Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Биология возбудителя актинобациллеза крупного рогатого скота и овец, патогенез и диагностика заболевания

с/Российская йкадшн сьчьскихозйисшшах паи а

ВСЕРОССИЙСКИЙ ШЧНО-ИССЛЕрВйТШСШ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ имени Я.Р.ШАШШ)

На пранах рукописи

ТУТОВ Иван Кириллович

ьиологиа возьу«ителя акткновацйллезй крэ11н0г0 рогатого скота и овец, патогенез и диагностик« эйьильвйниа

16.00.03 - Ветеринарная иикройиология. вирусология, эпизоотология, иикологиа и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарии наук

Москва - 1994

Работа-выполнена в Ставропольском ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственном институте.

Научный консультант - доктор оиологичсскик наук, профессор Л. и«.Дмитриев.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор й.В.Голиков

.2. Доктор ветеркнарних наук, профессор К.(I.Сидоров

3. Доктор ветеринарных наук, профессор Р.В.Душук

Ведущая организация - Московская ветеринарная акадеыи.ч им. К.И.Скрябина.

Защита состоится _____ 1994 г. в ^

часов на заседании специализированною совета Д 020.28.01 во Всероссийской научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени У.Р.Коваленко ( 1094X2, Москва, Кузьминки, ЬИЗК).

С диссертацией моано ознакомиться в эиблиотеке ВИ311.

Автореферат разослан

Учиннй секретарь специализированного совета кандидат ветспинарних наук

Ф.Г.Теревков

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

I.I. Актуальность работы. В системе профилактических и про-тизоэпизооткчесхих авроприятяй особое значение имеют малоизученные болезни. В связи с недостаточной изученносаьа свойстз возбудителей и генеза этих заболеванииа такхе методов диагностики существенно снпаается эффективность проводимых мероприятий по их ликвидации (А.Х.Саркисов, 1973; В.П.Пишков, 1976; Г.ф.КорошслоЕ, 1979; В.П.Урбан, 1992 и другие). Кроме того, в последние годы изменился характер течения многих болезней, выявилось существенное сходство в клкническоа проявлении и патологоаяатояических нзызае-ниях некоторых заболеваний (П.А.Бакулов, 1982).

К числу таких заболевании относится актинобациллаз (ясзздоаи-тиногакоз) крупного рогатого скота и овец, получивши;! ¡ппроксе распространение во иногзх странах ¡ара и в различных регионах ít-c-сии. Актинобациллез был зарегистрирован в СМ (Sanders D.Д. ,£ís -líe M., 1956; jetasen К. , Maccey D. , 1971; СыпрЬгИ. S. j. el aL.,D75;, з Японии (iVaxaSWJ M. , Kuba M. , 1930), s Индии (Yajarama M. , SelbuwaolavarV., 1974; Lai K. , Vernta S. , 1979), в Герышп api H., 1934; TurtKi'cKliff E. Д. , 1941), в Чехословакия (Mi-izö,, 1965;, M га г О. , Roslóífil V. ,Ze.noliily& M., 1966), в Взнз'рил (Пл. -jam J , 1965), в Англии (Vornan I. А., Lanníng 2). S , 1969), з .".н-голз и Гвинее (и.Г.Костеако, И.Г.Серегин, Саура Лазсааа-тзрник, 1992). О распространении актннооациллеза ва reppaxbpar. России сообщали К.Ф.Лааахов (1954), Е.Г.Посохив (IS»5!f) .А.З.Коеих, Л.А.Гармаева (1961), Н.А.Спесилцева (1964, 1965), A.3.ro.:':::cj (1965), Л.И.Целщев, А.И.Золотоузоза, Я. «5. Лихачев, Д.В.йшге*-ский (1965), Е.В.Семенов (1965, 1972-197?), В.Л.Ромм, С.Г.Пасо-ко (1976), Ф.А.Кещеряков, В.Л.Роим, А.Н.Пилппснко (IS73, 1939, 1990) и другие.

Актинобациллез является хроническим инфекционным заболеванием крупного рогатого скота и овец и харакгвризуглцикся лн::^аденитами к лиафангиташ в области головы и йен.

Возбудителей актинобациялеза является Дcíísaobac¿LLus Ltguierc-iii , выделенный в 1902 году от -крупного рогатого скота s Аргентине Линьером и Ппитцен. По современной яоизиклатуре (Борга ,193-г, С.И.Тер-Казарян, 1939; В.А.Бурлаков , Д.К.Скородумов, Т.СЛостеп-ко, 1991) он относится к семейству Paskurc[Lacere , po.rj Acf/ -rtobacilLus .

Несмотря на такую определенность к началу назих acwewaiai

многие вопросы эпизоотологии, биологии возбудителя, методы лабораторной и дифференциальной диагностики, вопросы иышунктета и патогенеза заболевания были изучены недостаточно.

Некоторые исследователи и практические ветеринарные работники диагностировали его как актиношкоз, полагая, что он является заболеванием полимикробной этиологии (Н.А.Обухов, 1963; В.И.Зю -бан, 1972; С.Н.Вахидов, 1973; МгагО., ЕовЫИУ. , 7еко1м1ка. М., 1966 и другие). В то же время ряд ученых рассматривают актиноба-циллез как самостоятельную нозологическую единицу. Зюму вопросу .посвящены работы Н.А.Слесивцевой (1964), Л.И.Целищева с сотрудниками (1965) , I., ЕЫеиТ. (1969), П.В.Семенова (1972) ,СиШ(* е4 &1.. (1972), СамрЬеи§.^ 0.(1975), Ф.А.Мещерякова,

В.Л.Ромм, А.Н.Пилипенко (1989, 1990) и других.

Видимо поэтому длительное время актинобацидлеэ не был включен ни в одну из зпизоотологических классификаций инфекционных болезней сельскохозяйственных животных и только в 1986 году И.А. Бакулов, совершенствуя классификацию инфекционных заболеваний, включил его в новый вариант эпизоотологической классификации болезней сельскохозяйственных животных. По этой классификации акти-нобациллез относится к группе зоонозных заболеваний.

Изложенное позволяет считать, что дальнейшее изучение вопросов биологии возбудителя, генеза, эпизоотологии, иммунитета, лабораторной и дифференциальной диагностики заболевания является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилось обобщение результатов изучения особенностей культурально-ыорфоло-гических и биологических свойств выделенных штаммов возбудителя актинобациллеза, разработка научных основ и методологических принципов оценки патогенеза и эффективных методов диагностики заболевания, внедрение результатов исследований в ветеринарнуд практику.

Для реализации намеченной цели были поставлены следующие задачи:

- выделить от больных животных и идентифицировать штаммы возбудителя актинобациллеза, а также изучить.их морфологические, культуральные, биохимические и патогенные свойссва;

- определить особенности количественных и качественных закономерностей размножения и сохранения жизнеспособности возбудителя актинобациллеза;

- изучить аминокислотный обмен возбудителя в процессе выращивания его в питательных средах;

- разработать дифференциацию возбудителя актииобациллеза от некоторых патогенных актиномицетов;

- изучить патогенез актииобациллеза животных с учетом ооо -бенностей клинического проявления заболевания, данных патолого-анатошческлх, лаголсгогист.ологических изменений, а такие аминокислотного к морфологичзского состава крови;

- оценить диагностическую значимость клинико-эпизоитологиче-ских, бактериологических, иммунологических методов исследований при актинобациллезе крупного рогатого скота и овец;

- разработать методические рекомендации по лабораторной диагностике актииобациллеза крупного рогатого скота и овец.

Научная нозизка работы. Б представленной работе сформулирована я обоснованы научные положения, касашщеся биологических особенностей штаммов возбудителя актииобациллеза, выделенных от больных животных в регионе Северного Кавказа. С поноцыо электронно-микроскопических исследований получены новые данные по иорфо-логии А-Ь'ят'етн . Впервые установлены закозоьерности иинет;-.-ки роста и размноженйя возбудителя актииобациллеза. Изучен ai.ii-нокислотный обмен возбудителя актииобациллеза, расшифрована ¡.ои отдельных ашнокислог в азотистом обмене микрооргянизиа. Определены условия и сроки сохранения кизнеспособности А.Ь^т'егел'! в питательных средах, объектах внешней среды, в лисфильно высушенном состоянии, а гакгз его устойчивость к температурныи факторам, химическим веществам и антибиотикам. Разработана дифференциация возбудителя актииобациллеза и некоторых патогеьних актиноки-цетов.

Установлено, что в основе.патогенеза актииобациллеза живот- . ных лежит.действие токсинов возбудителя заболевания. Они нарушают проницаемость клеточных птрунтур стенск лимфатических сосудов, что приводит к образований в них и регионарных лимфатических узлах головы и шеи, реже других мягких тканях, гранулем. Разработаны методы определения токоигенных свойств возбудителя актиноба -циллеза. Доказано, что продукты метаболизма А- и^ийгез" вызывают дегенеративные изменения, которые проявляются зерниото-шро-вой дистрофией, отеками, некрозами, лизисом клеток различных органов л тканей. Выявлено, что у экспериментально зараженных и больных акветных изменяются показатели аминокислотного обмена и

лейкограмкы. Одновременно з организме ивоткых активизируются защитно-кошенсаторные механизмы, в первую очередь клетки рети-куло-гксгисцигарной системы.

По полученным материалам расшифровали методические принципы и разработана схема клинико-эпизоотологических, бактериологических, серологических, аллергических, пагологоанатомических, пато-яогогистояогических методов исследований и дано научное обоснование использовании их в лабораторной и дифференциальной диагностике актинобациллеза.

Впервые даны научно обоснованные предложения отнести заболевание к иомшним бактериозам, называть его лигниереллезоы,а возбудителя болезни - Бас^еНит 1(£П1'еге$п.

■Практическая значимость работы и реализация результатов исследований. Результаты исследований ввиде рекомендаций используются е краевой, зональных и районных ветеринарных лабораториях и хозяйствах Ставропольского края. Основные их положения отращены в следующих нормативно-технических документах:

- Ыетодические указания по лабораторной диагностике актино-бациллеза (псевдоактиномикоза) крупного рогатого скота и овец (утверждены Главным управлением ветеринарии МСХ Российской Федерации 9 имя 1992 года).

- Рекомендации по клинической и -лабораторной диагностике ан-тинобациллеза (псевдоактиномикоза) крупного рогатого скота и овец (утверадены ветеринарным отделом управления сельского хозяйства Ставропольскою крайисполкома 20.05.81).

- Лабораторная диагностика актинобациллеза жвачных (утвера-дена НТС АПК Ставропольского края на секции животноводства, ветеринарии и переработки мясомолочной продукции 25.12.87.).

