Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Эндокринные аспекты программированного воспроизводства крупного рогатого скота с использованием гонадолиберина и простагландина Ф2 альфа

На правах рукописи

ОД

ТУРКОВ Владимир Георгиевич

ЭНДОКРИННЫЕ АСПЕКТЫ ПРОГРАММИРОВАННОГО ВОСПРОИЗВОДСТВА КРУПНОГО РОГАТОГО

СКОТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГОНАДОЛИБЕРИНА И ПРОСТАГЛАНДИНА

Ф2 альфа

16.00.07 — Акушерство и искусственное осеменение

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Воронеж 1996

Работа выполнена на кафедре внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства Ивановской государственной сельскохозяйственной академии.

11 а у ч п ы й к о н с у л ьт а и т —

заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор ветеринарных наук, профессор Нежданов А. Г.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Мисайлов В. Д., доктор ветеринарных наук, профессор Авдеенко В. С., доктор биологических наук, Советкин С. В.

Ведущая организация —-

Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины.

Защита состоится . . 1996 г.

в ¿¿¿Стасов на заседании диссертационного совета Д. 020.65.01 при Всероссийско.м научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии (394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « . . . »

Ученый секретарь диссертационного совета

. . 1996 г.

СЛОБОДЯНИК В. И.

1. Общая характеристика работы

1.1 Актуальность проблемы. Достижения в области разработки приемов повышения плодовитости крупного рогатого скота,а так же раскрытие тонких механизмов регуляции половой функции заложили основу для рационального воспроизводства как традиционными методами, так и путем использования биологически активных соединений (Заводовский М.М.,1941; Студенцов А.П.,1953 - 1963; Бочаров И.А.,1956; Шипилов В.С.,1956 - 1994; Шаталов П.И.,1961 - ' 1975; Зверева Г.В.,1969 - 1994; Кононов Г.А.,1968 - 1977; Черемисинов Г.А.,1968 - 1994; Ильинский Е.В.,!972; Полянцев Н.И.,1972 - 1995; Клинский Ю.Д.,1973 - 1994; Степанов Г.С.,1977 - 1981; Прокофьев М.И.,1977 - 1993; Нежданов А.Г.,1978 - 1995; Падучева А.Л.,1979; Буянов А.А.,1984; Павлов В.А.,1984; Медведев Г.Ф.,1987 - 1994; Хантер Р.Х.Ф.,1984; Шорт Р.В.,1987; Гордон А.,1988; Завергяев Б.П.,1989 ; Авдеенко В.С.,1993; Советкин С.В.,1993; Федосова Н.Х., 1994 и др.).

Воспроизводство крупного рогатого скота представляет сложный биологический процесс. Одноплодие и длительный период цикла репродукции вида определяют не только низкие темпы размножения, но и сопряжены с риском возникновения бесплодия и экономическими потерями. Это побуждает создавать новые и совершенствовать известные технологии воспроизводства, а так же приемы ликвидации бесплодия и представляет одну из важнейших задач мировой науки и практики.

Открытие и химический синтез простагландинов и гонадо-либерпнов позволили расширить возможности контроля за тонкими процессами в цикле размножения. Воздействуя на регулягорные механизмы половой функции можно управлять наиболее ответственными процессами в период овуляции, оплодотворения, беременности и родов. Реальной становится возможность стабильного получения приплода и продукции в запланированные периоды.

Несмотря на очевидные успехи в биотехнологии размножения, потенциальные возможности воспроизводства крупного рогатого скота полностью не использованы. Многолетний опыт убедительно свидетельствует, что получить желаемый результат путем использования гормональных препаратов можно лишь при обоснованном и правильном назначении последних. Включаясь в регуляторные механизмы организма, эти соединения должны способствовать более полному физиологическому течению естественных процессов. Недооценка эндокринного статуса и физиологического состояния организма животного при применении биологически активных соединений может дать не только отрицательный результат, но и явиться причиной глубоких нарушений.

Отмеченное заставляет признать, что практическое скотоводство не располагает доступным технологическим циклом приемов прогнозирования эндокринного статуса гонад, контроля овуляции, оплодотворения и последующего физиологического состояния. Ограниченные сведения о функции аденогипофиза, яичников, надпочечников и щитовидной железы в организме коров и телок в период полового цикла и в начальный период беременности после спонтанной и индуцированной овуляции, затрудняют разработку - научно обоснованных подходов коррекции половых процессов. Требуют уточнения данные о морфофункциональной перестройке в половых железах под влиянием биологически активных соединений. Необходимо дальнейшее совершенствование приемов клинической диагностики функционального состояния гонад. Недостаточные фундаментальные исследования ограничивают возможности и. масштабы использования биотехнологических приемов в воспроизводстве крупного рогатого скота.

Изучение функции желез внутренней секреции и разработка теоретических основ использования простагландинов и гонадолиберинов для управления воспроизводством крупного рогатого скота, а так же выяснение влияния гормональных препаратов на генеративную функцию половых желез, являются необходимым условием для определения рациональных приемов управления половой функцией и разработки биотехнологической системы в размножении.

1.2. Цель н задачи исследования. Принимая во внимание недостаточную изученность регуляции функции размножения и приемов ее коррекции мы поставили перед собой цель изучить эндокринные аспекты регуляции полового цикла и разработать рациональные Методы программированного воспроизводства крупного рогатого скота с использованием препаратов простагландина и гонадолиберина.

• Дл» достижения намеченной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить гормональные взаимоотношения в организме коров и телок в течение полового цикла и в начальный период становления беременности после спонтанной и индуцированной овуляции и определить разрешающие возможности лабораторного и клинического методов ранней диагностики беременности.

2. Выяснить влияние препаратов гонадолиберина и простагландина Ф гальфа на функциональную активность аденогипофиза, гонад, надпочечников и щитовидной железы и разработать теоретические основы гормонального контроля за воспроизводством крупного рогатого скота. •

3. Выяснить влияние гонадолиберинов и простагландина Ф гальфа на генеративную функцию половых желез и определить рациональные методы использования гормональных препаратов для регуляции репродуктивной функции животных. !■ • ■

4.Разработать и предложить производству научно обоснованную биотехнологическую сист ему интенсивного воспроизводства крупного рогатого скота с использованием гормональных препаратов.

1.3. Научная попиши и теоретическая значимость. Получены новые данные н расширено современное представление о функции аденогипофта, яичников, надпочечников и щитовидном железы в течение полоного никла и в начальный период становления беременности у шпактных животных и с индуцированной овуляцией.

Определены клинические параметры, отражающие функциональную активность желтого тела, разработана методика ранней клинической диагностики беременности и дана се сравнительная оценка с известным лабораторным методом.

Получены новые данные по влиянию препаратов гонадолибери-на и простагландниа Ф гальфа на гормонсинтезирующую функцию аденогипофта, гонад, надпочечников и щитовидной железы.

Разработаны теоретические основы и определены рациональные способы использования препаратов простагландниа Ф 2альфа и го-надолиберина в биотехнологии размножения.

Получены новые данные о доминирующей функции п последовательности циклической активности яичников в спонтанном и индуцированном половом цикле.

Показана целесообразность применения препаратов простагландниа Ф зальфа н гонадолиберина в системе интенсивного воспроизводства крупного рогатого скога.

1.4.Практнческая значимость работы. На основании научно -теоретических положении сформулированных в диссертации разработаны и предложены производству: способ клинической оценки функционального состояния яичников у крупного рогатого скота с целью научно обоснованного применения биологически активных соединений для управления процессом размножения; способ ранней диагностики беременностн, через 3 недели после осеменения, основанный на клинической оценке функционального состояния яичников и учете признаков стадии возбуждения; уточнена оценка показателей ранней лабораторной диагностики беременности по содержанию прогестерона в крови; разработана и предложена производству биотехнологическая система программированного воспроизводства крупного рогатого скота, включающая: клиническую оценку морфологического и функционального статуса яичников; индукцию стадии возбуждения при наличии в яичниках активно функционирующих желтых тел; стимуляцию овуляции; искусственное осеменение в фиксированное время; контроль за последующим физиологическим состоянием животных.

1.5.Реализация результатов исследований. Основные научные положения вошли в методические рекомендации по диагностике, терапии и групповой профилактике болезней органов размножения у крупного рогатого скога, утвержденные Минсельхозпродом России (1995),в методические рекомендации по борьбе с бесплодием

крупного рогатого скота в хозяйствах Владимирской области (1987), в рекомендации по управляемому воспроизводству крупною рогатого скота с помощью ипрофана и сурфагона рекомендованные к внедрению ЦНО АПК Ивановской п Владимирской областей (1995).

Научно-теоритическне положения и практические рекомендации сформулированные в диссертации используются в учебном процессе Ивановской Госсельхозакалемии, Воронежском Госагроуниверситете, Санкт-Петербур! ской академии ветеринарной медицины, Беларусской сельхозакадемии (Республика Беларусь) и др.

