Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Внутрибрюшинное химиоперфузионное лечение диссеминированного рака яичника в эксперименте

На правах рукописи

Ж-

.Л

КИРЕЕВА Галина Сергеевна

ВНУТРИБРЮШИННОЕ ХИМИОПЕРФУЗИОННОЕ ЛЕЧЕНИЕ ДИССЕМИНИРОВАННОГО РАКА ЯИЧНИКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.01.12 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 5 Ш 2015

Санкт-Петербург 2015 005570481

005570481

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт онкологии имени H.H. Петрова» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Беспалов Владимир Григорьевич Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Тер-Ованесов Михаил Дмитриевич

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы «Городская клиническая больница №40 Департамента здравоохранения города Москвы», заместитель главного врача по хирургии и онкологии

доктор биологических наук, профессор Иванов Сергей Дмитриевич

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Российский научный центр радиологии и хирургических технологий» Министерства здравоохранения Российской Федерации, руководитель лаборатории биотестирования радиационно-химических факторов

Ведущее научное учреждение:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Зашита диссертации состоится «_»_2015 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д208.052.01 при ФГБУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова» Минздрава России по адресу: 197758, Санкт-Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, д. 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «НИИ онкологии им. H.H. Петрова» Минздрава России (197758, Санкт-Петербург, пос. Песочный, ул. Ленинградская, д. 68) и на сайте http://www.niioncologii.ru/ru/node/2 с «<-J» ЧМ^у 2015 г.

Автореферат разослан «0 > » iv-jO. иЛ 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Бахидзе Е.В.

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Рак яичника (РЯ) является седьмой по частоте причиной смерти женщин от всех видов рака. Ежегодно около 140 ООО женщин в мире погибает от РЯ [Jemal A. et al., 2011], в России - более 7 000 [Каприн А.Д. и др., ред., 2015]. Бессимптомное течение заболевания на ранних стадиях является причиной того, что более чем в 60% случаев РЯ определяется в далеко зашедших стадиях, когда уже имеется поражение брюшины за пределами малого таза с вовлечением органов брюшной полости, асцит, реже — гематогенные метастазы в печени, легких, костях, опухолевый плеврит. В этом случае, летальность в первый год с момента постановки диагноза составляет 33%, а общая пятилетняя выживаемость - менее 30% [Каприн А.Д. и др., ред., 2014; Урманчеева А.Ф. и

Для РЯ в большинстве случаев характерно распространение в пределах брюшной полости, поэтому внугрибрюшинное (в/б) введение противоопухолевых препаратов при данной локализации рака может быть высокоэффективной лечебной процедурой. В последнее время в онкологии все более востребованными становятся высокотехнологичные методы химиоперфузий. Большие надежды связывают с использованием в/б химиоперфузий с цитостатиками как способа профилактики и лечения карциноматоза брюшины и опухолевых асцитов при РЯ [Chan D.L. et al., 2012]. Во время в/б химиоперфузии цитостатики, которые вводятся в раствор для перфузии в значительно более высоких дозах по сравнению с дозами для системной химиотерапии, оказывают свое действие в пределах брюшной полости в течение ограниченного времени. При этом всасывание в системный кровоток является незначительным, что снижает токсичность проводимого лечения [Cristea М. et al., 2010].

Сегодня наиболее часто в химиоперфузионном лечении распространенного РЯ используют цисплатин, реже - митомицин С, доксорубицин, карбоплатин [De Bree Е. et al., 2012]. В проведенном мета-анализе 19 клинических исследований, включавших 895 больных с диссеминированным первичным или с рецидивом РЯ, медиана продолжительности жизни (МПЖ) пациентов после выполнения циторедуктивной операции и гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии (ГИПХ) с разными цитостатиками составила от 22 до 64 месяцев, пятилетняя общая выживаемость (при оптимальной циторедукции) - от 12 до 66%, что значительно лучше показателей стандартного лечения с внутривенным введением химиотерапевтических препаратов [Chua Т.С. et al., 2009]. Однако токсичность проводимой химиотерапии III степени регистрировалась у 40% больных, IV степени - у 15% больных. Причем наиболее частым побочным эффектом была гемотоксичность (лейкопения, нейтропения). В целом, в/б химиоперфузионное введение цисплатина и других используемых сегодня для этой цели препаратов ограничивается их не очень высокой эффективностью, выраженной токсичностью, развитием опухолевой резистентности и осложнением в виде спаечного

др., 2012].

з

/

процесса [Стуков А.Н. и др., 2011]. В связи с этим продолжается поиск не только новых методов химиоперфузионного лечения, но и новых препаратов, обладающих более выраженным контактным противоопухолевым действием, и при этом более безопасных. В этом отношении обращает на себя внимание разработанный в НИИ онкологии им. H.H. Петрова противоопухолевый лекарственный препарат из группы алкилирующих соединений - этилениминов, который прошел полное доклиническое и клиническое изучение и был разрешен для медицинского применения под названием «Диоксадэт» [Беспалов В.Г. и др., 2011; Гершанович МЛ. и др., 1998]. Диоксадэт обладает выраженным контактным противоопухолевым действием и при в/б введении не вызывает спаечного процесса [Гершанович M.JI. и др., 1998; Стуков А.Н. и др., 2011].

Значительный разброс результатов выживаемости пациентов с диссеминированным РЯ после в/б химиоперфузии обусловлен отсутствием общепринятых показаний для данного метода, стандартных режимов и техники выполнения химиоперфузии. Нерешенными также остаются вопросы, касающиеся выбора препаратов для в/б химиоперфузии и их дозирования, рациональности сочетания химиоперфузии с гипертермией. Некоторые из этих вопросов могут быть решены в условиях доклинических исследований в максимально короткие сроки. Однако число опубликованных исследований химиоперфузионного лечения на животных крайне ограничено, и их результаты, также как и в клинической практике, являются противоречивыми.

Цель исследования

Разработка новых более эффективных и безопасных методов внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения перитонеального карциноматоза на модели диссеминированного рака яичника у крыс.

Задачи исследования

1. Апробировать модель диссеминированного рака яичника у крыс для химиоперфузионного лечения.

2. Разработать экспериментальную технологию нормотермической и гипертермической интраперитонеальных химиоперфузий на модели диссеминированного рака яичника у крыс и сформулировать оптимальные режимы нормотермической и гипертермической интраперитонеальных химиоперфузий.

3. Определить максимально переносимые дозы диоксадэта и цисплатина для нормотермической и гипертермической интраперитонеальных химиоперфузий.

4. Изучить и сравнить безопасность и противоопухолевые эффекты нормотермической и гипертермической интраперитонеальных химиоперфузий с диоксадэтом и цисплатином в максимально переносимых дозах у крыс с диссеминированным раком яичника.