Кроме того, материалы исследований используются в учебном процессе в 8 ветеринарных вузах и'факультетах СНГ при чтении лзк-цш и проведении лабораторно-практичесг.пх занятий по шкробиоло-гил и эпизоотологии.

Основные положения, заносите на защиту:

Основные биологические свойства выделенных итаьыоз возбудителя актинобациллеза (морфологические, кулмуралъные, биохим:че-ск;;е, патогенные) позволяй! отнести их к семейству Ра5-киг«Ца. -сеас,. роду Ас^'поЬаоИив . Указанные атскин обладал! высокой степенью аканокисло1йогс обмена а особенно энергично усваивают из питательных сред ссперагквову«з кислоту и серии.

- Возбудитель актинобациллеза по морфологическим, культураль-ным свойствам и характеру аминокислотного обмена существенно отличаемся от возбудителей актиномикоза. Эти микроорганизмы относятся к различным порядкам класса Бс^'гстуее+ез (соответственно Ей Ьас^е rial.es я AcfirtomyeeJai.es ).

- В основе патогенеза актинобациллеза животных лежит действие его токсинов, которые нарушают проницаемость клеточных структур лимфатических сосудов, вследствие чего возбудитель болезни локализуется в стенках этих сосудов и в лимфатических узлах,где образуются гранулемы. Продукты метаболизма возбудителя актинобациллеза вызывают дегенеративные изменения клею.-; различных орга-ноз и тканей по типу зернисто-кировой дистрофии, отеков, некрозов и лизиса, изменяют содержание аминокислот в крови и лейко -грамму.

- Методические принципы и схема клинико-зпизоотологических, бактериологических и иммунологических методов диагностики актинобациллеза крупного рогатого скота и овец.

Апробация работы. Основные положения м результаты исследований, изложенные в диссертационной работе, доложены и одобрены на научных конференциях-Ставропольского (1969-1992 гг.), Донского (1973) сельскохозяйственных институтов,, менв^зовсной конференции по цитохимическим и биохимическим исследованиям (г.Нальчик,1978), а также да НТС АПК Ставропольского края (1987 г.), на совещании директоров --ветврачей-бактериологов зональных и районных ветеринарных лабораторий Ставропольского ярая (23 апреля 1992) и опубликованы в 33 научных статьях, в трех методических разработках по диагностике актинобациллеза.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на ¡¿сд страницах машинописного текста, содеркив 49 таблиц, I схему, 37 рисунков (график, микро- и фотографии). Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методик .результатов исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 22? источников,б тем числе 53 зарубежных, приленения.

2. МАТЕРИАЛЫ Й ИЕТОДЦ ИССЛЕДОВАНИЙ

Диссертационная работа выполнялась по тематическим планам научно-исследовательской работы Ставропольского ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственного института (госрегистраци-онный № 81034864) ь 1970-199?. гг. на кафедре микробиологии ,ь 19

хозяйствах Ставропольского и Краснодарского краев, Калмыкии,неблагополучных по актинобациллезу крупного рогатого скота и овец. При этом использовались данные ветеринарной отчетности, ветери-нар.чо-санитарной экспертизы туш животных, убитых не мясокомбинатах. В связи с неполными сведениями с числе неблагополучных пунктов по этой болезни, количестве заболевших и павших животных,нам при вьшолнекги работы пришлось опираться в основном на многолетние данные собственных исследований и наблюдений.

В процессе выполненип работы автор имел возможность воспользоваться ценными советами известных ученых - А.Х.Саркисова,Н.И. Николаенко, И.К.Архангельского, Ф.А.Мещерякова, В разные года • в исследованиях принимали участие доцента В. 1а.Дорофеев, Н.И.Лихачев., В.Л.Ромм, С.Я.Соловьева, ассистент Е.В.Маркина, с которыми совместно разрабатывались отдельные вопросы.

За указанный период наш обследовано 12908 крупного рогатого скота и 18800 овец. Проведен анализ данных ветеринарно-сани-тарной экспертизы 1031465 туш крупного рогатого окота при убое животных на мясокомбинатах. В опытах по экспериментальному заражению использовали 12 овец различного пола и возраста, 9 телок 13-16-ыесячного возраста, двух жереоят, 147 лабораторных животных, 461 развивающихся куриных эмбрионов, 42 сеш-восыш суточных цыплят, 160 пробирок с культурами- клеток фибробластов куриных эмбрионов.

От больных, вынужденно убитых и павших животных выделено 112 итаммоз возбудителя актинобациллеза, изучены по классической методике их морфологические, кулътуральные, биохимические и патогенные свойства. Из них три штамма (95, 97, 5401) подвергнуты лиофилъной сушке, которыь после идентификации л 1981 году в лаборатории антибиотиков и микозов ВМЪВ ^заведующий лабораторией академик А.Х.Саркисов), депонированы во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГН1Ш).

Изготовлено и проанализировано 633 гистологических препарата из пораненных тканзй и органов животных, куриных эмбрионов и цыплят, 36 фотографий, полученных под световым, люминесцентным и электронным микроскопами.

В процессе изучения биологии возбудителя актинобациллеза проведено 230 исследований аминокислотного состава культуральной киддсс'х-и, гг.дролмзатов микробных клеток, сывороток и плазщ кро-

ви больных животных. Наличие аминокислот в указанных материалах определяли методом обменной хроматографии в аминоанализаторе К А-ЗВ японской фирмы "Хитачи".

При изучении иммунитета против этой болезни поставлено 431 различных реакции: опсонофагоцптарная, реакция агглютинации (РА), реакция непрямой гемагглэтинации (РИГА), реакция Чумбса. Приготовлены и испытаны четыре серии аллергенов на семи зксперимен -тально зараженных (три овцы и четыре крупного рогатогб скота) животных и 40 больных телок.

Для бактериологических исследований от больных животных брали в асептических условиях в стерильные пробирки гнойное содер -жимое гранулем пораненных лимфатических узлов и лимфатических сосудов , а при хирургических операциях зкстерпировенные абсцедиро-ванные гранулемы вместе с соединительнотканной капсулой. После гибели животных или вынужденного их убоя,кроме гранулем из пораженных лимфатических узлов и сосудов,использовали кусочки пораженных внутренних органов.

Морфологические свойства возбудителя актияобацйллзза изучали с применением светового, люминесцентного и электронного микроскопов.

Культуральные и биохимические свойства возбудителя изучали путем выращивания штампов А. ¡н^и'етГГ при 37°С в ыясопептон-ном бульоне (Ы1Б), иясопептонном агаре (ША), бульоне я агаре Хоттингера, агаре Сабуро, иясопептонном печеночном бульоне (ШПЕ), тиогликолевой среде, в МП.Б с добавлением лимфатической жидкости, в средах с углеводами с последующим определением ферментативных особенностзй викроба.

Кинетика роста и размножения возбудителя актинобациллеза изучалась в процессе его культивирования в гадких питательных срз- . дах и с применением методов нефелометрпческкх и лкшшесцентно микроскопических исследований. Для этих целей отбор проб растущих культур А.!.|'8И|'еге8н в первые сутки инкубации проводили через каждые два часа, затем через двое и шесть суток. Подсчет количества микробных клеток при люминесцентной микроскопии мазкоз, окрашенных акридиновым оранжевым, проводили по методу Брида,учитывая при этой количестве аивых и мертвых клеток.

Дифференциаций возбудителя актинобациллеза от патогенных ах-шномицетоз, внзнаеющкх сходные поражения у животных, проводили по морфологический, кулыуральным свойствам и особенностям аш-

нокислотногс обмена при выращивании в питательных средах.

Патогенные свойства возбудителя актинобациллеза испытывали комиссионно на белых мышах, морских свинках, кроликах,овцах,крупном рогатой скоте и неребятах при различных способах заражения. За животными проводили постоянное наблюдение, отмечая появление клинических признаков болезни к динамику ее развития.

Для изучения патогенных свойств возбудителя актинобадиллеза в качестве лабораторной модели использовалиЛ61 семи-деЕяти суточных развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ), на которых 339 заражали культурами возбудителя в хориоаллантоисную полость, а остальные 122 эмбриона были контрольными. Кроме того, для этих целей использовали 42 семи-восъми суточных цыпленка, которых заражали, интрапульмонально и.внутримышечно. От погибших эмбрионов и цыплят делали высевы в питательные среды с целью выделения рет-рокультур возбудителя болезни.

По общепринятым методикам определяли влияние на возбудителя актинобациллеза повышенных температур,.дззинфицирующих веществ и антибиотиков. Кроме того, определяли сохранение жизнеспособности А'в питательных средах без пересевов, в почве,воде, шерсти, сене, -в патологическом материале, в мясе и ыясных продуктах, а такие в лиофильно высушенном состоянии. Сублимационную сушку проводили в аппаратах И-И5 в течение 50 часов. Б качестве защитной среды использовали сахарозо-желатиновый раствор.

Для выявления токсических веществ возбудителя актинобациллеза V определения их роли в патогенезе заболевания испытывали лейкоциты крови животных, культуры клеток фибробластов куриных эмбрионов. Коэффициент лизиса лейкоцитов (КЛЛ), подвергнутых действию токсических веществ возбудителя актинобациллеза, определяли по формуле А.П.Карапата, (1970):

лейкомиы контроля - лейкоциты опыта

КЛЛ =-:--

лейкоциты контроля

Для удобства показатель лизиса лейкоцитов под действием токсических веществ возбудителя актинобациллеза мы выражали в процентах.

Кроме того, определяли дегенеративные изменения под действием продуктов метаболизма возбудителя актинобациллеза в культурах клеток и в гистосрсзах из внутренних органов павших после зара-

женин куриных эмбрионов и цыплят.

Материалом для патологсанатомическлх, гистологических исследований и изучения патогензза болезни служили органы и ткани от 19 павших и вынужденно убитых телок, ткани, взятые от 32 животных при хирургических операциях и от 8 больных овец, убитых в различные периоды развития болезни.

Для изучения паюлогогистологических изменений у крупного рогатого скота и овец исследовали ткани, прилегающие к-очагу воспаления и ткани, взятые в предполагаемых воротах инфекции, то есть слизистую оболочку ротовой полости, а также кусочки пораненной кожи по ходу лимфатических сосудов,кусочки из отечной ткани,язык, пораженные лимфатические узлы, участки легких, печени, почек, селезенки, головного и спинного мозга. Приготовлено и исследовано 447 гистологических препаратов.

При изучении вопросов патогенеза актинобациллеза, кроме того, определяли изменения аминокислотного состава сыворотки,плазмы,ги-дролигата плазмы крови и лейкограммы, как показателей, наиболее объективно отражавших функциональное состояние организма. Аминокислотный и морфологический состав крози изучали у 16 здоровых, 44 больных актинобеЦиллезом телок 13-16-месячного возраста и у трех экспериментально зараженных овец.

