Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Действие и применение препарата ЯК-85 в птицеводстве

На правах рукописи

РГ£ од

V июп 2000

ТРУНОВ МИХАИЛ АНАТОЛЬЕВИЧ

ДЕЙСТВИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТА ЯК-85 В ПТИЦЕВОДСТВЕ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Краснодар - 2000

Работа выполнена в Кубанском государственном аграрном уш верситете и Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной ста! ции.

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятех науки Российской Фед( рации, доктор ветер! нарных наук, профессс В.А. Антипов

Доктор ветеринарнь; наук, профессор А.А. Лимаренко

Доктор ветеринарнь: наук.

И.А. Болоцкий

Доктор ветеринарнь: * наук, профессор

Т.Н. Ракова

Ведущая организация: Ставропольская государственная сельскохозяйс венная академия

Защита диссертации состоится с/^ур^ - 2000 года в ^ часов I

заседании диссертационного совета К - 120.23.09 в Кубанском государс венном аграрном университете (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 1 КГАУ)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета

Автореферат разослан " 2000 года

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор л? ^В.Н. Боровой

ръ м м-

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

В условиях интенсивного ведения промышленного птицеводства 1частую нет возможности создать все необходимые условия для профи-штики заболеваний различной этиологии. Это обусловлено несоответст-ием существующей технологии выращивания птицы физиологическим :обенностям, несбалансированностью рационов, погрешностями в со-июдении правил содержания и ухода, дороговизной или отсутствием рофилактических и лечебных средств, а также работой по односторонней лекции с целью получения большего количества мясной продукции, риводящей к ослаблению общей резистентности и иммунной реактивно-ги организма (Бондаренко О.И., Бондаренко А.Ф., Матрос A.A., 1996; узлама B.C., 1987; Дубров И.С., 1996; Иванов A.B., 2000; Кондрашова LH., 1971; Мудрый И.Н., 1977; Найденский М.С., 1995-1997; Папуниди .X., 1998; Фисинин В.И., Околелова И.М., 1989;).

Как показывает опыт, серьезный ущерб птицеводческим хозяйст-ш наносят болезни инфекционной этиологии, в частности, болезнь Нью-5сла, возникновение которой влечет за собой комплекс карантинных ме-эприятий, сопровождающихся значительными экономическими затрата-и (Конопаткин A.A., 1993; Коровин Р.Н., 1995; Скутарь И.Г., 1995).

Вакщшопрофилактика данного заболевания не всегда достаточно {)фективна, так как поголовье птиц после вакцинации неоднородно по ммунному ответу; в стаде всегда присутствуют особи с низкими титрами иител. Серьезно усугубляют ситуацию депрессивные свойства самих нсцин, снижающих уровень иммунной реактивности при вакцинации >олотников И.А., 1983, 1987; Воробьев С.А., Филинин И.Е., Ладыгина .А. и др. 1985; Франгулян К.Ш., Аракелян А.Х, Саркисян Т.У., 1999; Jor-т F.T.W., 1986).

С учетом этого весьма актуальным следует считать поиск эффектных и безопасных средств, усиливающих иммунную защиту, устойчи-эсть к стрессам и стимулирующих обменные процессы в организме птиц >узлама B.C., 1997; Конопатов Ю.В., 1992; Уразаев H.A., 1995).

Такими свойствами обладают некоторые четырехуглеродные ди-фбоновые органические кислоты, такие, как, например, янтарная и фу-аровая, являющиеся безопасными природными метаболитами цикла ребса. В последнее время они находят применение в практике животно-здетва и ветеринарии в качестве адаптогенов, стимуляторов роста и эедств, укрепляющих иммунитет при различных иммунодефицитных )стояниях (Андреева H.JL, 1996; Бажов Г. М., 1999; Бендер К.И., Фрейд-ан C.JL, Хлебников А.Н., 1979; Безбородова Е.А., 1995; Карелин А.И., илаева A.M., 1983; Чаговец Н.Р., 1976).

Цель и задачи исследований.

Целью настоящих' исследований явилось научное обоснован» применения препарата ЯК-85 в качестве корректора иммунитета и про дуктивности цыплят-бройлеров.

В соответствии с поставленной целью решались следующие зада

чи:

1. Изучить воздействие препарата на рост культур санитарно показательных бактерий и грибков in vitro;

2. Исследовать влияние ЯК-85 на иммунный ответ при введешп неинфекционных антигенов различных классов, на формиро вание поствакцинального иммунитета у цыплят-бройлеро] против вируса болезни Ньюкасла у бройлеров при экстре мальных температурных режимах содержания;

3. Провести сравнительную оценку влияния препаратов ЯК-85 i чистой янтарной кислоты на обмен веществ, продуктивность сохранность и качество продуктов убоя цыплят-бройлеров.

4. Осуществить токсикологическую оценку препарата ЯК-85 н; цыплятах-бройлерах.

Научная новизна работы.

Впервые изучено корректирующее действие препарата ЯК-85 н; формирование поствакцинального иммунного ответа у цыплят-бройлеро] против болезни Ньюкасла при экстремальных температурных режимах выяснено его влияние на иммунный ответ против различных неинфекци онных антигенов и на факторы неспецифической защиты организма.

Выяснено влияние препарата ЯК-85 на биохимические показател! крови, усвоение питательных веществ корма, рост, сохранность и качеств« мясной продукции бройлеров в сравнении с чистой янтарной кислотой.

Впервые проведена токсикологическая оценка ЯК-85 для цыплят бройлеров обоснован ветеринарный регламент на его применение в брой лерном птицеводстве.

Практическая значимость работы.

Разработаны показания к применению препарата ЯК-85, которы{ внедрен на птицефабриках Краснодарского края в качестве корректор; иммунитета и средства, стимулирующего рост бройлеров.

Предложен способ определения остаточных количеств приме« кротонолактона в органах и тканях птицы с помощью тонкослойной хро матографии;

Апробация результатов исследований.

