Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние неионогенных поверхностно-активных веществ на морфофункциональное состояние вторичных лимфоидных органов на фоне антигенных воздействий

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКИ КЫРГЫЗСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

од

На правах рукописи

/ 2 ДЕК

УДК 616.-056:612.017.11/12 Касенов Амирхан Кужантаевич

ВЛИЯНИЕ НЕИОНОГЕННЫХ ЮВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ¡ТОРИЧНЫХ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ НА ФОНЕ АНТИГЕННЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ

14.00.16 - Патологическая физиология 14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Бишкек-1997

Работа выполнена в Актюбинской государственной медицинской

академии

Научные руководители: доктор медицинских наук

профессор Э. М. Исмаилов

доктор медицинских наук профессор С. Г. Ахметкалиев

Официальные оппоненты: Засл. деят. науки КР доктор медицинских

наук профессор М. И. Китаев

Кандидат медицинских наук старший научный сотрудник Б. Т. Туребеков

Ведущие учреждения: Московская медицинская академия

им. И. М. Сеченова,

Шымкентская государственная медицинская академия

Защита состоится «_»_1997 г.,

в « » часов на заседании специализированного совета Д 14.95.35 при Кыргызской государственной медицинской академии (720061 г. Бишкек, ул. Ахунбаева, 92)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке академии. Автореферат разослан «_»_1997 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

Р. Р. Тухватшин

Актуальность проблемы

Иммуномодулирующие вещества в настоящее время столь многочисленны, что возникли трудности в их классификации. По происхождению B.C. Ширинский и Е.А. Жук выделяют иммуномо-дуляторы бактериального, животного, растительного генеза, их синтетические аналоги и средства разной химической структуры. На одном из международных симпозиумов по иммунофармакологии инфекционных болезней, проходившем в 1986 г., была принята классификация в основу которой положены три принципа (Ж.А.Сатыбалдиева, 1996): происхождение (экзо- и эндогенные), способ получения (природные и синтетические) и действие на клетки-мишени. И впервые в группу иммуномодуляторов в качестве экзогенных были включены поверхностно- активные вещества (ПАВ). Применение ПАВ в медицине, в частности в фармации, было разрешено Немецкой фармакопеей еще в 1942 году, но иммунотропные их свойства установлены позже. Такими свойствами обладают и неионогенные ПАВ.

Иммуномодулирующие свойства неионогенных ПАВ (НПАВ) известны по крайней мере с 1975 года, когда сотрудникам Белорусского НИИ эпидемиологии и микробиологии О.В.Давыдову и Т.В.Воронцовой были выданы авторские свидетельства на два изобретения под одинаковым названием "Стимуляторы иммуногенеза".

Недостатком практически всех иммуномодуляторов является то, что они не обладают избирательным действием, одновременно влияют в той или иной степени на функщш макрофагов (А-субсистемы), разных субпопуляций Т- и В-лнмфоцитов. Широкое применение многих иммуномодуляторов ограничивается и наличием побочных эффектов. В числе побочных действий могут быть: местные реакции, пирогенность, передний увеит и артрит (Allison А., ByarsN., 1991).

В последнее десятилетие иммунотропные свойства различных НПАВ изучались на кафедрах микробиологии Крымского и патофизиологии Актюбииского мед. институтов. Причем, исследования проведенные на базе последней, по общей теме "ПАВ с антистатическими свойствами как иммуно- н гемостимулягоры" (№ госрегистра-цни - 01.90.006722) показали наличие у них и гемостимулирующнх свойств. Данное исследование является частью этой общей проблем-мы.

Цель исследования: Любая стимуляция имеет не только позитивные, но и негативные последствия - может привести к морфо-функниональному-истогпеншо-в тех и пи иных физиологических системах организма. Поэтому основной целью данного исследования являлась оценка состояния вторичных лимфоидных органов - селезенки и периферического лимфатического узла в процессе иммунного раздражения тимусзависимыми антигенами в комбинации с инъекцией одного из трех неионогенных ПАВ - Стеарокс-920, Стеарокс-6 и ОС-20. Для полноты оценки состояния органов - объектов исследования было необходимым сочетанное введение с иммуногенами. При изолированной инъекции иммуномодулятоО.К.Хмельницкий и со-авт. (1986) выявили незначительные гистологические изменения во вторичных лимфоидных органах. Использование в экспериментах трансплантационного иммуногена, наряду с сывороточным белком, связано учетом частоты гемотрансфузий, являющихся одной из форм трансплантаций.

Задачи исследования:

- изучение весовых и цитологических изменений в селезенке на фоне иммунного раздражения тимусзависимыми антигенами в сочетании с инъекцией неионогенных ПАВ;

- изучение иммунофункционального состояния лимфоидных клеток селезенки по методу Ерне-Нордина при тех же условиях для оценки состояния гуморального звена иммунитета;

- анализ иммуноморфологических состояний селезенки и периферического лимфатического узла при тех же условиях.

Научная новизна: Впервые установлено увеличение массы селезенки и содержания в ней кариоцитов при изолированном и сочетанием с иммуногенами введениях неионогенных ПАВ .

- Впервые установлено наличие двух волн увеличения анти-телообразующих клеток (АОК) в селезенке при сочетанием введении неионогенных ПАВ и корпускулярного иммуногена - аллогенного трансплантанта.

- Впервые установлено увеличение числа лимфоидных клеток в селезенке, гиперплазия вторичных фолликулов в лимфатическом узле при изолированных и сочетянных инъекциях неионогенных ПАВ.

- Установлено, что при иммунотропных воздействиях возникает обратно-пропорциональное соотношение между числом лимфоидных фолликулов в селезенке и их диаметром.