1.6. Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации доложены п лолучши одобрение:

- па научно-практических конференциях Ивановского сельскохозяйственного инспиуш в 1989, 1993, 1995 ;

- на IV конференции ЦНИЛ ГИДУВа "Центральная регуляция вегетативных функции" Тбилиси, 1988;

• на научных конференциях профессорско-преподавшельского состава, ■ научных сотрудников н аспирантов Ленинградского ветеринарного института. Ленинград, 1985, 1988;

- на республиканской конференции "Достижения ветеринарной науки и практики по повышению продуктивности сельскохозяйственных животных". Tapiy, 1988;

- на секции Всесоюзной школы по физиологии эндокринной системы. Ленинград, 1985;

- на Всесоюзной научной конференции "Проблемы диапюстнки незаразных болезнен сельскохозяйственных животных а Промышленном животноводстве". Воронеж, 1986;

- на областных совещаниях и семинарах работников сельского хозяйства Владимирской облает. Владимир, 1987, 1988, 1989, 1992, 1994,1995;

- на Всероссийской научной и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения. Воронеж, 1994;

- па координационном совещании по итогам и перспективам научных исследований по проблемам патологии животных и разработке средств и методов терапии и профилактики. Воронеж, 1995.

1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 научных работ.

1.8. Объем и структура диссертации.Диссертация изложена на 308 страницах и состоит из введенш, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов собственных исследований, анализа результатов собственных исследований, выводов и практических предложений и списка использованной литературы, включающего 29) наименование отечественных и 280 иностранных авторов. Работа содержит 41 таблицу и 63 рисунка.

1.9. На защиту выносятся следующие основные положения диссертации:

- эндокринные взаимоотношения у крупного рогатого скота в течение полового цикла и в начальный период становления беременности;

- ранняя клиническая и лабораторная диагностика беременности у крупного рогатого скота;

- функциональная активность аденогппофиза, гонад, надпочечников и щитовидной железы в фолликулярную и лютепновую фазы полового цикла под влиянием препаратов гонадолиберина и простагландипа Фг альфа;

- биотешологическая система коррекции половой функции и ее практическое использование.

2. Материал и методы исследования

Работа выполнена в 1984-1996 гг. на коровах и телках черно-пестрой породы. Животные принадлежали сельскохозяйственным предприятиям Ивановской, Владимирской и Московской областей. Лабораторные исследования проведены в лаборатории РИА Ивановского сельхозинститута. Основные этапы работы и количественная характеристика материала приведены в таблице I.

Таблица 1

Этапы работы и количество животных

N1 п/п| Название эксперимента 1 Возрастая 1 Обшее 1 Г и V п п ы | группа | поголовье| подопытная| контроль

1 1 2 | 3 | 4 | 5 | 6

Изучение влияния гонадолн-беринов на функцию адено-

птофта.гонад,надпочечников н щитовидкой железь!

коровы телки

78

54

24

Изучение влияния клопрос-тенола на функцию аденоги-пофта,гонад,надпочечников коровы и щитовидной железы телки

10

10

Разработка клинического метода ранней диагностики беременности у крупного рога- телки того скота

■ 67

67

4. Влияние сурфагона на процесс созревания фолликулов и их овуляцию телки

31

20

5. Показатели стельности после введения различных доз сурфагона

коровы

93

65

28

2

3

а

продолжение таблицы I

1 2 3 4 5 6

6. Влияниесурфагона на оило-дошоряе.мость в 1аЫ1СПМОС1П от количества осеменении коровы 277 90 187

7 Влияние сурфаюна па продолжительность беременности к пол приплода коровы телки 374 157 217

8. Клиническое обоснование использования клопростенола 'для контроля воспроизводства коровы крупного рогатого скот телки . 394 394

9. Последовательность циклической активности яичников в спонтанном и индуцнровашюм полоном цикле ' телки 395 395 395

10 Онлодотиоряемость при осеменении в индуцированный ПОЛОВОЙ ЦИКЛ коровы гелкн 210 163 47

11. Программированное воспроизводство крупного рогатого скота с использованием клон-рост смола и сурфагона телки 385 33» ' 47

Всего животных(голов): 2314

Клиническое исследование животных проведено по общепринятой методике и состояло из общего и специального. Специальное исследование предусматривало определение морфологических показателей яичников и матки. Характеристика яичииков включала определение формы, размеров, консистенции тканей, наличие фолликулов и желтых тел. При характеристике фолликулом онешшалн их размеры, консистенцию и характер зыблснин. Состояние желтых тел было определено формой, размерами, консистенцией тканей н местом локализации в яичнике.

Кровь для лабораторных исследований получали посредством внутреннего катетера №5, а так же путем пункции яремной вены.

Радиоиммунологическое определение лютропина (838 анализов) и пролактина (296 анализов) выполнено по методу Greenwood F.C. et al. (1963). В работе использован высокоочшценный и стандартизованный препарат ЛГ крупного рогатого скота полученный в институте биологии АН Латвийской ССР (Зенкевич Г.А. и соавт.,1989). Мечение препарата лютропина выполнено изоюпом |251 в лаборатории РИА Ивановского СХИ. Гельхромато! рафия проведена с использованием сефадекса. Разделение комплекса антиген - антитело от непрореагировавших компонентов осуществлено по принципу "двойных антител" (Morgan,

Ьа5аго\у,1962). Радиоиммунологическое определение - тестостерона (1748 анализов), эстраднола-17 бета (994 анализа), прогестерона (1986 анализов) проведено с использованием стандартов АО "СЕА-1ЯЕ-БОШМ" и радиоактивных меченных тритием препаратов стероидов ЛМО "Изотоп", а так же антисывороток, полученных в институте физиологии им. И.П.Павлова АН СССР и ВНИИ разведения и генетики сельскохозяйственных животных. Радиоиммунологическое определите кортикостерона (942 анализа), кортизола (1142 анализа), тироксина (1332 анализа) и трийодтиронина (1334 анализа) проведено с использованием наборов реактивов ХОП института биоорганической химии АН БССР.

Радиоиндикация выполнена на спектрометре "Рак-Гамма" и жидкостном сиинтиллянционном счетчике "Рак-бета" (ЬКВ-Швеция).

Статистическая обработка цифрового материала собственных исследований выполнена в соответствии с методическими рекомендациями по биометрии (Лакин Г.Ф.,1980) с использованием стандартных программ.

3. Результаты собственных исследований

3.1. Динамика и взаимоотношение гормонов аденогнпофиза, яичников, надпочечников и щитовидной железы в крови у коров и телок в первые три недели после осеменения

В становлении беременности железам внутренней секреции отводится ведущая роль. Для выяснения функции аденогнпофиза, гонад, надпочечников и щитовидной железы в первые три недели после осеменения у интактных животных и под влиянием гонадолиберина (сурфагон, доза 20 мкг) провели исследование на 48 животных. После искусственного осеменения через 3 недели выполнили лабораторную диагностику беременности по содержанию прогестерона в крови, а через 55-60 дней - клиническую по изменениям в половых органах. По установленному физиологическому состоянию животные были отнесены в группы: первая - стельные, интактные; вторая - нестельные, интактные; третья - стельные с индуцированной овуляцией (гонадолиберином в период осеменения).

У животных первой группы в день осеменения и в последующие дни беременности концентрация лютропнна в крови отражала тоническую секрецию и находилась в пределах от 2 до 3 нг/мл. Не высокое, но стабильное содержание ЛГ являлось характерным для начального периода становления беременности. Результаты исследований свидетельствуют, что у животных первой группы циклическое выделение лютропина предшествовало осеменению.

Применение гонадолиберина в период осеменения не влияет на секрецию лютропина в течение первых трех недель беременности. Концентрация гормона в крови остается близкой к аналогичной у интактных стельных животных.

•В день осеменения у животных второй группы (нестельные, интактные) установлено повышенное содержание лютропина в крови. Концентрация гормона была в 3,2 - 4,3 раза выше, чем у стельных. Через 2 дня после осеменения концентрация лютропина в крови снизилась до показателя тонической секреции. В течение 3-х недель у нестельных животных гонадотропная функция повышается на 9-15 и 21 дни. Анализ динамики лютропина в крови нестельных коров и телок свидетельствует, что осеменение животных в период циклического выделения лютропина не обеспечивает оплодотворения вследствие значительного временного интервала до овуляции., Отсутствие беременности определяет гонадотропную активность в середине и конце полового цикла.

В период стадии возбуждения полового цикла у всех животных отмечается повышение концентрации тестостерона в крови на 14,919,6% (Р<0,001) с 0,139-0,150 до 0,167-0,172 нмоль/л, эстрадиола-17 бета на 41-76,6% (Р<0,05) с 0,24-0,31 до 0,42-0,44 нмоль/л, а содержание прогестерона снижается до минимальных значений (менее 1 нмоль/л) и свидетельствует об отсутствии функционально активной лютеиновой ткани. В яичниках отмечается рост фолликулов, увеличение их в диаметре и появление зыбления. Ткани не функционирующих желтых тел уплотняются и приобретают неправильную форму. Матка, как правило, располагается в тазовой полости и имеет высокую ригидность.

