.

Учитывая это, перспективным направлением в изыскании новых фасциолоцидных средств является разработка аитигельминтных препаратов эффективных как против половозрелых, так и юных форм трематод.

Одним из соединений, обладающих выраженной фасциолоцидной активностью, является триклабендазол, синтезированный учеными фирмы «Сиба-Гейги» (Швейцария). Триклабендазол активен как против половозрелых (имагинальных), так и против ранних и поздних преимагинальных форм развития фасциол, что выгодно отличает его от других аитигельминтных средств (Т.М. Craig, R.L. Huey, 1984; J.C. Boray, R. Jackson, M.B. Strong, 1985; G.L. Puente, 1997; J.R. Claxton et al., 1998).

Наряду с использованием высокоактивных действующих веществ, существенное значение для успешного проведения противопаразитарных лечебно-профилактических мероприятий, имеет и лекарственная форма препарата.

При разработке лекарственной формы необходимо обеспечить совместимость используемых компонентов, подобрать вспомогательные ингредиенты, способные повысить эффективность действующего вещества, оказать положительное влияние на процессы всасывания и элиминации, не вызвать патологические процессы в организме животного (И. А. Архипов, 1975,1976).

В последнее время наиболее широко используются лекарственные формы для индивидуального применения животным. Преимущества таких форм антигельминтных препаратов заключаются в том, что дегельминтизации подвергаются все животные в стаде, точно рассчитывается терапевтическая доза для обеспечения максимального антигельминтного эффекта, отсутствие побочных явлений и осложнений у животных, снижается риск загрязнения препаратом объектов внешней среды (Архипов И.А., 1975; Мусаев М.Б., 1991).

Учитывая это, мы сочли целесообразным разработать и предложить для дегельминтизации крупного рогатого скота новый отечественный трематодоцидный препарат на основе триклабендазола в форме суспензии для перорального применения.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии нового отечественного антигельминтного средства на основе триклабендазола, предназначенного для лечения и профилактики фасциолеза крупного рогатого скота.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- разработать состав антигельминтного средства для перорального применения на основе триклабендазола;

- изучить острую и субхроническую токсичность, эмбриотоксические и тератогенные свойства, сенсибилизирующее и местно-раздражающее действие Триклабендазола суспензии 5% в опытах на лабораторных животных;

- исследовать влияние на организм крупного рогатого скота Триклабендазола суспензии 5 % при ее применении в терапевтической и повышенных дозах;

- изучить фармакокинетику триклабендазола в плазме крови бычков после применения Триклабендазола суспензии 5%;

- определить сроки выведения остаточных количеств триклабендазола из органов и тканей бычков после дегельминтизации Триклабендазола суспензией 5%;

- определить антигельминтную активность Триклабендазола суспензии 5% в отношении имагинальных и преимагинальных фаз развития фасциол;

- испытать в условиях производства Триклабендазола суспензию 5% при остром и хроническом течении фасциолеза крупного рогатого скота;

- разработать и представить для согласования и утверждения в установленном порядке проект инструкции по применению Триклабендазола суспензии 5% для лечения и профилактики фасциолеза крупного рогатого скота.

Научная новнзна Впервые разработано отечественное антигельминтное лекарственное средство - Триклабендазола суспензия 5%, изучены его фармако-

токсикологические свойства, фасциолоцидная активность в отношении имагинальных и преимагинальных фаз развития гельминтов и терапевтическая эффективности при фасциолезе крупного рогатого скота. Установлены особенности распределения, накопления и сроки выведения остаточных количеств триклабендазола из организма крупного рогатого скота после применения Триклабендазола суспензии 5%. В условиях животноводческих хозяйств подтверждена терапевтическая эффективность и целесообразность применения препарата при остром и хроническом течении фасциолеза крупного рогатого скота.

Практическая значимость. Для применения в ветеринарии предложен новый высокоэффективный трематодоцидный препарат, определены оптимальные дозы и схема его применения для лечения острой и хронической формы фасциолеза крупного рогатого скота. Экспериментально установлен срок выведения остаточных количеств триклабендазола из организма крупного рогатого скота после дегельминтизации предлагаемым лекарственным средством.

На основании результатов исследований и обобщения полученных данных разработан проект инструкции по применению Триклабендазола суспензии 5% для лечения и профилактики фасциолеза крупного рогатого скота, который представлен для утверждения в установленном порядке.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на:

- научной конференции профессорско - преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПБ ГАВМ, (г.Санкт - Петербург, 2004 г.);

- научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2005 г., 2006 г.);

- заседаниях Ученого совета ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (г. Москва, 2004 г., 2005 г., 2006 г., 2007 г.);

Основные положения, выносимые на защиту:

- характеристика фармако-токсикологических свойств Триклабендазола суспензии 5% по результатам опытов на лабораторных животных и крупном рогатом скоте;

- результаты изучения фармакокинетики и определения сроков выведения триклабендазола из организма крупного рогатого скота после применения Триклабендазола суспензии 5%;

- результаты изучения фасциолоцидной активности и терапевтической эффективности при фасциолезе крупного рогатого скота Триклабендазола суспензии 5%;

- практические предложения по применению Триклабендазола суспензии 5% при остром и хроническом течении фасциолеза крупного рогатого скота;

Публикации. По теме диссертации опубликовано _5_ печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений, списка литературы. Работа иллюстрирована 50 таблицами, 5 графиками и 2 рисунками. Список литературы содержит 235 источников, в том числе 128 иностранных. Приложение на 7 листах.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Экспериментальная часть работы выполнена в 2003-2008 г.г. в отделе качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств для животных ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», ОПХ «Манихино» (ФГУ «ВГНКИ»), а также в животноводческих хозяйствах разных климатических зон России.

Объектом исследований служило разработанное нами антигельминтное средство - Триклабендазола суспензия 5%.

Фармако-токсикологические свойства Триклабендазола суспензии 5%, изучали в опытах на 124 белых мышах, 126 крысах, 12 морских свинках, 12 кроликах, 20 коровах и 12 бычках.

Противопаразитарную эффективность в условиях производства испытали на 410 головах крупного рогатого скота, спонтанно инвазированного фасциолами разного возраста.

Для стандартизации и контроля качества антигельминтного препарата, определения сроков его хранения нами были предложены методы исследования качества препарата в соответствии с требованиями, предъявляемыми Государственной фармакопеей (XI издание) к суспензиям, включающее: определение внешнего вида и цвета суспензии, её плотности и седиментационной устойчивости, рН, определение массовой доли и подлинности триклабендазола, определение микробиологической чистоты.

Метод определения подлинности триклабендазола с использованием ВЭЖХ одновременно является методом его количественной оценки. Совпадение времени выхода пика триклабендазола на хроматограммах испытуемого образца со временем выхода пика на хроматограммах стандартного образца триклабендазола является подтверждением его подлинности.

Определение плотности, рН, седиментационной устойчивости, микробиологической чистоты проводили по методикам, изложенным в XI издании Государственной фармакопеи.

Изучение стабильности препарата проводили в условиях естественного хранения при комнатной температуре в течение 2 лет.

Исследование токсикологических свойств Триклабендазола суспензии 5% препарата проводили в соответствии с методическими рекомендациями Фармакологического Государственного комитета «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000).

