Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологическая характеристика минеральной добавки Кальцевитала

г 1 А п

, На правах рукописи

Смирнова Наталья Валерьевна

УДК 619:615.03.065

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИНЕРАЛЬНОЙ ДОБАВКИ КАЛЬЦЕВИТАЛА

16.00.04-ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Санкт-Петербург 2000

Работа выполнена на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт-Петербургской государственной "академии "ветеринарной медицины.

Научные руководители: заслуженный деятель науки

Российской Федерации, доктор ветеринарных наук, . профессор В. Д. Соколов

I I I доктор ветеринарных наук Н. П. Бацанов

Официальные оппонентькдоктор медицинских наук,

профессор Э. П. Зацепин

кандидат ветеринарных наук Э. Е. Шутов

Ведущая организация: Санкт-Петербургский -

Государственный Аграрный Университет

Защита состоится О^стУ/л. 2000г. в И часов на заседани диссертационного совета Д 120.20.02. в Санкт-Петербургскс государственной академии ветеринарной медицины (196084, Санк Петербург, ул. Черниговская, 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санк Петербургской государственной академии ветеринарной медицины

Автореферат разослан «3» января 2000г.

Ученый секретарь диссертационного

совета, доктор веЛринарных наук М. В. Шустрова

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Метаболизм или обмен веществ, является совокупностью процессов, происходящих в живом организме под действием биологических катализаторов (энзимов). Он представляет собой единство двух противоположных процессов -ассимиляции и диссимиляции. В результате ассимиляции в организме происходит построение из простых веществ сложных соединений - белков, жиров, углеводов, нуклеиновых кислот и биологически активных соединений. Диссимиляция сопровождается расщеплением пищевых продуктов и резервных соединений на простые вещества, что обеспечивает организм энергией. Кроме того, промежуточные продукты расщепления сложных веществ нередко являются строительным материалом для биосинтеза новых органических соединений, свойственных данному организму. Метаболизм - это один из основных признаков живой материи. Он определяет индивидуальные, видовые и продуктивные качества живого организма (Вишняков С. И., 1967).

В связи с этим знание его особенностей дает возможность правильно организовать кормление, содержание, эксплуатацию и размножение сельскохозяйственных животных (Бабенко Г. А., 1965).

При развитии патологических процессов в организме животных обмен веществ изменяется. Поэтому знание уровня и состояния метаболизма у больных животных имеет большое значение для научно-практической ветеринарии. В частности, данные об обмене веществ при патологии позволяют не только разрабатывать новые методы диагностики, но и глубоко раскрывать патогенез и давать теоретические предпосылки клиницисту для применения более эффективных методов научно-обоснованного лечения и профилактики того или другого заболевания (Одынец Р. Н., 1979).

При изучении заболеваний, связанных с нарушением минерального' состава пищи, было выявлено, что простой, ничем не осложненный недостаток или избыток элементов встречается редко. Микроэлементы точно сбалансированы в организме и патологические состояния возникают от нарушения их баланса (Энхтуая, Пурэвжавын, 1993).

Поэтому чаще всего все возрастающие нарушения минерального обмена у животных связаны с их неполноценным кормлением. Нестабильная экономическая ситуация в нашей стране, постоянное увеличение цен на продукты питания не дают возможность владельцам животных правильно и полноценно их кормить. Чаще всего в последнее время хозяин прибегает к так

называемому кормлению "со стола". В рацион животных включаются продукты, которые человек использует в пищу для себя. В целях экономии животным скармливается очень много углеводсодержащих продуктов (каши, хлеба) с небольшим добавлением мясных продуктов, овощей. Специальные корма для животных многим владельцам собак и кошек не доступны в связи с их достаточно высокой ценой (Соколов В. Д., 1998г)

Неправильное кормление молодняка отрицательно сказывается не только на массе и росте, но и на телосложении животных. При неправильном питании собаки вырастают плоские, высоконогие, с испорченной Ливией спины, отвислым брюхом и сильно развитой средней частью туловища. Воспроизводительные способности собак и кошек тоже зависят от питания. Неправильное кормление самцов и самок отрицательно сказывается на количестве половых клеток, эмбриональном развитии и приплоде. Несбалансированное кормление снижает способность к оплодотворению и часто является причиной рождения слабого, нежизнеспособного потомства. Организовать правильное кормление можно лишь при регулировании количества и качества корма применительно к физиологическим потребностям животных, то есть при нормированном кормлении (Хохрин С. Н., 1992).

Большую помощь в получении полноценного и сбалансированного кормления оказывают минеральные подкормки. Они удобны в применении. Их можно добавлять к любому рациону. Они не только профилактируют, но и лечат нарушения минерального обмена. В их состав может входить большое количество микро и макроэлементов.

Вот почему перед нами встала задача исследовать и внедрить на наш рынок отечественную минеральную подкормку для плотоядных, которая отвечала бы требованиям владельцев и ветеринарных врачей.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение возможности использования Кальцевитала в качестве минеральной добавки для плотоядных.

В связи с этим необходимо было решить следующие задачи:

- определить специфическую активность Кальцивитала в сравнительном аспекте с другой минеральной подкормкой.

- выяснить безвредность (токсичность) Кальцевитал;

- провести клинические испытания Кальцивитала для выявления его действия на организм животных.

Научная новизна работы. На основании исследований установлена общеукрепляющая и улучшаюшая минеральный обмен

доза Капьцевитала. Изучена возможность коррекции негативных последствий нарушений обмена веществ у собак."

Практическое значение работы. Отработаны схемы и дозы применения Капьцевитала при нарушениях обмена веществ у собак.

Разработано временное наставление по применению Кальцевитапа при нарушениях обмена веществ.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседаниях кафедры (1997-1999гг.) и 11-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 статей в тематических сборниках академии и в материалах конференции.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений.