Вопросы диагностики актинобациллеза крупного рогатого скота и оьец изучали комплексно по общепринятым методам. При этом использовали методы клинико-эпизоотологических, бактериологических, серологических к аллергических исследований. Кроме того, разработана., методика дифференциальной диагностики актинобациллеза от ак-тиномикоза и других сходных с ним заболеваний.

Для систематизации покабателей распространения заболевания, степени поражения животных с учетом возраста, пола, вида, породности, интенсивности течения эпизоотического процесса использовали математические методы эпизоотологического анализа.

Бактериологическая диагностика, как основной мчтод, проводилась по разработанной нами методике. В последующем она была утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ Российской Федерации, (9 июня 1992 г.) под названием "Методические указания по лабораторной диагностике актинобациллеза (псевдоактиномикоза) крупного рогатого скота и овец".

Изучалась возможность использования в диагностике актинобациллеза животных некоторых серологических реакций (РА, РИГА, ре-

акция Кумбса). Определялись лизоцимная и комплементарная активность сыворотки крови больных и экспериментально зараженных животных, как показателей естественной резистентности организма. Все указанные реакции ставились по общепринятым методикам,однако специфические антигены готовили самостоятельно из наиболее изученных штаммов Ас-КкоЬаоШи и^мегеъИ.

Состояние сенсибилизации организма животных при данной заболевании определяли с помощью специально приготовленных наш аллергенов, которые были апробированы в экспериментальных и производственных условиях.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В соответствии с целью и задачами исследований ми изучали особенности биологии возбудителя актинобациллеза, генез и диагностику заболевания. Приводим основные результаты исследовании по указанным направлениям.

3.1. БИОЛОГИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ^ШШОБАЦОЛЕЗА .

При изучении особенностей биологии выделенных штаммов возбудителя актинобациллеза от больного крупного рогатого скота и овец е регионе Северного Кавказа, нами установлено, что пс своим основным свойствам они сходны с микроорганизмами семейства Ра £ -•ЦигеНасе^е. в морфологическом отношении выделенные микроорганизмы представляли собой полиморфную бактерию с закругленными концами, длиной до 3 гаш. Часто встречались и более мелкие, коккопо-добные формы величиной 0,3-0,5 икк. Микробы хорошо окрашиваются веет анилиновыми красителям!, грамотрицательные. При окраске препаратов по Рокановскому-Гимза просматривалась биполярность ¡микробных клеток. Испытано несколько лошшесцентных красителей »лучшим из них оказался акридиновый оранжевый. В мазках из молодых культур микроорганизмы окрашиваются этим красителем в ярко-оран-кевый цвет. Б препаратах их старых, длительно хранящихся культур возбудитель актинобациллеза окрашивается в зеленый цвет. Такая дифференциальная окраска позволяет легко подсчитать количество нивых и мертвых микробных клеток, что наш использовано при выявлении кинетики роста и размноиения возбудителя актинобациллеза.

Итаымы возбудителя актинобациллеза, выделенные от крупного рогатого скота, были неподвижными, а некоторые штаммы, выделен -ные от о^зц, сказались подвижными. При последующих пересевах на

питательные среды подвижность этих микробов теряется. Спорообразования у изучаемых штампов Л. И^егезп не установлено.

Злектронномикроскопическиз исследования позволили-установить, что возбудитель актинобациллеза образует капсулу. Клеточная оболочка этих микробов морщинистая, что способствует увеличение ее поверхности и более интенсивному обмену вецеств. Ьто подтверждается высокой интенсивность» потребления из питательных сред свободных аминокислот, особенно в первые часы культивирования микроба.

Установлено, что для выделенных нами штаммов Д. и§тег«$п оптимальной температурой роста является 37°С, минимальной +18°С и максимальной +42°С. Микробы хорошо растут на обычных питательных средах, но более интенсивный рост наблюдается в бульоне и на агаре Хоттингера, где содержится большее количество аминного азота и свободных аминокислот.

В первичных .высевах из патологического материала на плотных питательных средах возбудитель актинобациллеза образует матовые, вланные, полупрозрачные колонии 1-4 мм в диаметрё. Иногда отмечается феномен валообразованая. Часто ветеринарные врачи-бактериологи такие колонии принимают за рост случайных микробов и не придают им значения. При последующих пересевах микробов на плотные питательные среды на поверхности агара образуются типичные для А- идт'егеаи мелкие, прозрачные колонии с голубоватым оттенком диаметром 0,5-1 км. Колонии имеют ровные края (5 -форма), с трудом снимаются и смываются с поверхности агара.

В жидких питательных средах ввдашй рост микроба появляется через 4-6 часов культивирования и становится хорошо выраженным через сутки. Рост-возбудителя актинобациллеза характеризуется помутнением бульона и выпадением слизистого осадка. Иногда наблюдается поверхностный рост микроба в виде пристеночного кольца или нежной пленки. Последняя бывает хорошо выраженной при культивировании микроба в жидких питательных средах в больших емкостях,что связано с его аэрофильностьв.

Изучаемые штаммы возбудителя актинобациллеза слабо гидроли-зуют углеводы с образованием кислоты, без газа: глюкозу, сахарозу, маннит, иногда арабинозу, мальтозу, галактозу. Микроб ферментирует белки с образованием сероводорода.

Наш впервые изучены количественные и качественные закономерности роста и размножения возбудителя актинобациллеза при выращи-

вашш его в питательных средах. При этом выявлены следующие количественные -и качественные закономерности. Лаг-фаза составляет 2-4 часа, фаза ускоренного размножения - 4-6 часов, экспоненциальная фаза - 6-12 часов, фаза замедленного размножения - 12-14 часов, стационарная фаза - 14-20 часов и фаза гибели микробных' клеток, -продолжительность которой составляет 10-14 суток. В первые 3-4 часа инкубации накопление микробных клеток нзззачятель -кое. При люминесцентной микроскопии в мазках обнаруживали мивых и мертвых микробов, что указывает на гибель части микроорганизмов в адаптационную фазу. Затем-наблюдается интенсивное размножение микроорганизмов, количество мертвых микробных клеток было . такие незначительным. В промежутке от 6 до 14 часов культивирования .мертвых микробных клеток практически не выявляется. Только в 16-ти часовой культуре число мертвых клеток начинает заметно увеличиваться и к двум суткам их становится в 2,5-П раз больше, чем нпвых микробов. К этому времени резко уменьшается общее количество микробных клеток, что, очевидно, связано с их автолизом за счет собственных ферментог.Наибольшее накопление микробной массы наступает через 12-22 часа культивирования А.Ь'^Шек^»! ,что необходимо учитывать при работе с этими микроорганизмами.

Установлено, что возбудитель актинобациллеза при температуре +4, +6°С остается жизнеспособным в жидких питательных средах 2730 суток, на плотных до 23 суток.

Злектрснношкросколическиш исследованиями выявлено, что размножение возбудителя актинобациллеза осуществляется изоморфным, гетероморфным делением и почкованием.

Углубленным исследованием биологии возбудителя актинобацил-члеза животных на уровне аминокислотного обмена установлено, что по количественному содержания свободных аминокислот бульон Лот-ткнгера значительно богаче, чей ШБ-, поэтому в этой среде рост возбудителя актинобациллеза более интенсивный. Кроме того, наиболее заметные и закономерные изменения свободных аминокислот и их сумш обнарукены при выращивании микроба в бульоне 1оттингера.Из этой питательной среды возбудитель актинобациллеза наиболее интенсивно усваивал аспарагиновую кислоту и серии. При выращивании этих микробов в ШБ потребность в свободных аминокислотах, из-з; меньшего их суммарного количества в этой среде, значительно повышались и в обменные процессы наряду с аспарагиновой кислотой и сернном интенсивно вовлекались и другие аминокислоты.

Кроме мго, при выращивании возбудителя актинобациллеза в питательных средах наблюдали не только утилизацию, но' и синтез отдельных аминокислот, например, пролина, метионина, аргинина.

При изучении аминокислотного состава гидролизата микробных клеток обнаруживали те же 17 свободных аминокислот, что и в исходных питательных средах. Из них наибольшее количество (до 25$) приходится на долю моноаминодикарбоновых кислот (аспарагиновая и глю-тамиковая кислоты). Наши исследования подтверждают известное положение о том, что эти аминокислоты играют важную роль в азотистом обмене у многих микроорганизмов, в том числе и у возбудителя актинобациллеза. Они принимают участие в реакциях трансаминирова-ния, давая материал для образования новых аминокислот. Кроме того, они играют существенную роль в синтезе некоторых небелковых азотистых веществ, ферментов, фосфолипидов, а также в связывании и детсксикации продуктов метаболизма. Аспарагиновая и глютамино-вая кислоты служат также источником азота при биосинтезе пурино-вых и пиришдиновых оснований. Образуемые в процессе обмена щавелевая и фумаровая кислоты включаются в цикл трикарбоновых кислот и обеспечивают таким образом не только аминокислотный, но и энергетический обмен в клетках.

На долю моноаминокарбоновых аминокислот (аланин, глицин, лейцин и валин) в гидролизатах микробных клеток приходилось 32,7$,а на долю диаминомонокарбоновых аминокислот (лизин, аргинин).-13 Другие аминокислоты, хотя и выявлялись в небольших количествах, имеют немаловажное. значение в аминокислотном обмене возбудитечя актинобациллеза. Например, серин в гидролизатах микробных тел Д. LigHieresit составлял 3,3/», но он является важным промежуточным звеном во взаимопревращения^ цистина и метионина, а также в синтезе цистина и глицина. Показателем интенсивного обмена серина является .почти полное его исчезновение из питательных сред к б часам культивирования A. Lijm'eves/i в Ш1Б (до 90%) и к 10 часам культивирования в бульоне Хоттшгера (до 98/«).

При изучении патогенных-свойств выделенных штаммов A- bjufe^e-Sm' нами установлено, что заражение белых мышей, морских свинок, кроликов, как традиционных лабораторных моделей, не всегда дает положительные результаты. Только при введении больших доз возбудителя внутрибрюшинным способом иногда наступает гибель белых мышей.

У овец заболевание воспроизвели введением чистой культуры под

слизистую оболочку угла верхней губы, у крупного рогатого скота - при подкожном и накожном методах введения микроба в зоне расположения подчелюстных лимфатических узлов. При этом у животных через 4-7 суток на месте введения культуры микроба формировались характерные для актинобациллеза гранулемы, из которых при бактериологических исследованиях выделяли ретрокультуры возбудителя. Воспроизвести заболевание у жеребят не удалось. Это подтверждает мнение ряда исследователей о том, что возбудителем актинобациллеза лошадей является другой вид актинобацилл, а именно ЛсНиоЬасЛ -Lus Btyui ( HaupJ H., 1934; Bacer.r. R. , 1972 и другие).