Острую токсичность препарата изучали на 84 белых мышах обоего пола, массой 19-21 г, которых получили из питомника «Филиал Андреевка ГУ НЦ биомедицинских технологий РАМН». Суспензию вводили в желудок с помощью металлического зонда с оливой в дозах 8000 - 60000 мг/кг однократно или дробно в два приёма с интервалом 30 мин. Наблюдения за клиническим состоянием животных проводили в течение 14 суток, учитывали количество погибших животных, характер и степень токсического действия, рассчитывали основные токсикологические параметры: ЛД0, ЛД16, ЛД50, ЛДв4, ЛДюо, используя методы

Кербера и Першина, Миллера-Тейитера (М.Л.Беленький 1963; М.Д. Машковский,1971). Оценку степени опасности лекарственного средства проводили согласно ГОСТ 12.1.007-76.

Субхроническую токсичность препарата изучали на 40 белых мышах, исходной массой 19+23 г, разделенных на равноценные опытные и контрольную группы. Подопытным животным ежедневно в течение 15 суток суспензию вводили в желудок в дозах, соответствующих 1/5, 1/10 и 1/20 от ЛД^0, установленной в остром опыте, контрольным животным вводили 1% крахмальный клейстер в объеме 0,5 мл. Ежедневно регистрировали массу мышей, выявляли наиболее чувствительные к триклабендазолу органы и системы организма, характер, степень и обратимость патологических изменений. На 16 сутки мышей декапитировали и брали пробы крови для исследования гематологических и биохимических показателей, извлекли внутренние органы и определили их относительную массу (коэффициенты).

О состоянии гемопоэза судили по количеству эритроцитов, лейкоцитов, лейкограмме и содержанию гемоглобина. Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ), содержание пировиноградной кислоту (ПВК), молочной кислоты определяли в сыворотке крови на биохимическом анализаторе «Зреко! 220/221» (Германия).

Для выявления возможного гепатотоксического действия препарата на 36 белых крысах-самцах проводили исследование детоксицирующей функции печени с использованием метода гексеналовой пробы (ДГ. Розин, 1964). Подопытным животным вводили однократно суспензию триклабендазола в дозе 36 мг/кг массы по ДВ. Через 1,5; 3 и 6 часов животным опытной и контрольной групп внутрибрюшинно вводили 0,2% раствор гексенала в дозе 60 мг/кг массы животного. Учет времени сна начинали с момента развития бокового положения до первых попыток крыс изменить положение на «спиной вверх».

Для определения массового коэффициента печени через 1, 3 и 7 сутки белых крыс опытной и контрольной групп декапитировали, вскрывали брюшную полость и извлекали печень. Полученные результаты обрабатывали методом Фишера-Стьюдента (В.Ю. Урбах, 1963).

Местно-раздражающее действие препарата изучали в опытах на 6 кроликах. Для оценки действия на кожу Триклабендазола суспензию 5% в дозе 1 мл наносили на выстриженный участок кожи боковой поверхности туловища кроликов, слегка втирая в кожу, а через 4 часа смывали тёплой водой без мыла. Аппликации осуществляли на протяжении 4 недель по 5 раз в неделю. Контрольным животным наносили дистиллированную воду.

Реакцию кожи учитывали ежедневно, используя шкалу кожных проб по С.В.Суворову (1974).

Раздражающее действие на слизистые оболочки изучали при внесении Триклабендазола суспензии 5% в конъюнктивальный мешок левого глаза кроликов, правый глаз служил контролем (вносили физиологический раствор). Оценку действия проводили через 15 минут, 2 часа (быстрая реакция) и через 24 -48 часов (гиперчувствительность замедленного типа) по изменению кровенаполнения конъюнктивы, наличию лакримации и состоянию роговицы.

Изучение аллергизирующего действия препарата проводили на 12 морских свинках методом гистаминного шока (М.Л. Гершанович, 1954).

Сущность метода заключается в том, что у морских свинок подкожным введением гистамина в дозе 5 мг/кг вызывают гистаминовый шок, который заканчивается смертью животного. Если тестируемый препарат обладает антигистаминным действием, то предварительное его введение должно предотвратить гибель животного от гистамина, в противном случае смерть животного наступает в более короткие сроки.

Подопытным морским свинкам вводили Триклабендазола суспензию 5% пероралыю в дозе 12 мг/кг массы, контрольным животным препарат не применяли. Через 6 и 12 часов одновременно как подопытным, так и контрольным морским свинкам вводили подкожно гистамин в дозе 5 мг/кг и проводили наблюдение, отмечая гибель животных.

В основу выявления возможного тератогенного и эмбриотоксического действия препарата были положены «Методические рекомендации по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств» (МЗ РФ, 1986 г.) и «Методические указания по тестированию тератогенной активности химических веществ» (Дыбан и др., 1970).

Эксперименты провели на 72 беременных самках белых крыс с установленным сроком начала беременности, которых разделили на 6 групп (3 контрольных и 3 опытных). Препарат вводили крысам внутрижелудочно в трёхкратной терапевтической дозе - 36 мг/кг массы животного (по ДВ) по следующей схеме: с 1 по 7 сутки беременности (ежедневно); с 8 по 14 (ежедневно) и с 1 по 19 сутки беременности (ежедневно). Учёт результатов эксперимента проводили после декапитирования подопытных и контрольных крыс на 20 сутки беременности. При вскрытии в яичниках подсчитывали количество резорбций, жёлтых тел, в матке - число мест имплантаций, живых и погибших плодов. Оценивали анатомическое строение и определяли массу и размеры плодов.

Полученные данные обрабатывали статистически методом Стьюдента -Фишера с использованием коэффициента С.И.Ермолаева. Достоверность разности между контролем и опытом определяли с помощью критерия Стьюдента.

Влияние Триклабендазола суспензии 5% на организм крупного рогатого скота изучали на базе АО «Красный доброволец» Смоленской области на 20 коровах чёрно-пёстрой породы в возрасте 4-7 лет Препарат животным опытных групп вводили однократно пероралыю: в терапевтической дозе - 12 мг/кг, трёхкратной терапевтической дозе - 36 мг/кг и в пятикратной терапевтической дозе 60 мг/кг по ДВ. Оценку действия препарата проводили по результатам клинических исследований, анализа крови и мочи подопытных и контрольных животных. Обследование животных и отбор проб крови и мочи проводили за сутки до и через 1, 3 и 5 суток после введения препарата в утренние часы до кормления животных.

Морфологический и биохимический анализы крови и мочи проводили общепринятыми методиками, а также на анализаторах марок «Sinchron-4», «Lyasys», «ELAN-Analyzez 4145».

Фармакокинетику триклабендазола в плазме крови и его остаточные количества в органах и тканях изучали после однократного введения 12 бычкам массой 180 -200 кг Триклабендазола суспензии 5% в дозе 12 мг/кг (по ДВ).

Через 1; 4; 8; 12; 18; 24; 36; 48; 60; 72; 84; 96; 108; 120 часа после введения препарата у животных из яремной вены брали пробы крови в гепаринизированные

пластиковые пробирки, центрифугировали, отбирали плазму, в которой методом ВЭЖХ определяли содержание триклабендазола.