Практическая ценность: Неионогенные ПАВ вызывают стимуляцию иммунной системы, миелоидной ткани, увеличение селезен-

ки, клеточности в ней, гипотрофию лимфатических узлов в зоне проникновения. На предприятиях, где такие вещества повседневно используются для предотвращения и/или снижения статической электризации, необходим ежегодный мониторинг картины крови и иммунной системы у лиц, постоянно контактирующих с ними. Не желателен контакт с неионогенными ПАВ для лиц с проявлениями повышенной чувствительности - аллергических реакций всех четырех типов.

Основные положения выносимые на защиту:

- Как изолированное, так и сочетанное с иммуногенами введение неионогенных ПАВ, вызывает резкое увеличение в селезенке клеточных элементов гематогенного характера. В результате этого она увеличивается в объеме, на 10 - 30% возрастает её масса, Количественные и качественные изменения клеточного состава в селезенке связаны с оживлением гемопоэза в костном мозгу с последующим активным заселением вновь образованными клетками вторичных лимфоидных органов.

- Неионогенные ПАВ вызывают увеличение числа живых лимфоидных клеток (ЖЛК) в селезёнке и параллельный рост количества антителообразующих клеток (АОК), что является проявлением стимуляции гуморального звена иммунитета. Признаки активации В-системы иммунитета заметны и при изолированной инъекции этих веществ, но более выраженны при сочетанном введении с иммуногенами.

- На фоне введения неионогенйых ПАВ в сочетании с алло-генной трансплантацией наблюдается двухфазность в динамике ан-тителогенеза: вначале увеличение числа АОК за счёт НПАВ, а затем нммуннного раздражения. В таких опытах возникают неблагоприятные изменения нммуноморфологического характера во вторичных лимфоидных органах - селезенке и лимфатическом узле. Подобные перестройки менее выраженны в опытах с изолированной трапс-плантацией, без НПАВ.

- Иммунизация сывороточным белком вызывает более "мягкую" иммуноморфологическую перестройку в упомянутых органах. Введение НПАВ само по себе, без иммунного раздражения, способствует увеличению числа лимфоидных фолликулов в селезёнке, гиперплазии вторичных фолликулов в лимфатическом узле.

При нммуностимуляциях возникает обратно-пропорциональное соотношение между количеством лимфоидных фолликулов в селезёнке и их диаметром. Диаметр центра раздражения фолликулов - показатель стабильный при иммунизации сьшоро-

точным белком, существенно уменьшается в опытах с трансплантацией в сочетании с инъекцией неионогенных ПАВ.

свойствах НПАВ используются в процессе преподавания раздела "Иммунитет" на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Актюбинск ой медицинской академии. 2) Сведения о возможных отрицательных последствиях постоянного контактат с НПАВ у лиц, страдающих ПЧЗТ, учитываются в здравпункте Акттобинского трикотажного объединения. 3) Изданы 2 Информационных листка Ак-ттобинским ЦНТИ - №59-96 и №60-96.

Апробация работы: Фрагменты доложены на: 1) Научно-практической городской конференции "Экологическое состояние г. Актюбинска и пути его оздоровления"(30.11.1995); 2) Научно-практичесой городской конференции "Изыскание и оригинальные способы применения лекарственных веществ" (28.02.1996); 3) На межкафедральной научной конференции Акттобинского медицинского института (3.08.1996).

Публикации: 1 статья опубликована в журнале "Здравоохранение Казахстана", 1996 г. №2, 2 статьи в межвузовском сборнике "Медико-биологические проблемы Западного Казахстана", 1 статья опубликована в "Материалах научной конференции молодых учёных ВУЗов г. Актюбинска" (на ин. языках) 1997 г.; 4 статьи - в сборнике НИР, изданном в г. Бишкеке, 1997 г.; 3 статьи депонированы в КазгосИНТИ (1995).

Объём и структура диссертации. Изложена на 125 е., содержит разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, три главы собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации, список цитированной литературы; таблиц 17, рисунков 19, указатель литературы включает 119 названий, из них 52 иностраной, в числе последних 17 патентов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы п методы исследовании. Проведены хронические опыты на 576 белых крысах массой тела 200-220 г. Испытано действие 3 -неионогенных поверхностно-активных веществ (НПАВ): Стеарокс-920, Стеарокс-6 и ОС-20. Стеароксы представляют собой оксиэтплированные продукты высшей жирной кислоты - стеариновой, ОС-20 является производным оксиэтнлированных жирных спиртов.

Обладая способностью препятствовать появлению и снижать статическую электризацию, они применяются в технологических

процессах в текстильном производстве. Заимствованы они на местной трикотажной фабрике, где используются как антистатики.

Водные растворы НПАВ инъецировали подкожно из расчёта на вещество 1,5 мг/100 г.

В первой серии опытов на 336 животных введение НПАВ сочетали с инъекцией растворимого иммуногена - сухой сыворотки крупного рогатого скота, выпускавшейся Екатеринбургским предприятием бактерийных преператов. Вводили подкожно однократно из расчёта на сухой белок 6 мг/100 г массы тела, в изотоническом растворе хлорида натрия. В другой подкожный участок инъецировали один из упомянутых НПАВ. Исследования проводили на 4, 7, 14 и 21 сутки со дня введения иммуногена и НПАВ. В каждой подгруппе было 6 животных.

Избранная доза белка соответствует примерно половине той, которую вводят однократно при воспроизведении феномена Артоса.

Во II серии опытов на 240 крысах осуществляли аллогенную трансплантацию - подкожно вводили 1 мл 50% печёночного гомоге-ната. Исследования проводили в те же сроки, что и в I серии - на 4, 7, 14 и 21 сутки.

