Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Анатомо-гистологическая характеристика печени бурятской грубошерстной овцы

На правах рукописи

Убашеев Олег Иннокентьевич

АНАТОМО-ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕЧЕНИ БУРЯТСКОЙ ГРУБОШЕРСТНОЙ ОВЦЫ

16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Улан-Удэ, 2003

Работа выполнена в Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им.В.Р.Филиппова

Научный руководитель: - Заслуженный деятель науки

Республики Бурятия и России, доктор ветеринарных наук, профессор Кирилл Антонович Васильев

Официальные оппоненты: - доктор биологических наук

Тармакова Светлана Степановна -доктор биологических наук Лебедева Светлана Николаевна

Ведущая организация: Бурятский государственный университет

Защита состоится «04» декабря 2003 г в 10 часов на заседании Диссертационного совета в Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р.Филиппова (670020, г. Улан-Удэ, ул.Пушкина, 8)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова

Автореферат разослан «3» ноября 2003 г.

Ученый секретарь Диссертациойного совета

к.в.н., доцент а л/_ Игумнов Геннадий Александрович

£оот- А

\&5"с>5

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Среди домашних животных овца обладает самой разносторонней продуктивностью (шерсть, мясо, молоко, овчина), что обусловливает высокую рентабельность овцеводства. В Бурятии оно было развито только в виде номадного (кочевого, подвижного) животноводства. Повышение эффективности его в республике может быть достигнуто путем производства дешевой баранины, овчины и шерсти за счет возрождения генофонда аборигенных бурятских овец, которые обладают уникальными особенностями с позиций регионального природопользования.

Аборигенная бурятская овца находилась в трудных условиях содержания и кормления только за счет подножного корма. В процессе эволюционного развития она приобрела ряд важных качеств, в частности, способность сопротивляться суровым зимним условиям Забайкалья и неприхотливость к кормовому режиму (Д.К. Миронов, 1986). Известно, что аборигенные бурятские овцы отличались высокой способностью к нагулу и быстрому восстановлению зимних потерь живой массы (Р.П. Пилданов, 1975). Кроме того, местные бурятские грубошерстные овцы, также как монгольские овцы, обладают особенностью большого содержания пуха в шерсти, которая считается высококачественной (Ю.М. Нагаев, И.И. Соколов, 1982). В последние десятилетия разведению овцы бурятской грубошерстной породы уделялось недостаточно внимания в связи с интенсивным развитием тонкорунного овцеводства.

Дальнейшее успешное развитие овцеводства в Республике Бурятия и в целом в России диктует необходимость проведения разносторонних исследований морфофизиологии организма грубошерстной овцы, в частности, органов пищеварительного аппарата: печени и поджелудочной железы. Это обусловлено запросами ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы, терапии, абдоминальной хирургии и рационального использования кормов овцами указанной породы.

Значительный интерес представляет исследование крупной железы - печени, выполняющей целый ряд жизненно важных функций и являющейся биохимической лабораторией в организме. Общеизвестно, что печени принадлежит центральное место в регуляции обмена -веществ в организме млекопитающих.

Немаловажное значение для углубленного понимания морфофизиологии аборигенной бурятской грубошерстной овцы имеют особенности строения ее печени, ибо суровые климатические условия существования и характер кормового рациона не могли не оказать влияния на тонкую структурно-функциональную характеристику печени и других органов этого номадного животного.

В доступной литературе сведения об анатомических, гистологических, цитологических, гистохимических и гистоэнзимологических особенностях печени овец бурятской грубошерстной породы отсутствуют, что и явилось основанием для проведения исследований по настоящей теме._,_.

РОС. НАЦИОНАЛЬНА* БИБЛИОТЕКА

1

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение особенностей структурно-функционального состояния печени аборигенной бурятской овцы в поетнатальном онтогенезе: у новорожденных в возрасте 1-3 дней, 4-5-месячных и взрослых особей (в возрасте 3-5 лет). Для достижения указанной цели были определены в настоящей работе следующие задачи:

1) определить в поетнатальном онтогенезе анатомические особенности печени овцы (топографию, линейные и весовые показатели);

2) выявить гистологические особенности печени овец в возрастном аспекте;

3) дать гистохимическую и гистоэнзимологическую характеристику печени овцы в поетнатальном онтогенезе;

4) дать цитологическую характеристику основных клеточных популяций печени овцы (наличие гипертрофированных, двухъядерных гепатоцитов) в процессе нормального роста и развития;

5) определить в поетнатальном онтогенезе состояние ядерно-цитоплазматического отношения в гепатоцитах печени овцы;

6) оценить морфометрические показатели печени овец;

7) дать цитофотометрическую характеристику полиплоидных гепатоцитов печени овец, количественное определение содержания в ядрах их ДНК. Научная новизна работы. Впервые дана анатомо-гистологическая, гистохимическая, гистоэнзимологическая, морфометрическая и цитологическая характеристика печени аборигенной бурятской грубошерстной овцы в поетнатальном онтогенезе. Определены линейные и весовые показатели печени и дана ее топография у овец трех возрастных групп (1-3-дневных, 4-5-месячных и взрослых), дана гистохимическая, гистоэнзимологическая, цитологическая, морфометрическая и цитофотометрическая характеристика гепатоцитов печени овцы.

Полученные данные составили банк данных по анатомии, гистологии, морфометрии, гистохимии и цитологии печени бурятской грубошерстной овцы.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований позволили получить сведения по анатомо-гистологической, структурно-метаболической (гистохимической, гистоэнзимологической), морфометри-ческой и цитологической характеристике печени аборигенной бурятской грубошерстной овцы в поетнатальном онтогенезе, которые в определенной степени могут объяснить особенности обменных процессов в организме, позволяющие ей быть устойчивой к условиям нашего региона в зимний период, быть неприхотливой к кормовому режиму и обладать высокой способностью к нагулу и восстановлению в короткий срок потерь в живой массе в зимний период.

Также результаты исследований могут быть использованы для ветери-нарно-санитарной и судебной экспертизы, при терапии и проведении абдоминальных операций у больных животных и для организации рационального питания овец указанной породы.

'1 ..' . 4

'V ? ч> *

.<4 Г-

Полученные сведения по анатомии, гистологии, морфометрии, гистохимии, гистоэнзимологии и цитологии печени бурятской грубошерстной овцы, в составе банка данных по морфофизиологии сельскохозяйственных животных могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах, при написании книг, руководств по сравнительной функциональной морфологии животных, для объяснения патогенеза и разработки лечебных мероприятий при заболеваниях печени овец указанной породы, а также при проведении ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы.

Внедрение результатов исследований. Полученные по теме данные находят применение при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедрах анатомии, гистологии, патологической анатомии и физиологии Бурятской и Иркутской государственных сельскохозяйственных академий, Бурятского, Хакасского, Омского, Мордовского и Монгольского университетов.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на:

- научно-производственных конференциях Бурятской государственной сель-

скохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2001, 2002 г.г.);

- научно-практической конференции Благовещенской государственной сель-

скохозяйственной академии (Благовещенск, 2002);

- Международной научной конференции «Возрастная физиология и патология

сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию профессора В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2003).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1) выявлены особенности анатомо-гистологической, гистохимической и гисто-энзимологической характеристики печени бурятской аборигенной овцы в процессе нормального роста и развития в постнатальном онтогенезе;

2)установлена зависимость цитологической характеристики клеточных популяций печени бурятской аборигенной овцы от периодов ее постнатального онтогенеза;

3) представлены морфометрические данные печени овец в возрастном аспекте;

4) дана цитофотометрическая характеристика полиплоидных гепатоцитов с количественным определением содержания ДНК в их ядрах.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 140 страницах компьютерного текста, состоит из введения и 5 глав, включающих обзор литературы, материал и методы исследований, материал собственных данных, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список литературы, включающий 230 отечественных и иностранных источников. Работа иллюстрирована 11 таблицами, 32 рисунками, макрофотографиями и микрофотографиями.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования анатомо-гистологических и цитологических особенностей печени бурятской грубошерстной овцы в постнатальном онтогенезе проводили на материале 9 животных, которые входили в 3 возрастные группы: 1) новорожденные ягнята, 2) 4-5-месячные баранчики, 3) взрослые бараны (3-5 лет).