Полученные средние значения концентраций триклабендазола в плазме крови бычков подвергали фармакокинетической оценке методом последовательного логарифмирования в рамках однокамерной модели с учетом всасывания. Предел количественного определения триклабендазола в плазме крови составляет 0,2 мкг/мл.

Определения остаточных количеств триклабендазола в органах и тканях проводили после перорального введения препарата в терапевтической дозе 12 мг/кг. Через 7 и 14 суток после введения препарата убивали по 3 бычка, у которых в образцах печени, почек, лёгких, селезёнки, сердца и мышц определяли содержание триклабендазола методом ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием, используя методику Р.К. 8апуа1 (1994). Предел количественного определения триклабендазола в органах и тканях составлял 0,02 мкг/мл.

Трематоцидную активность и терапевтическую эффективность препарата при фасциолёзе крупного рогатого скота изучали на базе животноводческих хозяйств Ельниковского района Республики Мордовия, Павловского района Нижегородской области, Лаганьского района Республики Калмыкия в опытах на 106 коровах, спонтанно инвазированных фасциолами.

Определение оптимальной терапевтической дозы Триклабендазола 5% суспензии при остром фасциолезе крупного рогатого скота, вызванном РаБсю1а Ьераиса, проводили на 20 выбракованных коровах, при хроническом фасциолезе -на 40 выбракованных коровах. Коровам опытных групп препарат вводили индивидуально перорально в дозах: 10; 12 и 14 мг/кг массы по ДВ (соответственно 2,0; 2,4 и 2,8 мл препарата на 10 кг массы животного).

Испытание Триклабендазола суспензии 5% при фасциолезе крупного рогатого скота, вызванном И. gigant¡ca, проводили на 36 выбракованных коровах при введении препарата в дозе 12 мг/кг.

Оценку эффективности лекарственного средства проводили по результатам гельминтологических вскрытий печени после убоя животных через 7 дней после дегельминтизации и по результатам исследования проб фекалий крупного рогатого скота методом флотации до и через 30 дней после введения препарата, с использованием счетной камеры ВИГИС.

Расчет эффективности Триклабендазола суспензии проводили отдельно против молодых и взрослых фасциол по типу «контрольный тест» согласно Руководству, одобренному Всемирной Ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии (1995).

Комиссионное испытание препарата при фасциолезе крупного рогатого скота провели при участии специалистов государственной ветеринарной службы на базе СПК «Восход» Ельниковского района Республики Мордовия па 36 головах крупного рогатого скота, спонтанно инвазированных фасциолами. Опытным животным препарат вводили перорально в дозе 12,0 мг/кг по ДВ.

Производственное испытание препарата при фасциолезе крупного рогатого скота проводили в СПК «Комаровский» и СПК «Горбатовский» Павловского района Нижегородской области на 145 на 123 головах крупного рогатого скота. Препарат вводили животным индивидуально перорально однократно в оптимальной терапевтической дозе 12,0 мг/кг по ДВ, из расчёта 2,4 мл Триклабендазола суспензии 5% на 10 кг массы животного.

Антигельминтную эффективность препарата оценивали на основании результатов количественных копроовоскопических исследований всех животных до и через 25 дней после дегельминтизации по типу «критический тест» согласно Руководству, одобренному Всемирной Ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии (1994).

Результаты исследований

При выборе лекарственной формы и разработке рецептуры препарата на основе триклабендазола нами были подобраны малотоксичные вспомогательные вещества, позволившие получить стабильную суспензию для индивидуального перорального применения. Лекарственное средство представляет собой белую с сероватым оттенком жидкость со средней структурной вязкостью, содержащую в качестве действующего вещества субстанцию триклабендазола - 5%, а в качестве вспомогательных компонентов: твин-80 - 0,2%, сорбитол - 0,5%, желатин - 0,05%, сахароза - 10% и воду очищенную - до 100%.

Для характеристики качественных и количественных показателей антигельминтного препарата были предложены показатели и нормы, представленные в таблице 1.

Таблица 1

Показатели качества антигельминтного препарата на основе _триклабендазола._

Наименование показателя Требования

Внешний вид Суспензия, при хранении допускается расслоение, исчезающее при взбалтывании

Цвет Белая с сероватым оттенком

Плотность, г/см3 1,050- 1,10

Водородный показатель (рН) 5,5-6,5

Подлинность триклабендазола Время выхода пика образца должно соответствовать времени выхода пика стандарта

Содержание триклабендазола в 1 мл суспензии, мг 5,0 + 0,2

Седимептационная устойчивость, не менее, мин 60

Микробиологическая чистота, в 1 мл общее число аэробных бактерий (не более 103) общее число грибов (не более 10") при отсутствии Е. coli

При изучении стабильности опытной серии препарата в процессе естественного хранения установлено, что срок годности экспериментальной серии препарата составляет 2 года. В течение этого периода качественных и количественных изменений в составе препарата не происходит.

Токсикологические исследования

В результате изучения острой токсичности препарата на белых мышах (табл. 2) установлено, что согласно гигиенической классификации ГОСТ 12.1.007-76 по степени воздействия на организм лекарственное средство относится к 4 классу опасности - «вещества малоопасные»: 1ЛЭ5о при введении в желудок белым мышам составила 27000 + 2429 мг/кг.

Таблица 2

Параметры острой токсичности Триклабендазола суспензии 5%

при внутрижелудочном введении белым мышам _

ЬО0 (мг/кг) (мг/кг) 1^0 (мг/кг) Ь084 (мг/кг) ГО,«, (мг/кг)

8000 11500 27000 42500 60000

Клиническая картина интоксикации в основном проявлялась в кратковременном возбуждении, которое сменялось угнетением, отмечался отказ от корма, учащенное дыхание, нарушение двигательной активности, отсутствие реакции на внешние раздражители.

В субхроническом эксперименте при ежедневном введении в желудок белым мышам Триклабендазола суспензии 5% в течение 15 дней, в дозах 1/5, 1/10 и 1/20 от 1ЛЭ50 гибели животных, достоверных изменений в клиническом состоянии не выявлено.

Ведение суспензии в дозе 1/5 от ЬБы приводило к замедлению динамики прироста массы животного: процент прироста массы тела к исходной составил 112% по сравнению со 123% в контроле. В то же время при введении препарата в более низких дозах - 1/10 и 1/20 от 1^50 динамика прироста массы тела мышей практически не отличалась от динамики в контрольной группе (Р >_ 0,05).

Значения массовых коэффициентов сердца, легких, печени, почек и селезенки у мышей опытных и контрольной групп достоверно не отличаются друг от друга. Массовый коэффициент печени у мышей, которым препарат вводили в дозах 1/5; 1/10 и 1/20 от ЬО50, составил соответственно 57,47±0,84; 54,72±2,16 и 59,14+1,70 (в контроле - 58,49±3,02); почек - соответственно 13,4310,88; 11,23±0,46 и 12,18+0,52 (в контроле 11,78+0,31); легких - соответственно 8,9910,22; 8,0710,38 и 7,9010,49 (в контроле 8,2510,40).