5. Исследовать динамику изменения концентрации цисплатина в перфузате и определить содержание данного цитостатика в плазме крови крыс с

диссеминированным раком яичника во время выполнения гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии. 6. Изучить и сравнить изменения количества лейкоцитов в периферической крови крыс с диссеминированным раком яичника после внутрибрюшинного введения диоксадэта и после гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии с диоксадэтом.

Научная новизна

Создана новая экспериментальная технология химиоперфузионного лечения карциноматоза брюшной полости и разработаны эффективные режимы нормотермической и гипертермической интраперитонеальных химиоперфузий на модели диссеминированного рака яичника у крыс. Отечественный противоопухолевый препарат диоксадэт впервые использован в химиоперфузионном лечении рака яичника. Впервые проведено сравнение безопасности применения и противоопухолевых эффектов диоксадэта и цисплатнна у крыс с диссеминированным раком яичника в трех режимах: инъекционное внутрибрюшинное введение, нормотермическая интраперитонеальная химиоперфузия и гипертермическая интраперитонеальная химиоперфузия. Впервые установлена динамика изменения содержания цисплатина в перфузате и периферической крови крыс с раком яичника во время проведения гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии. Впервые проведено сравнительное изучение влияния диоксадэта на изменение числа лейкоцитов в периферической крови крыс с диссеминированным раком яичника после внутрибрюшинного введения и гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии.

Практическая значимость Экспериментальная технология внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения карциноматоза брюшной полости может быть применима для доклинического изучения различных противоопухолевых препаратов. Разработаны наиболее эффективные режимы внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения диссеминированного рака яичника с использованием диоксадэта, позволяющие достичь значительного увеличения выживаемости лабораторных животных на фоне меньшей токсичности по сравнению с цисплатином. Способ определения концентрации цисплатина в перфузате и плазме крови во время выполнения внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения карциноматоза брюшины методом масс-спектрометрии предлагается для применения в практике. Внедрение полученных результатов в клиническую практику позволит улучшить результаты лечения больных раком яичника в далеко зашедших стадиях и повысить их качество жизни.

Положения, выносимые на защиту

1. Экспериментальная технология внутрибрюшинной химиоперфузии является безопасной и эффективной в лечении диссеминированного рака яичника.

2. Диоксадэт является более эффективным и менее токсичным противоопухолевым препаратом по сравнению с цисплатином при выполнении гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии у крыс с диссеминированным раком яичника.

3. Нормотермическая интраперитонеальная химиоперфузия с цисплатином является менее токсичным и более эффективным режимом лечения крыс с диссеминированным раком яичника по сравнению с гипертермической интраперитонеальной химиоперфузией с данным цитостатиком.

4. Гипертермическая интраперитонеальная химиоперфузия снижает токсическое действие диоксадэта на лейкоциты в периферической крови крыс с диссеминированным раком яичника по сравнению с инъекционным внутрибрюшинным введением данного цитостатика.

Апробация диссертации Основные положения диссертации доложены на 4-й Всероссийской конференции молодых ученых ФГБУ «НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург, 26 марта 2014 г.; 23-м Конгрессе Европейской Ассоциации по Исследованию Рака, Мюнхен, Германия, 5-8 июля 2014 г.; 12-м ежегодном съезде Японского общества медицинской онкологии, Фукуока, Япония, 17-19 июля, 2014 г.; VIII Съезде онкологов и радиологов СНГ и Евразии, Казань, 16-18 сентября 2014 г. Работа удостоена почетной грамоты победителя программы «Участник Молодежного Научно-Инновационного конкурса» («У.М.Н.И.К.»).

По теме диссертации опубликовано 18 работ, 7 из которых - статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК. Получена приоритетная справка на изобретение по заявке на патент РФ «Вещество для лечения канцероматоза брюшины при диссеминированном раке яичника» №2014151478 от 19.12.2014.

Личный вклад автора

Автором лично проведен поиск и анализ отечественной и зарубежной литературы, разработан дизайн исследования, выполнены все этапы эксперимента, обработаны и проанализированы результаты исследования, внесен основной вклад в написание публикаций по теме исследования. Написание текста диссертации и автореферата.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 177 источников, в том числе 22 отечественных и 155 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 26 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проведено на 292 крысах самках Вистар, полученных из разводки питомника "Рапполово" РАМН. Для эксперимента отбирались крысы в возрасте 2,5-3 месяца с массой тела 200-270 г. Использован штамм опухоли яичника (ОЯ), полученный из РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН. При проведении эксперимента штамм ОЯ постоянно перевивали в/б нескольким крысам. После предварительного пассажа на 7-й день после в/б перевивки ОЯ от одной крысы забирали асцит, который перевивали здоровым крысам в/б. Каждой крысе в/б вводилось разведение асцитической жидкости в физиологическом растворе, содержащее 1><107 опухолевых клеток. Подсчет опухолевых клеток проводили в камере Горяева. Для характеристики разработанной модели перитонеального карциноматоза ОЯ перевивалась 15 крысам.

Для цитологического исследования ОЯ на 7-й день после перевивки у крысы забиралась асцитическая жидкость, которая использовалась для приготовления мазка. Мазок подвергался стандартной цитологической обработке. Образцы внутрибрюшинных опухолевых узлов отбирались у крыс, погибших от опухолевого процесса, для гистологического исследования. Полученные образцы фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 24—48 часов. Затем после стандартной гистологической проводки на гистопроцессоре карусельного типа АТ-4 их заливали в парафин и изготовляли гистологические срезы толщиной 5-6 мкм. Цитологические мазки и гистологические срезы окрашивали гематоксилином (БиоВитрум, Россия) и водно-спиртовым раствором эозина (БиоВитрум, Россия) и анализировали при помощи световой микроскопии на лабораторном бинокулярном микроскопе «Leica» (Leica Microsystems, Германия).

Для выполнения в/б перфузий была впервые создана экспериментальная техническая установка, которая состояла из: мехатронного перфузионного перистальтического насоса «Марс», универсального кибернетического комплекса регистрации и анализа параметров витальных функций «Телец» (оба производства Центрального научно-исследовательского и опытно-конструкторского института робототехники и технической кибернетики, СПб, Россия), бани термостатирующей прецизионной LOIP LB-200 (ЗАО «Лабораторное оборудование и приборы», СПб, Россия), перфузионных магистралей (MAQUET, Германия). Также при проведении перфузий были использованы электрическая грелка (Microlife FH 80, Германия), цифровые термометры CheckTemp (Hanna, Германия), катетеры (KD Medical GmbH Hospital Products, Германия). Для разработки технологии в/б химиоперфузии было использовано 40 крыс с перевиваемой ОЯ.

