Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Аллергический метод диагностики бруцеллеза верблюдов

КАЗАХСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт

РГ6 од

2 5 АПН );;н'!

УДК 619. 616:981. ад-07

На правах рукописи

СЕИДАХИЕТОВА РОЗА ДЯАРОВНА

АЛЛЕРГИЧЕСКИ!! НЕТОД ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ВЕРБЛЮДОВ

16. 00. 03 - ветеринарная микробиология, иммунология, эпизоотология и инфекпионныэ болезни животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Апма-ш, 1994

Работа выполнена в отделе бруцеллеза Казахского НИШ Казахской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель - доктор ветеринарках наук,

профессор, член-корреспседент КааАСХН Н. П. Иванов

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных

Официальные оппонента: доктор ветеринарных наук , ЕИ, Пионтковский

доктор биологических наук, профессор М. К Ременцова •

. ■ • I

Защита состоится " ^ " Ог& 1994 г.

в час на заседании специализированного совета

Д 55. 03. 01 при Казахском научно-исследовательском ветеринарном институте по адресу: 480029, г.Апматы, проспект Райьибека, 223. х

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. •

Автореферат разослан " " О^^ -РФЛ ^д^. г

Ученый секретарь специализированного совета,

доктор ветеринарных наук Б. ф. Керимжанова

■г ^

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность аомн.В определенных геогрэфичеоких зонах Рес-сшки Казахо1ви большое знамение уделяеюя раэвмию верблюдо-з!вэ. Однако распросгранение ореди верблюдопогоповья разлнч-инфекцяонных болезней одерживвв! развитие этой отрасли. К вы заболеваниям'относится, в чаотности, бруцеллеэ. Ликвядэ-указанной инфекция представляет ообой одву из актуальных блем ветеринария и здравоохранения, так кэк она причиняв« читальный ущерб народному хозяйству и предотавляет поотоян-угрозу здоровью населения.

Одним из основных звеньев в общей комплексе противобруцел-аых мероприятий в верблюдоводстве являетоя дяэгностихе, осу-свленяе которой в наогоявде время проводимя, в основном, о эщью бактериологических и серологических методов яооледова-. При зим наиболее дооюверныы при получений полояятельно-зезулыата являетоя бактериологический,«« кэк обнаружение делл является неоспоримым доказательством наличия инфакшш. то по частоте выявления возбудителя болезни, трудоемкости )лнения и затратам этот метод значительно устулаег сероло->скому.

Серологические меюды являются более доступными для дро-1ния массовых исследований, достаточно эдвствительными, опе-[чными, но они не выявляю! всех больных бруцеллезом животных, ■ому большое иаучно-практичеокое значение шее! разработка ценных, более доступных в условиях отгонного верблпдоводст-I элективных способов диагностики бруцеллеза этого вида ад-ых. К одним из 18них методов диагностики относится аллерги- • вя проба.

Однако аллергическая реакция при бруцеллезе верблюдов изу-аедоататочно полно, 8 технике проведения её экотраполировэна

о 88ковой при исследовании крупного рогатого скота. При этом ( таются неизученными влияние на степень проявления аллергичесщ реакций видовой принадлекности бруцелл, паразитирующих в opr¡ ле кивотвых и бактериальных клеюк, из которых получен диэгно( кум. Hei данных о степени чувствительности отдельных участков вд поверхности юла верблюдов, проявлении аллергической реэкщ у различных половозрастных групп животных и влияния при этом ( аиологичеакогс состояния их.

Имеювдеоя в литература по этому вопросу денные (H.Jl.Ooipi видов, 19*1; А.А.Пальгов, 19^6; М.О.Солоницын, 19^9) свидетел; етвуют о перспективности его изучения с целью более широкого i пользования в ветеринарной практике.

Вышеизложенное подтверждает необходимость проведения соо: ветотвующах исследований по разработке высокочувствительных и специфичных диагностических препаратов, с помощью которых bos-U0XH8 прижизненная диагностика бруцеллеза у верблюдов.

ДОль и 88Пэзд доследовании. Целью настоящих исследований явилось усовершенствование диагностики бруцеллезе у верблюдов основе феномена пшерчувствительности замедленного типа, рэзв: щейоя прн этой заболевании.

Б этой связи на разрешение поставлены оледующие задачи:

1. Уточнить впивоотичеокую обстановку по бруцеллезу верб дов в Казахстане и определить биологические свойства культур целл, выделенных от верблюдов.

2. Изучить в сравнительном аопекте специфичность, сенсиб эирующе овойотва а ективнооть аллергенов, приготовленных из целл различной видовой принадлежности.

3. Установить специфическую чзвмзнн-лыюс« уэ.вшцишх у ков коки больных бруцеллезом верблюдов к аллергену ьз öfyi;e:u

- 3 -

'+.Иаыок81Ь оптимальные параметры (опоооб введения диэгпоо-<уиа, орока 54013 реакции) эллергопробы о цвльа диагноотикя бру-1лв39 У верблюдов.

5. Изучить показания алларгнчвокой пробы э орэзнендп о рв-тотаии оврологичеоких реакций у ииауниаярованных реадичннии отивобруцеллезныня венцянеыи верблюдов.

6. Установить эффективность оздоровительных мероприятий о юльэованием аллергичвокого метода дявгмоохшш я проиэводогввн-к условиях.

Начтод ярцрдрр. Установлена необходяяооть приготовления иплеконого дазгноогикуаа аз разных видов йруцеля. Получен еффв&-впый вллерген яа вакцинных втаимов бруцеля ( пв11*«пя1в йвг-1 ''»ЪохЧиа 104 м ) для диагноотикя бруцеллеза верблюдов. Ог-ботзнн оптиивльние параметры проведения аяпзргопробы: опоооб нугрякожное введение беэигольнны ииьекгорои) я место (бесаеро!-й участок паха; введения аллергена, орокя учете я оценка локаэв-й реакции. Изучена чувствительность замедленного типе на прэдлвга-

ий аллерген у данного вида животных поола прививка вокцяной йэ

!