При введении препарата в дозах 1/5 и 1/10 от ЬО50, имело место незначительное снижение концентрации гемоглобина, а в дозе 1/5 от ЬО50 — появление в лейкограмме палочкоядерных нейтрофилов. Другие тестированные показатели (количество эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, цветовой показатель, СОЭ) достоверных изменений не претерпели.

Суспензия в дозе 1/20 от ЬП50 не оказала достоверного влияния на все тестированные гематологические показатели: уровень гемоглобина, количество эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов и СОЭ составили соответственно 152,511,84; 8,7110,22; 323,0110,06; 7,4610,16 и 1,5010,17 против 153,313,13 (г/л); 8,5310,10 (102/л); 290,8+10,07 (Ю'/л); 7,50+0,15 (109/л) и 1,50+0,17 (мм/ч).

Во всех тестируемых дозах препарат не оказал достоверного влияния на концентрацию белка, холестерина, креатинина, а также активность ферментов аспартат- и апанинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, активность которых является показателем функционального состояния печени и почек.

При оценке детоксицирующей функции печени (табл.3) статистически достоверное увеличение продолжительности гексеналового сна было установлено через 3 часа после введения Триклабендазола суспензии 5% в дозе 36 мг/кг (3-кратная терапевтическая доза по ДВ), восстановление антитоксической функции печени выявлено через 6 часов.

Таблица 3

Влияние Триклабендазола суспензии 5% на антитоксическую функцию

печени крыс

Интервал после введения препарата, час Длительность гексеналового сна, мин Р

Опытная группа Контрольная группа

1,5 26,20+0,52 25,40+1,16 >0,05

3 28,42+2,25 24,20+1,22 <0,05

6 25,540+2,10 24,45+1,03 >0,05

Достоверное увеличение относительной массы печени у животных опытной группы было установлено через 1 сутки после введения препарата, через 7 суток указанный показатель у подопытных крыс не отличался от показателя животных контрольных групп (табл. 4).

Таблица 4

Влияние Триклабендазола суспензии 5% на массовый коэффициент печени крыс

Вводимая доза Период после Массовый

препарата, мг/кг введения препарата, коэффициент печени Р

(по ДВ) сутки

36 1 35,82+0,57 <0,05

36 3 31,23+0,26 >0,05

36 7 31,71+0,29 >0,05

контроль 1 32,63 ±1,48 -

контроль 3 33,10+1,31 -

контроль 7 32,00+0,93 -

Полученные результаты свидетельствуют о том, что Триклабендазола суспензия 5% оказывает кратковременное, слабо выраженное и обратимое влияние на обезвреживающую функцию и массовый коэффициент печени крыс.

Результаты изучения местно-раздражающего действия Триклабендазола суспензии 5% при нанесении на кожу и слизистые оболочки показали, что при 20-кратных аппликациях 5% суспензии препарата на кожу кроликам не отмечено каких-либо изменений в состоянии кожного покрова животных.

При инсталляции суспензии в конъюнктивальный мешок через 15 минут и 2 часа (быстрая реакция) наблюдалось слабое покраснение конъюнктивы, а через 2448 часов признаков раздражения слизистой оболочки глаз ни у одного из подопытных кроликов отмечено не было. Суммарный балл выраженности раздражающего эффекта составил 1 («слабое раздражение»).

Экспериментальные дачные по аллергизирующему действию на морских свинках, представленные в таблице 5, указывают на то, что препарат в рамках

стандартного протокола исследований аллергизирующими свойствами в терапевтической дозе не обладает антигистаминной активностью, так как не предотвращает, но и не ускоряет смерть животных от введённой дозы гистамина.

Таблица 5

Результаты изучения аллергизирующих свойств Триклабендазола

суспензии 5%

Группа животных Срок введения гистамина,после введения препарата, час Время наступления гистаминного шока, мин.

Опытная 6 19,3 + 0,24

Контрольная 6 19,0 + 0,25

Опытная 12 18,4 + 0,22

Контрольная 12 19,1 ±0,24

Примечание: разница в показателях животных обеих групп была не достоверной.

Анализ результатов изучения эмбриотоксического и тератогенного действия показал, что внутрижелудочное введение крысам Триклабендазола суспензии 5% в 3-кратной терапевтической дозе в различные сроки беременности, включая критические, а также на всём протяжении беременности, не оказывает отрицательного влияния на эмбриональное развитие плода.

Так, при введении антигельминтика с 1 по 7 дни беременности предимплантационная, постимплантациопная и общая эмбриональная смертность плодов, составили 12,63; 9,04 и 20,53% против соответствующих показателей в контроле 11,76; 7,78 и 18,63% (Р > 0,05) .При введении препарата в течение всей беременности предимплантационная смертность составила 9,90% против 7,77% в контроле; постимплантационная смертность - 6,94% против 6,32% в контроле; общая эмбриональная - 16,15% против 13,59% в контроле. Различия в данных показателях опытных и контрольных групп статистически не достоверны (Р>0,05).

Такие показатели, как масса, размеры, число плодов и плодоплацентарный коэффициент в опытных и контрольных группах также не имели статистических различий (Р>0,05).

При визуальном осмотре и микроскопическом исследовании плодов случаев уродств, аномалий развития внутренних органов не выявлено. При микроскопическом исследовании скелета плодов установлено, что применение препарата в различные периоды эмбриогенеза не вызывает нарушений процессов оссификации.

Результаты изучения влияния Триклабендазола суспензии 5% в терапевтической дозе и в дозах в 3 и 5 раз превышающих терапевтическую, на организм крупного рогатого скота показали, что показатели клинического состояния (тампература тела, частота сердечных сокращений и дыхательных движений, руминаторная активность) подиытных животных в течение всего периода наблюдения находились в пределах физиологической нормы и не отличались от контрольной группы.

Отсутствие токсического действия препарата в тестируемых дозах подтверждается результатами гематологических исследований. Количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина, лейкограмма у крупного рогатого скота после введения антигельминтного препарата в дозах 12 мг/кг, 36,0 мг/кг и 60,0 мг/кг (по ДВ) у подопытных животных были на уровне, близком к контролю (Р >0,05).

В результате исследований биохимических показателей крови было установлено, что после перорапьного введения препарата животным в трёхкратной и в пятикратной терапевтических дозах выявлено достоверное повышение активности аланинаминотрансферазы, концентрации общего билирубина и прямого билирубина, содержания креатинина и мочевины в 1-3 сутки после введения препарата. Восстановление указанных показателей до физиологической нормы происходило на 5 сутки. Таким образом, выявленные отклонения, вызванные препаратом в дозах 36,0 мг/кг и 60 мг/кг носят функциональный характер и являются проявлением реакции организма на введение чужеродного вещества.

На основании результатов проведенных исследований можно сделать обоснованный вывод о хорошей переносимости Триклабендазола суспензии 5% крупным рогатым скотом в терапевтической и в 5-кратной терапевтической дозах.

Изучение фармакокинетики триклабендазола в плазме крови бычков проведённые методом ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием (нижний предел определения 0,2 мкг/мл), показали, что триклабендазол всасывается в желудочно - кишечном тракте и уже через 1 час попадает в кровь. Максимальная концентрация триклабендазола в плазме крови бычков отмечена через 18 часов после введения препарата и составила 6,878 ± 0,254 мкг/мл, минимальная - 0,075 ± 0,167 мкг/мл через 96 часов (график 1).