Материалы диссертации доложены на научно-практических конференциях Кубанского государственного аграрного университета в 19962000 годах, Международной научной конференции «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» (Москва, 1999), Всероссийское

гаучно-практической конференции Академии естествознания «Человек и геосфера» (гг. Краснодар-Геленджик, 29-30 сентября 1999 г).

Основные положения, выносимые на защиту.

Материалы о влиянии ЯК-85 на санитарно-показательную микрофлору и грибки.

Сравнительные данные о воздействии препарата ЯК-85 и чистой янтарной кислоты на иммунный ответ цыплят-бройлеров против инфекционных и неинфекционных антигенов. Результаты сравнительной экспериментальной и научно-производственной оценки влияния ЯК-85 и чистой янтарной кислоты на обмен веществ, продуктивность и сохранность цыплят-бройлеров.

Материалы обоснования параметров токсичности ЯК-85 для цыплят-бройлеров.

Публикации результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано б печатных работ, в которых отражены основные результаты экспериментальных исследований.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 159 страницах компьютерного набора и включает следующие разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы, предложения производству, список литературы. Диссертация иллюстрирована 25 таблицами, 22 рисунками и 3 фотографиями. Список литературы включает 285 работ, в том числе 203 отечественных и 82 зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Комплексный препарат ЯК-85 («Универсальный»), включающий 85% янтарной, 5% фумаровой кислот и 10% кротонолактона, производится по технологии, разработанной Кульневичем В.Г., Бадовской Л.А., Ла-ташко В.М. в Кубанском государственном технологическом университете; зарегистрирован Краснодарским центром стандартизации и метрологии № 063/003050. ЯК-85 представляет собой кристаллический порошок, растворимый в воде. ЬБ50 для белых мышей и крыс - 2297 и 2675 мг/кг живой массы соответственно, разрешен для применения в качестве регулятора роста растений.

Исследования препарата и изучение его влияния на санитарно-показательную микрофлору, на иммунитет, биохимические и продуктивные качества цыплят-бройлеров, токсикологические оценку проводили в отраслевой научно-исследовательской лаборатории факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета, в отделе ветеринарной фармации и токсикологии Краснодарской НИВС,

на базе птицефабрики "Кубанская" Динского района Краснодарского края и учхозе "Кубань" в течение 1996-2000 гг.

рН водного раствора препарата измеряли на рН-метре марки рН-150 с платиновым электродом.

Максимумы поглощения в спектре водного раствора препарата находили на спектрофотометре марки СФ-46, фотометре КФК-3.

Гравиметрические исследования проводили на электронно-цифровых весах фирмы Sartorius.

Влияние препарата на санитарно-показательную микрофлору изучали в трех сериях опытов на музейных штаммах Escherichia coli, Staphylococcus album, Pasteurella multocida, Salmonella typhimurium путем культивирования этих бактерий в МПБ с добавкой препарата в различных разведениях. . О интенсивности роста культур судили по изменению оптической плотности МПБ через сутки с момента начала инкубации.

Влияние препарата на грибки изучали на тест-культурах Aspergillus и Fusarium, о интенсивности роста которых судили по накоплению мицеллярной массы, выращенной на гидролизате пекарских дрожжей с добавкой препарата в различных разведениях.

Для экспериментальной оценки препарата брали цыплят-бройлеров СК "Русь".

В крови исследовали: количество эритроцитов определяли в счетной камере Горяева, СОЭ - в аппарате Панченкова, вязкость - гемовиско-зиметром ГВК-4, гематокрит - в капиллярах с центрифугой МЦГ-8, содержание гемоглобина - гемоглобинцианидным методом, концентрацию глюкозы - ферментативно, общий белок - по биуретовой реакции, фракций белка по методу Стольникова, мочевину - в цветной реакции с диацетил-монооксимом и тиосемикарбазидом; креатинин, активность трансаминаз, мочевую кислоту, билирубин, холестерин, общие липиды - с помощью наборов реактивов фирмы «Лахема» (Чехословакия). В печени определяли концентрацию каротина по общепринятой методике, витамина А - по Бес-сею в модификации Анисовой, витамина Е - по реакции с аа'-дипиридилом, витамина В2 - по Лаврову Б.А..

Уровень иммунной защиты против болезни Ньюкасла исследовали в РЗГА с эритроцитами петуха, иммунный ответ на введение неинфекционных антигенов - по реакции капиллярной преципитации (КП) в нашей модификации; бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) -по Смирновой и Кузьминой, лизоцимную (ЛАСК) - по Дорофейчук. Фагоцитарную активность лейкоцитов определяли in vivo (по Болотникову И.А., Соловьеву Ю.В., 1980). Количественное соотношение Т и В лимфоцитов устанавливали по методике с красителем прочным синим и нафтил-ацетатом.

Влияние препарата ЯК-85 на обменные процессы изучали путем проведения балансового опыта по Маслиевой.

Определение острой токсичности препарата ЯК-85 проводили по ютоду Deichmann, Le Blanc (1943), субхронической токсичности - по Lim соавт., (1961), параметры хронической токсичности изучали по обще-:ринятой в токсикологии методике.

Гистологические исследования внутренних органов проводили овместно с профессором КГАУ Ю.И. Щербахой.

Полученные в опытах данные подвергнуты биометрической обра-1отке с помощью персонального компьютера и программного обеспече-[ия фирмы Microsoft®, фирмы Carl Zeiss®. Критерий достоверности раз-1ицы между показателями определяли по таблице Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Влияние препарата ЯК-85 на рост культур санитарно-юказательных микроорганизмов и грибков

Исследование действия препарата ЯК-85 на организм цыплят-¡ройлеров проводились при включении его водных растворов в комби-;орма перед скармливанием. В связи с этим было необходимо выяснить лияние препарата на микрофлору, загрязняющую корма. Испытаны рас-воры препарата в диапазоне концентраций 0,5-0,00098%. Установлено гадежное подавление роста культур сальмонелл, эшерихий, пастерелл, тафилококков препаратом в 0,25-1%-ной концентрации; в более низких »азведениях наблюдался бактериостатический эффект. Препарат оказал симулирующее влияние на рост культур грибов из рода Aspergillus и •usarium, причем с увеличением его концентрации до 1% этот эффект уси-швался.