амиа 82 и пронэкюным антигеном из бруцэлл. Установлена пригод-с!ь коиплекопого аллергена для контроля эпизоотичеокого благспо-чия-верблпдоп оголовья и оздоровления твбуноэ в кояплвков в друга-противобруцеллезными мероприятиями.

Практическая ценность роботр.Ооедлокеаы оптимальные параметры сведения эллергопробы при диагностике бруцеллезе верблюдов, пра-пение которой возводи« дсполиигельмо к другим методам выявлять льных животных.

Использование вакцинных ятзлаов бруцелл ( теШепии nвv~1 аьэг^ш для изготовления аллергена о целью дяагноагя-

бруцеллезз у верблюдов иовмиоет чу вшаи кельи ос препарата я,

- 4 -

зффективзость его применения.

Проведение комплексе противобруцеллезнцх мероприятий ооглао-по аредлояенной йами охеиа сокращав! ороки оздоровления верблюдоводческих хоэяёсгв os бруцеллезной инфекции и снихэв! затраты вв их проведение.

Внедрение.Результаты работ вошла в "Рекомендации по борьбе . с бруцеллезом верблюдов в хозяйствах Реопублики Казахстан" и попользуются в хозяйствах Алматянокой, Таидыкоргенокой я других областей.

Дсййавдб.дрлшнйд1..кр,1ш9....дшчся}жея.де. {щаян.Двшше ло ■изыокэяию и испытанию аллергене из бруцалл, результаты изучения эффективности аялергечеокой реакции при диагностике бруцеллеза верблюдов, oxea» оздоровления oí бруцеллезе верблюдоп оголовья о применением виутрнкохной аллергической пробы.

Дпр'ббапдр р^брщ. Нзтеряалн диссертации доложены не эаоеда-Нии Ученого совете КевНЙВИ (ежегодно 1990- 1993г.г.), конференции молодых учевых Казахского НИШ! (1991), рвоииреннои заседании оот-рудвлков отдела бруцеллеза КозНИШ, ыеалеСорэторнои заседании сотрудников КвзНИБИ (1993).

Стр-vmpa и обьец дясоертащщ.Дисоертошая издокена.на КЗ оц ницах машинописного текста и состоит из введения (4 стр), обзора литературы (22 стр.), результатов собственных исследований (70стр, выводов и практических предложений (2 стр.) л содержит 26 таблиц а 3 рисунка, опиоок попользованной плтвраиуры, включающей 203 наименования, в числе которых 178 отечественных авторов и 25 зарубежных и приложения. •

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и йеюды исследований

Рабога выполнена в отделе бруцеллеза Казахского иеучио-ас-кедовательокого ввгврваврного пнагпгута в хозяйствах Али8*еяокой» »лдикоргвнокой облаогей.

При выполнении изучаеаых задач иы пользовалиоь ебвдрннягн-в аэрологическими и бактериологическими иоюдаии доследований эворотов крови яивотних, дарепхиивюзних органов а яилфвичво-кх узлов пороках ованок в вербввдов.

Внутренние пвренхиавтозные органы к лкмф8!ич9окгв увяа вэрб-вдов о позитивная покаааняпая аллергических и серояогячэакпх 99КЦИЙ после их убоя подвергала баотериояогическоау аооледованап о общепринятой авюдико.

Бактериологическому доследовании била такяо подвергнул! внуг-зннпз пвренхиаетознне органы я лимфатические узлы й иорогшс сезон, попользованных для биологической яроби.

При идентификации вндэленнах нулыур, кроиа проверки гипкго-иольпнх, морфологических и кулмуральйих овойсгв, использовало зокцив агглтяноция иа огекле о позитивной а неравной онворол-зяи. Ди^ренциацию бруцеял проводили по обиелрияягыи иетодякаи.

Для установления диагностического значения аллергической эобц при бруделлезе верблюдов использовали бруделли» ЕШ, яаго-ззленний Хероононой Государственной биофабрикой 12,12.Ь9г., Гоо-лироль 42, серия 42, срок годности 16 месяцев я аллергена, пря-)ювленные нами по методике, предложенной Н.П.Ивановна о соавторам [985). Содержание остаточного азота э препаратах определяли по )уря, концентрации которого устанавливали в пределах 30-35 иг/р.

- б -

Аллергены готовила иа бруцали различной видовом принадлежности: В.roelitenate Rer-1 tB.fluie-61 jB.abortus IOf-!i;B.ebortusen.B2 ,19; в юкже Бруцеялв ебортуо выделенный oí вербвюдици (обовнвчен ив-ив B.ubortuo штамп "В"). Полученные таким образом препараты проверяли не стерильное» о помощью высева их на пртеяельные среды, бвввреднооть путем подкожного введения их белым мышам.

Изучение специфичности аллергенов проводили путем внутрякох boro введения их в дозе 0,1 мл морским свинкам, оеноибилизирован ным отдельно антигенами возбудителей оибирокой язвы, сальмонелле ев, кампилобактериовв, бруцеллеза, а также здоровым неуенсибиди-вировзнным животным. Результаты реакций учитывали через 24, чэоа.

Сенснбяляенрующае свойотва приготовленных аллергенов опреде ляли пятикратным подкожным введением их здоровым морским свинкам которых через 30 дней подвергали аллергичеокому исследованию, а сыворотки их крови проверяли в РА и РДЛ.

Активносеь испытуемых препаратов изучали в лабораторных и производственных уоловиях, соответственно, на морских свинках а верблюдах в сравнении о бруцвллином ВИВВ и общепринятым серологи чеокпмв тестами.