Диоксадэт в виде порошка для приготовления раствора для инфузий был синтезирован компанией «Кемконсалт» (СПб, Россия) в соответствии с лабораторным технологическим регламентом синтеза данного препарата, содержание диоксадэта составляло не менее 95%.

Максимально переносимые дозы (МПД) цитостатиков для нормотермической интраперитонеальной химиоперфузии (НИПХ) и ГИПХ определяли путем пошагового увеличения их дозы. Для определения МПД цисплатина выполняли НИПХ и ГИПХ с

7

препаратом в дозах 10, 20, 30, 40, 50 и 60 мг/массы тела животного. Для определения МПД диоксадэта выполняли НИПХ и ГИПХ с препаратом в дозах 5, 10, 15, 22,5 25, 30, 35 и 45 мг/кг массы тела животного. С каждой дозой цитостатика выполняли НИПХ и ГИПХ у трех крыс, за которыми затем наблюдали в течение двух недель. Всего для определения МПД цисплатина и диоксадэта для НИПХ и ГИПХ было использовано 84 крысы. За МПД препаратов принималась наибольшая доза, после введения которой все три крысы в данной группе оставались живы.

Для формирования экспериментальных групп ОЯ была перевита 128 крысам. Крысы рандомизировались на 9 групп: I - контроль, в/б введение 0,5 мл физиологического раствора (n=19), II - нормотермическая интраперитонеальная перфузия (НИПП) физиологическим раствором (n=ll), III — гипертермическая интраперитонеальная перфузия (ГИПП) физиологическим раствором (n=14), IV - в/б введение цисплатина в МПД - 4 мг/кг массы тела (n=12), V - НИПХ с цисплатином в МПД (n=12), VI - ГИПХ с цисплатином в МПД (n=14), VII - в/б введение диоксадэта в МПД - 1,5 мг/кг массы тела (n=19), VIII - НИПХ с диоксадэтом в МПД (n=14), IX - ГИПХ с диоксадэтом в МПД (п=13). Все манипуляции проводились однократно через 48 часов после перевивки ОЯ.

Крысы в группах II-III, V-VI, VIII—IX взвешивались непосредственно перед операцией и в последующем ежедневно на протяжении 10 дней после проведения перфузии. Во время перфузии у крыс в группах II-III, V-VI, VIII-IX контролировались температура брюшной полости в месте притока перфузата, ректальная температура, частота дыхания, частота сердечных сокращений (ЧСС), регистрировалась электрокардиограмма (ЭКГ)- День перевивки ОЯ был принят за нулевой. Первичной конечной точкой эффективности проводимого лечения была выживаемость. Время наблюдения за животными составляло 90 дней. Крыс, которые оставались живыми на момент окончания эксперимента, забивали методом ингаляции углекислым газом. У всех животных экспериментальных групп проводилась полная аутопсия.

Этапы работы по определению цисплатина в перфузионном растворе и плазме крови крыс выполнялись совместно с биоаналитической лабораторией ЦКП «Аналитическая спектрометрия» (СПб, Россия). Для количественного определения цисплатина в выбранных биологических образцах использована методика масс-спектрометрии. У четырех крыс была выполнена ГИПХ с цисплатином в дозе 20 мг/кг (МПД). Средняя масса крыс, взятых для проведения исследования, составляла 251,5±1,7 г, поэтому количество цисплатина, вводимого в 200 мл перфузата (0,9% физиологического раствора), для всех крыс составило 5 мг. Взятие образцов перфузата и периферической крови проводился на 10-й, 20-й, 30-й и 40-й минутах от начала перфузии. Количественное определение цисплатина в пробах выполняли после предварительной пробоподготовки на масс-спектрометре с индуктивно-связанной плазмой ICP-MS X Series II (Thermo Fisher Scientific, США).

Для сравнительного анализа гемотоксичности в/б и химиоперфузионного введения диоксадэта ОЯ была перевита 21 крысе, которые после перевивки рандомизировались на 3 группы: X — контроль, в/б введение 0,5 мл физиологического раствора (n=7); XI — в/б введение диоксадэта в МПД - 1,5 мг/кг массы тела (n=7); XII - ГИПХ с диоксадэтом в МПД (п=7). Все манипуляции проводились однократно через 48 часов после перевивки ОЯ. Взятие образцов крови у животных групп XI и XII осуществлялся непосредственно перед перевивкой ОЯ (0-й день), перед введением диоксадэта (в/б или во время ГИПХ) (2-й день), на следующий день после введения препарата (3-й день) и в последующем на 5-й, 7-й и 9-й дни после перевивки ОЯ. У крыс, не получавших лечения (группа X) кровь для анализа брали по графику, аналогичному для крыс групп XI и XII. Взятие крови осуществляли из хвостовой вены. Для клинического анализа крови животных использовался ветеринарный автоматизированный гематологический анализатор ВС-2800Vet (Mindray, Китай).

Результаты эксперимента подвергали статистической обработке на персональном компьютере с помощью программ Microsoft Excel, GraphPad Prism 6, SPSS Statistics 17.0. Статистический анализ показателей выживаемости проводили с использованием критерия Лиллиефорса, непараметрического критерия U (Манна-Уитни); построение кривых выживаемости проводили по методу Каплана-Мейера, анализ кривых выживаемости — по тесту Мантела-Кокса (Log-rank test). Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Результаты анализа крови животных статистически обрабатывали с использованием двухвыборочного t-критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Макроскопическая картина перитонеального карциноматоза при диссеминированном раке яичника у крыс

Прививаемость ОЯ составляла 100%. Опухоль быстро прогрессировала, приводя к развитию перитонеального карциноматоза, асцита и гибели крыс на 9-17 дни после перевивки. На вскрытии регистрировали опухолевый асцит (от умеренного до выраженного), который практически в 90% случаев был геморрагический (Рисунок 1). Гистологическое исследование карциноматозных узлов брюшины и пораженных лимфатических узлов позволило диагностировать метастазы ОЯ.

Рисунок 1. Геморрагический асцит у крысы с опухолью яичника.

9

Микроскопическая картина перитонеального карциноматоза при диссеминированном раке яичника у крыс

Опухолевые узлы белого цвета размерами 1—3 мм в наибольшем измерении имелись в большом сальнике, брыжейке кишечника, на париетальной и висцеральной брюшине. При цитологическом исследовании мазков асцитической жидкости опухолевые клетки в асците представлялись крупными, гиперхромными, округлыми, с крупным оптически плотным ядром и резко базофильной цитоплазмой. В некоторых участках опухолевые клетки асцитической жидкости образовывали комплексы из 2-5 клеток, что характерно для аденокарцином (Рисунок 2). Количество вакуолей в цитоплазме варьировало в разных клетках, а на поверхности цитоплазмы крупных клеток имелись базофильные выступы.

