Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Бактериологическая и клинико-морфологическая характеристики иерсиниоза свиней в хозяйствах Западной Сибири

На правах рукописи

и

КОНЕВ АЛЕКСЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

Р

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ И КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИЕРСИНИОЗА СВИНЕЙ В ХОЗЯЙСТВАХ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Омск 2006

Работа выполнена на кафедре ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии Института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ доктор ветеринарных наук профессор Н.М. Колычев

доктор ветеринарных наук профессор В.И. Плешакова

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук профессор А.П. Красиков

Заслуженный деятель науки РФ доктор ветеринарных наук профессор Л.И. Дроздова

Ведущее учреждение:

ФГОУ ВПО «Казанская академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана»

Защита диссертации состоится « ^Г»2006 года в «/£_» часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» в институте ветеринарной медицины ОмГАУ по адресу: 644122, г. Омск - 122, ул. Октябрьская, 92; тел. 24-15-35,23-74-71; тел./факс 23-30-31 (для Н.П. Жабина)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан «_j£_» _2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, . / ¡Я/Щ

кандидат ветеринарных наук доцент ¿рЗЦ'&М [ Жабин Н.П.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Наиболее динамичной отраслью мирового агропромышленного комплекса является свиноводство. Специализация и концентрация свинопоголовья на ограниченных площадях в условиях искусственного микроклимата способствует снижению общей резистентности организма животных. При этом основное место в структуре заболеваний животных раннего постнаталыюго периода занимают расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта, клинически проявляющиеся диареей, дегидратацией и токсемией.

В их возникновении главную роль отводят нарушениям в кормлении, уходе и содержании свиноматок и новорожденного молодняка. Считается, что диарея сельскохозяйственных животных обусловлена условно патогенными микроорганизмами (Волков Г.К., 2003, Гусев В.В., Приходько С.М., Павлов С.И., Теймуразов М.Г., 2004).

Вместе с тем, согласно исследованиям, проведенным за последние 25-30 лет и освещенным в доступной литературе, значительную долю кишечных болезней составляют иерсиниоз и псевдотуберкулез, обусловленные бактериями рода Yersinia (Каврук Л.С., Бритова C.B., Гиряева И.О., 1983; Субботин В.В., Сидоров М.А., 2004).

В ветеринарном аспекте проблема иерсиниоза сельскохозяйственных животных до настоящего времени остается недостаточно изученной. Несмотря на то, что в последние годы резко возрос интерес исследователей к изучению возбудителя иерсиниоза, крайне мало сведений о распространении болезни у различных видов животных в отдельных регионах Российской Федерации (Зыкин Л.Ф., Щербаков A.A., Хапцев З.Ю., 2002).

Вместе с тем, наибольшую опасность иерсиниоз представляет именно в областях с холодным климатом, ввиду биологических свойств Y. enlerocolitica, позволяющих микроорганизму развиваться, накапливаться и сохранять патогенные свойства при низких температурах (Куликовский А. В., Джентимирова K.M., 1993).

Следует помнить также об эпидемиологической значимости иерсиниоза. В Российской Федерации он занимает второе место среди пищевых инфекций после сальмонеллеза, а в Европе третье - после сальмонеллеза и колибактериоза (Wauters G., 1979; Perez-Trallero Е., Idigoras P., Solaun M.L., Zigorraga C., 1992; Jackova S., Subik J., 1995; Смирнов И.В., 2004).

Ряд исследователей рассматривают свиней как наиболее значимый резервуар Y.enterocolitica и в большинстве случаев именно этот вид животных считают наиболее опасным источником патогенных для человека сероваров, о частности 03 (Szita J., Svidro А., 1976; Bockemuhl J., Schmitt H., Roth J., Saupe E., 1979; Wauters G., 1979; Schiemann D.A., 1987; Кирьянов E.A., Савчук И.И., 1989; de Boer E., Nouws J.F., 1991 ; Perez-Trallero E., Idigoras P., Solaun M.L., Zigorraga C., 1992; Jurikova K., Gottwaldova В., Jackova S., Subik J., 1995; Borie C.F., Jara M.A.. Sanchez M.L.. San Martin В.. Arellano C.. Martinez J.. Prado V.. 1997: Funk

РОС. национл.пьнТП БИБЛИОТЕК\ 3 С.-Петербур|

ОЭ 2005лкгф<У

J.A., Troutt H.F., Isaacson R.E., Fossler C.P., 1998: Гурский П.Д., Шашснько A.C., Корочкин Р.Б., 2003).

В настоящее время ветеринарная практика не располагает достаточным количеством методов, позволяющих эффективно диагностировать и профилактировать эту патологию. Разработка и внедрение мероприятий по диагностике иерсиниоза, позволит ветеринарным специалистам более адекватно оценивать этиологическую роль возбудителя инфекции, своевременно выявлять больных животных и проводить целенаправленную терапию.

Вместе с тем, выявление животных-иерсинионосителей, позволит применить комплекс мер для исключения дальнейшего распространения возбудителя и заражения людей.

Все вышеизложенное послужило основанием для выбора темы научно-исследовательской работы, определения цели и задач исследования.

Цель исследований - изучить распространение и усовершенствовать методы лабораторной диагностики иерсиниоза, а также определить основные биологические свойства Y.enterocolitica и клинико-морфологические изменения у поросят обусловленные возбудителем.

Задачи исследования: ~ изучить распространение Y.enterocolitica у поросят в хозяйствах Омской и Томской областей;

- усовершенствовать лабораторную диагностику иерсиниоза свиней на основе разработки питательной среды для ускоренного накопления Y.enterocolitica;

- изучить морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства культур Y.enterocolitica;

- определить патогенность Y.enterocolitica для лабораторных животных;

- изучить клинические и иммунобиохимические особенности течения иерсиниоза у свиней;

- установить патоморфологические изменения в органах поросят и лабораторных животных, обусловленные Y.enterocolitica.

Научная новизна

Впервые в хозяйствах Омской и Томской областей от поросят 2-3 месячного возраста изолированы культуры Y.enterocolitica и изучена степень распространения иерсиниоза, а также установлены географические особенности выделения био- и серовариантов Y.enterocolitica.

Результаты исследований культуральных, биохимических, серологических свойств культур Y.enlerocolitica расширяют и дополняют сведения о биолог ии возбудителя иерсиниоза свиней.