Аллергическую активность полученных нами препаратов определяли по степени вырааенности воспалительных реакций (в нм) через 24-72 чэоа после внутрикожиой ингекцив ах мгреким свинкам, сеиси билдзировонным бруцеллааи различной видовой принадлеиюсти, а та se спонтанно больным верблюдам.

Интенсивность воспалительного npoueoea при этом, или выраже яооть аллергической реакция у верблюдов оценивалась в Kpeursx: + - ревмер увеличения кожной складки в I мм; ++ - «гстветитвовал

- 7 -

I до 3 им я ♦++ - более 3 «м.

Указанными параметрами мы польвоваляоь при дальнейших верованиях я убеждались в том, что они ооогветотвуят диагностикам критериям. При определенной навыке отепень зыроаенноогд иергичеоких реакций можно проводить пальпацией.

Изучение чувствительности различных участков кожа больных уцелл08оа верблюдов проводили о использованием наиболее ектяв-го аллергена, приготовленного яэ оиеои нгаммов B« n«lit<meie ir - I и B.abortua IOf-iJ, Препараты вводила внутрикожяо в обяео-нижнвй тратя иея, аодхвооговой окяздки, йеоввротвого учаотка ха, в окладку кожи аод плечевым оуатевом,. а твкже подкозно-кп-апальпебрельно и наслаиванием пв аепъйакрнзу глаза;'У40* Р0еп-а проводили черев каждые 24 часа до её полного угеоаняя.

Сравнительное изучение диагностической ценнооти эллергачео-го и серологического методов при уогановл&иви бруцеллезе провопи при использовании IOO верблюдов неблагополучного табуна по едувшим тестом: аллергическая пробе - о применением пригогов-нлого нэки эллергенэ л бруцэллянэ ШЭВ, оерологичеокях иетодоз-11, РА, РДС1С. Кроме того, сравнительному анализу подвергала я эулмэты исследования всех групп верблюдов при яопытзнаа аляерге-в не специфичность я активность, так как параллельно аллергощхъ была взята кровь и проведены серологичеокио исоладоввния их ойроток. Постановку серологических реакций (РГО, РА, РДОК) проводи согласно ив г одическим указаниям (И. 1965).

Сравнительную оценку аллергопробы при введении препаратов зигольным инъекюром Ш-7, о заводским номером 37006, язготов-ннык Лебядинским инструментальным заводом, и игольным о помощью рица системы "Рекорд" провели не 112 верблюдах. Аллерген вводив наиболее чувствягвльный участок в бесшерстную область паха-

Ь

о одной стороны безыгольным иньектором, о другой - о помощью шря цэ.

Стэтиотичеокую обработку полученных результатов провели мете деми, рекомендованными Е.В.Ыонцевичюта - Брингене (196*0.

Вэ период о 1989 по 1993 годы подвергнуто аллергическим исследованиям 6200 верблюдов и & морские саинки. Серологически ио-аледовбпо 63Й сыворотки крови, бактериологический высев произвел яэ АПроб м8г0ри8лэ.взятого 01 животных.

V - РЕВУЛ ЕГАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Бпязоотичеокея оитуация по бруцеллезу верблюдов

в Казахстане и баологичвокие свойства бруцелл,

выделенных от этих животных.

МИзучение вопросов эпизоотологии бруцеллеза верблюдов в хозяйствах, а также анализ ветеринарной отчетности показали, что данное заболевание ааеет значительное распространение среди верб-людопоголовья Республики Казахстан.

8э период исследований (1989-199Эгг.) нами на территории Казахстана в эпиэоотичеоких очагах бруцелезной инфекции в 10 случаях от больвых животных выделены типичные .(классические) формы бру целл вида зоортуо. Однако при тесном контакте верблюдов с больными овцзма о острым ичениеа болезни имело место заражение 7 верб! дов'бруцеллэмя вида мелитензио. Кроме типовых, нами были выделень также атипичные -диссоциированные формы бруцелл от б верблюдов.

, Изысквние и испытание аллергенов для диагностики бруцеллеза верблюдов

Имеювшевя в литературе данные (П.й.Островидов, 1950; А.А.Пэ; гов, 1950; М.О.Солоницын» 1950) свидетельствуют о наличии специфя чеокой сенсибилизации организме больных бруцеллезом верблюдов,пер спектавнооти изучения аллергической реакции у них и использование

в ветеринарной практике для выявления инфицированных животных. ■

До нестоящего вреаени о этой целью иопытывели ебортин, бруце*-зат, бруцеллогидролизаг, бруцеллин, Технология изготовления ко-рых ае предусматривала выделения из бруцелл очищенных специфи-окях аллергенных фракций (Н.Д.Цуверкалов, В.И.Краоов, [¡.Локтева, 1959; А.А.Оотровидов, 1950; К.Ф.С1удеицов,1941; [¡.Иванов, 1980). В этой овязи ивми зэ основу изготовления аллор-на для диагностики бруцеллеза у верблюдов была взята методика П.Иванова а соовт. (1985), учитывающая местоположение зллерги-оки активных начал в микробной клетке и возможность их выделе- • я. Технология изготовления аллергене по данноиу способу продуомат-, лает дезинтеграцию бруцелл улмрэззуяоа и удаление сенсибилизи-ввдх вещеотв. Датчиком ультразвуковых волн служил магнитоотрик-рний аппарат отечественного производства «арка У8ДН-1. С цельэ вншения активности препарата и сокрэкения времена его изготов-ния авторы рекомендует проводить дезинтеграцию в среде о рН рав-й 9,С-10,С, а удаление оенсибилязирующих веществ - путе« онихе-я рН до 5,07,0 в полученном дезинтегрзте о последувдиа звюкла-ровзниеа при I атмосфере в гечения 30 минут, центрифугированием я 5-6 тис об/пин. 30-40 аинут и стерилизацией оупернатэнта.