Поскольку.биопроба на сельскохозяйственных животных при ак--тинобациллезе является весьма дорогостоящей и мало доступной для ветеринарных лабораторий, мы провели серию опытов в поисках более подходящей и дешевой лабораторной модели для определения патогенных свойств этого микроба. Такой моделью оказались 7-9-суточные куриные эмбрионы и 7-8-суточные цыплята. При заражении ШЪ в хориоаллангоисную полость чистыми культурами возбудителя актинобациллеза в дозах 0,4-0,5 млрд. микробных клеток, их гибель наступает через 1-2 суток. Из аллангоисной жидкости, содержимого желточного мешка," печени и'головного мозга погибших эмбрионов ыы всегда выделяли исходную культуру возбудителя.

При интрапулылональном и внутримышечном заражении 7-8-суточ-ных цыплят, через 1-2 суток после заражения у них наблюдали общее угнетение, отказ от корма, параличи конечностей и мышц шеи.

■В дальнейшем в течение пяти суток цыплята погибали. Из внутрен -них органов павших цыплят постоянно выделялись ретрокультуры возбудителя.

Результаты исследований позволяют рекомендовать специалистам ветеринарных лабораторий при диагностике актинобациллеза проводить биопробу на РК& или .7-8-суточных цыплятах.

При определении чувствительности возбудителя актинобациллеза к различным физическим, химическим и биологическим факторам уста новлено, что при температуре 60-70°С он погибает за 3-5 минут. Дезинфицирующие вещества - 2-3/з-ные растворы фенола, формалина, хлорной извести, едкого натрия, вызывают гибель этого микроба за 20-60 мин. A.LigHieresn проявил высокую чувствительность к ле-вомицетину, тетрациклину, гентамицину, стрептомицину, неошцину, эритромицину.

Кроме того, установлено, что в почве, воде, сене, зерне ,шер-

си возбудитель актинобациллеза сохраняется до 28 суток, в патологическом материале и мясе при +2, +б°С до 20 суток. Следова -тельно, трупы и туши вынужденно убитых жиеотных могут-быть вероятными источниками заражения людей актинобациллезом. После сублимационной сушки i LigHieresü сохраняет первоначальные свойства до пяти лет (срок наблюдения). Это является важным условием при производстве диагностических и профилактических препаратов, а также при хранении референтных штаммов в музеях научно-исследовательских и бактериологических лабораторий.

В связи с клиническим сходством актинобациллеза и актиноми-коза были прозедены исследования по дифференциации возбудителей этих заболеваний с учетом морфологических, культуральних свойств и аминокислотного обмена Ac-finobaciLLas Liguieresii , Ac-iiноту -ccs bovis (albus) и kci\H.oiw)czs ¡sraeü Таблица I). В морфологическом отношении возбудитель актинобациллеза представляет мелкие коккоподобные грамотрицательные бактерии, а возбудители ак-тиномикоза - длинные, часто полиморфные грамположительные нити. При выращивании в питательных средах возбудитель" актинобациллеза образует мелкие, гладкие, выпуклые, с ровными краями, прозрачные колонии, а возбудители актиномикоза образуют средние и крупные пушистые колонии за счет воздушного мицелия. Кроме того, A- is -»beli является строгим анаэрсбом и вырастить его в обычных питательных средах не удается. А. bovis (aLbus ) хотя и хорошо, растет в обычных питательных средах, но не вызывает помутнения бульона, а на агаровых средах образует белые пушистые колонии с хорошо выраженным воздушным мицелием. Сроки культивирования возбудителей актинобациллеза и актиномикоза разные. Если А- LigHieresü дает хорошо выраженный рост через сутки, то у Д. bovis и Д. ¡si'a.eLi сн появляется через 3-7 суток.

При-изучении аминокислотного обмена установлено, что A-Lignie-Vesü обладает способностью ь основном поглощать свободные аминокислоты, а А. bovis , наоборот, больше выделяет аминокислоты в питательную среду..Сумма аминокислот в питательных средах при выращивании А-bovis (albus) увеличивается на 43$. Кроме того, 4. LigHieresü утилизирует из 16 аминокислот бульона Хоттингера главным образом аспарагиновую кислоту и серин (до 96-98$), а ft. bovis (aLbus) интенсивно потребляет метионин и гастидии (до 85-86$).

Таким образом, по морфологическим, культуральным свойствам,

Таблица I

Дифференциация Ьозбудителей акгинобациллеза и актиномико'за

Признаки Форма клеток

Наличие мицелия

Окраска по Гра-му

Отношение к кислороду

Рост б еидких средах

Название возбудителя

А • Ийм'егевП : Л. ЬоуГв (а1Ьи5 ): А- (згаеН

Морфологические свойства Короткие кокко- Длинные нити • подобные бакте- ' рии

Отсутствует ..Имеется 1

Грамотрицатель- Граыположитель-ный ный

Культуральные свойства факультативный Строгий аэроб .анаэроб

Помутнение буль-Будьон прозрач-она, присгеноч- дый, в осадке ное кольцо,ели- пушистые колонии зистый осадок

Росе на плотных Мелкие колонии, Средней величины, средах края ровные, белые колонии

имей голубоватый опенок

Рост и полужид- Рост по уколу ком агаре под в виде мелких вазелиновым зернистых коло-ыаслоы ний

Длительность культивирования, в сутках

Потребление аминокислот

Рост отсутствует

Нити различной величины'

Имеется

Грамположи-тельный

Строгий.анаэроб

Рост отсутствует

Рост отсутствует

Рост по уколу в виде зернистых колоний

I 3-7 3-7

Особенности аминокислотного обмена Утилизирует сво-Интенсквно потре- Не изучались бодные ашнокис-бляет ыетионин и лоты, особенно гисгидин,выделя-аспарагиновую и ет отдельные аш-серин нокислоты

по аминокислотному обмену Д. Ligиiе.vesiимеет резкие отличия от возбудителей актиномикоза-Д. bovis (albus; ). и A'sraeii это дает основание отнести актияобациллез к самостоятельной болезни.

3.2. ПАТОГЕНЕЗ АКТИНОБАЦИЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ ■■■

Возбудитель актинобациллеза обладает слабой агрессивностью, так как патологический процесс протекает чаще всего локально.При этом наблюдаются грануломагозные поражения отдельных участков мягких тканей, лимфатических узлов и сосудов и, как правило, с одной стороны головы. Несколько реже процесс протекает диссеми-нированно, когда наблюдаются грануломатозные поражения мягких тканей, лимфатических узлов и сосудов с обеих сторон головы и шеи, а также в подчелюстном пространстве. Иногда актинобациллез может протекать генерализованно, когда возбудитель, преодолевая основные защитные барьеры организма, попадает в более глубокие ткани и паренхиматозные органы, локализуется в них и, размножаясь, вызывает определенные патологические изменения. В таких , случаях наблюдаются поражения глубоких заглоточных и средостен-ных лимфатических узлов, языка, печени, селезенки, почек,легких и даже головного и. спинного мозга.

Возбудитель актинобациллеза обладает выраженным тропизмом к лимфатической системе, то есть он является лимфотропным.микроорганизмом. Внедряясь через язеы слизистой оболочки ротозой полости и языка, возбудитель актинобациллеза легко попадает в лимфатические сосуды, адсорбируется и локализуется в их стенках,обра-' зуя единичные и множественные гранулемы по ходу этих сосудов. 'Здесь же образуются колонии микроорганизма. При их разрушении происходит метастаз возбудителя в регионарные лимфатические узлы, в которых развивается воспаление й формируйся гнойные гранулемы различной величины. При этом наиболее часто поражаются подчелюстные, латеральные заглоточные, реже околоушные медиальные заглоточные, а'также подъязычные лимфатические узлы. Преимущественное поражение подчелюстных и латеральных заглоточных лимфатических узлов мы объясняем тем, что они, как отмечает В.Л.Вэмм {1980), являются регионарными'образованиями для лимфы,оттекающей от-слизистых оболочек ротовой полости и языка. Поэтому проникновение в эти лимфоузлы возбудителя является наиболее вероятным.Поскольку в околоушные лимфатические узш впадает значительно меньше лимфатических сосудов от слизистой ротовой полости,а для язы-

ка они не являлся регионарными, то околоушные лимфатические узлы поракайтся-значительно реме, чей подчелюстные. Медиальные заглоточные и подъязычные лимфатические узлы выполняют второстепенную роль б лимфообращении слизистых оболочек ротовой полости и языка, поэтому они при актинобациллезе поранадтся крайне редко.

Ас-Кйо'Ьас!111.115 Ugи¡e.Y£¡>i^ , обладая лиыфотропностью, вызывает глубокие изменения в различных органах и тканях организма гш-вотных. Этому способствует снижение резистентности организма по различным причинам. Но главны;,! образок эти изменения связаны с действие!., микробных токсинов.

Исследованиями установлено, что токсины возбудителя актинобациллеза являются высокомолекулярный! белковыми соединениями, которые- не проходят через стерилизующие фильтровальные пластинки. Они выявлялись наш лишь в надосадочной ¡¡сидкости после центрифугирования бульонных культур. Результаты токсического действия продуктов метаболизма возбудителя актинобациллеза на различные лабораторные модели представлены б таблице 2.

Таблица 2

Токсическое действие возбудителя актинобациллеза на различные лабораторные модели

¡«1*: Название лабора-пп: торной модели

¿.аракте'р изменений

I. Культуры клеток фибробластов куриных эмбрионов

?.. Лейкоциты крови

аИВОТНЫХ

3. РК1 и 7-3-суточ-ные цыплята

Округление клеток, зернистость цитоплазмы, выпадение клеток из монослоя, образование симпластов

Лизис до 34%, в основном за счет моноцитов, сегменюядерных нейтрофилов, частично эозинофилов -

Гибель эмбрионов и цыплят через 1-2 суток после заражения. Дегенеративные изменения в печени, сердце, головном мозге по типу зернисто-шровой дистрофии, отеков, лизиса, некрозов клеток

Продукты метаболизма возбудителя актинобациллеза обладают цитотоксическим действием на культуры клеток фибробластов куриных эмбрионов. При этом наблюдается округление клеток, появление

в их цитоплазме дернистости, затек наступает гибель плеток п выпадение их из лонослоя. Реав набладается образование скгпластов с'зернистыми включениями. Кроне того, установлено лптическое действие токсинов Д.И8Ыети ка белые клетки кров:; кролк::ев, птиц, овец, крупного рогатого скота. При это!.-, достаточно полугора-двух часового контакта микробных токсинов с кровъо иконных, чтобы наступил лизис лейкоцитоз до Лвккорраики из проб крови, подвергнутой действию токсина возбудителя актииобацпллеза свидетельствуют, что лизис лейкоцитов происходит за счет моноцитов, сегментоядерных нейтрофклов и частично эпзикофилов.