Получены новые данные о чувствительности культур Y.enterocolitica, выделенных от свиней к ряду антибактериальных препаратов, а также изучено сорбционное действие лперосорбентов Зоокарба и Полисорба ВП на возбудителя иерсиниоза.

Существенно расширены и дополнены сведения о патоморфоло! ических изменениях при спонтанном иерсиниоэе свиней. обусловленном

Y.enterocolitica, а также экспериментальном иерсиниозе (лабораторные животные).

Практическая значимость работы.

Результаты исследований использованы при разработке методических рекомендаций «Иерсиниоз свиней (диагностика, лечение, профилактика)», утвержденных Ученым советом ИЭВ Сибири и Дальнего востока СО РАСХН (2006).

Культура НАз4 депонирована в коллекции культур микроорганизмов ФГУП Государственного научного центра вирусологии и микробиологии «Вектор» (2005).

Разработан состав питательной среды для культивирования микроорганизмов Y.enterocolitica (патент N2005108115/13 009685).

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены:

- на ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (Омск, 2004, 2005, 2006 гг.);

- на Международной конференции посвященной 100-летшо со дня рождения Н.Г. Кондюрина (Омск, 2004 г.);

- на Международной конференции но свиноводству (Омск, 2005 г.);

- на Международном съезде терапевтов (Барнаул, 2005 г.);

- на IX научно-практической конференции «Перспективные направления научных исследований молодых ученых», посвященной 75-летию УГАВМ (Троицк, 2005 г.);

- на V межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006 г.)

Публикации. Основные результаты научных исследований изложены в диссертационной работе и опубликованы в девяти научных статьях.

Объем н структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа проиллюстрирована 18 таблицами, 27 рисунками. Список литературы включает 154 источника, из них 97 зарубежных авторов.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований используются в свиноводческих хозяйствах и ветеринарных лабораториях при диагностике и борьбе с иерсиниозом свиней, обусловленном Y.enterocolitica. Основные материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс при подготовке ветеринарных врачей в Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, Пермской ГСХА, Ижевской ГСХА, Оренбургском ГАУ, Красноярском ГАУ, Новосибирском ГАУ, Уральской ГСХА.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Распространение, биологические свойства и особенности циркуляции био- и серовариантов У. еЫегосоГШса среди поросят в свиноводческих хозяйствах Омской и Томской областей.

2. Клинические, гематологические, иммунобиохимические особенности и иатологоморфологические изменения у поросят спонтанно инфицированных У. еМегосоШка.

3. Усовершенствование лабораторной диагностики иерсиниоза свиней с использованием разработанной питательной среды для накопления бактериальной массы У. егИегосоГШса.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены в рамках НИР «Разработка методов и средств диагностики, лечения, профилактики и мер борьбы с инфекционными болезнями сельскохозяйственных животных» (н°меР государственной регистрации 01.20.00 12391), в период с 2003 по 2006г.

Первичный материал для бактериологического исследования получали в свиноводческих хозяйствах различных форм собственности Омской и Томской областей и мясоперерабатывающих предприятиях от свиней пород ландрас и крупная белая, всех возрастных периодов, преимущественно молодняка до 4 месяцев, с клиническими признаками диареи невыясненной этиологии Изучили 22 культуры У.емегосоНИса, из них:

1. Официально зарегистрированные коллекционные музейные культуры У.еШегосоШка, хранящиеся и регулярно поддерживающиеся на кафедре ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии Института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета (ИВМ ОмГАУ):

• референтные штаммы У.ешегосоШка 383, У.еп1егосо1'й\са 66-821 ■ У. еШегосоИйса В-11012

2. Культуры, изолированные нами за период проведения исследований от свиней в животноводческих хозяйствах Омской и Томской областей:

• НАз1, НАз2,11АзЗ, НАз4, НАз5 (ЗАО «Новоазовское» - Азовский район) ° 11ол 1, Пол2 (ООО «Еремеевское» - Полтавский район)

• СибК Сиб2 (ООО «Сибшинтрейд» - Горьковский район)

• Крут1, Крут2, КрутЗ (ЗАО им. Кирова - Крутинский район)

• Расс1, Расс2 (СХПК «Рассвет» - Тарский район)

1 любезно предоставлены кафедрой микробиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы института ветерииарной медицины и биотехнологии Саратовского Государственного аграрного университета им Н.И. Вавилова в 2003 )

2 культура, депонированная в коллекции культур микроорганизмов ФГУП Г0еуларс1венн010 научного центра вирусологии и микробиологии «Вектор». 2005

• Ис1 (КХФ «Жито» - Исилькульский район)

• Кир 1 (СПК Кирова - Калачинский)

• СибАг1, СибАг2, СибАгЗ (ЗАО «Сибагрогруппа» — Томская область)

Для прижизненной диагностики иерсиниоза пробы фекалий получали непосредственно из прямой кишки с помощью тупферов - ватных тампонов, монтированных на деревянной палочке длиной 10-15 см.

После взятия проб тупферы помещали в стерильные пробирки, погружая ватный тампон в транспортную среду и плотно закрывали ватно-марлевыми пробками. С целью накопления биомассы, пробы культивировали при 0...4°С в течение 15 суток на среде накопления. В качестве транспортной среды и среды накопления использовали фосфатно-буферный раствор (ФБР).

Морфологические и тинкториальные свойства возбудителя иерсиниоза изучали микроскопическим методом в окрашенных по Граму мазках-препаратах с помощью микроскопов марки Биолам-70, «Jenaval». Цитометрию осуществляли с помощью винтового окулярмикрометра (МОВ-1), определяя размер 30-и микробных клеток в каждом мазке.

Морфологические признаки колоний на плотных питательных средах — такие как цвет, размер, форму, консистенцию, характер краев и рельеф поверхности учитывали визуально с использованием увеличительных стекол (х2, ,\4) и микроскопа МБС-9. Консистенцию определяли прикосновением к колониям бактериальной петлей. В жидких питательных средах учитывали наличие помутнения, осадка и пленки на поверхности. Подвижность микроорганизмов определяли при посеве уколом в столбик полужидкой питательной среды (ПЖС), и дальнейшем культивировании при 26°С, 37°С. Неподвижными считали микроорганизмы, растущие по линии укола, подвижными - по всему объёму, что характеризовалось равномерным помутнением всей питательной среды.

