Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Динамика иммунных нарушений у РИД-позитивных, больных лейкозом коров и после иммунокоррекции

На правах рукописи

о/ФЛ

Максимова Елена Вениаминовна

ДИНАМИКА ИММУННЫХ НАРУШЕНИЙ У РИД-ПОЗИТИВНЫХ, БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ КОРОВ И ПОСЛЕ ИММУНОКОРРЕКЦИИ

16.00.02. - патология, онкология, морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Ижевск - 2004

Работа выполнена на кафедре инфекционных болезней и патанатомии Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ижевская государственная сельскохозяйствен -ная академия».

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор Новых А.А.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор Герунов Владимир Иванович; заслуженный деятель наук Республики Татарстан, доктор ветеринарных наук, профессор Ежкова Маргарита Степановна

Ведущая организация: Пермская государственная

сельскохозяйственная академия

Защита состоится « с* 2004 г. в « часов на заседа-

нии диссертационного совета Д 220.067.03 в Уральской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 620219, г. Екатеринбург, ул. Карла Либкнехта, 42.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральской ГСХА.

Автореферат разослан «

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, /

доцент ¿Я ^^^ - Рабовская Л.А.

2004-4 25494

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: Одной из актуальных проблем ветеринарной медицины на современном этапе ее развития является оздоровление имеющегося поголовья от инфекционных болезней. Особого внимания в этом плане заслуживают заболевания вирусной этиологии, получившие в последние годы широкое распространение. К разряду последних, как было установлено (Сю-рин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В.; Фомина Н.В., 1998; Тамошюнас В.И., 1987), относится группа лимфопролиферативных заболеваний. Одним из них является лейкоз — инфекционное заболевание крупного рогатого скота, возбудитель которого относится к РНК-содержащим вирусам, семейства рет-ровирусов, имеющих высокую степень заселения окружающей среды (Быковский А.Ф. и др., 1983). ВЛКРС способен преодолевать межвидовые барьеры, вызывать опухолевые заболевания сходные по морфогенезу и механизму развития у животных и у человека. Особенности возбудителя, способность его длительно персистировать в организме не вызывая клинического проявления, затрудняют своевременную диагностику и систематику лейкоза (Валихов

A.Ф., 1992). Известно, что, изменяя генетический потенциал организма животных, вирус способен подавлять резистентность у молодняка, репродуктивную функцию у взрослого поголовья. Постепенно снижая мясную и молочную продуктивность, качество молока и мяса, лейкоз наносит огромный экономический ущерб. Изучение данного вопроса своевременно и в связи с тем, что лейкоз крупного рогатого скота характеризуется большой вариабельностью клинического, в том числе гематологического проявления, а тонкие механизмы его возникновения и развития раскрыты не полностью (Е.Р. Черных, Г.З. Шубинский, А.Л. Лозовацкий и др., 1987; Г.Н. Чувиров, Т.П. Маркова, 1984).

Имеющиеся работы, отражающие этиологию (Л. Г. Бурба, А.Ф. Валихов,

B.А.Горбатов и др., 1988; М.И. Гулюкин, 1997), сущность (А.Д. Белов, Л.В. Рогожина, 1997; Тамошюнас В.И., 1987), трансформирующее влияние вируса, наличие опухолевой метаплазии (Гулюкин М.И., Замараева Н.В., 1997; Зиль-бер Л.А., 1968) не полностью освещают механизмы развития доопухолевой и опухолевой стадий болезни и участие в них центральных органов иммуногенеза, а в частности вилочковой железы. Отсутствуют сведения о динамике и последовательности иммунных нарушений у РИД-позитивных и больных животных, а также у молодняка с наследственной предрасположенностью (А.А. Новых и др., 2003). Не уделяется должного внимания вопросам восстановления нарушенного иммуногенеза при вирусном воздействии и после им-мунокоррекции.

Не установлены критерии, которые бы легли в основу определения статуса РИД-позитивных животных (носителей вируса), не изучена их роль в распространении заболевания. По действующему законодательству РИД-позитивные животные при отсутствии выраженных гематологических изменений остаются в стаде, могут быть

БМБЛНОТЕКА

как горизонтальной, так и вертикальной передаче возбудителя. Имеющиеся данные о характере иммунологических (А.Е. Галатюк, 1986; В. И. Ефимов, П.Б. Садаускас,1983; Р.Х. Кармолиев, 1994), гематологических (Л.Г. Бурба, А.Ф. Валихов, В.А.Горбатов и др., 1988; В.А. Бусол, Б.М. Ярчук, В.П. Заянюк и др., 1991), морфологических (В.А. Смирнова, Т.П. Кудрявцева, 1985; Д.А. Худорожкова, 2003), биохимических (Н.Н. Анисимова, 1998) изменений в организме РИД-позитивных коров немногочисленны и разноречивы. Тем не менее, именно эти сведения могут способствовать более полному пониманию механизмов развития лейкоза.

С учетом изложенного считаем, что изучение динамики нарушений в органах иммуногенеза, сопоставление их с характером гематологических, биохимических и иммунологических изменений имеет, на наш взгляд, не только теоретический, но и большой практический интерес.

Цель и задачи исследования: Цель работы — изучение механизмов и динамики иммунных, в том числе иммуноморфологических нарушений у больных лейкозом, РИД-позитивных коров и у телят, подвергнутых иммунокор-рекции.

В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи:

1. Определить инфицированность поголовья крупного рогатого скота в СПК «Россия» Можгинского района.

2. Изучить динамику нарушений факторов естественной резистентности, Т-клеточного и гуморального ответа у больных (РИД-позитивных с лейкеми-ческой формой) коров.

3. Изучить характер иммуноморфологических изменений у больных (РИД-позитивных с лейкемической формой) коров.

4. Определить динамику нарушений факторов естественной резистентности и иммунологической реактивности у РИД-позитивных коров с алейкеми-ческой формой лейкоза.

5. Изучить характер изменений в тимусе, селезенке и лимфоузлах у РИД-позитивных коров с алейкемической формой болезни.

6. Провести систематику болезни соответственно клиническому и пато-логоанатомическому ее проявлениям.

7. Определить исходное состояние естественной резистентности и иммунологической реактивности у телят, полученных от РИД-позитивных коров и после использования препаратов тимуса.

Научная новизна исследований; 1. Выявленные инфильтративные изменения в органах и тканях РИД-позитивных коров позволяют считать их больными с инаппарантной формой инфекции.

2. Проведена систематика основных проявлений лейкоза в зависимости от клинических, патоморфологических, в том числе иммуноморфологиче-ских, проявлений.

3. Впервые использованы иммунограммы для расшифровки нарушений иммуногенеза при алейкемических, сублейкемических и лейкемических формах болезни.

4. Установлен характер гематологических, биохимических нарушений, соответствующих патоморфологическим изменениям в органах иммуногенеза.

5. Раскрыта динамика нарушений факторов естественной резистентности и иммунологической реактивности соответственно систематике лейкоза.

6. Материалы о влиянии иммунокорректора (тимогена и его комплексного препарата - тимрегивита) на восстановление нарушенного иммуногенеза в процессе вирусного канцерогенеза являются новыми, ранее неизвестными фактами.

Практическая значимость: Полученные результаты о наличии у РИД-позитивных и больных животных аналогичных иммунных и иммуноморфо-логических нарушений, позволяют считать РИД-позитивных животных источником инфекции, который при оздоровлении поголовья должен быть удален из стада. Использование цитомединов тимуса в ранний постнатальный период восстанавливает нарушенный иммуногенез. Они могут быть рекомендованы в качестве средств коррелирующих Т-клеточный иммунный ответ и повышающих устойчивость оганизма.

Результаты исследования внедрены в учебный процесс и используются в научно-исследовательской работе на факультете ветеринарной медицины Ижевской ГСХА и сельскохозяйственными подразделениями УР (СПК «Россия», УОХ «Июльское») при искоренении лейкоза.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Характер клинических и иммуноморфологических изменений при лейкозе определяет лейкемическую, сублейкемическую и алейкемическую формы болезни.

- Патологоморфологические измененияв различных тканях и органах, в том числе иммуногенеза, у РИД-позитивных коров аналогичны таковым у больных животных.

- В динамике иммунных нарушений при лимфоидном лейкозе крупного рогатого скота, независимо от его формы, определяющими являются морфологические изменения в органах иммуногенеза.

