Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эпизоотологический мониторинг и совершенствование мер специфической профилактики сибирской язвы в Республике Таджикистан

На правах рукописи

Наврузшоева Гулнора Ширинджоновна

ЭПИЗООТОЛО! ИЧКСКИЙ МОНИТОРИНГ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В РЕСПУБЛИКЕ

ТАДЖИКИСТАН

16.00.03.- ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва-2005

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина».

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор, член-корреспондент РАСХН Деврншов Давудай Абдулсемедовнч

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный

деятель науки РФ Гаврилов Владимир Андреевич

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ).

Защита состоится «26» октября 2005г. В 16 часов на заседании диссертационного совета Д 220.042.01 в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина (109472,Москва,ул. Академика Скрябина, 23. Тел. 377-93-83)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГАВМиБ.

доктор ветеринарных наук, член-корреспондент Таджикской академии сельскохозяйственных наук Аноятбеков Музаффар Аноятбековнч

кандидат ветеринарных наук Селиверстов Василий Витальевич

Ученый секретарь диссертационного с<

Автореферат разослан

БрылинаВ.Е.

Меь-Ч 4£к5о

Актуальность проблемы. Большим достижением человечества явились открытия связанные с вакцинопрофилактикой, благодаря чему были ликвидированы или сведены до минимума риски возникновения большинства опасных антроггозоонозов. Среди инфекции, представляющих опасность для животных и людей остается сибирская язва, возбудитель которой сохраняется в очагах заболевания более 70 лет. По данным МЭБ (2000-2004гт) сибирская язва ежегодно регистрируется среди животных большинства стран Азии и Африки (Индия, Пакистан, Ангола, Эфиопия, Монголия, Китай и др.). Особого вшмания заслуживает ситуация в регионах Средней и Центральной Азии стран, приграничных РФ или имеющих тесные экономические связи (Казахстан, Таджикистан, Узбекистан, Киргизия) Так, за последние годы в Республике Таджикистан, было зарегистрировано более 1000 неблагополучных пунктов (А. Назаров,1997). По данным СЭС в 2000г только в г. Душанбе было зарегистрировано 338 случаев заболевания сибирской язвой среди людей, и источником их инфицирования явилось мясо, зараженное бациллами сибирской язвы.

Заболеваемость этой инфекцией продолжает регистрироваться в традиционно эндемичных регионах, что свидетельствует о реальной возможности возникновения сибирской язвы в любой стране. Ведущие учёные инфекционисты предполагают возможность возникновения вспышек среди животных, не имеющих иммунитета к возбудителю и, в связи с этим, необходимость разработки и применения новых методов надзора и борьбы с этой болезнью становится весьма актуальной задачей. Высокая устойчивость В.апЛгаая к физическим и химическим факторам, значительная адаптационная способность к длительному сохранению, несмотря на существующую систему профилактических мероприятий требует особого внимания специалистов к этому возбудителю.

Животноводство в Республике Таджикистан, является одной из основных отраслей экономики, обеспечивающей население молоком и мясом, а также сырьем для легкой промышленности. Учитывая специфику страны, вопросам защиты населения от опасных зооантропонозных инфекционных заболеваний, в частности сибирской язвы у животных, придается большое значение.

В Республике организованы плановые диагностические и профилактические мероприятия, однако ликвидировать болезнь до сих пор не удается. Это связано с отсутствием достаточного финансирования для организации специфической профилактики, учета и обеззараживания всех очагов.

В последние годы учеными РФ разработана новая вакцина против сибирской язвы животных «Антравак», обладающая более высокими защитными свойствами, чем известные живые вакцины. Внедрение новой вакцины, позволит значительно повысить эффективность профилактики против сибирской язвы животных на территории Таджикистана

Диагностика и регистрация очагов сибирской язвы в различных регионах Таджикистана, выявление источников В. апИи-аив является первостепенной задачей, стоящей перед ветеринарной службой. Важным является создание модели эпизоотологического мониторинга, позволяющей с использованием наиболее информативных диагностических методов объективно, своевременно оценивать распространенность и обосновывать комплекс профилактических мероприятий, направленных на ликвидацию болезни.

Цель и задачи. Цель исследований - эпизоотологический анализ и мониторинг сибиреязвенной инфекции в Таджикистане, испытание новых профилактических средств и разработка научно-обоснованных мероприятий, предотвращающих заболевание животных сибирской язвой.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1.Провести эпизоотологический анализ заболеваемости сибирской язвой животных за период 1937-2003гг. на территории Республики Таджикистан;

2.Провести анализ эффективности диагностических ц противоэпизоотических мероприятий;

3.Изучить антигенную и протективную активность комбинированной вакцины против сибирской язвы животных в экспериментальных условиях;

4.Изучить иммуногенные свойства противосибиреязвенных вакцин (вакцина комбинированная против сибирской язвы животных, вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая; вакцина против сибирской язвы животных из штамма СТИ-1 живая) в неблагополучных по сибирской язве регионах.Таджикистана.