У половины животных I серии (168 крыс) сразу после забоя взвешивали селезёнку для определения её весового индекса, представляющего отношение массы органа в мг к массе животного в г. Далее делали два отпечатка на предметном стекле с поперечного среза селезёнки дня определения соотношения клеток (спленограмма) после окраски по Лейшману. Обе половины органа гомогенизировали в чашке Петри в присутствии 2 мл раствора Хенкса с добавлением по 2 мг водорастворимого эозина и трипановой сини. Гомогенатом заполняли камеру Горяева и в 100 больших квадратах вели подсчёт общего числа ядросодержащпх клеток (кариоцн-тов), результат выражался в тысячах на 1 мкл. Исходя из этого показателя, можно было высчитать абсолютное содержание тех или иных клеток гематогенного характера, вошедших в спленограмму. Такие же исследования были проведены у половины животных И серии опытов (120 крыс).

У другой половины живот пых н 1, п II серии исследованы: количество антителообрл зующнх клеток (АОК) в селезёнке по методу Ерне-Норднна, попутно - число живых лнмфондных клеток (ЖЛК). Проведены гистологические исследования селезёнки п подколенного лимфатического узла, чаще гетеролатеральпого зоне воздействия. Окраска срезов толщиной 5-7 мкм осуществлена гема-токсплин-эозином - п азур II- эозином.

Статистическая обработка цифрового материала проведена по I-критерию Сгьюдента. На различных этапах работы использо--ванкомпьютер—1ВМ-386".---

1. Весовой индекс селезёнки и спленограмма

Под влиянием инъекций НПАВ происходило существенное увеличение объёма и массы селезёнки, в результате чего возрастал весовой индекс органа. Иммунный стимул играл неблыцую роль и только на высоте иммуннопродуктивной фазы - в конце второй недели. Среди испытанных НПАВ в наибольшей степени способствовало увеличению селезёнки введение Стеарокс-920. Через 4 дня после введения сывороточного белка (контроль-1) масса селезёнки равнялась в среденем 703 мг, после изолированной инъекции только Стеа-рокс-920 (контроль-2) - 1033 мг. В опытах II серии в соответствующих подгруппах она равнялась 736 и 1020 мг. В разных подгруппах опытов и в разные сроки весовой индекс органа достигал и даже превышал 4,0. К 21-му дню произошло снижение показателя до обычных величин - 3,3 - 3,4.

Выявлен параллелизм п увеличении массы селезёнки и числа карноцнтов в единице объёма гомогената этого органа. Все три НПАВ вызывали в разной степени увеличение клеточности в сроки от 4 до 14 дней. Через две и три недели от начала опытов в обеих сериях наметилась тенденция к снижению ранее повышенного числа кариоцитов до 300 - 340 тыс. в мкл. В периоды максимального уве-личениея этот показатель достигал примерно 500 тыс., в начале опытов в контроле-1, то есть на фоне введения иммуногена без НПАВ, он составлял 375+19 тыс. в I серии, 393+ 19 тыс. в мкл во II серии опытов.

Анализ спленограммы свидетельствует о том, что увеличение числа кариоцитов связано с усилением их продукции: выявлен рост количества бластных клеток и пролимфоцнтов. Прослеживается влияние как антигенного стимула, так и НПАВ. Например, в опытах I серии в контроле-1, с инъекцией иммуногена без НПАВ, бластные клетки через 4 дня не обнаружены при подсчёте 200 кариоцитов, через 7 дней их было 0,08° о, через 14 дней - 0,15%. При сочетшшом введении иммуногена и ОС-21) бластных клеток было соответственно: 0,08° о; 0,20°0,21° о. Разные данные получены в двух сериях исследований по количеству плазматических клеток. Существенное их увеличение было в опытах I серии, где иммуноген вызывал стимуляцию гуморального звена иммунитета. В опытах II серии, с аллогеннон трансплантацией, не выявлены существенные изменения в числе этих клеток. Содержание эритроидных клеток через 4 дня во II серии

опытов с аллогенной трансплантацией печёночной ткани существенно выше, чем в I серии с введением сывороточного белка. Это является свидетельством того, что первый иммуноген является выраженным гемостимулятором, а не только иммуномодулятором. 2. Цитофункциональная и иммуноморфологаческая характеристика селезёнки 2.1. Цитофункцнональные показатели

В опытах I серии исследованы два цитофункциональных показателя селезёнки: 1) число живых лимфоидных клеток (ЖЛК) в млн в 1 мл селезёночной взвеси и 2) число антителообразующих клеток (АОК) на 1 млн ЖЛК.

Введение НПАВ прежде всего вызывало увеличение выхода жизнеспособных лимфоидных клеток при гомогенизации селезёнки в сроки до 4 суток. По данным С.Т.Шумбаловой, такое явление возникало уже в ближайшие часы, обнаруживалось и при исследовании через 24 часа. Результаты данного исследования свидетельствуют о том, что увеличение числа ЖЛК держится на протяжении нескольких суток.

Все три НПАВ к этому сроку более чем в 4 раза увеличивали число АОК. Оно равнялось 2,3+0,14 на млн ЖЛК в контроле-1, 10,9+0,30 - в контролле-2, колебалось в пределах 9,6 - 10,6 на млн ЖЛК при сочетанном введении иммуногена с различными НПАВ. На 7-е сутки наблюдалось статистически достоверное (Р<0,001) уменьшение количества ЖЛК. Причём, оно было только при соче-танных введениях иммуногена и НПАВ: число их в пределах от 7,0+0,16 (ОС-20) до 8,2+0,26 (оба Стеарокса), а в контроле-1 -9,9+0,24 млн, в контроле-2 - 10,9+0,28 млн. Количество АОК в этот срок оставалось увеличенным, но было уже значительно меньшим, чем при предшествовавшем исследовании. Колебалось оно от 8,4+0,31 (ОС-20) до 9,7+0,43 млн (Стеарокс-6) па 1 млн ЖЛК; при подсчёте на 4 сутки было соответственно 9,6+0,40 и 10,6+0,26.