- Применение цитомединов (тимогена и его комплексного препарата -тимрегивита) на ранних стадиях развития болезни устраняет дефицит Т-хелперов и коррелирует нарушенный иммуногенез.

Апробация работы: Результаты исследования доложены на научно-практической конференции: «Аграрная наука на рубеже тысячелетий» (Ижевск, 2001); региональной научно-практической конференции: «Аграрная наука - состояние и проблемы» (Ижевск, 2002); Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых - специалистов «Перспективы развития регионов России в XXI веке» (Ижевск, 2002); Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 2003); расширенном заседании кафедры инфекционных болезней и патологической анатомии ИжГСХА (2003).

Публикации. Основные положения работы опубликованы в 12 научных

статьях, тезисах, материалах научных конференций.

Структура и объем работы. Работа изложена на 132 страницах комью-терного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждения полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список, кроме того иллюстрирована 38 рисунками и 11 таблицами. Библиографический список включает 194 источника, в том числе 41 работу зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования

Исследования включали производственные испытания и экспериментальные исследования. Работа выполнена в СПК «Россия» Можгинского района УР в период с 2000 по 2003 год. Часть исследований выполнялись экспедиционным методом с регулярными выездами в хозяйство. Материал отбирался, а затем обрабатывался и исследовался на кафедре патологической анатомии и гистологии ФГОУ ВПО Ижевской СХА, в Удмуртском республиканском центре по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями, на кафедре патологической анатомии ИГМА ив Можгинской районной ветеринарной лаборатории.

Поголовье крупного рогатого скота СПК «Россия» достигало на день первичного клинического обследования 4733 головы, в том числе 2467 коров и 2266 молодняка от 2-х месячного возраста и старше. Оно размещалось на 2-х комплексах (молочный комплекс в д.Ломеслуд и комплекс по откорму -ККРС-3000 в с.Большая Уча), а так же на 7 молочно товарных фермах, расположенных на расстоянии 5-6 км (ЦМТФ, Мальчиково, С.-Уча, Заречная, Юбилейная, Б.-Сюга, Красный Яр).

В процессе производственных испытаний была проведена клиническая (1630голов) и акушерско-гинекологическая (840 голов) диспансеризация поголовья; многократное серологическое исследование по РИД всего дойного стада, 254 голов нетелей, 186 телок. Все РИД-позитивные животные (480 голов) были подвергнуты многократным гематологическим исследованиям. По результатам диспансеризации, серологических и гематологических исследований были выделены группы с лейкемическим, сублейкемическим и алейке-мическим вариантами болезни. Для определения характера патологоморфо-логических, в том числе иммуноморфологических изменений вынужденному диагностическому убою подвергнуто 52 коровы, 26 телят в возрасте от 6 месяцев и старше. Вскрыто 17 павших телят в возрасте от 7 дней до 6 месяцев, в том числе 6 новорожденных. От всех туш и павших телят для гистологических, исследований отбирались кусочки тимуса, селезенки, лимфоузлов. В эксперименте использовано 20 телят, полученных от РИД-позитивных матерей, которые получали цитомедины (тимрегивит, тимоген). Ежемесячно проводилось их клиническое обследование, включающее биохимические,

иммунологические, гематологические исследования. Вынужденному убою с дальнейшим патологоанатомическим и гистологическим исследованиемпод-вергнуто 9телят.

Материалом для исследования служили:

1. Органы и ткани павших, вынуждено убитых РИД-позитивных животных, выбракованных при эпизоотическом обследовании поголовья.

2. Органы и ткани павшего, выбракованного при эпизоотическом обследовании и вынуждено убитого молодняка, полученного от РИД-позитивных и больных лейкозом коров.

3. Кровь и сыворотка крови РИД-позитивных и больных лейкозом коров.

4. Кровь и сыворотка, крови молодняка, полученного от РИД-позитивных и больных лейкозом коров.

5. Кровь и сыворотка крови молодняка, полученного от РИД-позитивных коров, подвергнутого иммунокоррекции.

Зараженных лейкозом животных выявляли с помощью реакции иммуно-диффузии в агаровом геле (РИД).

Кровь для исследований и получения сыворотки брали из яремной вены, в качестве антикоагулянта использовали гепарин. Животных с выраженными гематологическими изменениями (больных) выявляли по лейкозному ключу.

Общий белок сыворотки крови определяли рефрактометрическим методом по общепринятой методике (И. П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А. Г. Малахов, 1985). Белковые фракции сыворотки крови определялись турбидиметри-ческим (нефелометрическим) методом по методике, описанной И. П. Кондра-хиным, Н.В. Куриловым, А. Г. Малаховым, 1985.

Определение уровня фагоцитоза проводили с использованием тест-наборов (производитель - Химическая компания «Реакомплекс», г. Чита) по прилагаемой к ним инструкции.

Определение состояния клеточного иммунитета проводили методом количественной оценки Т- и В-популяций лимфоцитов. Для отделения лимфоцитов от других клеток крови применяли метод, предложенный A.Boyum (1986): Фракции лимфоцитов выделяли методом центрифугирования в одно-ступенчатомградиентеплотности фиколл-верографин (плотность раствора 1,078 г/см3).

Далее ставили реакцию розеткообразования: для подсчета количества Т-лимфоцитов - с эритроцитами барана; Т-хелперов - с эритроцитами барана и добавлением теофиллина; для подсчета количества В-лимфоцитов - с эритроцитами мыши.

Опытной группе в качестве иммунокорректора вводили тимрегивит -комплексный препарат со стимулирующим свойством, включающий тимоген, регивет, витамин С, витамины группы В и антитоксические вещества. Препарат выпаивали в первые два часа после рождения до выпойки молозива и 1 раз в день в последующие 5 дней стимуляции.

Таким образом, в работе использованы серологические, клинические, гематологические, биохимические, иммунологические, патологоморфологиче-ские методы исследования.

Полученные результаты были подвергнуты математической статистической обработке.

2.2. Анализ эпизоотической ситуации по лейкозу в СПК «Россия»

Выполненная работа является одним из разделов научно-исследовательских изысканий кафедры инфекционных болезней и патанато-мии, проводимых по заказу Министерства сельского хозяйства Удмуртской Республики. Их целью являлась разработка методов диагностики и искоренения герпес- и онковирусных инфекций в хозяйствах УР.

Согласно полученных результатов в данном хозяйстве установлено стационарное неблагополучие имеющегося поголовья крупного рогатого скота, как по лейкозу, так и по группе герпес - вирусных заболеваний.

Полученные нами сведения (подтвержденные гематологическими исследованиями) свидетельствовали о наличии в этом хозяйстве больных лейкозом животных. Заболевание носило многие годы характер спорадий. Процент заражения не превышал 1,5-2% от общего поголовья. Отсутствие точных данных о вирусной природе лейкоза, недостаточно четкая его диагностика способствовали широкому распространению ВЛКРС. На день первичного обследования инфицированность поголовья составляла: на ЦМТФ -20%, на Юбилейной МТФ - 12,6 %, на Мальчиковской МТФ - 8,2 %, на МТФ Красный яр -44,3 %, С-Уча - до 1 %, Ломеслуд и Зарека свыше 70 %. Среди молодняка процент инфицированного поголовья колебался от 3 до 5 %. Очевидно, что данное заболевание носило характер эпизоотии. Среди имеющихся в хозяйстве заболеваний лейкоз доминировал, поражая как взрослое поголовье, так и молодняк.

Неблагополучие имеющегося поголовья, как и недостаточная эффективность проводимых мероприятий были обусловлены необоснованным перемещением животных и наличием в стаде скрыто переболевающих (с алейке-мической формой лейкоза) животных.

Регистрируя лейкоз, как по гематологии, так и в реакции иммунодиффу-зии (РИД) в хозяйстве часто наблюдалось его смешанное течение с туберкулезом, некробактериозом, лептоспирозом, ИРТ, ИППВ, диплококкозом, пас-тереллезом, хламидиозом и некоторыми другими заболеваниями. Процент ассоциативного проявления достигал 20% и более. Заболевание протекало в комплексе не только с вирозами и бактериозами, но и с паразитозами, часто с фасциолезом, дикроцеллиозом, эхинококкозом. Зарегистрированный гиперлейкоцитоз был обусловлен повышенным содержанием лимфоцитов, уровень которых у взрослых животных достигал 90 - 95%, а у молодых животных, нетелей, телок случного возраста — до 95 - 97%. Это давало основание диаг-

ностировать его как лимфоидный лейкоз.