Научная новизна. Научная новизна и теоретическая значимость работы заключается в том, что:

впервые проведен эпизоотологический анализ и оценка эффективности мероприятий по ликвидации сибирской язвы в Республике Таджикистан за период 19372003 годы;

впервые в экспериментальных условиях проведены опыты по изучению протективной активности различных противосибиреязвенных вакцин на лабораторных моделях, телятах и овцах, изучено влияние вакцинных препаратов на клинико-гематологические и иммунологические параметры организма животных при вакцинации и инфицировании культурой В.апАн-аиз;

впервые проведен мониторинг территории Республики Таджикистан , определены регионы эпизоотического риска по сибирской язве, составлена карта распространенности сибирской язвы на территории Таджикистана и определены регионы в которых требуется проведение специальных мероприятий;

впервые проведены производственные испытания комбинированной вакцины против сибирской язвы животных в неблагополучных регионах Таджикистана, дана сравнительная оценка иммуногенных свойств различных вакцинных препаратов.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований по клинико-гематологическим и иммунологическим изменениям у животных иммунизированных противосибиреязвенными вакцинами и инфицированных тест штаммом В. апйнаод являются теоретической основой для оценки эффективности ветеринарных иммунобиологических препаратов против особо опасных инфекций. Выполненные исследования и данные по эпизоотологии, сезонной динамике позволили научно обосновать необходимость совершенствования специфических мер борьбы с сибирской язвой у животных

Материалы исследований выполнены самостоятельно автором, а также совместно с учеными МГАВМиБ, Среднеазиатского ящурного института и специалистами ГУВ МСХ Таджикистана и включены в инструктивно-методические документы, одобренные НТС Министерство,, сельского хозяйства Таджикистана, которые включают комплекс мер и являются практической и теоретической основой профилактических мероприятий по ликвидации сибирской язвы в Республике Таджикистан.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту: результаты эпизоотологического и эпидемиологического анализа по сибирской язве животных и населения в Таджикистане за период 1937-2003 годы;

материалы сравнительного изучения антигенных и протективных свойств вакцин против сибирской язвы животных в экспериментальных условиях на лабораторных моделях, телятах и овцах;

результаты исследований влияние различных доз вакцинных препаратов и культуры В. апЛгаав на клинико-гематологические и иммунологические показатели организма животных;

данные мониторинга территории Республики Таджикистан по сибирской язве; результаты производственных испытаний комбинированной вакцины против сибирской язвы животных в неблагополучных регионах Таджикистана

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научных конференциях Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии и АН Таджикистана (2003-2004 гг.) и включены в отчеты Академии наук Таджикистана (2003-2004гг.).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 научные статьи. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста в формате А4 и включает следующие разделы: введение, обзор

литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения. Библиографический список включает 212 публикаций из них 78 иностранных источников. Материалы иллюстрированы 13 таблицами, 15 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Работа проводилась в период 2002-2005гг. Экспериментальные исследования выполнены в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина, на базе ООО «Агровет» (Киров-200), а также в Среднеазиатском ящурном институте и в хозяйствах Республики Таджикистан.

В качестве источников информации при проведении теоретических исследований были использованы:

- опубликованные научные труды, отчёты НИР, статистические данные и архивные материалы официальной регистрации заболеваемости сибирской язвой в Таджикистане в период с 1937 по 2003 годы на основании отчетов Главного управления департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Таджикистана;

материалы экспедиционных выездов специалистов Республиканской эпизоотической экспедиции, архивных данных Республиканской ветеринарной лаборатории по изучению сибирской язвы в очагах этого инфекционного заболевания на территории Таджикистана, а также данные Санитарно-эпидемиологической станции г. Душанбе по заболеваемости сибирской язвой людей в период с 1990 по 2003гг.

Основным методом исследования было комплексное эпизоотологическое обследование неблагополучных регионов, анализ полученных данных, влияние природно-климатических и сезонных факторов на возникновение случаев сибирской язвы в Таджикистане и разработка научно-обоснованных профилактических мероприятий.

Для сравнительной оценки были испытаны:

-вакцина комбинированная против сибирской язвы животных (вакцина Антравак);

-вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая;

-вакцина против сибирской язвы животных из штамма СТИ-1 живая.

Для культивирования вакцинных штаммов В апИц-аив на чашках использовали плотную питательную среду на основе соляно - кислотного гидролизата казеина.

Концентрацию живых спор в вакцине оценивали по количеству колоний, выросших в результате высева соответствующих десятикратных разведений на плотной

питательной среде. Оптическую концентрацию спор определяли микроскопией в камере Горяева путем подсчета количества спор.

Патоморфологические исследования проводили общепринятыми методами.

Подкожное и внутрибрюшинное заражение животных проводили по общепринятым методикам. Изучение скорости формирования иммунитета и оценку эффективности вакцинации проводили на морских свинках массой 350...400 г, овцах и телятах.

Вакцину и инфекционный материал перед введением разводили фосфатным буфером или физиологическим раствором. Материал под кожу морским свинкам вводили в объёме 0,5... 1,0 см3 во внутреннюю поверхность бедра правой или левой конечности.

Вакцинированных морских свинок заражали возрастающими дозами (lxlO4.. .1x10 и 1x105.. .1x10®) тест-культуры второй вакцины Ценковского на 7 и 14 сутки в дозах (по 5 животных на каждую дозу).

При оценке иммунобиологических препаратов проводилось изучение динамики изменений гематологических и иммунологических показателей общепринятыми и специальными методами (Иммунология, М. 2004). При оценке влияния факторов внешней среды на возникновение и распространение сибирской язвы учитывали температуру воздуха, почвы, рН почвы и воздушные потоки. Иммуногенность вакцинных препаратов и напряженность иммунитета оценивали в РИГА и ТИФМ.

При анализе цифрового материала использованы методы вариационной статистики и компьютерные программы в формате Excel.

В производственных условиях было вакцинировано 17800 голов овец, исследовано в динамике 3000 проб сывороток крови овец.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В Таджикистане животноводство является одним из основных составляющих экономики и в значительной мере, определяющим благосостояние населения. Развитие животноводства, имеет исключительно большое социальное значение.