В первые 2 дня после осеменения у животных первой группы (стельные интактные) концентрация тестостерона в крови остается без изменений, а эстрадиола-17 бета понижается. С 4-го дня начинается повышение концентрации прогестерона в крови. Начальный период становления беременности сопровождается устойчивой секрецией тестостерона (0,162-0,179 нмоль/л), которая на 10,7-22,4% выше, чем в лютеиновую фазу полового цикла, а концентрация эстрадиола-17 бета снижается на 67,3-26,4%. К концу 3 недели беременности эстрогенная активность повышается и отражает особенность функции гонад в период беременности. Периодическое развитие фолликулов до определенных стадий в период беременности, не позволяет им достигать предовуляторного состояния в связи с отсутствием циклической гонадотропной стимуляции, а стабильное содержание тестостерона в крови беременных животных отражает постоянные процессы атрезии фолликулов.

Становление беременности тесно связано с активной функцией лютеиновых структур желтого тела, которая с 4-го по 9-ый день беременности обеспечивает среднесуточный прирост концентрации прогестерона более 1 нмоль/л, а с 10-го по 21-ый день - около 0,5 нмоль/л. В теченне первых трех недель беременности концентрация

дни

Рис.1 Изменение концентрации прогестерона (А) и кортизола (Б) в крови коров и телок в течение трех недель после осеменения:

_ стельные интактные;

.... нестельные интактаые; ----стельные с индуцированной овуляцией

прогестерона в крови возрастает более чем в 13 раз (рис.1А). Через 2) день после осеменения у беременных животных яичники содержащие желтые тела имеют объем 1,5-2 раза больший, чем яичники без желтых тел. Форма яичников определяется положением желтого тела и варьирует от овально-округлой до овально-удлиненной с утолщением в месте локализации желтого тела. Желтые тела имеют примерный диаметр от 1,5 до 2 см и упруго-уплотненную консистенцию и хорошо отличимы от податливой эластичной ткани яичника.

Применение гонадолиберина в период осеменения не вызывает значительных изменений в функции яичников в начальный период становления беременности. Секреция половых стероидных гормонов близка к аналогичной у ингактных стельных животных. Закономерные процессы в секреции гормонов подтверждает тесная коррелятивная связь между изменениями динамик тестостерона. (г=+0,66), эстрадиола-17 бета (г=+0,8) и прогестерона (г=+0,97), а морфологические характеристики яичников и желтых тел не отличаются от ранее отмеченных у стельных ин гактных животных.

У животных второй группы (нестельные иитактные) в течение первых двух дней концентрация тестостерона повышается на 4% (с 0,167 до 0,173 нмоль/л), а затем понижается на 17,5-16,5% к 6-9 дню и находится в пределах 0,148-0,149 нмоль/л. На 12-17 и 21 дни происходит активация секреции тестостерона. В эти сроки содержание гормона повышается на 17,4-13,9% и 15,8%, соответственно. В первые 2 дня после осеменения концентрация эстрадиола увеличивается на 11,1% (с 0,412 до 0,458 нмоль/л). В течение трех недель содержание эстрадиола-17 бета в крови неоплодотворившихся животных выше в 1,5 раза, чем у стельных. На 15 и 21 дни секреция эстрогена возрастает и концентрация его повышается до 0,5+/-0,16 и 0,55+/-0,08 нмоль/л, соответственно. У нестельных животных в секреции тестостерона и эстрадиола прослеживаются однотипные изменения: в первые 2 дня после осеменения, в период с 12 по 17 дни и через 21 день (г=+0,44).

• Повышение прогестагенной активности лютеиновых структур у животных второй группы отмечается с 4-го дня. В результате более низкого среднесуточного прироста прогестерона (менее 0,7 нмоль/л), содержание гормона к 9-ому дню достигает 5 нмоль/л, что на 53% ниже, чем у стельных животных в этот период. После 17 дня у нестельных коров и телок концентрация прогестерона резко снижается и на 19-21 день достигает минимального значения (рнс.1А).

Начиная с 19 дня после осеменения у нестельных животных проявляются признаки стадии возбуждения полового цикла, которые к 21 дню становятся ярко выраженными. Яичники, в которых ранее располагались желтые тела уменьшаются в объеме, желтые тела уплотняются, и приобретают неправильную форму. В яичниках появляются крупные фолликулы и повышается ригидность матки. При этом, очевидной является связь между морфологическим строением желтого тела и его функцией. Особенности функции гонад и клиническое проявление признаков стадии возбуждения через 3

недели после осеменения могут быть положены в основу разработки клинического метода ранней диагностики беременности у крупного рогатого скота.

В лютеиновую фазу полового цикла содержание кортизола в крови животных первой группы (стельные, интактные) составляет 5,8+/-0,6 нмоль/л. В период стадии возбуждения концентрация гормона повышается в 2,1 раза (12,7+/-3,8 нмоль/л). В течение первых двух дней содержание кортизола возрастает в 4 раза и достигает 23,7 нмоль/л (Р<0,02). На 4-ые сутки беременности концентрация кортизола в крови понижается. Активация функции надпочечников происходит на 9 и 15 дни (рис. 1 Б).

У животных третьей группы (стельные с индуцированной овуляцией) в лютеиновую фазу полового цикла содержание кортизола в крови составляет 6,5 нмоль/л. В день осеменения концентрация кортизола возрастает в 3,8 раза и достигает 24,7 нмоль/л, в течение 2-х дней остается на высоком уровне (19,8 нмоль/л), а затем содержание гормона в крови понижается (рис. 1Б).

У телок второй группы (нестельные интактные) в период стадии возбуждения и в первые два дня после осеменения содержание кортизола находится в пределах 5,0+/-0,6 - 5,9+/-1,8 нмоль/л, что достоверно ниже, чем у стельных животных в этот период (Р<0,05). К концу 3 недели, в период формирования очередной стадии возбуждения полового цикла, концентрация кортизола в крови составляет 10,5+/-1,2 нмоль/л.

Анализ результатов свидетельствует, что в период стадии возбуждения и в первые два дня после нее у животных первой и третьей групп (беременные) происходит достоверное повышение содержания кортизола в крови. Активация глюкокортнкоидной функции в период овуляции и оплодотворения свидетельствует о наличии тесной связи между этими процессами.

Несмотря на яркие признаки стадии возбуждения, у нестельных животных в период осеменения, концентрация кортизола в крови существенно не изменилась.

Таким образом, глюкокортикоидная функция надпочечников в первые два дня после осеменения может быть использована в качестве критерия оценки полноценности процесса оплодотворения и начала беременности.

Функциональное состояние щитовидной железы в период становления беременности определялось по секреции тироксина и трийодтиронина.

Содержание тироксина в крови первой группы (стельные интактные) в период стадии возбуждения составляет 68,1 +/-8,7 нмоль/л, а трийодтиронина - 1,8+/-0,18 нмоль/л. Через два дня после осеменения концентрация гормонов в крови понижается: тироксина - на 23,5% (до 52,1+/-5,4 нмоль/л), а трийодтиронина - на 29,4% (1,39+/-0,07 нмоль/л). В последующий период беременности содержание тиреоидных

гормонов в крови стабилизируется, между секрецией тироксина и трийодтиронина устанавливается связь (г=+0,73).

Применение гонадолиберина в период осеменения не влияет на функцню щитовидной железы в первые три недели беременности. Однотипные изменения в секреции тироксина и трийодтиронина в начальный период беременности у животных с индуцированной овуляцией подтверждает коррелятивная связь (г=+0,88).

У коров второй группы (нестельные интактные) в период стадии возбуждения содержание тироксина в крови составляет 69,5+/-13,0 нмоль/л, а трийодтиронина - 1.87+/-0.19 нмоль/л. В течение двух дней после осеменения функциональная активность щитовидной железы понижается и концентрация тироксина в крови уменьшается на 14,7% (59,3+/-12,0 нмоль/л), а трийодтиронина - на 7% (1,74+/-0,14 нмоль/л). Активация функции щитовндной железы наступает в середине, полового цикла и сопровождается повышением секреции тироксина до 73,6+/-12,2 нмоль/л, а трниодтироннна до 1,9+/-0,11 нмоль/л.

Если учесть, что в середине полового цикла происходит активация секреции лютропина, полоиых стероидов, то становится очевидной связь между функцией аденогнпофиза, яичников и процессами метаболизма.

Полноценное течение процессов размножении наряду с гормональной активностью желез внутренней секреции определяется гормональными отношениями. Анализ межгормональных отношений в течение полового цикла к в начальный период становления беременности свидетельствует о непосредственном участии гормонов яичников, надпочечников и щитовндной железы в реализации функции размножения.

3.2. Разработка клинического метода ранней диагностики беременности у крупного рогатого скота

Закономерности функции желтого тела у крупного рогатого скота в течение полового цикла и при наступлении беременности, а так же наличие связи между морфологической характеристикой желтого тела и его функцией могут быть использованы для определения беременности через три недели после осеменения клиническими методами исследования. В таблице 2 представлены результаты диагностики беременности у крупного рогатого скота.