Рисунок 2. Клетки низкодифференцированной опухоли яичника в асцитической жидкости. Цитологический препарат, окраска гематоксилин/эозином, х400.

На основании полученных данных можно заключить, что используемая модель распространенного РЯ является адекватной для моделирования перитонеального карциноматоза при РЯ и для изучения в/б химиоперфузионного лечения. Экспериментальная технология внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения днссеминированного рака яичника у крыс

Непосредственно перед перфузией крысе с перевитой ОЯ для обезболивания вводят кетопрофен подкожно в дозе 5 мг/кг. Через 10 минут крысу вводят в наркоз в/б инъекцией тиопентала натрия в дозе 60 мг/кг, а для предотвращения дегидратации во время операции вводят подкожно 10 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Крыса на протяжении всей операции находится на электрической грелке с целью предотвращения гипотермии организма. Фиксацию животного осуществляют с помощью самоклеящихся электродов, которые затем подсоединяются к комплексу регистрации и анализа параметров витальных функций (Рисунок 3). Кожу живота крысы освобождают от шерсти и обрабатывают 5% спиртовым раствором йода. Хирургическими ножницами делают два разреза через кожу и брюшную стенку: первый (6-8 мм) - в области правого подреберья, второй (8-10 мм) - в левой подвздошной области. В первый разрез помещается катетер для притока перфузата и цифровой термометр, во второй - катетер для оттока перфузата. Затем брюшная стенка и кожа герметично закрываются прерывистыми швами, при этом осуществляется

фиксация катетеров и термометра в брюшной полости.

10

Комплекс регистрации и ана.ш |а параметров витальных функций «Телец»

«"СфеЯХ)

Водяная термостатируюшая чх, баня

Перистальтический нерфу {ионный насос «Марс»

Рисунок 3. Схема внутрибрюшинной перфузии у крыс (красной линией обозначена магистраль для притока перфузата, желтой - для оттока перфузата).

Магистрали перфузионной системы заполняют 0,9% раствором натрия хлорида или свежеприготовленным раствором цитостатика в 0,9% растворе натрия хлорида (в случае химиоперфузии). Катетеры для притока и оттока жидкости из брюшной полости соединяют с магистралями перфузионной системы, создавая замкнутый контур. С помощью перистальтического перфузионного насоса раствор из резервуара по приточной магистрали нагнетается сначала в водяную баню, где он нагревается до определенной температуры, а затем — в брюшную полость. По магистрали на отток перфузат вытекает из брюшной полости, снова попадая в резервуар. По окончании перфузии раствор цитостатика из брюшной полости и магистралей сливается в резервуар, и проводится промывка брюшной полости крысы 0,9% раствором натрия хлорида (200 мл) в течение 20 минут. После этого брюшную полость освобождают от раствора, удаляют катетеры и термометр, брюшную стенку и кожу в местах разрезов зашивают в два слоя. Режимы внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения диссеминированного рака яичника у крыс

В ходе отработки экспериментальной технологии в/б перфузии были определены оптимальные режимы перфузионного лечения, а именно: время перфузии - 45 минут, объем перфузата - 200 мл, скорость циркуляции перфузата - 10-15 мл/мин., температура перфузата в брюшной полости - 36,5-37,5°С при нормотермической перфузии и 40,5-41,5°С при гипертермической перфузии. Температура водяной бани, необходимая для обеспечения указанной температуры перфузата брюшной полости, устанавливается при нормотермической перфузии 40,5-Ч0,9оС, при гипертермической перфузии -44,5^-5,0°С. Разработанная технология и сформулированные режимы нормотермических (НИПП, НИПХ с цисплатином, НИПХ с диоксадэтом) и гипертермических (ГИПП, ГИПХ с цисплатином, ГИПХ с диоксадэтом) перфузий не вызывают существенных изменений в показателях витальных функций крыс-самок (Таблица 1).

Таблица 1 - Показатели витальных функций крыс во время нормотермических и гипертермических интраперитонеальных перфузий

Показатель Нормотермические перфузии Гипертермические перфузии Референсные значения [Трахтенберг И.М. и др., 1978]

ЧСС, уд./мин. 320±28 335±23* 370-580

Частота дыхания, дых./мин. 89±8 106±7* 70-110

Предсердно-желудочковая проводимость Р-С?, мс 40±3 49±5 40-80

Внутрижелудочковая проводимость (2115, мс 96±4 101±7 10-110

Продолжительность электрической систолы ОТ, мс 67±5 74±6 28-100

Примечание: данные представлены как среднее ± стандартное отклонение измерений во время перфузий у всех крыс указанных групп; * - р<0,05 по сравнению с нормотермическими перфузиями.

Результаты определения максимально переносимых доз цнеплатина и дноксадэта для внутрибрюшинной химиоперфузни у крыс

При выполнении НИПХ с цисплатином крысы переносили дозы препарата 10, 20, 30 и 40 мг/кг массы тела, при ГИПХ с цисплатином - 10 и 20 мг/кг массы тела. При выполнении НИПХ с диоксадэтом крысы переносили дозы цитостатика 5, 10, 15, 22,5, 25 и 30 мг/кг массы тела, при ГИПХ с диоксадэтом - 5, 10 и 15 мг/кг массы тела. При использовании более высоких доз данных цитостатиков у крыс на 2—4 дни после операции развивалась диарея, появлялись кровянистые выделения из носа, регистрировалось резкое снижение массы тела. На 5-12 дни после операции эти животные погибали, при аутопсии отмечали токсический энтероколит, признаки угнетения кроветворения (гипоплазия селезенки, множественные кровоизлияния в печени, брыжейке кишечника), а в случае перфузии с цисплатином - диффузное поражение почек. Таким образом, МПД цисплатина при НИПХ составила 40 мг/кг массы тела, при ГИПХ - 20 мг/кг массы тела. МПД диоксадэта при НИПХ составила 30 мг/кг массы тела, при ГИПХ - 15 мг/кг массы тела. Противоопухолевые эффекты внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения диссеминированного рака яичника у крыс

Результаты выживаемости крыс с ОЯ после проведенного лечения обобщены в таблице 2. МПЖ крыс, у которых выполнялась НИПП (группа II) составила 16 дней, что статистически значимо не отличалось от МПЖ крыс, не получавших лечения (группа I). В свою очередь ГИПП (группа III), начиная с 12 дня после перевивки ОЯ, статистически значимо увеличивала выживаемость животных. МПЖ крыс с ОЯ после выполнения

12

ГИПП составила 22,5 дня, что было достоверно выше МПЖ крыс контрольной группы (группа I) (Таблица 2).