У животных всех возрастных групп изучали топографию печени, оценивали ее внешний вид, определяли размеры и массу органа. Вычисляли отношение массы печени к массе тела животного в процентах. Для каждого возраста определяли обеспеченность животного печенью (в граммах).

Фиксацию кусочков печени проводили в 10% нейтральном формалине, жидкости Карнуа. Полученные срезы органа после депарафинирования окрашивали гематоксилин-эозином и пикрофуксином по ван Гизону (Г.А. Меркулов, 1969; О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий, 1982; В.Г. Елисеев и соавт., 1967).

Для оценки морфофункционального состояния печени овец трех возрастных групп использовали некоторые гистохимические и гистоэнзимологиче-ские методы. В свежезамороженных срезах печени, полученных ва микротом-криостате (МК-25), выявляли содержание гликогена ШИК-реакцией.

Уровень содержания гликогена оценивали в баллах по Г.Г. Автандилову (1990).

Для оценки состояния окислительно-восстановительных процессов в печени овец бурятской грубошерстной породы разных возрастных групп выявляли активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ-азы) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ-азы) по Нахласу (Э. Пирс, 1962; Р. Лилли, 1969). Количественную оценку активности ферментов проводили по методу С.Б. Стефанова и Н.С. Куха-ренко (1988).

Содержание дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в ядрах гепатоцитов определяли цитофотометрически в мазках суспензированной ткани печени барана, окрашенных по Фельгену. ДНК окрашивали в изолированных ядрах в пурпурно-красный цвет (Э. Пирс, 1962; В.Г. Елисеев и соавт., 1967; Г.А. Меркулов, 1969; Ю.Р. Хруст и соавт., 1978).

Фотометрирование ДНК в ядрах изолированных гепатоцитов осуществляли на цитофотометре МИФ-К (Ю.Р. Хруст и соавт., 1975). Количество ДНК в ядрах гепатоцитов, выраженное в относительных единицах по показаниям числового вольтметра, высчитывали как произведение концентрации ДНК на площадь ядра.

Стандартом диплоидного набора хромосом (количества ДНК) служили результаты математической обработки данных цитофотометрии (количества ДНК-фуксина) в окрашенных по Фельгену ядрах лимфоцитов крови этих же овец (Т.И. Гришина, С. Мюллер, 1978). Получены данные по классам плоид-ности гепатоцитов на основании исследований их ядер.

Микроскопирование и микрофотографирование гистологических, гистохимических и цитологических препаратов, а также морфометрические исследования осуществляли на немецком микроскопе «Мойс».

Полученные цифровые данные обрабатывали методами вариационной статистики с использованием непараметрических критериев Вилкоксона-Манна-Уитни (Г.Ф. Лакин, 1990; А.Е. Платонов, 2000; В.И. Сергиенко, 2001).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Анатомическое строение печени овец бурятской грубошерстной овцы

В брюшной полости овец бурятской грубошерстной породы определяли топографию печени. После извлечения печени определяли весовые и линейные показатели, затем брали кусочки печени для дальнейших исследований.

Печень бурятской аборигенной овцы - компактный орган, расположенный целиком в правом подреберье на уровне 8 межреберного пространства до позвоночного конца последнего ребра и немного выступающий за его каудаль-ный край.

Выпуклая диафрагмальная поверхность ее примыкает к диафрагме, а вогнутая висцеральная поверхность обращена к желудку и кишечнику. Печень удерживается в своем положении на диафрагме очень короткой венечной связкой - lig. coronarum, которая справа и слева продолжается в правую и левую треугольные связки - lig. triangulare dekstrum et sinistrum. Каудально хвостатый отросток печени соединен связками с правой почкой - lig. hepatorenale, с желудком - lig. hepatogastricum, с двенадцатиперстной кишкой - lig. hepato-duodenale. Последние две связки образуют малый сальник. Пупочная вена у новорожденных ягнят четко выражена и уже у 4-5-месячных баранчиков она полностью облитерируется и превращается в круглую связку - lig. teres.

Почти в центре висцеральной поверхности имеется углубление - ворота печени - porta hepatis. В области ворот печени располагаются 2-3 небольших лимфатических узла. На висцеральной поверхности лежит желчный пузырь -vesica fellea, его верхушка незначительно выступает за свободный край печени.

По дорсальному тупому краю печени по желобу проходит задняя полая вена - v. cava caudalis и имеется углубление для пищевода - incisura hepatis oesophagea. Вентральный край имеет надрезы, разделяющие печень на доли. Хвостатый отросток соприкасается с правой почкой, формируя для нее почечное вдавление - impressio renalis.

У новорожденных ягнят печень ярко-красного цвета, с возрастом она становится красно-бурого цвета.

Как видно из вышеизложенного, топография и анатомическое строение печени овцы бурятской аборигенной породы не имеет существенных различий с таковыми, изложенными в учебной литературе (Климов А.Ф., 1950; Акаев-ский А.И., 1975).

Показатели массы и линейные размеры печени исследуемых животных приведены в таблице 1.

Как видно из приведенных в таблице данных, абсолютная масса печени новорожденных ягнят незначительна и равна 65,06 г, что составляет по отношению к массе тела 2,1%, а к массе печени взрослой особи - 9,0%. В период от новорожденное™ до 4-5-месячного возраста, т.е. до отъема ягнят от матери, печень растет интенсивно, опережая общий рост организма в 1,9 раза. В дальнейшем, рост печени и увеличение массы тела идут умеренно, и процентное соотношение массы печени к массе тела у взрослых баранов составляет 1,3%. Коэффициент роста печени в период от новорожденности до 4-5 месяцев составляет 7,47, а в период от 4-5 месяцев до 3-5 лет составляет всего 1,47. Рост массы тела с периода новорожденности до 4-5 месяцев увеличивается в 6,91 раз, а с 4-5 месяцев до 3-5 лет - в 2,47 раз.

Таблица 1

Весовые и линейные показатели печени овцы бурятской грубошер-

стной породы в постнатальном онтогенезе

Возраст баранов Масса животного, кг Масса печени, г Отношение массы печени в % Линейные Размеры, см

к массе тела к массе печени взр. особи длина ширина

Новорожденные 3,05 65,06±0,75 2,1 8,5 9,5+1,2 3,7±0,8

4-5 месяцев 21,1 486,0±0,75 2,3 67,9 20,5±1,67 12,3±1,4

Взрослые (3-5 лет) 54,4 715,0±0,75 1,3 100 24,5+2,5 16,0+1,75

Примечание: * - здесь и далее показатели достоверны в сравнении с

данными взрослых животных при Р<0,05.

Таким образом, печень баранов от рождения до 4-5 месяцев растет в 5,08 раз быстрее, чем в период от 4-5 месяцев до 3-5 лет. Масса печени от рождения до 4-5 месяцев в 1,9 раз быстрее растет по сравнению с массой тела.

У новорожденных ягнят относительная масса печени в 2 раза больше, чем у взрослых баранов.

Наши данные согласуются с данными ряда авторов (Пилданов Р.П., Миронов К.Д., 1975 и др.).

Приведенные данные роста массы печени подтверждают данные роста ее линейных размеров. Так, коэффициент роста печени в период от новорожденности до 4-5 - месячного возраста в длину составил 2,1, а в ширину - 3,3. В период от отъемного возраста до взрослой особи коэффициент роста составил в длину 1,2 и в ширину - 1,3 (рис. 1).