3.2. Исследование действия препаратов ЯК-85 и ЯК-ч на иммунитет бройлеров

Известны данные о влиянии янтарной и фумаровой кислот на иммунитет и неспецифическую резистентность животных и птиц (Бузлама Î.C., Рецкий М.И., Морозов М.П. и др., 1985; Нешитов Ю., Ивницкий Ю., Теккина О., 1996). Учитывая изложенное, нами было проведено исследо-¡ание действия препарата ЯК-85 на иммунную систему бройлеров.

При внутривенном введении различных классов антигенов брой-шрам на фоне добавки в рацион ЯК-85 происходило более быстрое и дощное антителобразование к этим антигенам. Так, на химически чистый штиген (бычий сывороточный альбумин) образуется антител на 61,5 %, на :месь антигенов (сухая цитратная кроличья плазма) - на 25-51%, на клеточный антиген (эритроциты человека) - на 700% больше, чем у птиц, не юлучавших препарат (табл. 1).

Таблица 1.

Результаты иммунизации птиц антигенами различных классов

Группа Вид антигена Количество антител спустя неделю после иммунизации

Единицы Абсолютное значение Приращение к контролю, %

Контрольная БСА г% 0,039 -

Кроличья г% 0,087 0,020 0,0008 0,0004

Эритроциты Титры 1:264

Опытная БСА г% 0,063 +61,5

Кроличья г% 0,125 0,031 0,001 0,0005 +44 +51 +25 +25

Эритроциты Титры 1:2112 +700

Применение препарата на фоне пониженных и повышенных температур в помещении (+37...+40°С в летний, +12...+14°С в зимний периоды года) оказало корректирующее действие на формирование поствакцинального иммунного ответа против вируса болезни Ньюкасла в виде стабилизации титров антител в технологически допустимых пределах 1:16 -1:64 - 1:128. В этих условиях у интактных цыплят наблюдали значительный разброс значений титров антител к НБ в диапазоне 1:4 - 1:128 - 1:512 (рис.1).

В производственных испытаниях подтвердилось корригирующее действие препарата ЯК-85 на поствакцинальный иммунитет к НБ.

Рис. 1. Влияние ЯК-85 на поствакцинальный иммунитет бройлеров против. болезни Ньюкасла

При исследовании действия препарата на иммунную систему цыплят было обнаружено повышение лизоцимной и бактерицидной активно-

ста сыворотки крови, а также фагоцитарной активности лейкоцитов. В крови увеличилось количество у-глобулинов. (табл. 2, 3).

Таблица 2.

Влияние ЯК-85 на показатели неспецифической резистентности

Группа Лизо-цим сыворотки, % Бактерицид-ность сыворотки, % Альбумины, % Глобулины, %

а Р У

|о введения препарата Контроль 16,68 88,3 49,72 11,25 15,86 23,16

Опыт 20,01 60 48,43 13,40 14,29 23,88"

Спустя 2 недели от начала дачи Контроль 29,94 77,1 45,20 17,17 12,64 24,98

Опыт 56,24 96,5 42,01 15,11 14,64 28,24

Таблица 3.

Показатели фагоцитоза на фоне применения препарата ЯК-85.

Группа Фагоцитарная активность лейкоцитов, % Фагоцитарный индекс, ФИ Фагоцитарное число, ФЧ

Контроль 62 2,23 1,38

Опыт 74 3,51 2,60

Количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула крови бройлеров обеих групп не различались и в течение всего периода эксперимента были в пределах нормы.

В крови цыплят опытной группы количество Т-лимфоцитов в общем количестве лимфоцитов составляло 37,5%, что выше, чем у контрольных птиц, на 24,5%.

При гистологическом исследовании фабрициевой сумки, селезенки, тимуса в них не было выявлено патологических изменений; не найдено достоверной разницы между их весовыми коэффициентами у особей контрольной и опытной групп. Появилась тесная корреляционная связь между весовыми коэффициентами органов иммунитета у птиц опытной группы, в то время, как у контрольных бройлеров она не была установлена. Это доказывает причастность препарата к морфологической и функциональной стимуляции иммунитета.

3.3. Влияние препарата ЯК-85 на биохимические показатели крови и продуктивные качества бройлеров

Биохимическими исследованиями крови цыплят при применении ЯК-85 и ЯК-ч в дозе 20 мг/кг живой массы в течение 3, 4 и 6 недели выращивания не было установлено достоверной разницы между показателями контрольной и опытных групп по содержанию общего белка, мочевины, активности ACT и AJIT, глюкозы, общих липидов и холестерина, гемоглобина и СОЭ. Наблюдалась тенденция к повышению уровня глюкозы в группе, получавшей ЯК-85.

Корреляционным анализом результатов выявлены новые тесные корреляционные связи между биохимическими показателями у цыплят в группах, получавших ЯК-85 и чистую янтарную кислоту по сравнению с контрольной птицей.

Рис.2. Изменение корреляционных зависимостей между биохимическими показателями под действием препаратов янтарной кислоты

Препарат ЯК-85 в сравнении с ЯК-ч вызвал появление большего количества достоверно измененных корреляционных связей между биохимическими показателями крови цыплят: АЛТ (+4), СОЭ (+1), мочевина (+1), гемоглобин (+2), глюкоза (+1), холестерин (+2), общие липиды (+4), общий белок (+2). Препараты янтарной кислоты в наибольшей степени затронули показатели углеводного и жирового обмена у бройлеров.