Таблица 2 - Результаты выживаемости крыс с опухолью яичника после проводимого лечения

Группа Число крыс МПЖ, дни 95% ДИ для МПЖ, дни Р УПЖ по сравнению с группой I

I. Контроль 19 9 8-23

И. НИПП 11 16 10-20 0,300' 78%

III. ГИПП 14 22,5 12-43 0,0061 0,085 п 150%

IV. Цисплатин в/б 12 19,5 17-31 0,008 1 0,006 11 0,968 ,п 117%

V. Цисплатин НИПХ 12 37,5 20-58 <0,001 1 0,002 п 0,037 ™ 317%

VI. Цисплатин ГИПХ 14 25,5 13-62 0,003 1 0,613 1П 0,354 ™ 0,256 v 183%

VII. Диоксадэт в/б 19 28 16-36 0,001 1 0,004 п 0,511 ш 211%

VIII. Диоксадэт НИПХ 14 31 13-36 0,001 ' 0,006 " 0,679 v 0,661 v" 244%

IX. Диоксадэт ГИПХ 13 49 28-70 <0,0011 0,037 ш 0,002 Vl 0,020 ™ 0,058™ 444%

с I группой, - со II группой, - с III группой,

Примечание: значение р в сравнении:

- с V группой, " - с VI группой, v" - с VII группой, "" - с VIH группой.

Эффективность ГИПП сопоставима с эффектами однократного в/б введения противоопухолевых препаратов: МПЖ крыс после ГИПП с физиологическим раствором (22,5 дня) статистически значимо не отличалась от МПЖ крыс, получавших в/б цисплатин (19,5 дней, р=0,968) и диоксадэт (28 дней, р=0,511) (Таблица 2). МПЖ крыс с ОЯ после

выполнения НИПХ с цисплатином составила 37,5 дней, что достоверно выше МПЖ крыс контрольной группы (9 дней, р<0,001) и МПЖ крыс, у которых выполнялась НИПП без цитостатика (16 дней, р=0,002). МПЖ крыс после НИПХ с диоксадэтом была ниже, чем после НИПХ с цисплатином, и составила 31 день, но также статистически значимо отличалась от МПЖ нелеченых животных (9 дней, р=0,001) и МПЖ крыс после НИПП с физиологическим раствором (16 дней, р=0,006) (Рисунок 4, Таблица 2). НИПХ с цисплатином увеличивала МПЖ крыс с ОЯ на 317% по сравнению с контрольной группой, НИПХ с диоксадэтом - на 244%, причем эта разница не была статистически значимой (р=0,679). Однако, цисплатин в условиях НИПХ оказывал достоверно более выраженное противоопухолевое действие по сравнению с введением в виде в/б инъекции (р=0,037), тогда как эффективность диоксадэта при НИПХ не превышала эффективность препарата при в/б введении (р=0,661).

Рисунок 4. Кривые выживаемости крыс с опухолью яичника. Анализ эффективности нормотермической интраперитонеальной химиоперфузии с цисплатином и

диоксадэтом.

В условиях ГИПХ диоксадэт был значительно более эффективен, чем цисплатин. МПЖ крыс с ОЯ после ГИПХ с цисплатином составила 25,5 дней, что было статистически выше только МПЖ крыс в контрольной группе (9 дней, р=0,003), но не отличалось значимо от МПЖ крыс, получивших ГИПП (22,5 дня, р=0,613) и цисплатин в/б (19,5 дней, р=0,354) (Рисунок 5), и оказалось ниже, но не достоверно, МПЖ крыс, у которых выполнялась НИПХ с цисплатином (37,5 дней, р=0,256) (Таблица 3). В свою очередь, для ГИПХ с диоксадэтом была достигнута максимальная МПЖ крыс среди всех рассматриваемых групп - 49 дней. Указанное значение МПЖ было достоверно выше МПЖ крыс контрольной группы (9 дней, р<0,001), крыс, получавших ГИПП (22,5 дня, р=0,037) и диоксадэт в/б (28 дней, р=0,020). ГИПХ с диоксадэтом увеличивала МПЖ крыс с диссеминированным РЯ на 444%, тогда как ГИПХ с цисплатином - только на 183% (р=0,002). Более того, в группе крыс, у которых выполнялась ГИПХ с диоксадэтом, одно животное было живо на момент окончания эксперимента (90-й день после перевивки ОЯ) (Рисунок 5). На аутопсии не было обнаружено признаков опухолевого процесса в

брюшной и грудной полости, что позволило сделать заключение о том, что данное животное было полностью излечено от опухоли.

Продолжительность жизни, дни

Рисунок 5. Кривые выживаемости крыс с опухолью яичника. Анализ эффективности гипертермической интраперитонеалыюй химиоперфузии с цисплатином и

диоксадэтом.

По результатам аутопсии у значительного процента крыс (26,8% ± 7,6%) после выполнения ГИПП, НИПХ и ГИ11Х с цисплатином и диоксадэтом было отмечено отсутствие опухолевого поражения брюшной полости. Этот факт говорит о том, что технология в/б химиоперфузионного лечения была эффективна в лечении перитонеального карциноматоза и опухолевого асцита, и данные крысы могли бы быть полностью излеченными. Причиной гибели этих животных стал опухолевый гидроторакс, ассоциированный с перфузионным лечением (особенно гипертермическим).

Безопасность внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения

диссеминированного рака яичника у крыс

Ранней послеоперационной гибели (5 дней) животных отмечено не было. Осложнения перфузионного лечения, встречавшиеся в разных группах, приведены в таблице 3. Все приведенные осложнения, кроме диареи, регистрировались при проведении аутопсии. Данные животные в итоге погибали из-за прогрессирования опухолевого процесса, но на более ранних сроках (до 14 дня после операции включительно) по сравнению с крысами, у которых не развивались данные осложнения. Наибольшая частота послеоперационных осложнений зарегистрирована в группе крыс, получавших ГИПХ с цисплатином — 6 (43%). Также ГИПХ с цисплатином — единственный режим химиоперфузии, для которого было отмечено развитие спаечного процесса в брюшной полости крыс.