График №1

Кинетика триклабендазола в плазме крови телят

Через 108 часов после обработки лекарственным средством триклабепдазол в плазме крови не обнаруживали.

Полученные средние значения концентраций триклабендазола в плазме крови бычков подвергали фармакокипетической оценке методом последовательного логарифмирования в рамках однокамерной модели с учётом всасывания, описываемой уравнением: С = А* (е"а( + е"(!'), где А = 0,7443; а = 0,00487; (3= 0,02421.

Результаты математической обработки данных динамики изменения концентрации триклабендазола в плазме крови бычков в рамках однокамерной модели со всасыванием (таблица 6) свидетельствуют, что после однократного пероралыюго введения бычкам Триклабендазола суспензии 5% в дозе 12 мг/кг массы тела (по ДВ) фармакокинетика данного соединения характеризуется медленным (1тах -18 ч) достижением максимальных концентраций (Ст„ - 6,18 мкг/мл). Площадь под фармакокинежческой кривой (А11С - 12209,0 мкг мин/мл) подтверждает, что фасциолоцид обладает длительным периодом всасывания из желудочно-кишечного тракта.

Таблица 6

Фармакокипетические параметры аптигельминтного препарата _на основе триклабендазола_

Фармакокипетические параметры Триклабепдазол

Среднее время полуабсорбции, t i/2at)s, min 286,245

Среднее время полуэлиминации, 11/2е|, min 1422,998

Константа абсорбции, Каь 0,00242

Константа элиминации, Kei 0,00049

Время достижения максимальной 1080

концентрации, tlrax, min

Максимальная концентрация, Стач, mkg/ml 6,18

Кажущийся объём распределения, Vd, ml 16818,618

Общий клиренс, Cl, ml/min 8.191

Площадь под фармакокинетической кривой, AUC, mkgmin/ml 12209,0

Результаты определения сроков выведения остаточных количеств триклабендазола из органов и тканей бычков после применения препарата представлены в таблице 7 и показывают, что:

Таблица 7

Содержание триклабендазола в органах и тканях крупного рогатого скота после

однократного пероралыюго введения препарата в дозе 12 мг/кг ДВ

Органы и ткани Сроки исследования (сутки)

7 14

Печень 0,182 + 0,024 нпо

Почки 0,242 + 0,027 НПО

Мышцы 0,206 + 0,022 нпо

Сердце 0,162 + 0,011 НПО

Легкие 0,112 + 0,013 НПО

Селезёнка 0,132_±0,034 НПО

нпо - ниже предела обнаружения

- период полного выведения триклабендазола из организма бычков составляет 14 суток (концентрация триклабендазола в этот период ниже предела чувствительности метода -ШЭ-0,02 м кг/мл).

- по уровню содержания триклабендазола на 7 сутки после обработки, в порядке убывания, располагаются следующим образом: почки > мышцы > печень > сердце > селезёнка > лёгкие.

Определение оптимальной терапевтической дозы Триклабендазола суспензии 5% при остром и хроническом фасциолезе, вызванном БаБсюк Ьера^са.

Результаты определения терапевтической дозы препарата при остром фасциолезе крупного рогатого скота по данным гельминтологических вскрытий свидетельствуют о высокой активности суспензии в отношении преимагинальных фаз развития фасциол. Применение препарата дозах 10; 12 и 14 мг/кг (по ДВ) показало соответственно 93,0; 98,4 и 100% эффект против неполовозрелых Б. Ьерайса. Так, как терапевтическая эффективность препарата в дозе 12 и 14 мг/кг практически находилась на одном уровне, дозу 12 мг/кг триклабендазола мы рекомендовали как оптимальную терапевтическую.

Результаты определения терапевтической дозы при хроническом фасциолезе крупного рогатого скота показали, что препарат в дозах 10; 12 и 14 мг/кг массы животного (по ДВ) оказывает соответственно 84,4; 96,4 и 100% эффективность против половозрелых фасциол, что позволяет рекомендовать дозу Триклабендазола суспензии 5% 14 мг/кг массы животного (по ДВ), как максимальную терапевтическую, а дозу 12,0 мг/кг массы животного (по ДВ), как оптимальную терапевтическую при хроническом фасциолезе крупного рогатого скота, вызванном Р. Ьера^са.

Испытание Триклабендазола суспензии 5% при фасциолезе крупного рогатого скота, вызванном Р. д^апИса, показало, что препарат в дозе 12 мг/кг (по ДВ) обеспечил 97,5% эффективность. При убое 3 животных контрольной группы в среднем обнаружили по 26,3±6,0 экз. взрослых и 6,6±1,7 экз. неполовозрелых фасциол; в опытной группе - 2 особи половозрелых фасциол Р. §1§ап1лса обнаружили в печени у 1 животного.

При испытании антигельминтной эффективности препарата в дозе 12 мг/кг массы тела (по ДВ) против Р. ЬераНса разного возраста через 7 дней после дегельминтизации было обнаружено в печени в среднем на одно животное 0,2 особи неполовозрелых и 0,4 особи половозрелых гельминтов.

Интенсэффективность дегельминтизации (ИЭ) составила 98,2 против имагинальных и 98,0 % против преимагинальных Р.Ьерайса.

Комиссионное испытание препарата. проведенное при участии представителей государственной ветслужбы на 36 головах крупного рогатого скота, спонтанно инвазированных Р^ера^са, подтвердило высокую антигельминтную эффективность препарата в рекомендуемой нами терапевтической дозе -12 мг/кг массы животного (по ДВ).

По результатам копрологических исследований препарата обеспечил 98,4% антигельминтный эффект (таблица 8).

Таблица 8

Результаты комиссионного испытания Триклабендазола суспензии 5% при __фасциолезе крупного рогатого скота__

Препарат Кол-во живот ных Доза по ДВ, мг/кг Освободилось от инвазии после лече- Среднее кол-во яиц фасциол в 1 г фекалий Эффективность, %

ния, голов ДО опыта после лечения

Триклабендазола суспензия 5% 18 12,0 15 149,8+7,6 2,4+0,4 98,4

Контроль 18 - 0 151,9+8,2 154,2+8,0 -

Производственное испытание Триклабендазола суспензии 5% проведено в январе 2008 года на базе СПК «Комаровский» и СПК «Горбатовский Нижегородской области на 145 и 123 головах крупного рогатого скота. Препарат применяли однократно индивидуально перорально в дозе 2,4 мл на 10 кг массы животного. Копрологическими исследованиями через 25 дней после дегельминтизации было установлено, что количество яиц фасциол после дегельминтизации снизилось на 98,7%, а экстенсэффективность дегельминтизации (количество свободных от гельминтов животных) составила 94,4 % (таблица 9).