Работа иллюстрирована таблицами и<9_ графиками. Список

литературы включает*^ источников, в том числе 83 зарубежных авторов.

Вопросы, выносимые на защиту. Данные по изучению нового фармакологического препарата Кальцевитала для коррекции и профилактики нарушений минерального обмена у плотоядных и его использование в ветеринарии.

2. Материал и методы исследований

Исследования проводились в условиях кафедры фармакологии и токсикологии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины на протяжении 1997-1999гг. -

Кальцевитал был разработан сотрудниками ООО «Тезис», Санкт-Петербургской Государственной ветеринарной академии и Управления ветеринарии Санкт-Петербурга.

Кальцевитал - представляет собой сбалансированный набор микро и макроэлементов в виде легкоусвояемых солей. Добавка содержит минеральные компоненты - кальций, фосфор, магний, серу, йод, а также лимонную и кремневую кислоты, улучшающие усвоение минеральных компонентов корма и витаминов. *.

Эти макро- и микроэлементы представлены в виде магния сернокислого, серы элементарной, кальция фтористого, калия йодистого, кальция карбоната и мясокостной муки.

Кальцевитал выпускают в виде порошка, расфасованного в полиэтиленовые пакеты по 500г, и упакованного в картонные коробки.

Предполагалось, что препарат должен обладать способностью повышать содержание микро й макроЪлёментов в организме животных, улучшать фосфорно-капьциевое соотношение. Применение добавки должно способствовать нормальному развитию костяка у молодых животных, поддерживать в оптимальном состоянии минеральный обмен у взрослых, обеспечивать полноценное развитие эмбрионов у беременных самок и улучшать лактацию и состояние шерстного покрова.

Для изучения некоторых аспектов фармакологического воздействия препарата на организм животных были проведены 2 серии опытов. ' '

Первая серия опытов была посвящена отработке оптимальных доз препарата. Опыты проводили на базе кафедры фармакологии и токсикологии Санкт-Петербургской государственной ветеринарной академии. Для этой цели использовали 80 белых крыс. Все животные имели одинаковые условия кормления и содержания. Опыты повторены дважды.

Изучали влияние препарата на рост и развитие животных, на показатели крови и патологоанатомическое состояние внутренних органов лабораторных животных.

Препарат задавали в дозах 0,5 г/кг, 1 г/кг и 2 г/кг различными " курсами, используя два рациона: рацион №1 (с пониженным содержанием минеральных веществ); рацион №2 (обычный рацион). Во второй серии опытов изучали влияние препарата на организм животных в сравнении с другой минеральной добавкой -Альговитом. Для этой цели было использовано 60 белых крыс, разделенных на 3 группы. Первая группа получала Кальцевитал в дозе 1г/кг, вторая группа получала Альговит в дозе 1г/кг, третья группа служила контролем. Порядок исследования внутренних органов и крови животных оставался таким же. Опыты проведены дважды.

Во всех сериях экспериментов пробы крови исследовали общепринятыми методами:

морфологические показатели крови: скорость оседания эритроцитов; подсчет количества содержания эритроцитов и лейкоцитов; концентрация гемоглобина.

- биохимические показатели крови: определение концентрации общего белка сыворотки крови -рефрактометрическим методом; концентрацию глюкозы крови -фотоколориметрическим методом с применением орто-толуидинового реактива (И. П. Кондрахин, А. В. * Архипов, 1985); содержание общего кальция в сыворотке крови -трилонометрическим методом; неорганического фосфора, с вандат-

молибденовым реактивом по Пулсу в модификации В. Ф. Коромыслова и Л. А. Кудрявцевой; .......

- бактериальную активность сыворотки крови по методике, предложенной О. В. Смирновой, Т. А. Кузьминой (1996).

Острую токсичность Кальцевитала изучали по методике, утвержденной Главветуправлением МСХ СССР на белых крысах.

Подострую токсичность изучали на белых крысах. Животным в течение 30 дней скармливали препарат в дозе 2 и 4г/кг, однократно в утреннее кормление. Наблюдали за состоянием здоровья, поведенческими реакциями, потреблением корма и воды. Затем проводили патологоанатомические, гистологические,

биохимические и гематологические исследования. Учитывали такие же показатели, что и в предыдущих опытах.

Хроническую токсичность изучали на белых крысах. Животным препарат задавали с кормом в течение 6-ти месяцев в утреннее кормление, в дозах, используемых при изучении подострой токсичности. Через 3 месяца часть животных усыпили и провели патологоанатомические, гистологические, биохимические и гематологические исследования. Учитывали такие же показатели, как и при изучении подострой токсичности препарата.

Для определения адаптогенных свойств Кальцевитала моделировали транспортный стресс и выясняли антистрессовую активность препарата. Для этого использовали три группы клинически здоровых кроликов живой массой 2,6-3,1 кг, обоего пола (по 5 голов в группе).

Для создания условий чрезвычайного воздействия (стресса) на кроликов применяли стационарный шуттель-аппарат. Рабочая опытная экспозиция нагрузки составляла 2 часа. Данная методика механического стресса, согласно литературным данным (Кашин А. С., 1980), является наиболее оптимальной для достижения существенных сдвигов гомеостаза организма опытных животных, аналогичных изменениям при транспортном стрессе.

В данной серии опытов использовали следующие основные методы:

- клиническое наблюдение (общее поведение животных, ректальная температура, пульс, дыхание);

- гематологические показатели (подсчет содержания эритроцитов и лейкоцитов, определение концентрации гемоглобина, выведение лейкограммы с окраской мазков метиленовым синим).

- биохимические показатели крови (определение концентрации общего белка сыворотки крови, концентрацию глюкозы крови).

- бактериальную активность сыворотки крови.

s

Изучение эмбриотропного действия препарата Кальцевитапа проводили согласно "Методическим указаниям по тестированию тератогенной и эмбриотоксической активности новых лекарственных веществ" и основным методическим подходам к тестированию тератогенной активности химических веществ разработанным А. П. Дыбан и др.

