Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние комбинированного применения рубомицина, мексидола, эмоксипина и отрицательных аэроионов кислорода на некоторые метаболические показатели в условиях экспериментальной неоплазии

На правах рукописи

ии^иьзз1Э

ПРОСВИРИНА ОЛЬГА НИКОЛАЕВНА

Влияние комбинированного применения рубомицина, мексидола, эмокенпина и отрицательных аэроионов кислорода на некоторые метаболические показатели в условиях экспериментальной неоплазии

14 00 25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ст Купавна-2007

003069319

Работа выполнена на кафедре поликлинической терапии и функциональной диагностики с курсом эндокринологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет им Н П Огарева»

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор А.В. Зорькина

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор И.В. Березовская

доктор биологических наук, профессор В.П. Балашов

Ведущая организация - ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им Г.Ф. Гаузе РАМН, г Москва

Защита состоится » Л/С^Й/С^ 2007 года в ^ часов на заседании Диссертационного совета Д 217 004 01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (142450, Московская область, пос Старая Купавна, ул Кирова, 23)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ

Автореферат разослан «_»_2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Л В Корольченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Одной из наиболее актуальных проблем в современной медицине является проблема заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований. В России отмечается тенденция к неуклонному росту заболеваемости злокачественными опухолями и смертности от них, так за период с 1995 по 2004 г число больных с впервые установленным диагнозом злокачественного новообразования увеличилось на 13,5% В 2004 году в России умерло 287 593 онкологических больных (Давыдов М И., Аксель Е М , 2006)

В Республике Мордовия по данным медицинского информационно-аналитического центра МЗ РМ заболеваемость населения злокачественными новообразованиями по обращаемости в лечебно-профилактические учреждения в 2005 году составила 38,8 на 100 000 населения, по г Саранск - 51,9 на 100 000 населения Смертность от злокачественных новообразований по республике составила 189,8 на 100 000 населения, в Саранске - 165,7 на 100 000 населения

Летальность онкологических больных чаще связана с высоким уровнем эндогенной интоксикации, обусловленной иммунодепрессией, интенсивно протекающими биохимическими процессами в опухолевых клетках и продуктами их жизнедеятельности, нарушением функции органов детоксикации, повреждающим действием лучевой терапии, применением противоопухолевых средств (Морозкина Т С , 1989, Чиссов В И , 2000, Вовчук И Л с соавт ,2001, Бородин ЮИ с соавт, 2004)

В лечении злокачественных опухолей используется комбинированная и комплексная терапия, направленная как на подавление роста опухоли, так и на коррекцию синдрома эндотоксикоза и защиту организма больного Учитывая свободнорадикальную теорию канцерогенеза, есть основания использовать средства, предупреждающие неадекватную активацию процессов перекисного окисления липидов, нормализовать активность ферментов антиоксидантной защиты, повышая устойчивость организма к действию токсических метаболитов опухолевой клетки (Калинин Н Н , 1999, Богдашкина О Н , 2002; Сипров А В , 2004, Скопин П И , 2005) Однако их комбинированное применение с противоопухолевыми средствами нуждается в подробном исследовании.

Выполненная работа является разделом комплексной программы исследований ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им Н П Огарева «Фармакологическая коррекция повреждений, возникающих при гипокси-ческих, токсических и радиационных воздействиях» Номер государственной регистрации 01200004103

Целью настоящей работы явилось изучение воздействия комбинированного применения рубомицина с мексидолом, эмоксипином и отрицательными аэроионами кислорода на некоторые метаболические показатели и характеристики опухоли в условиях роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 и ме-ланомы В-16

Задачи исследования:

1 Изучение влияния отрицательных аэроионов кислорода на показатели эндогенной интоксикации в крови и тканях организма и некоторые весовые характеристики в условиях роста штамма холангиоцеллюлярного рака РС-1 на фоне введения рубомицина (4 мг/кг)

2 Исследование влияния мексидола (5% и 10% от ЬО50) и эмоксипина (5% и 10% от иЭ5о) на острую токсичность рубомицина