По результатам исследований (разд.3.1) были определены пороговые значения концентрации прогестерона в крови, согласно которым животные с содержанием гормона в крови 3,1 нмоль/л и более были отнесены к стельным; при содержании прогестерона менее 2,0 нмоль/л - к нестельным; а с содержанием прогестерона в крови от 2,1 до 3,0 нмоль/л животных отнесли к группе с проблемным диагнозом, так как такая концентрация прогестерона была отмечена как у стельных, так и у неоплодотворнвшихся животных. Исходя из представленных

критериев 76,2% телок были отнесены к стельным, 13,4% - к нестельным, а 10,4% животных не получили окончательного диагноза.

Таблица 2

сезультаты диагностики беременности у телок лабораторным и клиническими методами исследования

Метод

Время исслед. ¡Исследовано) Результат

после осемен-я I животных (в днях) I (голов)

стельные! нестельные достоверн. | неопр.

| к-во: % | к-во: ",ъ | к-во: %

Радионммуно-логичесмш

Клинический (пальпация яичников)

Клинический (пальпацмя матки)

21 67 51 76,2 9 13,4 7 10,4

21 67 52 77,6 15 22,4 - . -

50-60. 67 44 65,6 23 34,4 -

Клиническая диагностика беременности по функциональному состоянию яичников и учету признаков стадии возбуждения полового цикла через 3 недели после осеменения позволила установить у 77,6% телок желтые тела в яичниках. Яичники с желтыми телами были примерно в 1,5-2 раза больше яичников, без желтых тел. Желтые тела имели диаметр 1,5-2 см и упруго-уплотненную консистенцию, хорошо выраженные границы. Независимо от локализации желтого тела над ним располагалось возвышение, которое влияло на форму яичника. Признаки стадии возбуждения отсутствовали. Эти животные были признаны стельными.

У 15 (22,4%) телок в яичниках активно функционирующие желтые тела отсутствовали. Яичники без желтых тел чаше имели овальную форму, упругие и податливые ткани, в которых располагались фолликулы разного размера. Матка характеризовалась высокой ригидностью. Общим клиническим исследованием были установлены феномены стадии возбуждения.

Ректальное исследование в период с 50...60 день после осеменения позволило установить явные изменения в матке характерные для беременности у 65,6% животных, а 34,4% - были признаны небеременными.

Таким образом, исследования свидетельствуют о совпадении резуль-татов радиоиммунологического и клинического методов диагностики беременности через три недели после осеменения при наличии стельности у животных.

В таблице 3 представлена оценка точности пограничных критериев концентрации прогестерона в крови стельных и нестельных телок.

Таблица 3

Концентрация прогестерона в крови через три недели после осеменения и физиологическое состояние телок

Концентрация Кол - во Диагностика беременности Диагностика беременности прогестерона телок через 21 день после осемене- через 50...60 дней по из-

(нмоль/л) (голов) ння по состоянию яичников менения.м в матке_

стельные нестельные стельные нестельные

_к - во . % к - во % к - во % к - во %

До 2,0 9 - - 9 100 - - 9 100

2,1 -3,0 7 1 14,3 6 85,7 I 14,3 6 85,7

3,1 и более 51 51 100 - - 43 84,3 8 15,7

67 52 77,6 15 22,4 44 65,6 23 34,4

У 9 телок (табл.3) с концентрацией прогестерона в крови до 2 нмоль/л через три недели после осеменения акгивнофункци-онирующие желтые тела отсутствовали. У животных имелись признаки стадии возбуждения. Ректальным исследованием через 50-60 дней после осеменения было подтверждено отсутствие беременности у этих животных. Таким образом, у животных с содержанием прогестерона в крови до 2,0 нмоль/л установлено полное совпадение результатов исследования через 21 и 50-60 дней после осеменения.

У 1 телки из 7, с содержанием прогестерона от 2,1 до 3,0 нмоль/л через 21 день после осеменения в яичнике установлено активнофунк-ционирующиее желтое тело, признаки стадии возбуждения отсутствовали. Через 2 месяца у этого животного беременность была подтверждена изменениями в магке.

У 6 животных желтые тела в яичниках отсутствовали и были установлены признаки стадии возбуждения полового цикла, что дало основание считать животных нестельными. Последующее клиническое исследование подтвердило этот диагноз.

У 51 телки с содержанием прогестерона в крови более 3 нмоль/л через три недели после осеменения были установлены активнофунк-ционирующие желтые тела в яичниках. Через два месяца 43 (84,3%) телки были признаны беременными по изменениям в матке.

Установленные различия связаны с прерыванием беременности в результате гибели эмбрионов в период между исследованиями и соответствуют сообщениям других исследователей (Степанов Г.С. и соавт.,1977; Мюйрсепп И.Я. и соавт.,1988; Спрингович Н.Н.,1989).

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют, что по точности диагноза ранняя клиническая диагностика беременности не уступает лабораторной, а доступность и быстрота получения результата делает клинический метод более практичным.

J.3. Влияние гонадолиберинов на функциональную активность аденогипофиза, гонад, надпочечников и щитовидной железы в лютеиновую фазу полового цикла

Непродолжительный период действия, а так же слабое отсроченное влияние гонадолиберинов на функцию желез внутренней секреции свидетельствуют, что действие препаратов этой группы реализируется в первые часы после их проникновения в кровяное русло.

Изучение непосредственного влияния препаратов гонадолибе-рина сурфагона и Berlin Chemie выполнено в лютеиновую фазу полового цикла на 15 коровах и телках. Препараты применены однократно, внутримышечно, ГнРГ Berlin Chemie в дозах I мг и 100 мкг, сурфагон в дозе 100 мкг. Функциональная активность желез внутренней секреции оценена по изменениям секреции гормонов до и после применения гонадолиберинов. Кровь для исследований получена посредством внутривенного катетера до применения препаратов, а затем через каждые 15 минут в течение 6 часов после их введения.

На 12 день полового цикла концентрация лютропина в крови составляет 0,7+/-0,12 нг/мл. Внутримышечное введение ГнРГ Berlin Chemie в дозе 1 мг повышает содержание ЛГ в крови в течение 15 минут до 1,8+/-0,3 нг/мл, а к концу первого часа до 4,9 нг/мл. Наиболее выраженное изменение секреции лютропина наступает во второй час постинъекционного периода. К концу второго часа содержание ЛГ в крови возрастает в 31 раз по отношению к исходному и составляет 25,2+/-б,8 нг/мл (Р<0,001). Максимальная концентрация лютропина в крови отмечается через 2 часа 15 минут после применения препарата, когда содержание гормона возрастает в 39,5 раза и достигает 27,7+/-5,3 нг/мл. В последующий период наблюдений секреция гормона понижается и к 5-му часу приближается к исходному значению.

Введение гонадолиберина активизирует про л актин-вы делительную функцию аденогипофиза. К концу второго часа содержание пролактина в крови возрастает в 4,8 раза (с 10,3 до 50,2 нг/мл), а затем

концентрация гормона понижается и к 4-ому часу постинъекционного периода достигает исходного значения.

Непродолжительное, но интенсивное повышение гонадотропной функции аденогипофиза после применения гонадолиберина приводит к изменению гормональной активности гонад.

После внутримышечного введения сурфагона в дозе 100 мкг в течение 45 минут содержание тестостерона в крови повышается в 2,7 раза (с 0,619 до 1,69 нмоль/л; Р<0,01), а через 3 часа 30 минут концентрация андрогена в крови возрастает в 6 раз и достигает 3,66 нмоль/л(Р<0,001). После этого содержание гормона в крови снижается и к 5 часам 30 минутам достигает 1,42+/-0,24 нмоль/л.

Гонадолиберин Berlin Chemie в аналогичной дозе после введения вызывает так же повышение концентрации тестостерона в крови. Через 4S минут содержание гормона в крови увеличивается в 3,2 раза(с 0,589 до 1,86 нмоль/л; Р=0,02). В результате наростания секреции гормона в крови к 3 часам 30 минутам его концентрация возрастает в 6,1 раза и достигает 3,59 нмоль/л (Р<0,001), а затем снижается.

Однотипность изменения секреции тестостерона под влиянием сурфагона и ГнРГ Berlin Chemie подчеркивает высокая коррелятивная связь(г=+0,83).

Сурфагон в дозе ЮОмкг в лютеиновую фазу полового цикла обеспечивает кратковременную активацию секреции эстрадиола-17 бета. В течение первого часа концентрация гормона возрастает в 2 раза (с 0,208 до 0,415 нмоль/л; Р<0,01), а затем содержание эстрадиола понижается к 3-ему часу до 0,057 нмоль/л (Р<0,001) и в течение Последующего периода остается без изменений.

Изменение функции ароматазной системы после применения гонадолиберинов прослеживается и на секреции прогестерона. В течение 6 часов после введения сурфагона содержание прогестерона в крови повышается в 1,84 раза (с 18,9 до 33,4 нмоль/л), а под влиянием ГнРГ Berlin Chemie за аналогичный период - в 1, 9 раза.