Материалы наших исследований показали, что отношение массы печени к массе тела новорожденных ягнят превышает таковую у взрослой особи в 2 раза.

Печень овцы бурятской аборигенной породы в постнатальном онтогенезе наиболее интенсивно набирает массу с рождения до возраста 4-5 месяцев, при этом несколько опережая рост массы тела.

Гистологическое строение печени овец

Печень новорожденных ягнят снаружи покрыта висцеральным листком и тонкой волокнистой капсулой (Глиссона), от которой вглубь органа отходят прослойки из соединительной ткани, разделяющей орган на дольки.

Паренхима печени имеет дольчатое строение. Долька имеет многогранную форму. В центре каждой дольки расположена центральная вена. Дольки отграничены друг от друга портальными трактами, где находятся междольковая вена и артерия, желчный проток, которые составляют печеночную триаду. На гистологических срезах печени вместо 5 или 6, как это имеет место у взрослых особей, хорошо заметны лишь 2 или 3 портальных тракта, расположенных по периферии дольки.

Паренхиму дольки составляют гепатоциш, которые окружают центральную вену. Гепатоциты образуют анастомозирующие друг с другом печеночные пластинки. Непосредственно вокруг центральных вен эти ряды расположены несколько радиально, а далее в средней и периферической части долек этот порядок нарушается и в расположении гепатоцитов не удается отметить определенной закономерности. Встречаются дольки, где нет никакого порядка в расположении клеток. Есть участки в паренхиме печени, где дольки можно отделить одну от другой по упорядоченному расположению гепатоцитов по периферии дольки (терминальная, пограничная пластинка).

Гепатоциты в дольке неодинакового размера. В середине дольки они несколько увеличены, чем по периферии. Среди гепатоцитов встречаются двухъядерные клетки и очень редко - трехъядерные и полиплоидные гепатоциты, чем компенсировалось размножение клеток, которое тормозится в постэмбриональном периоде, что подтверждалось отсутствием митотического деления клеток в дольке. Ядра в клетках имели округлую форму и содержали от 1 до 3 ядрышек.

Между печеночными балками располагаются синусоидные капилляры, которые образуют анастомозирующую сеть. У новорожденных ягнят синусоидные капилляры несколько растянуты и поэтому печеночные балки дальше отстоят друг от друга, чем обычно. Часто в капиллярах отмечалось присутствие эритроцитов. Синусоидные капилляры выстланы узкими вытянутыми с уплощенным ядром эндотелиальными клетками. Таких клеток большинство в выстилке синусоидов. Между эндотелиальными клетками располагаются более крупные распластанные по внутренней поверхности синусоидов клетки Купфера. Эти клетки вдаются в просвет синусоидов.

Полученные данные свидетельствуют о том, что печень новорожденных ягнят бурятской грубошерстной породы сформировалась анатомически, а гистологически находится на стадии дальнейшего развития.

Печень овец в возрасте 4-5 месяцев построена из долек, имеющих форму усеченной пирамиды. В центре дольки располагается центральная вена, к которой радиально сходятся печеночные балки, состоящие из печеночных клеток, расположены капилляры (синусоидные), в которых течет смешанная кровь. Стенки капилляров образованы ретикулоэндотелиальными клетками. Клетки и синусы неотчетливо отграничены друг от друга тонкими прослойками соединительной ткани, в которых расположены триады, состоящие из меж-дольковой артерии, междольковой вены и желчного протока, собирающего желчь из внутридольковых желчных капилляров и несущих ее й желчевыво-дящие пути.

Гепатоциты составляют подавляющую часть клеток печени и выполняют основную часть свойственных ей функций. Ядра крупные, сферические с преобладанием эухроматина с одним - двумя ядрышками. Цитоплазма зернистая воспринимает кислые и основные красители.

Печень овец в возрасте 3-5 лет покрыта волокнистой капсулой из соединительной ткани, собранной в плотные пучки. От капсулы внутрь органа проникают тонкие волоконца, составляющие строму. Вся ткань печени разделена на дольки. Одна долька от другой отделяется портальными трактами по периферий дольки. В портальных трактах располагаются триады, в состав которых входят артерия, вена и желчный проток. На гистологических срезах печени взрослого животного можно отметить 4 или 5, очень редко 6 триад.

В центре каждой дольки находится центральная вена. Внутри дольки радиально к центральной вене расположены печеночные клетки. Они объединяются в 2-3 клетки и образуют печеночные балки. Многогранные печеночные клетки - гепатоциты содержат по одному овально-круглому ядру. В ядрах обнаруживается от 1 до 3 ядрышек. Отдельные клетки имеют по 2 ядра, а также увеличенные в размерах ядра с большим содержанием хроматина - полиплоидные ядра.

В промежутках между балками располагается сеть синусоидиых капилляров, которые собираются в центральные вены. На внутренней их поверхности, особенно в местах ветвлений капилляров встречаются клетки Купфера.

Полученные данные, по нашему мнению, свидетельствуют о том, что суровые условия существования овец бурятской грубошерстной породы обусловили некоторые особенности в гистологическом строении печени:

- наличие двухъядерных, гипертрофированных и полиплоидных клеток свидетельствует о повышенной способности печени овец этой породы к регенерации, т.е. к восстановлению структуры и функции этого жизненно важного органа, обусловливающего повышение сопротивляемости к суровым зимним условиям и неприхотливость к кормовому режиму;

- небольшое количество соединительнотканных волоконец, огходящих от капсулы внутрь органа, и отсутствие соединительнотканных перегородок между дольками свидетельствуют о развитЪй паренхиме печени, которая обеспечивает целый ряд важных функций в организме животного.

Гистохимические и гистоэнзИмологические исследования печени овец бурятской грубошерстной породы

К важнейшей активности гепатоцитов следует отнести участие в обмене углеводов.

В настоящем разделе работы дана оценка содержания гликогена в печени новорожденных ягнят, 4-5-месячных и 3-5-летних овец бурятской грубошерстной породы. Всего подвергнуто исследованию печень 9 животных.

Цифровые данные содержания гликогена в печени баранов бурятской грубошерстной породы приведены в таблице 2.

Таблица 2

Содержание гликогена в печени овцы бурятской грубошерстной __породы в постнатальном онтогенезе (М±ш)_

Возраст животных Уровень содержания гликогена, усл. ед. % содержания гликогена

Новорожденные 12,5±0,6* 4,75

4-5 мес. 115,8 ±2,0* 45,30

3-5 лет 173,3 ± 2,6 70,00

Как видно из данных, приведенных в таблице 2, наибольшее содержание гликогена отмечено в печени взрослых овец - 70%. У 4-5-месячных баранов количество гликогена в печени составило 45,3%, а у новорожденных - 4,75%, что соответственно меньше, чем у взрослых особей в 1,7 и 14 раз.

Гистохимически у баранов всех возрастных групп гликоген выявлялся в виде овальных гранул, заполнявших гепатоциты. В печени взрослых животных гранулы гликогена мозаично располагались в печеночных клетках. Более интенсивное содержание гранул гликогена выявлено в клетках по периферии печеночной дольки. Вокруг центральной вены содержание гликогена было неинтенсивным.

У 4-5-месячных особей гликоген представлен в виде гранул продолговатой формы, иногда в виде мелкой зернистости. Насыщение гликогеном как в перивенулярных клетках, так и в перипортальной зоне равномерно.

В клетках печени новорожденных ягнят содержание гликогена было незначительным. Встречались единичные гепатоциты, содержащие небольшое количество гранул гликогена.

Известно, что различные гистоэнзимологические реакции в органах и тканях, в том числе реакции на дегидрогеназы служат как индикаторы физического состояния организма в целом, состояния митохондрий, в частности (Э. Нирс, 1962). Данные гистоэнзимологических исследований позволяют оценить состояние биомембран печени.