Идентификацию выделенных культур производили, определяя следующие биохимические свойства: тип ферментации углеводов, кислотообразование (снижении рН ниже 5) при культивировании, наличие цитохромоксидазы, уреазы, фенилаланиндезаминазы, способность образовывать сероводород, индол, ацетилметилкарбинол; утилизировать цитрат как единственный источник углерода, а также расщеплять глюкозу и лактозу.

Для гистологических исследований материал фиксировали в 12%-м растворе нейтрального формалина, обезвоживание проводили в спиртах возрастающей концентрации. Уплотнение и заливку тканей осуществляли, используя набор парафиновых сред. Срезы толщиной 7-8 мкм получали при помощи санного микротома МС-2. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином.

Определение чувствительности возбудителя к антибактериальным препаратам проводили диско-диффузионным методом in vitro, согласно методическим указаниям «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (МУК 4.2.189004, утв. в 2004 г). При этом исследуемый микроорганизм относили к одной из трех категорий: ч>вствительный, промеж> точный, резистентный.

Для определения симбиотических взаимоотношений между У. enterocolitica и микроорганизмами, выделенными в ассоциации, использовали метод внесения предполагаемого антагониста на изучаемую газонную культуру. Учет результатов производили визуально, определяя наличие зоны задержки роста. Контролем являлся рост предполагаемого антагониста на половине чашки Петри незасеянной культурой У.enterocolitica.

2.2 ВЫДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ ИЕРСИНИОЗА В ХОЗЯЙСТВАХ ОМСКОЙ И ТОМСКОЙ ОБЛАСТЕЙ

За 2003-2006 гг. мы провели бактериологическое исследование 583 проб фекалий от клинически здоровых свиней и с признаками диареи, а также смывов с объектов внешней среды из восьми свиноводческих хозяйств Омской области и одного хозяйства Томской. В результате было выделено 19 культур У. enterocolitica от свиней с клиническими признаками диареи.

При этом установлено, что инфицирование свиней У.enterocolitica в различных хозяйствах варьирует.

Максимальное количество выделенных культур У.enterocolitica от общего числа исследованных проб зарегистрировано в СХПК «Рассвет» Тарского района (20%), минимальное - в ЗАО «Новоазовский» Азовского района (4,4%).

2.3 ГЕОГРАФИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВЫДЕЛЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ СЕРОВАРИАНТОВ Y.ENTEROCOLITICA

На территории Омской области выделяли второй и четвертый биовариаиты y.enterocolitica и следующие сероварианты - 03, 09, 05,27. Наиболее часто встречающимся серовариантом являлся 03, культуры y.enterocolitica этого сероварианта выделяли в животноводческих хозяйствах расположенных в юго-восточном, юго-западиом и северо-западном регионах области.

Реже зафиксированы случаи выделения Y.enterocolitica серовариантов 05,27в северо-восточном регионе области и 09 - в юго-восточном.

Культуры Y.enterocolitica, выделенные из проб фекалий от свиней ЗАО «Сибагрогруипа» Томской области, принадлежали к четвертому биоварианту, ссроварианту 03.

2.4 АССОЦИАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРИ ВЫДЕЛЕНИИ Y.ENTEROCOLITICA

Необходимо отметить, что y.enterocolitica выделяли преимущественно в ассоциациях с другими энтеробактериями, реже - в монокультуре (табл. 1).

Наиболее часто встречающимся сочленом в ассоциации являлась E.coli- 16 случаев выделения (85%).Ассоциации y.enterocolitica с E.coli и P. vulgaris выделяли в 37% случаев. Реже обнаруживали Y.enterocolitica в ассоциации с E.coli и Kleb, pneumoniae - (5%). В 5% случаев выделяли Y.enterocolitica в монокультуре.

Таблица 1

Ассоциации микроорганизмов при выделении Y.enterocolitica

Количество Частота

Ассоциация м.о. выделенных выделения,

ассоциаций %

Y.enterocolitica, E.coli б 31

Y.enterocolitica, E.coli, P. vulgaris 7 37

Y.enterocolitica, E.coli, Kleb, pneumoniae 1 5

Y.enterocolitica, E.coli, Ser. spp. 2 11

Y.enterocolitica, P. vulgaris, Ps. aeruginosa 2 11

Y.enterocolitica 1 5

Итого: 19 100

2.5 МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА У. ЕШЕЯОСОЫПСА

При микроскопии окрашенных мазков-препаратов, наблюдали мелкие грамотрицательные палочки длиной 1-3 мкм, и шириной 0,5-0,8 мкм. Клетки располагались хаотично, поодиночке или небольшими скоплениями. У исследуемых культур У.еШегосоШка способности к капсуло- и спорообразованию обнаружено не было.

Все выделенные культуры У.еШегосоНИса, обладали подвижностью при температуре культивирования 26°С и были неподвижны при 37°С.

При культивировании в аэробных условиях на агаре Эндо (26°С) через 24 ч У.еМегосоИИса образовывали росинчатые бесцветные, выпуклые блестящие колонии пастообразной консистенции; на вторые сутки они увеличивались до 1,5-2,Омм и приобретали розовый оттенок. На среде ИПС образовывали крупные 4-5мм выпуклые голубовато-зеленые колонии, с матовым налетом.

2.6 БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА У.ЕМТЕЯОСОиЛСА

При изучении биохимических свойств выделенных культур, были отмечены, как стабильные признаки позволяющие осуществлять достаточно четкую идентификацию вида, так и вариабельные, дающие возможность проводить биотипизацию.

Все выделенные культуры продуцировали кислоту из мальтозы, сахарозы и глюкозы без образования газа, проявляли умеренную уреазную активность, были неактивны в отношении лактозы, дульцита, липазы, рамнозы и рафинозы; давали положительную реакцию в тесте с метиловым красным и в реакции Фогеса-Проскауэра при 26°С; не выделяли сероводород, обладали нитратредуктазой и не обладали фенилаланиндезаминазой. Культуры Пол2, Расс1, Расс2, Кир], в отличие от других, разлагали ксилозу и продуцировали индол.

Таким образом, по результатам биохимических исследований культуры НАз1, ИАз2. НАзЗ, НАз4, НАз5, Пол1, Сиб1, Сиб2, Крут1, Крут2, КрутЗ, Ис1, СибАг1, СибАг2, СибАгЗ были отнесены к четвертом) биовару, а Пол2, Расс1, Расс2. Кир! - ко второму.