При заражении КСЬ культурами возбудителя актинобациллеза в хориоаллантоисную полость наступает их гибель через однп-двое суток. При микроскопии гистологических срезов из внутренних органов павних эко'рионов обнаруживаются дегенеративные изменения в клетках иечони, сердца, головного мозга по типу зернисто-ашровой дистрофии, отеков, некрозов и лизиса клеток. До 20£ зараденша эмбрионов не погибали и .из них вылуплялись цыплята, которые в течение трех суток погибали с признаками нервных явлений (параличи конечностей, шшц шеи и спины). Такие же признаки наблюдались при заражении 7-3-суточных цыплят. Б гистопрепвратах из внутренних органов павших цыплят выявлялись аналогичные дегенеративные изменения в клетках, как и у погибших эмбрионов. Бти изменения являются результатом действия токсических веществ, выделяемых возбудителем актинобациллеза в процессе его развития.

В естественных условиях внедрение возбудителя актинобациллеза в организм животных сопровождается прежде всего воспалением кожи и подкожной клетчатки губ, щек. Под действием токсических веществ возбудителя актинобациллеза проницаемость клеточных структур стенок лимфатических сосудов и капилляров нарушается,вследствие чего развиваются отеки и другие изменения. При этом создаются хорошие условия для проникновения микроба в стенки лимфатических сосудов и в регионарные лимфатические узлы, где развиваются гранулемы. Центр гранулем состоит из гнойных фокусов. При микроскопии мазков, окрашенных по Романовскому-Гимза и по Граму, з содержимом гранулем обнаруживаются колонии А- в ви-

де красных коккобактерий, окруженных нейтрофильныш лейкоцитами в такрофагаыи. В них хорежо заметны фагоцитированные бактерии. Ьто свидетельствует о том, что для борьбы с микробами и их токсинами в организме животных активизируются защитно-компеноатор-

ные механизмы, и 2 первую очередь клетки ретикулогистиоцитарной системы, осуществляющие фагоцитоз возбудителя актинобациллеза. В зоне, окружающей грануляционную или фиброзную ткань, образуются обширные инфильтраты, содержащие лимфоциты и плазматические клетки. Часто воспалительные фокусы сливаются ъ плотные очаги.

Результаты исследований показывают, что А- Ь^Шеиев" при проникновении в организм вызывают прежде всего регионарный лимфаденит." Подчелюстные, околоушные, заглоточные лимфатические узлы создают довольно мощный защитный барьер и диссеминации возбудителя в более глубокие ткани, как правило, не бывает. Однако при снижении резистентности организма возбудитель прорывает эти барьеры и проникает в паренхиматознце органы (печень,легкие,селезенку, язык), в головной и спинной мозг, что подтверждено нами выделением культур возбудителя актинобациллеза из этих органов. При микроскопии гистологических препаратов в указанных органах установлены дегенеративные изменения в виде зернисто-жиро-вой дистрофии, отеков и некрозов клеток.

• Кроме того, при актинобациллезе у животных обнаруживали глубокие изменения некоторых биохимических и гематологических показателей. В частности, обнаружены изменения аминокислотного состава сыворотки и плазмы крови, лейкограммы,. как показателей наи-.более объективно отражающих функциональное состояние организма животных. При этом установлено, что у больных актинобациллезом животных сумма свободных аминокислот в сыворотке, плазме, гидро-лизате плазмы крови была значительно ниже, чем у здоровых (соответственно на 21, 34, 14%). Однако по отдельным аминокислотам отмечали п вышение их содержания (аспарагиновой кислоты и проли-на - в сыворотке крови, глютаминовой кислоты, лизина, аланина -в плазме крови)-..

При изучении некоторых гематологических показателей у экспериментально зараженных и больных актинобациллезом животных установлен достоверно выраженный лейкоцитоз. У многих больных животных отмечали увеличение числа лейкоцитов на 60-66$ по сравнению с нормой. В лейкограмме у этих животных основные изменения касались нейгрофилов. Наряду с общим увеличением числа нейтрофилов у животных наблюдалось увеличение в два раза палочкоядерных нейтро-филов. Одновременно в крови появлялись незрелые формы .."¿йтрофи-лов, как юные и миелоциты, то есть происходил явный сдвиг ядра влево, что свидетельствует о тяжело протекающем инфекционном про-

цессе при данном заболевании.

В ю же время у животных выявлено достоверное увеличение абсолютного числа зрелых, сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов, которые, как известно, принимают участие в формировании иммунного ответа организма на действие возбудителя заболевания.

Следовательно, в организме больных актинобациллезом животных происходят с одной стороны глубокие нарушения обменных процессов, о чем свидетельствует уменьшение суммы свободных аминокислот в сыворотке и плазме крови, выброс в кровяное русло незрелых форм нейтрофилов. С другой стороны наблюдается увеличение абсолютного числа зрелых, сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, эозинофи-лов.

3.3. ДИАГНОСТИКА АКТИНОБАЦИЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ

Диагностику актинобациллеза крупного рогатого скота и овец проводили комплексно, с учетом клинико-эпизоотологических особенностей, бактериологических исследований, использования серологических и аллергических реакций. Кроме того, были разработаны и использованы методы дифференциальной диагностики актинобациллеза и сходных с ним заболеваний.

При изучении вопросов эпизоотологии установлено, что в зоне Северного Кавказа актинобациллез крупного рогатого скота и овец имеет широкое распространение. В Ставропольском крае актинобацил-лез крупного рогатого скота регистрируется в зонах с достаточно высокими атмосферными осадками и умеренно высокой температурой. В таких благоприятных условиях.жизнеспособность возбудителя актинобациллеза во внешней среде, очевидно, бывает более длительной. В зонах с небольшим количеством осадков и довольно высокой температурой заболеваемость крупного рогатого скота актинобациллезом встречается в 2-2,5 раза реже. По нашему мнению, такие условия снижают сохраняемость возбудителя этой болезни во внешней среде.

Актинобациллез овец встречается значительно реже, чем у крупного рогатого, скота и, как правило, спорадическихотя имели место и энзоотические вспышки. Примером является опхоз "Темнолес-ский" Шпаковского района, который является стационарно неблагополучный по актинобациллезу овец в течение 20. лет. В засушливые годы,когда на пастбищах было много сухих стеблей трав, здесь в отдельных отарах выявлялось до 15% больных овец. В годы с хорошим травостоем, когда травмирование слизистых оболочек было не-

значительным, заболеваемость у овец регистрировалась в единичных случаях.

На примере крупного рогатого скота нам удалось наиболее полно установить возрастную чувствительность животных к акташобацал-лезу. Так, в хозяйствах, неблагополучных по актинобациллезу крупного рогатого скота, диспансерному обследованию подвергнуто 7734 животных, выявлено 641 больных, что составило 8,3%. Заболевае -мость животных актинобациллезом в некоторых хозяйствах выглядела следующим образом (табл.3).

Таблица 3

Чувствительность крупного рогатого скота к актинобациллезу в зависимости от, пола..и возраста

Группа животных

Число обследованных

Выявлено: Заболеваемость, % больных

:0т общего чи-:0т числа за-:сла животных :болевшх

II6I

624

Коровы

Нетели (I5.-I8 мес.)

Бычки на откорме (14-16 мес.) 1374

Телята (6-9 ыес.) 468

86

56

131 21

7,5

8,9

9,5 4,5

29 19

44,8 7,2

Всего 3149 294 9,3 100

Наиболее подверженными заболеванию актаиобациллезом оказа -лиоь животные в возрасте 14-18 месяцев. В этой возрастной группе з'.оолев-аеыость составила 64$. Пр'ичем наиболее чувствительными были бычки на откорме, у которых заболеваемость составила 45$ от числа заболевших, затем следуют нетели, процент заболеваемости у которых доходил до 19. Взрослые коровы заболевали реке,чем животные в возрасте 14-13 меряцев. Заболеваемость у них составляла 29$. Еще реке заболевание регистрировалось у телят 6-9-месячного возраста (7$).

3 некоторых хозяйствах наблюдали высокую заболеваемость ак-тинобацкллезоы племенных быков.-Так, в 1973 году в мясосовхозе "Закубанокий" Кочубеевского района из 25 племенных,быков породы абердин-ангус и шароле заболевание выявлено у 13 аиьотных (52$).

Породность животных при заболевании актинобациллезом не имеет существенного значения. Завезенные животные из благополучных хозяйств в очаге поражения заболевали актинобациллезоы чаще,чем местный скот.

Источником возбудителя актин обацилле за являются больные животные и животные-бактерионосители. При этом особую опасность представляют больные животные со вскрывшимися абсцедированными гранулемами. Возбудитель, попадая во внешнюю среду с вытекающим гнойным содержимым, инфицирует корма, подстилку, пастбища, предметы ухода, которые становятся важными факторами передачи возбудителя болезни.

Для выявления антинобациллоносигельства и с учетом вероятных ворот инфекции были проведены бактериологические исследования проб слизи, собранной с десен и корня языка здоровых животных.Из многообразия микроорганизмов ротовой полости нами выделены бактерии, сходные с Д.Ь^и/егегм . При тщательном изучении их морфологических, культуральных и биохимических свойств установлено, что выделенные микроорганизмы оказались идентичными возбудителю актинобациллеза. Следовательно, при носительстве здоровыми животными актинобацилл Линьера они через поврежденные слизистые оболочки ротовой полости могут внедряться в лимфатические сосуды и лимфой транспортироваться в лимфатические узлы, ткани и органы животного организма.

Факторами, способствующими проникновению возбудителя актинобациллеза в лимфатические сосуда и лимфатические узлы, были не только травмы слизистой оболочки роговой полости и языка, но и заболевания у животных зубов и десен. Немаловажное значение имели скученное содержание животных, низкое качество кормов, однообразное и неполноценное кормление и другие факторы.

В опытах по экспериментальному заражению животных нами установлено, что инкубационный период при актинобациллезе составляет 3-7 суток. В естественных условиях этот период может продолжаться до двух недель и более.

Актннобациллез не всегда проявляется типичными признаками. Заболевание может ограничиваться только проявлением общих признаков болезни. Так, при экспериментальном заражении крупного рогатого скота культурами А- Ь^Ме^м в корень языка воспроизвести типичные признаки заболевания не удалось. У животных отмечались лихорадка, угнетение, серозное истечение из глаз, слюно-

течение. Но эти признаки были непродолжительный! и затухали через трое-четверо суток. Очевидно, это имеет место и в естественных условиях.

