Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Влияние ТЭС-терапии на показатели прооксидантно-антиоксидантной системы при ишемическом инсульте

На правах рукописи

ЛЕВИЧКИН Валерий Дмитриевич

ВЛИЯНИЕ ТЭС-ТЕРАПИИ НА ПОКАЗАТЕЛИ ПРООКСИДАНТНО-АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ИШЕМИЧЕСКОМ ИНСУЛЬТЕ (экспериментальное исследование)

14.03.03 - патологическая физиология 03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 3 ОКТ 2014

Краснодар - 2014

005553823

005553823

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России).

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Каде Азамат Халидович; доктор медицинских наук, профессор Павлюченко Иван Иванович.

Официальные оппоненты:

Рогова Людмила Николаевна, доктор медицинских наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра патологической физиологии, заведующая кафедрой; Терентьев Владимир Петрович, доктор медицинских наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра внутренних болезней с основами физиотерапии № 1, заведующий кафедрой.

Ведущая организация:

государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится 12 ноября 2014 года в 15.00 часов на заседании диссертационного совета Д208.038.02 на базе ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России по адресу: 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России.

Автореферат разослан «_» октября 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д208.038.02,

доктор медицинских наук, доцент

Лапина Наталья Викторовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Ишемический инсульт (ИИ) - острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК) с развитием стойких симптомов поражения, вызванных инфарктом в мозговое вещество (Клинические рекомендации Всероссийского общества неврологов, 2007). Среди современных медико-социальных проблем ИИ занимает одно из ведущих мест. ИИ является одной из лидирующих причин заболеваемости и смертности в мире (A. D. Lopez et al., 2006). Рост числа инсультов головного мозга (ГМ) среди трудоспособного населения нашей страны является на данный момент одним из самых острых вопросов отечественного здравоохранения. В РФ заболеваемость инсультом среди лиц старше 25 лет составляет 3,48±0,21, смертность от инсульта 1,17±0,06 на 1000 населения в год. Для сравнения в США частота инсульта среди жителей европеоидной расы составляет 1,38-1,67 на 1000 населения. Доля ОНМК в структуре общей смертности в РФ составляет 21,4%. Смертность от инсульта среди лиц трудоспособного возраста увеличилась за последние 10 лет более чем на 30% (41 на 100000 населения). Ранняя 30-дневная летальность после инсульта составляет 34,6%, а в течение года умирают приблизительно 50% больных, то есть каждый второй заболевший. ИИ - преобладающая причина инвалидизации населения (3,2 на 1000 населения). По данным Национального регистра инсульта, 31% пациентов, перенесших инсульт, нуждаются в посторонней помощи для ухода за собой, 20% не могут самостоятельно ходить. Лишь 8% выживших больных могут вернуться к прежней работе (Е. И. Гусев, 2009).

Независимо от причины и патогенетического варианта развития ИИ воздействие патогенного сосудистого фактора на ткань мозга заканчивается возникновением острой локальной церебральной ишемии. Церебральная ишемия является ключевым звеном метаболического этапа в патогенезе ИИ, в основе которого лежат универсальные реакции ткани мозга на повреждающие воздействия или изменения окружающей среды, в том числе нарушения деятельности сосудистых систем, обеспечивающих жизнедеятельность ГМ.

Очаг ишемии мозга неоднороден, в нем выделяют: зону необратимого повреждения которую называют ядром инфаркта и зону ишемического поражения обратимого характера которую обозначают термином «пенумбра» (ишемическая полутень). За счет зоны пенумбры происходит постепенное увеличение размеров инфаркта. К настоящему времени известно, что единый организованный ответ на острую церебральную ишемию осуществляется благодаря взаимодействию нервной, иммунной и эндокринной систем, использующих для этого нейротрансмитгеры, цитокины, факторы роста, гормоны и действующих на сходные рецепторы. Острое асептическое воспаление лежит в основе разрастания зоны инфаркта мозга в течение первой недели после возникновения ИИ, а в более поздние сроки - организации зоны инфаркта мозга (Ginsberg, 2003; Fisher, Ratan, 2003; Markus, 2004).

Данные об изменении уровня ß-эндорфина при нарушениях мозгового кровообращения практически отсутствуют.

Выделяют два основных направления в патогенетической терапии ИИ: улучшение перфузии ткани мозга - реперфузия, и нейропротективная терапия. Воздействие на зону пенумбры является ключевым звеном терапии инсульта.

Основной целью этой терапии является предотвращение гибели клеток в зоне пенумбры, что уменьшает объем инфаркта мозга. Достичь это возможно за счет разработки таких воздействий и лекарственных препаратов, которые приводили бы к максимальному сохранению интактной ткани мозга и, следовательно, менее выраженному неврологическому дефициту (Э. А. Аракелова, 2011). Однако на сегодняшний день все имеющиеся нейропротекторные препараты, испытанные в мультифокальных клинических исследованиях, недостаточно эффективны (ЯоШег, 2008). Ряд препаратов, уменьшающих ишемическое повреждение мозга в эксперименте, в клинических испытаниях дали отрицательные результаты (Т. Н. Федорова, 2004). Для клинических испытаний важно разработать комбинированную лекарственную стратегию, патофизиологически значимую терапию с количественной оценкой обратимости повреждений вещества мозга. Поэтому разработка новых подходов к терапии и профилактике инсульта является важнейшей задачей медицины.

Немедикаментозный метод ТЭС-терапии, предложенный профессором В.П.Лебедевым и соавт. (1983), направлен на избирательную активацию защитных (антиноцицептивных) механизмов мозга, деятельность которых осуществляется с участием Р-эндорфинов и серотонина, обладает многообразием эффектов, общей направленностью которых является нормализация гомеостаза. Все эффекты по механизму делят на 2 типа: центральные (анальгезия, стабилизация гемодинамики и т. д.) (В. П. Лебедев и соавт., 1986; Я. С. Кацнельсон, А. Я. Леоско, 1987; А. Я. Гриненко и соавт., 1988; Е. М. Крупицкий и соавт., 1998) и периферические (модуляция динамики острофазного ответа при воспалении, ускорение заживления кожных ран, язвенных дефектов слизистой оболочки желудка, очага некроза при инфаркте миокарда, пиелонефрите) (В. П. Лебедев, 1986; Р. В. Шапоренко, 2008; Е. А. Губарева, 2009; В. Г. Борисенко, 2009; В. С. Тиликин, 2012).