Нагрузочными тестами с фруктозой и глюкозой была установлена способность организма цыплят, выращенных на рационе с добавкой ЯК-85, быстрее по сравнению с контрольными в 1,6 и 2 раза соответственно элиминировать из крови вводимые углеводы, что также характеризует исследуемый препарат как активатор углеводного обмена. При изучении баланса веществ корма у бройлеров было подтверждено это положение. Процент усвоения безазотистых экстрактивных веществ корма (БЭВ) цыплятами, получавшими препарат ЯК-85 был на 3,3% выше, чем в контроле

I на 1,9% больше, чем в группе особей, принимавших ЯК-ч. Активация глеводного обмена препаратом ЯК-85 отразилась на продуктивности и жизнеспособности бройлеров (табл. 4).

Применение препаратов ЯК-ч и ЯК-85 цыплятам в течение 3,4 и I недели выращивания повысило сохранность по сравнению с контроль-1ыми бройлерами на 1,3 и 2,5% соответственно. Среднесуточный прирост 1ассы тела бройлеров за период выращивания в группе, получавшей ЯК->5, составил 43,6 г, что выше, чем в контрольной и 1 опытной группе на ¡,8 и 2,6 г. Средняя живая масса 7-недельных цыплят 2 опытной группы ¡оставила 1892 г, и превышала этот показатель в контрольной и 1 опытной руппах на 27 и 5,4%.

Таблица 4.

Показатели продуктивности бройлеров

Группы

Показатели контроль 1 опытная (ЯК-ч) 2 опытная (ЯК-85)

'(оза препарата, мг/кг массы тела бройлеров - 20 20

количество цыплят в начале опыта, гол 1570 1570 1570

Тало за период опыта, гол 60 39 20

Сохранность, % 96,2 97,5 98,7

Средняя живая масса в 7-недельном возрасте, г 1679 1795 1892

Среднесуточный прирост за период опыта, '35 дней), г 37,8 41,0 43,6

Для выяснения влияния препаратов на антиокисдантную защиту организма цыплят было проведено изучение содержания витаминов в пе-

генп (табл. 5).

Таблица 5.

_Содержание витаминов в печени бройлеров_

Наименова- Содержание витаминов, мкг/г

ние групп Каротин Ретинол (А) Рибофлавин (В2) Токоферол (Е)

Контроль 3,8 85,2 19,2 0,89

ЯК-чистая 4,2 108,9 23,9 1,3

ЯК-85 5,3 110,2 24,5 1,48

Более высокое содержание витаминов А и Е в печени птиц, получавших ЯК-85 в качестве кормовой добавки, свидетельствует о гепатопро-гективных свойствах ЯК-85 и ЯК-ч. Наиболее высокое содержание витамина Е в печени бройлеров, выращенных на рационе с применением ЯК-

85, свидетельствует о большей активности печени в антиоксидантной з щите организма по сравнению с интактным контролем.

Препараты янтарной кислоты, вводимые в рацион не влияли i качество и ветеринарно-санитарные показатели тушек бройлеров.

рН водной вытяжки из мышц цыплят контрольной группы соста ляла 6,20, 1 опытной - 6,19, второй опытной - 6,17. Реакция на пероксид зу была положительна у мяса цыплят всех групп.

Различий в соотношении съедобных частей тушки к несъедобны между группами цыплят не было. Масса всех мышц в группе бройлеро получавших добавку препарата ЯК-85, была больше, чем у контрольнь на 11,9% и больше, чем у группе, получавшей чистую янтарную кислот на 6,13%.

Дегустационной оценке подверглись следующие продукты: о варное мясо грудных и бедренных мышц от птиц всех групп, а тают бульон. Оценивались такие показатели, как вкус, аромат, нежность и со1 ность (для мяса) и прозрачность (для бульона). Не было выявлено дост< верных различий в показателях вкусовых качеств мяса и бульона межв контрольной и опытными группами.

3.4. Токсикологическая оценка препарата ЯК-85 на цыплята) бройлерах

При исследовании острой токсичности препарат ЯК-85 был отш сен к VI классу токсичности - "практически нетоксичные веществе (Hodge, Sterner, 1943): LDJ0 составила 5300 мг/кг живой массы. Танатоп нез характеризовался атаксией, понижением частоты дыхательных движ< ний, сердечных сокращений и быстрым снижением температуры тела. Н вскрытии отмечалось раздражающее действие ЯК-85 на слизистые обе лочки пищевода, зоба, желудка и кишечника, под слизистыми оболочкам были найдены эрозии и язвы.

При определении параметров субхронической токсичности н удалось вызвать гибель птиц, получавших препарат с кормом. Происходи ла адаптация бройлеров к ЯК-85. Поедаемость корма при этом нескольк замедлялась, хотя порция корма съедалась полностью на несколько часо позднее, чем в контрольной группе.

Было установлено два чувствительных теста, по которым можн на ранней стадии диагностировать начало интоксикации препаратом ЯК 85. Это концентрация мочевины и мочевой кислоты в сыворотке кровг По этим показателям были вычислены суммарная накопительная пороге вая доза - 5300 мг/кг живой массы, а также зона токсического действ и 5 равная единице.

Отравление нарастающими дозами препарата на 16 сутки индиви дуального внутрижелудочного введения сопровождалось остановкой рос та цыплят и их гибелью на 20-е сутки затравки. Этому предшествовал

лная неподвижность, сопорозное состояние, парезы и параличи мышц, ижение температуры тела.

Коэффициент кумуляции согласно классификации Медведя Л.И. и индивидуальном внутрижелудочном введении ЯК-85 составил 5,24 -щество со слабыми кумулятивными свойствами .

После проведения затравки бройлеров методом тонкослойной оматографии было выяснено распределение кротонолактона, входящего трепарат ЯК-85 в организме птиц. Его накопление зафиксировано в поч-х, печени, коже с пером у бройлеров, получивших препарат суммарно за -дневный период 27772 мг/кг массы тела.