По показателям заболеваемости сибирской язвой среди животных и людей Таджикистан является одним из неблагополучных регионов на территории бывшего СССР. По данным Главного управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства в республике с 1937г. по 2003г. было зарегистрировано 928 неблагополучных пунктов, в которых заболело 2274 животных разных видов (табл. 1.)

Динамика заболеваемости характеризуется периодическими подъемами и спадами Устойчивого снижения числа неблагополучных пунктов и частоты проявления случаев сибирской язвы не отмечается.

Таблица 1.

Количество неблагополучных пунктов сибирской язвы в Республике Таджикистан с 1937-2003 гг

Административная 1937- 1947- 1957- 1967- 1977- 1987- 1997- итого

территория 1946 1956 1966 1976 1986 1996 2003

ГБАО - 3 1 2 - - 1 6

РРП 28 62 86 87 50 22 67 402

Хатлонская - 15 72 94 89 53 147 470

Область

Сугдская область 12 12 13 1 2 5 4 49

По Республике 40 92 172 184 141 80 219 928

Самое большое количество неблагополучных пунктов приходятся на Хатлонскую область - 470, вторым по степени интенсивности следуют районы республиканского подчинения - 402 неблагополучных пункта, Сугдская область - 49, Горно-Бадахшанская автономная область - 6. Наибольшее количество неблагополучных пунктов отмечено в период с 1997г. по 2003 г. (219 неблагополучных очагов).

Анализ многолетних данных показывает, что больше всего очагов сибиреязвенной болезни отмечается в южной части Таджикистана Основной отраслью хозяйств этого региона является животноводство. На расстояний более чем 1000 км скот перегоняют с зимних пастбищ на летние, а в осенне-зимний период с летних пастбищ на зимние. В период перегона слабо осуществляется зооветеринарный контроль над животными, особенно индивидуального сектора Другой причиной распространения этой инфекции является наличие множества скотомогильников большинство, из которых не учтены или нет сведений о старых почвенных очагах сибиреязвенной инфекции. Отмечено, что при пыльных бурях, особенно в мае месяце, когда дует ветер «Афганец» происходит 2-3 случая заболевания животных данной инфекцией.

Анализ заболеваемости животных сибирской язвой по видам животных в целом свидетельствует о тенденции роста числа инфицируемых животных. Заболеваемость животных в целом с 1937 года по 2003 год составляет 2274 животных. В структуре заболеваемости по видам животных, с 1937г. по 2003г.-1115 голов приходятся на крупный рогатый скот, 1072 головы на мелкий рогатый скот, 73 лошади, 14 свиней.

Таким образом, заболеванию в основном подвержен мелкий и крупный рогатый скот, которые являются ведущими в структуре животноводства Таджикистана.

В период политической и экономической нестабильности, характерно повышение уровня заболеваемости, что подтверждается на примере Таджикистана. Так период гражданской войны (1992-1996 гг.) и экономической нестабильности (1997-2000гг) характеризуется высоким уровнем заболеваемости с охватом 197 голов животных.

Установлено также, что в эти годы велась недостаточная работа ветеринарных учреждений, которая отразилась в существенных расхождениях данных заболеваемости сибирской язвой (Рис 1-2)._

Гас I Небхаговояучяжые оуякты сибврсю! (1ВЫ но лиши инршрамх ]прд«|М|| Р«еву6яш _Тм«»«»ДТ1м 1988-2003ГГ_

г Иг ИГ III («Г 14Г Мг III »г М1 мг Иг Иг Мт №

по данный реев лаб

я» даииии ГУв МСХ Тмжируут

Рис 2 Кояшчеспо чбояеяшяя хялогяых счбярекоЛ азаой по даявым астерниарвых учреждена! Респубяяы Таджякветак 1911-2003 п*

г Иг Иг Иг ||г Иг Hr.Mi.Nr.ITi.il г*дм

па данный ГУВ МСХТ1 —по .и иным $*сл_п_во

Особенно наглядны показатели 2000 г по данным ГУВ МСХ Таджикистана, зарегистрировано 74 неблагополучных пункта, по данным Республиканской лабораторий 41 неблагополучный пункт, по данным же Республиканской эпизоотологической экспедиции количество неблагополучных пунктов составляет 34. Данные за 1998г в Республиканской эпизоотологической экспедиции отсутствовали. В 2001 г по данным ГУВ МСХ Таджикистана количество неблагополучных пунктов составляет 47, по данным же Республиканской эпизоотологической экспедиции это количество составляет 13. Аналогичная картина наблюдается и по количеству заболевших животных (рис 2).

В системе противосибиреязвенных мероприятий основное внимание уделяется проведению ежегодной профилактической вакцинации скота. В результате плановых противоэпизоотических мероприятий с применением вакцины на основе штамма СТИ, а с 1989 года на основе штамма 55-ВНИИВВиМ, значительно улучшилась эпизоотическая ситуация по данной инфекции. Однако существенной разницы по количеству случаев заболеваний на фоне применения указанных вакцин не отмечено, что подтверждает

необходимость совершенствования вакцинных препаратов против сибирской язвы (табл.2).

Таблица 2

Эпизоотологический показатель Применение вакцины СТИ Применение вакцины из штамма 55 -ВНИИВВиМ

1979-1988 1989-1998 1999-2003

Число неблагополучных пунктов 127 106 172

Число заболевших животных 253 315 177

При двукратном применении вакцины СТИ с 1979 по 1988 число заболевших животных снизилось до 253 случаев, после 1989г. на фоне применения вакцины из штамма 55 отмечается некоторая тенденция повышения (табл.2).