Изучено также влияние ТЭС-терапии на репаративные процессы у больных ИМ. Доказано, что при ее применении происходит ускорение формирования постинфарктного рубца и развитие компенсаторной гипертрофии внеинфарктных отделов миокарда, уменьшается число случаев появления сердечной недостаточности и число рецидивов ангинозных болей, улучшается общее состояние гемодинамики (А. П. Голиков и соавт., 1989; Н. А. Зюзина, 2006; Е. А. Губарева, 2009; В. Г. Борисенко, 2009).

Однако, до сих пор, не исследована возможность использования ТЭС-терапии с целью коррекции про-/антиоксидантного статуса в острейший период ИИ, нарушение которого является важным патофизиологическим фактором развития и течения этой нозологии.

Цель исследования. Изучение в эксперименте возможности улучшения показателей прооксидантно-антиоксидантной системы и уменьшения повреждения ткани мозга в острейший период ишемического инсульта применением ТЭС-терапии.

Задачи исследования:

1. Оценить степень повреждения ткани мозга в зоне ишемии и динамику объема очага деструкции в разные сроки (1, 3, 7, 14 сутки) развития экспериментального ишемического инсульта (морфологические исследования).

2. Оценить состояние показателей прооксидантно-антиоксидантной системы в разные сроки (1, 3, 7, 14 сутки) развития экспериментального ишемического инсульта (по выраженности хемилюминисценции плазмы крови и активности ферментов антиоксидантной системы эритроцитов, уровню общей антиокислительной активности плазмы).

3. Оценить влияние ТЭС-терапии на степень повреждения ткани мозга в зоне ишемии и динамику объема очага деструкции в разные сроки (1, 3, 7, 14 сутки) развития экспериментального ишемического инсульта (морфологические исследования).

4. Оценить состояние показателей прооксидантно-антиоксидантной системы в разные сроки (1, 3, 7, 14 сутки) развития экспериментального ишемического инсульта (по выраженности хемилюминисценции плазмы крови и активности ферментов антиоксидантной системы эритроцитов, уровню антиокислительной активности плазмы) на фоне ТЭС-терапии

5. Определить оптимальные временные параметры и длительность курсового применения ТЭС-терапии в условиях экспериментального ишемического инсульта.

Научная новизна.

Впервые получены данные о состоянии и динамике показателей прооксидантно-антиоксидантной системы в разные сроки развития (1, 3, 7, 14 сутки) экспериментального ишемического инсульта ассоциировано со степенью повреждения ткани мозга в зоне ишемии и динамикой объема очага деструкции.

Впервые исследовано влияние ТЭС-терапии на динамику показателей прооксидантно-антиоксидантной системы в разные сроки развития (1, 3, 7, 14 сутки) экспериментального ишемического инсульта ассоциировано со степенью повреждения ткани мозга в зоне ишемии и динамикой объема очага деструкции.

Впервые обосновано нейропротективное влияние ТЭС-терапии при ее применении в острейшем периоде экспериментального ишемического инсульта.

Получены новые экспериментальные данные, позволяющие заключить, что ТЭС-терапия оказывает нейропротективное действие в зонах вторичного поражения за счет усиления продукции Р-эндорфина. Она способствует уменьшению выраженности отдаленных последствий ишемии (оксидативный стресс и локальное воспаление), оказывая влияние на баланс прооксидантной и антиоксидантной систем организма и активность эндогенных компонентов АОС. Выраженное нейропротективное действие ТЭС-терапии, восстановление баланса прооксидантной и антиоксидантной систем при ее применении ограничивает объем зоны деструкции и последующее расширение очага инфаркта мозга.

Практическая значимость.

Экспериментальные исследования показали принципиальную возможность использования ТЭС-терапии для коррекции дисбаланса в системе прооксиданты и антиоксиданты и ее цитопротекторное действие в острейший период ишемического инсульта.

Использование ТЭС-терапии для коррекции нарушений баланса про- и антиоксидантных систем и стресс-лимитирующей системы позволит корригировать степень повреждения ткани мозга у пациентов в острейший период ишемического инсульта. Это сократит сроки пребывания больных в

стационаре и улучшит их неврологический статус.

Кроме того, метод ТЭС-терапии не требует больших экономических затрат и доступен в выполнении.

Основные положения, выносимые на защиту:

- динамика нарушений баланса прооксидантной и антиоксидантной систем в острейший период экспериментального ишемического инсульта характеризуется резкой активацией процессов СРО (возрастание уровня индуцированной хемилюминесценции) и напряжением и декомпенсацией системы антиоксидантной и антирадикальной защиты (падение активности СОД и КАТ и АОА);

нарушения баланса прооксидантной и антиоксидантной систем происходят на фоне падения уровня (3-эндорфина в крови и ассоциируются с грубыми нарушениями структуры мозга в очаге ишемии (некроз нейронов, гипохромия ядер клеток, развитие воспалительного отека, нарушение формирования глиомезодермального рубца);

- проведение ТЭС-терапии, после моделирования ишемического инсульта, значительно снижает активацию реакций СРО, минимизирует нарушения баланса прооксидантно-антиоксидантной систем в острейший период ИИ;

- ТЭС-терапии предупреждает падение уровня р-эндорфина в крови и оказывает нейропротективное, антигипоксическое и противовоспалительное влияние, значительно улучшая состояние структуры мозга в очаге ишемии (ограничение некроза нейронов уменьшение воспалительного отека, более быстрое и качественное формирование глиомезодермального рубца).

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы представлены на международных конференциях «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (Италия, 2014); «Современные наукоемкие технологии» (Израиль, 2014); «Фундаментальные исследования» (Доминиканская республика, 2013, 2014); «Инновационные медицинские технологии» (Франция, 2014). На всероссийской конференции XII научно-практическая конференция молодых учёных и студентов юга России «Медицинская наука и здравоохранение» (Краснодар, 2014).

Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационной работы внедрены на кафедрах общей и клинической патофизиологии и общей и фундаментальной биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России, Центральной научно-исследовательской лаборатории отдела клинической экспериментальной иммунологии и молекулярной биологии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России.