Таблица 9

Результаты производственного испытания 5%-ной суспензии триклабендазола в дозе 12,0 мг/кг при фасциолезе крупного рогатого скота в хозяйствах Павловского

района Нижегородской области

Кол-во Из них Сред, кол-во яиц ээ, Снижение

Хозяйство животных заражено, голов фасциол % кол-ва яиц

в г фекалий фасциол,

до после до после %

опыта лечения опыта лечения

СПК

«Комаровский» 145 94 6 148,2+6,9 2,0+0,5 93,7 98,6

СПК

«Горбатовский» 123 86 4 150,4+7,2 1,6+0,4 95,3 98,9

Всего 268 180 10

В среднем: 149,3+7,0 1,8±0,4 94,4 98,7

Таким образом, на основании полученных нами экспериментальные данных по оценке фармако-токсикологических свойств и положительных результатов испытания антигельминтной эффективности в условиях производства, Триклабендазола суспензия 5% может быть рекомендована для дегельминтизации крупного рогатого скота при остром и хроническом течении фасциолеза, вызванного неполовозрелыми и половозрелыми гельминтами Р. Ьераг!са и Р. gigantica.

ВЫВОДЫ

1. Триклабендазола суспензия 5% в процессе естественного хранения при комнатной температуре в течение 2 лет не изменяет своих количественных и качественных показателей.

2. Триклабендазола суспензия 5% по параметрам острой токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к 4 классу опасности - «вещества малоопасные»: ЛД50 для белых мышей при введении в желудок составляет 27000 + 2429 мг/кг массы животного; не обладает сенсибилизирующим и местно-раздражающим действием на кожу, слабо и кратковременно раздражает слизистые оболочки глаз.

3 Триклабендазола суспензия 5% при введении белым мышам в желудок в течение 15 дней в дозах 1/20, 1/10 и 1/5 от ЛД50, не вызывает гибели животных и видимых изменений в их клиническом состоянии; в дозах 1/10 и 1/20 от ЛД^о-не вызывает достоверных изменений в приросте массы тела и относительной массе внутренних органов; в дозе 1/20 от ЛД50 - не вызывает достоверных изменений гематологических и биохимических показателей, а также необратимых нарушений функций печени и почек.

4. Триклабендазола суспензия 5% в опытах на белых крысах при введении в 3-кратпой терапевтической дозе оказывает слабовыражепное кратковременное и обратимое влияние на обезвреживающую функцию печени.

5. Триклабендазола суспензия 5% в 3-кратной терапевтической дозе не проявляет эмбриотоксического и тератогенного действия при ежедневном введении крысам на протяжении всей беременности, а также в критические периоды эмбриогенеза.

6. Триклабендазола суспензия 5% хорошо переносится крупным рогатым скотом в терапевтической, 3-кратной и 5-кратной терапевтической дозах, не вызывает достоверных изменений в физиологическом состоянии, морфологических показателях крови и физико-химических показателях мочи.

Незначительные отклонения от физиологической нормы некоторых биохимических показателей сыворотки крови (активность аланинаминотрансферазы, содержание билирубина, креатинина и мочевины), выявленные у коров после введения суспензии в 3-кратной и 5-кратной терапевтических дозах, и проявляющиеся в 1-3 дни после введения препарата, носят функциональный характер.

7. После однократного пероралыюго введения Триклабендазола суспензии 5% крупному рогатому скоту в терапевтических дозах, триклабендазол в максимальной концентрации - 6,18 мкг/мл обнаруживается в крови, органах и тканях на 1-7 сутки. Через 14 суток концентрация триклабендазола в исследованных органах и тканях снижается ниже предела детектирования.

8. Триклабендазол в дозах 10, 12 и 14 мг/кг массы животного обладает выраженной антигельминтной активностью в отношении неполовозрелых и половозрелых фасциол Р. Иера^са и И. gigantica, паразитирующих у крупного рогатого скота. Эффективность дегельминтизации составила 67,7; 96,8 и 100% против взрослых фасциол и 93,0; 98,4 и 100% против неполовозрелых Р. Ьерайса

9. В опытах на крупном рогатом скоте, спонтанно зараженном фасциолезом, установлена оптимальная терапевтическая доза триклабендазола для лечения острого и хронического фасциолеза, составляющая 12 мг/кг массы животного, что

достигается однократным перорапьным введением Триклабендазола суспензии 5% из расчета 2,4 мл на 10 кг массы животного.

10. Результаты комиссионного и производственных испытаний подтвердили высокую терапевтическую эффективность Триклабендазола суспензии 5% при остром и хроническом фасциолезе крупного рогатого скота при однократном пероралыюм введении в дозе 2,4 мл на 10 кг массы животного. Эффективность дегельминтизации составила: ЭЭ - 94,4% и ИЭ - 98,7%.

1 .Разработано, изучено и предложено для применения в практике ветеринарии лекарственное антигельминтное средство для перорального применения - Триклабендазола суспензия 5% .

2. Определены показатели качества, методы их контроля, гарантированный срок годности лекарственного средства на основе триклабендазола.

Разработан проект инструкции по применению Триклабендазола суспензии 5% для дегельминтизации крупного рогатого скота при остром и хроническом фасциолезе, представленный для согласования и утверждения в установленном порядке.

1. Напалкова В.В. Изыскание антигельмиптных средств для лечения фасциолёза жвачных животных // Материалы научной конференции профессорско - преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПБ ГАВМ, С-Петербург, 2004, С.90-91.

2. Абрамов В.Е., Напалкова В.В. Антигельминтная эффективность суспензии триклабендазола при фасциолезе овец // Материалы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС, М., 2005, Вып. 6, С. 16 -

3. Напалкова В.В. Изучение острой токсичности 5%-ной суспензии триклабендазола на лабораторных животных //Материалы докл. науч. конф. Всероссийского общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС, М , 2006, Вып. 7, С. 260 - 262.

4. Напалкова В.В. Терапевтическая эффективность суспензии триклабендазола при фасциолёзе крупного рогатого скота //Сборник научных трудов ФГУ «ВГНКИ», М., 2006, Вып. 67, С. 2005-211.

5. Напалкова В.В., Абрамов В.Е. Исследования острой и субхронической токсичности суспензии триклабендазола // Ветеринарная патология, М., 2008, №3

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

18.

(26), С. 107-112.

Заказ № 108/11/08 Подписано в печать 13 11 2008 Тираж 100 ло Уел пл 1,25

ООО "Цифровичок", тел (495) 797-75-76, (495) 778-22-20 www.cfr т , e-mail:info@cfr ги

Актуальность проблемы. Высокие темпы развития сельского хозяйства РФ требуют повышения продуктивности животных и улучшения качества получаемой продукции.

Серьёзную производственную проблему для животноводства представляют инвазионные болезни, в том числе трематодозы жвачных.

Ущерб от фасциолёза крупного рогатого скота складывается за счёт снижения молочной и мясной продуктивности, выбраковки поражённой паразитами печени, ухудшения качества продукции (A.M. Сазанов, 1991; А.В. Малахов, 1991; П.П. Диденко, 1996; Р.Т. Сафиуллин, 2002).