Следует отметить, что интенсивность роста заболеваемости связана не только с качеством и уровнем проведения санитарно-эпизоотологических мероприятий, но и с фактором эффективности применяемых профилактических препаратов.

Начиная с 2001 года противосибиреязвенные прививки проводятся повсеместно, интенсивность их значительно повысилась в отличие от предыдущих лет. Увеличен охват поголовья животных частного сектора.

Известно, что эпизоотология сибирской язвы напрямую связана с почвенно-климатическими условиями местности и температурным фактором. По данным ведущих ветеринарных специалистов максимальное количество вспышек приходятся на самые жаркие месяцы. Заражение животных происходит преимущественно из почвы. Проведенные нами исследования свидетельствуют о выраженной сезонности проявления сибиреязвенной инфекции.

П<с.З. Связь поместной динамики неблагополучных пунктов сибирской язвы с агроклиматическими даанными в публике Таджикистан

-е— Кол.неблагополуч пунктов -■—Температура воздуха

- Температура почвы -«—Осадок мм!_

Если сопоставить данные сезонности (рис 3.) с агроклиматическими данными то получается, что пик заболеваемости совпадает с максимальными показателями температуры воздуха и почвы (июнь-сентябрь) и минимальным количеством осадков.

Известно, что случаи сибирской язвы у животных нередко служат причиной заболевания людей, имевших контакт с этими животными.

Нам была предоставлена возможность проанализировать заболеваемость людей сибирской язвой по данным СЭС Р.Таджикистан.

Распределение больных по возрасту и полу приведено в табл. 3, из которой следует, что среди них преобладали мужчины - 118 (64,1%) . Основная масса больных (83,2%) пришлешь на возраст от 11 до 60 лет, однако 7,6% случаев приходится на пациентов старше 60 лет и 9,2 - на детей до 10 лет.

Таблица 3

Возраст и пол больных сибирской язвЕ) н

Пол Возраст в годах Всего

больных 0- 11- 21- 31- 41- 51- 61- 71- 81-

10 20 30 40 50 60 70 80 90

мужчины 8 17 11 23 31 20 6 1 1 118

женщины 9 8 10 И 9 13 4 2 . 66

Итого 17 25 21 34 40 33 10 3 1 184

% 9,2 13,6 11,4 18,5 21,7 18,0 5,4 1,6 0,6 100

В основном сибирская язва у людей проявлялась в кожной форме, 90,8 % были связанны с сельскохозяйственной деятельностью, тогда как среди городского населения заболеваемость была невысокой (17 случаев или 9,2%).

На рис. 4 показана динамика сибирской язвы у людей и животных по месяцам года, которая имеет общую тенденцию с пиком заболеваемоо I в июне-сентябре Рис. 4

Р»спрм»мии» мболмммвет сибирской мм по месяцам

месяцы

чтомк-wwmwej

По данным санитарно - эпидемиологической службы Таджикистана показатель заболеваемости людей за последние 12 лет очень высокий, с 1992 г. по 2003 г. он составил 1687 человек, (табл. 4)

Также / как у животных, самое большое количество случаев инфицирования приходится на Хатлонскую область -1139.

Таблица 4

Количество заболевших людей сибирской язвой 1992-2003 гг. _

Админ. территория 1992 1993 1994 I 1995 1996 1997 1998 6661 2000 2001 2002 | 2003 итого

ГБАО - - - - - - 57 1 2 2 - 3 65

Г.Душанбе - - - 1 - 4 3 - 8 - - - 16

Р.Р.П 3 26 14 29 31 19 15 28 129 16 23 21 354

Хаглонская область 24 70 17 69 83 52 194 92 198 122 134 84 1139

Согдская область 1 - 7 3 - - 42 29 1 16 3 11 113

По Республике 28 96 38 102 114 75 311 150 338 156 160 119 1687

Полученные данные показывают, что эпизоотологическая ситуация в Таджикистане по сибирской язве остается напряженной и представляет потенциальную угрозу для населения.

В этой связи важным фактором предотвращения эпизоотических вспышек имеет своевременная и полномасштабная вакцинация животных против сибирской язвы. Немаловажную роль в эффективности иммунопрофилактики играет качество вакцинных препаратов.

Нами проводились исследования по оценке протективных и иммуногенных свойств различных вакцин как используемых в ветеринарной практике, так и вновь созданной вакцины комбинированной против сибирской язвы животных (вакцина Антравак).

Результаты сравнительных испытаний противосибиреязвенных вакцин. При изучении иммунобиологической активности были использованы следующие вакцины::

-вакцина комбинированная против сибирской язвы животных (вакцина Антравак) (производство ООО «Агровет»);

-вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая (производство Орловской биофабрики);

-вакцина против сибирской язвы животных из штамма СТИ-1 живая (производство ООО «Агровет»).

Экспериментальные исследования проводились на морских свинках массой 350...400г. Вакцину вводили однократно подкожно в области бедра в дозах: - Антравак ИхЮ6 и 25x10®, СТИ-1 в дозе 11x10*, 55- ВНИИВВиМ - ПхЮ6 живых спор. Вакцинированных морских свинок через 10 суток заражали тест-культурой шт. М-71/12 (вторая вакцина Ценковского). Культуру вводили подкожно в область живота в дозе 1x106 спор (1600 ЛД50) в объеме по 0,5+0,05 см3 каждому животному. На 7 и 14 сутки после инфицирования определяли величину титров противосибиреязвенных антител в ТИФМ.