Личный вклад автора в исследование. Автором сформулированы цель и задачи диссертации, составлен план, обеспечены организация и реализация этапов работы, проведены экспериментальные исследования, выполнена статистическая обработка результатов, их обсуждение, определены основные положения исследования, содержание выводов и практических рекомендаций. Авторский вклад в выполнении работы и написание научных работ по теме диссертации 70%.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе б статей - в журналах, включенных в перечень ведущих рецензируемых

научных журналов и изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста, который включает 11 таблиц и 56 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 2 глав, отражающих результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы, содержащего 120 отечественных и 39 иностранных источников, и приложения.

Содержание работы Эксперименты проведены на 100 взрослых белых нелинейных крысах-самцах средней массой 200±25 гр. Возраст животных колебался от 9 месяцев до 1 года. На животных моделировали ИИ. У них осуществляли забор крови, тканей ГМ. Содержание животных и постановка экспериментов проводилась в соответствии с требованиями приказов № 1179 МЗ СССР от 11.10.1983 года и № 267 МЗ РФ от 19.06.2003 года, а также международными правилами «Guide for the Саге and Use of Laboratory Animals». Все проводимые вмешательства в экспериментах (процедуры по созданию модели ИИ, проведение ТЭС-терапии) проводили под общим наркозом (золетил 0,3 мг в/м («Virbac» Франция), ксиланит 0,8 мг в/м (ЗАО «НИТА-ФАРМ, Россия, г. Саратов), атропина сульфат 0,1% раствор - 0.01 мл п/к из расчета на 100 гр. массы тела животного). Животные были разделены на 3 группы (табл. 1).

Таблица 1

Количественная характеристика исследования_

№ группы Название группы Количество животных (п)

1 группа Контрольная группа 20

2 группа Крысы с моделированием ишемического инсульта 40

3 группа Крысы с моделированием ишемического инсульта и последующим проведением ТЭС-терапии 40

Всего животных 100

• 1 группа (п=20) - контрольная - интактные крысы, животные подвергались эвтаназии без проведения оперативного вмешательства.

• 2 группа (п=40) - крысы с моделированием ИИ без проведения ТЭС-терапии. Эвтаназию проводили по 10 животных на 1, 3, 7 и 14 сутки после моделирования ИИ.

• 3 группа (п=40) — крысы с моделированием ИИ, которым проводилась ТЭС-терапия в анальгетическом режиме в течение 7 дней после моделирования ИИ.

Эвтаназию проводили по 10 животных на 1, 3, 7 и 14 сутки после операции.

Применялась методика моделирования ИИ путем создания у крыс острой локальной церебральной ишемии за счет коагуляции правой средней мозговой артерии (ПСМА) [Y. Wang-Fischer, 2009; А. И. Трофименко и соавт., 2013].

Операцию производили при помощи налобной лупы с увеличением 4,8 крат. Кожу в области операционного поля брили, обрабатывали спиртом и спиртовым раствором йода. После обработки операционного поля производили разрез кожи над скуловой костью (около 1,5 см). Затем обнажали слюнную железу, расположенную в задненижнем квадрате операционного поля. Слюнную железу вместе с сосудистым сплетением аккуратно отделяли от окружающих тканей и перемещали в задневерхний квадрат операционного поля. После удаления части скуловой кости открывали края прикрепления височной мышцы к нижней челюсти и проводили ее разрез вдоль волокон. Края височной мышцы раздвигали и обнажали височную ямку. Отодвигали крыловидную мышцу и открывали поверхность черепа в промежутке между овальным отверстием и отверстием зрительного нерва. В этой зоне сверлили отверстие диаметром около 3 мм и выделяли ПСМА. ПСМА в этой зоне коагулировали электрокоагулятором собственной конструкции. После коагуляции движение крови по ПСМА прекращалось. Контроль остановки кровотока по ПСМА производился визуально: побледнение дистального (от места коагуляции) отдела артерии и отсутствие кровотечения при повреждении артерии дистальнее места коагуляции. После моделирования ишемии мозга, максимально восстанавливали топографию мышц и мягких тканей, фиксировали сухожилия височной мышцы к нижней челюсти для возможности жевания. В ходе эксперимента проводили наблюдения за крысами для оценки общего состояния и определения выживаемости.

Для морфологического подтверждения ишемического инсульта и оценки выраженности повреждения ткани мозга в разных группах животных у них изымали головной мозг и проводили гистохимическое исследование на кафедре гистологии с эмбриологией ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России: окраска гематоксилином и эозином по Д. Э. Коржевскому, А. В. Гилярову (2010), окраска ткани головного мозга толуидиновым синим по Нисслю (Д. Э. Коржевский, А. В. Гиляров, 2010), окраска ткани мозга по Чиаччио (R. D. Lillie, 1965). Микроскопию полученных стекол проводили с использованием микроскопа Микромед-6 (Россия). Фотографии получали с использованием окулярной камеры «Levenchuk 230» (США).

Для определения размеров очага церебральной ишемии пользовали тетразолиевый метод (Y. Wang-Fischer, 2009; А. И. Трофименко и соавт., 2013), с применением 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (2,3,5-ТТХ) (Россия). Тетразолиевый метод использовали, поскольку он дает более точные данные объемов очага повреждения по сравнению с МРТ в режиме Т2-ВИ. Получаемые данные коррелируют со степенью неврологического дефицита у животных с ишемией мозга в поведенческих тестах (Д. Н. Силачев и соавт., 2009).

ТЭС-терапию экспериментальным животным проводили модифицированным двухпрограммным электростимулятором «ТРАНСАИР-03» (ООО «Центр транскраниальной электростимуляции», г. Санкт-Петербург) в анальгетическом режиме. Параметры транскраниальной электростимуляции для крыс представлены в таблице 2 (В. П. Лебедев и соавт., 1988; М. Г. Ковалев, 1993).

Таблица 2

Параметры электрического тока, использованного при проведении _ТЭС-терапии в режиме анальгезии у крыс_

Частота, Гц Длительность импульса, мс Величина суммарного тока, мА

70±2 3,75 ± 0,25 0,6-2,5

Продолжительность первого сеанса составляла 15 минут, всех последующих по 30 минут. В группе 3 сеансы ТЭС-терапии проводили после моделирования ИИ, в течение 7 дней.