Тератогенное и эмбриотоксическое действие препарата Кальцевитал изучили на 64 опытных и 58 контрольных 21-дневных плодах белых крыс.

Совместимость Кальцевитапа с некоторыми препаратами определяли на белых крысах. ' /

Из препаратов были выбраны: пробиотик - бифацил и антимикробные средства - диоксидин, левомицетин и тетрациклин, которые достаточно часто применяют плотоядным. Кальцевитал задавали в дозе 1г/кг, препараты - в рекомендуемых дозах.

При этом учитывали следующие показатели: поведение, аппетит, состояние шерстного покрова, реакция на внешние раздражители; приросты массы и резорбцию антибиотиков.

Таким образом, экспериментальные исследования провели на 275 белых крысах.

Клинические испытания препарата провели на 150 собаках. Собакам скармливали минеральную подкормку с профилактической и лечебной целями. По окончании опыта у собак брали кровь на исследования. Гематологические исследования проводили по общепринятым в клинической практике методикам.

Полученный цифровой материал обрабатывали на персональном компьютере методом вариационной статистики, принятым в фармакологии (М. JI. Беленький, 1963). Различия средних величин считали достоверными при р<0,05.

3. Результаты исследований

3.1. Определение эффективности «Кальцевитала»

3.1.1. Определение оптимальной дозы препарата

В первой серии опытов использовали 5 групп белых крыс. Первые четыре группы животных в.период опыта получали рацион №1 (с пониженным содержанием минеральных веществ) и Кальцевитал в дозах 0,5г/кг, 1г/кг и 2г/кг. Препарат задавался один раз в день с кормом в течение 30 дней. Каждые 10 дней проводилось контрольное взвешивание. Пятая'группа - контрольная.

Общее состояние животных в подопытных и контрольной группах не отличалось: Отклонений в поведенческих реакциях не наблюдалось, крысы хорошо реагировали на внешние раздражители. Результаты контрольных взвешиваний приведены в таблице 1.

Таблица 1

Влияние разных доз "Кальцевитала" на рост лабораторных ___животных, в среднем по группе__

Показателя 1 группа (0,5г/кг) 2 группа (1 г/кг) 3 группа (2г/кг) 4 группа (Контрольная) рацион №1 5 группа (контрольная рацион №2)

Масса животных на начало опыта 151,8+0,15 150,4+0,8 149,7+0,7 134,1+0,15 150,6+0,6

1-е взвешивание (10 дней), г 170.2+0,4 173,7+0,25 174,2+0,6 152,8+0.025 178,8+0,45

2-е взвешивание (20 дней), г 197,4+0,2 203,8+0,8 200,0± 1,15 181.1+0,15 200.8+1,2

Масса животных на конец опыта, г 206,7+0,07 216,0+0,2 210,6+0,35 193,4+0,13 212,5+0,55

По данным таблицы видно, что применение Кальцевитала повышает привесы у животных и их живая масса превышает таковую у белых крыс, содержащихся на рационе 1 (с пониженным , содержанием минеральных веществ). '' /

Во второй серии опытов использовали 4 группы белых крыс. Все животные содержались на рационе №2. Первые три группы получали Кальцевитал в дозах 0,5г/кг, 1г/кг и 2г/кг. Препарат задавайся один раз в день с кормом в течение 30 дней. Каждые 10 дней проводилось контрольное взвешивание. Четвертая группа служила контролем.

Общее состояние животных в подопытных и контрольных группах было одинаковым. Животные имели блестящий, гладкий шерстный покров. Отклонений в поведенческих реакциях не наблюдалось, крысы хорошо реагировали на внешние раздражители.

После проведения, патологоанатомических исследований, установили, что Кальцевитал в дозе 2 г/кг вызывает у единичных животных незначительные кровоизлияния на слизистой' оболочке тонкого кишечника и желудка. Других изменений в состоянии внутренних органов у животных не выявлено.

Изучали изменение гематологических показателей в зависимости от разных доз Кальцевитала Все- показатели находились в пределах физиологической нормы. Однако было отмечено, что в группе, которая получала . двойную дозу

Кальцевитала наблюдалось повышение СОЭ и лейкоцитов и понижение эритроцитов по сравнению с другими группами. Помимо исследования картины крови подопытных животных, была также исследована их сыворотка. Установлено что у животных, получавших двойную дозу Кальцевитала, биохимические показатели были выше, чем в других группах и находились в пределах верхней границы физиологической нормы.

Результаты контрольного взвешивания второй серии опытов представлены в таблице 2.

I Таблица 2

Влияние различных доз Кальцевитала на приросты лабораторных

животных

Показатели 1 группа (0,5г/кг) 2 группа (1 г/кг) 3 группа (2г/кг) 4 группа (контрольная

Масса животных на начало опыта 148,5+0,2 149,2+0,65 150,3+0,15 152,4+0,15

1-е взвешивание (10 дней), г 172,4+0,55 173,7+0,5 177,1+0,25 174,0+0,2

2-е взвешивание (20 дней), г 210,6+0,3 275,5+0,25 194,0+1,1 206,6+1,25

Масса животных на конец опыта, г 212,4+0,25 278,0+0,1 198,7+0,06 208,5+0,35

Анализ данных таблицы показывает, что к концу опыта привесы у животных увеличились. Максимальное значение было отмечено в группе, получавшей Кальцевитал в дозе 1г/кг. Больший прирост по массе был отмечен уже на 20-ом дне. Такая же динамика, но с меньшими привесами отмечалась в первой группе. Установили, что доза 2 г/кг на 20-й день вызывает незначительные замедления в привесах и концу опыта эти привесы ниже контрольных.