Сукцинатдегидрогеназа и лактатдегидрогеназа относятся к группе дегид-рогеназ, являющихся окислительно-восстановительными ферментами. Указанные ферменты осуществляют важнейший этап обменных процессов в живых организмах - биологическое окисление веществ, образующихся в процес-

се обмена белков, жиров и углеводов. Столь важная роль окислительных ферментов в обеспечении обмена веществ в органах и тканях обусловливает большой интерес к их изучению.

В печени животных трех возрастных групп определяли активность следующих окислительно-восстановительных ферментов: сукцинатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы.

Оценку уровней активности указанных ферментов проводили по распределению оптической плотности диформазана на микропрепаратах.

Данные по оптической плотности гистоэнзимологической реакции на сук-цинатдегидрогеназу в срезах печени баранов сведены в таблицу 3.

Таблица 3

Распределение оптической плотности препаратов печени баранов с гистоэнзимологической реакцией выявления активности

Возраст животных Оптическая плотность гистоэнзимологической реакции

«м» - малая плотность, усл.ед. «с» - средняя плотность, усл.ед. «б» - большая плотность, усл.ед.

новорожд. 2,0 ±0,32 3,7 ± 0,32* 2,6 ±0,22

4-5 мес 2,8 ± 0,22 3,7 ± 0,22* 4,3 +0,43*

3-5 лет 2,6 ± 0,43 5,0 ±0,32 2,4 ± 0,22

Из данных таблицы видно, что в печени взрослых баранов преобладает средняя плотность («с») гранул диформазана - 5,0±0,32 усл. ед., которая превышает таковую у баранов младших возрастов в 1,3 раза. У баранов 4-5-месячного возраста гранулы диформазана имеют большую плотность («б»), равную 4,3±0,43 усл. ед., в то время как эти же показатели меньше у взрослых особей в 1,7, а у новорожденных - в 1,5 раза.

В целом, в печени животных всех трех возрастных групп малая плотность («м») гранул диформазана была примерно одних величин. У животных 4-5-месячного возраста и новорожденных отмечена средняя плотность («с») на одном уровне.

Распределение гранул диформазана при гистоэнзимологической реакции на сукцинатдегидрогеназу в дольках печени было различным у овец разных возрастных групп. У взрослых животных активность сукцинатдегидрогеназы была выше в гепатоцитах по периферии долек. У баранов в возрасте 4-5 месяцев гранулы диформазана обнаруживались равномерно во всех клетках долек печени и чаще встречались гепатоциты с большой плотностью («6«) гранул диформазана.

Результаты исследований активности лактатдегидрогеназы в печени овец разных возрастов приведены в таблице 4.

Полученные данные свидетельствуют о том, что распределение гранул диформазана при выявлении активности лактатдегидрогеназы в печени испытуемых животных по интенсивности оптической плотности гистоэнзимологи-

ческой реакции однотипно с таковым в печени баранов при выявлении активности сукцинатдегидрогеназы.

В целом, активность лактатдегидрогеназы у взрослых особей и новорожденных ягнят была несколько ниже, чем таковая у баранов 4-5-месячного возраста.

Таблица 4

Распределение оптической плотности гранул диформазана при вы-

явлении активности лактатдегидрогеназы в печени овец (М±т; п=9)

Возраст Оптическая плотность гранул диформазана на препаратах

«м» - малая плотность, усл.ед. «с» - средняя плотность, усл.ед. «б» - большая плотность, усл.ед.

новорожд. 1,5 ±0,32 3,4 ± 0,22 2,8 ± 0,43

4-5 мес. 1,8 ±0,22 3,2 ± 0,43* 4,3 ±0,33*

3-5 лет 1,6 ±0,22 4,1 ± 0,32 2,0 ±0,43

В ходе биологического окисления происходит выработка и накопление энергетических ресурсов в клетке. Все гепатоциты участвуют в окислении, однако перипортальные гепатоциты, получающие богатую кислородом кровь, по всей вероятности, обладают большей способностью к аэробному метаболизму. По нашим данным, перипортальные клетки проявляют большую активность в окислительно-восстановительных процессах.

В печени новорожденных ягнят и баранов 4-5-месячного возраста гранулы диформазана были мелкие и округлой формы. В печени взрослых баранов последние были несколько крупнее.

Такой тип изменений гранул диформазана в печени взрослых овец, по-видимому, свидетельствует, по нашему мнению, о некоторых структурных особенностях митохондриальных мембран, характеризующих функциональное изменение их проницаемости, что проявляется чаще у взрослых баранов бурятской грубошерстной породы из-за скудности кормления и суровых климатических условий в зимний период года.

Повышение активности указанных ферментов, несомненно, свидетельствует об усилении окислительно-востановительных процессов в организме и торможении перекисного окисления лгагадов в биомембранах печени баранов бурятской грубошерстной породы как показатель их хорошего физиологического состояния.

Цитофотометрическая оценка содержания ДНК в ядрах полиплоидных клеток печени овец в различные периоды постнатального онтогенеза

Исследование морфофункциональных особенностей печени овцы бурятской грубошерстной породы представляет значительный теоретический и практический интерес.

Сведения из научной литературы свидетельствуют о хорошей приспособляемости и возможности овец этой породы в экстремальных условиях суще-

ствования сохранять гомеостаз в организме. Немаловажную роль в восстановлении гомеостаза играет печень - самая крупная железа у животных.

Полиплоидизация клеток - закономерный процесс онтогенеза многих тканей у разных животных и растений. Нередко именно полиплоидия - основной способ постнатального роста тканей. Была установлена необходимость поли-плоидизации для полноценного выполнения некоторыми тканями своих специфических функций. Появились обоснованные соображения о значении клеточной полиплоидии в эволюции организмов [В.Я. Бродский, И.В. Урываева, 1981].

Правило относительного постоянства дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в клетке является первым доказательством генетической роли ее, надежным и точным методом оценки числа и состава полиплоидных клеток в любой ткани.

Содержание ДНК в ядрах гепатоцитов определяли цитофотометрически в мазках суспензированной ткани печени, являющихся наилучшими препаратами для фотометрии.

Результаты исследований ядер гепатоцитов по классам плоидности показали, что у новорожденных особей наблюдается равное содержание клеток с диплоидным, тетраплоидным и промежуточным (2п—*4п) набором хромосом (рис. 1).

Рис 1. Распределение ядер гепатоцитов баранов разных возрастных групп по классам плоидности.

Примечание: * - значения достоверны по сравнению с показателями 3-дневных баранов, Р<0,05.

По сравнению с показателями баранов других возрастных групп отмечается большое содержание гепатоцитов с высокой плоидностью (4п, 8п и 16п)

(32,6%) и наличие клеток с промежуточным набором хромосом (4п-»8п, 8п—>16п), чья доля составила 18% от общего числа клеток.

В возрасте 4-5 месяцев у баранов происходит увеличение числа диплоидных гепатоцитов на 31,4% по сравнению с таковыми у 3-дневных баранов и снижение количества гепатоцитов с высокой и промежуточной плоидностью, которые в этот срок составляют 30,5% от общего числа.

У 3-5-летних баранов клетки представлены в основном диплоидным классом, гепатоциты с высокой плоидностью составляют 23,2%.

При изучении общего содержания ДНК в ядрах гепатоцитов баранов его наибольшее значение отмечается у новорожденных ягнят. Оно превышает аналогичный показатель 4-5-месячных и 3-5-летних баранов соответственно на 47 и 61,4% (рис. 2).

600

кол-во ДНК, 400 ота.ед. 200

0

1-Здня 4-5мес. 3-5лег

возраст животных

Рис. 2. Общее содержание ДНК в ядрах гепатоцитов баранов разных возрастных групп

Примечание: * - значения достоверны по сравнению с показателями 3-дневных баранов, Р<0,05.