В работе были изучены показатели про-/антиоксидантного статуса и уровень p-эндорфинов у животных 3 исследуемых групп. Все исследования проведены на базе ЦНИЛ Отдел клинической экспериментальной иммунологии и молекулярной биологии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России. Забор крови проводили в период эвтаназии. Кровь собирали в объеме 3 мл в пластиковые центрифужные пробирки с пробкой с добавлением 1000 Ед гепарина на 1 мл крови. Затем ее центрифугировали на центрифуге ОП-12 (Россия) в течение 15 минут со скоростью 1500 об/мин. Часть плазмы крови собирали пастеровской пипеткой, замораживали в криопробирках и хранили в холодильнике при -70°С

Уровень Р-эндорфина в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с помощью набора «Elabscience Biotechnology Co., Ltd», (Китай). Учет реакции, построение калибровочных графиков и определение концентрации анализов проводили на фотометре вертикального сканирования «ANTHOS 2010» (Австрия) с помощью программного обеспечения «Auswerte-Softwere anthos labtec», версия 2.3.0.7.

Оценку прооксидантно-антиоксидантного статуса биологического материала проводили на базе лаборатории кафедры фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России. Люминол-зависимая Н202-индуцированная хемилюминесценция плазмы крови измерялась на хемилюминотестере ЛТ-1 производства СП «ХОРОС» (г. Ростов-на-Дону) по методике НИИБИ в собственной модификации (И. И. Павлюченко, С. Р. Федосов, А. А. Басов, 2006). Определение антиокислительной активности (АОА) плазмы крови амперометрическим способом проводилось на анализаторе антиоксидантной активности «Яуза-01-AAA», производства ОАО НПО «Химавтоматика» по методу (А. Я. Яшин и соавт., 2003) в собственной модификации (А. А. Басов и соавт., 2007). Активность каталазы (КАТ) оценивали в гемолизате эритроцитов по методу (R. Beers и соавт., 1952) в собственной модификации (И. И. Павлюченко и соавт., 2006). Для определения активности супероксидцисмутазы (СОД) использовали методику (В. А. Костюк и соавт., 1990) в собственной модификации (И. И. Павлюченко и соавт., 2006).

Статистическую обработку полученных данных осуществляли методами непараметрической статистики с использованием программного обеспечения «Statistica 6.0 for Windows» фирмы «Stat Soft, Inc.» и «Micrisoft Office Excel 2003». Полученные результаты исследуемых групп после статистической обработки выражали в виде средних значений (М) и ошибки среднего (т). Сравнение выборок проводилось по непараметрическому критерию Манна-Уитни, с установлением уровня значимости *р<0,05 и **р<0,01.

Результаты исследования

Повреждение мозга при его ишемии обусловлено развитием ОС — универсальный механизм повреждения тканей организма, опосредованный СР и другими субстанциями с высоким окислительным потенциалом. Важно отметить, что содержание кислорода в тканях даже в условиях выраженной ишемии остается значительным (В. В. Зинчук и соавт., 2003; И. А. Житина, 2013).

ОС - процесс образования АФК радикальной и нерадикальной природы, приводящих к активации апоптоза и разрушению клеточного содержимого, включая ДНК. Исходно ОС предназначен для выполнения естественной биологической функции - упорядочения клеточного пула. Нарушение баланса эндогенных про- или антиоксидантных систем в клетке приводит к митохондриальной дисфункции и другим клеточным и тканевым нарушениям. Острый ОС служит причиной патохимических проявлений при ИИ. Каждая живая система снабжена мощной системой АОЗ, потому степень вредоносности ОС, зависит от соотношения про- и антиоксидантного потенциала системы (М. С. Степанова, 2009; О. А. Гомазков, 2011). Изменения активности антиоксидантных ферментов зависят от интенсивности образования АФК: в случае умеренного возрастания АФК возникает, как правило, активация ферментного звена АОС, при чрезмерном возрастании уровня СР нередко происходит, подавление ферментативного звена радикальной защиты клеток (Инфекционный процесс. Академия естествознания. М., 2006).

Накопление СР приводит к повреждению митохондрий, прогрессирующему снижению концентрации макроэргов и накоплению аденозинмонофосфата, который активизирует протеинкиназную систему, усугубляя тем самым процессы деструкции клеточных мембран.

Клетки мозга проявляют повышенную уязвимость к ОС. Митохондриальная недостаточность приводит к нарушению баланса внутриклеточного кальция в нейроне, и, в конечном счете, - к гибели клетки.

Дисфункцию АОС и развитие ОС можно осуществлять различными методами, к ним относится и биофизический метод индуцированной хемилюминисценции (ХЛ) [А. В. Доманский и соавт., 2005].

Результаты, полученные в проведенных экспериментальных исследованиях, согласуются с литературными данными о механизмах активации ОС и его роли в повреждении ткани мозга. Наблюдаемое в 1 сутки после моделирования ИИ увеличение максимальной амплитуды вспышки хемилюминисценции (МВХЛ) (на 131,4% по сравнению с контрольной группой) свидетельствует об активации процессов СРО. Рост амплитуды МВХЛ продолжался вплоть до 7 суток, достигая 395,6%. К 14 суткам происходило некоторое снижение (до 255,5% по сравнению с контрольной группой) амплитуды МВХЛ, однако она превышала уровень контрольной группы на 31,6%. Это указывает на значительную активность оксидантной системы.

Одновременно с этим, в ответ на возрастающую прооксидантную нагрузку, повышалась активность СОД, которая к 7 суткам тоже достигала максимума (увеличение на 151,9% по сравнению с контрольной группой). К 14 суткам ее активность резко падала, превышая показатель контрольной группы животных

только на 22,1%. При этом отмечено падение активности второго фермента АОЗ - КАТ. Она к 14 суткам была ниже уровня контрольной группы на 34,5%.

К особенностям антиоксидантного ответа митохондрий клеток больших полушарий следует отнести синхронную активацию ферментативных компонентов АОС - СОД, КАТ (А. О. Даниленко, 2012). Поэтому есть проблема избыточного образования активных метаболитов кислорода при участии компонентов АОС, в частности, пероксида водорода, который может синтезироваться в повышенных количествах на фоне высокой активности СОД и низкой активности КАТ (М. Ь. БепЬпап & а1., 2006), что и наблюдалось у экспериментальных животных.