Основываясь на полученных результатах в двух сериях опытов решено считать дозу 1г/кг лечебной и рекомендовать ее применять 2-3 недели.

3.1.2. Изучение разных схем применения Кальцевитала

В опыте использовали две группы белых крыс, которые получали Кальцевитал в дозе 0,5г/кг. Первая группа получала препарат в течение* месяца один раз .в день в утреннее кормление. Вторая группа получала препарат в течение 2-х недель каждый день, затем был недельный перерыв, 'затем опять ежедневная дача

Кальцевитала. Каждые 10 дней проводилось контрольное взвешивание.

Общее состояние животных в подопытных и контрольной группах характеризовалось хорошей упитанностью и подвижностью. Животные имели блестящий, гладкий шерстный покров. Отклонений в поведенческих реакциях не наблюдалось, крысы хорошо реагировали на внешние раздражители. Результаты взвешиваний приведены в таблице 3.

Таблица 3.

Влияние разных схем применения «Кальцевитала» на привесы у

животных

Показатели 1 группа (0,5 г/кг непрерывно) 2 группа (0,5г/кг с недельным интервалом)

Масса животных на начало опыта, г 155,5+0,35 157,6+0.55

1-е взвешивание (10 дней), г 178,8+0,5 177,7+1,25

2-е взвешивание (20 дней), г 225,7+0,2 224,9+0,1

Масса животных на конец опыта, г 241,4+0,02 240,9+0,01

По данным таблицы видно, что существенных отличий по приростам в этих группах не наблюдалось. Поэтому мы можем рекомендовать применять Кальцевитал с профилактической целью и ! «' с недельным перерывом и беспрерывным курсом.

3.1.3. Влияние Кальцевитала на морфологические и имунобиохимические показатели крови

В опыте использовали 3 группы крыс.' Первая группа содержалась на рационе с пониженным содержанием минеральных веществ и не получала препарата. Вторая группа получала препарат в дозе 0,5г/кг.'Третья группа служила контролем. Препарат задавали один раз в день в течение месяца в утреннее кормление. Каждые 10 дней исследовали кровь.

Общее состояние животных в подопытных и контрольной группах не отличалось. Отклонений в поведенческих реакциях не наблюдалось, крысы хорошо реагировали на внешние раздражители.

В первой группе животных на 10 день отмечалась тенденция к снижению минеральных веществ, гемоглобина, эритроцитов. На 20-ый день это снижение подтверждено статистически. В* группе, получавшей Кальцевитал, все эти показатели увеличились по

сравнению с контрольной группой и находились в пределах " физиологической нормы.

Таким образом, можно считать, что применение Кальцевитала благотворно действует на организм животных, увеличивает содержание микроэлементов в крови, повышает ее резистентность.

3.1.5. Адаптогенные свойства Кальцевитала

С целью получения контрольных результатов для выбранной модели транспортного стресса/ ^ кроликов было сформировано 3 группы животных. 5-ти кроликам, служившим контролем, не проводили стрессированние. Вторая группа животных не получала Кальцевитал. Третьей группе животных в течение двух . недель предварительно скармливали "Кальцевитал" и проводили стрессирование. Оценку стресс-реакции у животных проводили комплексным методом, включавшим клиническое наблюдение, биохимические показатели и показатели неспецифической резистентности организма.

После моделирования стресса температура у кроликов возросла сразу же после окончания шутгелирования в среднем на - ' 0,8 С у 2-ой группы и на 0,4°С в третьей. Частота пульса у животных увеличивалась почти в 1,5 раза и составила 255+5,6 удар./мин во второй группе и 201+5,2 удар./мин в третьей группе против 171,2+4,8 уд./мин и 174,5+4,6 уд./мин в донагрузочный период. Количество дыхательных движений возрастало на 69 и 61% соответственно.

Изменение же содержания эритроцитов у кроликов 2-ой и 3-ей группы характеризовалось непродолжительным увеличением средних значений показателя на 24,6-23,9% от первоначального уровня (Р<0,01). Однако в третьей группе эти показатели были ниже, показателей второй группы и быстрее приблизились к контрольным.

Информативной характеристикой гомеостатических изменений у стрессированных животных явилось изучение содержания лейкоцитов в крови этих животных. Изменение их уровня на протяжении первых пяти суток оставалось достаточно высоким (Р<0,01), а пик максимального увеличения показателя отмечен у кроликов сразу же после прекращения механической нагрузки. Однако в третьей группе опять отмечена тенденция к снижению этих величин по сравнению со второй группой.

Результаты исследований морфологической характеристики лейкоцитов крови показали, что стрессирование животных вызывало значительное проявление псевдоэозинофилеза со сдвигом ядра

I J

влево, при котором содержание псевдоэозинофилов увеличивалось в первых двух измерениях после механической нагрузки."

Уже через трое суток после шуттелирования кроликов отметили резкое повышение числа псевдоэозинофилов, на 5-е сутки значения приблизились к исходным во второй группе и на 4-е сутки в третьей группе (Р<0,05). Среди гранулоцитов отмечено статистически достоверное кратковременное снижение содержания эозинофилов сразу же после механического стрессирования (Р<0,01).

Обратный процесс отмечали в лейкограмме подвергнутых стрессу кроликов при рассмотрении содержания лимфоцитов. Максимальный пик уменьшения данного показателя составлял 22,830,8% для третьей группы и 34,9-58,5% для второй группы от исходных значений (Р<0,001) в течение первых суток после механической нагрузки. Восстановление его произошло к пятым суткам во второй труппе и к 4-м суткам в третьей группе."

Аналогичный характер процесса отмечен и при изучении динамики концентрации общего белка сыворотки крови. Установили, что в опытный период у стрессированных животных она незначительно снижалась в обеих опытных группах (Р<0,05) в первые трое суток, и поэтому значения данного показателя не входят в число достаточно информативных данных.