2.7 АГТЛЮТИНАБЕЛЬНЫЕ И ПАТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА К ЕШЕ1ЮСОИТ1СА

Серотипирование изолированных культур У.еп1егосо1Шса проводили в РА на стекле с помощью диагностических О-моновалентных кроличьих сухих сывороток к серовариантам 03; 04,32; 04,33; 05; 05,27; 06,30; 06,31; 07,8; 09, 013,7 производства С.Петербургского НИИЭМ им. Пастера. Для постановки реакции использовали культуры, выращенные на МПА в течение 48 ч при 26°С. Учет результатов проводили визуально при косом освещении на темном фоне по четырех крестовой системе. Положительной считали реакцию, характеризующуюся появлением агглютината не менее чем на три креста в течение трех минут.

При изучении антигенных свойств выделенных культур У.еп!егосо1Шса, нами отмечено, что 15 культур из 19 принадлежа!' сероварианту 03, две сероварианту 05,27 и две сероварианту 09.

Патогснность выделенных культур выявляли в РА на стекле с сывороткой для определения вирулентности иерсиний (СВИ), а также определяли маркеры вирулентности - пигментацию, аутоагглютинацию, температурозависимую морфологию колоний.

В результате было установлено, что все изолированные культуры проявляли признаки, характерные для вирулентных иерсиний - образовывали красные колонии на среде с конго-рот, аутоагглютинировали при 37°С, образовывали в условиях культивирования при 37°С колонии меньшего размера, чем при при 26°С, агглютинировались СВИ.

Анализ работ отечественных и зарубежных авторов показал, что имеются разноречивые, а в некоторых случаях противоположные сведения относительно патогенности культур У.еШегосоИНса для лабораторных животных. В связи с этим нами были проведены экспериментальные исследования по заражению белых мышей культурами У.еШегосоИНса.

В качестве объекта для заражения использовали полуторамесячных белых лабораторных мышей весом 20-25г (п=27). В качестве иммунодепрессанта использован преднизолон в дозе 50 мг/кг массы тела, который предварительно вводили экспериментальным животным внутримышечно, по схеме один раз в двое суток в течение недели.

Па вторые сутки после заключительного введения преднизолона производили внутрибрюшинное заражение путем введения инфекционной дозы 0,5 мл суспензии (3-107 м.кл/мл) музейных штаммов У.еШегосоИНса сероварианта 03 и 08, а также культур выделенных в хозяйствах Омской области из кишечника свиней с признаками диареи (НАз1, НАз2. Пол1, Г1ол2, Сиб1, Сиб2).

На вторые сутки после заражения у животных второй группы (контр.) отмечали: угнетение, отказ от корма, взъсрошенность и загрязнение шерсти жидкими выделениями. На пятые-седьмые сутки все животные погибли.

У животных второй-седьмой групп (опыт.) аналогичные клинические признаки развивались на третьи-четвертые сутки после заражения.

Состояние животных первой группы (контр.) на протяжении всего эксперимента оставалось удовлетворительным. Убой мышей производили на 15 сугки, с последующим вскрытием животных.

При изучении патоморфологических изменений у всех экспериментально зараженных животных с выраженными клиническими признаками расстройства пищеварительной системы (п=24) наблюдали острый катаральный энтерит, макроскопически проявлявшийся складчатостью, набуханием, отеком и разрыхлением слизистой оболочки, гиперемию в некоторых участках кишечника. Содержимое кишечника жидкое, мутное, с большим количеством слизи и примесыо крови.

При гистологическом исследовании установлена выраженная инъекция сосудов, кровоизлияния и инфильтрация слизистой оболочки серозно-катаральным экссудатом. В эпителиальном покрове слизистой оболочки отмечается значительное увеличение числа бокаловидных клеток, набухание и слущивание эпителия. Эпителий кишечных желез нередко в состоянии зернистой и жировой дегенерации.

У четырех животных, кроме указанных изменений, в тонком кишечнике обнаруживали атрофию ворсинок и желез и разрастание рыхлой волокнистой соединительной ткани.

У девяти экспериментально зараженных животных наблюдали изъязвления слизистой оболочки кишечника. Брыжейка уплотнена, сосуды инъецированы. Регионарные брыжеечные лимфоузлы находились в состоянии гиперплазии, были увеличены в 10-30 раз, по сравнению с контролем, набухшие, гиперемированные. Гистологически в лимфатических узлах обнаруживали продуктивный лимфаденит, который представлен разрастанием соединительной ткани капсулы, при этом подкапсулярныс синусы расширены.

У трех животных наблюдали геморрагический отек и некроз слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника, мелкие абсцессы и участки некротических поражений в печени, легких, и селезенке, которая была значительно увеличена.

В слизистой оболочке кишечника установлена значительная инъекция сосудов, расширение капилляров, особенно в ворсинках, диапедез эритроцитов в межткансвые пространства, дегенерация и слущивание эпителия, и отчасти некроз ворсинок с образованием эрозивных и язвенных поверхностей.

В печени отмечается очаговая и разлитая инфильтрация желчных протоков, в некоторых случаях адвентиции сосудов прилегающей к ним интерстициальной соединительной ткани - лимфоидными, плазматическими клетками и фибробластами, реже лейкоцитами. В некоторых участках печеночные дольки частично атрофир>ются. Гепагоциты подвергаются атрофии, зернистой и жировой дегенерации.

В селезенке отмечаются очаги кровоизлияний, а также активная пролиферация клеток фибробластического ряда в красной пульпе и редукция лимфоидных фолликулов. Наблюдается резкое утолщение трабекул и капсулы с частичной фрагментацией волокон.

После патологоанатомического скрытия были произведены бактериологические посевы на питательные среды проб из пораженных органов и тканей лабораторных животных.

Культуры У.еШегосоИИса были выделены из содержимого кишечника и пейеровых бляшек, и в трех случаях также из печени, селезенки, легких, лимфатических узлов и из крови.

2.8 КЛИНИКО-ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ И ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У СВИНЕЙ ПРИ СПОНТАННОМ ИЕРСИНИОЗЕ, ОБУСЛОВЛЕННОМ У. ЕШЕЮСОЫЖА.