2.3. Данные клинической диспансеризации

2.3.1. Особенности клинического проявления у явно больных животных

При первичной клинической диспансеризации из 480 голов РИД-позитивного крупного рогатого скота 8,1% животных (39 голов) имели явные признаки лейкоза. При пальпации у них определялись лимфадениты (чаще односторонние) поверхностных шейных (44,8%), надколенных (84,3%) и над-выменных (28,1%) лимфоузлов (рис. 1). Реже изменения регистрировались в заглоточных, околоушных и подчелюстных лимфоузлах.

Рисунок 1. Частота поражения лимфоидных образований у больных животных

Увеличенные в объеме лимфоузлы были безболезненны, малоподвижны, эластичной или плотной консистенции. Отмечались отеки тканей межчелюстного пространства, паховой зоны, нижней части живота.

У 14,3% животных выявлялось асимметричное пучеглазие (рис. 1). При этом глазное яблоко выступало за границы орбиты. У большей части животных с экзофтальмом наблюдалось помутнение роговицы и кератиты.

При акушерско-гинекологической диспансеризации этих животных у 46,1 % животных (18 голов) установлены патологические процессы в матке и яичниках, в том числе в матке - у 17,9 % (7голов), в яичниках - у 28,2% (11 голов). Изменения в яичниках были неоднотипными. Определялись кисты - в 54,5% случаев (6 голов), персистентное желтое тело - у 27,3% животных (3 головы), реже ихопухолевидное изменение - 18,2% случаев (2 головы). При ректальном исследовании яичники во всех случаях имели неровную, бугристую поверхность. При кистозном поражении определялись единичные, выступающие над поверхностью флюктуирующие образования с плотной 'стен-

кой. Желтое тело выступало в виде плотных возвышений различной формы. Поражение матки сопровождалось утолщением стенки ипрорастанием ее опухолевидной тканью. Опухолевидные разращения имели неправильную форму, придавали поверхности матки бугристость.

У подавляющего большинства животных этой группы регистрировалось сочетание нескольких вышеописанных признаков одновременно. Нередко животные выглядели истощенными.

При гематологическом исследовании у явно больных коров было установлено наличие гиперлейкоцитоза с колебаниями количества лейкоцитов в большинстве случаев от 12200 до 17000 в 1 мкл крови, а у отдельных особей -23000-26400 и более в 1 мкл периферической крови (в среднем этот показатель равнялся 16800 в 1мкл.). Более того, у животных с явно выраженными клиническими признаками лейкоза наблюдался абсолютный и относительный лимфоцитоз, достигающий в среднем 89,1% (табл. 1).

Таблица 1

Характер гематологических изменений_

Количество Количество лимфоцитов

Показатель лейкоцитов в I мкл крови

в 1 мкл крови абсолютное относительное

Алейкемическая форма

Среднее 6400 5550 86,8

Минимальное 3600 2840 79,0

Максимальное 8200 7520 91,8

Сублейкемическая форма

Среднее 9200 6930 75,4

Минимальное 7800 6410 74,6

Максимальное 12000 8490 79,1

Лейкемическая форма

Среднее 16800 14960 89,1

Минимальное 12200 11170 75,2

Максимальное 26400 21440 96,4

Здоровые 4600-12000 - 40-75

Помимо изменений лейкоцитарного профиля у больных животных наблюдалось и изменение факторов естественной резиситентности. В частности мы отмечали снижение фагоцитарной активности нейтрофилов. Это проявлялось снижением их поглотительной и переваривающей способности. Количество фагоцитирующих нейтрофилов (ФА) у таких животных составило - 20% от общего их числа, а ФЧ - 2,2 латексные единицы. Очевидно, что увеличение количества лейкоцитов не сопровождалось повышением их функциональной активности.

При последующих многократных исследованиях ФА и ФЧ было установлено, что функциональная активность макрофагов была стабильно низкой, а

ФЧ в течение 6 месяцев находилось в пределах 2,0 - 2,4 латексных единиц. Наибольший процент фагоцитирующих клеток был отмечен через 1 месяц после начала исследований и составил 23,7%, однако через 3 месяца ФА вновь снизилась до 21,5%, а к 6-му месяцу исследований - до 21,0%. Снижение фагоцитарной активности сопровождалось подавлением их переваривающей способности и развитием незавершенного фагоцитоза (табл. 2).

Таблица 2

Динамика изменения фагоцитарной активности нейтрофилов

Показатель ФА ФЧ

Исходные данные 20,3 2,2

Через 1 месяц- 23,7 2,0

Через 3 месяца 21,5 2,4

Через 6 месяцев 21,0 2,3

Здоровые 30-80 2-9

Изучение Т- и В-клеточного иммунного ответа выявили избыточную пролиферацию Т-лимфоцитов, уровень которых (83%) превышал количество В-лимфоцитов (12,5%) в 6,64 раза. С возрастом и продолжительностью болезни процессы пролиферации Т-лимфоцитов нарастали, и высокий процент содержания этой популяции в периферической крови поддерживался на уровне 83 - 88% на протяжении всего периода наблюдения. Параллельно росту количества Т-лимфоцитов наблюдалось уменьшение доли субпопуляции Т-хелперов, которая при первом исследовании составила 14,5% от общего количества Т-лимфоцитов, а при последнем исследовании - 12,8%. Уровень В-лимфоцитов при последующих исследованиях не превышал 12,5%, а к концу наблюдения снизился до 9,1 %. (табл. 3).

Таблица 3

Динамика изменений Т- и В-популяций лимфоцитов

Показатель В- лимфоциты Т- лимфоциты Т-хелперы Т-лим./В-лим.

Исходное 12,5 83,0 14,5 6,64

Через 1 месяц 12,5 83,0 14,0 6,64

Через 3 месяца 11,1 85,6 13,2 7,71

Через 6 месяцев 9,1 88,3 12,9 8,10

Здоровые 7-20 60-80 25-55 1,5-2,0

Параллельно вышеописанным изменениям наблюдалось нарушение соотношения белковых фракций в сыворотке крови. Это проявлялось гипоаль-буминемией (количество альбуминов равнялось 20,98%). Одновременно изменялось соотношение а-, р- и у-глобулинов. На фоне гипер-Р-глобулинемии (их уровень составил 42,68%) четко выступает гипо-у -глобулинемия

(20,45%), которая свидетельствует об ослаблении иммунологической реактивности организма.

Исследование динамики биохимических изменений выявило дальнейшее нарушение соотношения белковых фракций в сыворотке крови больных животных. Это проявлялось в прогрессирующем уменьшении количества у-глобулинов, в результате через 6 месяцев их уровень составил 18,41%. Параллельно наблюдалось нарастание гипер-р-глобулинемии до 44,64% (табл.4).

Таблица 4

Динамика изменения соотношения белковых фракций

Показатель Альбумины, % Глобулины,% Альб/Г лоб.

а 3 У

Исходные данные 20,98 16,89 40,68 21,45 0,24

Через I месяц 21,14 20,29 39,85 18,72 0,26

Через 3 месяца 20,63 19,70 40,67 19,0 0,25

Через 6 месяцев 20,13 16,82 44,64 18,41 0,25

Здоровые 38-50 12-20 10-16 25-40

Резюмируя результаты клинического исследования больных коров с выраженными признаками лейкоза можно заключить, что гиперлейкоцитоз обусловлен избыточной пролиферацией лимфоцитов, которая развивается на фоне нарушений гуморального звена иммунного ответа. Очевидно снижение хелперной популяции Т-лимфоцитов, ведет к торможению трансформации В-лимфоцитов в плазматические клетки и, как следствие, снижению уровняу-глобулинов. Выявленные изменения характеризуют развитие у коров лейке-мической формы данного заболевания.