Таблица 3 - Послеоперационные осложнения у крыс-самок с асцитной опухолью яичника

Группа Воспаление верхних дыхательных путей, Некроз брыжейки кишечника в области шва Перитонит Спайки в кишечнике Парез конечностей Диарея Кровоизлияние в брюшную полость Число крыс с послеоперационными осложнениями, Р

I. Контроль (п=19) 0 0 0 0 0 0 0 0

И. НИПП (п=11) 0 2 1 0 0 0 0 3 (27%) р-0,018 1

III. ГИПП (п=14) 1 0 0 0 0 0 1 2(14%) р=0,094 1 р=0,430 11

V. Цисплатин НИПХ (п=12) 0 0 0 0 1 0 0 1 (8%) р=0,208 1 р=0,242 11

VI. Цисплатин ГИПХ (п=14) 1 0 0 1 3 1 0 6 (43%) р-0,002 1 р--0,100 111

VIII. Диоксадэт НИПХ (п=14) 1 0 0 0 0 0 1 2 (14%) р=0,094 1 р=0,43011 р=0,642 v

IX. Диоксадэт ГИПХ (п=13) 1 0 1 0 0 1 1 4(31%) р-0,011 1 р—0,312 '" р=0,524 Vl

Примечание: значение р в сравнении:' - с I группой, " - со И группой,111 - с III группой, v - с V группой, vl -с VI группой.

В/б перфузии в режиме нормотермии переносились животными лучше, чем

перфузии в режиме гипертермии. У всех крыс после НИПП, НИПХ с цисплатином и

диоксадэтом масса тела возвращалась к первоначальным значениям к 7 дню после

операции, тогда как после ГИПП и ГИПХ с цитостатиками значение относительной массы

тела не достигло 100% даже к 10 послеоперационному дню (Рисунок 6). Как для НИПХ,

так и для ГИПХ минимальные значения относительной массы тела крыс после проведения

перфузии - 88% и 84% соответственно - регистрировались в случае использования

цисплатина (Рисунок 6). Полученные данные, вероятно, обусловлены тем, что цисплатин

16

оказывал более выраженное токсическое действие, чем диоксадэт, поэтому послеоперационный период у крыс после НИИХ и ГШ IX с цисплатином протекал тяжелее, чем у крыс, получавших НИПХ и ГИПХ с диоксадэтом.

• 1 О О i

о 95'

5 90. : «»• ! л

О 0

Рисунок 6. Изменения средней относительной массы тела крыс самок с опухолью яичника в течение 10 дней после нормотермических (1) и гипертермических (2) интраперитонеальных перфузий.

Результаты определения содержания цисплатина в перфузате и периферической крови крыс при выполнении гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии

Концентрация цисплатина в перфузате начинала резко снижаться, начиная с 20-й минуты перфузии, и к 40-й минуте перфузии составила 53,5% от первоначального значения (Таблица 4).

Таблица 4 - Содержание цисплатина (мг/мл) в образцах перфузионного раствора у крыс с опухолью яичника во время гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии.

Показатели Цисплатин 5 мг

мг/л

10 минут 20 минут 30 минут 40 минут

М±т 19,7±4,3 16,7±4,2 12,0±2,8 6,0±2,0

Min 10,5 7,1 6,8 1,7

Мах 30,5 27,1 19,8 10,7

% 98,5 83,5 60 53,5

Примечание: М - среднее значение концентрации цисплатина (рассчитано для четырех крыс); m -стандартная ошибка; Min - минимальное значение концентрации цисплатина; Мах - максимальное значение концентрации цисплатина.

Системная абсорбция цисплатина в течение ГИПХ была незначительной. Содержание цисплатина в плазме крови на протяжении перфузии не превышало 1,2% от введенной дозы. На основании полученных данных можно предположить, что оставшееся количество цисплатина (около 45% от общей дозы) накапливалось в тканях брюшной полости и в опухолевых узлах.

Результаты сравнительного исследования влияния диоксадэта на содержание лейкоцитов в периферической крови крыс с диссеминированным раком яичника при внутрибрюшинном введении и гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии

В/б введение диоксадэта (группа XI) привело к значительному снижению общего числа лейкоцитов по сравнению с контрольной группой (группа X) (Таблица 5).

Таблица 5 - Изменения числа лейкоцитов (среднее ± ошибка среднего) в периферической крови крыс с опухолью яичника после внутрибрюшинного и химиоперфузионного введения диоксадэта

Группа Дни после перевивки ОЯ Лейкоциты х Ю'/л Гранулоциты х Ю'/л Лимфоциты х Ю'/л Моноциты х Ю'/л

X. Контроль 0 10,1 ±2,0 2,5 ± 0,2 7,2 ± 0,8 0,4 ±0,04

2 7,2 ± 1,5 3,2 ± 0,5 3,7 г 0.4 0,2 ±0,03

3 10,2 ±2,2 3,3 ± 0,4 6,4 ±0,8 0,5 ± 0,07

5 12,3 ±2,4 4,3 ± 0,7 7,7 ± 0,5 0,6 ±0,1

7 11,2 ± 1,7 5,3 ± 0,8 5,2 ± 0,9 0,7 ±0,1

9 14,9 ±2,4 6,8 ± 0,8 6,8 ± 0,3 1,3 ±0,1

XI. Диоксадэт в/б 0 9,6 ± 1,7 2,8 ± 0,4 6,2 ± 0,8 0,6 ±0,07

2 5,6+ 1,0 2,9 ±0,4 2,5 ± 0,3 ; 0,2 ± 0,02

3 2,8 ± 0,4* 1,4 ±0,2* 1,3 ±0,1* 0,2 ± 0,03*

5 2,1 ±0,4* 0,6 ±0,1* 1,4± 0,1* 0,07 ±0,01*

7 4,2 ± 0,9* 1,5 ± 0,2* 3,2 ±0,8* 0,2 ± 0,04*

9 7,8 ± 1,8* 5,1 ±0,8* 2,4 ±0,6* 0,6 ±0,1*

XII. Диоксадэт ГИПХ 0 12,0 ±1,9 3,6 ± 0,4 7,6 ± 0,5 0,6 ± 0,04*

2 10,1±1,6# .: 4,1 ±0,4 4,9 ±0.4 0,3 ± 0,03

3 10,3 ± 1,6# 7,5 ± 0,6*# 4,3 ± 0,7# 0,4 ± 0,06#

5 13,0 ± 2,0# 7,5 ± 0,6*# 5,7± 0,5*# 0,6 ± 0,07#

7 17,8 ±4,5 *# 10,1 ±0,7*# 6,6 ± 0,8# 0,8 ± 0,07#

9 24,8 ± 8,9*# 17,4± 1,0*# 13,3 ± 1,3 *# 1,6±0,3#

Примечание: разница статистически значима по ^критерию Стьюдента (р < 0,05): * — по сравнению с группой X (крысы с опухолью яичника, не получавшие лечения); # — по сравнению со группой XI (в/б введение диоксадэта).

Максимальное снижение общего числа лейкоцитов у крыс в группе XI относительно группы X (17,1% ± 2,9, р—0,015) было зарегистрировано на пятый день после перевивки ОЯ. К концу исследования (девятый день после перевивки ОЯ) число лейкоцитов по-прежнему оставалось значительно ниже соответствующих значений в контрольной группе (52,3% ± 10,2, р=0,013). Похожие изменения после в/б введения диоксадэта (группа XI) были отмечены для отельных видов лейкоцитов: по сравнению с контрольной группой (группа X), число гранулоцитов снизилось до 18-75%, число лимфоцитов - до 18-62%, число моноцитов - до 12^6% (Таблица 5).