В ходе определения параметров хронической токсичности ЯК-85 гплята ежедневно в течение 70 суток получали его с кормом из расчета 10 LDjo - 530 мг/кг живой массы. Отмечалось отсутствие клинических 1Изнаков отравления, не было выявлено отрицательного действия препа-та на поведение и клиническое состояние бройлеров. Было установлено имулирующее влияние ЯК-85 в этой дозе на рост цыплят. В крови мтных птиц по сравнению с контрольными содержание мочевины уверилось в 2 раза, глюкозы - на 17,5%, активность ACT — на 67% и АЛТ в раз, что указывает на токсическое действие ЯК-85 на бройлеров

ВЫВОДЫ

1. Препарат ЯК-85 обладает бактериостатическим и бактерицидным действием на Escherichia coli, Staphylococcus album, Pasteurella multocida, Salmonella typhimurium в концентрации не ниже 0,25%; рост простейших грибов в этих концентрациях но не угнетает.

2. ЯК-85 корректирует поствакцинальный иммунный ответ цыплят-бройлеров против болезни Ньюкасла. Добавка препарата стабилизирует титры антител к НБ, не дает им снижаться до уровня 1:8, при котором необходима ревакцинация. Особенно эффективно действие препарата проявляется на фоне экстремальных повышенных и пониженных температур. Иммунный ответ к химически чистому, смешанному и клеточному антигенам под действием ЯК-85 усиливается. Лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови, фагоцитарная защита активизируются и находятся на более высоком уровне,

3. - Основное действие, оказываемое: препаратом на организм птиц,

Заключается в активации углеводного обмена, проявляющейся в повышении усвоения безазотистых экстрактивных веществ и более эффективной элиминации углеводов из крови.

4. ЯК-85 в дозе 20 мг/кг живой массы при скармливании бройлерам в течение 3, 4 и 6 недели выращивания стимулирует их рост и развитие. Это действие проявляется более сильно, чем у чистой янтарной кислоты, применяемой в той же дозе и схеме.

5. Качество мяса, полученного от бройлеров, выращенных на р; ционе с ЯК-85, его органолептические свойства соответствую стандартам и не отличаются от таковых у птиц, получавших чис тую янтарную кислоту.

6. По классификации Hodge, Sterner препарат ЯК-85 относится к V классу токсичности (класс практически нетоксичных веществ] LD50 составляет 5300 мг/кг живой массы и он не обладает кумул* тивными свойствами.

Экономическими расчетами установлено, что использовании пре парата ЯК-85 в качестве кормовой добавки в дозе 20 мг/кг массы тел (~150 г на 1 тонну корма) в течение 3, 4 и 6 недели выращивания обеспе чивает окупаемость затрат на его приобретение в размере 12,4 рубля на вложенный рубль, что на 4,5 рубля больше, чем при применении чисто янтарной кислоты (в ценах 1998 года).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Ветеринарной практике и птицеводству рекомендуется новьп комплексный препарат органических кислот и кротонолактона - ЯК-85 качестве неспецифического иммуномодулятора и иммунокорректора по ствакцинального иммунитета, а также ростостимулирующего средства : дозе 20 мг/кг массы тела в течение 3, 4 и 6 недели выращивания бройле ров.

Применение препарата регламентируется утвержденным настав лением по применению ЯК-85 в ветеринарии в Краснодарском крае.

Основные положения диссертационной работы используются i учебном процессе при обучении студентов факультета ветеринарной ме дицины Кубанского государственного аграрного университета.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лимаренко A.A., Трунов М.А., Латашко Ö.M., Абашева Л.Ф., Капи танаки В.М., Абашев E.H. Техническая янтарная кислота как ста мулятор роста цыплят-бройлеров.// Информ. листок Краснодарско го ЦНТИ № 41-98. Краснодар, 1998.

2. Лимаренко A.A., Трунов М.А., Латашко В.М., Абашева Л.Ф., Капи танаки В.М., Абашев E.H. Применение препаратов янтарной кислоты для повышения сохранности и продуктивности цыплят-бройлеров. // Информ. листок Краснодарского ЦНТИ № 41-98 Краснодар, 1998.

3. Лимаренко A.A., Трунов М.А., Латашко В.М. Влияние препарате ЯК-85 на здоровье и продуктивность цыплят-бройлеров.// Трудь: Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск 375

(403). Краснодар, 1999. с. 88-92.

Лимаренко A.A., Трунов М.А., Койков Д.В., Невструев H.A., Ла-ташко В.М. Влияние препарата ЯК-85 на организм ремонтного молодняка кур-несушек кросса Ломанн-Браун. // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск 375 (403). Краснодар, 1999. с. 93-103.

Лимаренко A.A., Трунов М.А. Санитарно-гигиеническая оценка нового адаптогена при выращивании цыплят-бройлеров.//Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и эколопш. Тезисы докладов международной научной конференции. Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. Москва, 1999. с. 122-124.

Трунов М.А. Токсиколого-гигиеническая характеристика препарата ЯК-85. //Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. Тезисы докладов международной научной конференции. Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. Москва, 1999. с. 139-141.

Актуальность темы

Применении янтарной, фумаровой кислот и их производных в качестве стимуляторов физиологических функций организма животных (Бажов Г. М., 1999; Бахирева JI.A. и др., 1995; Бузлама B.C., 1987; Кондрашова М.Н., 1971; Мудрый И.Н., 1977; Найденский М.С., 1995-1997; Папуниди К.Х., 1998; Иванов A.B., 2000) в последние годы уделяется большое внимание.