Типичное течение акишобациллеза у животных сопровождалось лимфаденитами и лимфангоитами преимущественно в области головы и шеи. Как и другие исследователи, при этом заболевании мы наблюдали преимущественное поражение подкожных лимфатических сосудов, подчелюстных, реже околоушных, заглоточных и предлолаточных .лимфатических узлов и языка. Патологический процесс проявляется образованием единичных или множественных гранулем в лимфатических узлах, по ходу лимфатических сосудов, в подчелюстном пространстве. Сформировавшиеся гранулемы постепенно в течение нескольких недель' увеличивались в размерах. Величина гранулем у крупного рогатого скота колебалась от одного до 10 и более сантиметров ь диаметре. Ьногда они достигали величины кулака взрослого человека. У овец размеры гранулем были от одного до пяти сантиметров в диаметре. При генерализованной форме заболевания насчитывали от 50 до 100 мелких гнойных очагов по ходу лимфатических сосудов. При актинобациллезе, особенно при диссеминированной и генерализованной формах болезни происходит обезображивание морды.

У овец из-за плотной и длинной шерсти при локализованной и диссеминированной формах актинобациллеза клинические признаки зачастую не выявляется. Но при генерализованной форме.когда наблюдается значительнее увеличение губ, отвисание нижней губы, теряется их подвижность, отмечается уродливость морды, клинический дпгноз на актинобациллез поставить нетрудно.

1<ри локализованной и диссеминированной формах актинобациллеза как у крупного рогатого скота, так и у овец температура тела остается в. пределах физиологическом нормы. У животных сохраняется аппетит, дыхание не нарушается. Но при поражении медиальных-заглоточных лимфатических узлов дыхание учащается в 2-3 раза,наблюдается сильное истощение и животных выбраковывают и убивают.

В последующем с развитием патологического процесса при акти-нобациллезе гранулемы самопроизвольно вскрываются и через образовавшиеся свиида из них.выделяется беловато-серая, без запаха, гнойная масса. Если наступает самовыздоровление и;.ч" яивотных под-вергаот оперативному лечению, то на месте гранулемы образовываются плотные рубцы.

Актинобациллез крупного рогатого скота и овец, как правило,

протекает в виде моноинфекции..Однако нам приходилось наблюдать и случаи смешанного заболевания животных актинобациллезом и ак-гиномикозом, актянобациллезоы и пиогенниш инфекциям. В этих случаях заболевание протекало тяжело, животных выбраковывали и - убивали в некондиционной массе.

Перечисленные клинико-эпизоотологические особенности актино-бациллеза являются важными критериями при постановке диагноза на данное заболевание. Однако основным методом диагностики этой болезни является бактериологический. Он предусматривает обнаружение возбудителя в мазках, выделение из патологического материала чистой культуры микроба, изучение их морфологических, кулъ-туральных, биохимических и патогенных свойств.

Материал для бактериологических исследований необходимо брать от каждого животного отдельно. Обычно это гнойное содержимое ин-тактных. абсцедированных гранулем из пораженных лимфатических узлов и сосудов, а также других мягких кканей головы. Его получают с помощью стерильных толстых инъекционных игл и шприца с соблюдением правил асептики или при хирургических операциях,когда берут гранулему вместо с соединительнотканной капсулой.

При посевах за питательные среды материал необходимо брать стерильной пастеровской пипеткой с внутренней стороны прикапсуль-кой зоны. В таком случае выделение культуры возбудителя актино-бациллеза наиболее вероятно, так как в центре гранулемы обычно не бывает живых микробов вследствие их активного фагоцитоза ней-трофильными лейкоцитами. При посевах из вскрывшихся абсцедиро -ванных гранулем обычно вырастает не только культура возбудителя актинооациллеза, но и другая посторонняя микрофлора, что затрудняет постановку диагноза. При гибели и вынужденном убое животных для бактериологических исследований берут не только содержимое гранулем лимфатических узлоз и сосудов, но и кусочки пораженных участков легких, печени, селезенки, почек, иногда мозга.

При отборе патологического материала необходимо иметь в виду, что выделить возбудителя актянобациллеза из гнойного содержимого с- примесью крови из-за наличия в ней бактерицидных веществ не всегда удается.

Бактериологическая диагностика актинсбациллеза проводится по классической триаде Генле-Коха - микроскопия мазков из патологического материала, выделение чистой культуры возбудителя болезни и постановка биопробы.

иазиси из абсцедированных гранулем лимфатических узлов и сосудов делают с внутренней стороны прикапсульной зоны. Из паренхиматозных органов готовят мазки-отпечатки и после их фиксации окрашивают по Граиу и Романовскому-Гимза. При микроскопии в препаратах обнаруживают мелкие, грамотрицательные, биполярные бактерии а виде мелких скоплений. По периферии этих скоплений встречаются одиночные, парные или расположенные кучкаш коккобактерии, часть из которых фагоцитируется нейтрофильными лейкоцитами.

Посевы из патологического материала делают стерильными пипетками на свежие питательные среды (Щ1Б, 1.1ПА, бульон и агар Хоттингера). Инкубацию высевов проводят в термостате при 37°С в течение суток. Первичные посевы, из патологического материала рекомендуем делать на плотные питательные среда в чашках Петри. В положительном случае на поверхности агара обнаруживают матовые пли полупрозрачные, с голубоватым оттенком колонии до двух-четы-рех миллиметров в диаметре. Из таких колоний необходимо сделать пересев в пробирки с Ш1Б, ША или в бульон и агар Хоттингера.Через сутки в пробирках с агаровой средой обнаруживают прозрачные с голубоватым оттенком колонии до одного-дв^х миллиметров в диаметре, с ровными краями. В ходких питательных средах возбудитель актинобациллеза образует помутнение среды, слизистый осадок иногда пристеночное кольцо и нежную пленку.

Из колоний на плотных питательных средах и из гадкой бульон- ■ ной культуры делают мазки, окрашивают их по Граму и ыикроскопи-руют. При этом обнаруживают полиморфную грамотрицательную бактерию до 2-3 мкм в длину, имеющую чаще всего коккоподобную форму размерами 0,3-0,5 мкм. По Романовскому-Гимза микроб окрашивается биполярно, неподвижен, спор и видимых капсул не образует.

Тля окончательной дифференциации культуру выделенного микроба проводят через среды с углеводами, имея в виду, что возбудитель актинобациллеза обладает слабой биохимической активностью и расщепляет с образованием кислоты без газа глюкозу, сахарозу,ман-нкт, иногда арабинозу, мальтозу и галактозу. Кроме-того, он гид-ролизует белки с образованием сероводорода.

Биопробу на белых мышах, морских свинках и кроликах прово -дать нецелесообразно, так как они малочувствительны к данному возбудителю. Удобной лабораторной моделью для этих целей являются раззиьающиеся куриные эмбрионы и 7-8-суточные' цып^шта. После выделения из внутренних органов павших змбрионов „ли цыплят ис-

ходпой культуры Ц.1',отеге$ц' считается, что диагноз на актьно-бациллез поставлен окончательно. При необходимости биопробу можно проводить на овцах или телятах.

Применение для диагностики реакций иммунитета весьма ограничено, так как иммунитет при актинобациллозе имеет свои особенности. Б иммунном ответе организма на действие возбудителя актино-бациллеза принимают участие прежде всего клеточные факторы. Так, при этом заболевании оригинальной формой защиты является образование вокруг очага воспаления гранулем с мощной соединительнотканной капсулой. Вокруг гранулемы накапливаются невтрофильные и эозшюфильные лейкоциты, фагоцитирующие возбудителя и его элементы. ;

В экспериментах на кромках, овцах и крупном рогато!;; скоте нами доказано, что у иммунизированных, заракенных и больных животных закономерно повышается фагоцитарная активность лейкоцитов. Подтверждением этого слугхат изменения гематологических показателей у экспериментально зараженных и больных актинобацилле-зом животных. При общем увеличении числа лейкоцитов в 1,6 раза повышается количество зрелых, сегиентоядерных нейтроуилов и лимфоцитов, которые выполняют фагоцитарную функцию.

Гуморальные факторы иммунитета при акгинобациллезе имеют меньшее значение. В ответ на внедрение возбудителя заболевания организм животного реагирует продукцией полных и неполных агглютининов, которые паи удалось выявить у экспериментально заракен-ных и больных ниботных в сравнительно невысоких тиграх (1:1001:200) с помощью РА, РИГА, реакции Кумбса. Подтверждением синтеза антител являются исследования по определению белкового спектра сывороток крови иммунизированных кроликов и экспериментально зараженных телок. У них наблюдалось достоверное повышение гакма-гзюбу'линов, являющихся носителями антител.

Неспецифическими факторами гуморального иммунитета являются лизоции и комплемент.У экспериментально зараженных возбудителем акгинобациллеза телок 13-16-месячного возраста в течение трех недель наблюдалось закономерное повышение лизоцишой активности сыворотки крови.К концу третьей недоли ее лкзоцимаая активность была на 34,5 выше,чем у животных до заражения.Однако комплементарная активность сыворотки крови,наоборот,понижается.!.;ойно предположить, что угнетение литической способности комплементсвязывающи:: антител обусловлено изменением под действием токсических веществ

возбудителя актинобациллезэ синтеза из аминокислот ферментов,cbj занных с деятельностью комплемента. Этим^ можно объяснить невоз -мощность применения РСК для диагностики актйнобациллеза.

Одной из форм иммунного ответа ор.-панизЙа против возбудителя болезни при хронических заболеваниях является повышенная чувствительность замедленного типа. Нааи впервые выявлено, что ока имеет место и при актинобациллезз. Аллергическое состояние у экспериментально зараженных овец и больного крупного рогатого скота выявлено с помощью специально приготовленных для этих .целей аллергенов. Как показали результаты исследований, аллергическое состояние у животных формируется через 10-14 суток после заражения и монет сохраняться не мен^е трех месяцев (срок наблюдения). С помощью приготовленных аллергенов установили, что состояние аллергии при актинобациллезе можно выявить через 6-8 часов после введения аллергена. Но лучше всего учет реакции проводить через сутки.

При дифференциальной диагностике актинобациллез прежде всего необходимо отличать от антиномии о за.. При актиношкозе поражаются главным образок твердые, реже мягкие ткани. Гной в эктино-микозных гранулемах имеет желто-зеленый цвет, неприятного запаха, содержит зернистость из-за наличия друз гриба. При актинобациллезе поражаются главным образом лимфатические сосуды, лимфатические узлы, другие мягкие ткани. Гнойная масса актинобацил •■ лезных гранулем белого цвета, без запаха, нз содержит, друзы.