Учитывая пзрззшировение в организме верблюдов бруцелл видов . ортуо я иелитензао, аллергены готовили Я8 бруцелл различной видо-й принадлежности: Бр.иелигевзлс Рвв-1, Бр. аборту о - шсаиии 10И 82, 19, е тзкяе использован эпизоотический ивеиа "В", эыделея-й от верблюдицы и Бр. оуио -61.

Препараты, изготовленные из названных штампов бруцелл были пытаны в лабораторных и производственных условиях соответственно морских свинках я верблюдацзх.

- 10 -

Ивучвние сенсибилизирующих свойств,специфичности ■ я активности зялергейов,приготовленных из бруцелл различной видовой принадлежности на мороких свинках

Сенсибилизирующие свойства, приготовленных нами аллергенов, определяли 5-кратным подкожным введением их 42 здоровым морским овинкац, в дозе 1мл о интервалом в 4-5 дней. Через 30 днай животных подвергали аллергическому обследованию, в сыворотки их крови проверяли в РА и РДСК. При этом, были подучбны отрицательные результаты кек по аллергия, тек и по оерологичеокии тестем,

Специфичность всех опытных вллергенов подтверждена отрицательными результатами аглергопроб на 30 интактных морских свииквх которые предварительно были сенсибилизированы вакцинами против сибирской язви, кашшлобактериоза, пэрэтифв, Положительно реагирующие животные отмечены только среди морских свинок привитых на» цаиой аа ит.Бр.ебортуо Ь2.

Сравнительная активность аллергенов, приготовленных из бру-цэлл различной видовой принадлежности'определена на б группах пороках свинок (по 10 кивотах в каждой), заведомо сеноибиливиро-ванных вакцинными штаммами бруцелл, Учитывая сообщения Н.Д.Беклемишеве <1968) о том, что одновременное введение нескольких аллергенов не оказывав! влияние на выраженность реакций к каждому из нах, при сравнительной оценке ектяввооти аллергенов вводили их одновременно нороким овинкем внугрикожло н гблэста брюшке на рас оюянии 3-4 ом друг от друга. Полученные результаты .представлены в таблице Н» I, .

И8 данянх таблицы *> I видно, что морские свивки, сеиовбяи-внровэвные бруцеллами рвзличной видовой принадлежности в Сглмшн отве случаев огвечвют разной внрв*евисс*ьв.; аллергических'регцвд

1нако во всех случаях максимальные реакции отмечены при дреме-5нии аллергенов, гог/ологичных бруцеллам зораавющего штамма.Кро-! 5ого, установлено, что аллергены из штаммов бруцелл нелитен-

Рев-1 и абортус а также комплексный препарат, состоящий

з омеаи указанных монокультур были наиболее активации. Получзи-нааи данные по этому вопросу согласуются о ревулыагзаи ис-иедовэний проведенными на морских свинках и овцах Э.А.Хвзна(1988), .А.Султэновэ(1992).

Изучение активности аллергенов, приготовленных из бруцолл различной видовой принвдлекяос-ти на верблюдопоголовье

Известно, что лабораторные яявотвые, как аодель для изучэ-ая различных реакций оргэни8«8 пря инфекционной патология, не вегдэ адекватно отражают состояние реактивнооти у крупных ка-отных. Поэгоиу розулыагн изучения ив морских свинках еффекгягиоо-н аллергенов из различных видов бруцелл требовали проверки и на эрблюдэх.

С этой целью специфическую активность опытных аллергенов,

I

олучешшх из штаммов бруцелл видов мелитензио Рев-1, абортус Ь2, 19 и "В", а также суй о - 61 и сарологачеоких теоюв троделяли на различных в эпизоотическом отношения группвх верб-одов. Результаты проведенных исследований отражены в таблице й 2. знние твблицы № 2 свидетельствуют о том, чю все испытуемые иэгностикумы демонстрируют достаточную аллергическую активность, зкоямальиые показатели которой зарегистрированы при изгоюале-аи их из гатоммов бруцелл видов мелитензио Рев-1 я абортус голщение кожной складки в средней по реагирующему поголовью в гои случэе составляло 6,3 1 0,5 и 6,0- 0,7 ни.

.Таблица' I

Активность аллергенов, приготовленных аз различных птзммов бруцввл

Группе! Каким

ЯНЕ ОТ- J nl.gayoU

ных I

i сенсибая. ¡ кивотвые i

I î

i áofl-bo

J моро-j ких j свинок

i I

I 0гнос21вльное уюлщензе koxhoíí оклэдки в средней (аа) j Аллергены, приготовленные аэ агатов бруцелл: '

I ледитенз} СуШГ j Рев-I j 3-61 j И i и I

4,3*0,4 2,0*0,2 2,5*0,5 б,CÍO,2 4,1*0,4 ' 2,3*0,4

2,5^0,6 1,7-0,5

2,5*0,4 1,5*0,5

"AOOpSyC iftj,

Äoopiyc- áoopryc Aoopiyc! ¿руцедаан"

j a¡i."B* ¡ si. 19 j иг.82

lit,

Î

j iíía

! U

5,3-t "J.b* Uft 4,4iü,4 0,2

7,0* 0,1 2,4*0,3 4,0*0,3 2,&*C,4 1,4*0,2

3,4*0,3 2,3*0,& 116*0,4 1,4*0,2 2,7-0,6

5,7-0,3 5,5*0,2 2,4*0,5 1,9*0,4 1,2*0,5

4, SÍ О,б 2, Cí 0,5 5,8*0,3 1,9*0,2 2,5*0,6

3,3*0,1 3,1*0,4 3,2*0,5 5,6*0,3 2,6*0,6

"T

2

3

4 5'

6

7

Рёв-I

im-a

Cyao-6I

El."»1

Бр.ебортус ит.19

Бр.ебортус Ш1.Б2

Несенсибал. (контроль)

10 10 10

10

10

10

Po I

В среднем по аллергену

4,0*0,6 2,9*0,6 4,5*0,5 3,4*0,8 3,6*0,6 2,5*0,5 2,0*0,4

дальнейшей животные о позитивными показателями аллергической серологических реакций были убиты, а внутренние паренхиматоа-е органы и лимфатичеокне узлы от 7 из них подвергнуты бактврао-гическому иоследовэнив. При зтом от 3 из б верблюдиц, ревгарую-IX только до аллергическому теоту изолированы кулыуры бруцелл, одном случав от животного, реэгируквдего одновременно по серо-»глчеогшм реакциям и аллергояробе.