Проведенные нами клинические наблюдения поросят (п=5) в эксперименте, показали, что иерсиниоз протекает в двух формах: подострой и хронической. Так, у двух поросят наблюдали выделения жидких фекалий светло-желтого цвета, в большинстве случаев с примесью крови. Иногда понос чередовался нормальной дефекацией. Животные почти все время лежали, в некоторых случаях проявляли аппетит, но он был значительно снижен. Отмечалось прогрессирующее исхудание, развитие одышки и ослабление сердечной деятельности. Лихорадка обычно перемежающаяся. В дальнейшем указанные животные пали.

У трех поросят наблюдали хроническое течение инфекции - понос чередовался с запорами, поросята отставали в росте, прогрессировало исхудание. Кожа становилась сероватой, на ней появлялась струпьевидная экзема Наблюдали гнойный кератоконъюнктивит и артриты - во всех случаях были поражены суставы грудных конечностей. В дальнейшем у двух поросят понос постепенно прекратился, появился аппетит, животные начали набирать вес. Однако они по-прежнему существенно отставали в развитии от поросят контрольной группы.

Проведенные гематологические и биохимические исследования показали, что у поросят, инфицированных У.еШегосоНИса, на третьи сутки наблюдения отмечается достоверное увеличение количества лимфоцитов (на 18,9%), моноцитов (на 15,0%), снижение количества лейкоцитов (на 4,7%) по сравнению с контролем, на девятые сутки происходит дальнейшее снижение количества лейкоцитов, эритроцитов, отмечается эозинофилопения.

К 14-м суткам наблюдали снижение уровня гемоглобина на 27,5%; эритроцитов на 31,5%; лейкоцитов на 11,6%; эозинофилов на 55,7% и увеличение количества лимфоцитов на 21,9%.

Биохимическими исследованиями сыворотки крови больных поросят установлено достоверное снижение уровня общего белка к 14-м суткам на 28.2% и увеличение а-глобулинов на 10.5%. у-глобулинов на 22%.

Бактерицидная активность сыворотки крови у зараженных У.еШегосоИНса поросят к 14-м суткам достоверно увеличивалась на 22,0% по сравнению с животными в контроле.

Проведенные пагоморфологические исследования показали, что у поросят 23 месячного возраста с клиническими признаками диареи, из проб фекалий которых были выделены культуры У.егЧегосо!Шса, в той или иной степени, обнаруживали поражение желудочно-кишечного тракта, в особенности кишечника, печени, лимфатических узлов и селезенки. Слизистая оболочка покрыта густым, тягучим полупрозрачным налетом, на вершинах кишечных складок окрашена в ярко-красный цвет с мелкими кровоизлияниями. В ободочной и прямой кишках обнаруживаются фекальные массы с примесью густой слизи и крови.

Гистологически определяли усиленную слизистую метаплазию, дегенерацию и слущивание покровного эпителия, местами до полного обнажения ворсинок. В участках с атрофированными ворсинками слизистая оболочка сглажена и истончена, отмечается сильная гиперемия и инъекция сосудов, а также расширение капилляров, особенно в ворсинках. Обнаруживается серозно-клеточный выпот и диапедез эритроцитов в межтканевые пространства, дегенерация, некроз и слущивание эпителия, отчасти некроз ворсинок с образованием эрозивных и язвенных поверхностей.

Брыжеечные лимфатические узлы у павших или вынужденно убитых поросят увеличены в объеме, размягчены, на разрезе серо- или темно-красного цвета.

При гистологическом исследовании установлено, что сосуды лимфатических узлов резко гиперемированы. Эндотелий синусов набухший, в стоянии пролиферации. Просветы синусов расширены и заполнены лимфоцитами, гранулоцитами и, в особенности, десквамированными ретикуло-эндотелиальными клетками в различных стадиях набухания, дегенерации и некроза. Отмечается гиперплазия центров размножения фолликулов.

В селезенке, печени, почках у павших животных наблюдаются ясно выраженные структурно-функциональные изменения со стороны паренхимных и стромальных компонентов.

Так, в селезенке сосуды расширены, синусы заполнены эритроцитами, гранулоцитами, лимфоцитами и десквамированным эпителием. Пульпа инфильтрирована клеточными популяциями, среди которых преобладают ретикулоэндотелиальные клетки и плазмоциты. В центре фолликулов отмечаются инфильтраты из ретикулярных и эпителиоидных клеток. В некоторых случаях наблюдается зернистая и жировая дегенерация, некроз и распад клеточных элементов пульпы, фолликулов и ретикулоэццотелиальных клеток.

В печени наблюдали очаговую, а в большинстве случаев и диффузную инфильтрацию междольковой и внутрилольковой рыхлой соединительной ткани. Балочное строение нарушено, границы между гепатоцитами выражены нечетко, ядра отдельных клеток лизировапы, др>гие находятся а состоянии кариопикноза.

На гистопрепаратах почек, окрашенных гематоксилином и эозином, отмечается набухание, пролиферация, десквамация и некроз эпителия капсулы клубочков. Эпителий извитых канальцев находится в состоянии мутного набухания, зернистой, гиалиново-капельной и жировой дегенерации, частично некротизирован и десквамирован.

Таким образом, проведенные исследования показали, что при спонтанном иерсиниозе у свиней в патогенетическое звено болезни вовлечены не только желудочно-кишечный тракт и брыжеечные лимфатические узлы, но и другие органы, в частности, печень, селезенка, почки.

Полученные данные свидетельствуют о том, что течение иерсиниоза может сопровождаться инфекционно-аллергической реакцией со стороны организма.

2.9 УСТОЙЧИВОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЯ ИЕРСИНИОЗА К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ

Мы провели определение чувствительности выделенных культур Y.enterocolitica к ряду антибактериальных препаратов. В опыте использовали препараты следующих групп: пенициллина (бензилпенициллин, карбенициллин, оксациллин и пенициллин), тетрациклина (доксициклии), цефалоспоринов (цефоперазон, цефазолин), аминогликозидов (мономицин), макролидов (эритромицин), хлорамфинекола (левомицетин), фторхинолонов (офлоксацин, ципрофлоксацин), производных нитрофуранов (фурадонин), противотуберкулезных препаратов (рифампицин, стрептомицин).