2.3.2. Особенности клинического проявления у животных с алейкемической формой лейкоза

Из 480 животных, положительно реагирующих по РИД 56 особей не имели выраженного клинического проявления лейкоза. Однако при детальном изучении состояния лимфоидной системы этих животных выявлялись узелковые образования, диффузно располагающиеся по ходу лимфатических сосудов чаще в области голодной ямки, в зоне расположения нижнего (поверхностного) шейного и надколенного лимфоузлов, придавая поверхности данной зоны бугристость. При этом они были безболезненные, неподвижные, плотно срастались с окружающими тканями, обычно округлой или округло-овальной формы, размером от горошины до лесного ореха и имели плотную консистенцию.

У 13 из 56 животных (23,2%) выявляли лимфангиты. Лимфатические сосуды при этом имели вид плотных извитых тяжей, окруженных отечной

жидкостью, придающей данной зоне тестоватую консистенцию (рис. 2).

БЭ лимфоидяые фолликулы области голодной ямки

□лимфоидяые фолликулы в зоне поверхностного шейного лимфоузла

Ш лимфоидные

фолликулы в других _мастях тела_

Рисунок 2. Частота поражения лимфоидных образований у животных без выраженных признаков лейкоза.

Поражение поверхностных лимфоузлов отмечалось реже, в частности лимфоузлов голодной ямки - 35,7% (20 случаев), из них у 8,9% (5 случаев) поражение носило односторонний характер, а у 26,8% (15 случаев) - двусторонний; поражениенадколенного лимфоузла чаще было односторонним -14,3% (8 случаев), тогда как двусторонним - у 3,6% (2 случая) (в общем 17,9%); лимфаденит нижнего (поверхностного) шейного встречался у 33,9% (19 случаев) в том числе односторонний - 28,6% (16 случаев) и двусторонний - 5,3% (3 случая), поражение надвыменного лимфоузла встречалось достаточно редко - 7,1% (4 случая).

Гематологические изменения у скрыто болеющих животных характеризовались низким содержанием лейкоцитов в периферической крови. У большинства животных (49 голов) он колебался в пределах 4600 - 8200 в 1 мкл крови. Часть животных (5 голов) имели очень низкий уровень лейкоцитов -3600-4200 в 1 мкл, позволяющий говорить о наличии у них лейкопении. Тем не менее в лейкоцитарной формуле имел место лимфоцитоз (в среднем 86,8% с колебаниями 79 - 91,8%), но менее выраженный, чем у явно больных (см. табл. I).

При исследовании функциональной активности фагоцитов было выявлено, что их ФА составила 24,3%. Параллельно этому наблюдалось снижение активности каждого отдельно взятого фагоцита и, ФЧ было равно 1,9 латекс-ные единицы.

Дальнейший мониторинг вскрыл тенденцию к усугублению зарегистрированных изменений. При каждом последующем исследовании ФА неизменно снижалась и к 6-му месяцу исследований составила 19,8%. ФЧ находилось на одном и том же низком уровне - 1,9-2,0 латексные единицы (табл. 5).

Таблица 5

Динамика изменения фагоцитарной активности нейтрофилов

Показатель ФА ФЧ

Исходные данные 24,3 1,9

Через 1 месяц 22,0 2,0

Через 3 месяца 21,4 1,9

Через 6 месяцев 19,8 1,9

Здоровые 30-80 2-9

Несмотря на скрытое течение болезни и отсутствие явных клинических признаков лейкоза у животных этой группы, результаты иммунологических исследований указывали на изменение Т- и В-клеточного иммунного ответа. При первичном исследовании отношение Т-лимфоцитов к В-лимфоцитам равнялось 7,06 : 1, т.е. на один В-лимфоцит приходилось примерно семь Т-лимфоцитов. При последующих исследованиях уровень Т-лимфоцитов постепенно повышался - через 3 месяца до 83,0%, а к 6-ти месяцам но достиг отметки 84,3%. При этом содержание Т-хелперов постоянно находилось на уровне 14,5 - 16,3%. Количество В-лимфоцитов пропорционально уменьшалось и к концу наблюдений составило 12,0% (табл. 6).

Таблица 6

Динамика изменений Т- и В-популяций лимфоцитов

Показатель В- лимфоциты Т- лимфоциты Т-хелперы Т-лим./В-лим.

Исходное 13,4 80,5 14,8 7,06

Через 1 месяц 12,9 82,5 14,5 7,23

Через 3 месяца 12,1 83,0 16,3 6,85

Через 6 месяцев 12,0 84,3 15,2 7,08

Здоровые 7-20 60-80 25-55 1,5-2,0

При биохимических исследованиях сыворотки крови была выявлена ги-по-у-глобулинемия (содержание у-глобулинов равнялось 16,7%). Уровень р-глобулинов почти в 2 раза превышал показатели здоровых животных -30,22%. Регистрировалась и гипоальбуминемия - 29,7%.

При последующих исследованиях зарегистрированная на начальном этапе гипо-у-глобулинемия сохранялась на протяжении всего периода наблюдения (16,7 - 13,48%), ги пер - р- гл о бул и не м и я нарастала до 37,37%, а гипоапь-буминемия еще более усиливалась - уровень альбуминов снижался с 29,7% до 26,74%. Наравне с этим выявлялось увеличение количества а-глобулинов -22,02-23,38% (табл. 7).

Очевидно, выявленные изменения у РИД-позитивных коров без выраженных клинических признаков лейкоза указывают на алейкемическую фор-

му болезни, которая сопровождается нарушением как клеточного, так и гуморального иммунного ответа, обусловленного избыточной пролиферацией Т-лимфоцитов и нарушением их дифференцировки.

Таблица 7

Динамика изменения гуморальных факторов

Показатель Альбумины, % Глобулины,% Альб./Г лоб.

а Р У

Исходное 29,7 23,38 30,22 16,7 0,42

Через 1 месяц 28,9 23,2 33,7 14,2 0,40

Через 3 месяца 29,01 22,02 35,39 13,58 0,40

Через 6 месяцев 26,74 22,41 37,37 13,48 0,36

Здоровые 38-50 12-20 10-16 25-40

Количество лейкоцитов в периферической крови остальных РИД-позитивных животных (385 голов) находилось в пределах 7800 - 12000 в 1 мкл. т.е. у верхней границы физиологической нормы. В лейкоцитарной формуле умеренный лимфоцитоз выявлялся лишь у 36 коров (9,35%). Количество лимфоцитов при этом в среднем составляло 75,4%. ФА у них составляла в среднем 28,9%, а ФЧ - 2,3 латексные единицы. Количество-Т-лимфоцитов находилось на уровне 74,5 - 80,9%, что ниже аналогичного показателя других групп. Доля Т-хелперов составила 15,7 - 19,3%. Соответственно и уровень В-лимфоцитов был несколько выше - 15,7-19,3%. В сыворотке крови выявлялась гипер-Р-глобулинемию - в среднем 25,8% и гипо- у-глобулинемию -24,6%. Значительных различий этих показателей при последующих исследованиях не выявлено. Полученные при серологических, гематологических и иммунологических исследованиях данные свидетельствуют об инапарантной форме болезни.

Резюмируя полученные результаты необходимо отметить, что у взрослого поголовья крупного рогатого скота СПК «Россия» регистрируется эпизоотия Т-клеточного лимфоидного лейкоза, которая регистрируется в виде лей-кемической и алейкемической или инапарантной (скрытой) форме инфекции. В динамике иммунных нарушений, как больных, так и скрыто переболеваю-щих животных регистрируются нарушения всех компонентов иммунного ответа. Процесс характеризуется резким снижением макрофагальной активности, незавершенностью фагоцитоза, на фоне которых отмечается избыточная пролиферация Т-лимфоцитов, сопровождающаяся нарушением их дифферен-цировки и сокращением популяции Т-хелперов. Она приводит к торможению антителогенеза. Как у явно больных, так и у РИД-позитивных коров не имеющих явных клинических проявлений постоянно нарушена кооперация макрофагов, Т- и В-лимфоцитов, лежащая в основе как гематологических, так и иммунологических изменений.

Подтверждают наши наблюдения результаты патологоанатомических, в

том числе иммуноморфологических исследований.

2.4. Патологоанатомические изменения при различных формах лейкоза

2.4.1. Особенности патологоанатомического проявления болезни у явно больных животных

При патологоанатомическом исследовании РИД-позитивных животных, имеющих гиперлейкоцитоз,мы отмечали изменения практически во всех внутренних органах, частота поражения которых отражена в таблице 8. Со-гласноданных таблицы, наиболее часто изменения у них выявлялись в органах иммуногенеза, прежде всего в тимусе, селезенке и лимфоузлах. Реже в печени, сердце, яичниках, почках, в различных отделах матки, в тканях глаза и скелетной мускулатуреЛимфоидные фолликулы органов желудочно-кишечного тракта отвечали на воздействие вируса лишь в одном случае (табл. 8).