Опыт интенсивной эксплуатации птиц в условиях промышленной технологии показывает, что серьезный ущерб птицеводческим хозяйствам наносят болезни инфекционной этиологии, в частности, болезнь Ньюкасла (БН), вспышка которой влечет за собой комплекс карантинных мероприятий, сопровождающихся значительными финансовыми затратами (Конопаткин A.A., 1993; Коровин Р.Н., 1995; Скутарь И.Г., 1995). Профилактика данного заболевания не всегда достаточно эффективна, так как поголовье птиц после вакцинации неоднородно по иммунному ответу, в стаде всегда присутствуют особи с низкими титрами антител, подверженные заражению (Воробьев С.А., Филинин И.Е., Ладыгина JI.A. и др. 1985; Франгулян К.Ш., Аракелян А.Х, Саркисян Т.У., 1999).

Это обусловлено множеством факторов: односторонней селекцией птицы с целью получения большего количества мясной продукции, приводящей к ослаблению общей резистентности и иммунологической реактивности ее организма, нарушением количественного и качественного состава рационов и микроклиматического режима при выращивании, применением живых вакцин против НБ, обладающих иммуносупрессивными свойствами (Болотников И.А., 1983, 1987; Jordan F.T.W., 1986).

С учетом этого весьма актуальным следует считать поиск эффективных и безопасных средств, повышающих общую резистентность и иммунологическую реактивность организма птицы, устойчивость ее к стрессам без каких-либо нарушений процессов пищеварения и обмена веществ (Горшков Г.И, 1981; Конопатов Ю.В., 1992.).

В.Г. Кульневичем, Л.А. Бадовской, В.М. Латашко (Кубанский государственный технологический университет) по оригинальной технологии разработан комплексный препарат органических кислот, включающий 85% янтарной кислоты и 10% кротонолактона, который изготавливается из пенто-зансодержащих отходов полеводства и деревообрабатывающей промышленности. Он нашел применение в качестве регулятора роста растений, и не был исследован как средство, корректирующее иммунный ответ и продуктивность птицы. Исследование его влияния на иммунологическую реактивность и продуктивные качества цыплят-бройлеров является актуальной задачей.

Цель и задачи исследований.

Целью настоящих исследований явилось научное обоснование применения препарата ЯК-85 в качестве корректора иммунитета и продуктивности цыплят-бройлеров.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Исследовать влияние препарата ЯК-85 на формирование иммунного ответа у цыплят-бройлеров при введении антигенов различных классов.

2. Изучить воздействие препарата на рост культур некоторых бактерий и простейших грибов in vitro.

3. Установить влияние препарата ЯК-85 на сохранность, продуктивность и качество продуктов убоя цыплят-бройлеров.

4. Провести токсикологическую оценку препарата ЯК-85 на цыплятах-бройлерах.

Научная новизна работы.

Впервые выяснено иммунокорригирующее действие ЯК-85 на поствакцинальный иммунитет у бройлеров против болезни Ньюкасла и различных классов антигенов.

Установлено влияние препарата на рост микроорганизмов и простейших грибов в водных растворах различных концентраций.

Установлено ростостимулирующее влияние ЯК-85 на бройлеров и на качество их мясной продукции.

Впервые проведена токсикологическая оценка препарата ЯК-85 на цыплятах-бройлерах при использовании его с кормом и установлены его параметры токсичности.

Работа выполнена в соответствии с отраслевой программой кафедры паразитологии, ветсанэкспертизы и зоогигиены Кубанского государственного аграрного университета.

Практическая значимость работы.

Разработаны показания к применению препарата ЯК-85, который внедрен в ветеринарную практику в качестве нового корректора поствакцинального иммунитета против болезни Ньюкасла и ростстимулирующего средства в бройлерном птицеводстве.

Обоснованный нами режим применения препарата используется при выращивании бройлеров в птицеводческих хозяйствах Краснодарского края.

Предложено и экспериментально обоснованы бактерицидные и бакте-риостатические дозы ЯК-85 для некоторых видов микроорганизмов.

Апробация результатов исследований.

Материалы диссертации доложены на научно-практических конференциях Кубанского государственного аграрного университета в 1997-2000 годах, Международной научной конференции «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии» (Москва, 1999), Всероссийской научно-практической конференции Академии естествознания «Человек и ноосфера» (гг. Краснодар-Геленджик, 1999). Основные положения, выносимые на защиту:

- сравнительные данные о воздействии ЯК-85 и чистой янтарной кислоты на поствакцинальный иммунитет против болезни Ньюкасла и о формировании иммунного ответа к различным классам антигенов у цыплят-бройлеров;

- материалы о влиянии ЯК-85 на микрофлору и простейшие грибы; 7

- результаты сравнительных экспериментальных исследований и научно-производственной оценки применения ЯК-85 и чистой янтарной кислоты в качестве ростостимулирующей кормовой добавки;

- сведения о параметрах токсичности препарата ЯК-85 для цыплят-бройлеров;

Публикации результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, в которых отражены основные результаты экспериментальных исследований.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4. ВЫВОДЫ

1. Препарат ЯК-85 обладает бактериостатическим и бактерицидным действием на Escherichia coli, Staphylococcus album, Pasteurella multocida, Salmonella ty-phimurium в концентрации не ниже 0,25%; рост простейших грибов в этих концентрациях но не угнетает.

2. ЯК-85 корректирует поствакцинальный иммунный ответ цыплят-бройлеров против болезни Ньюкасла. Добавка препарата стабилизирует титры антител к НБ, не дает им снижаться до уровня 1:8, при котором необходима ревакцинация. Особенно эффективно действие препарата проявляется на фоне экстремальных повышенных и пониженных температур. Иммунный ответ к химически чистому, смешанному и клеточному антигенам под действием ЯК-85 усиливается. Лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови, фагоцитарная защита активизируются и находятся на более высоком уровне, чем у интактных бройлеров.

3. Основное действие, оказываемое препаратом на организм птиц заключается в активации углеводного обмена, увеличении пропускной способности цикла трикарбоновых кислот, проявляющейся в повышении усвоения безазотистых экстрактивных веществ и более эффективной элиминации углеводов из крови.