На 14-е сутки произошло восстановление исходного уровня ЖЛК, колебания их в разных подгруппах были от 10,1+0,18 до 10,4+0,26 млн в 1 мл селезёночной взвеси. Но число их всё же меньше, чем при исследовании па 4-е сутки, когда колебания были в пределах от 11,0 до 11,8. Примерно такая же картина наблюдалась п при исследовании на 21-е сутки. То есть, увеличение количества ЖЛК при инъекциях НПАВ бывает в ближайшие несколько дней, затем показатель возвращается к исходному уровню. Показатель этот не связан с фазами иммуногенеза при антигенной стимуляции.

Число АОК на 14-е сутки примерно вдвое меньше, чем на 7-е сутки, оно также не связано с иммуногенезом. Показатель колеблется в пределах 3,5 - 4,4 на 1 мтн ЖЛК при сочетанном введении иммуно-гена и НПАВ, а при инъекции только Стеарокса-920 (контроль-2) он составил 6,8+0,45, на фоне только иммунизации (контроль-1) -4,8+0,29 на млн ЖЛК.

Число АОК при исследовании на 21-е сутки во всех подгруппах опыта было на фоновом уровне - 2,2 - 2,3 на млн ЖЛК.

Во II серии опытов трансплантация сама по себе не оказывала никакого влияния на количество живых лимфоидных клеток в селезёнке в сроки от 4 суток до 2 недель. Колебания в пределах 10,1 -10,3 млн в 1 мл селезёночной взвеси. Статистически достоверным (Р<0,05) было лишь умень-шение числа ЖЛК в трёхнедельный срок -9,3+0,29 млн/мл, а в четырёхдневный срок было 10,2+0.20.

На количество АОК существенно влияют НПАВ: они резко увеличивают их число в сроки до 4 суток, затем наступает их уменьшение до исходного уровня, То есть, здесь повторяются те изменения, которые были обнаружены в предыдущей серии исследований.

Колебания числа АОК имеют две волны: одна связана с введением НПАВ, а другая - с антигенной стимуляцией, в частности с иммунопродуктивной фазой. При исследовании на 4-е сутки обнаружено 2,7+0,20 АОК на млн ЖЛК в опытах с трансплантацией в "чистом" виде, от 9,5 до 10,8 при дополнительном введении одного из трёх НПАВ. Собственно, увеличение количества этих клеток связано именно с воздействием НПАВ, а не с параллельной трансплантацией, ибо увеличенным до 10,1+0,66 оно было и в контроле-2, где был лишь Стеарокс-920.

В начале иммунопродукппшого периода произошла убыль действия НПАВ: на фоне изолированного введения Стеарокс-920 (конпюль-2) количество АОК существенно не изменено - 9,0+0,71. Но .стало проявляться действие трансплантанта в сочетании с НПАВ. Число анализируемых клеток было через 7.дней в пределах 6,3 - 6,7 па 1 млн ЖЛК. Эффект дала именно комбинация инъекции одного из трёх НПАВ с трансплантацией, ибо при скомбинированной трансплантации количество клеток составило лини» 2,1+0,21, то есть практически осталось па уровне предшествующею срока исследования.

Но в наивысшую фазу пммуноиродуктивиого периода - через 2 недели произошло двукратное увеличение числа АОК. Ещё большее их увеличение произошло при комбинации трансплантации с введением НПАВ. Количество АОК стало наибольшим в ходе опы-

тов данной серии, в пределах от 10,7 до 12,7 на 1 млн ЖЛК. А эффект изолированного введения НПАВ - Стеарокс-920 снизился к двухнедельному сроку: число АОК составило 6,9+0,52.

Ущё через неделю - к 21-м суткам количество АОК во всех подгруппах было сниженным, оно было в пределах исходных значений -1,8 - 2,1 на 1 млн ЖЛК.

Таким образом, введение корпускулярного антигена приводило к усилению иммунофункциональной активности лимфоидных клеток селезёнки к двухнедельному сроку. Но активация была по крайней мере вдвое большей при сочетании такого воздействия с инъекцией одного из НПАВ. Причём, эффект последних начанал проявляться уже в начале иммуноэффекторного-периода, к 7 дневному сроку.

2.2. Гистологическая картина

Через 7 дней после подкожного введения сывороточного-белка (контроль-1) соотношение белой и красной пульпы (по площади) в гистологических преператах было примерно равным. Резко ran ер -плазированы клеточные элементы в обеих пульпах, границы последних плохо различимы. Число лимфоидных фолликулов до 7, все они гип ер плазированы, достигают в диаметре 200 мкм.

Активные изменения в структуре селезёнки произошли к 7-м суткам и после инъекции Стеарокс-920 (контроль-2). Клеточные элементы белой пульпы расположены отдельными крупными островками, как правило они тяготеют к сосудам. При комбинации иммунизации с инъекцией Стеарокс-920 в препаратах заметны признаки иммунного разраження: многие лимфоидные фолликулы в результате гиперплазии слились. Местами лимфоидные фолликулы образуют большие массивы с несколькими центрами размножения, достигая размеров 400 - 280 мкм.

Менее заметные изменения в структуре селезётш наблюдались при сочетаниых инъекциях Стеарокс-6. Лимфоидные фолликулы представлены отдельно, между собой не сливаются.

В контролле-I число фолликулов и поле зрения составило 6,8+0,7, в котролле-2 втрое больше - 19,0+1,7, что свидетельствует об иммуномодулиру-ющей роле НПАВ, в данном случае Стеарокс-920. При сочетанном введении пммуногепа (сывороточного белка) и одного из НПАВ также происходит увеличение колличества фолликулов, по, в несколько меньшей степени, особенно в тех случаях, когда таким веществом был наиболее активный стимулятор гуморального иммунитета Стеарокс-920. В этих опытах показатель даже не отличался статистически достоверно (Р>0,05) от контроля-1, рн был

равен соответственно 8,5+0,9 и 6,8+0,7. Кстати, диаметры фолликула были одинаковыми и равнялись 153 мкм. Необходимо отметить, что быта обратно-пропорциональные соотношения между числом фолликулов и их диаметром. Это, наверное, вполне естественно: при наличии гиперплазированных фолликулов они сливаются и поэтому не могут быть в большом числе.