АОА отражает общую антиоксидантную активность плазмы крови или ее антиокислительный потенциал (Ю. О. Теселкин, 2003). Проведенными исследованиями показано, что АОА плазмы крови уже на 1 сутки моделирования ИИ возрастала на 49,2%, относительно показателя в группе интактных животных.

На 3 сутки рост этого показателя продолжался. Он превосходил нормальные показатели, характерные для группы интактных животных, на 103,3%. На 7 сутки он оставался на том уровне. К 14 суткам он падал даже ниже показателя группы контроля на 18,7%, что вероятно связано с дезадаптацией системы АОЗ.

Морфологическая оценка состояния ткани мозга в очаге инфаркта в 1 сутки показала, что там появились клетки-тени (рис. 1.3) и единичные нейтрофилы (рис. 1.4). В нейронах выявлялся практически полный тигролиз. На периферии очага некроза развивался клеточный ответ (рис. 1.2).

В очаге ишемии наблюдалась гипохромия ядер клеток, что отражало процессы деполимеризации ДНК в некротизированных клетках. Выявлялись признаки перицеллюлярного отека ткани мозга рис. 1), что подтверждалось значительной разреженностью нейропиля.

В центре области ишемии капилляры запустевали и становились незаметными на общем фоне. Хотя по периферии очага ишемии они хорошо прокрашивались (рис 2.1). В них были заметны признаки отека эндотелиоцитов и стаза крови. Отмечалась адгезия нейтрофилов к эндотелию капилляров (рис.

Рисунок 1. Область формирующегося инфаркта в ткани мозга. Ув. об. 40. Окраска гематоксилин-эозин.

периферии очага ишемии. Крысы группы 2. Ув. об. 90. Окраска гематоксилин-эозин.

Рисунок 2. Капилляры на

2.2). На периферии очага некроза мозговой ткани развивался клеточный ответ (появились единичные нейтрофилы).

Все это свидетельствовало о появлении некроза нейронов, нарушениях кровоснабжения в зоне образующегося инфаркта. Кроме того имелись признаки развития местной воспалительной реакции.

В 1 сутки, после моделирования острого ИИ, происходила активация СРО. Это сопровождалось выраженным падением уровня Р-эндорфина в крови, которое наблюдалось весь период наблюдения.

Интенсивность СРО на 3 сутки продолжала расти, одновременно отмечалось значительное увеличение активности СОД и резкое падение активности КАТ (это приводило к перепроизводству перекиси водорода, как источника СР).

В этот период четко контурировалась зона инфаркта мозга (рис. 3.1). Значительно увеличилось количество погибших нейронов (рис. 3.3). Усилился перицеллюлярный отек. Появилась выраженная воспалительная клеточная инфильтрация (рис. 3.2).

1 Л * 5

о з

» '0 **т * •

• 2

Рисунок 3. Срез ткани мозга Рисунок 4. Срез ткани мозга

крысы группы 2. Ув. об. 40. Окраска крысы группы 2. Ув. об. 40. Окраска гематоксилин-эозин. по Нисслю.

На 3 сутки после моделирования ИИ, при окраске по Нисслю (рис. 4), на микропрепаратах ткани мозга животных группы 2, видны дистрофически измененные нейроны (рис. 4.1), отмечаются признаки нейронофагии (рис. 4.2) и выраженная воспалительная клеточная инфильтрация (рис. 4.3).

Ишемический отек мозга возникает в результате повреждения клеточной мембраны и внутриклеточного накопления ионов натрия, хлора и ацидоза. Он начинается уже через несколько часов после начала ишемии ГМ, после начала инсульта, достигает максимума на 2-4-й день (А. И. Федин, 2001).

Как показали исследования удельный объем очага инфаркта мозга у крыс группы 2 на 1 сутки составил 0,108±0,003 у.е. На 3 сутки он достоверно возрос на 18,3%.

Действие и развитие патологических механизмов в очаге продолжается в среднем 2-3 суток, а в отдельных случаях и до 7 дней (Е. И. Гусев, В. И. Скворцова, 2009; А. И. Исайкин, 2010; В. А. Парфенов, 2010).

Таким образом к 3 суткам наблюдается основной этап доформирования «ядерной» зоны ИИ за счет пенумбры (В. И. Скворцова, 2004).

На 7 сутки отмечался максимум амплитуды МВХЛ, что свидетельствует о значительной активности оксидантной системы. Это сопровождается очень высокой активностью СОД и низкой - КАТ.

В этот период в зоне деструкции ткани мозга и по ее границам отмечалось скопление зернистых шаров (рис. 5.1). Нейроны в зоне деструкции не обнаружены. В области самого инфаркта мозга отмечалась выраженная клеточная реакция и разреженность нейропиля (рис. 6.2). Наблюдалось значительное количество воспалительного клеточного инфильтрата. Хорошо выделялся формирующийся незрелый глиомезодермальный рубец (рис. 6.1).

Рисунок 5. Срез ткани мозга крысы группы 2. Ув. об. 40. Окраска гематоксилин-эозин.

Рисунок 6. Срез ткани мозга крысы группы 2. Ув. об. 20. Окраска по Чиаччио.

На 14 сутки, после моделирования ИИ, амплитуда МВХЛ незначительно снижалась. При этом происходило резкое падение активности СОД, активность КАТ оставалась на низких цифрах. Одновременно значительно уменьшалась АОА плазмы крови.

Хотя по периферии очага наблюдалось появление новых капилляров, с прорастанием в зону деструкции, но организация очага инфаркта мозга в это время осуществлялась медленно с появлением тканевых дефектов. В очаге инфаркта и по его границам отмечалось значительное скопление клеток глии, составляющих основу глиомезодермального рубца. К этому времени еще происходила организация зоны деструкции.

В 3 группе животных, которым после моделирования ИИ проводили ТЭС-терапию, уровень показателя СРО - ХЛ плазмы крови была в 1,3 раза ниже, чем у животных 2 группы. Максимум амплитуды вспышки ХЛ (МВХЛ), наблюдаемый на 7 сутки, не достигал уровня животных 2 группы (был меньше на 30,6%). К 14 суткам амплитуда МВХЛ была на 33,1% ниже, чем у животных 2 группы (рис. 7). Это указывало на более низкую активность процессов СРО. При этом отмечено, что максимум активности СОД (7 сутки) был ниже на 50,0%. К 14 суткам ее активность возвращалась к исходной величине (рис. 8). Более низкая активность СОД указывает на меньшую продукцию СР.