3 Исследование влияния комбинированного применения рубомицина (4 мг/кг) с мексидолом (5% и 10% от 1ЛЭ50) и рубомицина (4 мг/кг) с эмок-сипином (5% и 10% от ЬО50) на некоторые показатели эндотоксикоза, выраженность ангиогенеза и количество патологических митозов в опухоли на фоне роста холангиоцеллюлярного рака РС-1

4 Оценка влияния комбинированного применения рубомицина

(4 мг/кг), мексидола (2% и 10% от ЬО50) и эмоксипина (2% и 10% от ЬО50) на степень метастазирования перевиваемой опухоли мышей меланомы В-16 в присутствии первичного опухолевого узла

Научная новизна. Впервые исследовано влияние отрицательных аэроионов кислорода при проведении химиотерапии рубомицином на выраженность эндогенной интоксикации и противоопухолевый эффект антрациклинового антибиотика в условиях роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 наблюдалось ограничение активности процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях организма; стимуляция активности процессов перекисного окисления липидов в ткани опухоли, снижение количества патологических митозов, массы опухоли, индекса массы опухоли, увеличение индекса торможения роста опухоли

Отмечено снижение острой токсичности рубомицина на фоне введения мексидола и эмоксипина

Показано повышение противоопухолевой активности рубомицина при дополнительном применении мексидола и эмоксипина в виде снижения индекса массы опухоли, увеличения индекса торможения роста опухоли, уменьшение количества патологических митозов в опухоли на фоне ограничения развития эндотоксикоза при росте холангиоцеллюлярного рака РС-1 в эксперименте

Впервые показано угнетение процессов спонтанного метастазирования в условиях роста меланомы В-16 при комбинированном применении рубомицина с эмоксипином и мексидолом

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием целесообразности продолжения доклинических исследований применения мексидола, эмоксипина и отрицательных аэроионов кислорода в комплексной противоопухолевой химиотерапии для коррекции метаболических нарушений Основные положения, выносимые на защиту:

1. Комбинированное применение рубомицина и мексидола подавляет

активацию процессов перекисного окисления липидов в крови и тка-

нях, корригирует метаболические показатели, ограничивает рост опухоли, количество патологических митозов в опухолевой ткани при росте холангиоцеллюлярного рака РС-1, уменьшает количество макрометастазов в легких на фоне роста меланомы В-16 мышей в присутствии первичного опухолевого узла

2 Применение эмоксипина на фоне противоопухолевой терапии холангиоцеллюлярного рака РС-1 рубомицином вызывает снижение активности процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях, корригирует биохимические показатели и показатели эндотоксикоза, усиливает противоопухолевый эффект антибиотика, снижает количество патологических митозов в опухолевой ткани, уменьшает количество макрометастазов в легких на фоне роста меланомы В-16 мышей в присутствии первичного опухолевого узла

3 Дополнительное применение отрицательных аэроионов кислорода на фоне введения рубомицина подавляет активацию процессов перекисного окисления в крови и тканях, корригирует метаболические показатели и ограничивает рост холангиоцеллюлярного рака РС-1 в эксперименте

Апробация работы Результаты работы и основные положения, полученные в результате собственных исследований, доложены на III Международной научно-практической конференции «Новые медицинские технологии в охране здоровья здоровых, в диагностике, лечении и реабилитации больных» (Пенза, 2005), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы регионального здравоохранения» (Саранск, 2004), научных конференциях Мордовского государственного университета «XXXII-XXXV Огаревские чтения» (Саранск, 2003-2006), IX-X научных конференциях молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского государственного университета (Саранск, 2004-2006)

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 9 работ, зарегистрировано 2 рационализаторских предложения.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы исследования, трех глав с результатами собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка используемой литературы, включающего 285 источников, из них 191 отечественных и 94 иностранных, приложения, включающего 24 таблицы. Текст изложен на 163 страницах компьютерного набора, документирован 2 таблицами, иллюстрирован 61 рисунком

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперимент выполнен на 234 белых нелинейных крысах-самцах, 55 мышах-самках линии C57BL/6, 306 белых нелинейных мышах обоего пола