В целом, цитофотометрические данные исследования печени баранов бурятской грубошерстной породы свидетельствуют о том, что в печени новорожденных ягнят, наиболее ранимых при воздействии различных факторов окружающей среды, выявлено высокое содержание полиплоидных клеток, увеличение общего содержания ДНК по сравнению с таковым у овец 4-5-месячного и 3-5-летнего возрастов. Эти данные следует рассматривать как положительный факт, ибо полиплоидные клетки обладают большей функциональной активностью и характеризуют более ранний и интенсивный запуск процесса физиологической и репаративной регенерации в печени. Процессы клеточной полиплоидизации и пролиферации непосредственно зависят от ядерной ДНК, ибо повышение или понижение уровня содержания которой определяет стимуляцию или замедление восстановительных процессов в таком важном органе как печень.

В.Я. Бродский, И.В. Урываева (1981) отмечают, что полиплоидные клетки чаще встречаются в тканях, где высок уровень спонтанных повреждений хро-

Ик

мосом и рассматривают это как фактор генетической защиты ткани. Несомненно, установленный факт свидетельствует о выживаемости новорожденных ягнят бурятской грубошерстной породы, большой приспособляемости особей друшх возрастных групп.

Морфометрические и цитологические исследования печени овец бурятской грубошерстной породы разного возраста

Одним из показателей дня количественной характеристики печени животных является размер долек, в частности, их площадь. Определение этих показателей важно при изучении роста печени у животных в постнатальном онтогенезе.

Площадь долек печени определяли в 10 полях зрения в каждом из 3-х препаратов от животных трех возрастных групп. Цифровые данные приведены в таблице 5.

Таблица 5

Площадь печеночных долек овец бурятской грубошерстной породы в постнатальном онтогенезе (М±т; п=30)

Группы овец Площадь дольки, мм

Новорожденные ягнята (1-3 дня) 0,34 + 0,00045*

Баранчики 4-5-месячного возраста 1,73 ± 0,0043*

Бараны 3-5-летнего возраста 2,6 + 0,0036

Как видно из таблицы, площадь печеночной дольки баранчиков к 4-5-месячному возрасту достигает 1,73 ± 0,00043 мм2, что превышает в 5 раз площадь долек новорожденных ягнят - 0,34 ± 0,00045 мм2. К 5- летнему возрасту площадь печеночной дольки достигает 2,6 ± 0,0036 мм2, что в 7,6 раза больше площади печеночной дольки у новорожденных ягнят. Сопоставляя полученные данные, можно сделать вывод о том, что до 4-5-месячного возраста овец печень интенсивно увеличивается в массе.

Основные типы клеток в печени

Гепатоциты составляют 80% клеток печени и выполняют основную часть свойственных ей функций. Функциональная активность гепатоцитов проявляется в участии их в захвате, синтезе, накоплении и химическом преобразовании веществ, которые в дальнейшем могут попадать в кровь или желчь.

При проведении подсчета клеток в 10 полях зрения в каждом лз 3 препаратов печени овец бурятской грубошерстной породы всех возрастных групп

были определены основные типы клеток в печени. Данные отражены в таблице 6.

При анализе данных таблицы 6 отмечено, что высокий процент гепатоци-тов выявлен у 4-5-месячных баранчиков и взрослых 5-летних баранов, что составляло 82,8 и 80,0% соответственно. У животных этих групп и дольки были по площади больше, чем у новорожденных, у которых количество гепа-тоцитов составило 73,8%.

Что касается купферовских клеток, то их в наибольшем количестве отмечалось в печени новорожденных ягнят - 20%. Такое повышенное количество клеток Купфера можно объяснить тем, что у новорожденных ягнят печень до рождения является органом гемопоэза и эту функцию она выполняет частично после рождения в течение некоторого времени. После угасания этой функции, оставшиеся эритроциты разлагаются и продукты разложения фагоцитируются клетками Купфера. Кроме того, из таблицы видно, что несколько повышенным является количество купферовских макрофагов у 3-5-летних баранов (15,1%), что можно связагь с гибелью единичных гепатоцитов при усилении перекис-ного окисления липидов и нарушении метаболических процессов.

Таблица 6

Основные типы клеток в печени овец бурятской грубошерстной породы в зависимости от возраста

Группы овец Гепатоциты Купферов-ские клетки Холангио-циты Эндотелиоци-ты

абс. % абс. % абс. % абс. %

Новорожденные 369 73,8 100 20 9 1,8 10,4 2,1

Баранчики 4-5 мес. 414 82,8 56 11,2 14 2,8 12 1,9

Бараны 3-5-летние 400 80,0 75,6 15,1 12 2,4 10 2,1

По нашим данным, содержание холангиоцитов и эндотелиоцитов в печени овец всех возрастных групп было примерно на одинаковом уровне.

Изучение размеров гепатоцитов в печени

Для цитологической характеристики гепатоцитов в дольке печени и оценки их функциональной активности определяли размеры (площадь) клеток печени в дольке в перивенулярной, интермедиальной и перипортальной зонах. Результаты исследований представлены в таблице 7.

Таблица 7

Размеры гепатоцитов в дольках печени у овец бурятской грубошерстной породы, мкм2 (М±т; п=30)

Группы овец Перивенулярные гепатоциты Интермедиальные гепатоциты Перипортапьные гепатоциты

Новорожденные ягнята (1-3 дня) 19,9+0,49* 20,1 ±0,48* 19,3±0,40*

4-5-месячные баранчики 20,8+0,42* 24,910,43* 21,9±0,21*

Бараны 3-5-летаего возраста 23,4±0,61 28,8±1,03- 25,5±1,42

Из таблицы 7 видно, что клетки, расположенные в центральных и периферических зонах дольки, отличаются друг от друга по размерам. Так, у всех животных клетки в центральной зоне долек имеют большие размеры: у новорожденных - 20,1±0,48, у 4-5-месячных - 24,9±0,43, у 5-летних - 28,8±1,03 мкм2. В то же время клетки центральной зоны долек имеют наибольшие размеры по сравнению с таковыми у новорожденных ягнят и 4-5-месячных баранчиков. Это хорошо согласуется литературными данными о наибольшей функциональной активности гепатоцитов, расположенных в интермедиальной зоне.

Данные таблицы 7 свидетельствуют о том, что в дольках печени новорожденных ягнят размеры клеток в интермедиальной зоне незначительно отличаются от клеток перивенулярной и перипортальной зон. Это может быть связано с тем, что у новорожденных ягнят еще окончательно не завершена диффе-ренцировка гепатоцитов в зависимости от их функции.

Анализируя показатели размеров клеток у 4-5-месячных баранчиков и у 35-летних баранов, можно сделать вывод о том, что у животных в этих группах интермедиальные гепатоциты по размерам превышают перивенулярные и пе-рипортальные, что связано с их функциональной активностью.

Исследования ядерно-цитоплазматического отношения гепатоцитов печени овец

Известно, что ядерно-цитоплазматическое отношение клеток может меняться на ранних стадиях роста и дифференцировки тканей и органов, а также при различных функциональных состояниях организма в целом. Этим и обусловлена значимость исследования этого показателя в процессе нормальной жизнедеятельности клеток.

В наших исследованиях ядерно-цитоплазматическое отношение вычисляли с помощью среднестатистических показателей площадей клеток и их ядер в 10 клетках в каждой из 5 долек в одном срезе печени. Исследования проводили на гистологических препаратах от трех животных.

Полученные данные сведены в таблицу 8.