Таблица 8

Частота поражения внутренних органов у явно больных животных

Орган Частота по ражения, %

лейкемическая форма алейкемическая форма

Тимус 69,2 89,3

Лимфоузлы 100 62,5

Селезенка 87,2 75,0

Печень 35,9 46,4

Сердце 30,8 26,8

Яичники 28,2 17,8

Почки 23,1 41,1

Матка 17,9 12,5

Ткани глаза 10,25 1,8

Скелетная мускулатура 7,7 -

Лимфоидные фолликулы: в т.ч. по ходу лимф, сосудов желудочно-кишечного тракта 2,6 100 73,2

У животных с признаками гиперлейкоцитоза выявлялись неоднотипные изменения в тимусе. В одних случаях определялись опухолевидные фокусы -12,8% случаев (5 голов). В других - гиперпластические процессы, которые сопровождались отеком и увеличением размера тимуса - 7,7% (3 головы). В этом случае абсолютная масса достигала 561 (±73) г, в том числе шейная доля - 253 (±41) г и грудная - 308 (±32) г. При этом шейная доля имела вид широ-

кого, серо-розового тяжа неравномерной толщины, а грудная доля прикрывала правое предсердие.

При гистологическом исследовании просматривалось дольчатое строение органа. Соотношение корковой и мозговой зоны соответствовало увеличению объема последней. Граница между ними была не четко контурирована. Это сочеталось с обильным кровенаполнением железы, появлением в ней очагов плазматического пропитывания тканей и стенок сосудов. Регистрировались очаги гнездного скопления лейкоцитов, в основном Т-лимфоцитов (иммуно-цитов), четко выявляющиеся на фоне очагов разряжения. Нарушение расположения данных элементов отмечалось как в корковой, так и в мозговой зоне. Очаговые, гнездные скопления лимфоцитов, как правило, определялись в пе-риваскулярных зонах. Артерии при этом имели набухшую, утолщенную стенку, эндотелий которых пролиферировал, выступал в виде частокола, сужая просвет сосудов, нередко десквамировал. Элементы адвентиции, увеличивались в размерах, пролиферировали и пополняли состав периваскулярных инфильтратов.

У 48,7% животных (19голов) отмечаласьакцидентальная инволюция тимуса. При этом орган уменьшался в объеме, с трудом выявлялся в окружающей его жировой ткани. Дольчатость органа не была выражена. Отдельные участки тимуса приобретали коричневатый оттенок и студневидную консистенцию. Цвет сохранившейся части органа был бледно-розовый с сероватым оттенком. Консистенция неоднородная: более плотные участки чередовались с менее плотными, студневидными.

При микроскопическом исследовании в сохранившейся ткани органа различие мозговой и корковой зон сохранялось. Границы между ними просматривались не четко. Лимфоциты оформлялись в отдельные редко расположенные пакеты и оголяли ретикулярную структуру ткани. Имелось большое количество лимфоцитов в состоянии апоптоза. Отдельные эпителиальные элементы мозговой зоны имели включения жира в виде жировых вакуолей (жировая метаплазия тимуса). Реактивные изменения сосудов характеризовались их выраженным расширением и полнокровием. Пролиферативные изменения определялись наиболее выражено в периваскулярной зоне. Периваскулярно отмечался отек и плазморрагии.

Из лимфоузлов наиболее часто в процесс вовлекались околоушные, заглоточные, нижние (поверхностные) шейные, надколенные, реже надвымен-ной. Из внутренних лимфоузлов чаще регистрировались изменения в мезен-териальных, средостенных и глубоких паховых. На вскрытии, они были увеличены в объеме, капсула их напряжена, иногда утолщена. Лимфоузлы приобретали серовато-белый цвет, саловидную консистенцию, поверхность их была при диффузном поражении гладкой, ровной, а при очаговом - бугристой. На разрезе паренхима выбухала за капсулу, имела цвет рыбьего (вареного) мяса, а иногда перламутровый оттенок, умеренно плотную консистенцию. Граница коркового и мозгового вещества просматривалась не четко. На поверхности разреза определялись точечные, реже полосчатые кровоизлия-

ния. При очаговом поражении поверхность разреза была неровной. Опухолевидные фокусы проникали глубоко в толщу органа, имели саловидную консистенцию, белый, иногда серовато-белый цвет, на поверхности разращений в некоторых случаях определялись точечные кровоизлияния.

При микроскопии выявлялось нарушение их строения, увеличенные в размерах лимфоидные фолликулы утрачивали четкое очертание, границы корковой зоны фолликулов были размытыми, центры размножения их опустошались, просматривались очаги разряжения и групповые скопления лимфоцитов. Локализация лимфоцитов в мозговой зоне лимфоузлов имела ин-фильтративный характер. Стенка кровеносных сосудов утолщенная, эндотелий пролиферировал и выступал в просвет сосуда. Выявлялись плазморрагии, периваскулярные скопления полиморфных клеток.

Селезенка вовлекалась в процесс в 80 - 90% случаев. Макроскопические изменения носили неоднотипный характер. В первом случае орган был увеличен в размерах, имел малиновую или темно-вишневую окраску, увеличенные, как бы, размытые фолликулы, мягкую консистенцию. Во втором случае объем органа изменялся не значительно, в ней наблюдались очаговые разращения опухолевидной ткани, придающей ей неравномерную окраску. Между этими очагами просматривались четко выраженные фолликулы.

Микроскопически - капсула была неравномерно утолщена. Фолликулы увеличены в объеме, нечетко контурированны. В некоторых случаях ги-перплазированные фолликулы приобретали причудливую фор-му.Наблюдались поля диффузной пролиферации в межфолликулярных зонах, при этом основную массу клеточного пролиферата составляли лимфоциты.

Постоянно наблюдались изменения со стороны кровеносных сосудов селезенки. В артериях и артериолах имела место четко выраженная пролифера-тивная реакция со стороны сосудистой стенки. Наиболее ярко выраженная реакция наблюдалась в трабекулярных и пульпарных сосудах. Стенка их была резко утолщена, выявлялся продуктивный периартерит и пролифератив-ный эндартериит. Набухший эндотелий сосудов при этом усиленно пролифе-рировал. Периваскулярный клеточный инфильтрат состоял из лимфоидных и плазматических элементов. При этом с образованием бородавчатого. Изменения в стенках вен были менее выражены и соответствовали васкулиту.

Помимо этого в печени, почках, сердце, в матке, скелетной мускулатуре и даже в тканях глаза обнаруживались диффузные пролифераты, в состав которых входили полиморфноядерные клетки. Большую часть пролифератов со-ставляля иммуноциты (Т-лимфоциты) округлой формы, ядро в которых занимало более 80% объема клетки и имело интенсивно базофильную окраску. Отдельные клетки имели ядро с изрезанными краями, кариолемма которого формировала инвагинации в кариоплазму (ядерные карманы).

2.4.2. Особенности патологоанатомического проявления у РИД-позитнвных животных с алейкемической формой

У РИД-позитивных животных с алейкемической формой лейкоза изменения структуры вилочковой железы были неоднотипны. Наиболее часто отмечались тимиты, реже гиперплазия. В случае гиперплазии масса органа достигала 496 (±58) г. Тимус был увеличен в размере, розового цвета с хорошо выраженной дольчатостью и упругой консистенцией. При тимите окраска органа была неоднородной: определялись очаги кровоизлияний на фоне полнокровия ткании участки скопления отечной жидкости, придающей органу студневидную консистенцию.

Микроскопические изменения характеризовались кровенаполнением ткани. Граница коркового и мозгового вещества сохранялась, несмотря на значительное увеличение объема мозговой зоны. В периваскулярной ткани накапливались большие рыхло расположенные лимфоциты. Светлоядерные рети-кулоэпителиальные клетки четко просматривались и были окружены плотным кольцом лимфоцитов, имеющих большое, интенсивно базофильное ядро и узкий ободок цитоплазмы. Ретикулярные клетки содержали остатки разрушенных ядер лимфоцитов, выглядели объемными, гипертрофированными. Вокруг некоторых эпителиальных клеток определялась зона свободная от лимфоцитов. В связи с этим эпителиальные элементы имели овальную форму и оттесненное к периферии ядро. Эпителиальные тельца Гассаля были увеличены в объеме, некоторые из них контактировали с лимфоцитами. В мозговом веществе группы лимфоцитов располагались среди гипертрофированных эпителиальных клеток.