Для проведения эксперимента использованы следующие фармакологические препараты

1 Рубомицина гидрохлорид - противоопухолевый антрациклиновый антибиотик, который быстро связывается с белками плазмы и тканей, не проникает через гематоэнцефалический барьер Рубомицин эффективен при остром лейкозе, гематосаркомах, различных солидных опухолях у детей, хорионэпите-лиоме матки, ретикулосаркомах. Наряду с выраженным противоопухолевым действием он дает ряд побочных эффектов вызывает поражение тонкой кишки, почек, угнетение гемопоэза (Пичугина Т В с соавт, 1979), нарушения сердечной деятельности (Р1Ька1а I е1 а!, 1996, РоБШга А. et а!, 1996) Для курса противоопухолевой химиотерапии использовался рубомицина гидрохлорид во флаконах по 20 мг сухого вещества (растворялся в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида) в дозе 4 мг/кг внутрибрюшинно через день с 20 суток эксперимента, всего 4 инъекции

2 а-Токоферола ацетат (6-Ацетокси-2-метил-2-(4,8,12-триметил-тридецил)-хроман) является универсальным антиоксидантом и стабилизатором биологических мембран (Евстигнеева Р П с соавт, 1998) В эксперименте применялся 10% масляный раствор а-токоферола ацетата в ампулах по 1 мл производства ООО «ФАРМАДОН» (г Ростов-на-Дону) в дозах 9,5 мг/кг, 19,5мг/кг, 47,5 мг/кг Эти дозы изомолярно соответствуют изучаемым дозам мексидола (5, 10 и 25 мг/кг) и эмоксипина (3,4, 6,8 и 17 мг/кг)

3 Мексидол (3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат) обладает широким спектром фармакологической активности (Дюмаев К М с соавт, 1995) Оказывает антиишемическое, антигипоксическое (Артюков О П, 1997), анти-амнестическое, анксиолитическое, антистрессорное и противосудорожное действие (Меринг ТА с соавт, 1991), обладает антиоксидантными и мембрано-протекторными свойствами (Смирнов Л Д с соавт, 1992, Дюмаев К М. с соавт, 1997) В представленной работе мексидол использовался в дозах 5, 10, 25 и 50 мг/кг, примерно соответствующих 1%, 2%, 5% и 10% от ЬО50 В эксперименте использовался мексидол в виде 5% раствора для инъекций в ампулах по 2 мл производства ООО МЦ «Эллара»

4 Эмоксипин (3-окси-6-метил-2-этил-пиридина гидрохлорид) относится к классу р-оксипроизводных азотистых гетероароматических антиоксидантов Синтетический водорастворимый антиоксидант эмоксипин обладает высокой антирадикальной, противоишемической, ноотропной и вегетотропнои активностью (Вечерский ЮЮ с соавт, 1998, Машковский МД, 2000, Смирнов ЛД с соавт, 2001). В эксперименте использован эмоксипин производства ФГУП «Московский эндокринный завод» в ампулах по 1 мл 1% раствора в дозах 3,4 мг/кг, 6,8 мг/кг, 17 мг/кг, 34 мг/кг, примерно соответствующих 1%, 2%, 5% и 10%от1ЛЭ50

Отрицательные аэроионы кислорода генерировались электроэффлюви-альной люстрой «Эффлювион» (научно-производственный центр «Альфа-ритм», г Саранск) при концентрации 100000 аэроионов в см3 Отрицательные аэроионы кислорода действуют как биокатализаторы, нормализующие и стимулирующие обмен веществ, что повышает сопротивляемость ко всем неблагоприятным воздействиям (Чижевский А Л, 1959), способствуют снижению содержания в крови малонового диальдегида и увеличивают антиоксидантные

свойства плазмы при длительном стрессорном воздействии (Зорькина А В , 1995), стимулируют фибринолиз (Скипетров В А , 1991), уменьшают скорость и степень агрегации тромбоцитов (Власов А П с соавт, 1996) Аэроионотерапия (АИТ) использовалась в двух режимах- профилактическом (с первых суток после перевивки опухоли проводилось ежедневное шестичасовое облучение) и лечебном (с 20-х суток роста опухоли проводилось ежедневное шестичасовое облучение)

В ходе эксперимента использованы две модели неоплазии, создаваемые путем перевивки опухолевых штаммов - холангиоцеллюлярный рак РС-1крыс и меланома В-16 мышей (НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей ГУ РОНЦ им НН БлохинаРАМН)