4. ЯК-85 в дозе 20 мг/кг живой массы при скармливании бройлерам в течение 3, 4 и 6 недели выращивания стимулирует их рост и развитие. Это действие проявляется более сильно, чем у чистой янтарной кислоты, применяемой в той же дозе и схеме.

5. Качество мяса, полученного от бройлеров, выращенных на рационе с ЯК-85, его органолептические свойства соответствуют стандартам и не отличаются от таковых у птиц, получавших чистую янтарную кислоту.

6. По классификации Hodge, Sterner препарат ЯК-85 относится к VI классу токсичности (класс практически нетоксичных веществ): LD50 составляет 5300 мг/кг живой массы и он не обладает кумулятивными свойствами.

3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Препарат янтарной кислоты 85%-ной ЯК-85, являющийся комплексом четырехуглеродных органических кислот и кротонолактона в водной среде имеет высокую кислотность, благодаря чему достаточно надежно подавляет рост санитарно-показательной микрофлоры - сальмонелл, эшерихий, пасте-релл, кокков в 0,25-1% концентрации. Высокая корреляционная связь между рН и ростом микробов в жидкой среде с добавкой препарата характерна для всех перечисленных бактерий кроме эшерихии, у которой наблюдается стимуляция роста в интервале концентраций 0,0625-0,001953%). Возможно, это связано со способностью E.coli утилизировать сукцинат, используя его как энергетический и пластический материал. Рост простейших грибков из рода Fusarium и Aspergillus в жидкой питательной среде с добавкой препарата не угнетается, наоборот, имеет место ростостимуляция, прямо зависящая от концентрации (тесная отрицательная корреляционная связь).

Влияние препарата ЯК-85 на иммунную систему цыплят-бройлеров выражается в коррекции поствакцинального иммуногенеза против вируса болезни Ньюкасла. Особенно отчетливо это проявляется в тяжелых для птиц микроклиматических условиях - при пониженных и повышенных температурах, высокой влажности и недостаточном воздухообмене. Величины титров антител, образующихся на введение вакцины «Ла-Сота» под действием препарата не превышают значения 1:128, но и не опускаются ниже 1:16, что имеет важную роль в промышленном птицеводстве, так как снижение титров к НБ ниже 1:16 влечет за собой ревакцинацию поголовья, являющуюся дополнительным стрессом и ведущую к немалым экономическим и трудовым затратам.

Кроме этого, достаточный иммунный ответ против вируса НБ формируется на неделю раньше, чем у контрольных птиц, что имеет практическое значение при экстренной вакцинации поголовья с целью предупреждения заноса вирусной инфекции из соседних неблагополучных хозяйств.

При исследовании действия препарата на иммунную систему птиц было обнаружено усиление как гуморальной (лизоцимная активность, бактери-цидность сыворотки крови, увеличение у-глобулиновой фракции белков) так и клеточной (фагоцитарная активность лейкоцитов, увеличение количества Т лимфоцитов) составляющей иммунитета.

При сравнительной оценке ЯК-85 и чистой янтарной кислоты в производственных опытах в тяжелых микроклиматических условиях установлено, что оба препарата в дозе 20 мг/кг живой массы практически одинаково корректируют иммунный ответ против НБ, причем чистая янтарная кислота оказала несколько меньший эффект по сравнению с ЯК-85. При гистологическом исследовании органов иммунитета (фабрициевой сумки, селезенки, тимуса) не было выявлено в них патологических отклонений. Не найдено достоверной разницы между их весовыми коэффициентами. Установлена появившаяся тесная корреляционная связь между их весовыми коэффициентами, что, безусловно доказывает причастность препарата к функциональной стимуляции иммунитета.

При введении различных классов антигенов на фоне добавки в рацион бройлеров ЯК-85 происходит более быстрое и мощное антителобразование к этим антигенам. Так, на химически чистый антиген (БСА) образуется антител на 61,5 %, на смесь антигенов (СЦКП) - на 25-51%, на клеточный антиген (эритроциты человека) - на 700% больше, чем у птиц, не получавших добавки препарата.

Кроме иммунокорректирующего и иммуностимулирующего было обнаружено ростостимулирующее действие 85 %-ной янтарной кислоты.

Ростостимулирующее действие янтарной кислоты было обнаружено в эксперименте по установлению параметров хронической токсичности препарата, в котором бройлеры получали его в дозе 530 мг/кг живой массы (1/10 глад.

Была проведена сравнительная лабораторная оценка ростостимули-рующего действия ЯК-85 и ЯК-ч в различных дозах на рост и развитие бройлеров. Исследовались дозы 5, 20, 50 мг/кг живой массы при даче в 3, 4 и 6 недели выращивания. Оказалось, что добавка 20 мг/кг ЯК-85 эффективнее чистой янтарной кислоты в той же дозе. Разница с массой контрольных птиц на момент убоя составила 9,8% и 6,45% соответственно. Дополнительный прирост, полученный в результате применения ЯК-85 по сравнению с чистой янтарной кислотой - 3,35%.

На наш взгляд, причину ростостимулирующего действия янтарной кислоты можно объяснить накоплением в организме безазотистых экстрактивных веществ (БЭВ) в результате интенсификации углеводного обмена.

Это явление было обнаружено в опыте по утилизации фруктозы и глюкозы. Оказалось, что элиминация углеводов из крови опытных цыплят под действием ЯК-85 происходит более быстро и качественно по сравнению с интактной птицей.

Этот факт подтверждается балансовым опытом, проведенным в производственных условиях, где испытывались ЯК-85 и ЯК-ч в дозах 20 мг/кг живой массы в 3, 4 и 6 недели выращивания. В результате проведенного исследования удалось подтвердить накопление в организме птиц БЭВ, ионов фосфора и калия. Применение ЯК-85 в отличие от чистой янтарной кислоты снижает отложение жира в тканях птицы. Этот эффект, скорее всего связан с наличием в препарате ЯК-85 нового, малоисследованного циклического кислородсодержащего кротонолактона, известного как активатора процессов дыхания.