У РИД-позитивных коров с алейкемической формой болезни наиболее часто обнаруживались лимфадениты поверхностных лимфоузлов (надколенного, поверхностного шейного и в области голодной ямки), а также мезенте-риальных, глубоких паховых и лимфоузлов малого таза. При этом в процесс вовлекались лимфоидные фолликулы, диффузно расположенные по ходу лимфатических сосудов данных зон. Характер поражения лимфоузлов сводился к диффузной, либо очаговой пролиферации лимфоидных элементов. Лимфоузлы были увеличены в объеме, капсула их напряжена, при разрезе края органа выбухали за капсулу, границы корковой и мозговой зон не просматривались. При наличии опухолевидных фокусов на общей поверхности разреза определялись неровности более плотной консистенции.

Лимфоидные фолликулы, расположенные по ходу лимфатических сосудов имели округлую или округло-овальную форму, грязно-белый цвет, на разрезе перламутровый оттенок. Они были увеличены и некоторые достигали размера лесного ореха. Наиболее часто данные образования выявлялись в зоне расположения лимфоузлов голодной ямки, нижнего (поверхностного) шейного лимфоузла, а также по ходу лимфатических сосудов рубца, сычуга и сальника.

Микроскопические изменения в лимфоузлах и фолликулах, расположен-

ных по ходу лимфатических сосудов были аналогичны. Отмечалось увеличение размеров лимфоидных фолликулов, некоторые из них не помещались в поле зрения при увеличении 8x15. Разряжение реактивных центров сопровождалось формированием вторичных лимфоидных фолликулов. Также как и у больных животных имели место поля диффузной пролиферации лимфоцитов, среди которых многиебыли в состоянии митоза. Изменение стенок кровеносных сосудов было неоднотипным: Наряду с пролиферативными процессами в них наблюдалась фрагментация сосудистой стенки. Регистрировались участки плазморрагий. Параллельно изменениям лимфоидных органов отмечалось наличие лимфангитов. Стенка лимфатических сосудов при этом была утолщена, уплотнена, в просвете сосудов определялись тромбы. Вокруг лимфатических сосудов наблюдались студневидные инфильтраты соломенно-желтого цвета.

Макроскопические изменения селезенки характеризовались выраженным полнокровием. Капсула была напряжена, края органа во многих случаях оставались острыми. Форма и размер ее значительно не изменялись. На разрезе четко заметны увеличенные, выступающие над поверхностью в виде светлосерых фокусов лимфоидные фолликулы (белая пульпа). Соскоб умеренный.

При микроскопии выявлялись увеличенные, не четко контурированные лимфоидные фолликулы, плавно переходящие в поля диффузной инфильтрации. В этих зонах обнаруживалось большое количество иммунобластов. При цитологическом исследовании округлые крупные лимфоидные клетки имели интенсивно базофильное ядро и нуклеоли в кариоплазме. Они формировали гнездные скопления и очаги разряжения. Пролиферативная реакция наблюдалась со стороны сосудистой стенки. В некоторых кисточковых артериях вследствие активной пролиферации эндотелия наблюдалась полная их облитерация.

2.5. Характер и динамика изменения иммунопоэза у потомства РИД-позитивных коров

При исследовании иммунологического статуса молодняка, полученного от РИД-позитивных матерей были получены результаты, указывающие на нарушение их иммунологической реактивности и естественной резистентности.

Согласно результатам исследования, при клиническом осмотре 8 из 20 новорожденных телят (что составило 40%), полученных от РИД-позитивных коров, были отнесены в группу слаборазвитых. Они были угнетены, аппатич-ны, имели слабовыраженный сосательный рефлекс, малую подвижность и пониженный аппетит. К 20 - 25 дню у трех телят было выявлено увеличение заглоточных и паховых лимфоузлов. На вскрытии павшей 25-дневной телки, родившейся от РИД-позитивной первотелки, мы обнаружили гиперплазию мезентериальных лимфоузлов, тимит и увеличение размеров лимфоидных фолликулов сальника, т.е. признаки лейкоза, соответствующие изменениям,

как в центральных, так и в периферических органах иммуногенеза.

Исходные исследования крови и ее сыворотки у потомков РИД-позитивных коров показали наличие нарушений клеточного, гуморального звена иммунитета и факторов неспецифической защиты (табл. 9).

Таблица 9

Показатели иммунологической реактивности до применения тимрегивита

Группа Количество лейкоцитов в 1 мкл Количество лимфоцитов,% Альбумины, % Глобулины, %

Общее • Т-лимф. Т-хел. 3-лимф. а Р У

Потомки РИД-«+» матерей 15120 78,6 73,4 17,7 19,9 32,9 17,6 37,4 12,1

Потомки РИД-«-» матерей 7960 59,4 60,3 19,6 34,1 41,4 16,4 15,2 27,0

Согласно полученных результатов, у потомков РИД-позитивных коров регистрировались лейкоцитоз, обусловленный лимфоцитозом, гипоальбуми-немия, гипо-у-глобулинемия и гипер-Р-глобулинемия, низкий уровень фагоцитоза (ФА не превышала 29,4%) и поглотительной способности (ФЧ в среднем составило 2 латексные частицы). Количество Т-лимфоцитов превышало аналогичный показатель контрольной группы и составило 73,4%, а уровень В-лимфоцитов был существенно ниже - 19,9%.

Полученные результаты позволяют заключить, что потомки РИД-позитивных коров имеют иммунологические нарушения, соответствующие иммунодефицитному состоянию, обусловленному недостатком Т-хелперов.

На фоне выявленных нарушений состояние факторов резистентности и иммуногенеза можно активировать медиаторами клеточного обмена (цитоме-динами) тимуса. Используя тимрегивит с первых дней жизни, нам удалось восстановить общее количество лейкоцитов, в том числе лимфоцитов (табл. 10) и стабилизировать иммунный ответ.

Согласно представленных в таблице 10 данных, тимрегивит оказывает позитивное влияние на восстановление нарушенного иммунного гомеостаза у телят, полученных от РИД-позитивных коров. Уже через месяц после введения препарата отмечалось понижение общего числа лейкоцитов до 12250, а к шести месяцам - до 9600 в 1 мкл крови. Оно сопровождалось изменением соотношения Т- и В-лимфоцитов. При этом уровень Т-хелперов постепенно выравнивался и достигал к 6-месячному возрасту 23,1%, что соответствовало содержанию данных элементов у телят, полученных от РИД-негативных коров.

Таблица 10

Динамика изменения клеточного иммунитета после использования тимрегивита

Возраст телят, мес. Общее количество лейкоцитов в 1 мкл Относит, количество лимфоцитов, % Т-лимфоциты, % В-лимфо-циты, %

Общее количество Т- хелперы, %

Потомки РИД - «+» матерей

1 12250 71,7 72,6 21,7 25,3

3 10730 65,4 66,4 24,5 30,9

6 9600- 66,0 62,7 23,1 29,4

Потомки РИД - «-» матерей ■

1 8970 53,8 59,9 18,7 31,6

3 8620 57,6 58,7 20,4 30,9

6 8840 58,2 60,2 21,3 30,2

На фоне реализации иммунного ответа, коррелируемого цитомединами, происходило восполнение гуморальных факторов защиты, динамика изменения которых представлена в таблице 11

Таблица 11

Динамика изменения гуморального звена иммунитета после использования тимрегивита

Возраст телят, мес. Альбумины, % Глобулины, % Альбумины/ глобулины

а Р У

Потомки РИД - «+» матерей

1 33,4 15,4 35,6 15,6 0.5

3 37,2 16,9 24,8 21,1 0,59

6 39,2 18,3 16,4 26,1 0,61

Потомки РИД — «-» матерей

1 41,4 14,7 15,2 28,7 0,7

3 45,6 14,9 12,3 27,2 0,83

6 42,0 12,6 17,3 28,1 0,72

Тенденция к восстановлению нарушенного баланса белкового спектра сыворотки крови отмечалось уже через месяц после введения тимрегивита. Стабильный рост количества у-глобулинов - к 1-месячному возрасту до 15,6%, а к шести месяцам до 26,1%, сопровождался постепенным снижением уровня р-лобулинов - к шести месяцам он составил 16,4%. Параллельно воз —

росло содержание альбуминов - до 39,2%. Таким образом, к возрасту 6 месяцев соотношение белковых фракций сыворотки крови соответствовало физиологической норме.