На 7 сутки после иммунизации наиболее высокий уровень иммунного ответа наблюдали у животных привитых вакциной Антравак в дозе 25 млн. спор (индекс иммунитета 44710). При уменьшении количества спор СТИ-1 в составе вакцины Антравак до 11 млн. наблюдали снижение индекса иммунитета в 6,7 раза. Но даже при низкой дозе вакцина Антравак по иммуногенной эффективности (индекс иммунитета 6468) значительно превосходила живые вакцины на основе штаммов СТИ-1 и 55-ВНИИВВиМ (161 и 47 соответственно).

На 14 супси после вакцинации специфический иммунный ответ достоверно усиливается по сравнению с 7-ми сутками Более низкий уровень специфических антител отмечали у животных привитых вакцинами на основе штаммов СТИ-1 и 55-ВНИИВВиМ «я находился на одинаковом уровне 1:54±2,7 против 1:1244±3,2 11799±:2 у животных вакцинированных Антравак.

Для более полной характеристики вакцинных препаратов на морских свинках изучали протективную активность различных доз сибиреязвенных вакцин. Вакцинами прививали однократно подкожно в область бедра (табл.5). Через 14 суток после вакцинации животных заражали тест-культурой штамма М-71/12 в дозе 1х106 спор (1600 ЛД50.) Результаты наблюдений регистрировали в течение 10 суток после чего рассчитывали величину средне эффективной иммунизирующей дозы (1пЮ50) для каждой вакцины.

Таблица5

Сравнение иммуногенных свойств сибиреязвенных вакцин

Вакцина Доза Выжило из числа зараженных Коэффициент эффективности (%)

Количество спор ПА, ИДм

Комбинированная вакцина 6,00 хЮ6 20,00 8/9 88,8

(Антравак) 1,20 хЮ6 4,00 8/10 80

0,24x10® 0,80 1/9 11,1

0,48 хЮ5 0,16 2/9 22,2

Продолжение таблицы 5

Вакцина Доза Выжило из числа зараженных Коэффициент эффективности (%)

Количество спор ПА, ИД»

Живая споровая вакцина СТИ-1 6,00x10" 1,20x10е 0,24x10е 0,48 Х105 6/10 2/9 МО 0/10 60 22,2 10 0

Живая споровая вакцина 55- 6,00x10" - 5/10 50

ВНИИВВиМ 1Д)х106 3/9 33.3

0,24x106 1/8 12,5

0,48 хЮ5 0/8 0

Из данных, представленных в табл.5 следует, что наиболее высокой протекгивной активностью обладает комбинированная вакцина, величина 1тВ50) которой была ниже, чем для вакцин на основе штаммов СТИ-1 и 55-ВНИИВВиМ. Вместе с тем, последние не отличались между собой по иммуногенной активности (1т05о 4,43х106х ±:1,8 и 4,13 х 10б±:1,6, соответственно).

Для изучения безвредности, реактогенности и иммуногенных свойств комбинированной вакцины (Аэтравак) на продуктивных животных был поставлен опыт на овцах вятской тонкорунной породы, ранее не подвергавшихся вакцинации против сибирской язвы. Перед опытом овцы были разделены на группы животных. Вакцинацию овец проводили:

1-ая группа - комбинированной вакциной (Антравак) в дозе 25 млн спор (СТИ-1+40ИД5ОПА);

2-ая группа - комбинированной вакциной (Антравак) с содержанием спор в прививочной дозе 11 млн.спор (СТИ-1 + 40 ИД50 ПА);

3- я группа - живой споровой вакциной на основе штамма 55-ВНИИВВиМ в дозе 11 млн. спор.

Вакцины вводили под кожу внутренней поверхности бедра в объеме 0,5 см3. Клинико-гематологическое обследование животных проводили за 5 и 7 суток до введения вакцин и на 1,5, 10, 15,20,30 и 45 сутки после вакцинации.

Видимых клинических отклонений от физиологических норм у вакцинированных животных не отмечали. Результаты изучения гематологических показателей у овец, иммунизированных различными вакцинами, приведены на рисунке 5-8. Анализ полученных данных свидетельствует о том, что СОЭ у животных всех групп практически не изменилась и составляла 1...3 мм/ч. В то же время количество лейкоцитов после иммунизации всеми вакцинами увеличивалось на 5 сутки и приходило

в норму к 30 суткам. Начиная с 5-х суток у иммунизированных животных отмечали лимфоцитоз и незначительный сдвиг в лейкограмме влево, что свидетельствует об активации клеточных факторов.

Следовательно, комбинированная вакцина (Антравак) по показателям безвредности и реактогенности не отличается от живой споровой вакцины на основе штамма 55-ВНИИВВиМ в дозе превышающей рекомендуемую в 5 раз.

Уровень гуморального иммунитета у вакцинированных овец определяли по индексу ПСС и величине титров антител к ПА в ТИФМ.

Рис. 5 -8

СОЭ,мм/ч

12

08 О.в

02

ухуу-

10 15 20 30 45 Дни

-Антравак 25 млн. спор -Антомак 11 млн. спор шт 55 (11 млн. спор)

Количество лимфоцитов в мл

-Антравак 25 млн -Антравак 11 млн. спор -Шт 55(11 млн спор)

Количество моноцитов в мл

Количество нейтрофилов в мл

10 16 20 30 45 дни

-Антравак 25 млн. спор

-Антравак 11 млн. спор

Шг55(11 млн. спор)

-Антравак 25 млн. спор

-Антравак 11 млн. спор

Шт.55 (11 млн.спор)