В результате проведенных исследований установлено, что культуры Y.enterocolitica были чувствительными к офлоксацину, ципрофлоксацину, цефоперазону, левомицетину и стрептомицину; промежуточными - в отношение карбенициллина; резистентными - к оксациллину, цефазолину, бензилпенициллину и пенициллину. Чувствительность Y.enterocolitica в отношение доксициклина, мономицина, эритромицина, фурадонина и рифампицина варьировала в зависимости от хозяйства, где были выделены культуры.

2.10 СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СОРБЦИОННОГО ДЕЙСТВИЯ ЗООКАРБА И ПОЛИСОРБА ВП НА Y.ENTEROCOLITICA

С целью дальнейшей разработки методов лечения, альтернативных антибиотикотерапии, была изучена сорбционная активность зоокарба и полисорба ВП в отношении референтных штаммов Y.enterocolitica 383(0:9) и 66-82(0:3) в опытах in vitro.

Результаты исследований влияния сорбентов на Y. enterocolitica (0:3 и 0:9) свидетельствуют о том, что выраженным сорбционным эффектом на данный микроорганизм обладает Полисорб ВП, активность которого была хорошо выражена при 40-60-ти мин. экспозиции. Так, количество колоний сероварианта 0:3 снижалось с 1081±21 до 81±6, а сероварианта 0:9 - с 1241±58 до 132± 14, соответственно.

Зоокарб также сорбировал иерсинии, однако его эффект был значительно ниже и проявлялся после 60-и мин. контакта с взвесями микроорганизмов -

количество колоний сероварианта 0:3 снижалось с 1081 ±21 до 490±45, а сероварианта 0:9 - с 1241±58 до 511±10, соответственно.

2.11 РАЗРАБОТКА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ УСКОРЕННОГО НАКОПЛЕНИЯ Y.ENTEROCOLITICA НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТА ГОЛОВНОГО МОЗГА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА С целью получения антигена, при проведении серотипизации, при определении чувствительности к антибактериальным препаратам, для депонирования и т.п. требуется накопление достаточного количества биологической массы исследуемого микроорганизма, для чего в микробиологической практике наиболее широко применяется MI1A.

Однако использование МПА для этих целей в отношение Y.cntcrocolitica не является оптимальным, так как данный микроорганизм характеризуется скудным ростом на данной питательной среде при культивировании в течение 48-72 ч (+26°С).

С целью сокращения срока культивирования Y.enterocolitica и увеличения объема бактериальной массы нами разработан состав питательной среды, в который входил экстракт головного мозга (ЭГМ) крупного рогатого скота. Данный компонент стимулировал рост бактерий за счет содержания разнообразных веществ: белков, углеводов, липидов, минеральных и экстрактивных веществ, не меняя биологических свойств микроорганизма (патент №2005 108115/13 2005 г.).

На МПА с ЭГМ через 20-24 ч инкубирования культуры Y.enterocolitica образовывали сочные, выпуклые, непрозрачные, серо-белые колонии с ровными краями и блестящей, гладкой поверхностью, диаметром до 6 мм.

При биохимическом исследовании культур установили, что ферментативные свойства Y.enterocolitica идентичны таковым в контроле (культивирование на чистом МПА). При этом обнаружили значительные различия в размере колоний уже в первые сутки культивирования, что имеет большое практическое значение для накопления биомассы.

Предлагаемая питательная среда с ЭГМ позволила сократить сроки культивирования Y.enterocolitica до 20-24 ч и получить достаточное количество биомассы микроорганизмов.

ВЫВОДЫ

1. Иерсиниоз свиней имеет значительное распространение в свиноводческих хозяйствах Западно-Сибирского региона, средняя инфицированность составляет 5,8% с тенденцией нарастания в осенний период. Чаще всего выделяется Y.enterocolitica сероварианта 03, четвертого биоварианта (79,0%); реже 09 (10,5%) и 05,27 (10,5%)- второю биоварианта.

2. В большинстве случаев иерсиниоз свиней протекает в ассоциативной форме, что подтверждается выделением Y.entericolitica в ассоциации с E.coli (85,0%), P. vulgaris (48,0%), Kleb. Pneuponiae (5,0%), Ser. spp. (11,0%) и Ps. aeruginosa (11.0%).

3. Предложенный состав питательной среды с добавлением экстракта головного мозга крупного рогатого скота, позволяет значительно увеличить объем бактериальной массы и сократить сроки культивирования У.еМегосоИНса до 20-24 часов.

4. Культуры У.еШепсо1Шса, выделенные в хозяйствах Омской области от свиней с клиническими признаками диареи, чувствительны к офлоксацину, ципрофлоксацину, цефоперазону, левомицетину и стрептомицину. Наиболее эффективным сорбционным действием в отношении У.еШегосоИНса обладает энтеросорбент Полисорб ВП.

5. Культуры У.етегосоШ'юа, выделенные от. поросят с клиническими признаками диареи, проявляют патогенные свойства в отношении белых мышей после предварительного введения преднизолона, что подтверждается их гибелью с характерными клиническими признаками и пагоморфологическими изменениями и выделением возбудителя.

6. Иерсиниоз свиней сопровождается диареей, перемежающейся лихорадкой, кахексией, тахикардией, артритами и дерматитами. В гематологическом профиле наблюдается достоверное увеличение количества лимфоцитов и моноцитов, при снижении лейкоцитов и эритроцитов, а в сыворотке крови снижение уровня общего белка и увеличение а- и у-глобулинов, а также БАСК.

7. У поросят, естественно зараженных У.еЫегосоИНса регистрируется гиперемия слизистой оболочки кишечника, катарально-геморрагический энтероколит; застойная гиперемия, зернистая дистрофия, в некоторых случаях, некробиоз гепатоцитов; зернистая дистрофия, реже паренхиматозный нефрит; гиперпластический спленит; хронический пролиферативный лимфаденит.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований использованы при разработке методических рекомендаций «Иерсиниоз свиней (диагностика, лечение, профилактика)», утвержденных Ученым советом ИЭВ Сибири и Дальнего востока СО РАСХН (20.06.200бг, протокол № 2).

2. Разработан состав питательной среды для культивирования микроорганизмов У.еШегосоНИса (патент N2005108115/13 009685).

3. Фактический материал диссертационной работы используется в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах микробиологии, эпизоотологии, гистологии и патологической анатомии ряда вузов страны.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Конев, А. В. Чувствительность возбудителя иерсиниоза к некоторым химиотерапевтическим препаратам в опытах in vitro / А. В. Конев, М. 10. Налепова, С. В. Трапезников // Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных : сб. науч. тр. СО РАСХН ВНИИБТЖ. - Омск, 2004. - С. 212.