Литературные данные свидетельствуют о том, что фасциолёз широко распространён во многих странах мира и является частью мировой экологической и продовольственной проблемы, рассматриваемой ФАО, ВОЗ, МЭБ. На территории Российской Федерации и стран СНГ показатели заражённости крупного рогатого скота в зависимости от климато-географических зон составляют от 3,6% до 40,0% и более (Р.Г. Баширов, 1977; В.А. Душкин, 1977; В.В. Горохов, 1986, 1997; В.В. Кузьмичёв, 1997; В.В. Абдулмагомедов, В.К. Шамхалов, 1997; Лошкарёва В.В., Архипов И.А., 2003; А.А. Черепанов, А.В. Лейфанов, 2003).

Актуальность этой проблемы объясняет то неослабевающее внимание, которое уделяют отечественные и зарубежные исследователи совершенствованию мер борьбы с фасциолезом, включая разработку новых антигельминтных средств (J.C. Вогау, 1982; Ш.А. Азимов, С.Б. Салимов, 1986; Н.В. Демидов, 1987; С.В.Березкина, 1992; И.А.Архипов, 1977, 1998; I. Fairweather, J.C. Вогау, 1999).

В настоящее время для борьбы с фасциолёзом жвачных животных используется значительное количество антигельминтных средств разной химической природы. Так, выраженным трематоцидным действием обладают замещённые фенолы (нитроксинил), салициланилиды (оксиклозанид, рафоксанид, клозантел), бензимидазолы (альбендазол), сульфонамиды клорсулон), хлорированные углеводороды (гексихол, политрем, куприхол, антитрем), дифенилсульфиды (битионол).

Большинство препаратов указанных химических групп, применяемых в ветеринарии, вызывая гибель половозрелых гельминтов, как правило, не эффективны при острой форме фасциолёза, вызванной миграцией и проникновением в печень большого количества молодых фасциол, которые травмируют стенки кишечника, сосуды и печень, вызывая кровоизлияния и воспалительные процессы, способствуют проникновению в органы и ткани патогенной микрофлоры.

Учитывая это, перспективным направлением в изыскании новых фасциолоцидных средств является разработка антигельминтных препаратов эффективных как против половозрелых, так и юных форм трематод.

Одним из соединений, обладающих выраженной фасциолоцидной активностью, является триклабендазол, синтезированный учеными фирмы «Сиба-Гейги» (Швейцария). Триклабендазол активен как против половозрелых (имагинальных), так и против ранних и поздних преимагинальных форм развития фасциол, что выгодно отличает его от других антигельминтных средств.

Наряду с использованием высокоактивных действующих веществ, существенное значение для успешного проведения противопаразитарных лечебно-профилактических мероприятий, имеет и лекарственная форма препарата.

При разработке лекарственной формы необходимо обеспечить совместимость используемых компонентов, подобрать вспомогательные ингредиенты, способные повысить эффективность действующего вещества, оказать положительное влияние на процессы всасывания и элиминации, не вызвать патологические процессы в организме животного (И.А. Архипов, 1975, 1976, 1977; Т.П. Веселова, 1978; П.П. Диденко, 1996).

В последнее время наиболее широко используются лекарственные формы для индивидуального применения животным. Преимущества таких форм антигельминтных препаратов заключаются в том, что дегельминтизации подвергаются все животные в стаде, точно рассчитывается терапевтическая доза для обеспечения максимального антигельминтного эффекта, отсутствие побочных явлений и осложнений у животных, снижается риск загрязнения препаратом объектов внешней среды (Архипов И.А., 1975; Мусаев М.Б., 1991).

Учитывая это, мы сочли целесообразным разработать и предложить для дегельминтизации крупного рогатого скота новый отечественный трематодоцидный препарат на основе триклабендазола в форме суспензии для перорального применения.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии нового отечественного антигельминтного средства на основе триклабендазола, предназначенного для лечения и профилактики фасциолеза крупного рогатого скота.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- разработать состав антигельминтного средства для перорального применения на основе триклабендазола;

- изучить острую и субхроническую токсичность, эмбриотоксические и тератогенные свойства, сенсибилизирующее и местно-раздражающее действие Триклабендазола суспензии 5% в опытах на лабораторных животных;

- исследовать влияние на организм крупного рогатого скота Триклабендазола суспензии 5 % в терапевтической и повышенных дозах;

- изучить фармакокинетику триклабендазола в плазме крови молодняка крупного рогатого скота после применения Триклабендазола суспензии 5%;

- определить сроки выведения остаточных количеств триклабендазола из органов и тканей молодняка крупного рогатого скота после дегельминтизации Триклабендазола суспензией 5%;

- определить антигельминтную активность Триклабендазола суспензии 5% в отношении имагинальных и преимагинальных фаз развития фасциол;

- испытать в условиях производства Триклабендазола суспензию 5% при остром и хроническом течении фасциолеза крупного рогатого скота;

- разработать и представить для согласования и утверждения в установленном порядке проект инструкции по применению Триклабендазола суспензии 5% для лечения и профилактики фасциолёза крупного рогатого скота.

Научная новизна. Впервые разработано отечественное антигельминтное лекарственное средство - Триклабендазола суспензия 5%, изучены его фармако-токсикологические свойства, фасциолоцидная активность в отношении имагинальных и преимагинальных фаз развития гельминтов и терапевтическая эффективности при фасциолезе крупного рогатого скота. Установлены особенности распределения, накопления и сроки выведения остаточных количеств триклабендазола из организма крупного рогатого скота после применения Триклабендазола суспензии 5%. В условиях животноводческих хозяйств подтверждена терапевтическая эффективность и целесообразность применения препарата при остром и хроническом течении фасциолёза крупного рогатого скота.

Практическая значимость. Для применения в ветеринарии предложен новый высокоэффективный трематодоцидный препарат, определены оптимальные дозы и схема его применения для лечения острой и хронической формы фасциолёза крупного рогатого скота. Экспериментально установлен срок выведения остаточных количеств триклабендазола из организма крупного рогатого скота после дегельминтизации предлагаемым лекарственным средством.

На основании результатов исследований и обобщения полученных данных разработан проект инструкции по применению Триклабендазола суспензии 5% для лечения и профилактики фасциолёза крупного рогатого скота, который представлен для утверждения в установленном порядке.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на:

- научной конференции профессорско — преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПБ ГАВМ, (г. Санкт - Петербург, 2004 г.);

- научных конференциях Всероссийского общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва,

2005 г., 2006 г.);

- заседаниях Ученого совета ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (г. Москва, 2004 г., 2005 г., 2006 г., 2007 г.);

Основные положения, выносимые на защиту:

- характеристика фармако-токсикологических свойств Триклабендазола суспензии 5% по результатам опытов на лабораторных животных и крупном рогатом скоте;

- результаты изучения фармакокинетики и определения сроков выведения триклабендазола из организма крупного рогатого скота после применения Триклабендазола суспензии 5%;

- результаты изучения фасциолоцидной активности и терапевтической эффективности при фасциолезе крупного рогатого скота Триклабендазола суспензии 5%;

- практические предложения по применению Триклабендазола суспензии 5% при остром и хроническом течении фасциолеза крупного рогатого скота;

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы и собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений.

Результаты исследования мочи, проводившиеся до опыта и в течение 6 суток после введения препарата, показали, что функциональное состояние почек по исследованным показателям было неизменным.