Наиболее выраженный гуморальный ответ наблюдали у животных, привитых комбинированной сибиреязвенной вакциной (Антравак). Так, на 10 сутки все овцы, иммунизированные комбинированной вакциной в дозе 25 млн. спор, уже имели высокие показатели уровня специфического иммунитета (ПСС - 0,4.. 1,0, титры антител к ПА 1:1600 .. 1:6400). На 15...30 сутки показатели тестов ПСС и ТИФМ были существенно выше у привитых комбинированной вакциной, чем у привитых вакциной из штамма 55-ВНИИВВиМ. Рис 9-10

ПСС уодец, иммунизированных против сибирской язвы

-Антравак 25 млн. спор -Антравак 11 млн. спор Шт 55(11 млн слов)

Уровень антител к ПА в ТИФМ у овец, иммунизированных против сибирской язвы

6000 •

/ \

/ \

/ \ /

/ -

0

3 4 Дни

-Антравак 25 млн спор -Антравак 25 млн. спор Шт.55(11млн спор)

Таким образом, проведенные исследования по сравнительному изучению эффективности и безвредности различных сибиреязвенных вакцин на морских свинках и овцах свидетельствует о том, что по показателям безвредности и реактогенности комбинированная вакцина не отличается от живых вакцин, но существенно превосходит их по иммуногенной и протективной активности.

Последующее изучение иммунологической эффективности, безвредности и реактогенности комбинированной сибиреязвенной вакцины (Антравак) было проведено на телятах 3...6-месячного возраста, ранее не вакцинированных. Вакцины вводили подкожно в области средней трети шеи в нижеуказанных дозах (табл.6). Клинико-гематологическое обследование животных проводили до вакцинации и на 7, 14 и 21 сутки после вакцинации.

Результаты исследований показали, что все телята, иммунизированные испытуемыми вакцинами, оставались здоровыми в течение всего срока наблюдения (21 сутки).

Результаты изучения гематологических показателей у телят, иммунизированных различными вакцинными препаратами показали, что СОЭ у животных всех групп не превышала нормы и составляла 0,5... 1 мм /ч. Количество лейкоцитов после иммунизации всеми вакцинными препаратами увеличивалось на 7...21 сутки. Начиная с 7 суток, у иммунизированных животных отмечается лимфоцитоз и повышение количества юных форм нейтрофилов и моноцитов Лимфоцитоз на фоне увеличения общего количества лейкоцитов со сдвигом влево свидетельствовал об усилении защитных факторов и активации антителообразования на вакцинные антигены.

Полученные результаты физиологического состояния животных, состояние кожных покровов, динамики изменений СОЭ и формулы крови свидетельствуют о том, что комбинированная сибиреязвенная вакцина безвредна для телят и не отличается по показателям безвредности и реактогенности от живых споровых вакцин.

Эффективность иммунизации телят определяли по величине титров антител к ПА в ТИФМ

Максимальные титры антител были зафиксированы в I и 2 группах животных, иммунизированных вакциной Антравак в дозах, содержащих по 50 млн. спор + 60 ИДя ПА и 50 млн. спор + 40 ИДзо ПА, соответственно. Снижение концентрации одного из компонентов вакцины Антравак (либо спор, либо ПА) сопровождалось уменьшением выработки специфических антител и снижением титров. У животных привитых вакциной Антравак в рекомендуемой дозе (25млн. спор и 40 ИД50 ПА) титр антител к ПА достоверно выше, чем у животных, привитых вакцинами из штаммов 55 и СТИ-1.

Таблица6

Сравнительная характеристика иммуногенных свойств вакцин

Группа Вакцина Доза Уровень титров антител на.....

животны суп®

X Содержали ПА, 0 7 14 21

е спор х106 ИД»

1 Комбинированная 50 60 0 1:266 1:1333 1:1600

2 вакцина (Антравак), 50 40 0 1:266 1:1066 1:1333

3 серия 7 36 45 0 1:216 1:667 1:667

4 25 40 0 1:183 1:667 1:800

5 25 20 0 1:100 1:467 1:467

6 Живая (сухая) из шт. 25 - 0 1:100 1:200 1:267

55, серия 49

7 Живая (сухая) из шт. 25 - 0 1:100 1:200 1:400

СТИ-1, серия 12

Таким образом, комбинированная вакцина против сибирской язвы (вакцина Антравак) не реакгогена и авирулентна для животных в дозах превышающих оптимальную в 2-4 раза.

Иммуногенная активность вакцины Атравак с содержанием в 1 дозе 25 млн. спор штамма СГИ-1 и 40 ИД» протективного антигена пгг. 55-ВНИИВВиМ достоверно выше живых сибиреязвенных вакцин на основе только штаммов СТИ-1 и 55-ВНИИВВиМ.

Результаты производственных испытании сибиреязвенных вакцин. Производственные испытания проводились в хозяйствах Республики Таджикистан на овцах в мае-июне 2003 г., срок наблюдения 12 месяцев. Всего было вакцинировано 8900 овец вакциной Антравак и 8900 голов вакциной против сибирской язвы из штамма 55-ВНИИВВиМ. За животными проводили клинические наблюдения и иммунологический мониторинг по уровню титров антител к сибиреязвенному антигену в РИГА.

Результатами клинических наблюдений не были выявлены отклонения от физиологических параметров. Случаев сибирской язвы среда вакцинированных животных за период наблюдения не было зафиксировано.

Для иммунологических исследований у 15-16 % животных брали сыворотку крови для серологических исследований. Всего было взято в динамике 3000 проб, из которых 26 проб были забракованы в связи с выраженным гемолизом.