Кроме того отсутствие гиперактивности СОД снижает количество образующейся перекиси водорода, что благоприятно на фоне низкой активности КАТ.

проведением ТЭС-терапии

Динамика активности КАТ не отличалось от таковой у животных 2 группы. Однако к 14 суткам ее активность возвращалась к исходной величине (рис. 9).

Таким образом, активность ферментов АОС возвращалась к исходной к 14 суткам, чего не наблюдалось у животных 2 группы.

Изменения общей АОА плазмы крови была ниже в 1,2 раза (рис. 10). Максимума она достигала (в отличие от животных 2 группы) к 7 суткам, но была ниже на 14,3%. Однако к 14 суткам АОА оставалась выше исходной величины на 34,7%. Это свидетельствует об активности АОЗ.

Итак, применение ТЭС-терапии в острейший период ИИ уменьшает СРО (следовательно снижает образование СР), стимулирует активность АОС, поддерживает АОЗ.

проведением ТЭС-терапии

моделировании ИИ без и с проведением ТЭС-терапии

| Наиболее быстрым ответом ткани мозга на снижение мозгового кровотока и

' развитие фокальной ишемии являются реакции глутамат-кальциевого каскада. Однако повреждающие процессы, лежащие в основе заключительного этапа экспрессии (прежде всего свободнорадикальные реакции, ПОЛ, избыточное образование оксида азота, эйкозаноидов, фактора активации тромбоцитов и др.), сохраняют свою значимость и в более поздние сроки. Они участвуют в «доформировании» очага инфаркта в течение 3-5 дней после сосудистого инцидента (Е. И. Гусев, В. И. Скворцова, 2001).

Применения ТЭС-терапии в острейший период позволяет повысить уровень Р-эндорфина в крови и поддерживать его в течение периода наблюдения - (рис.11).

Рисунок 11. Динамика Р-эндорфина в крови при моделировании ИИ без и с проведением ТЭС-терапии

При активации опиоидных рецепторов осуществляется закрытие потенциал-зависимых кальциевых каналов в ЫМЕ)А-синапсе пресинаптического нейрона приводит к уменьшению выброса возбуждающих нейромедиаторов (таких как глутаминовая кислота), а активация калиевых каналов в постсинаптическом нейроне приводит к гиперполяризации мембраны, что уменьшает чувствительность нейрона к возбуждающим нейромедиаторам (В. Сг. 2007; М. М. Таха, 2011).

Введение антагонистов ЫМОА-рецепторов через 3 дня после глобальной или фокальной ишемии оказывает нейропротективное действие в зонах вторичного поражения (А. Ю. Беспалов, Э. Э. Звартау, 2000).

Наблюдают два пика выброса глутамата — первый приблизительно через 30 мин, а второй — через 2-4 ч после. Выраженность именно второго пика хорошо коррелирует с размерами инфаркта, что указывает на возможную эффективность антагонистов КМОА-рецепторов. Введение антагонистов КПУГОА-рецепторов через 3 дня после глобальной или фокальной ишемии оказывает нейропротективное действие в зонах вторичного поражения (А. Ю. Беспалов, Э. Э. Звартау, 2000).

Все сказанное позволяет утверждать о нейропротекторном действии ТЭС-терапии.

При избытке катехоламинов происходит чрезмерная активация липаз, фосфолипаз, ПОЛ. В комплексе с другими причинами активации СРО — гипоксемией, тканевой гипоксией, ацидозом это действие катехоламинов приводит к повреждению клеточных мембран (А. М. Вейн 2003).

Как установлено применение ТЭС-терапии позволяет снижать высокий уровень катехоламинов в крови (И. Ф. Вусик и соавт., 2013).

Доказана возможность применения ОП в качестве средств, вызывающих повышение антиоксидантного статуса организма и снижение активности ПОЛ (С. Б. Николаев, 2004; Т. Ю. Реброва и соавт., 2005).

Кроме того, ТЭС-терапия обладает противоспалительным (Л. И. Жукова и соавт., 2007; В. С. Типикин и соавт. 2012) и антигипоксическим влиянием (Е. А.

Губарева и соавт., 2008, 2009; Л. С. Козина и соавт., 2008; Т. В. Ласукова и соавт., 2013).

Указанные эффекты ТЭС-терапии обусловливают положительное влияние на состояние ткани мозга в очаге ишемии.

На фоне проводимой ТЭС-терапии область формирующегося инфаркта мозга начинала выявляться через 1 сутки. Удельный объем очага инфаркта мозга у крыс группы 3 на 1 сутки, после моделирования ИИ, составил 0,099±0,004 у.е., что на 9,1% меньше, чем у крыс группы 2. На 3 сутки его размер достоверно не изменился.

Рисунок 12. Срез ткани мозга крысы Рисунок 13. Срез ткани мозга крысы группы 3. Ув. об. 40. Окраска по группы 3. Ув. об. 40. Окраска

Нисслю. гематоксилин-эозин

Клеточный ответ и признаки перицеллюлярного отека ткани мозга также менее выражены. В зоне инфаркта мозга наблюдались единичные клетки-тени и единичные нейтрофилы. Отмечалось преобладание гиперхромных дистрофически измененных нейронов (рис. 12.1, рис. 13.1) с признаками только частичного тигролиза (рис. 12.2), над содержанием клеток-теней (рис. 12.3, рис. 13.2) (по сравнению с животными 2 группы).

Капилляры в центре области ишемии также запустевали и становились незаметными на общем фоне (рис. 13.4). По периферии очага ишемии капилляры хорошо прокрашивались (рис. 13.5). В них выявлялись признаки отека эндотелиоцитов, стаза крови, наблюдалась адгезия нейтрофилов к эндотелию (рис. 13.6). Однако значительно меньше наблюдалось нейтрофилов (рис. 13.3), что связано с менее значительным повреждением нейронов и меньшей выраженностью воспаления.

К 3 суткам, после моделирования ИИ, область инфаркта мозга четко выявлялась (рис. 14.1). Количество погибших нейронов было значительно меньше, чем в тот же период времени у крыс группы 2 (рис. 14.3). При этом у крыс группы 3 наблюдалось значительно большее количество нейронов с признаками частичного тигролиза (рис. 15.1) у некоторых из них. Гиперхромных дистрофически измененных нейронов выявлялось мало (рис. 15.2). Зона деструкции была выражена менее значительно (рис. 14.2). В ней выявлялись редкие рассеянные гипохромные клеточные ядра. По периферии зоны деструкции располагалась область плотного компактно сгруппированного расположения ядер клеток (область воспалительного клеточного ответа).