Полученные данные позволяют заключить, что применение тимрегивита тормозит развитие патологического процесса, восстанавливает функциональную активность фагоцитов, соотношение белков сыворотки крови, стабилизирует Т- и В-клеточный ответ. Положительная динамика процесса зависит от возраста, заражения, длительности развивающихся патологических процессов в органах иммуногенеза.

Используемые препараты тимуса обладая имунокоррелирующим действием рекомендованы к применению в схемах специфической и неспецифической профилактики данных нарушений.

ВЫВОДЫ

1. Высокая инфицированность взрослого поголовья крупного рогатого скота свидетельствует о стационарном неблагополучии СПК «Россия» по лейкозу, протекающему в форме эпизоотии.

2. Основной формой проявления болезни является лимфоидный лейкоз в его лейкемическом, сублейкемическом и алейкемическом вариантах.

3. У молодняка крупного рогатого скота данного хозяйства регистрируется ювенальная Т-клеточная форма лейкоза.

4. Алейкемический вариант лейкоза регистрируется в период инаппа-рантной инфекции у РИД - позитивных животных, являющихся основным источником ВЛКРС.

5. Морфологические изменения в органах иммуногенеза определяются в 100% случаев при лейкемической форме и в 78,7% - при алейкемической форме.

6. У явно больныхи РИД-позитивных животных, не имеющих явного Клинического проявления регистрируются лимфопролиферативные процес-сыв центральных и в периферических органах иммуногенеза.

7. Определяющим в развитии иммунных нарушений является подавление фагоцитарной активности, обусловливающее нарушение кооперативного взаимодействия макрофагов, Т- и В-лимфоцитов.

8 Избыточная пролиферация Т-лимфоцитов, индуцированная ВЛКРС, лежит в основе неопластических изменений различных органов и тканей.

9. Изменение иммуногенеза у телят, полученных от РИД-позитивных коров, регистрируются уже в первые дни жизни.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Учитывать результаты исследований при изучении механизмов развития лимфопролиферативных и опухолевых заболеваний.

2. Выбраковку РИД - позитивных животных производить с обязательным

учетом алейкемических вариантов лейкоза.

3. Использовать иммунограмму в комплексе общепринятых методов диагностики лейкоза.

4. Результаты проведенных нами исследований, могут быть внедрены в учебный процесс при подготовке и повышении квалификации ветеринарных специалистов.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Максимова Е.В., Новых А.А. Характер иммунных нарушений при лейкозе крупного рогатого скота // Тез. докл. научно-практической конференции. «Аграрная наука на рубеже тысячелетий». - Ижевск, 2001. - С. 140 -142.

2. Новых А.А., Мкртчян М.Э. Максимова Е.В. Состояние продуктивности коров, больных и положительно реагирующих в РИД // Тез. докл. региональной научно-практической конференции: «Аграрная наука - состояние и проблемы». - Ижевск, 2002. - С.214 -217.

3. Новых А.А., Максимова Е.В., Новых Н.Н., Михеева Е.А., Лебедко В.В. Иммуноморфологические изменения у коров при онковирусной инфекции и ассоциации ее с некробактериозом // Тез. докл. региональной научно-практической конференции: «Аграрная наука - состояние и проблемы». -Ижевск, 2002. - С. 220 - 224.

4. Новых А.А., Новых Н.Н., Максимова Е.В., Сентякова Р.П., Михеева Е.А., Лебедко В.В., Коновалов НА Особенности проявления гемобластозов и их ассоциаций в некоторых хозяйствах Удмуртии // Достижения ветеринарной медицины XXI веку / Сб. науч. трудов, Барнаул, 2002, - С. 280 - 284.

5. Мкртчян М.Э., Максимова Е.В., Губайдуллина Л.В., Филиппова Л.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза молока подозрительных в заболевании лейкозом коров // Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины. - Уфа, 2003, - С. 100 — 101.

6. Новых Н.Н., Максимова Е.В. Характер морфофункциональных нару

шений воспроизводительной функции у РИД-позитивных на лейкоз коров// Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины. - Уфа, 2003, - С. 104-105.

7. Максимова Е.В., Сентякова Р.П., Новых А.А. Особенности иммунных нарушений при различных формах лимфоидного лейкоза // Материалы Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых - специалистов «Перспективы развития регионов России в XXI веке». -Ижевск, 2002, -С.135-136.

8. Новых А.А., Сентякова Р.П., Максимова Е.В. Динамика иммунных нарушений у телят от РИД-позитивных по лейкозу коров // Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины. - Уфа, 2003, - С. 105.

9. Рыболовлев Н.Е., Новых А.А., Максимова Е.ВДинамика изменений-факторов естественной резистентности у телят подвергнутых иммунокоррек-ции // Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины. - Уфа, 2003, - С. 240 - 241.

10. Максимова Е.В., Новых А.А., Сентякова Р.П. Эффективность использования цитамединов тимуса при иммунных нарушениях, обусловленных ВЛКРС // Материалы научно-производственной конференции «Эффективность адаптивных технологий», - Ижевск, 2003, - С. 299 - 301.

11. Новых А.А., Максимова Е.В.4, Губайдуллина Л.В. Иммунные нарушения при различных формах лейкоза // Материалы Международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса. -Казань, 2003, - С. 96 - 97.

12. Сентякова Р.П., Максимова Е.В., Новых А.А. Эффективность использования тимрегивита для повышения резистентности новорожденных телят // Материалы Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых - специалистов «Перспективы развития регионов России в XXI веке». -Ижевск, 2002, - С. 202-203.

На правах рукописи Максимова Елена Вениаминовна

Динамика иммунных нарушений у РИД-позитивных, больных лейкозом коров и после иммунокоррекции

16.00.02. - патология, онкология, морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Сдано в набор 24.12.2003 г. Подписано в печать 26.12.2003 г. Формат 60 х 84 / 16. Объем 1 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 7122 Гарнитура Times New Roman. Отпечатано на Rex Rotary ред.-изд. отд. Ижевской ГСХА. Лицензия ЛУ № 059 от 12.03.98.

! - - 7 3 Г

РЫБ Русский фонд

2004-4 25494

Актуальность темы:

Одной из актуальных проблем ветеринарной медицины на современном этапе ее развития является оздоровление имеющегося поголовья от инфекционных болезней. Особого внимания в этом плане заслуживают заболевания вирусной этиологии, получившие в последние годы широкое распространение. К разряду последних, как было установлено (Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В., 1998; Тамошюнас В.И., 1987), относится группа лимфопролиферативных заболеваний. Одним из них является лейкоз -инфекционное заболевание крупного рогатого скота, возбудитель которого относится к РНК-содержащим вирусам, семейства ретровирусов, имеющих высокую степень заселения окружающей среды (Быковский А.Ф. и др., 1983). BJIKPC способен преодолевать межвидовые барьеры, вызывать опухолевые заболевания сходные по морфогенезу и механизму развития у животных и у человека. Особенности возбудителя, способность его длительно персистиро-вать в организме не вызывая клинического проявления, затрудняют своевременную диагностику и систематику лейкоза (Валихов А.Ф., 1992). Известно, что, изменяя генетический потенциал организма животных, вирус способен подавлять резистентность у молодняка, репродуктивную функцию у взрослого поголовья. Постепенно снижая мясную и молочную продуктивность, качество молока и мяса, лейкоз наносит огромный экономический ущерб. Изучение данного вопроса своевременно и в связи с тем, что лейкоз крупного рогатого скота характеризуется большой вариабельностью клинического, в том числе гематологического проявления, а тонкие механизмы его возникновения и развития раскрыты не полностью (Е.Р. Черных, Г.З. Шубинский, A.JI. Лозо-вацкий и др., 1987; Г.Н. Чувиров, Т.П. Маркова, 1984).