Хаолацэ 2

Результаты сравнительного ааучвная чувотва-телыюотя и активнооти опытных аллергенов бруцаллияа БИЭВ и оерологячеоках теотов

(Цоквзвния реакции на аллергены приготов- ' ; шеро-1 Коль-

щра;—..,...............,.|лога-1це-

Ыелитен '.Абораус 1 Супе - ¡АОортуо, 1Ьруцэлл-!чеок.¡вея

! 1 I! ¡'Г ( I (РШ, !ция о

}318}8{-Я|3!3' 8{3 18{3 - ||А,„ {«ояо-

!в I о I а Ы а I о 1а1 о I н| 9 !РДЦК 1«0М

}рб- ' : """ ' " """""""

одо зтки з неб-эго-элуч-

эго '

э бру- п_ тт_ II 2 I 2. I I

эбуна Ор Ф Ш* ЙГ* ■

(3

эл.)

В числителе простой дроби - количество реагирующих животных;

в знаменателе - интенсивность реакции

(в мм .

.... - в -

Последующими доследованиями была пс/даеридена целесообразность изгомвленая аллергенов из оиеои штаммов бруцелл видов мелатенаао Рев-1 и ебортус Ший. Рз8улы£эта этих испытаний сведены в таблицу 3«

Данные таблицы 3 показывают, чео.наиболее выраженная аллергическая реакция и у большего числа животных наблвдаежия при введения иа комплексного аллергена, приготовленного из сме-Ои .вавммоз бруцелл видов «елитенаио Рев-1 и абортус Кй-а. При этом уголщенае кожной оклэдки у реагирующих верблюдов составляло? мм. 1ри верблюде с позитивными показаниями аллергопробы была-убиты, а патологячеокий материал от них подвергнут бактериологическому исследованию. Культура бруцелл была выделена от одного животного.

Диагностическая ценность предлагаемого нами аллергена приготовленного иа смеси итвммоз Бр.мелитензио Рев-1 и эбортус 104-М подтверждена такхе при эляергичаоком исследовании 8 экспериментально зараженных верблюдов, из которых 5 - ранее вакцинированные и 3 не имеющих шшунврго фена (в опыте, проведенном оовмеотло с сотрудниками ШИВ ШР). При этом культуры бруцелл были изолированы только от 3 верблюдов,не шесвшх иммунного фона

. .. ¡Таким образом, проведенные исследования и полученные при. этом данные позволяют заключить, что для практического применения при диагностике бруцеллеза верблюдов целесообразно использовать аллергены ив омеси итэммов Бр. мелитензис Рев-1 и эбор-тус Ш-У.

Таблица 3

Активность аллергенов, приготовленных из различных шгэммол бруцелл

! реагировало'на аллергены, приготовленные из 1 штаммов Оруцелл:

следовоно

рблюдов (гол)

I Ров-1 + } Рев-1 + Г Рев-1 ; К1т1нлзтн I Ш-Л { Ш-Й + Щ вв. 19 \ ВДЦеллин

Г™!-Г—+

т

-г

-т-

Т

i о i 5

1 § I п I»

5

1 о ! с!

§ ! 3 I

•л I о

§1

* I

о !

П.;

рц

о| о | а I о -ь-в—!-"-

45

5?0 2$СГ

46

4

"КО

46

з^о г?п

48

ПРИЖЧАШЕ: 3 числителе простой дроби - количество животных;

в знаменателе - интенсивность реакция (в мм).

Сравнительная оценка показаний аллергической реакции у больных бруцеллезом верблюдов при введении опытного аллергена разными

-«видами и внутрикожноа в различные участки ' 10ла

Основываясь на денных литературы относительно неодинаковой увствагелвнооти различных тканей я учасгкоя поверхности тела; 1В0ТНЫХ, ни'изучали в сравнительном .аспекте эффективность'вну!-дксжного^о№вюяктивал5яого и интрап8Лмеброльного методов врезная аллергенов, считая, 1« зонами нпчбольшей реактивности . И.Ц.Иванов, 1986; А.О.Еевелев, О.А.Синявский, 1986; А.Н.Шаров, .Н.Ауштровз, 1990).

Нвми изучена вирэжеаносгь сероэллергичесних реакций у 13 ольных Сруцеллеэвд зерблюдов. Полученные при этом дзшше отра-энн в таблице 4.

- к -

Так,иа данных-таблицы 4 видно, что внутрикожный метод введения предлагаемого аллергена в беоиерстную область паха наиболее аффективен и доступен при массовом обследовании верблюдов для прижизненной диагностики бруцеллеза. Кроне того,инъекция препарата и учет показаний реакции в этом месте достаточно удобны.

Таблица 4

Сравнительная оценке чувствительности к аллергену тканей и различных учзотков тела больных бруццелезом верблюдов

1 Время

Количео-1 У4818 I пока-

| воний

! реакц.

Т

тво яи-вотных

Утолщение кожной складки по реаг. погол. в мм при введении аллергена

-2« , -

них- ! под-

нюю ! гру-

треть] док

(чао.)

оеи ! ]

!