В группе крыс, у которых выполнялась ГИПХ с диоксадэтом (группа XII) общее число лейкоцитов на протяжен™ всего эксперимента (9 дней после перевивки ОЯ) не опускалось ниже соответствующих значений в контрольной группе и было значительно выше (318-619%) общего числа лейкоцитов у крыс, получавших диоксадэт в/б (группа XI). Также у крыс в группе XII наблюдался стойкий рост числа гранулоцитов, который был статистически значим как по сравнению с нелечеными животными, так и по сравнению с крысами, получавшими диоксадэт в/б. Число лимфоцитов в периферической крови крыс после ГИПХ с диоксадэтом увеличивалось по сравнению с животными в контрольной группе, однако статистически значимые различия наблюдались только на 5-й и 9-й дни после перевивки ОЯ. Изменения в количестве моноцитов у крыс, у которых выполнялась ГИПХ с диоксадэтом, не были статистически значимыми по сравнению с животными в контрольной группе (Таблица 5).

ВЫВОДЫ

1. Модель диссеминированного рака яичника, вызываемого внутрибрюшинной перевивкой асцитной опухоли яичника крысам-самкам, является адекватной для изучения внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения в эксперименте.

2. Разработана экспериментальная технология нормотермической и гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии на модели диссеминированного рака яичника у крыс и определены оптимальные режимы внутрибрюшинной химиоперфузии: время перфузии - 45 минут, объем перфузата - 200 мл, скорость циркуляции перфузата -10-15 мл/мин., температура перфузата в брюшной полости - 36,5-37,5°С для нормотермической и 40,5^1,5°С для гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии.

3. Химиоперфузионное лечение позволяет применять более высокие дозы противоопухолевых препаратов диоксадэта и цисплатина по сравнению с внутрибрюшинным введением. Максимально переносимые дозы диоксадэта для нормотермической и гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии составили соответственно 30 и 15 мг/кг, что в 20 и 10 раз больше максимально переносимой дозы при его внутрибрюшинном введении, максимально переносимые дозы цисплатина - соответственно 40 и 20 мг/кг, что в 10 и 5 раз больше максимально переносимой дозы при его внутрибрюшинном введении.

19

4. Противоопухолевые эффекты химиоперфузионного лечения зависят от температурного режима и используемого препарата и могут превышать эффекты внутрибрюшинного введения диоксадэта и цисплатина. Наиболее эффективным режимом является гипертермическая интраперитонеальная химиоперфузия с диоксадэтом, получено потенцирование противоопухолевого эффекта цитостатика при внугрибрюшинной химиоперфузии и гипертермии. Медиана продолжительности жизни крыс после внутрибрюшинного введения диоксадэта составляет 28 дней, гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии с диоксадэтом - 49 дней (р=0,020).

5. Для цисплатина не получено разницы в противоопухолевых эффектах при нормотермической интраперитонеальной химиоперфузии и гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии. Медиана продолжительности жизни крыс после нормотермической интраперитонеальной химиоперфузии с цисплатином составляет 37,5 дней, гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии с цисплатином - 25,5 дней (р=0,256), внутрибрюшинного введения цисплатина - 19,5 дней (р=0,037).

6. Гипертермическая интраперитонеальная химиоперфузия по сравнению с нормотермической интраперитонеальной химиоперфузией, независимо от препарата, вызывает большее число послеоперационных осложнений. Химиоперфузионное лечение диоксадэтом переносится животными лучше, чем цисплатином. Частота послеоперационных осложнений у крыс после нормотермической интраперитонеальной химиоперфузии с цисплатином и диоксадэтом составила соответственно 8 и 14%; после гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии с цисплатином и диоксадэтом - 43 и 31% соответственно; при этом химиоперфузии с цисплатином приводили к более выраженному и длительному снижению относительной массы тела животных после операции.

7. Во время гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии цисплатин в значительном количестве накапливаеся в тканях и органах брюшой полости крыс с диссеминированным раком яичника и мало проникает в общий кровоток. На момент окончания перфузии содержание цисплатина в перфузионном растворе составляет 53,5% от первоначальной дозы, при этом в системный кровоток абсорбируется не более 1,2% от общей введенной дозы цисплатина.

8. Гипертермическая интраперитонеальная химиоперфузия с диоксадэтом в дозе 15 мг/кг обладает значительно меньшей гемотоксичностью по показателям общего числа лейкоцитов, количества гранулоцитов, лимфоцитов и моноцитов в периферической крови крыс, по сравнению с однократной внугрибрюшинной инъекцией препарата в дозе 1,5 мг/кг.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанная экспериментальная технология внутрибрюшинного химиоперфузионного лечения диссеминированного рака яичника предлагается для доклинического тестирования существующих и новых лекарственных препаратов на противоопухолевую активность в условиях химиоперфузии.

2. Для оценки фармакокинетики цитостатиков во время внутрибрюшинной химиоперфузии целесообразно применять методику масс-спектрометрии, которая позволяет определять концентрацию препарата в перфузате и плазме крови.

3. Нормотермическая интраперитонеальная химиоперфузия с цисплатином, как более безопасный и одинаково эффективный режим по сравнению с гипертермической химиоперфузией с препаратом по результатам экспериментального исследования, рекомендуется для клинических испытаний в лечении диссеминированного рака яичника.

4. Диоксадэт как препарат, эффективный в экспериментальном химиоперфузионном лечении, рекомендуется для клинических испытаний при гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии у пациентов с диссеминированным раком яичника.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Беляева O.A., Беспалов В.Г., Киреева Г.С., Сенчик К.Ю., Стуков А.Н., Беляев A.M. Возможности применения интраоперационной гипертермическон перфузии в лечении канцероматоза брюшины // Хирургия. Журнал им. H.H. Пирогова. -2014,-№8.-С. 59-61

2. Беляева O.A. Беспалов В.Г., Киреева Г.С-, Сенчик К.Ю., Стуков А.Н., Беляев

A.M. Моделирование химиоперфузионного лечения канцероматоза брюшной полости // БЭБиМ - 2015. - №1. - С. 91-95.

3. Беляева O.A., Беспалов В.Г., Сенчик К.Ю., Киреева Г.С., Стуков А.Н., Аристова

B.А., Иванцов А.О., Вышинская Е.А., Майдин М.А., Семенов АЛ., Александров В.А. Экспериментальная технология химиоперфузионного лечения канцероматоза брюшной полости при раке яичника // Вопр. онкол. - 2014. - Т.60, №1. - С. 71-78.