Таблица 8

Ядерно-цитоплазматическое отношение гепатоцитов в печени овец грубошерстной породы в возрастном аспекте (М±т; п=30)_

Группы животных Ядерно-цитоплазматическое отношение

Новорожденные ягнята (1-3 дня) 0,237 ± 0,0009*

Баранчики 4-5-месячного возраста 0,174 ±0,0017*

Бараны 3-5-летние 0,143 ±0,0011

Из данных таблицы 9 видно, что наибольшая величина ядерно-цитоплазматического отношения в гепатоцитах выявлена в печени новорожденных ягнят, что обусловлено тем, что площадь цитоплазмы гепатоцитов в печени новорожденных ягнят было значительно меньше, чем таковая у 3-5-летних баранов, а площадь ядра в гепатоцитах печени новорожденных была выше, чем таковая в печени взрослых баранов и 4-5-месячных баранчиков. /

Морфометрия центральной вены овец

Несомненно, размеры кровеносных сосудов печени овец бурятской грубошерстной породы разного возраста (новорожденных, 4-5-месячных и 3-5-летних) будут существенно отличаться. Для оценки количественных показателей печени нами определена величина диаметра центральной вены после ее поперечного среза. Полученные данные приведены в таблице 9.

Таблица 9

Диаметр просвета центральных вен в дольках печени овец

бурятской грубошерстной породы разного возраста, мкм (М±т; п=30)

Группы овец Среднее значение диаметра центральных вен

Новорожденные ягнята (1-3 дня) 78,47 ±0,49*

Баранчики 4-5-месячного возраста 91,13 ±0,051*

Бараны 3-5-летнего возраста 163,57 ±0,218

Из приведенной таблицы видно, что изучаемый количественный показа-р тель был наибольшим у баранов 3-5-летнего возраста - 163,57± 0,218. Величины диаметра центральной вены печени новорожденных ягнят был наименьшим (78,47 ± 0,49 мкм). Промежуточное положение занимал этот показатель у ь 4-5-месячных баранчиков.

Заключение

Аборигенная бурятская овца, созданная на протяжении многих столетий методами народной селекции, является неотъемлемой частью природного ландшафта Байкальского региона. Проблема возрождения генофонда овцы бурятской грубошерстной породы представляет большой интерес в научном и практическом аспектах, ибо номадное животноводство экологически и эконо-

мически обосновано, так как дает высококачественную продукцию в виде дешевого мяса, овчины и шерсти.

Необходимым этапом в мероприятиях по возрождению бурятской аборигенной овцы является научное обоснование проблемы. Важным разделом в исследованиях по проблеме следует считать работы по оценке морфо-функционального состояния органов и тканей овец бурятской грубошерстной породы в постнатальном онтогенезе.

Для этого использован комплекс информативных методик, позволяющих судить о строении важного в функциональном отношении органа. Помимо анатомической и гистологической оценки состояния печени овец, осуществленных с помощью макроскопических, анатомо-топографических и микроскопических методик, дана цитологическая, цитофотометрическая, гистохимическая, гистоэнзимологическая и морфометрическая характеристика печени изучаемых животных. Данные о количественном содержании ДНК в ядрах гепатоцитов, полиплоидных клетках в печени получены на цитофотометре МИФ-К.

Морфометрические исследования печени овец проведены на микроскопе фирмы «Мойс» со встроенной видеокамерой и с помощью ряда прикладных программ.

Для характеристики энергетических ресурсов и окислительно-восстановительных процессов в печени овец в постнатальном онтогенезе выявлены уровни содержания гликогена и активности ферментов: сукцинат- и лактатдегидрогеназ.

В целом, указанный комплекс методических подходов позволил всесторонне и глубже оценить динамику роста и развития печени аборигенных овец.

Полученные данные изложены выше в тексте настоящего автореферата диссертации и отражены компактно ниже в выводах.

Выводы

1. Рост и развитие печени наиболее интенсивно происходит в период от новорожденное™ до 4-5 месячного возраста. В дальнейшем, рост массы печени и увеличение массы тела идут умеренно. Рост массы печени по сравнению с ростом массы тела у овец аборигенной породы в период от новорожденности до 4-5-месячного возраста опережает таковой в период от отъемного возраста до взрослого в 1,9 раза. Динамика изменений линейных размеров согласуется с ростом массы печени.

2. Наряду с общим сходством в строении печени имеются определенные возрастные особенности в структуре этого органа. У новорожденных ягнят долька печени недостаточно сформирована по упорядоченному радиальному расположению к центральной вене печеночных балок и синусоидных капилляров. Терминальная пластинка просматривается с трудом. Формирование стро-

1

мы печени происходит соответственно росту органа. С возрастом увеличивается количество коллагеновых волокон и огрубение стромы печени.

3. Площадь дольки печени новорожденных ягнят интенсивно увеличивается и достигает к 4-5 месяцам 1,73±0,004 мм2, что в 5 раз превышает площадь дольки 1-3-дневных ягнят. С 4-5-месячного возраста увеличение площади дольки идет значительно медленнее. Площадь дольки печени взрослого барана увеличивалась в сравнении с таковой у 4-5-месячных баранчиков в 1,5 раза. Изменения кровеносных сосудов, в частности, центральных вен с возрастом сводятся к увеличению периметра стенок и диаметра их просвета. Указанные показатели увеличиваются медленнее, чем размеры печеночной дольки.

4. Гепатоциты составляют основную массу клеток печени: у новорожденных - 73,8 %, у 4-5-месяных - 82,8 %, у взрослых - 80,0 %. Клетки Купфера отмечались в наибольшем количестве (20%) у новорожденных ягнят, что, возможно, связано с фагоцитозом разлагающихся эритроцитов в клетках печенй.

5. В дольках печени новорожденных ягнят размеры (площадь) клеток в разных зонах (перивенулярной, интермедиальной, перипортальной) незначительно отличаются по размерам друг от друга, что может быть связано с их незавершенной функциональной дифференцировкой. У 4-5-месячных баранчиков и 3-5-летних баранов в центральной зоне долек клетки имеют наибольшие размеры: у 4-5-месячных - 24,9±0,43мкм2 при размерах перивенулярных гепатоцитов 20,8±0,42, перипортальных - 21,9±0,21 мкм2; у 3-5-летних -28,8± 1,03 мкм2 в центральной зоне долек при размерах перивенулярных гепатоцитов 23,4±0,61 мкм2 и перипортальных - 25,5+1,42 мкм2. Такое увеличение размеров гепатоцитов в интермедиальной зоне дольки свидетельствует о повышенной функциональной активности гепатоцитов.

6. Увеличение размеров дольки происходит в основном за счет увеличения количества двухъядерных гепатоцитов, а также повышения числа гипертрофированных клеток. Наибольшее число двухъядерных клеток зафиксировано в печени 4-5-месячных баранчиков, а наибольшее количество гипертрофированных клеток - в печени взрослых баранов.

г 7. Отмечены изменения содержания гликогена в печени в зависимости от

возраста. Максимальное содержание гликогена отмечено у взрослых баранов -173,3±2,6 усл.ед. У 4-5-месяных баранчиков содержание гликогена составило ^ 115,8±2,0 усл.ед., что было значительно выше, чем таковое у новорожденных -12,0±0,6 усл.ед. Это, по-видимому, связано с ростом и повышенной активностью метаболических процессов в печени у баранов 4-5-месячного и 3-5-летнего возрастов. Насыщение гликогеном отмечалось в большей степени в клетках перипортальной зоны, чем в перивенулярных клетках. В печени взрослых животных гранулы гликогена располагались в гепатоцитах мочаич-но.

8. Активность сукцинатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в печени у новорожденных ягнят низкая; к 4-5-месячному возрасту отмечается повыше-

ние активности фермента, которая затем снижается с возрастом животного (35 лет).

9. Цитофотометрические данные печени овец свидетельствуют о том, что в печени новорожденных ягнят выявлено высокое содержание полиплоидных клеток, увеличение общего содержания ДНК, по сравнению с данными у овец 4-5-месячного и 3-5-летнего возрастов.

Практические предложения

1. Результаты исследований печени овец бурятской грубошерстной породы могут быть использованы для ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы, при терапии и проведении абдоминальных операций у больных животных и для организации рационального питания овец указанной породы.