Результаты исследований сывороток крови от вакцинированных животных с эритроцигарным антигеном в РИГА представлены в табл. 7. "

Таблица7

Результаты серологических исследований сывороток крови от вакцинированных овец

Наименование вакцины Количество животных/ взято проб Уровень анпггел в различные сроки после иммунизации, мес. (средние титры)

3 6 9 12

Вакцина Антравак 890(У1500 414±45 403*36 375±87 184*67

Вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая 8900/1500 376±132 325±115 178±112 98±57

Полученные результаты серологических исследований свидетельствуют о более высокой иммуногенной активности антигенных комплексов вакцины Антравак. Тигр противосибиреязвенных антител на фоне иммунизации вакциной Антравак был достоверно выше и сохранялся на более высоком уровне в течение 12 месяцев.

Таким образом, вакцина Антравак не вызывает местных и общих изменений у животных, обеспечивает более длительный напряженный иммунитет против возбудителя сибирской язвы и может быть рекомендована для защиты животных от сибирской «вы.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что на территории Таджикистана, с периода 1937-2003 гг. официально зарегистрировано 928 неблагополучных пунктов по сибирской язве, которые формировались в течение длительного времени на фоне благоприятных природно-климатических условий и отгонного животноводства.

2. На основании собственных и архивных статистических материалов установлены территории высокой степени риска по сибирской язве (Хатлонская, РРП, Сугдская, Автономная Горнобадахшанская области). Выявлена тенденция к увеличению неблагополучных пунктов за период 1997-2003гг по сравнению с 1976-1996 гг. Соответственно, за этот же период наблюдается рост заболеваемости животных (в основном мелкий рогатый скот и крупный рогатый скот). В районах неблагополучных по сибирской язве отмечается рост заболевания среди людей занятых в сельском хозяйстве.

3. Комбинированная вакцина против сибирской язвы животных безвредна и авирулентна для экспериментальных моделей и продуктивных животных (телят и овец). Комплекс корпускулярных и растворимых антигенов, входящих в состав вакцины, обладает достоверно высокой иммуногенной активностью и протективной эффективностью за счет активации клеточных и гуморальных факторов иммунитета.

4. В производственных условиях установлена безвредность и более высокая иммуногенная активность вакцины Антравак, по сравнению с вакциной на основе штамма 55-ВНИИВВиМ, титры антител через 12 месяцев были на уровне 184 ±67 и 98±57 соответственно.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Результаты работы включены в методические указания по профилактике сибирской язвы у животных в Таджикистане (Утверждены МСХ Таджикистана).

2. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при подготовке ветеринарных специалистов на кафедре иммунологии Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И.Скрябина (Россия), и в Таджикском государственном аграрном университете по специальности 310800 - Ветеринария.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Результаты исследований рекомендуется использовать при организации и проведении противоэпизоотически*? мероприятий по предотвращению сибиреязвенной инфекции у животных и учебном процессе по дисциплине «Эпизоотология и инфекционные болезни животных» и «Иммунология» в высших учебных заведениях по специальностям 310800 - Ветеринария.

Список основных работ, опубликованных по материалам диссертации

1 .Девришов Д.А. Сравнительная характеристика антракс вакцин / Девришов Д.А., Наврузшоева Г.Ш. // Материалы международной научно-практической конференции 22 ноября 2003г посвященная 60- летаю Тадж НИВИ. - Душанбе.-С. 15-17.

2. Наврузшоева Г.Ш. Экспериментальное испытание антракс-вакцин. / « Наврузшоева Г.Ш., Девришов Д.А. // Ветеринарная медицина. - 2005. - №1. - С.25-27

3. Наврузшоева Г.Ш. Эпизоотологические данные по сибирской язве в Таджикистане. / Наврузшоева Г.Ш., Девришов Д.А. // Ветеринарная медицина. - 2005. -№1.-С.27

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 30.09.05 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,25 Печать авторефератов (095) 730-47-74,778-45-60

1

V

»18273

РНБ Русский фонд

2006-4 16450

Актуальность проблемы. Большим достижением человечества явились открытия, связанные с вакцинопрофилактикой, благодаря чему были ликвидированы или сведены до минимума риски возникновения большинства опасных антропозоонозов. Среди инфекции, представляющих опасность для животных и людей, остается сибирская язва, возбудитель которой сохраняется в очагах заболевания более 70 лет. По данным МЭБ (2000-2004гг) сибирская язва ежегодно регистрируется среди животных большинства стран Азии и Африки (Индия, Пакистан, Ангола, Эфиопия, Монголия, Китай и др.). Особого внимания заслуживает ситуация в регионах Средней и Центральной Азии стран, приграничных РФ или имеющих тесные экономические связи (Казахстан, Таджикистан, Узбекистан, Киргизия) Так, за последние годы в Республике Таджикистан было зарегистрировано более 1000 неблагополучных пунктов (А. Назаров, 1997). По данным СЭС в 2000г только в г. Душанбе было зарегистрировано 338 случаев заболевания сибирской язвой среди людей, и источником их инфицирования явилось мясо, зараженное бациллами сибирской язвы

Сибиреязвенная инфекция продолжают регистрировать в традиционно эндемичных регионах, что свидетельствует о реальной возможности возникновения сибирской язвы в любой стране. Ведущие учёные инфекционисты предполагают возможность возникновения вспышек среди животных, не имеющих иммунитета к возбудителю и, в связи с этим, необходимость разработки и применения новых методов надзора и борьбы с этой болезнью становится весьма актуальной задачей. Высокая устойчивость B.anthracis к физическим и химическим факторам, значительная адаптационная способность к длительному сохранению, несмотря на существующую систему профилактических мероприятий, требует особого внимания специалистов к этому возбудителю.