Через 14 дней: в контролле-1 умеренная гиперплазия клеточных элементов обеих пульп, последние имеют чёткие границы. Число лимфоидных фолликулов - 16, гиперплазированы отдельные из mix. В контролле-2 наблюдается преимущественная гиперплазия клеточ-ныхэлементов белой пульпы. Соотношение площадей белой и красной пульпы приближается 2:1. Есть, слившиеся фолликулы, достигающие в диаметре 180 мкм с несколькими центрами размножения.

При комбинированном введении иммуногена и Стеарокс-920: ткань селезёнки отёчна, число фолликулов равно 20, диаметр их достигает 140 мкм, есть с 2-3 центрами размножения. При сочетанной инъекции иммуногена и ОС-20 обнаружены слабо выраженные признаки отёка фолликулов, имеющих светлые центры размножения немного, диаметр их равен 65-70 мкм, а герминативного центра - 1518 мкм. Сходная картина выявлена и на фоне сочетанного введения Стеарокс-6.

Через 21 день: произошло существеное снижение числа лимфоидных фолликулов, по сравнению с предыдущим сроком, во всех подгруппах, за исключением комбинированного введения Стеаркс-6 и иммуногена. Один из слабых иммуностимуляторов среди НПАВ, он вызвал самое стойкое увеличение лимфоидных фолликулов в селезёнке. Сочетанное введение иммуногена с Стеарокс-920 или ОС-20 сопровождалось увеличением их числа в семидневный срок соответственно до 8,5+0,9 « 13,3+1,4, в двухнедельный срок - 12,9+1,3 в обеих подгруппах и в трехнедельный срок от начала иммунного раздражения количество фолликулов составило .7,0+0,6 и 9,6+0,8.

При сочетании инъекции НПАВ и иммуногена наблюдалось диффузное расположение клеток обеих пульп.

Через 7 дней после изолированного введения аллогенного трансплантанта число лимфоидных фолликулов вдвое превышает показатель, выявленный после введения растворимого антигена.

В опытах II серии наибольшее число лимфоидных фолликулом обнаружено в начале эффекторной фазы - 14,8+1,3. При дополнительной инъекции НПАВ показатели несколько меньше, статистически достоверно их различие при введении наиболее сильного

стимулятора гуморального иммунитета среди них - Стеарокс-920 -10,7+1,0 (Р<0,05).

Как и в опытах I серии, при аллогенной трансплантации в разных сочетаниях была обратно-пропорциональная зависимость между количеством фолликулов и их размерами. В опытах с чистой трансплантацией диаметр фолликула составил 88,0+8,2 мкм, а при добавлении различных НПАВ от 115 до 142 мкм.

Через 14 дней: на высоте иммунопродуктивной фазы произошло уменьшение количества лимфоидных фолликулов в селезёнке. Причём, чем сильнее была иммуностимуляция, тем больше это отражалось на рассматриваемом показателе. На фоне чистой трансплантащщ было 12,0+1,0 фолликулов, при сочетании с Стеарокс-6 и ОС-20 - 7,7 и 7,3, а при инъекции самого сильного стимулятора гуморального иммунитета - Стеарокс-920 - всего лишь 1,7+0,3.

При сочетании трансплантации с введением Стеарокс-920 выявляются отдельные участки белой пульпы заметно обеднённые клетками, что просматривается как разреженность. Есть участки, в которых клетки наоборот сгруппировались в виде тяжей. На фоне сочетанного введения трансплантанта и Стеарокс-6 клетки белой пульпы расположены равномерно по всей площади, поэтому выделить фолликулы по отдельности представляется сложным. Имеющиеся фолликулы в диаметре достигают 100 мкм.

Через 21 день. Произошло, по сравнению с предыдущим сроком, более чем двукратное уменьшение числа лимфоидных фолликулов в подгруппе с изолированной трансплантацией, но не размеров их, а также центров размножения. При сочетании трансплантации с введением НПАВ - ОС-20 или Стеарокс-6 происходило ещё большее снижение числа лимфоидных фолликулов в селезёнке - до 1,5 - 1,6, а также уменьшение размеров самого фолликула и центра размножения. Диаметры фолликулов были меньше, чем в опытах без приме-неня НПАВ, примерно в 3 раза, а центров размножения более чем в 2 раза.

Таким образом, аллогенная трансплантация привела к трёхнедельному сроку к ухудшению морфологической картины в селезёнке. Это выразилось в диффузном разбросе клеток белой пульпы, к их расположению в виде тяжей, уменьшении центров размножения, диаметра и числа лимфоидных фолликулов. Дополнительное введение НПАВ не ухудшало нммуноморфологнческую картину, а на фоне Стеарокс-920 произошло и ускорение структурных сдвигов.

3. Гистологическая картина лимфатического узла

3.1. После введения сывороточного белка

Через 7 суток после однократной подкожной инъекции Стеа-рокс-920, без иммуногена (контроль-2) в лимфатическом узле выра--женная-клеточная-гиперпттазия. Marca подколенного узла у интакт-ных крыс равна 4,5+0,5 мг, опытных групп - 7-8 мг. Микроскопически видно полнокровие сосудов узла, отёчность ткани. В утолщенном корковом веществе обилие вторичных фолликулов, многие из них увеличены в размерах, в связи с чем уменьшена площадь коркового плато. Площадь мозгового вещества заметно уменьшена.