I С>ео-I шерот-! вый ! учао-! ток I паха

под= ¡ингра-хвос- ¡пальтовую !пеб-окл8Д-!рально ку I

81±М |М*М

Офталь мопро-68

24 3,4 2,1 3,0 5,1 4,4 н-

13 48 4,1 4,5 6,3 6,3 6,0 ++

(опыт) 72 5,с£0,3 6,1-0,4 7,3*0,5 6,7*0,3 5,7^0,9 +++

Контрольная группа

24 -' - -

5 48 - - - - -

(контроль) 72 - - - -

ПРИМЕЧАНИЕ: Для контроля взятн свободные ох бруцел-

• лезэ верблюды.

Сравнительная оценка аллергопробы при проведении её Йвзыгояьнны; инжектором я с помощью шприца

Высокая диагностическая ценность внутрикояной эллергиче.о-кой пробы при бруцеллезе верблюдов впервые была обоснована П.И.Островидовым (1946), А.А.Цальговым (1949) и ¿.О.Солоницы-

- И - •

ым <1949), но они исключали практическое значение ее из-за ложности осуществления игольным методом. Нами о целью сииже-ия трудоемкости постановки аллергспробы проводилось изучение озможноитя использования для введения препарата безыгольного ньекюра марки БИ-7, в сравнения с общепринятым игольным спо-обом. Аллерген вводили внутрикожно в беовершный учзстик пзхе [врблюдов с одной стороны тела безыгольным ииьекюроя, о другой -шрицом, с иглой. Учет реакции проводили через 72 чзоа после инъ-кцяи преазрага. В результате было установлено, что в неблаго- . ¡олучных по бруцеллезу табунах число реагирующих аа аллерген ¡ерблюдов при игольном и безигольном способах ввздегшя его било ¡рямерно одинаково. Эти данные свидетельствуют о пракцшиалв-юй возможности использования безагольного яньекторз для внутрд-¿огшого введения предлагаемого аллергена при диагностике бруцеллеза у верблюдов без снижения диагностической ценности п репера-' 1аг значительном облегчения и доэмиения безопасности труде ветеринарных работников.

Сравнительная оценка диагностической эффективное- . . ти коимерческого бруцеллияа, опытного аллергена и серологических тестов

Выше было отмечено, что до настоящего временя для диагностики бруцеллеза верблюдов испытаваляоь абортин, бруцеллязат и бру-целлогидролязаг. Данные литературы относительно активности и специфичности указанных аллергенов разноречивы. Поэтому диагностическую эффективность приготовленного нами бруцеллезного аллергена мы испытали в сравнении о общепринятыми серологическими гес-1э.чи и коммерческим бруцеллиноы ВИЭВ.

С этой целью испытываемый аллерген, полученный аз смеоя итзшов Б,.уели1ензис Рев-1 и Б.абортуо ДО-У, показавшая себя

- 18 г>

наиболее акшвацц э орэваениа ео воема шытньши образцами, э яакке контрольный - бруцеллин, изготовленный биологичеокой промышленностью из неегглвтиаогецного итамаа Б.аборгус В-1 вводили одновременно, в бесшерстную область пахе, одним и тем яе животным в одинаковой дозе.

Полученные яри этом орэвнияелыше данные показывают, что предлагаемый эллерген обладает более высокой диагностической чувствительностью в сравнении о биофэбричным - бруцеллином БИЭВ

Наряду с постановкой аллергической пробы верблюдопоголовь подвергали исследованию по серологическим тестам (РШ.РА, РДСК) В таблице 5 предсяавлены сравнительные результаты аллергодиаг-ноотики с опытным аллергеном с показаниями серологических реакций.

Таблица 5

Распределение положительных результатов аллергической я серологических проб при комплексных исследованиях верблюдов на бруцеллез

Таксономия результатов

Аллерго-проба

Результаты исследований т---

{ Серолог. . { хесты ;

\ ' !

Кол-во

;В %% к общему кол-:ву положи.

'реегйррж?.

Совпало Нет совпадений

Воего

Случаи положительного реагирования

+ t

15

8 7

30

23 22

50,0

26,7 23,3 100,0

76,6 73,3

Данине габлицы 5 позволяю® утверждать, что в общем числе ре зулыатов у верблюдов совпадение показаний по аллергии и свроло-гаи наблюдэеяоя у 50^ аивомых, полоаительная реакция на один иг

пух методов диагностики- по серологии и на аллерген отиеча«?-ч соответственно в 23,3 и 26,7 процентов олучэев.

Таким образом, полученние нами даннне свидетельствуют,что 5рологичеокие (РДСК, РА, РЯБ) и аллергичаокай методы иооледо-эний при бруцеллезе выявляют разные состояния иммунного отве-э организма. Также как и у других видов животных, эти соо-ояния не совпадают по времени возникновения и по проявлению эакций в примененных теотах. Несоответствие же результатов нэв-чнных методов находят овое объяснение в различии их механизмов клеточного я гуморального). Поэтому, при дивгноотике бруцеллеза верблюдов необходимо проводить комплеконые - серовллергичеокие иследования для более полного выявления больных бруцеллезом жя-отных.

Показания внутрикожной аллергической пробы я серологических реакций у верблюдов пооле иммунизации их протявобруцеллвэныма вакцинами

В настоящее время разработаны а применяются в ветеринарной рахглке различные оерологачеокие (РА, РСК, РДСК, ИБ) методы сследовапия' для диагностики бруцеллеза крупного рогвгого окота, вец, коз и для выявления иммунологической перестройка оргапиз-э после вакцинации атнх валов кавгтных. •

Однако, возможность аспгльзпваняя названных тестов для оцен-я лосгвэкцпнэльного иицунологячеокоге ствтуоэ организме вербЛ1>-

оотаетоя малоизученной, йнторео предохевяяюг исследования .Г.Гусапнпза (1992) по изучению динамики накопления и угвсаиля оотвокцанольнах антител у верблюдоматок после иммунизации ях вкгйиачв >3 тача'гз Ep.rOppi.yc 19 и в малой а полной до-

зх. ранние ге г к^^ччгч механизме ответных реакций имиунязаро-

венных различными рротивобруцеллезныма вакцинами верблюдов в доотупной нем литературе не обнаружено.