• Если препараты гонадолиберина сурфагон и Berlin Chemie вызывали практически однотипные изменения в секреции половых стероидных гормонов, то глюкокортикоидная функция надпочечников и тиреоидиая функция щитовидной железы под их влиянием существенно отличаются. Так, после применения сурфагона отмечается снижение содержания коргикостерона через 3 часа 30 минут в 3,88 раза (с 4,8 до 1,3 нмоль/л; Р<0,001), а секреция кортизола остается неизменной. После применения ГнРГ Berlin Chemie в течение первых 2 часов 30 минут концентрация кортикостерона понижается в 2,8 раза ( с 2,7 до 0,9 нмоль/л; Р<0,01), а затем возрастает и к 5-му часу повышается в 1,7 раза по отношению к исходной (Р<0,01). Кортизол в период со 2-ого по 3-ий час увеличивается в 1,83 раза (Р<0,01).

После инъекции сурфагона в течение 6-ти часов концентрация тироксина в крови понижается в 1,25 раза (с 58,1 до 43,1 нмоль/л; Р<0,01). а грнйодтиронина в 1,21 раза (с 1,82 до 1,5 нмоль/л; Р<0,01) с последующей секрецией в пределах базовой концентрации. ГнРГ

Berlin Chemie вызывает повышение концентрации тироксина в 1,42 раза (с 38,5 до 54,9 нмоль/л; Р<0,02), а секреция трнйодтиронина возрастает к пятому часу постинъекционного периода в 1,54 раза (с 1,63 до 2,52 имоль/л; Р<0,'01).

3.4. Влияние сурфагона на функциональную активность аденогипофиза, гонад, надпочечников и щитовидной железы в фолликулярную фазу полового цикла

Характер и полнота реализации действия гормональных препаратов определяется с одной стороны биологическими свойствами соединений, а с другой - наличием специфических рецепторов к ним. Последнее определяется функциональным состоянием желез -мншений. Для выяснения влияния сурфагона на функциональную активность аденогипофиза, гонад, надпочечников и щитовидной железы в фолликулярную фазу полового цикла исследования проведены на 15 телках. Препарат сурфагон применен однократно, внутримышечно в дозах 100 и 20 мкг. О действии гонадолиберина судили по изменениям функции желез внутренней секреции до и после введения препарата.

После внутримышечного применения сурфагона в дозе 20 мкг в течение первого часа концентрация лютропина возрастает в 1,6 раза (с 2,3 до 3,9 нг/мл). Максимальное содержание лютропина отмечается через 2 часа, когда концентрация гормона повышается в 5,6 раза и достигает 14 нг/мл (Р<0,05). Через 2 часа 15 минут после применения сурфагона содержание лютропина снижается и к 5-ому часу достигает исходного значения (рис.2). Повышение дозы сурфагона до 100 мкг, обеспечивает более интенсивное наростание лютропина в крови. К концу первого часа концентрация Л Г возрастает в 9,7 раза и достигает 13,6 нг/мл (Р<0,01), а к 2 часам 30 минутам уровень гормона возрастает в 18,5 раза (Р< 0,001), однако как и в предыдущем случае концентрация гормона в последующем снижается и к 5-му часу постннъекционного периода достигает исходного значения (рис.2).

Исследования указывают, что повышение дозы сурфагона с 20 до 100 мкг обеспечивает достоверное возрастание концентрации лютропина в крови. Непродолжительный подъем лютропина, который по абсолютной величине является близким к овуляторному, после применения сурфагона в дозе 20 мкг, видимо, способен обеспечить полноценные условия для созревания фолликулов и их овуляции. Так, через 2 часа после введения сурфагона в дозе 20 мкг концентрация тестостерона возрастает в 1,5 раза (с 0,125 до 0,183 нмоль/л; Р<0,01), эстрадиола-17 бета - через 1 час в 1,87 раза (с 0,307 до 0,578 нмоль/л; Р<0,001). Таким образом, дополнительная гонадогропная стимуляция в фолликулярную фазу полового цикла аклтнзируег стероидогенез и созревание фолликулов.

-15

10

\

\ _

6 (V

Рис.2 Изменение концентрации тотропина в крови после применения сурфагона:

_ 100 мкг

---- 20 мкг

ьо

70 60

< 50

ад

1 30

о 20 &

10

I \

\

' \

I г•

*■* — '

1,е 1,6 хи 1,2 1,0 о, в

Э,6

о,г

(час)

Рис.3 Изменение концентрации тироксина (__) и

трииодтиронина (------) в крови после применения

сурфагона в дозе 20 мкг

После применения сурфагона в дозе 20 мкг происходит изменение глюкокортикоидной функции надпочечников. Секреция кортикостерона приобретает циклический характер с периодами активации в 45 минут. Через 2 часа 15 минут концентрация корзпзола возрастает в 1,93 раза.

Одновременно происходит понижение функциональной активности щитовидной железы (рис.3). В течение 6-ти часового периода концентрация тироксина понижается в 1,54 раза (с 172,2 до 111,6 нмоль/л; Р<0,01), а трийодтироннна в 1,19 раза (с 1,49 до 1,25 нмоль/л).

Изменение функции надпочечников и щитовидной железы после введения сурфагона свидетельствует о снижении интенсивности обменных процессов и накоплении энергии в период, предшествующий овуляция.

3.5 . Влияние простагландина Ф 2 альфа на функцию аденогипофиза, гонад, надпочечников и щитовидной железы

Сложные взаимоотношения в эндокринной системе функционирующие по принципу прямых и обратных связей, под влиянием экзогенного простагландина претерпевают существенные изменения, суть которых полностью не раскрыта. Исследования выполнены на 10 животных в лютеиновую фазу полового цикла (10-12 день).' Клопростенол в дозе 500 мкг применен однократно, внутримышечно.

Через 1 час после применения клопростенола присходит снижение концентрации прогестерона в крови в 2,4 раза (с 11,2 до 4,6 нмоль/л; Р<0,02), а через 3 часа содержание гормона уменьшается в 8,3 раза (рис.4). К 6-му часу постинъекционного периода . концентрация прогестерона в крови достигает значений, характерных для фолликулярной фазы полового цикла (0,4+/-0,1 нмоль/л).

В течение 1 часа после введения клопростенола содержание тестостерона в крови возрастает в 1,1 раза (с 0,169 до 0,187 нмоль/л). После 3-его часа в результате повторной активации секреции гормона, отмечается новое повышение тестостерона в крови. Если первое повышение концентрации тестостерона является результатом снижения процесса ароматизации, то второе, вероятно, свидетельствует о начале роста фолликулов, в результате прекращения действия прогестеронового блока и подтверждается изменением гонадотропной функции гипофиза. Если до применения клопростенола концентрация лютропнна соответствовала тонической (3,9 нг/мл), то через 1 час 30 минут после введения препарата содержание ЛГ повышается в 1,48 раза и достигает 5,8 нг/мл.

хг

го

л ь

X

а я х о

"о"^--"г" 1 ' 3—--5—'—5-""

Рис.4 Изменение концентрации прогестерона (_) и кортико-

стерона (—) в крови после введения клопростенола

6 (чао

250

200

-г 15о

I 100

I 50

а г ч

6 о я в я

3 Е

а

б

4

° I 2 3 4.5.6 (час:

Рис.5 Изменение концентрации лютролина (_) и пролактнна

(......) в крови после применения клопростенола

Особенно выраженные изменения отмечаются в секреции пролак-тина. К концу первого часа концентрация гормона возрастает в 9,3 раза (рис.5), однако, это повышение непродолжительное и к 4 часам 30 минутам постинъекционного периода концентрация пролактина достигает исходного значения. Таким образом, клопростенол наряду с лютеолитическим действием, одновременно стимулирует секрецию лютропина и пролактина.

Клопростенол вызывает изменение функции надпочечников и щитовидной железы. В течение 30 минут после применения препарата содержание кортикостерона в крови повышается в 3,2 раза (с 4,2 до 13,6 нмоль/л; Р<0,05). После кратковременной активации, функция надпочечников снижается и к 6-ому часу концентрация глюкокортикоида в крови составляет 1,8 нмоль/л. В течение 30 минут после введения простагланднна Ф зальфа концентрация тироксина повышается на 11 % (с 81,4 до 94,1 нмоль/л), а трийодтиронина на 17 % (с 1,47 до 1,7 нмоль/л) и в течение последующих трех часов секреция тереоидных гормонов сохраняется на 9-15% выше исходной. Эти результаты свидетельствуют, что под влиянием клопростенола происходят значительные изменения не только в функции яичников, но и в аденогипофизе, надпочечниках и щитовидной железе. Это подчеркивает необходимость правильного и обоснованного использования препаратов этой группы в практике скотоводства.

3.6. Клиническое обоснование использования препарата гонадолиберина для контроля воспроизводства крупного рогатого скота

Изучение влияния сурфагона на процесс созревания фолликулов и их овуляцию проведено на 31 телке. Для исследования были использованы животные с наличием в яичниках мелких фолликулов и без активно функционирующих желтых тел. Телкам подопытной группы (20 голов) был применен сурфагон в дозе 20 мкг, контрольной (11 голов) - 0,9% раствор натрия хлорида. В течение 8 дней после введения препаратов животные находились под наблюдением.

Ректальной пальпацией яичников и матки через 8 дней после применения гонадолиберина у 18 (90%) телок установили изменения в яичниках и матке: 6(30%) имели крупные фолликулы, повышенную ригидность матки, признаки стадии возбуждения, у 12 (60%) в яичниках обнаружены желтые тела. За 8-ми дневный период у 2 (10%) телок изменений в половых органах не установлено, яичники сохранили ранее установленную форму, размеры, консистенцию и содержащиеся в них структуры.