2. Полученные сведения по анатомии, гистологии, цитологи!, морфомет-рии, гистохимии, гистоэгоимологии печени бурятской грубошерстной овцы составляют банк данных по морфофизиологии сельскохозяйственных животных и мщуг быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах, а также *при написании книг, руководств по сравнительной функциональной морфологии животных, для объяснения патогенеза и разработки лечебных мероприятий при заболеваниях печени овец.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Убашеев О.И. Анатомо-гистологическое строение печени новорожденных ягнят бурятской грубошерстной породы //Устойчивое развитие сельского хозяйства в бассейне оз. Байкал: Материалы Международной науч.-практ. конф., посвященной 70-летию БГСХА. - Улан-Удэ, 2000. - С. 151-153.

2. Убашеев О.И. Анатомо-гистологическое строение печени овцы бурятской грубошерстной породы //Сб., поев. 75-летию РНПВЛ. - Улан-Удэ, 2002. -С.171-173

3. Убашеев О.И. Гистоэнзимологическая оценка печени баранов бурятской грубошерстной породы разных возрастных групп //Материалы Международной науч. конф. «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию проф. В.Р. Филиппова. - Улан-Удэ, 2003.-С. 94-96.

4. Убашеев О.И. Оценка содержания гликогена в печени баранов бурятской грубошерстной породы в возрастном аспекте //Материалы Международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященная 90-летию проф. В.Р.Филиппова. - Улан-Удэ, 2003. - С. 96-97.

5. Убашеев О.И., Александрова Т.Е. Цитофотометрическая характеристика печени овцы бурятской грубошерстной породы в постнатальном онтогенезе //Материалы Международной научной конференции «Возрастная физиология- и патология с/х животных», посвященная 90-лггию проф. В.Р.Филиппова. - Улан-Удэ, 2003. - С. 97-99.

1

)

Лицензия ЛР № 021274 от 26 марта 1998 г.

Подписано в печать 4.11.2003. Бумага офс. №1. Формат 60x84/16. Усл.печл. 1,37. Уч.-изд.л. 1,65. Тираж 100. Заказ № 154. Цена договорная.

Издательство Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова, 670024, г. Улан-Удэ, ул.Пушкина, 8.

2oq? -/\

I&jo5-

»1850 5

Актуальность темы. Среди домашних животных овца обладает самой разносторонней продуктивностью (шерсть, мясо, молоко, овчина), что обусловливает высокую рентабельность овцеводства. В Бурятии оно было развито только в виде номадного (кочевого, подвижного) животноводства. Повышение эффективности его в республике может быть достигнуто путем производства дешевой баранины, овчины и шерсти за счет возрождения генофонда аборигенных бурятских овец, которые обладают уникальными особенностями с позиций регионального природопользования.

Аборигенная бурятская овца находилась в трудных условиях содержания и кормления только за счет подножного корма. Она приобрела ряд важных качеств, в частности, способность их сопротивляться суровым зимним условиям Забайкалья и неприхотливость к кормовому режиму (К.Д. Миронов, 1986). Известно, что аборигенные бурятские овцы отличались высокой способностью к нагулу и быстрому восстановлению зимних потерь живой массы (Р.П. Пилданов, 1975). Кроме того, местные бурятские грубошерстные овцы, также как монгольские овцы, обладают особенностью большого содержания пуха в шерсти, которая считается высококачественной.

Дальнейшее успешное развитие овцеводства в Республике Бурятия и в целом в России диктует необходимость проведения разносторонних исследований морфофизиологии организма грубошерстной овцы, в частности, органов пищеварительного аппарата: печени и поджелудочной железы. Это обусловлено запросами ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы, терапии, абдоминальной хирургии и рационального использования кормов овцами указанной породы.

Представляет значительный интерес исследование крупной железы -печени, выполняющей целый ряд жизненно важных функций и являющейся биохимической лабораторией в организме.

Общеизвестно, что печени принадлежит центральное место в регуляции обмена веществ в организме млекопитающих. Она обеспечивает постоянство концентрации питательных веществ в общем кровотоке, синтезирует большинство белков плазмы крови, фосфолипиды, холестерин и контролирует постоянство уровня этих веществ в крови. Печень обеспечивает связывание и обезвреживание токсических веществ эндогенного и экзогенного происхождения. Продуцируемый ею секрет — желчь необходима для нормального пищеварения. Патология печени -органа, выполняющего разнообразные специфические функции в процессе жизнедеятельности организма животных, чрезвычайно сложна и многогранна и представляет одну из актуальных проблем современной медицины, ветеринарии и биологии. Несмотря на активное комплексное изучение целого ряда важных в теоретическом и практическом отношении вопросов патологии печени у домашних животных многое остается неясным.

Немаловажное значение для углубленного понимания морфофизиологии аборигенной бурятской грубошерстной овцы имеют особенности строения ее печени, ибо суровые климатические условия существования и характер кормового рациона не могли не оказать влияния на тонкую структурно-функциональную характеристику печени и других органов этого номадного животного.

В доступной литературе сведения об анатомических, гистологических, цитологических, гистохимических и гистоэнзимологических особенностях печени бурятской грубошерстной породы отсутствуют, что и явилось основанием для проведения исследований по настоящей теме.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение особенностей структурно-функционального состояния печени аборигенной бурятской овцы в онтогенезе: у новорожденных (1-3 дня), 5-месячных и взрослых особей (в возрасте 5 лет). Для достижения указанной цели были определены в настоящей работе следующие задачи:

1) определить в постнатапьном онтогенезе анатомические особенности печени овцы (топографию, линейные и весовые показатели);

2) выявить гистологические особенности печени овец в возрастном аспекте;

3) дать гистохимическую и гистоэнзимологическую характеристику печени овцы в постнатальном онтогенезе;

4) дать цитологическую характеристику основных клеточных популяций печени овцы (наличие гипертрофированных, двухъядерных гепатоцитов) в процессе нормального роста и развития;

5) определить в постнатальном онтогенезе состояние ядерно-цитоплазматического отношения в гепатоцитах печени овцы;

6) оценить морфометрические показатели печени овец;

7) дать цитофотометрическую характеристику ядер гепатоцитов печени овцы, количественное определение содержания в них ДНК.

Научная новизна работы. Впервые дана анатомо-гистологическая, гистохимическая, гистоэнзимологическая, морфометрическая и цитологическая характеристика печени аборигенной бурятской грубошерстной овцы в постнатапьном онтогенезе. Определены линейные и весовые показатели печени и дана ее топография у овец трех возрастных групп (1-3-дневных, 4-5-месячных и взрослых), дана гистохимическая, гистоэнзимологическая, цитологическая, морфометрическая и цитофотометрическая характеристика гепатоцитов печени овцы.

В целом, полученные данные составили банк данных по анатомии, гистологии, гистохимии и цитологии печени бурятской грубошерстной овцы. Они могут быть использованы для ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы, при терапии и проведении абдоминальных операций у больных животных и для организации рационального питания овец указанной породы.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований по теме позволили получить сведения по анатомо-гистологической, структурно-метаболической (гистохимической, гистоэнзимологической) и цитологической характеристике печени аборигенной бурятской грубошерстной овцы в онтогенезе, которые в определенной степени могут объяснить особенности обменных процессов в организме, позволяющие ей быть устойчивой к условиям нашего региона в зимний период, быть неприхотливой к кормовому режиму и обладать высокой способностью к нагулу и восстановлению в короткий срок потерь в живой массе в зимний период.

Полученные сведения по анатомии, гистологии, гистохимии, гистоэнзи-мологии и цитологии печени бурятской грубошерстной овцы, составляя банк данных по морфофизиологии сельскохозяйственных животных, могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах, при написании книг, руководств по сравнительной функциональной морфологии животных, для объяснения патогенеза и разработки лечебных мероприятий при заболеваниях печени овец указанной породы, а также при проведении ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы.