2. Конев, А. В. Сравнительная оценка действия зоокарба и полисорба ВП на культуру Y. enterocolitica / А. В. Конев, М. Ю. Налепова, А. Е. Колова // Проблемы ветеринарного образования и научных исследований в агропромышленном комплексе : сб. науч. тр.-Омск,2004. - С. 218-221.

3. Конев, А.В. Сравнительная оценка лабораторных методов индикации Y. enterocolitica от свиней / А. В. Конев, М. Ю. Налепова, С. В. Трапезников И Проблемы и перспективы свиноводства: материалы Междунар. конф. по свиноводству. - Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2005. - С. 140.

4. Конев, А. В. Выделение Y. enterocolitica от поросят индустриального комплекса 'Сибагрогруппа' / А. В. Конев, М. Ю. Налепова, С. В. Трапезников // Проблемы и перспективы свиноводства: материалы Междунар. конф. по свиноводству. - Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ,

2005. - С. 37-39

5. Конев, А. В. Субмикроскопическое исследование Y. enterocolitica / А. В. Конев, М. Ю. Налепова, С. В. Трапезников // Проблемы и перспекгивы свиноводства: материалы Междунар. конф. по свиноводству. - Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2005. - С. 111-113

6. Конев, А. В. Резистентность Y. enterocolitica в монокультуре в ассоциации к некоторым химиотерапевтическим препаратам в опытах in vitro / А. В. Конев, М. Ю. Налепова, С. В. Трапезников // Актуальные проблемы патологии животных : материалы Междунар. съезда терапевтов. - Барнаул : Изд-во АГАУ, 2005 - С. 232.

7. Конев, А. В. Патоморфологические изменения при экспериментальном иерсиниозс лабораторных животных / А. В. Конев // Перспективные направления научных исследований молодых ученых : материалы IX науч.-практ. конф. посвящ. 75-летию УГАВМ. - Троицк, 2005. - С. 85-87.

8. Конев, А. В. Распространение иерсиниоза в свиноводческих хозяйствах Омской области / А. В. Конев//Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных : сб. науч. тр. -Омск, 2006.-С. 99- 103.

9. Конев, А.В. Выделение Y. enterocolitica от свиней в животноводческих хозяйствах Омской области / А. В. Конев // Омский научный вестник. -

2006.-№4(38). - С. 142-143

КОНЕВ АЛЕКСЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ И КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИЕРСИНИОЗА СВИНЕЙ В ХОЗЯЙСТВАХ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ

АВТОРЕФЕРАТ

Лицензия ЛР № 020074

Подписано в печать 01.11.2006. Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Усл.печ.л. 1,0. Бумага офсетная. Способ печати - оперативный. Тираж ЮОэкз.

Института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»

Отпечатано с оригинал-макета в типографии ООО «Вариант-Сибирь» 644043, г. Омск, ул. Коммунистическая, 45. Тел./факс: 25-45-44.

O.QQG fi

«223178

Актуальность темы. Наиболее динамичной отраслью мирового а агропромышленного комплекса является свиноводство. Специализация и концентрация свинопоголовья на ограниченных площадях в условиях искусственного микроклимата способствует снижению общей резистентности организма животных. При этом основное место в структуре заболеваний животных раннего постнатального периода занимают расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта, клинически проявляющиеся диареей, дегидратацией и токсемией.

В их возникновении главную роль отводят нарушениям в кормлении, уходе и содержании свиноматок и новорожденного молодняка. Считается, что диарея сельскохозяйственных животных обусловлена условно патогенными микроорганизмами (Волков Г.К., 2003, Гусев В.В., Приходько С.М., Павлов С.И., Теймуразов М.Г, 2004).

Вместе с тем, согласно исследованиям, проведенным за последние 25-30 лет и освещенным в доступной литературе, значительную долю кишечных болезней, составляют иерсиниоз и псевдотуберкулез, обусловленные бактериями рода Yersinia (Каврук JI.C., Бритова С.В., Гиряева И.О., 1983; Субботин В.В., Сидоров М.А., 2004).

В ветеринарном аспекте проблема иерсиниоза сельскохозяйственных животных до настоящего времени остается недостаточно изученной. Несмотря на то, что в последние годы резко возрос интерес исследователей к изучению возбудителя иерсиниоза, крайне мало сведений о распространении болезни у различных видов животных в отдельных регионах Российской Федерации.(3ыкин Л.Ф., Щербаков А.А., Хапцев З.Ю., 2002).

Вместе с тем, наибольшую опасность иерсиниоз представляет именно в областях с холодным климатом, ввиду биологических свойств Y. enterocolitica, позволяющих микроорганизму развиваться, накапливаться и сохранять патогенные свойства при низких температурах (Куликовский А. В., Джентимирова К.М., 1993).

Следует помнить также об эпидемиологической значимости иерсиниоза. В Российской Федерации он занимает второе место среди пищевых инфекций после сальмонеллеза, а в Европе третье - после сальмонеллеза и колибактериоза (Wauters G., 1979; Perez-Trallero Е., Idigoras P., Solaun M.L., Zigorraga С, 1992; Jackova S., Subik J., 1995; Смирнов И.В., 2004).

Ряд исследователей рассматривают свиней как наиболее значимый резервуар Y. enterocolitica и в большинстве случаев именно этот вид животных считают наиболее опасным источником патогенных для человека сероваров, в частности 03 (Szita J., Svidro А., 1976; Bockemuhl J., Schmitt H., Roth J., Saupe E., 1979; Wauters G., 1979; Schiemann D.A., 1987; Кирьянов E.A, Савчук И.И., 1989; de Boer E., Nouws J.F., 1991; Perez-Trallero E., Idigoras P., Solaun M.L., Zigorraga C., 1992; Jurikova K., Gottwaldova В., Jackova S., Subik J., 1995; Borie C.F., Jara M.A., Sanchez M.L., San Martin В., Arellano C., Martinez J., Prado V., 1997; Funk J.A., Troutt H.F., Isaacson R.E., Fossler C.P., 1998; Гурский П.Д., Шашенько А.С., Корочкин Р.Б., 2003).