В контрольной группе в течение отмеченного срока лишь у 6 (55,5%) телок отмечены изменения в яичниках и матке, при этом у 4 (36,3%) - произошла овуляция с образованием желтого тела. У 5

(45,5%) телок изменений в половых органах не установлено. Исследования свидетельствуют, что применение гонадолнберина при наличии в яичниках мелких фолликулов стимулирует их развитие и овуляцию.

В таблице 4 представлены показатели стельности в зависимости от дозы сурфагона, введенного в период осеменения, на показатели стельности.

В первой группе (контроль) после осеменения стельность установлена у 15 (53,6%) животных. Применение сурфагона в дозе 10 мкг в период стадии возбуждения обеспечивает стельность у 15 (75%) из 20 животных. После введения сурфагона в дозе 20 мкг результаты повышаются на 25,6% в сравнении с контролем и составляют 79,2%. Повышение дозы препарата до 40 мкг, обеспечивает стельность у 80,9% коров. Повышение дозы сурфагона с 10 до 20 мкг, изменяет показатель стельности на 4,2%, а с 20 до 40 мкг - на 1,7%. Таким образом, исследования позволяют заключить, что наиболее целесообразной является доза 20 мкг.

Таблица 4

Доза сурфагона и показатели стельности у короб

1 Количество 1 Доза 1 Стельные | +/- к первой подопыт-

Группы | животных | препарата ^ кол-во | % ной группе(контроль,%

1 контроль 28 - 15 53,6 -

2 подопытная 20 10 15 75,0 +21,4

3 подопытная 24 20 19 79,2 +25,6

4 подопытная 21 40 ¡7 80,9 +27,3 "

Влияние сурфагона в дозе 20 мкг на оплодотворяемость коров в зависимости от количества осеменений представлено в таблице 5.

У коров контрольной группы в первичное осеменение беременность была зарегистрирована у 53,9%, при повторном осеменении - у 58%. Осеменение в третий раз (два предыдущих нерезультативные) обеспечивает стельность у 59% коров. После применения сурфагона в дозе 20 мкг в день осеменения у коров опытной группы стельность зарегистрирована у 80,7% в первичное осеменение, после второго осеменения беременными стали 71,1%, а в третье после отела - 63,1%.

Таким образом, наиболее высокая стельность (80,7%) отмечена у коров опытной группы после первичного осеменения с применением сурфагона (+26,8%), после второго осеменения показатель стельности был на 13,1% Выше, чем в контроле. При применении гонадолиберина в третье после отела осеменение показатель стельности повысился

Таблица 5

Показатели стельности коров в зависимости от количества осеменении после отела

Гвиппм +/- к показа-

Опытная Контрольная телю конт-

Осеменение Кол-во из них стельны? Кол-во из них стельные рольной

живот- живот - группы (%)

ных к-во % ных к-во %

Первичное 26 21 80,7 115 62 53,9 +26,8

Повторное 45 32 71,1 50 29 58,0 + 13,1

Третье 19 12 63,1 22 13 59,0 +4,1

лишь на 4,1%. Исследования подтверждают представление о более частом возникновении нарушений в период овуляции в первые после отела половые циклы. Гонадолиберин в этом случае нормализует процесс овуляции и обеспечивает условия для оплодотворения.

3.7. Клиническое обоснование использования клопростенола для контроля воспроизводства крупного рогатого скота

Влияние клопростенола на морфологические показатели яичников изучены на 34 телках в лютеиновую фазу полового цикла. Определение примерных размеров яичников проведено ректальной пальпацией.

В лютеиновую фазу полового цикла (10-12 день) у телок в одном из яичников пальпировали желтые тела. У большинства животных форма яичников с желтыми телами была овально-округлая или бобовидная с утолщением в месте локализации желтого тела. Желтые тела имели примерный диаметр 1,5-2 см и упруго-уплотненную консистенцию, над ними располагались возвышения тканей, которые влияли на форму яичника. Ткани рядом с желтыми телами были податливыми, эластичными. Яичники без желтых тел имели овальную форму, податливую эластичную консистенцию с мелкими очагами уплотнений. Средние размеры яичников, с желтыми телами были больше размеров яичников без желтых тел(Р<0,001).

Через 72 часа после внутримышечного введения клопростенола в дозе 500 мкг, отмечаются признаки стадии возбуждения, а яичники, в которых ранее были установлены желтые тела уменьшаются в размерах, преимущественно за счет уменьшения объема желтых тел. Ткани желтого тела уплотняются, приобретают неправильную форму. В яичниках появляются фолликулы разного диаметра, а матка становится высокоригидной.

Результаты индукции стадии возбуждения у коров и телок препаратом простагланднна Ф г альфа представлены в таблице 6.

Таблица 6

Результаты индукции стадии возбуждения у коров и телок клопростенолом

Группы Схема применения препарата кол - во живот- % Зарегистрированы признаки стадии возбуждения +/- к первой группе

ных количество %

1 Однократно, поголовно 22 100 15 68,1

2 Двукратно, поголовно 22 100 21 95.4 +27,3

3 Однократно в лютеиновую фазу 338 100 328 97,0 +28,9

После поголовного применения клопростенола (без учета стадии полового цикла) 22 коровам с нормальной воспроизводительной функцией, признаки стадии возбуждения установили у 15 (68,1%) животных с 48 по 90-ый час после введения препарата. Повторное применение эстрофана через 11 дней обеспечило индукцию стадии возбуждения у 21 (95,4%) коровы. Инъекция клопростенола 338 телкам, у которых были в яичниках активно функционирующие желтые тела, позволила индуцировать стадию возбуждения у 328 (97%) животных. Таким образом, предварительный отбор животных для индукции стадии возбуждения простагландином Ф гальфа обеспечивает не только высокий результат, но и оправдан как физиологически, так и экономически.

Исследованиями установлено, что в лютеиновую фазу полового цикла правый яичник чаще несет доминирующую функцию. Так, у 230 (58,2%) телок желтые тела были установлены в правом яичнике, а у 165 (41,8%) - в левом. После индукции стадии возбуждения препаратом простагландина Ф гальфа овуляция и последующие образование желтого тела были установлены у 215 (54,4%) телок в правом яичнике и у 180 (45,6%) - в левом. Последовательность циклической активности яичников представлена на рис.6.

Циклическая активность яичников в индуцированном половом цикле была связана с правым яичником следующим образом: 43,9% (п-101) овуляцией с последующим образованием желтого тела отмечены в том же (правом) яичнике и у 56,1% (п=129) в противоположном. Если желтое тело было расположено в спонтанном цикле в левом яичнике, то после индукции стадии возбуждения лишь у

30,9% (п=51) животных овуляция и желтое тело зарегистрированы в том же (левом), а у 69,1% (п=114) - в противоположном (правом).

Таким образом, доминирующая активность правого яичника регистрируется чаше как в спонтанном, так и в индуцированном половом цикле.

Спонтанный половой цикл '

Правый яичник. (1=230 (58,2%)

Левый яичник _ п= 165 (41,8%)

п=Ю1 (43,9%) п= 114(69,1%)

п=129 (56,1%) п=51 (30,9%)

Индуцированный половой цикл

Правый яичник п=215 (54,4%)

Левый яичник п=180 (45,6%,)

Рис.6 Последовательность циклической активности яичников в спонтанном и индуцированном половом цикле

3.8 Программированное воспроизводство крупного рогатого скота с использованием клопростенола и сурфагона

Исследования проведены на 385 телках, включенных в воспроизводство стада. Осеменение животных контрольной группы (47 голов) выполнено согласно инструкции по искусственному осеменению коров и телок (М.,ВО "Агропромиздат", 1988). 338 голов представляли опытную группу и перед индукцией стадии возбуждения простагландином Ф гальфа содержали в яичниках активно функционирующие желтые тела. Осеменение телок проведено по одной из 4 схем, которые представлены в таблице 7.

Таблица^

Показатели стельности у телок при одно- и двукратном осеменении в спонтанную и индуцированную стадии возбуждения

Группы Число Число Стадия Синхро- +/- к пока-

под- живот- осеме- возбуж- ншац. Стельные Нестельные зателю

опытных ных нений дения овуля- к-во % к-во % контр,

телок ции группы

Контр. 47 2 спонт. 24 51,0 23 49,0 -

1 опыт. 34 1 индуцир. - 19 55,8 15 44,2 +4,8

2 опыт. 107 2 индуцир. - 80 74.7 27 25,3 +23,7

3 опыт. 16 1 индуцир. + 12 75,0 4 25,0 +24,0

4 опыт. 171 2 индуцир. + 134 78,3 37 21,7 +27,3

Осеменение телок контрольной группы (47 голов) в спонтанную стадию возбуждения позволило получить беременность у 24 (51,6%) животных.