Таблица 1

Структура эксперимента (МОДЕЛЬ 1 - холангиоцеллюлярный рак РС-1)_

№ Условия проведения опыта п

1 Интактные животные 10

2 Контроль (С 20-х по 35-е сутки введение физ ра-ра 0,5 мл в/м ежедневно) 14

3 а-токоферола ацетат 9,5 мг/кг в/м 10

4 а-токоферола ацетат 19,5 мг/кг в/м 10

5 а-токоферола ацетат 47,5 мг/кг в/м 10

6 Мексидол 5 мг/кг (1% LDS0) в/м 10

7 Мексидол 10 мг/кг (2% LD50) в/м 10

8 Мексидол 25 мг/кг (5% LDS0) в/м 10

9 Мексидол 50 мг/кг (10% LD50) в/м 10

10 Эмоксипин 3,4 мг/кг (1% LDS0) в/м 10

И Эмоксипин 6,8 мг/кг (2% LD50) в/м 10

12 Эмоксипин 17 мг/кг (5% LDS0) в/м 10

13 Эмоксипин 34 мг/кг (10% LD5o) в/м 10

14 С 1-х по 35-е сутки проведение АИТ по 6 часов ежедневно 10

15 С 20-х по 35-е сутки проведение АИТ по 6 часов ежедневно 10

16 С 20-х суток введение рубомицина 4 мг/кг в/б 4 раза, через день 10

17 Рубомицин 4 мг/кг с 20 суток в/б 4 раза через день с 20 суток + а-токоферола ацетат 19 мг/кг в/м. 10

18 + а-токоферола ацетат 47,5 мг/кг в/м 10

19 + мексидол 25 мг/кг в/м 10

20 + мексидол 50 мг/кг в/м 10

21 + эмоксипин 17 мг/кг в/м 10

22 + эмоксипин 34 мг/кг в/м 10

23 + аэроионотерапия по 6 часов ежедневно с 20-х по 35-е сутки 10

Примечание корригирующие препараты вводились с 20 по 35 сутки ежедневно

Опухоль перевивалась на 28-е сутки роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 подкожно белым нелинейным крысам-самцам весом 80-90 г. Животных опытных серий умерщвляли путем декапитации после внутрибрюшного введения раствора тиопентала натрия в дозе 50 мг/кг на 36 сутки после перевивки опухоли Всего проведено 23 опытных серии (табл 1).

В плазме, эритроцитах, гомогенатах печени, почек, ткани сердца и кишечника, а также в опухолевой ткани определяли содержание малонового диальде-гида (МДА) и индуцированного железом малонового диальдегида (Ре-МДА) по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Конюхова С Г, 1989) Рассчитывали антиокислительную активность (АОА) как разницу между содержанием Ре-МДА и МДА (Клебанов Г И , 1999) Расчет резерва липидов для перекисного окисления (РЛПО) осуществляли по методу Д И Кузьменко и Б И Лаптева (1997) по формуле РЛПО=(Ре-МДА - МДА)/МДА Определяли активность ферментов антиокислительной защиты - каталазы (Королюк М А , 1988) и супероксиддисму-тазы (СОД) по методу С. Чевари (1990)

Для оценки биохимических изменений определяли активность аланино-вой (АлТ) и аспарагиновой (АсТ) трансаминаз методом Райтмана - Френкеля (1980), уровень креатинина по цветной реакции Яффе (1979), мочевины по ди-ацетилмоноксимному методу, концентрацию глюкозы - глюкозооксидазным методом по окислению О-толуидина (Меньшиков В В , 1987), содержание общего белка и белковых фракций При этом использовали фотоэлектрокапори-метр "КФК - 2МП" и спектрофотометр «СФ-46»

Измерения общей (ОКА) и эффективной (ЭКА) концентраций альбумина производили на флюориметре «Зонд-З» (Грызунов Ю А, Добрецов Г Е , 1994) с использованием набора реактивов ГМП НИМВЦ «Зонд Альбумин» По полученным значениям ЭКА, ОКА рассчитывали ряд показателей резерв связывания альбумина (РСА) РСА=ЭКА/ОКА, индекс токсичности (ИТ)" ИТ=(ОК А/ЭК А)-1