В настоящее время ветеринарная практика не располагает достаточным количеством методов, позволяющих эффективно диагностировать и профилактировать эту патологию. Разработка и внедрение мероприятий по диагностике иерсиниоза, позволит ветеринарным специалистам более адекватно оценивать этиологическую роль возбудителя инфекции, своевременно выявлять больных животных и проводить целенаправленную терапию.

Вместе с тем, выявление животных-иерсинионосителей, позволит применить комплекс мер для исключения дальнейшего распространения возбудителя и заражения людей.

Все вышеизложенное послужило основанием для выбора темы научно-исследовательской работы, определения цели и задач исследования.

Цель исследований - изучить распространение и усовершенствовать методы лабораторной диагностики иерсиниоза, а также определить основные биологические свойства Y.enterocolitica и клинико-морфологические изменения у поросят обусловленные возбудителем. Задачи исследования:

- изучить распространение Y.enterocolitica у поросят в хозяйствах Омской и Томской областей;

- усовершенствовать лабораторную диагностику иерсиниоза свиней на основе разработки питательной среды для ускоренного накопления Y.enterocolitica;

- изучить морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства культур Y.enterocolitica;

- определить патогенность Y.enterocolitica для лабораторных животных;

- изучить клинические и иммунобиохимические особенности течения иерсиниоза у свиней;

- установить патоморфологические изменения в органах поросят и лабораторных животных, обусловленные Y.enterocolitica.

Научная новизна

Впервые в хозяйствах Омской и Томской областей от поросят 2-3 месячного возраста изолированы культуры Y.enterocolitica и изучена степень распространения иерсиниоза, а также установлены географические особенности выделения био- и серовариантов Y.enterocolitica.

Результаты исследований культуральных, биохимических, серологических свойств культур Y.enterocolitica расширяют и дополняют сведения о биологии возбудителя иерсиниоза свиней.

Получены новые данные о чувствительности культур Y.enterocolitica выделенных от свиней к ряду антибактериальных препаратов, а также изучено сорбционное действие энтеросорбентов Зоокарба и Полисорба ВП на возбудителя иерсиниоза.

Существенно расширены и дополнены сведения о патоморфологических изменениях при спонтанном иерсиниозе свиней, обусловленном Y.enterocolitica, а также экспериментальном иерсиниозе (лабораторные животные).

Практическая значимость работы.

Результаты исследований использованы при разработке методических рекомендаций «Иерсиниоз свиней (диагностика, лечение, профилактика)», утвержденных Ученым советом ИЭВ Сибири и Дальнего востока СО РАСХН (2006).

Культура НАз4 депонирована в коллекции культур микроорганизмов ФГУП Государственного научного центра вирусологии и микробиологии «Вектор» (2005).

Разработан состав питательной среды для культивирования микроорганизмов Y.enterocolitica (патент N2005108115/13 009685).

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены:

- на ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (Омск, 2004, 2005, 2006 гг.);

- на Международной конференции посвященной 100-летию со дня рождения Н.Г. Кондюрина (Омск, 2004 г.);

- на Международной конференции по свиноводству (Омск, 2005 г.);

- на Международном съезде терапевтов (Барнаул, 2005 г.);

- на IX научно-практической конференции «Перспективные направления научных исследований молодых ученых» посвященной 75-летию УГАВМ (Троицк, 2005 г.);

- на V межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006 г.)

Публикации. Основные результаты научных исследований изложены в диссертационной работе и опубликованы в девяти научных статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа проиллюстрирована 18 таблицами, 27 рисунками. Список литературы включает 154 источника, из них 97 зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Иерсиниоз свиней имеет значительное распространение в свиноводческих хозяйствах Западно-Сибирского региона, средняя инфицированность составляет 5,8% с тенденцией нарастания в осенний период. Чаще всего выделяется Y.enterocolitica сероварианта 03, четвертого биоварианта (79,0%); реже 09 (10,5%) и 05,27 (10,5%) - второго биоварианта.

2. В большинстве случаев иерсиниоз свиней протекает в ассоциативной форме, что подтверждается выделением Y.entericolitica в ассоциации с E.coli (85,0%), P. vulgaris (48,0%), Kleb. Pneuponiae (5,0%), Ser. spp. (11,0%) и Ps. aeruginosa (11,0%).

3. Предложенный состав питательной среды с добавлением экстракта головного мозга крупного рогатого скота, позволяет значительно увеличить объем бактериальной массы и сократить сроки культивирования Y.enterocolitica до 20-24 часов.

4. Культуры Y.entericolitica, выделенные в хозяйствах Омской области от свиней с клиническими признаками диареи, чувствительны к офлоксацину, ципрофлоксацину, цефоперазону, левомицетину и стрептомицину. Наиболее эффективным сорбционным действием в отношении Y.enterocolitica обладает энтеросорбент Полисорб ВП.

5. Культуры Y.enterocolitica, выделенные от поросят с клиническими признаками диареи, проявляют патогенные свойства в отношении белых мышей после предварительного введения преднизолона, что подтверждается их гибелью с характерными клиническими признаками и патоморфологическими изменениями и выделением возбудителя.

6. Иерсиниоз свиней сопровождается диареей, перемежающейся лихорадкой, кахексией, тахикардией, артритами и дерматитами. В гематологическом профиле наблюдается достоверное увеличение количества лимфоцитов и моноцитов, при снижении лейкоцитов и эритроцитов, а в сыворотке крови снижение уровня общего белка и увеличение а- и у-глобулинов, а также БАСК.

7. У поросят, естественно зараженных Y.enterocolitica регистрируется гиперемия слизистой оболочки кишечника, катарально-геморрагический энтероколит; застойная гиперемия, зернистая дистрофия, в некоторых случаях некробиоз гепатоцитов; зернистая дистрофия, реже паренхиматозный нефрит; гиперпластический спленит; хронический пролиферативный лимфаденит.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований использованы при разработке методических рекомендаций «Иерсиниоз свиней (диагностика, лечение, профилактика)», утвержденных Ученым советом ИЭВ Сибири и Дальнего востока СО РАСХН (20.06.2006г, протокол № 2).

2. Разработан состав питательной среды для культивирования микроорганизмов Y.enterocolitica (патент N2005108115/13 009685).

3. Фактический материал диссертационной работы используется в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах микробиологии, эпизоотологии, гистологии и патологической анатомии ряда вузов страны.