Внедрение результатов исследований. Полученные по теме данные находят применение при проведении лекций и практических занятий на кафедрах анатомии, гистологии, патологической анатомии и физиологии Бурятской и Иркутской сельскохозяйственных академий, Бурятского, Хакасского, Омского, Мордовского и Монгольского университетов. Кроме того, полученный материал может быть использован при написании учебно-методического пособия по анатомии сельскохозяйственных животных.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на:

- научно-производственных конференциях Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2001, 2002 г.г.);

- научно-практической конференции Благовещенской государственной сельскохозяйственной академии (Благовещенск, 2002);

- Международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных», посвященной 90-летию профессора В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2003).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1) выявлены особенности анатомо-гистологической, гистохимической и гистоэнзимологической характеристики печени бурятской аборигенной овцы в процессе нормального роста и развития в постнатальном онтогенезе;

2) установлена зависимость цитологической характеристики клеточных популяций печени бурятской аборигенной овцы от периодов ее постнаталь-ного онтогенеза;

3) дана цитофотометрическая характеристика ядер гепатоцитов с количественным определением содержания ДНК.

выводы

1. Рост и развитие печени наиболее интенсивно происходит в период от новорожденности до 4-5 месячного возраста. В дальнейшем, рост массы печени и увеличение массы тела идут умеренно. Рост массы печени по сравнению с ростом массы тела у овец аборигенной породы в период от новорожденности до 4-5-месячного возраста опережает таковой в период от отъемного возраста до взрослого в 1,9 раза. Динамика изменений линейных размеров согласуется с ростом массы печени.

2. Наряду с общим сходством в строении печени имеются определенные возрастные особенности в структуре этого органа. У новорожденных ягнят долька печени недостаточно сформирована по упорядоченному радиальному расположению к центральной вене печеночных балок и синусоидных капилляров. Терминальная пластинка просматривается с трудом. Формирование стромы печени происходит соответственно росту органа. С возрастом увеличивается количество коллагеновых волокон и огрубение стромы печени.

3. Площадь дольки печени новорожденных ягнят интенсивно увеличивается и достигает к 4-5 месяцам 1,73±0,004 мм2, что в 5 раз превышает площадь дольки 1-3-дневных ягнят. С 4-5-месячного возраста увеличение площади дольки идет значительно медленнее. Площадь дольки печени взрослого барана увеличивалась в сравнении с таковой у 4-5-месячных баранчиков в 1,5 раза. Изменения кровеносных сосудов, в частности, центральных вен с возрастом сводятся к увеличению периметра стенок и диаметра их просвета. Указанные показатели увеличиваются медленнее, чем размеры печеночной дольки.

4. Гепатоциты составляют основную массу клеток печени: у новорожденных - 73,8 %, у 4-5-месяных - 82,8 %, у взрослых - 80,0 %. Клетки Купфера отмечались в наибольшем количестве (20%) у новорожденных ягнят, что, возможно, связано с фагоцитозом разлагающихся эритроцитов в клетках печени.

5. В дольках печени новорожденных ягнят размеры (площадь) клеток в разных зонах (перивенулярной, интермедиальной, перипортальной) незначительно отличаются по размерам друг от друга, что может быть связано с их незавершенной функциональной дифференцировкой. У 4-5-месячных баранчиков и 3-5-летних баранов в центральной зоне долек клетки имеют наибольшие размеры: у 4-5-месячных — 24,9±0,43 мкм при размерах перивенулярных гепатоцитов 20,8±0,42, перипортальных — 21,9±0,21 мкм2; у 3-5-летних — 28,8±1,03 мкм2 в центральной зоне долек при размерах перивенулярных гепатоцитов 23,4±0,61 мкм2 и перипортальных - 25,5±1,42 мкм2. Такое увеличение размеров гепатоцитов в интермедиальной зоне дольки свидетельствует о повышенной функциональной активности гепатоцитов.

6. Увеличение размеров дольки происходит в основном за счет увеличения количества двухъядерных гепатоцитов, а также повышения числа гипертрофированных клеток. Наибольшее число двухъядерных клеток зафиксировано в печени 4-5-месячных баранчиков, а наибольшее количество гипертрофированных клеток — в печени взрослых баранов.

7. Отмечены изменения содержания гликогена в печени в зависимости от возраста. Максимальное содержание гликогена отмечено у взрослых баранов - 173,3±2,6 усл.ед. У 4-5-месяных баранчиков содержание гликогена составило 115,8±2,0 усл.ед., что было значительно выше, чем таковое у новорожденных - 12,0±0,6 усл.ед. Это, по-видимому, связано с ростом и повышенной активностью метаболических процессов в печени у баранов 4-5-месячного и 3-5-летнего возрастов. Насыщение гликогеном отмечалось в большей степени в клетках перипортальной зоны, чем в перивенулярных клетках. В печени взрослых животных гранулы гликогена располагались в гепатоцитах мозаично.

8. Активность сукцинатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в печени у новорожденных ягнят низкая; к 4-5-месячному возрасту отмечается повышение активности фермента, которая затем снижается с возрастом животного (3-5 лет).

9. Цитофотометрические данные печени овец свидетельствуют о том, что в печени новорожденных ягнят выявлено высокое содержание полиплоидных клеток, увеличение общего содержания ДНК по сравнению с данными у овец 4-5-месячного и 3-5-летнего возрастов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты исследований печени овец бурятской грубошерстной породы могут быть использованы для ветеринарно-санитарной и судебной экспертизы, при терапии и проведении абдоминальных операций у больных животных и для организации рационального питания овец указанной породы.

2. Полученные сведения по анатомии, гистологии, цитологии, морфометрии, гистохимии, гистоэнзимологии печени бурятской грубошерстной овцы составляют банк данных по морфофизиологии сельскохозяйственных животных и могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах, а также при написании книг, руководств по сравнительной функциональной морфологии животных, для объяснения патогенеза и разработки лечебных мероприятий при заболеваниях печени овец.

Заключение

Аборигенная бурятская овца, созданная на протяжении многих столетий методами народной селекции, является неотъемлемой частью природного ландшафта Байкальского региона. Проблема возрождения генофонда овцы бурятской грубошерстной породы представляет большой интерес в научном и практическом аспектах, ибо номадное животноводство экологически и экономически обосновано, так как дает высококачественную продукцию в виде дешевого мяса, овчины и шерсти.

Необходимым этапом в мероприятиях по возрождению бурятской аборигенной овцы является научное обоснование проблемы. Важным разделом исследований по проблеме следует считать работы по оценке морфофункционального состояния органов и тканей овец бурятской грубошерстной породы в постнатальном онтогенезе.

Для этого использован комплекс информативных методик, позволяющих судить о строении важного в функциональном отношении органа. Помимо анатомической и гистологической оценки состояния печени овец, осуществленных с помощью макроскопических, анатомо-топографических и микроскопических методик, дана цитологическая, цитофотометрическая, гистохимическая, и гистоэнзимологическая и морфометрическая характеристика печени изучаемых животных. Данные о количественном содержании ДНК в ядрах гепатоцитов, полиплоидных клетках в печени получены на цитофотометре МИФ-К.

Морфометрические исследования печени овец проведены на микроскопе немецкой фирмы «Motic Images-2001» со встроенной видеокамерой и с помощью ряда прикладных программ.

В целом, данные, полученные по цитофотометрии, морфометрии, гистохимии и гистоэнзимологии печени, несут углубленную информацию о росте и развитии печени овец бурятской грубошерстной породы в постнатальном онтогенезе и свидетельствуют о высоком методическом уровне проведенных исследований в диссертационной работе.

Таким образом, указанный комплекс методических подходов позволил всесторонне и глубже оценить динамику роста и развития печени аборигенных овец.

Полученные данные изложены и проанализированы выше в тексте настоящей диссертации и приведены ниже в выводах, являющихся логическим завершением проведенных исследований.