О проницаемости мембран эритроцитов судили по коэффициенту, катала-за эритроцитов / каталаза плазмы (Розенко Л Я , Сидоренко Ю С , 1999)

Для подсчета лейкоцитарной формулы мазки крови окрашивали по методу Романовского-Гимзы, клеточный состав лейкоцитарной формулы просчитывали с использованием бинокулярного микроскопа. Для оценки степени эндогенной интоксикации использовали индекс лейкоцитарной интоксикации (ИЛИ), рассчитанный по формуле, предложенной Я Я Кальф-Калифом (1941)

ИЛИ = <4мц +Зю +2п +с)*("л +0 где (мон +лимф)*(э +1) '

мц - миелоциты, ю - юные нейтрофилы, п - палочкоядерные нейгрофилы, с -сегментоядерные нейтрофилы, мон - моноциты, лимф - лимфоциты, пл кл -плазматические клетки, э - эозинофилы

Оценивали динамику массы животных опухоленосителей, массу опухоли и печени, индексы массы опухоли и печени, рассчитанных как отношение массы этих тканей к массе животного и выраженных в процентах Противоопухо-

левый эффект оценивали по индексу торможения роста опухоли (ИТРО), который рассчитывали по формуле-

ИТРО =((средняя mKOI,rp - топьгг)/ средняя тконгр) 100, где средняя тК0ИТр -средняя масса опухоли в контрольной группе, топыт — масса опухоли в опытной группе

Морфологическое исследование опухоли проводили во всех опытных сериях Для гистологического исследования кусочки опухоли фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина Препараты заливали парафином и нарезали на микротоме Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином, затем помещали в смолу канадского клена Гистологические препараты просматривали на световом бинокулярном микроскопе В краевой зоне опухоли при увеличении хЗОО определяли количество кровеносных сосудов для оценки влияния исследуемых препаратов на процесс ангиогенеза в опухолевой ткани (Карамышева А.Ф., 2000), при увеличении х 600 - количество патологических митозов (Казанцева И А , 1981)

Исследование влияния мексидола и эмоксипина на процесс метастазирова-ния проводили на модели спонтанного метастазирования - перевиваемой опухоли мышей - меланоме В-16 (МОДЕЛЬ 2), перевитой в НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей ГУ РОНЦ им. Н.Н Блохина РАМН Всего проведено 10 серий (табл 2) Оценка результатов проводилась на 25 день после перевивки опухоли Все мыши умерщвлялись путем декапитации после внутрибрюшного введения им раствора тиопентала натрия в дозе 50 мг/кг

Табл и ца2

Структура эксперимента (МОДЕЛЬ 2 - меланома В-16) _

№ Условия проведения опыта п

1 Контроль (С 1-х по 24-е сутки введение физиологического раствора 0,2 мл в/м ежедневно) 5

2 Мексидол 10 мг/кг в/м (2% ЬО50) с 1 по 24 сутки ежедневно 5

3 Мексидол 50 мг/кг в/м (10% ЬО50) с 1 по 24 сутки ежедневно 5

4 Эмоксипин 6,8 мг/кг в/м (2% ЬП50) с 1 по 24 сутки ежедневно 5

5 Эмоксипин 34 мг/кг в/м (10% ЬО50) с 1 по 24 сутки ежедневно 5

6 Рубомицин 4 мг/кг в/б 4 раза, через день с 1 суток 5

7 Рубомицин 4 мг/кг в/б 4 раза через день с 1 суток + мексидол 10 мг/кг в/м с 1 по 24 сутки ежедневно 5

8 + мексидол 50 мг/кг в/м с 1 по 24 сутки ежедневно 5

9 + эмоксипин 6,8 мг/кг в/м с 1 по 24 сутки ежедневно 5

10 + эмоксипин 34 мг/кг в/м с 1 по 24 сутки ежедневно 5

Оценивалось количество метастазов у каждого животного, общее количество метастазов в серии, частота метастазирования, индекс ингибирования про-