Анализируя уровень содержания глюкозы крови подопытных животных следует отметить, что чрезвычайные факторы приводили к изменениям данного показателя на протяжении почти всего срока наблюдения - до 7 суток включительно (для второй группы) и 6-ти (для третьей) он был статистически достоверно (Р<0,01) выше исходных значений. Максимальное отклонение зарегистрировали через 30 минут после шуттелирования кроликов - на 2,7 ммоль/л во второй группе и 2,4 в третьей (Р<0,001).

Изучение показателей естественной резистентности организма подвергнутых стрессу кроликов показало, что БАС достигала своей минимальной ' величины через сутки после завершения механического стрессирования. Восстановление же данного показателя произошло только через 15 суток во второй группе крыс и к через 7 в третьей. , .

Следовательно Кальцевитал проявляет определенное антистрессовое действие.

3.2. Сравнительная характеристика Кальцевитала и Альговита

Опыт проведен на 5 группах белых крыс по 10 голов в каждой с живой массой 150-300гр. Первой группе животных Кальцевитал скармливался в рекомендуемой дозе 1г/кг, второй группе препарат скармливался в дозе 2г/кг, третья группа служила контролем, четвертая группа получала Альговит в дозе 1г/кг, пятая группа служила контролем для Альговита. Препарат задавался один раз в день с кормом в течение 30 дней. Общее состояние животных в подопытных и контрольных группах характеризовалось хорошей упитанностью, подвижностью. Животные имели блестящий, гладкий шерстный покров. Отклонений в поведенческих реакциях не наблюдалось, крысы хорошо реагировали на внешние раздражители. Установили, что двойная доза Кальцевитала вызывает у единичных животных незначительный катаральный налет на слизистых оболочках кишечника и желудка. Гематологические исследования показали, что двойная доза Кальцевитала вызывала снижение гемоглобина, повышение СОЭ и лейкоцитов. Показатели в группе, получающей Альговит были ниже по сравнению с группой, получавшей в той же дозе Кальцевитал.

При изучении динамики привесов установили, что применение Кальцевитала вызывало прирост массы у животных. Однако как двойная доза, так и рекомендуемая, вызывала незначительное снижение массы на 20-й день. У группы животных, получавших Альговит такого снижения не наблюдалось, хотя величина этих показателей была меньше по сравнению с такой же дозой Кальцевитала.

3.3. Изучение возможных токсических свойств Кальцевитала

3.3.1. Определение острой, подострой и хронической

токсичности

Первой серией опытов по изучению острой токсичности на белых крысах установили, что однократное введение препарата в дозах в 10 и 20 раз больше рекомендуемой не вызывали гибель животных, поэтому установить ЛД50 не удалось. Отклонений в поведенческих реакциях не наблюдалось, крысы хорошо реагировали на внешние раздражители. Общее состояние животных в подопытной и контрольной группах было одинаковым. Видимых патологических изменений внутренних органов не обнаружено.

Отклонений в цитологическом рисунке и клеточном составе органов и" тканей не выявлено. Гистологическое строение паренхиматозных органов животных из 2-ой и 3-ей группы соответствует норме и аналогично структуре органов и тканей контрольной группы.

Во второй серии опытов изучали подострую токсичность препарата. Испытуемый препарата вводили перорально белым крысам в дозе 2-4 мг/кг на протяжении 30 дней. В течение всего опыта животные находились под ежедневным наблюдением. Для оценки клинического состояния по окончании опыта осуществили исследование проб крови по ряду показателей, а декопетированные животные подвергнуты анатомо-морфологическому исследованию.

Результаты опыта не выявили существенных изменений массы тела, общего состояния и поведенческих реакций животных опытных групп на фоне контрольных. Гематологические показатели животных 2-й и 3-ей группы в пределах нормы. Более высокое количество гемоглобина и лимфоцитов в крови указывает на положительное влияние добавки на подопытных животных 2-й и 3-й группы. В то же время у некоторых животных при изучении морфологических показателей регистрировали катар слизистой оболочки тонкого отдела кишечника, который наблюдался и у контрольных крыс.

..-. В результате исследований можно сделать вывод, что введение в рацион подопытных животных Кальцевитала в течение одного месяца в дозах в 4 раза превышающих лечебно-профилактические не оказывало отрицательного влияния на их организм.

При изучении хронической токсичности препарат вводили перорально однократно на протяжении б месяцев в дозах 2 и 4 г/кг. В течение всего опыта животные находились под ежедневным наблюдением. Оценку клинического состояния по окончании опыта осуществляли исследованием проб крови по ряду показателей. По окончании опыта животные были убиты и подвергнуты анатомо-морфологическому исследованию.

Результаты опыта не выявили существенных изменений массы тела, общего состояния и поведенческих реакций животных опытных групп на фоне контрольных. В крови животных 2-ой и 3-ей групп количество эритроцитов и гемоглобина было выше, чем в контрольной группе. Биохимические исследования сыворотки крови показали некоторое увеличение показателей неспецифической резистентности организма (активность лизоцима, бактерицидная активность, активность бета-лизинов), улучшилось соотношение кальция и фосфора в крови.

Изучение анатомо-морфологических показателей не выявило разницы у подопытных" и контрольных животных. Незначительные повреждения слизистой оболочки кишечника встречались у некоторых животных, как подопытных, так и контрольных групп.

В результате исследований можно сделать вывод, что введение в рацион подопытных животных минеральной добавки в дозах 2 и 4 г/кг отрицательного влияния на их организм на протяжении б-ти месяцев не оказывало.

3.3.2. Выяснение воз/иЬЖного эмбриотропного действия Кальцевитала

Тератогенное и эмбриотоксическое действие препарата Кальцевитал изучили на 64 опытных и 58 контрольных21- дневных плодах белых крыс.