При сочетанном введении Стеарокс-920 и сывороточного белка (точнее смеси белков) морфологическая картина ухудшается, по сранению с вышеописанной. Макроскопически подколенный лимфатический узел увеличен по масссе на 70 -80%. Микроскопически он отёчен, в подкапсульной зоне наблюдается накопление отёчной жидкости, гомогенно окрашенной эозином. Из-за заполненности подкапсульного пространства жидкостью корковая зона сжата, клетки тесно примыкают друг к другу. В поле зрения несколько вторичных фолликулов диаметром 36 - 45 мкм. Центр их содержит меньше клеток, чем в препаратах от интактных животных, их много в мантии. Медуллярное вещество представлено отдельными островками клеточных элементов, по ходу бывших тяжей имеется разрастание соединительнотканных клеток и волокон.

Более мягкое действие оказало сочетанное введение другого НПАВ - Стеарокс-6. В тот же срок - через 7 суток узел увеличен по массе до 7 мг, в коре много вторичных фолликулов, диаметр многих из них доходит до 100 мкм, 60 мкм составляет размер светлого центра, 40 мкм плато. Есть плазматизация лимфоидных клеток в коре, но не обильная, Паракортнкальная зона имеет меньшую толщину, чем обычно. Гипотрофнрована мозговая зона.

Через 7 суток после совместного введения иммуногена и ОС-20 узел макроскопически увеличен в 2 раза, микроскопически выяв-ля7отся следа! отёка тканн, обилие макрофагов.

Через 14 суток в контроле-1, то есть после, изолированного введения сывороточного белка, без НПАВ, как н неделю назад узел увеличен, отёчен. Наблюдается гиперплазия преимущественно за счёт лимфоидных элементов коркового вещества. Медуллярные тяжи расчленены в виде отдельных очагов. В коре гистологически просматривается плазматизация лимфоидных клеток.

В другом контроле - с инъекцией только Стеарокс-920 через 14 суток узел уменьшен в размерах, масса его равна 2,5 мг против 4,5+0,5 мг в норме. В пернпортальнон зоне наблюдаются очаги некроза. При сочетании иммунизации с инъекцией Стеароокс-920 через

2 недели отёк спадает, отмечается гиперплазия клеточных элементов в коре. В поле зрения есть несколько первичных фолликулов и один большой вторичный, диаметром 80 мкм, но с клеточным разрежением в зоне просветления. На полюсах краевой синус расширен, в коре выражена плазматизация клеток. Клетки мозгового вещества расположены не тяжами, а отдельными островками.

Через 2 недели после сочетанного введения иммуногена и другого НПАВ - ОС-20 макроскопически узел уменьшен в размерах, масса соответствует 3 мг, микроскопически соотношение площадей коркового и мозгового вещества равно 3:1. Узел декапсулирован по всей наружной поверхности, окружен сплошным слоем жировых клеток. В мозговом слое, вблизи ворот выявляются очаги некроза. В коре есть первичные фолликулы диаметром 27 -30 мкм, просматриваются единичные вторичные фолликулы диаметром 40 -43 мкм. Гистологически картина была сходной и при сочетанной инъекции иммуногена и Стеарокс-6.

При исследовании по истечении 3 недель со дня иммунизации в сочетании с введением Стеарокс-920 лимфоидная ткань отсутствует, она замещена жировой, от узла как такового остались кровеносные сосуды. Несколь предпочтительнее картина на фоне иммунн-зауии с дополнительным инъецированием ОС-20: в окружении жировой ткани в препарате просматривается остаток узла длиной 400-450 мкм, в котором среди коркового вещесва есть разрозненные островки медуллярного. Фолликулы в коре не просматриваются.

На фоне иммунизации с дополнительным введением Стеа-рокс-6 микроскопическое состояние узла было лучшим, чем при сочетании введения иммуногена и двух других НПАВ. В коре есть отдельные и первичные, и вторичные фолликулы, диаметры последних достигают 75 -80 мкм.

К трёхнедельному сроку после введения ксеногенного белка макроскопические изменения в лимфатическом узле были более выраженными, чем в опытах с инъекцией лишь Стеарокс-920. Но при сочетанием введении белка и двух других НПАВ - ОС-20 и Стеарокс-6 изменения были несколько сглаженными, чего нельзя сказать о сочетании с Стеарокс-920, являющимся более активным стимулятором гуморального иммунитета.

3.2. После аллогенион трансплантации п сочетании с НПАВ

Через неделю после сочетанной подкожной инъекции 50% печёночного гомогената и Стеарокс-920 (раздельно) объект изучения - подколенный лимфатический узел увеличен в объёме, масса его равна 7 мг, в то время как у ннтактных животных 4,5+0,5 мг. В кор-

ковой зоне фолликулы не выявляются, есть гиперплазия клеточных элементов в паракортикальной Т-зависимой зоне, она утолщена. По -периферии узття клетки размешены равномерно, свободно._

В лучшем состоянии находился лимфатический узел после комбинированного введения трасплантанта и другого НПАВ -Стеарокс-6. Макроскопически узел также гипертрофирован, при гистологическом исследовании соотношение площадей коркового и мозгового вещества равно примерно 4:1. В паракортикальной зоне обилие клеток, без признаков плазматизации. В коре еть и первичные, и вторичные фолликулы, размеры последних доходят до 55 мкм, увеличены и диаметры первичных фолликулов.

При сочетании трансплантации с введением ОС-20 через 7 дней под капсулой намечается жировое отложение. Обилие лимфо-идных клеток с усиленной базофилией цитоплазмы, не видны лим-фоидные фолликулы. Размещение мозгового вещества носит остров-ковый харктер.