Биохимические показатели крови крупного рогатого скота после применения Триклабендазола суспензии 5% (п=5)

Показатели Группа животных и доза, триклабендазола Период после введения препарата, сутки

0 1 3 5

1 2 3 4 5 6

Контрольная 72,4+4,3 73,7+5,1 69,5+5,3 75,3+4,1

Общий белок, г/л Опытная, 12 мг/кг 78,1+3,2 80,0+4,6 76,1+5,7 76,9+4,7

Опытная, 36 мг/кг 69,5+4,9 65,8+3,8 70,5+4,8 69,9+5,2

Опытная, 60 мг/кг 73,9J:5,3 11,2±5,2 74,4+4,5 75,6+4,9

Контрольная 61,5+5,9 57,2+5,3 59,0+6,2 60,3+5,1

Щелочная фосфотаза, Е/л Опытная, 12 мг/кг 58,8+5,2 54,7+5,1 59,8+6,3 61,9+5,4

Опытная, 36 мг/кг 61,1+5,9 56,9+6,2 63,5+5,8 65,3+5,9

Опытная, 60 мг/кг 63,9+4,0 67,1+5,8 61,7+5,4 69,3+5,5

Контрольная 0,8+0,02 0,9+0,04 1,0+0,03 0,9±0,06

Аланинаминотрансфераза, Опытная, 12 мг/кг 0,9+0,03 1,0+0,07 1,0+0,09 1,1+0,05 ммоль/л-час Опытная, 36 мг/кг 1,00+0,18 1,5+0,13 1,7+0,24* 1,3+0,4

Опытная, 60 мг/кг 1,20+0,11 2,1+0,51* 1,9+0,34* 1,4+0,26

Контрольная 1,4+0,1 1,2+0,3 1,3+0,4 1,2+0,3

Аспартатаминотрансфераза, Опытная, 12 мг/кг 1,3+0,2 1,2+0,2 1,2+0,3 1,4+0,2 ммоль/л-час Опытная, 36 мг/кг 1,4+0,4 1,5+0,2 1,4+0,4 1,5+0,4

Опытная, 60 мг/кг 1,5+0,4 1,4+0,1 1,5+0,1 1,5+0,1

1 2 3 4 5 6

Билирубин общий, Контрольная 5,3+0,5 5,8+0,7 6,4+0,8 6,6+0,3 мкмоль/л Опытная, 12 мг/кг 6,2+0,7 6,5+0,6 5,9+0,2 5,7+0,6

Опытная, 36 мг/кг 5,7+0,8 8,6+0,9* 8,3+0,8* 6,1±0,3

Опытная, 60 мг/кг 5,5+0,2 14,9+1,3* 14,4+0,9* 6,7+0,7

Билирубин прямой, мкмоль/л Контрольная 3,0+0,3 3,2+0,4 3,4+0,5 2,9+0,2

Опытная, 12 мг/кг 2,7+0,2 3,0+0,3 3,1+0,2 ЗД ±0,4

Опытная, 36 мг/кг 2,4+0,3 3,8+0,7* 3,0+0,4 3,2+0,3

Креатинин, Опытная, 60 мг/кг 2,9+0,3 7,4+0,9* 6,1+0,8* 3,2±0,5 мкмоль/л

Контрольная 68,2+5,2 67,0+4,5 65,6+5,4 69,9±5,2

Опытная, 12 мг/кг 77,4+6,8 79,2+5,9 74,4+5,8 76,9±6,8

Опытная, 36 мг/кг 65,1+13,7 97,7+8,6* 104,4+10,8* 79,7±9,3

Триглицериды, Опытная, 60 мг/кг 71,3+5,7 168,1+11,7* 177,5+24,7* 81,1+7,7 мг%

Контрольная 28,2+4,2 30,0+2,8 31,4+3,1 29,4+1,8

Опытная, 12 мг/кг 31,8+3,7 34,6+3,4 33,7+2,7 32,2±5,4

Опытная, 36 мг/кг 37,2+5,2 32,4+4,6 35,4+2,6 37,6±5,0

Мочевина, Опытная, 36 мг/кг 35,5+4,8 37,4+3,6 39,1+4,2 36,5±2,6 мкмоль/л

Контрольная 4,4+0,4 4,1+0,5 4,2+0,4 3,8+0,5

Опытная, 12 мг/кг 5,1+0,3 5,3+0,5 5,7+0,6 5,4±0,4

Опытная, 36 мг/кг 3,9+0,5 6,1+0,6 7,2+0,6* 5,7±0,6

Опытная, 60 мг/кг 4,1+0,3 7,0+0,5* 7,5+0,7* 6,1±0,4

Примечание:*- Р<0,05

У всех животных, в том числе контрольных, моча была специфического для данного вида животных запаха, прозрачная, светло-жёлтого цвета, водянистой консистенции.' Удельный вес, как' показатель концентрационной способности почек не претерпевал изменений, рН мочи у всех животных была слабо щелочная, белок, сахар, индикан и ацетоновые тела, указывающие на серьёзные изменения в организме, отсутствовали. .

При микроскопии были выявлены организованные осадки, а также кристаллы триппельфосфата, кальция сульфата и гиппуровой кислоты (неорганизованные осадки, часто встречаемые в щелочной моче здоровых животных). Эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки и цилиндры в моче не обнаруживали, что свидетельствует об отсутствии патологических процессов в почках и выводящих путях.

Таким образом, на основании результатов проведенных исследований можно сделать обоснованный вывод о том, что применение Триклабендазола суспензии 5% в три и пять раз превышающих терапевтическую дозах хорошо переносится крупным рогатым скотом, не вызывая у животных побочных явлений и осложнений.

Результаты биохимических исследований мочи крупного рогатого скота после применения Триклабендазола суспензии 5%

Показатели Группы животных

Опытные Контроль

До введения После введения

12 мг/кг 36 мг/кг 60 мг/кг

Физические св-ва: цвет светло-жёлтый светло-жёлтый светло-жёлтый светло-жёлтый светло-жёлтый запах специфический специфический специфический специфический специфический прозрачность прозрачная прозрачная прозрачная прозрачная прозрачная консистенция водянистая водянистая водянистая водянистая водянистая удельный вес 1,015-1,045 1,017-1,042 1,019-1,038 1,018-1,04 1,015-1,041

Химические св-а: рН слабо-щелочная слабо-щелочная слабо-щелочная слабо-щелочная слабо-щелочная белок отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует ацетоновые тела отсутствуют отсутствуют отсутствуют отсутствуют отсутствуют индикан отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует отсутствует организованные осадки отсутствуют отсутствуют отсутствуют отсутствуют отсутствуют неорганизованные кристаллы: кристаллы: кристаллы: кристаллы: кристаллы: осадки триппельфосфата, триппельфосфата, триппельфосфата, триппельфосфата, триппельфосфата, кальция кальция сульфата гиппуровой гиппуровой кальция сульфата, кислоты кислоты сульфата, гиппуровой к-ты гиппуровой к-ты

2.2.4.1. Фармакокинетика триклабендазола в плазме крови молодняка крупного рогатого скота * •

Изучение фармакокинетики триклабендазола в плазме крови бычков проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектированием. По результатам анализа содержания триклабендазола в стандартных растворах строили график зависимости площади пика от концентрации (таблица 25, график №1):