4. Беспалов В.Г., Беляева O.A., Киреева Г.С., Сенчик К.Ю., Стуков А.Н., Беляев A.M. Повышение противоопухолевой активности диоксадэта и цнсплатина при гипертермической интраперитонеальной химиоперфузии на модели распространенного рака яичника // Современные технологии в медицине. - 2014. -Т. 6, №4.-С. 48-54.

5. Беспалов В.Г., Беляева O.A., Киреева Г.С.. Сенчик К.Ю., Стуков А.Н. Интраперитонеалыюе химиоперфузионное лечение диссеминированного рака яичника диоксадэтом в сравнении с цисплатином в эксперименте // Сиб. онкол. журнал. - 2014. - Т.62, №2. - С. 14-18.

6. Киреева Г.С.. Беспалов В.Г., Беляева O.A., Сенчик К.Ю., Стуков А.Н., Алексеев

B.В., Гафтон Г.И., Гусейнов К.Д., Беляев А.М. Сравнительный анализ миелотоксичности диоксадэта при внутрибрюшинном введении и гипертермической интраперитонеалыюй химиоперфузпи на модели рака яичника у крыс // Вопр. онкол. - 2014. - Т. 60, № 6. - С. 750-754.

7. Сенчик К.Ю., Беспалов В.Г., Стуков А.Н., Беляева O.A., Панченко А.П., Киреева Г.С.. Аристова В.А., Трашков А.П. Химиоперфузионное лечение канцероматоза брюшины // Вестник Российской Военно-медицинской академии - 2013. - Т. 44, №4.-С. 222-228.

8. Беляева O.A., Беспалов В.Г., Киреева Г.С.. Сенчик К.Ю., Стуков А.Н., Беляев A.M. Экспериментальная модель химиоперфузионного лечения распространенного рака яичника у крыс // VIII съезд онкологов и радиологов СНГ и Евразии. -Международный научно-практический журнал «Евразийский онкологический журнал». - Т.З, №3. - 2014. - С. 88.

9. Беляева O.A., Беспалов В.Г., Стуков А.Н., Сенчик К.Ю., Киреева Г.С.. Аристова В.А., Мочалина Ю.А. Разработка нового лекарственного препарата для высокодозного химиоперфузионного лечения рака яичника // Проблемы разработки новых лекарственных средств: Материалы Первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. - М.: ФГБУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», 2013.-С. 12.

10. Беляева O.A., Беспалов В.Г., Стуков А.Н., Сенчик К.Ю., Киреева Г.С.. Аристова В.А., Мочалина Ю.А. Разработка новой технологии химиоперфузионного лечения диссеминированного рака яичников в эксперименте // Онкология XXI века - от научных исследований в клиническую практику: Материалы VIII Всероссийского съезда онкологов. - Вопр. онкол. - 2013. - Т. 59, Приложение к № 3. - СПб.: Ладога, 2013.-Т. II.-С. 704-705.

11. Киреева Г.С. Интраперитонеальная перфузионная химиотерапия диссеминированного рака яичника в эксперименте // Четвертая конференция молодых ученых ФГБУ «НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова»: Сборник научных трудов. - СПб.: Ладога, 2014 - С. 15-18

12. Киреева Г.С.. Беляева O.A., Беспалов В.Г., Сенчик К.Ю., Стуков А.Н., Аристова В.А., Майдин М.А., Беляев A.M. Интраперитонеальное химиоперфузионное лечение распространенного рака яичника // Человек и лекарство: Тезисы докладов XXI Российского национального конгресса. - М.: ЗАО РИЦ "Человек и лекарство", 2014. -

C. 259

13. Киреева Г.С.. Беляева O.A., Беспалов В.Г., Сенчик К.Ю., Стуков А.Н., Беляев A.M. Эффективность диоксадэта в интраперитонеальном химиоперфузионном лечении карциноматоза брюшины в эксперименте // Материалы Всероссийской конференции молодых ученых-онкологов, посвященной памяти академика РАМН Н.В. Васильева

«Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии». — Сиб. онкол. журнал. - 2014. - Приложение №1. - С. 62-63

14. Киреева Г.С.. Беляева О.А., Беспалов В.Г., Стуков А.Н., Сенчик К.Ю., Беляев A.M. Сравнительное изучение эффективности нормотермической и гипертермической интраперитонеальной перфузии в лечении распространенного рака яичника в эксперименте // Тезисы 10-й Конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения». - СПб.: СЗПД-ПРИНТ, 2014. - С. 43

15. Киреева Г.С.. Беляева О.А., Беспалов В.Г., Стуков А.Н., Сенчик К.Ю., Аристова В.А., Мочалина Ю.А. Гипертермическая интраперитонеальная химиотерапия канцероматоза брюшины диоксадэтом у крыс с перевиваемым раком яичника // Онкология XXI века - от научных исследований в клиническую практику: Материалы VIII Всероссийского съезда онкологов. - Вопр. онкол. - 2013. - Т. 59, Приложение к № 3. - СПб.: Ладога, 2013. - Т. I. - С. 75-76.

16. Bespalov V.G., Belyaeva О.A., Stukov A.N., Senchik K.Yu., Kireeva G.S.. Aristova V.A. // 3rd world congress on Cancer Science & Therapy. - Journal of Cancer science and therapy. - 2013.-Vol. 5, № 10.-P. 24.

17. Kireeva G.S.. Belyaeva O.A., Bespalov V.G., Senchik K.Yu., A.N. Stukov, A.M. Belyaev Efficacy of normothermic and hyperthermic intraperitoneal perfusion in the treatment of ovarian cancer in a rat model // The 12-th annual meeting of Japanese Society of Medical Oncology. - Annals of Oncology. - 2014. - Vol.25, Suppl. 5. - P.67

18. Kireeva G.S.. Belyaeva O.A., Bespalov V.G., Senchik K.Yu., Stukov A.N., Belyaev A.M. A new survival model for hyperthermic intraperitoneal chemoperfusion (HIPEC) in tumor-bearing rats in the treatment of advanced ovarian cancer // 23rd Biennial Congress of the European Assosiation for Cancer Research: From basic research to personalized cancer treatment. - Eur. J. Cancer. - 2014. - Vol. 50, Suppl. 5. - Abstract 764, P. S183-S184.

\ •••

Подписано в печать 26.06.2015 Формат 60x84Цифровая Печ. л. 1.0 Тираж 100 Заказ № 13/06 печать

Типография «Фалкон Принт» (197101, г. Санкт-Петербург, ул. Большая Пушкарская, д. 54, офис 2, Сайт: falconprint.ru)