Обнаруженные изменения в семидневный срок нельзя трактовать как результат действия НПАВ, в большей степени они представляют ответ на трансплантат. На фоне изолированного его введения в ипсилатеральном узле гистологически обнаружена гиперплазия клеточных элементов в корковом веществе. В нём много первичных фолликулов, вторичные редки, имеют диаметр 30 -35 мкм. Расположение мозгового вещества носит островковый характер. Капсула узла на полюсах и на внешней стороне местами отслоена.

Через 3 недели после трансплантации в сочетании с инъекцией Стеарокс-6 гетеролатеральнын узел уменьшен в размерах, имеет массу всего лишь 1 мг. Гистологически много участков некроза, самые кру пные из них находятся в перипортальной зоне, местами отмечаются разрастания соединительной ткани. В корковом веществе заметно уменьшена клеточность, представленная в основном лимфо-ПДПЫМ11 клетками.Указанная картина была сходной и при сочетаи-ном виедешш ОС-20.

В контрольной подгруппе с введением только трансплантанта также имеются микроскопические изменения в лимфатическом узле, но они менее выражены, чем в опытах с дополнительным введением НПАВ. В паракортикальной, Т-зависимой зоне гиперплазия клет очных элементов, она ут олщена.

ВЫВОДЫ

1. Введения неионогеипых ПАВ, как изолированные, так и в комбинации с иммуногенамн, приводят к увеличению массы селезёнки в сроки от 4 до 14 дней. Параллельно на 15 - 30% возрастает со-

держание в органе ядросодержащих клеток, преимущественно за счёт усиления их образования в мнелоиднон ткани и заселения селезёнки. При комбинированном введетш этих веществ и сывороточного белка происходит увеличение количества плазматических клеток. Не происходит существенного увеличения таких клеток в опытах с ал-логенной трансплантацией. К трёхнедельному сроку возникают признаки функционального торможения в цитологической картине селезёнки.

2. При введениях неионогенных ПАВ в ближайшие сутки существенно возрастает количество жизнеспособных лимфоидных клеток в селезёнке, в несколько раз повышается число антителообра-зующих клеток (АОК). При комбинированном введении таких веществ и нммуногена, преимущественно активирующего гуморальный иммунитет, наибольший эффект бывает в иммуноиндуктнвную фазу (на 4-е супси), менее выраженный на 7-е сутки и далее происходит плавный возврат к исходному уровню. То есть в такой постановке опыта отсутствует синхронность с действием нммуногена.

3. Аллогенная трансплантация приводит в пик иммуноэф-фекторной фазы - 14-е сутки к двукратному увеличению числа АОК в селезёнке. При комбинированном введетш трансплантанта, преимущественно стимулирующего клеточный иммунитет, и неионогенных ПАВ происходят волнообразные изменения в количестве АОК: первое увеличение связано с действием НПАВ, второе - в разгар нм-муноэффекторной фазы находится в связи с эффектом нммуногена.

4. Изолированные инъекции и НПАВ, и иммуногенов вызывают гиперплазшо клеточных элементов в лимфоидных фолликулах селезёнки и лимфатического узла с увеличением их числа и размеров, с постепенным регрессированием по истечении двух недель. При их сочетанном введении нммуноморфологическая картина в этих органах ухудшается, в особенности при инъекции Стеарокс-920. Более щадящим действием обладают ОС-20 и Стеарокс-6. Наиболее характерны морфологические перестройки при аллогеннон трансплантации.

5. Существует обратно-пропорциональная зависимость между количеством лимфоидных фолликулов в селезёнке и их диаметром: при иммуностнмуляцпях возрастает число, но уменьшается диаметр фолликулов. Диаметр центра размножения фолликулов - малоизменчивый показатель при иммунизации сывороточным белком, существенно уменьшается в опытах с трансплантацией с сочетанным введением неионогенных ПАВ.

Список опубликованных работ по материалам диссертации

1. Касенов А.К. Динамика содержания лимфоидаых клеток в разные фазы иммуногенеза под влиянием неионогенных поверхностно-активных веществ. - Здравоохр. Казахстана, 1996, №2, с. 69-71.

2. Касенов А.К. Иммуностимулирующие свойства неионогенных ПАВ. - Медико-биол. проблемы Западного Казахстана, Актюбинск, 1997, с. 65-66.

3. Касенов А.К. Изменения в спленограмме под влиянием неионогенных ПАВ. - Медико-биол. проблемы Западного Казахстана, Актюбинск, 1997, с.67-68.

4. Касенов А.К. Спленограмма как показатель гемостимули-рующего действия неионогешшх ПАВ. - Мат. науч. конф. молодых учёных и студентов вузов г. Актюбинска (на иностр. яз., 22.02.97), с. 20-21.

5. Касенов А.К. Влияние неионогенных поверхностно-активных веществ на функциональное состояние спленоцитов на фоне иммунизации ксеногенным белком - 7 с. - Рук. деп. в Казго-сИНТИ 16.05.95 №6130 - Ка95. Реф. опубл. в сб. "Депонированные научные работы", г. Алматы, 1995, в. 2, с. 93.

6. Касенов А.К. Изменение иммунофункционального состояния спленоцнтов под влиянием неионогенных поверхностно-активных веществ на фоне аллогенной трансплантации - 7 с. - Рук. деп. в КазгосИНТИ 16.05.95 №6131 - Ка95. Реф. опубл. в сб. "Депонированные научные работы", г. Алматы, 1995, в. 2, с. 93.

7. Касенов А.К. Влияние неионогенных поверхностно-активных веществ на содержание живых лимфоидаых клеток в селезёнке в разные периоды иммунной реактивности - 7 с. - Рук. деп. в КазгосИНТИ 22.06.95 №6218 - Ка95. Реф. опубл". в сб. "Депонированные научные работы", г. Алматы, 1995, в. 2, с. 94.

8. Касенов А.К. Влияние неионогенных поверхностно-активных веществ на клеточный состав селезёнки. - Информ. листок Акпобпнекого ЦНТИ, №59-96.