Воспалительная клеточная инфильтрация зоны инфаркта ткани мозга была выражена менее значительно, чем у крыс группы 2 (рис. 15.4).

з ШШШШ ~ ------

Рисунок 14. Срез ткани мозга крысы группы 3. Ув. об. 40. Окраска гематоксилин-эозин.

Рисунок 15. Срез ткани мозга крысы группы 3. Ув. об. 40. Окраска по Нисслю.

На 7 сутки, после моделирования ИИ, нейронов в зоне деструкции ткани мозга не обнаружено. У крыс группы 3 обнаружено больше зернистых шаров, по сравнению с животными группы 2 (рис. 16.1). Обращает внимание наличие у крыс группы 3 по периферии области инфаркта мозга значительного количества новообразованных капилляров прорастающих вглубь зоны деструкции, в отличие от животных группы 2 (рис. 16.2).

Рисунок 16. Срез ткани мозга крысы Рисунок 17. Срез ткани мозга крысы группы 3. Ув. об. 40. Окраска группы 3. Ув. об. 10. Окраска по

гематоксилин-эозин. Нисслю.

У животных группы 3 глиомезодермальный рубец выглядит более сформированным по сравнению с животными 2 группы (рис. 17.1). О большей степени зрелости глиомезодермального рубца свидетельствует более равномерное распределение ядер клеток по зоне деструкции. Это отражает процесс ее организации. Формирующийся глиомезодермальный рубец не блокирует ход нервных волокон. В области формирования глиомезодермального рубца по периферии отмечено появление новообразованных капилляров (рис. 17.2).

На 14 сутки, после моделирования ИИ, у крыс группы 3 видно активное формирование зоны деструкции. По ее периферии формируется

глиомезодермальный рубец (рис. 18, гораздо менее плотным по сравнению

I . » ; & * » Л.

х* >

» * • « *

яёш

Рисунок 18. Срез ткани мозга крысы группы 3. У в. об. 40. Окраска по Нисслю.

рис. 19). Он выглядит более зрелым и животными 2 группы (рис. 18, рис. 19).

!

|

_________

Рисунок 19. Срез ткани мозга крысы группы 3. Ув. об. 10. Окраска по Чиаччио.

Таким образом, проведение ТЭС-терапии после моделирования ИИ уменьшает степень повреждения мозга в зоне ишемии. Необходимо отметить, что благодаря протективному влиянию ТЭС-терапии не происходило расширения зоны инфаркта (за счет пенумбры). Все выявленные эффекты ТЭС-терапии дают возможность использовать ее в практике терапии острого ИИ в острейший период.

ВЫВОДЫ

1. Нарушения баланса прооксидантной и антиоксидантной систем в острейший период экспериментального ишемического инсульта характеризуется резкой активацией свободнорадикального окисления - МВХЛ превышала исходный уровень на 373,0% даже к 14 суткам, и декомпенсацией антирадикальной защиты - СОД в этот период времени превышала только на 22,1% контрольные показатели. Это сочеталось со снижением активности КАТ (относительно показателей контрольной группы) на 34,5%. АОА к 14 суткам он падала даже ниже показателя группы контроля на 18,7%. Содержание [3-эндорфина уменьшалось на 185,5% меньше контроля.

2. Морфологическая картина характеризуется формированием очага деструкции к 3 суткам после моделирования ИИ, Там выявляется большое количество погибших нейронов. В сосудах по периферии очага ишемии наблюдаются признаки стаза крови. Возникает значительная воспалительная клеточная инфильтрация. Удельный объем очага инфаркта мозга увеличился на 18,3%. К 14 суткам по периферии очага ишемии появляются новые капилляры, которые прорастают в зону деструкции, идет формирование избыточного глиомезодермального рубца.

3. Применение ТЭС-терапии после моделирования ишемического инсульта снижает активность свободнорадикального окисления - МВХЛ к 14 суткам снижалась на 117,5% (по сравнению с животными 2 группы). Это сочеталось с возвращением активности СОД и КАТ к уровню у животных контрольной группы. АОА плазмы крови при этом была выше на 53,5% (чем у животных 2 группы). Все свидетельствует о снижении выраженности оксидативного

стресса под влиянием ТЭС-терапии. Уровень Р-эндорфина в сыворотке крови в период был выше (чем у животных 2 группы) на 338,3%

4. После проведение ТЭС-терапии в 1 сутки зона инфаркта ткани мозга менее выражена. Значительно меньше наблюдается некротизированных и гиперхромных дистрофически измененных нейронов. В связи с этим менее активно развивается воспалительный клеточной ответ и меньше перицеллюлярный отек ткани мозга. На 14 сутки сформированный глиомезодермальный рубец выглядит более зрелым. Удельный объем очага инфаркта мозга на 1 сутки был меньше на 8,9%, чем у крыс группы 2 и к 3 суткам не изменялся.

5. Полученные факты позволяют утверждать об эффективности применения ТЭС-терапии в острейший период экспериментального ишемического инсульта поскольку она обладает нейропротективным, антирадикальным, антигипоксическим и противовоспалительным действием на очаг возникающей гипоксии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Проведенное исследование (про-/антиоксидантного статуса) свидетельствует о целесообразности включения в комплекс лечебных мероприятий в острейшую фазу ишемического инсульта ТЭС-терапии, обладающей гомеостатическим эффектом в отношении только измененных показателей.

2. При ишемическом инсульте в острейшую стадию ТЭС-терапию рекомендовано применять дополнительно к комплексному медикаментозному лечению следующим образом: в режиме биполярного импульсного тока ежедневно, сила тока подбирается индивидуально (от 1 до 2 мА, в среднем 1,7 мА), положение электродов фронто-мастоидальное. Длительность 1-го сеанса составляет 15 минут, всех последующих - 40 минут. Сеансы проводят в течение 7-10 дней.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Особенности электрокардиограммы у крыс с моделью церебральной ишемии вызванной посредством коагуляции правой средней мозговой артерии / А. И. Трофименко, А. X. Каде, В. П. Лебедев, С. А. Занин, Т. Б. Заболотских, В. Д. Левичкин, С. Н. Мерзлякова, М. В. Колпаков // Кубанский научный медицинский вестник. - 2012. - № 2(131). - С. 175-179.