Установили, что при скармливании беременным самкам в течение всей беременности этого препарата в дозе 1мг/кг общая эмбриональная гибель плодов на 21-й день внутриутробного развития составили 11,43%. Идентичный показатель отражает и предимплантационную гибель плодов, т.к. постимплантационная смертность не установлена. - Для сравнения в контрольной группе общая эмбриональная смертность составила 16,54%: и она включает предимпплантационную - 15,82% и постимплантационную - 0,72%. Следовательно, в опытной группе наблюдается снижение как пред-так и постимплантационной смертности плодов крыс.

Тератогенное действие этого препарата на развитие органов головы, грудной, брюшной и тазовой полостей исследовали на 230 серийных макросрезах плодов опытных крыс и 120 срезах, приготовленных из плодов животных контрольной группы после их продолжительной фиксации в растворе Буэна Патологических изменений органов при увеличении МБС-10 до 56 раз как в контрольной, так и в опытной группах животных не обнаружены.

Установлены закономерности развития костей перифирического скелета плодов животных опытной и контрольной групп. Изготовлено 624 тотальных препаратов оссифицированных участков грудных и тазовых правых и левых конечностей.

Необходимо отметить, что развитие периферического скелета плодов животных опытной и контрольной групп протекало с одинаковой напряженностью и аналогичной интенсивностью для одноименных костей правой и левой конечностей, а существующая незначительная разница между морфометрическими величинами, отражающими этот процесс, статистически недостоверна (Р>0,05).

Таким образом, можно заключить, что Кальцевитал не оказывает эмбриотропного действия.

3.3.3. Совместимость Кальцевитапа с некоторыми лекарственными средствами

Оценку совместимости препарата провели в двух сериях опытов, результаты которых позволили установить биологическую совместимость или наоборот несовместимость Кальцевитапа с другими фармакологическими препаратами. В первой серии опытов по изучению совместимости Кальцевитапа с диарином и бифидумбактерином, препараты вводили перорально белым крысам в рекомендуемых дозах, одновременно с Кальцевиталом (1г/кг) однократно, в утреннее кормление на протяжении двух недель.

Для оценки результатов опыта учитывались следующие показатели: поведение, аппетит, состояние шерстного покрова, реакция на внешние раздражители; приросты массы.

Установили, что во время опыта поведение животных не изменялось, они хорошо реагировали на внешние раздражители. Все животные характеризовались хорошей упитанностью и подвижностью. Применение Кальцевитапа совместно с другими препаратами не только не оказывало отрицательного действия на животных, но и увеличивало их живую массу по сравнению с группой, которая получала только Кальцевитал.

Вторая часть исследований заключалась в выявлении совместимости Кальцевитапа с тетрациклином, левомицетином и диоксидином. Препараты вводили перорально в дозе 20-30мг/кг совместно с Кальцевиталом однократно, в дневное кормление в течение 20-ти дней.

Во время опыта поведение подопытных животных не изменялось и их состояние ничем не отличалось от состояния крыс контрольной группы.

Совместное назначение тетрациклина с Кальцевиталом вызывало уменьшение биодоступности тетрациклина на 15-30%. По всей видимости кальций, входящий в состав Кальцевитапа, образует с тетрациклином водонерастворимые соединения - хелаты. В то же время биодоступность левомицетина и диоксидина не изменялась.

3.4. Клинические испытания Кальцевитала

3.4.1. Определение фоновых показателей минерального обмена у собак

Для более полного сравнительного анализа влияния Кальцевитала на организм плотоядных, предварительно определили фоновые показатели минерального обмена.

Для этой цели отобрали 15 собак 1,5-2-х месячного возраста, которые в зависимости от условий их кормления были подразделены на две группы(7 и 8 голов), /-я I- полноценное, сбалансированное кормление; 2-я - обычный, несбалансированный рацион. За животными наблюдали в течение месяца. Каждые 10 дней изучали биохимические показатели крови (таблица 4).

Таблица 4

Фоновые показатели минерального обмена у собак

Показатели сбалансированный рацион несбалансированный рацион

кальций фосфор кальций фосфор

На начало опыта 10,1+0,05 4,2+0,2 11,3+1,2 3,2+0,02

10-дней 11,4+0,1 4,4+0,5 11,0+1,5 3,1+0,25

20-дней 10,4+0,2 4,1+0,25 10,8+0,5 2,9+0,04

На конец опыта 11,6+0,04 4,5+0,55 ' 10,4+0,05 2,9+0,08

Установили, что во второй группе содержание кальция и фосфора было ниже, чем в первой и отмечалась тенденция к их снижению.

Почти аналогичные результаты были получены при исследовании крови у кормящих сук. У всех 13-ти обследованных животных в крови наблюдали снижение содержания кальция и фосфора.

3.4.2. Применение Кальцевитала в клинике

Позитивное влияние Кальцевитала на минеральный обмен и общее состояние организма лабораторных животных, относительная безвредность препарата в испытанных дозах, а также дефицит кальция и фосфора в организме собак дали основания для клинического испытания препарата.

В первой серии опытов проверили профилактическое действие препарата, для че[0 были сформированы 3 группы животных различного возраста и физиологического состояния, получающих несбалансированный рацион. Кальцевитап задавали в дозе 0,5г/кг, однократно в течение месяца. В первую группу вошли кормящие

суки. Во вторую - щенки до 0,5 года. В третью - молодняк. Из последней группы было отобрано 15 собак, которым Кальцевитал назначали прерывисто.

Биохимические исследования крови показали, что у животных первых трех групп отмечалось незначительное увеличение кальция и фосфора на 10-ый день (статистически недостоверно) и максимальное увеличение на 20-ый день. При прерывистом назначении КалЬцевитапа отмечено увеличение минеральных компонентов в конце второй недели.

Во второй серии опытов отобрали 15 щенков, содержащихся на несбалансированном рационе. Кальцевитал скармливали однократно, в дозе 1 г/кг в течение месяца.