Существенные отличия наблюдаются в биологии возбудителей. Глаг ши отличием является то, что возбудитель актинобациллеза - ьто мелкая, коккоподобная, грамотрицательная бактерия, относящаяся к семейству Pa.S-leure|iaceae. порядка Eubac.+erC&Lcs г.Лаоса Schizow^celes. Микроб является'факультативным анаэробом.Хорошо растет на простых питательных средах. Продолжительность выращивания однй сутки. Возбудитель актиномикоза - нитчатые формы микроорганизмов, относятся к порядку AciiyiüwyeeJaLes класса SakiTomyceles . Пс Граму красится положительно. Существуют аэробные и анаэробные виды возбудителей актиношкоза - Д.,bovis (klbus ) и Ä.israe.li' . Первый хорошо растет на обычных питательных средах, образуя белые пушистые колонии на полных и жидких питательных средах. Помутнения жидких питательных сред не вызывает. Д-israeLi , являясь строгим анаэробом, растет в полужид -кои агаре с добавлением 1% глокозы под вазелиновым маслом,обра-

зует колонии по ходу укола. Продолжительность культивирования возбудителей актиномикоза составляет 3-7 суток.

■Актинобациллез в ряде случаев следует дифференцировать от туберкулеза, некоторых гнойных и опухолеродных заболеваний. Следует иметь в виду, что при туберкулезе выделить возбудителя снень трудно. Для этого требуются специальные питательные среды и длительное культивирование, иногда до трех месяцев. Микобактерии относятся к кислотоустойчивым микробам и красятся до Циль-Нильсе-ну. При дифференциации этих заболеваний существенную роль играет аллергическая диагностика.

При поражении лимфатических узлов ииогенныыи микроорганизмами, как правило, не образуется грануляционной ткани. При бактериологическом исследовании выдь.:яется преимущественно кокковая микрофлора, главным образом стафилококки и стрептококки.

Увеличение лимфатических узлов в области голсвы и шеи может быть при новообразованиях. Однако они стерильны, не содержат гноя. Чаще всего диагностируют новообразования гистологическим методом.

В Ы В О Д Ы

1. Актинобациллез сельскохозяйственных животных является самостоятельной нозологической единицей, имеот широкое распространение и проявляется лимфаденитами и лимфангитами.

2. Выделенные в зоне Северного Кавказа от больных животных штаммы возбудителя актинобациллеза отнесены к Ас4|'и£>ЬэеЦ1.«5 ил'еигзи из рода /к-Ь'иоЬаа'Нив семейства&^е"«Шсеае.Представляют мелкие палочки величиной 1,5-3 мкм или коккоподобные 0,30,5 мкм в диаметре, неподвижные,-грамотрлцательные бактерии, не образующие спср й видимых капсул. По.Романовскому-Гимза окрашиваются биполярно. Хорошо растут в обычных питательных средах.Нэ плотных питательных средах образуют мелкие, прозрачные с голубоватым оттенком и ровными краями колонии (£ -форма). В жидких питательных средах дают умеренное помутнение и слизистый осадок, на поверхности бульона иногда формируются пристеночное кольцо и нежная пленка. Микроб гидролизует глюкозу, сахарозу, маннит,реже арабинозу, .мальтозу, галактозу до кислоты, без образования газа. Методом электронной микроскопии выявлено, что у возбудителя актинобациллеза клеточная стенка имеет морщинистую поверхность.Это увеличивает ее площадь и обеспечивает более интенсивный обмен веществ.

3. Возбудитель актинобацкллеза размножается изоморфным, ге-тероморфным делением и почкованием. В первые 2-4 часа инкубаци накопление микробных клеток незначительное. Затем наблюдается интенсивное размножение микроорганизмов и в промежутке от б д 14 часов культивирования мертвых микробных клеток практически I выявляется. Только через 16 часов число мертвых, клеток начикае заметно увеличиваться и к двум суткам их становится в 2,5-11 р< больше, чей живых. Наибольшее накопление микробной массы насту пает к 12-22 часам.

4. При изучении аминокислотного обмена 4. Ь'^иктп уст новлено, что возбудитель актинобациллеза относится к аминогете ротрофньш микроорганизмам, способным использовать аминокислоты непосредственно из питательных сред. Наиболее заметные и закон мерные изменения свободных аминокислот обнаружены при выращива нии микроба в бульоне Юттингера, как более богатой среде по и количественному содержанию, Из питательных сред возбудитель аи тинобациллеза наиболее интенсивно усваивает аспарагиновую ни с л ту и серин. В гидролизате микробных клеток на долю моноашноди карбоновых кислот (аспарагиновая и глютаминовая) из общей сум» аминокислот приходится 25$, что. указывает на их важную роль азотистом обмене возбудителя. На долю моноаыинокарбонозых кис; (глицин, аланин, лейцин, валин) приходится около 33%, а на до^ диаминокарбоновых аминокислот (лизин, аргинин) - 13,4$.

5. Ванное значение в аминокислотном обмене возбудителя аки нооацкллеза имеет серин. Хотя его содержание в гидролизатах мг робных клеток невысокое (3,3$), он является важным промежуточь звггом во взаимоотношениях цистеица и метионина, а также в сш зс цистина и гистидина. Показателе^ интенсивного обмена серш является почти полное его исчезновение из питательных сред к часам культивирования микроба в ьШБ (до 90$) и к 10 часам'в б? оне Хоттингера (до 98$).

6. При дифференциации возбудителя актинобацкллеза от возб] телей актиномикоза следует учитывать, что последние относятся лучистым грибам у представляют длинные, полиморфные, грамполо;. тельные нити. В питательных средах они дают хороши'! рост чере 3-7 суток. При изучении аминокислотного обмена выявлено,что В1 будитель актинобациллеза в основном потребляет. '-зоОсдные амш кислоты па питательных сред, а возбудители актиномикоза, наоб( рот .выделяют их в питательную среду.

7. Для изучения патогенных свойств возбудителя акт.чйоба:;. яева удобными лабораторными моделями яеляются 7-9-суточнио обвивающиеся куриные эмбрионы и б-8-суточные цыплята, догпбодде 1ерез одни-двое суток после заражения, Искусственно воспроизвели заболевание у крупного рогатого скота и овец возможно ведением возбудителя актинобациллеза под слизистую оболочку губ, цесен, а также при подкожном и накожном заражении в зоне расположения подчелюстных лимфатических узлов.

8. Возбудитель актикобациллеза весьма чувствителен к ьлоо -шм температурам, химическим веществам и некоторый антибиотика.:. ]ри температуре 60-7С°С он погибает за 2-5 минут, дезинфициру.о-цие вещества - 2-5^-ные растворы фенола, формалина, хлорной пз-зести, едкого натрия вызывают гибель микроба за 20-60 минут.Си зказался чувствительным к левомицетину, тетрациклину, неошщг.ьу, ^ентамицину, стрептомицину, эритромицину. Причем у различных наймов чувствительность к антибиотикам неодинаковая.

9. Д.Ь'^т'егеб!! является микроорганизмом лимфотропноп пр;<-)оды. Сн попадает в организм через раны слизистой оболочки де-;ен, неба, языка и вызывает воспаление коки, педкожкий клетчатки губ и щек. Затем в патологический процесс вовлекаются трагические сосуды, подчелюстные, околоушные, заглоточные лимфатк-¡еские узлы, в которых формируются гранулемы. Яри микроскопии мазков, окрашенных по Романовскому-Гиыза и по Грану, в содер<а.-«ом гранулем обнаруживаются скопления возбудителя акгинобацил -1еза, окруженные нейтрофильными лейкоцитами и макрофагами, со-(ержащими фагоцитированных бактерий. В зоне, окружающей гранулимонную или фиброзную ткань, образуются обширные инфильтраты,содержащие лимфоциты и плазматические клетки.

10. При генерализованной форме актинобациллезного процесса фоисходит поражение всех органов и тканей организм. Ра&;.;но..-.а-юь в них, возбудитель актинобациллеза накапливает токсически ¡ещества, которые вызывают дегенеративные изменения, харчктьрп-пующиеся дистрофией, отеками, лизисом и некрозами вначале на :леточнок, а затем тканевом и органном уровнях.

11. У экспериментально зараженных и больных акгинобащьги,- ог :ивотных установлен выраженный лейкоцитоз. Увеличение лейкозе» [роисходит на 60-65/5. В лейкограыме основные изменения ксс;^ ейтрофилов. Наряду с общим повышением числа нейтрофилса у ътга-ых наблюдалось увеличение в два раза палочкоядерных веш-ри..,;, то,

а также в крови появлялись незрелые, юные формы нейтрофилов и i елоциты, чю свидетельствует об интоксикации организма. Впервые установлено, что при актинобацидлезе животных сумма свободных а нокислот в сыворотке, плазме и гидролизате плазмы крови значи тельно ниже, чем у здоровых.

12. Диагностика актинобациллеза осуществляется комплексно, учетом клинико-эпизоотологических, бактериологических, патолоп анатомических, патологогистологических,серологических.и аллери ческих методов исследований. Ведущая роль принадлежит бактерио. гической диагностике. Актинобациллез животных необходимо диффе ренцировать'от актиномикоза, туберкулеза, некоторых гнойных ш фекцпй и новообразований, при которых поражаются лимфатические узлы и сосуды головы и шеи.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. "Методические указания ло лабораторной диагностике акти. бациллеза (псевдоактиномикоза) крупного рогатого скота и овец" Утверждены Главным управлением ветеринарии ¡¡¡ОХ РФ 9.06.92.

2. "Рекомендации по клинической и лабораторной диагност™ актинобациллеза (псевдоактиномикоза) х;рупного рогатого скота i овец". Утверждены ветеринарным отделом управления сельского х зяйства Ставропольского крайисполкома 20.05.81.

3. "Лабораторная диагностика актинобациллеза жвачных живо ныхм. Утверждена НТС АПК Ставропольского края на секции животн водства, ветеринарии и переработки мясомолочной продукции 25.12.

4. Поскольку у возбудителя актинобациллеза отсутствует спо образование и он по морфологическим и другим свойствам существ но отличается от актиномицетов, предлагаем заболевание отнести истинным бактериозай и именовать его лигниереллезом, а возбуди теля болезни - be^triu-w Ligviiere.sü.

Список научных трудов, ьпубликованных по теме диссертации

1.'Тутов И.К., Калик O.J. Сохраняемость возбудителя псевдо актиномикоза (froaciinowyees Ligniev-esn .) в некоторых объекте внешней среды // Диагностика, лечение, профилактика заболевани сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /Ставроп. СХИ. -Ставрополь, 1971. - 3ып.34. - Т.- С.151-153.