цесса метастазирования Частота метастазирования — процент животных с метастазами по отношению к общему количеству животных в группе Индекс инги-бирования процесса метастазирования (ИИМ) подсчитывали по формуле ИИМ=((АкхВк-АхВ)/АкхВк)хЮО%, где Дки А - частота метастазирования в легкие у мышей контрольной группы и опытной, Вк и В - среднее число метастазов в легких в контрольной и опытной группах

Острая токсичность рубомицина при его комбинации с мексидолом и эмоксипином оценивалась на белых нелинейных мышах обоего пола по методу Литчфилда и Уилкоксона (1949) с построением графика на бумаге с миллиметровой сеткой Определялись токсические дозы LD|i; LD50 и LD84 рубомицина после однократного внутрибрюшинного введения мексидола и эмоксипина в дозах 5 и 10% от LD50

Статистическая обработка результатов исследований проведена с помощью t-критерия Стьюдента (Закс Л , 1976) на персональном компьютере AMD Sempron™ 2800+ с использованием программ "Microsoft® Office Excel 2003" Вычисляли среднюю арифметическую выборочную (М), ошибку средней арифметической (т), коэффициент достоверности Стьюдента (t), критерий соответствия (х2) Изменения считали достоверными, если р<0,05 (0,01, 0,001)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ II ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В многочисленных экспериментальных и ряде клинических исследований показано, что при возникновении и развитии злокачественных опухолей изменяются показатели, характеризующие интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) в органах и тканях (Шарипов Ф К с соавт, 2001, Савина Е В с соавт, 2001, Франциянц Е М. с соавт , 2002) Это дало основание предположить, что ПОЛ является одним из механизмов реализации реакции организма на возникновение и развитие опухоли (Эделева Н В с соавт., 2001, Смирнов В В с соавт, 2002, Peter Y et al, 2001) Интенсификация процессов перекисного окисления липидов способствует образованию и накоплению токсических продуктов, сопровождаясь развитием неспецифического синдрома эндогенной интоксикации (Карякина Е В , 1998, Власов А П с соавт , 1999, Harris В Н. et al, 1995, MalviDJ etal, 1997)

Эти данные подтверждаются нашими исследованиями В условиях роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 выявлено значительное усиление процессов ПОЛ в организме животных на фоне резкого снижения антиоксидантной защиты, что проявлялось в снижении активности каталазы и антиокислительной активности Указанные изменения наблюдались в крови и органах детоксикации В эритроцитах и плазме крови отмечалось угнетение активности каталазы, повышение содержания МДА на фоне снижения АОА и резерва липидов для перекисного окисления, усиление процессов ПОЛ и снижение антиоксидантной защиты выявлено в ткани печени, почках и кишечнике Развитие опухоли в организме сопровождалось значительными изменениями в биохимических пока-

и

зателях повышалась активность АсТ и АлТ, снижалось содержание глюкозы, что отражает мнение об опухоли как о «ловушке» глюкозы (Шапот В С , 1975) У животных опухоленосителей наблюдалось повышение уровня креатинина и мочевины, выявлена диспротеинемия- отмечалось повышение общего количества белка, уровня аг и а2-глобулинов, резкое снижение содержания альбуминов и эффективного альбумина О накоплении в крови токсинов свидетельствовало снижение резерва связывания альбумина, увеличение индекса токсичности Повышение индекса лейкоцитарной интоксикации также подтверждало высокий уровень эндотоксикоза (табл 4)

При введении рубомицина на фоне выраженного противоопухолевого эффекта препарата (табл 3) сохранялся высокий уровень эндогенной интоксикации ЭКА, ОКА, индекс токсичности и индекс лейкоцитарной интоксикации, активность АсТ, АлТ, содержание креатинина, мочевины достоверно не отличались от показателей в контрольной группе.