Биохимические исследования показали, что у 5 собак показатели достигли нормы в конце 2-й недели и у 10 собак они сравнялись с нормой в конце 3-ей недели.

Таким образом, с лечебной целью Кальцевитал можно применять в течение 2-Зх недель.

Более широкие клинические испытания лечебно-профилактической эффективности препарата при нарушениях минерального обмена провели на базе ветеринарных клиник Санкт-Петербурга в 1998-1999гг. В опытах использовали 150 собак, Кальцевитал задавали в дозах 0,5 и 1 г/кг, по ранее отработанным схемам с профилактической или лечебной целью.

Об изменении физиологического состояния собак судили по следующим признакам: общее состояние, температура тела, аппетит, стул, окраска видимых слизистых оболочек и др.

Наблюдения показали, что у большинства собак улучшилось общее состояние (аппетит, подвижность, шерстный покров и др.) и нормализовались показатели фосфорно-кальциевого обмена.

Одновременно с этим в крови подопытных животных наблюдалась тенденция увеличения содержания гемоглобина, эритроцитов, и общего белка. Характерно, что среди животных получавших Кальцевитал уменьшилось количество случаев желудочно-кишечных расстройств.

Клинические наблюдения за животными показали, что все собаки были здоровы, подвижны, работоспособность и выносливость их повысилась. Улучшилось состояние шерстного покрова, особенно заметными изменения были к концу периода скармливания добавки. У собак наблюдался ровный постоянный " аппетит и хорошая поедаемость кормов. В крови показатели гемоглобина, эритроцитов, общего белка были несколько выше у

подопытной группы собак, однако достоверной разницы в

результатах не выявлено.

ВЫВОДЫ

1. Установлена возможность использования новой минеральной добавки Кальцевитал для коррекции минерального обмена плотоядных.

2. Отработаны оптимальные дозы Кальцевитала и схемы применения для собак и кошек, которые составили: 0,5г/кг при назначении с профилакти^ебкой целью 2-мя курсами на протяжении 2-х недель с недельным перерывом и 1г/кг при использовании с лечебной целью на протяжении 2-х-З-х недель.

3. Назначение Кальцевитала способствует увеличению солей кальция и фосфора в организме, активизирует рост и развитие животных, увеличивает живую массу молодняка крыс и щенков, благотворно влияет на их шерстный покров и дальнейший рост и развитие.

4. При изучении токсичности Кальцевитала установлено, что увеличение оптимальной дозы препарата в 4 и 8 раза не оказывает отрицательного действия на организм животных.

5. Препарат не обладает эмбриотропным (тератогенным и эмбриотоксическим) действием и не угнетает иммунобиохимические реакции организма.

6. Кальцевитал совместим с пробиотическими препаратами. Назначение Кальцевитала совместно с бифацилом увеличивает прирост массы животных и активирует показатели естественной резистентности организма.

7. Применение Кальцевитала не влияет на биодоступность таких антимикробных веществ как диоксидин и левомицетин. В то же время, препарат снижает на 15-30% биодоступность тетрациклиновых антибиотиков.

8. Кальцевитал проявляет антистрессовое (адаптогенное) действие при механическом стрессе.

9. При сопоставлении эффективности Кальцевитала с другой минеральной добавкой - Альговитом проявлялась тенденция преимущества Кальцевитала.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработана, аппробирована и производится новая минеральная добавка к рациону плотоядных - Кальцевитал, обеспечивающий коррекцию минерального обмена животных.

2. Материалы диссертации вошли во "Временное наставление по применению Кальцевитала плотоядным".

3. Практические рекомендации по применению Кальцевитала используются в учебном процессе таких дисциплин, как: кормление, внутренние незаразные болезни, фармакология с токсикологией.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Смирнова Н. В. Влияние различных доз Кальцевитала на организм животных // Экспресс-информация АОЗТ «Эврика» / Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки. - СПб., 1999, №7.-С. 13.

2. Смирнова Н. В. Минеральные добавки в рационах животных // Тез. Докл. К 11-ой межгосударственной межвузовской научно-практической конференции / Новые фармакологические средства в ветеринарии. - СПб., 1999. С.28.

3. Смирнова Н. В. Сравнительная характеристика Кальцевитала и Альговита // Экспресс-информация АОЗТ «Эврика» / Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки. - СПб., 1999, №7. -С.13.

4. Смирнова Н. В. Экспериментальное изучение Кальцевитала // Экспресс-информация АОЗТ «Эврика» / Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки. - СПб., 1999, №7. - С.32.

5. Столяров С. Г., Осокина Е. И., Чуваев И. В., Смирнова Н. В. Применение Биоцефала для профилактики дисплазйи тазобедренного сустава у собак // Тез. Докл. К 11-ой межгосударственной межвузовской научно-практической конференции / Новые фармакологические средства в ветеринарии. -СПб., 1999. С.36.

Метаболизм, или обмен веществ, является совокупностью процессов, происходящих в живом организме под действием биологических катализаторов (энзимов). Он представляет собой единство двух противоположных процессов - ассимиляции и диссимиляции. В результате ассимиляции в организме происходит построение из простых веществ сложных соединений - белков, жиров, углеводов, нуклеиновых кислот и биологически активных соединений. Диссимиляция сопровождается расщеплением пищевых продуктов и резервных соединений на простые вещества, что обеспечивает организм энергией. Кроме того, промежуточные продукты расщепления сложных веществ нередко являются строительным материалом для биосинтеза новых органических соединений, свойственных данному организму. Метаболизм - это один из основных признаков живой материи. Он определяет индивидуальные, видовые и продуктивные качества животного организма (Вишняков С. И., 1967).

В связи с этим знание его особенностей дает возможность правильно организовывать кормление, содержание, эксплуатацию и размножение сельскохозяйственных животных (Бабенко Г. А., 1965).