2. Тутов Н.К., Свистухина В.К. Изучение некоторых свойс-л возбудителя псевдоактинодгикоза овец (РгоасНпожуве.$ UgwieKesi») // Диагностика, лечение .профилактика заболеваний ^лъскохозяйс венних животных: Сб. науч. тр. /Ставроп.СХИ. - Ставрополь, 19'/

Вып.34. - Т.4. - 0.154-158. .

3. Мануйлов В.М., Тутов И.К. Электронно- и люкинесцентно-ш-¡о'скопические исследования возбудителя псевдоактиномикоза (Риз -itiviow^cci. Lignievesii ) // Диагностика, лечение, профилактика ¡болеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр,/Ставроп. Ш. - Ставрополь, 1971. - Вып.34. - Г.4. - С.159-162.

4. Тутов И.К. Получение и испытание 'в эксперименте аллергена яя диагностики псевдоактиномикоза (актинобациллеза) // Диагнос-яка, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных плотных: Сб. науч. тр. /Ставроп. ОН. - Ставрополь, 1972. - Вып. 5. - Т.5. - С.201-204.

5. Тутов И.К., Говорухина З.И., Малик СЫ. Условия культиви-озашш возбудителя псевдоактиномикоза на искусственных питате.'Д:-ых средах и РКЭ // Диагностика, лечение, профилактика заболева-ий сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /Ставроп. СХИ. -таврогюль, 1972. - Вып.35. - Т.5. - С.205-203.

6. Вылегжаник А.Ф., Тутов И.К. Устойчивость возбудителя псев-.оактинсшкоза в мясе и мясных продуктах // Профилактика и ликви-;ация болезней домашних животных и птиц: Краткие•тезисы докл. на-'чно-технической конференции /НоЕочеркасский СХИ. - ст.Персианоь-:а, 1973. - С.98-100.

7. Тутов U.K., Лихачев Н.И., Свистухина В.К., Денисенко А.Г., Залботкин В.Б. Определение токсичности возбудителя псевдоактино-.жкоза в опытах in vi)re> на клетках крови овец и культурах ткани 13 фибробласгов куриных эмбрионов // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч. тр. /■Ставроп. СХй. - Ставрополь, 1973. - Вып.36. - Т.5. - С.227-230.

8. Тутов И.К., Пасько С.Г. К вопросу культивирования возбудителя псевдоактиномикоза (актинобациллеза) в организме развиваю -¡дихся куриных эмбрионов // Диагностика, лечение, профилактика заболевании сельскохозяйственных аизотных: Неуч. тр. /Сгаврсл.СХП. -Ставрополь, 1973. - Выл.36. - Т.5. - C.94-S6.

9. Тутов И.К. Материалы по изучению свойств возбудителя псев-доактиномикоза // Диагностика, лечение, профилактика заболевании сельскохозяйственных животных: Науч. тр. /Ставроп. ОИ. - Ставрополь, 1374. - Вып.37. - Т.5. - С.94-96.

10. Ту509 Й.Х., Лихачев U.E. Некоторые кшунобиологипрокле показатели при псездоактиномлкозе (ектн.чсбсцнллезе) cBv-ц // Диагноста* лечение, профилактика заболезанкй сельсиохсзяЗогввншх

д-йюгчьгх: Науч. тр. /Ставроп. СМ. - Ставрополь, 1974. - Выи.37

- 1.5. - С.96-98.

11. Пасько С.Г., Роми В.Л., Тутов И.К. Клиниконорфологичес-jiwi и бактериологическая диагностика актинобациллеза крупного р гаюго скота jj Диагностика, лечение, профилактика заболеваний осльскохсзийстве-нных животных: Науч. тр. /Ставроп. СХИ. - Ставр ноль, 1975. - Вып.33. - Т.5. - С.42-44.

12. Тутов Ii.К., Косикова 0.11. Количественные показатели раз-bHo;:-eas.ü и сохранения жизнеспособности возбудителя псевдоактино-микоза (актинобациллеза) в питательных средах // Диагностика,лечение , профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч. тр. /Ставроп. Ш. - Ставрополь, 1976. - Вып.39. - Т.5. -С.55-56.

13. Тутов И.К., Косикова О.П. Динамика свободных аминокисло; ку„£ьгурально£ жидкости в процессе размножения возбудителя псевд( актиношкоза (актинобациллеза) ъ МЛЕ и бульоне Хотпшгера // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйствен -НЫХ встных: Науч. тр. /Ставроп. CHI. - Стазрополь, 1976. - Выг 39. - Т.5. - С.57-53.

14. Тутов Ii.?:., Лихачев Н.й., Роянцева Л.В., Сулиз В.К., .Выверь А.Д., Баранович Е.Г. Основные свойства возбудителя псевдо-актииош:г.сза крупного рогатого окота // Диагностика, лечение,прс фплактига заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч. тр. /Ставроп. СЙ1. - Ставрополь, 1976. - Вып.39. - Т.5. - С.59-60.

15. Тутов И.К. К методике изучения мксигенных свойств возбудителя псевдоакгпномикоза // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных „{цветных: Науч. тр./Ставрип. Clii. - Ставрополь, 1977. - Еьш.40. - Т.5. - С.23-26.

16. Тутов И.К., Косикова О.Л. " :;инокислотный обмен возбудителя псевдоактпноыикоза // Диаг; .<а и профилактика ияфекцион-нгх г паразитарных заболеваний сельскохозяйственных аквотннх:

-тр. /Ставроп. СХП. - Ставрополь, 1977. - Зып.40. - Т.5. -С.26-29.

17. Тутов й.К. Дифференциация возбудителя псевдоактвномико-за (актинобациллеза) и некоторых патогенных актиномкцет //' Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных а: ветках: Науч. тр. /Ставроп. СШ. - Ставрополь, 1978. - Вып.41.

- Т.5. - C.9-II.

18. Тутов И.К., Лихачев H.H., Косикова O.G. Некоторые биохи-

щческие и гематологические показатели у крупного рогатого скота при псевдоактиномикозе (актинобациллезе) // Диагностика,лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч.. тр. /Ставроп. ИИ. - Ставрополь, 1978. - Вып.41. - Т.5 . - C.II-I4.

19. Тутов И.К. Особенности аминокислотного обмена некоторых патогенных актиномицегов // Цитохимические и биохимические исследования в эксперименте и клинике: Вопросы теоретической и клинической медицины. - Нальчик, 1979. - Вып.8. - C.I82.

20. Тутов И.К., Косикова О.П. Сравнительные показатели динамики свободных аминокислот культуральной жидкости в процессе размножения некоторых патогенных актиномицетов // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч. тр. /Ставроп. СХИ. - Ставрополь, 1979. - Вып.42. - Т.З. -

С.19-24.

21.. Тутов И.К. Об иммунитете при псевдоактиномикозе (актинобациллезе) животных // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч. тр. /Ставроп. С1И. -Ставрополь, 1980. - Вып.43. - Т.З. - С.30-34.

22. Тутов И.К. Морфология возбудителя псевдоактиномикоза (актинобациллеза) // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч. тр. /Ставроп. СХИ. - Ставрополь, 1980. - Вып.43. - Т.З. - С.34-36.

23. Тутов U.K. Биологические особенности возбудителя псевдоактиномикоза (актинобациллеза) сельскохозяйственных животных

// Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч. тр. /Ставроп. СХИ. - Ставрополь, 1981. -Вып.44. - Т.З. - С.65-68.

24. Тутов И.К., Вакуленко A.B., Соловьева С.Е. Гематологические и биохимические показатели у крупного ро.гатого скота при псевдоактиномикозе (актинобациллезе) // Диагностика, лечение, профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: Науч.тр./Ставроп. СХИ. - Ставрополь, 1982. - Вып.45. - Т.5. - С.20-23.

25. Тутов И.К., Ромм В.Л. Особенности эпизоотологии актинобациллеза .(псевдоактиномикоза) животных в Ставропольском крае // Диагностика,' лечение и профилактика инфекционных и паразитарных заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /Ставроп. СМ. - Ставрополь, 1984. - С.7-10.

26. Тутов И.К., Лихачев Н.И., Соловьева С.Я'. Штамковые различия возбудителя псевдоактиномикоза (актинобациллеза) животных

// Диагностика, лечение, профилактика инфекционных и паразитарных заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр./Став-pon. СЙ1. - Ставрополь, 1985. - С.9-12.

27. Тутов К.К., Соловьева С.Я. Культивирование различных птамыоз возбудителя псеьдоактиномикоза в организме развивающихся куриных эмбрионов ,// Диагностика, лечение, профилактика инфекционных и паразитарных заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч, тр = /Ставроп. CXII. - Ставрополь,1986.- С.10-12

28. Тутов И.К., Соловьева С.Я., Кириаков И.С. Распростране -ние акт;шобациллеза и акткноьшкоза крупного рогатого скота в Ставропольской крае // Диагностика, лечение, профилактика инфекционных и паразитарных заболеваний сельскохозяйственных животных Сб. науч. тр. /Ставроп. СлИ. - Ставрополь, 1937. - С.12-14.

29. Тутов И.К. , Дорофеев В.И., Кириаков К.С. Чувствительное!] крупного рогатого скота и овец к возбудителю псевдоактиноишоза

(актинобацкллеза) при разданных способах заражения // Диагностика, лечение, профилактика инфекционных и паразитарных заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. /Ставроп. СИ;. Ставрополь, 1938. - С.18-20.

30. Лихачев Н.И., Тутов И.К., Соловьева С.Я. Некоторые показатели естественной резистентности крупного рогатого скота при экспериментально!,i псездоактиномикозе (актинобациллезе) // Диагнс стика, лечение, профилактика,инфекционных и паразитарных заболеваний сельскохозяйственных киьоткых: Сб. науч. тр. /Ставроп.СХЕ. - Ставрополь, 1988. - С.21-26.

31. Тутов И.К. Особенности иммунитета при псевдоактиноыикозе (актинобациллезе) животных/'/ Диагностика, лзчение, профилактике инфег ,ионных и паразитарных заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб.-науч. тгр, /Ставроп. СХ11.' - Ставрополь, 1939. - C.S-J

32. Соловьева С.Я. , Тутов И.К. Комплементарная активность сь воротки кров»* Крупного рогатого скота, больного поевдоактиноыикс зоь; (акгинобациллезом) // Диагностика, лечение, профилактика паразитарных и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных айв о: ных: Сб. науч. тр. /Ставроп. СХ11. - Ставрополь,1990. - С.33-35.

33. Маркина К.В., Тутов К.К. Сохраняемость возбудителя псев-доактиноыикоза (актинобациллеза) после сублимационной сушки //Д1 агностика, лечение, профилактика паразитарных и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. ip./Ставроп. ОД!. - Ставрополь, 1990. - С.36-33.