9. Касенов А.К. Неиопогеппые поверхностно-активные вещества как иммуномодуляторы. - Информ. листок Актюбинского ЦНТИ, №60-96. '

10. Касенов А.К. (в соавт.) Неионогенные ПАВ как вещества с нммуномодулпр)тощими свойствами. - Влияние окружающей среды

на животный организм (Сб. трудов, поев, памяти профессоров А.Ю.Тилиса и А.К.Кадыралиева). - Бишкек, 1997.

11. Касенов А.К. (в соавт.) Изменения в клеточном составе селезёнки под влиянием неионогенных ПАВ. - Там же.

12. Касенов А.К. (в соавт.) Функциональное состояние лим-фоидных клеток селезёнки под влиянием неионогенных ПАВ. - Там же.

13. Касенов А.К. (в соавт.) Влияние неионогенных ПАВ на морфофункциональное состояние лимфатического узла при антигенных воздействиях. - Там же.

Аннотация

В опытах на 576 крысах установлено увеличение на протяжении нескольких дней числа живых лимфоидных (ЖЛК) и антитело-образующих клеток (АОК) в селезёнке при подкожных введениях неионогенных поверхностно-активных веществ (НПАВ) и иммуноге-на в различных сочетаниях. Среди испытанных НПАВ: Стеарокс-920, Стеарокс-6 и ОС-20 в дозах 1,5 мг/100 г. При сочетанном их введении с взвесью гомогената печени выявлены волнообразные изменения в числе АОК в селезёнке: на протяжении двух недель - увеличение, снижение до фонового уровня, новый подъём. После введения аллогенной клеточной взвеси происходит гипотрофия лимфатического узла. Трансплантация, также как и инъекция ксеногенного сывороточного белка, приводит к увеличению количесва лимфоидных фолликулов в селезёнке. При дополнительном введении НПАВ отмеченные изменения наступают ускоренно. Имеется обратно-пропорциональное соотношение между числом лимфоидных фолликулов и их диаметром. Инъецирование НПАВ приводит к увеличению массы селезёнки на 10 - 30%, к рост}' количества сплеиокарпо-цитов, к омоложению клеточных элементов гематогенного происхождения.

Касенов Эмнрхан Кожаитай уулу

ИОНОГЕНСИЗДИК УСТУРТ©Н АКТИВДУ ЗАТТАР-ДЫН АНТИГЕНДИК АБАЛЫНДАГЫ ЭКИНЧИЛИК ЛИМ-ФОИД ОРГАНДАРЫНЫН МОРФОФУНКЦИОНАЛДЫК ЖАГДАНЫНА

ТИИГИЗУУЧУ ТААСИРИ 14.00.16 - Патологиялык физиология

НЖЗб^ПШШрШТОГИЯТтшмунолошя

Медицина илимдеринин кандидаттык даражасьша диссертациялык ТАР ЖЫ МАЛ

Кан белогу менен бирге ионогенсиздик устуртеден активу затгарды (ИУАЗ) колдонуп, 576 келемшшсе жасалган та-жрыйбалардьш натыйжасьшда лимфоид клеткаларыньш жашо-осу жана кек боордо антитела тузуучу клеткалардын бир нече кунге чейин саны кебейеру аныкгалды. Сыноодон еткерулген ИУАЗдын ичинде Стеарокс-920, Стеарокс-6 жана ОС-20 1,5 мг/100 г дозасында коддонулган ИУАЗ жана боордун гомогене-таллогендик тканын пайдаланууда антитела тузуучу клеткалардын санында толкун турундогу езгеруштер байкалат: 2 жума-нъш ичинде кебейуу, алгачкы денгээлге чейин темендее, кайра кетэрулуу- Антигендик иммунизациядан, езгечэ аллогендик трансплантациядан кийин четки лимфатикалык туйме гапотро-фияга учурайт. Трансплантация кек боордун лимфа фолликула-ларынын саны канбелогу менен иммунизациялангандан кшшн есет ИУАЗ кошумча колдонгоендо жогоркудай езгеруштер тез-детилет. Фолликулалардын саны менен диаметринин ортосунда карама-каршы катышы байкалган. ИУАЗ колдонгондон кииин кек боордун салмагы 10 -30% есет, аны менен катар бул орган-да кариоцитердин саны кебойген, гематогендик клетка эле-менттери жашарат.

Kasenov Amirlian Kogantaevich

The influens of nonionogenic surface-active substances on the northofunctional state of secondary lymphoids organse, on antigenious effect.

' Summary for the scientific degree of candidate of medical science

14.00.] 6 - Patologic physiology

14.00.36 - Allergology, Immunology

On the experiment of 576 rats it is estimated that during combined introductions of serum protein and nonionogenic surface-active substances (NSAS) vitality of limfoid cells and the number of antibodyforming cells in spleen is increasing for several days. Such NSAS as Stearoks-920, Stearoks-6 and OS-20 in the dose 1,5 mg/100 g were tested. During allogenic transplantation of the liver's tissue and sumaltenous introduction of NSAS undulating changes take place in the number of antibodyforming cells: the increase, return to the initial level and a new rise during immunisation by soluble antigen and more notably during allogenic transplantation. Quantitative changes on transplantation take plase in the lymfoid follicules of the spleen. During immunisation by serum protein the increase of lymfoid follicules number take plase in the spleen, NSAS accelerate its number. There exists inverseproportional dependence between the number of follicules and their diameter. The introduction of NSAS caused the increase of the spleen mass by 10 -30%. It was accompanied by increase of cariocits number in the spleen and rejuvenation of cellular elements.

Зап. - Каз. НПП ВТ и Информ. г. Актюбинск ул. Алтынсарина, 10А. Заказ 315, Тираж: 80 экз