Имеющиеся работы, отражающие этиологию (Л.Г. Бурба, А.Ф. Валихов, В.А.Горбатов и др., 1988; М.И. Гулюкин, Замараева Н.В., 1997), сущность (А.Д. Белов, JI.B. Рогожина, 1997; Тамошюнас В.И., 1987), трансформирующее влияние вируса, наличие опухолевой метаплазии (Гулюкин М.И., Замараева Н.В., 1997; Зильбер JI.A., 1968) не полностью освещают механизмы развития доОпухолевой и опухолевой стадий болезни и участие в них центральных органов иммуногенеза, а в частности вилочковой железы. Отсутствуют сведения о динамике и последовательности иммунных нарушений у РИД-позитивных и больных животных, а также у молодняка с наследственной предрасположенностью (А.А. Новых и др., 2003). Не уделяется должного внимания вопросам восстановления нарушенного иммуногенеза при вирусном воздействии и после иммунокоррекции.

Не установлены критерии, которые бы легли в основу определения статуса РИД-позитивных животных (носителей вируса), не изучена их роль в распространении заболевания. По действующему законодательству РИД-позитивные животные при отсутствии выраженных гематологических изменений остаются в стаде, могут быть допущены к осеменению и способствуют как горизонтальной, так и вертикальной передаче возбудителя. Имеющиеся-данные о характере иммунологических (А.Е. Галатюк, 1986; В.И. Ефимов, П.Б. Садаускас,1983; Р.Х. Кармолиев, 1994), гематологических (Л.Г. Бурба, А.Ф. Валихов, В.А.Горбатов и др., 1988; В.А. Бусол, Б.М. Ярчук, В.П. Заянюк и др., 1991), морфологических (В.А. Смирнова, Т.П. Кудрявцева, 1985; Д.А. Худорожкова, 2003), биохимических (Н.Н. Анисимова, 1998) изменений в организме РИД-позитивных коров немногочисленны и разноречивы. Тем не менее, именно эти сведения могут способствовать более полному пониманию механизмов развития лейкоза.

С учетом изложенного считаем, что изучение динамики нарушений в органах иммуногенеза, сопоставление их с характером гематологических, биохимических и иммунологических изменений имеет, на наш взгляд, не только теоретический, но и большой практический интерес.

Цель и задачи исследования:

Цель работы - изучение механизмов и динамики иммунных, в том числе иммуноморфологических нарушений у больных лейкозом, РИД-позитивных коров и у телят, подвергнутых иммунокоррекции.

В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи:

1. Определить инфицированность поголовья крупного рогатого скота в СПК «Россия» Можгинского района.

2. Изучить динамику нарушений факторов естественной резистентности, Т-клеточного и гуморального ответа у РИД-позитивных коров с лейкеми-ческой формой.

3. Изучить характер иммуноморфологических изменений у РИД-позитивных коров с лейкемической формой болезни.

4. Определить динамику нарушений факторов естественной резистентности и иммунологической реактивности у РИД-позитивных коров с алейке-мической формой лейкоза.

5. Изучить характер изменений в тимусе, селезенке и лимфоузлах у РИД-позитивных коров с алейкемической формой болезни.

6. Провести систематику болезни соответственно клиническому и пато-логоанатомическому ее проявлениям.

7. Определить исходное состояние естественной резистентности и иммунологической реактивности у телят, полученных от РИД-позитивных коров и после использования препаратов тимуса.

Научная новизна исследований:

1. Выявленные инфильтративные изменения в органах и тканях РИД-позитивных коров позволяют считать их больными с инаппарантной формой инфекции.

2. Проведена систематика основных проявлений лейкоза в зависимости от клинических, патоморфологических, в том числе иммуноморфологических, проявлений.

3. Впервые использованы иммунограммы для расшифровки нарушений иммуногенеза при алейкемических, сублейкемических и лейкемических формах болезни.

4. Установлен характер гематологических, биохимических нарушений, соответствующих патоморфологическим изменениям в органах иммуногенеза.

5. Раскрыта динамика нарушений факторов естественной резистентности и иммунологической реактивности соответственно систематике лейкоза.

6. Материалы о влиянии иммунокорректора (тимогена и его комплексного препарата — тимрегивита) на восстановление нарушенного иммуногенеза в процессе вирусного канцерогенеза являются новыми, ранее неизвестными фактами.

Практическая значимость:

Полученные результаты о наличии у РИД-позитивных и больных животных аналогичных иммунных и иммуноморфологических нарушений, позволяют считать РИД-позитивных животных источником инфекции, который при оздоровлении поголовья должен быть удален из стада. Использование ци-томединов тимуса в ранний постнатальный период восстанавливает нарушенный иммуногенез. Они могут быть рекомендованы в качестве средств корели-рующих Т-клеточный иммунный ответ и повышающих устойчивость оганиз-ма.

Результаты исследования внедрены в учебный процесс и используются . в научно-исследовательской работе на факультете ветеринарной медицины Ижевской ГСХА и сельскохозяйственными подразделениями УР (СПК «Россия», УОХ «Июльское») при искоренении лейкоза.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Характер клинических и иммуноморфологических изменений при лейкозе определяет лейкемическую, сублейкемическую и алейкемическую формы болезни.

- Патологоморфологические измененияв различных тканях и органах, в том числе иммуногенеза, у РИД-позитивных коров аналогичны таковым у больных животных.

- В динамике иммунных нарушений при лимфоидном лейкозе крупного рогатого скота, независимо от его формы, определяющими являются морфологические изменения в органах иммуногенеза.

- Применение цитомединов (тимогена и его комплексного препарата — тимрегивита) на ранних стадиях развития болезни устраняет дефицит Т-хелперов и корелирует нарушенный иммуногенез.

Апробация работы:

Результаты исследования доложены на научно-практической конференции: «Аграрная наука на рубеже тысячелетий» (Ижевск, 2001); региональной научно-практической конференции: «Аграрная наука — состояние и проблемы» (Ижевск, 2002); Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых - специалистов «Перспективы развития регионов России в XXI веке» (Ижевск, 2002); Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 2003); расширенном заседании кафедры инфекционных болезней и патологической анатомии ИжГСХА (2003).

Публикации

Основные положения работы опубликованы в 12 научных статьях, тезисах, материалах научных конференций.

Структура и объем работы

Работа изложена на 132 страницах компьютерного набора и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждения полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список, кроме того иллюстрирована 38 рисунками и 11 таблицами. Библиографический список включает 194 источника, в том числе 41 работу иностранных авторов.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

5. ВЫВОДЫ

1. Высокая инфицированность взрослого поголовья крупного рогатого скота свидетельствует о стационарном неблагополучии СПК «Россия»по лейкозу, протекающему в форме эпизоотии.

2. Основной формой проявления болезни является лимфоидный лейкоз в его лейкемическом, сублейкемическом и алейкемическом вариантах.

3. У молодняка крупного рогатого скота данного хозяйства регистрируется ювенальная Т-клеточная форма лейкоза.

4. Алейкемический вариант лейкоза регистрируется в период инаппарант-ной инфекции у РИД — позитивных животных, являющихся основным источником BJIKPC.

5. Морфологические изменения в органах иммуногенеза определяются в 100% случаев при лейкемической форме и в 78,7% - при алейкемической форме.

6. У явно больных и РИД-позитивных животных, не имеющих явного Клинического проявления регистрируются лимфопролиферативные процессы в центральных и в периферических органах иммуногенеза.

7. Определяющим в развитии иммунных нарушений является подавление фагоцитарной активности, обусловливающее нарушение кооперативного взаимодействия макрофагов, Т- и В-лимфоцитов.

8. Избыточная пролиферация Т-лимфоцитов, индуцированная BJIKPC, лежит в основе неопластических изменений различных органов и тканей.

9. Изменение иммуногенеза у телят, полученных от РИД-позитивных коров, регистрируются уже в первые дни жизни.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Учитывать результаты исследований при изучении механизмов развития лимфопролиферативных и опухолевых заболеваний.

2. Выбраковку РИД — позитивных животных производить с обязательным учетом алейкемических вариантов лейкоза.

3. Использовать иммунограмму в комплексе общепринятых методов диагностики лейкоза.

4. Результаты проведенных нами исследований, могут быть внедрены в учебный процесс при подготовке и повышении квалификации ветеринарных специалистов.