2. *Влияние ТЭС-терапии на исходы острого адреналинового повреждения сердца у крыс / А. И. Трофименко, А. X. Каде, В. П. Лебедев, С. А. Занин, А. Ю. Туровая, С. П. Вчерашнюк, С. О. Апсалямова, В. Д. Левичкин, И. В. Порублев // Кубанский научный медицинский вестник. - 2013. - № 5(140). - С. 174-180.

3. ^Характеристика сдвигов в системе про-/антиоксиданты у крыс с моделью острой локальной церебральной ишемии / А. X. Каде, А. И. Трофименко, С. А. Занин, В. Д. Левичкин, И. И. Павлюченко, О. С. Охременко // Фундаментальные исследования. - 2013. - №9 (ч. 4). - С. 683-686.

4. Визуализация очага ишемии головного мозга у крысы тетразолиевым методом / А. И. Трофименко, А. X. Каде, С. А. Занин, В. Д. Левичкин, А. Ю. Туровая, С. П. Вчерашнюк, А. Ю. Туровая, С. П. Вчерашнюк // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. -2013,-№5.-С. 99.

5. Цитокиновый профиль у больных с ишемическим инсультом / Ф. А. Нехай, Е. Е. Байкова, А. X. Каде, А. А. Потапова, С. А. Занин, В. Д. Левичкин, А. И. Трофименко, А. Ю. Туровая // Успехи современного естествознания. -2014,-№5.-С. 195-196.

6. Состояние стресс-реализующей системы у больных с ишемическим инсультом / А. X. Каде, Ф. А. Нехай, А. А. Потапова, Е. Е. Байкова, С. А. Занин, А. И. Трофименко, В. Д. Левичкин, С. П. Вчерашнюк // Успехи современного естествознания. - 2014. - №5. - С. 191-192.

7. Влияние ТЭС-терапии на динамику интерлейкина-10 при острой локальной церебральной ишемии в эксперименте у крыс / А. И. Трофименко, А. X. Каде, В. Д. Левичкин, Ф. А. Нехай, С. А. Занин // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2014. - №5 (ч.1). - С. 137-138.

8. Влияние ТЭС-терапии на динамику трансформирующего фактора роста-ß при острой локальной церебральной ишемии в эксперименте у крыс / А. X. Каде, А. И. Трофименко, В. Д. Левичкин, Ф. А. Нехай, С. А. Занин // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. -2014,- №5 (ч.1).-С. 136-137.

9. Активность свободнорадикального окисления и эндорфинергической системы у крыс с моделью острой локальной церебральной ишемии / В. Д. Левичкин, И. И. Павлюченко, А. X. Каде, О. С. Охременко, А. И. Трофименко, Ф. А. Нехай, С. А. Занин // Современные наукоёмкие технологии. - 2014. - №4. -С. 126-127.

10. Про-/антиоксидантная активность плазмы крови у крыс с моделью острой локальной церебральной ишемии / В. Д. Левичкин, И. И. Павлюченко, А. X. Каде, О. С. Охременко, А. И. Трофименко, Ф. А. Нехай, С. А. Занин // Современные наукоёмкие технологии. - 2014. - №4 - С. 142-143.

11. * Динамика цитокинового статуса у крыс при моделировании ишемического инсульта / А. И. Трофименко, А. X. Каде, В. Д. Левичкин, Ф. А. Нехай, С. А. Занин // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 2; URL: http://www.science-education.ru/116-12557 (дата обращения: 31.03.2014).

12. * Влияние ТЭС-терапии на показатели системы про/антиоксиданты у крыс с экспериментальным ишемическим инсультом / В. Д. Левичкин, Е. И. Ременякина, И. И. Павлюченко, А. X. Каде, А. И. Трофименко, С. А. Занин // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 2; URL: http://www.science-education.ni/116-12557 (дата обращения: 28.07.2014).

13. * Динамика уровня ß-эндорфина при моделировании ишемического инсульта у крыс / А. И. Трофименко, А. X. Каде, Ф. А. Нехай, В. П. Лебедев, В. Д. Левичкин, С. А. Занин // Кубанский научный медицинский вестник. - 2014. -№3(145).-С. 115-118.

14. Левичкин, В. Д. Влияние ТЭС-терапии на состояние системы про-/антиоксиданты при экспериментальном ишемическом инсульте / В. Д. Левичкин, И. И. Павлюченко, А. X. Каде // Мат. XII науч. - практич. конф. молодых ученых и студентов юга России. - 2014. - С. 15-17.

15. *Коррекция показателей прооксидантно-антиоксидантной системы при ишемическом инсульте ТЭС-терапией / В. Д. Левичкин, А. И. Трофименко, А. X. Каде, И. И. Павлюченко, С. А. Занин // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 4; URL: www.science-education.ru/118-14427 (дата обращения: 01.10.2014).

* - работа, опубликована в журнале, включенном в Перечень российских рецензируемых научных журналов, в которых должны быть

опубликованы основные научные результаты диссертаций на соискание ученых степеней доктора и кандидата наук.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АОА - антиоксидантная активность

АОЗ - антиоксидантная защита

АОС - антиоксидантная система

АФК - активные формы кислорода

ГМ - головной мозг

ИИ - ишемический инсульт

ИМ - инфаркт миокарда

КАТ - каталаза

ОНМК - острое нарушение мозгового кровообращения

ОП - опиоидные пептиды

ОС - окислительный стресс

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПСМА- - правая средняя мозговая артерия

СОД - супероксиддисмутаза

СР - свободные радикалы

СРО - свободно-радикальное окисление

МВХЛ - максимальная вспышка хемилюминисценции

ХЛ - хемилюминесценция

Левичкин Валерий Дмитриевич

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 05.09.2014 Печать трафаретная. Формат 60x84 Vie. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 1219.

Отпечатано в ООО «Издательский Дом - ЮГ» 350072, г. Краснодар, ул. Московская 2, корп. «В», оф. В-120,

Тел. 8(918) 41-50-571; e-mail: olfomenko@yandex.ni; Сайт: http://id-yug.