При развитии патологических процессов в животном организме обмен веществ изменяется. Поэтому знание уровня и состояния метаболизма у больных животных имеет большое значение для научно-практической ветеринарии. В частности, данные об обмене веществ при патологии позволяют не только разрабатывать новые методы диагностики, но и глубоко раскрывать патогенез и давать теоретические предпосылки клиницисту для применения более эффективных методов научно обоснованного лечения и профилактики того или другого заболевания (Одынец Р. Н., 1979).

При изучении заболеваний, связанных с нарушением минерального состава пищи, было выявлено, что простой, ничем не осложненный, недостаток или избыток элементов встречается редко. Микроэлементы точно сбалансированы в организме и патологические состояния возникают от нарушения их баланса (Энхтуая, Пурэвжавын , 1993).

Поэтому, чаще всего все возрастающие нарушения минерального обмена у животных, связанны с их неполноценным кормлением. Нестабильная экономическая ситуация в нашей стране, постоянное увеличение цен на продукты питания не дают возможность владельцам животных правильно и полноценно их кормить. Чаще всего в последнее время хозяин прибегает к так называемому кормлению "со стола". В рацион животных включаются продукты, которые человек использует в пищу для себя. В целях экономии животным скармливается очень много углеводосодержащих продуктов (каши, хлеба) с небольшим добавлением мясных продуктов, овощей. Специальные корма для животных многим владельцам собак и кошек не доступны в связи с их достаточно высокой ценой (Соколов В. Д., 1998г)

Неправильное кормление молодняка отрицательно сказывается не только на массе и росте, но и на телосложении животных. При неправильном питании собаки вырастают плоские, высоконогие, с испорченной линией спины, отвислым брюхом и сильно развитой средней частью туловища. Воспроизводительные способности собак и кошек тоже зависят от питания. Неправильное кормление самцов и самок отрицательно сказывается на количестве половых клеток, эмбриональном развитии и приплоде. Несбалансированное кормление снижает способность к 5 оплодотворению и часто является причиной рождения слабого, нежизнеспособного потомства. Организовать правильное кормление можно лишь при регулировании количества и качества корма применительно к физиологическим потребностям животных, то есть при нормированном кормлении (Хохрин С. Н., 1992).

Большую помощь в получении полноценного и сбалансированного кормления оказывают минеральные подкормки.

А • - •

Они удобны в применении. Их можно добавлять к любому рациону. Они не только профилактируют, но и лечат нарушения минерального обмена. В их состав может входить большое количество микро- и макроэлементов.

Вот почему перед нами встала задача исследовать и внедрить на наш рынок отечественную минеральную подкормку для плотоядных, которая отвечала бы требованиям владельцев и ветеринарных врачей.

Цели и задачи исследований

Целью настоящей работы явилось изучение возможности использования Кальцевитала в качестве минеральной добавки для плотоядных.

В связи с этим необходимо было решить следующие задачи:

- определить специфическую активность Кальцивитала в сравнительном аспекте с другой минеральной подкормкой.

- выяснить безвредность (токсичность) Кальцевитала;

- провести клинические испытания Кальцивитала с целью выявления его действия на организм животных.

Научная новизна работы

На основании исследований установлена общеукрепляющая и улучшающая минеральный обмен доза Кальцевитала. Изучена 6 возможность коррекции негативных последствий нарушений обмена веществ у собак.

Практическое значение работы

Отработаны схемы и дозы применения Кальцевитала при нарушениях обмена веществ у собак.

Разработано временное наставление по применению Кальцевитала при нарушениях обмена веществ.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседаниях кафедры (1999г.).

Публикация

По теме диссертации опубликовано 5 статей.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 10 графиками. Список литературы включает 204 источника, в том числе 83 зарубежных авторов.

выводы

1. Установлена возможность использования новой минеральной добавки Кальцевитал для коррекции минерального обмена плотоядных.

2. Отработаны оптимальные дозы Кальцевитала и схемы применения »для собак и кошек, которые составили: 0,5г/кг при назначении с профилактической целью 2-мя курсами: непрерывного в течение месяца и прерывистого на протяжении 2-х недель с недельным перерывом и 1г/кг при использовании с лечебной целью на протяжении 2-х недель.

3. Назначении Кальцевитала способствует увеличению солей кальция и фосфора в организме, активизирует рост и развитие животных, увеличивает живую массу молодняка крыс и щенков, благотворно влияет на их шерстный покров и дальнейший рост и развитие.

4. При изучении токсичности Кальцевитала установлено, что увеличение оптимальной дозы препарата в 2 и 4 раза не оказывает отрицательного действия на организм животных.

5. Препарат не обладает эмбриотропным (тератогенным и эмбриотоксическим) действием и не угнетает иммунобиохимические реакции организма.

6. Кальцевитал совместим с пробиотическими препаратами и диарином. Назначение Кальцевитала совместно с бифацилом и диарином увеличивает прирост массы животных и активирует показатели естественной резистентности организма.

7. Применение Кальцевитала не влияет на биодоступность таких антимикробных веществ как диоксидин и левомицетин. В то же время, препарат снижает на 15-30% биодоступность тетрациклиновых антибиотиков.

117

8. Кальцевитал проявляет антистрессовое (адаптогенное) действие при механическом стрессе.

9, При сопоставлении эффективности Кальцевитала с другой минеральной добавкой - Альговитом проявлялась тенденция преимущества Кальцевитала.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработано, аппробировано и производится новая минеральная добавка к рациону плотоядных - Кальцевитал, обеспечивающий коррекцию минерального обмена животных.

2. Материалы диссертации вошли во "временное наставление по применению Кальцевитала плотоядным".

Практические рекомендации по применению Кальцевитала используются в учебном процессе таких дисциплин, как: кормление, внутренние незаразные болезни, фармакология с токсикологией.

118