В этой овяья мы изучали нвличае поотвекцинэльних аллергических я серологических реакций у верблюдов после введения им вакцины из штамма Ö2 и протективного антигена (неживое вакцины, приготовленной H.II.Ивановым и В.Б.Теном в КазНИВИ (свидетельство на Ноу-Хеу te 0039BI5), о целью определения сроков диагностических исследований. Через 15,30, 60, 90, 120, 150, 180 и 210 oysoK после вакцинации определяли покэзвния иммунологических реакций (серологических - РА, РДРК, РШ в еллергичеоких - комплексным аллергеном КасНИВИ, приготовленным из смеси штаммов öpy-целя видов мелитензио Рев-I в вбортуо 104-М). Ревулыаты этих исследований представлены в хабляцэх 7 и Ö.

Анализ проведенных исследований позволяет заключить, что при иммунизация зврблюдомамк вакциной Bp.вбортуо 62 вгглюгааин! в онворолке крови (в PÄ я РШ) появляются не позднее 15 дней я сохранятся 3 меояца после введения вэкцянн. Комплемент-связы-ввювде энтятело в сыворотке крови и аллергические реакции сохрв' няююя до б месяцев после взкцинацаи.

7 верблюдоматок, иммунизированных неживой вакциной,оероал-лергические реакция ртасавт через 3 меояца после вакцинации.¡ipg, этом замечена закономерность в совпадении проявлений иммунного otBesa, secwjíyaaoro как серологическими, аак и аллергическими реакциями. Контрольные (неввкционированные) верблюдоааткя во bci сроки и по хан же тесгам сероаллергическях исследований ямоля негахявные показания.

Бффектявнооть оздоровяхеяьных мероприятий о использованием средств диагностики и специфической профилактики в производслвенных условиях

В настоящее время оздоровление верблюдоводчеоких хозяйств oí

)уцелл08э осуществляется в основной методом систематических »следований, убоем полоаительно реагирующих и проведением ¡аплекса ветеринерно-санитарнвх мероприятий. При этом дяегноо-1ну прозодят с помощью серологических рееадий. Но несмотря не гнооятелъно высокую чувствительность и специфичность, они не ззволяют достаточно полно выявлять всех больных бруцеллезом зрблюдов» так как отражают только одну форму ответа организме з внедрение инфекционного начала связанную о гуморальными фек-ореми иммунитета. Нами устеновлвив диагностическая ценнооть зытного аллергене КезНИВИ в взаимная дополняемость серологических аллергических реакций. Поэтому в целях более полного выявления ольных бруцеллезом животных необходимо проведение комплексных эрооляергических исследований. Однако,таким методом не всегда оотигаехся оздоровление неблагополучных и охране благополучных уртов 01 бруцеллеза. В этой связи при оздоровлении верблюдозод-еских ферм совхозов "Сарытаукумский " Ашштинокой и "Сарыбулак-кий" Талдыкоргенской облзотей в качестве диагностических тестов ы использовали оероеллергические реакции в комплексе о ввкцино-рофилактвкой, способствующей поддержанию благополучия по денной нфекщш в тэбунех верблюдов и комплексе организационно-хозяйст-. енных и ветеринерно-санитарных мероприятий.

Учитывая полояятельные результаты по оздоровлению верблюдоводческих хозяйств от бруцеллеза, нами рекомендована такая схема пециальных противобруцеллезных меропрлятяй в верблюдоводстве, ри которой необходимо сочетание диагностических сероаллергичес-их исследований о созданием достаточно напряденного аммунатега животных, а также возможности поотвакцинельной диагностики.

?

Динаыика показаний иммунологических рзвкцвй при исследования верблюдов пойле иммуиизвцяи их вакциной ив штамма 82

Таблице 7

Т

Т

т

РА

РДСК

РШ

Аллергия

иооледо- в8нея после иммун, (сур.) % ¡'Средн. | ре8Г.|«^мР ] I 1 % реаг ! Средн.! % р 1 реаг •I М*и 1 ! 1 ! I % ревгируввдх ! 1

15 70 50*1Ь,8 90 33*11,2 50 90

30 100 155*48,5 100 34,5*11,8 60 100

60 70 35*10,5 40 4,5*^,1 40 60

90 10 2,5*1,9 20 5,0*1,7 20 90

120 20 5,0*1,7 20

150 20

180 20

210

Таблица 8

Дянвмика показаний яммунологичеокях реакций при исследования верблюдов после ям-мунизвция ах неживой вакциной

Срок

исследования после яммуняза-ЩШ^Ш.)

ра_

1 Средн.

Т

рррк Треп

I Среда!

|реаг.! 1И1Р ! ! м+и 70

100 75*11,5 70 27,5*5,9 10

Я

I реаг

Т

! титр I реаг. 1 £м !

Аллергяя № рзегир.

1

30 60 90 120 150 160 210

61) '¿№,1-50-ТО"

100 35*9,2 100 80

90 11-2,7 90

30 3,5*1,0 10 90

- 23 -ВЫВОДЫ

1. Заболевание верблюдов бруцеллезом вызывают в основном )уцелян вида абортуо» При теоном коникте о больными бруцеляе->и овцами может быть миграция не них бруцелл вида меяитенвао.

2. 8аОолевааие верблюдов бруцеллезом сопровождается еллер-!чеокой перестройкой организма, что может бы*ь использовано о 18гноотичеокой целью.