Было также установлено, что в отличие от чистой янтарной кислоты ЯК-85 обладает менее выраженным анаболическим эффектом.

Применение ЯК-85 в производственных условиях позволяет повысить валовой прирост на 15,47%, среднесуточный прирост на 13,3% в расчете на 1 ООО цыплят-бройлеров CK «Русь».

Биохимическими исследованиями крови при применении ЯК-85 и чистой янтарной кислоты в дозе 20 мг/кг живой массы не было установлено достоверной разницы в показателях. Корреляционным анализом полученных результатов выявлены новые тесные корреляционные связи между уровнем глюкозы, АЛТ и общих липидов и остальных показателей, что, свидетельствует о активации углеводного обмена.

При проведении ветеринарно-санитарной оценки мяса птиц, убитых после производственных испытаний препаратов не было обнаружено никаких пороков, поиск остаточных количеств кротонолактона в тушках бройлеров, обнаруженного в ходе токсикологической оценки ЯК-85 не дал положительного результата. Кротонолактон в следовых количествах был идентифицирован в перьях, которые являются его накопителями.

Исследование печени на содержание витаминов А, В2, Е показало, что максимальное их содержание было в печени цыплят, получавших добавку препарата ЯК-85 по сравнению с группой, находившейся на рационе с чистой янтарной кислотой и интактным контролем.

Массовая доля съедобных частей в тушках птиц, получавших препараты янтарной кислоты соответствовала показателям контрольной группы, незначительно превышая их.

Дегустационной оценкой мяса не выявлено отклонений в его органо-лептических свойствах ни в сравнении с мясом контрольных птиц, ни в сравнении с мясом бройлеров, получавших в рацион добавку чистой янтарной кислоты.

При исследовании острой токсичности препарат ЯК-85 был отнесен к V классу токсичности - "практически нетоксичные вещества", 1Л)5о составила 5300 мг/кг живой массы. Возможная причина гибели птиц при остром отравлении - развитие некомпенсированного ацидоза и тотального гемолиза. Танатогенез характеризовался атаксией, понижением частоты дыхательных движений, сердечных сокращений и быстрым снижением температуры тела. На вскрытии отмечалось раздражающее действие ЯК-85 на слизистые оболочки пищевода, зоба, желудка и кишечника, под слизистыми оболочками были найдены эрозии и язвы. Вес птиц, переживших острое отравление был в среднем на 45% ниже аналогичных бройлеров, не получавших препарата.

При определении параметров субхронической токсичности не удалось вызвать гибель птиц, получавших препарат с кормом. Происходила адаптация бройлеров к ЯК-85. Поедаемость при этом несколько замедлялась, хотя порция корма съедалась полностью на несколько часов позднее, чем в контрольной группе. Было установлено два чувствительных теста, по которым можно в ранней стадии диагностировать отравление препаратом ЯК-85 -концентрация мочевины и мочевой кислоты. По этим показателям были вычислены пороговые дозы - 5300 мг/кг живой массы, а также зоны токсического действия - 1.

Введение ЯК-85 в рацион бройлеров при субхронической токсичности вызвало остановку в их росте в 4 периоде дачи препарата, к 5 периоду произошло падение их живой массы, что, возможно, объясняется прекращением действия компенсаторных механизмов, регулирующих гомеостаз.

Субхроническая токсичность препарата при индивидуальном внутри-желудочном введении сопровождалась гибелью птиц в 6 периоде опыта (20-е сутки затравки), и, как при скармливании с кормом, остановка в росте также происходила в 4 периоде, но в отличие от первого опыта, живая масса птиц больше не увеличивалась а прогрессивно снижалась вплоть до последнего дня их жизни.

Клиническая картина при субхронической токсичности характеризовалась полной неподвижностью, сопорозным состоянием опытных бройлеров, парезами и параличами их мышц. Как и в опыте по определению параметров острой токсичности, наблюдали снижение температуры тела перед их гибелью.

Патологоанатомическое вскрытие трупов выявило ожоги и воспаление слизистых оболочек, язвы и эрозии под ними.

Коэффициент кумуляции при индивидуальном внутрижелудочном введении ЯК-85 составил 5,24 - вещества со слабыми кумулятивными свойствами (по классификации Медведя Л.И. с сотр., 1968).

После проведения исследования было установлено распределение опасного компонента, входящего в препарат ЯК-85 в организме птиц - кротонолактона, методом тонкослойной хроматографии. Его накопление было к обнаруженошочках, печени, коже с пером (максимальное).

В ходе определения параметров хронической токсичности ЯК-85 птицы ежедневно в течение 70 суток получали 1/10 LD50 — 5 3 0 мг/кг корма. Отмечалось отсутствие клинических признаков отравления, не было выявлено отрицательного действия препарата на поведение и клиническое состояние бройлеров. При анализе динамики живой массы и суточных привесов обнаружилось ростостимулирующее влияние ЯК-85 на организм птиц в токсических дозах. Биохимические исследования выявили достоверное изменение таких показателей, как мочевина, мочевая кислота, глюкоза, ACT и AJIT, что свидетельствует о токсическом действии ЯК-85 на функцию печени и о стимуляции углеводного обмена.

В виду того, что при определении хронической токсичности препарата падежа не было ни в контрольной, ни в опытной группе, после завершения эксперимента бройлеры были убиты и проведено патологоанатомическое вскрытие тушек, органы исследованы гистологически. Основные патизмене-ния локализовались в печени (жировая дистрофия, застойная венозная гиперемия, точечные кровоизлияния под капсулой, лизис ядер гепатоцитов, раз-рост соединительной ткани в просвете желчных протоков), сердце (слабая выраженность поперечной исчерченности или ее полное отсутствие, дряблость и утончение стенки левого желудочка) и желудочно-кишечном тракте (полосчатые кровоизлияния под слизистой оболочкой пищевода, зоба, под кутикулой мышечного желудка, очаговая гиперемия и изъязвления).