Животноводство в Республике Таджикистан является одной из основных отраслей экономики, обеспечивающей население молоком и мясом, а также сырьем для легкой промышленности. Учитывая специфику ведения животноводства, вопросам защиты населения от опасных зооантропонозных инфекционных заболеваний, в частности, сибирской язвы у животных, придается большое значение. Организованы плановые диагностические и профилактические мероприятия, однако ликвидировать болезнь до сих пор не удается. Это связано с отсутствием достаточного финансирования для организации специфической профилактики, учета и обеззараживания всех очагов.

В последние годы учеными РФ разработана новая вакцина против сибирской язвы животных «Антравак», обладающая более высокими защитными свойствами, чем известные живые вакцины. Внедрение новой вакцины, позволит значительно повысить эффективность профилактики против сибирской язвы животных на территории Таджикистана.

Диагностика и регистрация очагов сибирской язвы в различных регионах Таджикистана, выявление источников В. Anthracis является первостепенной задачей, стоящей перед ветеринарной службой. Важным является создание модели эпизоотологического мониторинга, позволяющей с использованием наиболее информативных диагностических методов объективно, своевременно оценивать распространенность и обосновывать комплекс профилактических мероприятий, направленных на ликвидацию болезни.

Цель и задачи. Цель исследований - эпизоотологический анализ и мониторинг сибиреязвенной инфекции в Таджикистане, испытание новых профилактических средств и разработка научно обоснованных мероприятий, предотвращающих заболевание животных сибирской язвой.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1.Провести эпизоотологический анализ заболеваемости сибирской язвой животных за период 1937-2003 гг. на территории Республики Таджикистан:

2.Провести анализ эффективности диагностических и противоэпизоотических мероприятий.

3.Изучить антигенную и протективную активность комбинированной вакцины против сибирской язвы животных в экспериментальных условиях.

4.Изучить иммуногенные свойства противосибиреязвенных вакцин (вакцина комбинированная против сибирской язвы животных, вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая; вакцина против сибирской язвы животных из штамма СТИ-1 живая) в неблагополучных по сибирской язве регионах Таджикистана.

Научная новизна. Научная новизна и теоретическая значимость работы заключается в том, что :

-впервые проведен эпизоотологический анализ и оценка эффективности мероприятий по ликвидации сибирской язвы в Республике Таджикистан за период 1937-2003 годы;

-впервые в экспериментальных условиях проведены опыты по изучению протективной активности различных противосибиреязвенных вакцин на лабораторных моделях, телятах и овцах, изучено влияние вакцинных препаратов на клинико-гематологические и иммунологические параметры организма животных при вакцинации и инфицировании культурой B.anthracis;

-впервые проведен мониторинг территории Республики Таджикистан, определены регионы эпизоотического риска по сибирской язве, составлена карта распространенности сибирской язвы на территории Таджикистана и определены регионы, в которых требуется проведение специальных мероприятий;

-впервые проведены производственные испытания комбинированной вакцины против сибирской язвы животных в неблагополучных регионах Таджикистана, дана сравнительная оценка иммуногенных свойств различных вакцинных препаратов.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований по клинико-гематологическим и иммунологическим изменениям у животных, иммунизированных противосибиреязвенными вакцинами и инфицированных тест штаммом В. anthracis, являются основой для оценки эффективности ветеринарных иммунобиологических препаратов против особо опасных инфекций. Выполненные исследования и данные по эпизоотологии, сезонной динамике позволили научно обосновать необходимость совершенствования специфических мер борьбы с сибирской язвой у животных.

Материалы исследований выполнены самостоятельно автором, а также совместно с учеными МГАВМиБ, Среднеазиатского ящурного.института и специалистами ГУВ МСХ Таджикистана и включены в инструктивно-методические документы, одобренные НТС Министерства сельского хозяйства Таджикистана, которые включают комплекс мер и являются практической и теоретической основой профилактических мероприятий по

• ликвидации сибирской язвы в Республике Таджикистан.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту? результаты эпизоотологического и эпидемиологического анализа по сибирской язве животных и населения в Таджикистане за период 1937-2003 годы; материалы сравнительного изучения антигенных и протективных свойств вакцин против сибирской язвы животных в экспериментальных условиях на лабораторных моделях, телятах и овцах; результаты исследований влияния различных доз вакцинных препаратов и тест культуры В. anthracis на клинико-гематологические и иммунологические показатели организма животных; данные эпизоотологического мониторинга территории Республики Таджикистан по сибирской язве; результаты производственных испытаний комбинированной вакцины против сибирской язвы животных в неблагополучных регионах Таджикистана.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научных конференциях Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии и АН Таджикистана (2003-2004 гг.) и включены в отчеты Академии наук Таджикистана (2003-2004гг.).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 научные статьи.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста в формате А4 и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения. Библиографический список включает 212 публикаций, из них 78 иностранных источников. Материалы иллюстрированы 13 таблицами, 15 рисунками.

1. Результаты работы включены в методические указания по профилактике сибирской язвы у животных в Таджикистане (Утверждены МСХ Таджикистана), (протокол №3 от 26 октября 2004 г.)

2. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при подготовке ветеринарных специалистов на кафедре иммунологии Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И.Скрябина (Россия) и в Таджикском государственном аграрном университете по специальности 310800 -Ветеринария.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Результаты исследований рекомендуется использовать при организации и проведении противоэпизоотических мероприятий по предотвращению сибиреязвенной инфекции у животных и учебном процессе по дисциплине «Эпизоотология и инфекционные болезни животных» и «Иммунология» в высших учебных заведениях по специальностям 310800 - Ветеринария.