Однократное осеменение телок в индуцированную стадию возбуждния через 84...86 часов после применения эстрофана обеспечивает беременность у 55,8% телок (1 группа), дополнительная синхронизация овуляции сурфагоном в дозе 20 мкг через 72 часа после применения простагландина Ф г альфа повышает беременность до 75 % (3 группа).

Двукратное осеменение в индуцированную стадию возбуждения через 72 и 90 часов после применения препарата простагландина Ф г альфа позволяет получить беременность у 74,7% телок (2 группа). Синхронизация овуляции сурфагоном в первое осеменение повышает показатель стельности до 78,3%.

Таким образом, основываясь на биологических закономерностях эндокринной регуляции половой функции, эффективность размножения крупного рогатого скота может быть существенно повышена за счет обоснованного использования гормональных препаратов. Такой подход позволяет полнее реализовать потенциальные возможности организма животного и планировать интенсивное воспроизводство крупного рогатого скота.

Выводы

1. В стадию возбуждения полового цикла концентрация тестостерона в крови повышается на 14,9 - 19,6%, эстрадиола - 17 бета - на 41 - 76,6%, а содержание прогестерона удерживается на уровне минимальных значений (менее I нмоль/л).

Овуляция и оплодотворение у коров и телок проходят на фоне тонической секреции лютропина и повышенной функциональной активности надпочечников н щитовидной железы. Концентрация кортизола в крови возрастает в 4 раза, тироксина на 23,5%, трийодтиронина - на 29,4% . Между тиреондными гормонами в начальный период беременности устанавливается коррелятивная связь (г= + 0,73).

2. Начальный период беременности у животных сопровождается устойчивой секрецией тестостерона, которая на 10,7-22,4% выше, чем в лютеиновую фазу полового цикла . Секреция эстрадиола - 17 бета через 4 дня после осеменения снижается на 67,3 - 26,4%, а к концу третьей недели возрастает до показателя в стадию возбуждения. Среднесуточный прирост прогестерона в кровн с 4 по 9 день беременности составляет более 1 нмоль/л, ас 10 по 21 день - 0,5 нмоль/л.

3. Функциональная активность аденогипофиза, гонад, надпочечников и щитовидной железы в период становления беременности у коров и телок с индуцированной овуляцией близка к аналогичной у интактных стельных животных. В первые два дня беременности происходит повышение концентрации кортизола в крови в 3,8 раза. Определяется общая закономерность в секреции тестостерона (г= +0,66), эстрадиола - 17 бета (г= +0,8) и прогестерона (г— +0,97).

4. У неоплодотворившихся коров и телок через 4 дня после осеменения содержание тестостерона в крови понижается на 17,5%, с последующей активацией секреции на 12 - 17 и 21 дни на 17,4 - 13,9% и 15,8%, соответственно. Концентрация эстрадиола-17 бета в крови повышается на 15 и 21 дни, а среднее содержание гормона в течение 3-х недель на 50% выше, чем у беременных. Среднесуточный прирост прогестерона с 4 по 9 дни не превышает 0,7 нмоль/л, а после 17 дня функциональная активность желтого тела резко снижается и к 19-21 дню концентрация прогестерона в крови достигает минимальных величин (менее 1 нмоль/л). В период стадии возбуждения функциональная активность надпочечников у неоплодотворившихся животных существенно не меняется, а коррелятивная связь между тироксином и трийодтнронином снижается. Осеменение коров и

телок в период циклического (овуляторного) выделения лютропина является преждевременным и не ведет к оплодотворению.

5. Беременность, установленная лабораторной диагностикой через 2 недели после осеменения, у коров и телок с содержанием прогестерона в крови 3,1 нмоль/л и более, подтверждается клиническим исследованием через 2 месяца у 84,3% животных, с содержанием прогестерона в крови- до 2 нмоль/л исключает возможность беременности, а с концентрацией гормона от 2,1 до 3,0 нмоль/л возможны ошибки в постановке диагноза.

6. При выявлении в яичнике активно функционирующего желтого тела через 3 недели после осеменения беременность подтверждается клиническими изменениями в матке через 2 месяца у 84,6% животных. Беременность исключается если через 3 недели активно функционирующее желтое тело в яичнике отсутствует и имеются признаки стадии возбуждения полового цикла.

7. Введение коровам гонадолиберина в лютеиновую фазу полового цикла обеспечивает повышение содержания лютропина и пролактина в крови. Секреция гормонов наиболее выражена с 2 по 3 час после инъекции препарата. Через 1 час 45 минут концентрация пролактина в крови повышается в 4,8 раза, лютропина через 2 часа 15 минут - в 39,5 раза. Содержание тестостерона в течение 3 часов 30 минут после применения гонадолиберина возрастает в 6 раз, эстрадиола-17 бета в течение 1-го часа - в 2 раза, а концентрация прогестерона через 6 часов после инъекции гонадолиберина повышается в 1,84 раза.

8. Препараты сурфагон и ГнРГ Berlin Chemie обладают аналогичным биологическим действием на функцию яичников и вызывают не однотонную реакцию со стороны надпочечников и щитовидной железы. Сурфагон в дозе 100 мкг в лютеиновую фазу полового цикла не изменяет секрецию кортизола, но понижает выделение тироксина в течение 6-ти часового периода на 25%, а трийодтиронина в первые 30 минут - на 21%. Препарат ГнРГ Berlin Chemie в аналогичной дозе в период со 2 по 3 час постинъекционного периода повышает концентрацию кортизола на 83%. Со 2 по 4 час активирует секрецию тироксина на 42%, а к концу 5-го часа содержание трийодтиронина возрастает на 54%.

9. Сурфагон, введенный в фолликулярную фазу полового цикла, стимулирует выведение лютропина в кровяное русло. Наиболее выраженная секреция лютропина наступает через 45 минут и продолжается в течение 2 часов. Сурфагон в дозе 20 мкг обеспечивает максимальное повышение ЛГ в 5,6 раза, а в дозе 100 мкг -в 18,5 раза по отношению к базовому содержанию. Через 5 часов независимо от

вводимой дозы содержание лютролина снижается до исходного. Под влиянием сурфагона в дозе 20 мкг в фолликулярную фазу полового цикла изменяется интенсивность течения сгсрондогенсза. Содержание тестостерона в крови в течение 4 часов возрастает на 60% , а эстрадиола - 17 бета через 3 часа 30 минут повышается в 2,2 раза. Происходит повышение функциональной активности надпочечников. Возрастает секреция кортикостерона и корппола, которая носит циклический характер. В тоже время секреторная активность щитовидной железы понижается. В течение 6 - ти часового периода концентрация тироксина снижается на 37%, а трийодтироннна на 28%.

10. Применение сурфагона в дозе 10 мкг в период осеменения повышает показатель стельности на 21,4% , в дозе 20 мкг - на 25,6%. Введение препарата в дозе 20 мкг, в первичное после отела осеменение повышает оплодотворяемость па 27,6%, а повторное на 12,1%, а третье после отела осеменение- на 4,1%.

11. Клопростенол в лютепновую фазу полового цикла вызывает прекращение функции лютенновой ткани желтого тела в течение 6 часов после внутримышечного введения препарата. Происходит достоверное уменьшение размеров яичников с желтыми телами. Желтые тела уменьшаются в объеме, уплотняются и преобретают неправильную форму. Эти изменения сопровождаются интенсивным ростом фолликулов и появлением клинических признаков стадии возбуждения полового цикла, которые наиболее выражены с 48 по 90 час после введения клопростенола.

12.Клопростенол вызывает активацию центральных и терифирнческих звеньев регуляции половой функции. В течение тервого часа после введения препарата концентрация лютролина в срови повышается на 48%, пролактина в 9,3 раза. Возрастает сонценрация тестостерона на 15%. В течении 30 минут содержание сортикостерона в крови увеличивается в 3,2 раза, секреция -ироксина - на 11%, а трийодтироннна - на 17%.

3. Применение клопростенола в дозе 500 мкг без учета )ункционального состояния яичников индуцирует стадию озбуждения у 68,1% животных. Двукратное введение препарата с интервалом в II дней повышает этот показатель до 95,4%. )днократное применение клопростенола животным с наличием ктивно функционирующих желтых тел в яичниках обеспечивает ндукцию стадии возбуждения у 97% коров и телок.

4. В лютеиновую фазу полового цикла правый яичник является ункционально активным у 58,2% коров и телок, а левый у 41,8%. [ри расположении желтого тела в правом яичнике, в нндуци-

рованную клопростенолом стадию возбуждения, овуляция у 43,9% животных происходит в том же яичнике, а у 56,1% - в противоположном . Если, до индукции стадии возбуждения желтое тело локализовано в левом яичнике, то последующая овуляция отмечается лишь у 30,9% в том же , а у 69,1% - в противоположном яичнике.

15. Однократное осеменение животных в индуцированную стадию возбуждения полового цикла (через 84-86 часов после применения клопростенола) обеспечивает стельность у 55,8%' телок, а дополнительная коррекция овуляции сурфагоном повышает число стельных животных до 75%. Двукратное осеменение (через 72 и 90 часов после введения клопростенола) позволяет получить беременность у 74,7% телок, а при дополнительной гормональной коррекции овуляции этот показатель возрастает до 78,3%.