3. Наиболее эффективным я приемлемым для практического зущеотвления методом диагностики бруцеллеза у верблюдов явля-юя внутрикохная аллергичеокая проба, осуществляемая путем ведения аллергена в бесшерстный участок паха.

4.Диагностическая чувствительность аллергене, праготовлен-ого из сцеси штаммов В.те11гепа1в Неу-1 И В.аЪмЧио СУнМ, выше аналогичных препаратов, полученных ав монокульвур,

бруцедлина ВДЭВ.

5. Постановку аллергопробц в производственных условиях охно осуществлять с помощью беэыгольного яньектора.

6.Серологические я аллэргач8скве теот» вэаамно дополняв? руг друга. Наибольший диагностический аффект достигается при ровелзнаа комплексных иероаллергических обследований.

7. Серологические реакции в сочетании с оллергичеокой про-ой позволяют более полно устанавливать иммунологическое состоя-иэ организма животных.

ь. Использование предлагееиого нэпа аллергена в комплекое другими аерами позволяет оздоравлявать верблюдоводческие фер-!ы от бруцеллеза.

- 24 -

б. ПРАКТИЧЕСКИЕ ОРЕДЖЖШЯ

I.Оздоровление верблюдоводческих хоаяйотв проводить о при мвнекием оероаллергичеокого комплексе исследований и вакцин ооглаоно "Рекомендаций по борьбе в бруцеллезом верблюдов в хоаяйстввх Республики Казахстан" oi 18 декабря 1992 годе.

2. Для проведения аллергопробы целесообразно использовать предлагаемый аллерген КавНИВИ не смеси итеммов бруцелл видов мелатенэис Рев-I в абортуо 104-М.

3.Введение аллергена проводить бевыгольннм или игольным методами внутрикокно в бесиерстный участок пахе верблюдов.

СПИСОК (ПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ НО ТЕ,® ДИССЕРТАЦИИ

1.Сейдахметове Р.Д., Тев В.Б., Иванов H.a.,- Сравнительная оценка вялергопробы при проведении её беаыгольннм инжектором и о помощью иярицо - Информационный листок КагШШНКИ -Алма-Ата, 1992 -С.З. '

2.Сейдахметове P.S., Тев В.Б., Иванов Н.П.- Сравнительная оценка диагностической ценности коммерческого бруцеллина и спы иых образцов аллергене KesHHBH. Информеционный листок КааНИИНН Аяма-Аи - 1992 - С.5.

3. Тен В.Б., Сейдахметове Р.Д. Диагностика бруцеллеэа верблюдов - Достижения пеуки и техника - Мооквэ - 1993- С, 31.

4. Сврсенов Л.С., Сейдахметове Р.Д.- "Рекомендации по борьбе о бруцеллезом верблюдов в хозяйствах Реопублики Казахстан" - Алматы- 1993 - С.Ь,

5. Тен В.Б., Сейдахметове Р.Д.- Сравнительная оценке показаний местной аллергической реакции у больных бруцеллезом верблюдов при введении специфического аллергена в различные участи теле. Сб.нзучн.трудов КйзКИШ - Алматы - 1992.

Сейдахметова Роза Дарцызи ТуИа бруцеллез(к аллергишшд твс1лмен бола/.

Аург1э(лген эорттеу зумыстардю^ кортывднсында туйон» бруцеллеэ-

тексергевдо аллергшхлыц сииаманнч прадшня-ц анш*;талди,ваацяналнч

мцарда / Ро*-1,104-а / ультрадыбыспен ултацтау аркдаа та!мц! ал-

ген ал у нушОнашп двлвлдвнд!.

ТуйеШ бруиеллеэге тексергецдо аллвргвнщ! пай иергв жена цалаЯ

1зу керехт1г» явнв натяжес!н багалау масала^ер! oeatoeH.

ьротоктчят! антиген лапе Ь2 птоммнан дайывдалгаи вакцинамен

лген туйелердегг аплергяялид сынамаиыц нэтяяес! аныцтадци.

1уйа вс!рвт1н яаруаяылыгстарды бруцеллвэдеп саунцтырган кездв

в оса ауру бойнгаа !ндотт!к лсагдайди тевсертецде усннилып отнртая

сргенд! серадогиялщ зерттэулзр, вакцяна егу лоно йасда да !вдетпа

си варалардии| кешеШнде пайдалануга боладн.

Зорттеу нэтажелвр1я пайдалаяу туЯо <?руцеллев»нв к аре и нурПзГло-. геяралардиц тшмдшпн арттнркп.ауру тарагая наруаяилкцтардн ай-цру мэрэ>м>н dtpaam пискартадн.

Нова JaroTna beid&fonetovn Allergic /nethod of diagnosing brucellosis in earnels As a result of investigations conducted в diagnostie impor-ce of allegic teat at brucellosis in chmsIb who confirmed, possibility of obtaining an efficient allegen from the cultu-destroyed by ultrasound of vaccine strains of brucellas (nsll-sia Rev-1 and abortus 1o4-!l) was proved. The optimal pareraeterB conducting allergic teate were entftblished» the rasthdd (intrecu-eoua introduction bu ь needleless injector) and the point i ha-еээ groin spot) or allergen introduction,period of period of rc-ds ind the evaluation of- the reaction indications were set. ioetio.-ia for allergic tests in camels immunised bu vaccine from «in 32 and я protective nntigene from brucellas were studied. r

Tho applicability ojr the proposed allergen to control the epiao tlo well-being In bruoellosis In ourael Uvea took was aaoertalnec M ««11 as In Bomitatlon of farms with regard to thin inreotior along with Bsrologlo Investigation«,vaooinatlon una utilise tier ot th« whola oomplex of untibruoellosia me«surea.

Application of th« Investigation» reaulta in controlling bruaellools in oum«ls will considerably lncreuue the efflolenoj and reduce th« tens« of «imitation meumure«.

9 ^-"J' '/ '