7. Практические предложения

1. Оценка функциональной активности надпочечников у коров и телок в первые 2 дня после осеменения может быть использована для контроля полноценности стадии возбуждения полового цикла и прогнозирования оплодотворения.

2. Для оценки функционального состояния желтого тела у коров и телок наряду с лабораторными методами исследования целесообразно использовать морфологическую характетистику яичников. Яичник, содержащий активно функционирующее желтое тело обычно в 1,5 -, 2 раза больше противоположного. При периферическом расположении желтого тела он приобретает овальную форму с утолщением в месте локализации желтого тела, при центральном положении желтого тела в яичнике, последний становится округлым. Во всех случаях над желтым телом расположено небольшое возвышение, которое влияет на форму яичника. Желтое тело 1,5 - 2 см в диаметре, ткани его упруго-уплотненной консистенции, границы . желтого тела хорошо контурированы и отличаются от окружающей податливой ткани яичника в которой могут быть мелкие очаги уплотнений.

3. Для получения информации о физиологическом состоянии корой и телок после осеменения и исключения пропуска половых циклов целесообразно проводить раннюю клиническую диагностику беременности через 3 недели после осеменения. Наличие в одном из яичников активно функционирующего желтого тела и отсутствие признаков стадии возбуждения полового цикла свидетельствуют о беременности. Отсутствие в яичнике активно функционирующего желтого тела/наличие крупных фолликулов, повышенная ригидность

матки и проявление признаков стадии возбуждения исключают беременность. Для повышения точности лабораторной дишностики беременности по содержанию прогестерона в крови через три недели после осеменения при оценке результатов целесообразно вводить пограничный показатель концентрации прогестерона, разделяющий максимальное содержание гормона в крови нестельных жшкпных и минимальное у беременных.

4. В целях исключения отрицательного влияния просгагланднна Ф гальфа на фолликулотенез, получение высокого синхронизирующего эффекта, а так же рационального применения препаратов необходимо учитывать функциональное состояние яичников. Индукцию стадии возбуждения проводить только у корой и телок с наличием активно функционирующего желтого тела в яичнике.

5. В целях повышения >ффективности осеменения коров н телок в случаях регистрации нарушения фолликулогенеза и овуляции целесообразно применять сурфагон в дозе 20 мкг, однократно, внутримышечно, в период проведения осеменения.

6. Для управления воспроизводством крупною рогатого скота наряду с традиционными приемами целесообразно использовать био технологическую систему программированного размножения, которая включает последовательное выполнение следующих этапов:

- формирование группы животных (коров.теток), подлежащих осеменению. Оптимальная группа насчитывает от15 до 30 животных. Для программированного воспроизводства отбирают здоровых коров, которые имеют послеотельный период не менее 40 дней. Телок используют при достижении ими физиологической зрелости. Животные должны иметь хорошую упитанность. В группу включают коров и телок с активной фукнцней желтых тел в яичниках;

идукция стадии возбуждения_проводится применением

клопростенола в дозе 500 мкг, однократно, внутримышечно. Препарат инъецируют отобранным животным в день формирования группы;

- синхронизация (индукция) овуляции выполняется препаратом сурфагон в дозе 20 мкг. Препарат применяется однократно, внутримышечно, через 72 часа после применения препарата простагландина Ф гальфа;

- искусственное осеменение животных выполняется цервикальным способом с ректальной фиксацией шейки матки. Осеменение может быть проведено двукратно или однократно. Двукратное осеменение обеспечивает более высокую оплодотворяемость, но связано с использованием двух доз спермы. Первое осеменение выполняют через 72 часа после применение клопростенола, второе - через 90 часов. При однократном осеменении сперму вводят через 84..86 часов после применения клопростенола;

• ранняя клиническая дн;ц мостика беременности выполняется через 3 недели после проведения осеменения. Ранняя клиническая диагностика берсмениосш основана на определении функционального состояния яичников и учете признаков стадии возбуждения полового цикла;

- пощ орное осеменение неоплологворивитхея животных может быть выполнено сра1\ же после проведения ранней клинической диагностики беременности при наличии комплекса признаков стадии возбуждения полового цикла;

- заключительная клиническая диагностика беременности по изменениям и мазке проводится через 55...60 дней после осеменения;

- подготовка животных к отелу и проведение родов выполняются согласно и шести 1.1\ рекомендаций.

Управляемое воспроизводство планируют исходя из конкретных задач и хозяйственных условий.

Основные работы, опубликованные по теме диссертации

1. Турков В.Г., Раднатаров В.Д.Катетеризация яремной вены у животных с помощью медицинскою катетера для неоднократного взятия крови и ннфузионнон терапии. В кн.: Ветеринарное обеспечение крупных животноводческих комплексов на промышленной основе. Л., 1982, с. 42 -43.

2. Степанов Г.С., Лебедев А.Г., Турков В.Г., Коган М.Г.

Роль центральных и периферических факторов в механизмах регуляции репродуктивной функции. В кн.: Центральная регуляция вегетативных функций. Материалы VI конф. ЦНИЛ ГИДУВ, Тбилиси, 1984.

3. Турков В.Г. Применение синтетического аналога простагландина Ф 2 альфа для регуляции воспроизводительной функции у коров. В кн.: Индивидуальное развитие и профилактика болезней жвачных животных в условиях промышленного животноводства Ивановской области. Сб. науч. тр., Моск. вет. акад. М.,1985, с. 4447.

4. Турков В.Г., Саврасов И.И. Применение гормонального препарата сурфагона для профилактики ановуляторных половых циклов и повышения оплподотворяемости коров. Ивановский межотраслевой ЦНТИ, № 391-86, Иваново, 1986, с. 2

5. Турков В.Г. Катетеризация наружной яремной вены у овец. В кн.: Морфофуикциональные предпосылки профилактики и лечение бо-

лезией романовских овен в условиях агропромышленной") комплекса Ивановской обласги. Сб. науч. тр. Моск. вет. акад., 1986, с. 69-71.

6. Турков В.Г., Демидов Ю.П., Плохой Л.В. Mei одические рекомендации по борьбе с бесплодием крупно! о рога un о скот в хозяйствах Владимирской области. Владимир, 1987, 56 С.

7. Турков В.Г. Диагностика, лечение и профилактика акушерско-пшекологических болезней у коров. Итшомо, 1987, 65 С.

8. Турков В.Г. Влияние сурфаюна на оплодомюряемое гь у корон. В кн.: Профилактика и лечение нешразных болезнен н спсцхозах. Сб. науч. ip. Моск. иет. акад., М., 1987, с 55-58.

9. Анлннк М.Э., Турко» В.Г. Влияние сурфаюна на оплодогиорясмость корой. В кн.: Теоретически« и практические вопросы ветеринарии, т.1 Тарту, 1988, с 119-121.

10. Турков В.Г. Эффективность применения эарофлиа и сурфаюна при искусственном осеменении телок. В кн.: Актуальные проблемы науки » сельскохозяйственном производстве. Иваново, 1993, с. 182.

11. Туркон В,Г. Функции желтою тела у телок после применения сурфаюна. В кн.: Регуляция фи шо.чогических функции продуктивных живо i них. Межвуз. сб. науч. тр. Моск. иет акад. М.,

■ 1993, с. 107-109.

12. Турков В.Г. Ранняя клиническая диагностика стельности. В кн.: Он тогенез, профилактика и лечение больных сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. Моск. вет. акад. М.,1993, с. 83-86.

13. Турков В.Г. Гормональная функция яичников и надпочечников у стельных и иестельных телок. В кн.: Возростная морфофнзнология и профилактика болезней животных в сельскохозяйственных предприятиях различного типа. Сб, науч. тр. Моск. вет. акад, 1994, с. 37-41.

14. Турков В.Г. Динамика люгропина под влиянием сурфагона. Материалы Всероссийской научной н учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. Воронеж, 1994, с. 197.

15. Турков В.Г. Влияние лнберинов на секрецию тестостерона у телок. В кн.: Актуальные проблемы науки в сельскохозяйственном производстве. Иваново, 1995, с. 253.

16. Турков В.Г. Динамика и взаимоотношения гормонов гонад у коров и телок в первые три недели после осеменения. В кн.: Актуальные проблемы науки в сельскохозяйственном производстве. Иваново, 1995, с. 257.

17. Турков В.Г. Динамика кортнкостерона в крови у телок под влиянием гонадолнбсрина. В кн.: Экологические проблемы АПК Ивановской области. Иваново, 1995, с. 77.

18. Турков В.Г. Последовательность циклической активности яичников в спонтанном и инуцнрованном половом цикле. В кн.: Итоги и перспективы научных исследований по проблемам патологии животных и разработке средств и методов терапии и профилактике. Воронеж, 1995, с. 251.

19. Турков В.Г. Влияние сурфагона на функциональную активность аденогипофнза, гонад, надпочечников и щитовидной железы в

в фолликулярную фазу полового цикла. В кн.: Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства. Республика Беларусь, г. Горки, 1996.

20. Турков В.Г. Клиническое обоснование использования гонадоли-беринов для контроля воспроизводства крупного рогатого скота. В кн.: Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства. Республика Беларусь, г. Горки, 1996.