Таблица 3

Влияние комбинированного применения рубомицина, мексидола, эмоксипина и отрицательных аэроиоиов кислорода на весовые

характеристики опухоли н количество патологических митозов __в опухолевой ткани (М±т)___

Условия проведения эксперимента Масса опухоли, г. ИМО % ИТРО % Количество патологических митозов

Контроль 55,4±5,1 41,1±4,3 - 3,9±0,1

Рубомицин 4 мг/кг 36,8±4,1 ' 25,5±3,9' 33,5±7,1 2,2±0,1'

Рубомицин 4 мг/кг + а-токоферол 47,5 мг/кг 30,9±3,9 '* 19,8±2,3 '* 44,2±5,4 * 1,1±0,1 '*

Рубомицин 4 мг/кг + мексидол 25 мг/кг 17,2±3, '* 15,0±2,2 '* 69,7±6,8 * 1,80±0,04 '*

Рубомицин 4 мг/кг + мексидол 50 мг/кг 13,8±5,3 '* 6,9±1,1 '* 75,1±11,6 * 1,40±0,04 '*

Рубомицин 4 мг/кг + эмоксипин 17 мг/кг 22,2±4,3 '* 12,6±2,3 59,7±9,2 * 1,6±0,1 •*

Рубомицин 4 г/кг + эмоксипин 34 мг/кг 16,7±1,5 '* 9,4±0,5 '* 69,8±2,5 * 1,5±0,1 '*

Рубомицин 4 мг/кг + АИТ с 20 суток 19,3±0,7 '* 17,5±0,7 '* 64,1±1,2 * 1,05±0,13 '*

Примечания достоверность различия р<0,05 с данными контрольной группы, *- достоверность различия р<0,05 с данными группы, получавшей ру-бомицин, ИМО - индекс массы опухоли, ИТРО - индекс торможения роста опухоли, АИТ - аэроионотерапия

В плазме крови рубомицин вызывал дальнейшую активацию процессов ПОЛ по сравнению с контрольной группой, что выражалось в повышении со-

держания МДА на 14% (р<0,05), угнетении антиокислительной активности на 52% (р<0,01), уменьшении резерва липидов для перекисного окисления на 60% (р<0,001). В гомогенатах печени выявлено снижение активности СОД на 42% (р<0,005), повышение МДА на 26% (р<0,05), снижение РЛПО на 29% (р<0,05) В почках на фоне введения рубомицина так же наблюдался рост активности процессов перекисного окисления липидов, что проявилось в увеличении содержания МДА на 64% (р<0,001), Ре-МДА - на 46% (р<0,05) В ходе эксперимента выявлен кардиотоксический эффект рубомицина Так, в ткани сердца активность каталазы оказалась на 54% (р<0,05), активность супероксиддисмутазы - на 45% (р<0,005) ниже, чем в контроле, содержание малонового диальдегида увеличилось на 49% (р<0,05), резерв липидов для перекисного окисления снизился на 51% (р<0,05) на фоне угнетения антиокислительной активности на 23% (р<0,05) в сравнении с данными контрольной группы Применение рубомицина повышало активность процессов ПОЛ в кишечнике

В ткани опухоли введение рубомицина вызывало активацию каталазы и уменьшение резерва липидов для перекисного окисления, при этом содержание малонового диальдегида и железом индуцированного малонового диальдегида, активность супероксиддисмутазы и антиокислительная активность достоверно не различались с данными контрольной группы

В микропрепаратах количество сосудов в краевой зоне опухоли по сравнению с контрольной группой уменьшилось на 56% (р<0,001), патологических митозов - на 44% (р<0,001) (табл 3)

Таким образом, на фоне выраженного противоопухолевого эффекта рубомицина обнаружены значительные изменения метаболических показателей, что требует изыскания средств для коррекции выявленных нарушений С этой целью в эксперименте применялись отрицательные аэроионы кислорода, мекси-дол и эмоксипин

Применение отрицательных аэроионов кислорода на фоне роста холангио-целлюлярного рака РС-1 способствовало коррекции показателей эндогенной интоксикации и не оказывало стимулирующего влияния на рост опухоли

Отрицательные аэроионы кислорода на фоне введения рубомицина корригировали показатели эндотоксикоза, нарушения в биохимическом звене гомео-стаза, что проявлялось в снижении активности АсТ на 40% (р<0,001), уровня креатинина на 19% (р<0,005), повышении содержания глюкозы на 26% (р<0,05), нормализации уровня мочевины (рис 1) Отрицательные аэроионы кислорода способствовали повышению уровня альбумина на 355% (р<0,001), снижению содержания аг и у-глобулинов на 20% (р<0,05) и 34% (р<0,005) соответственно При этом выявлено повышение эффективной концентрации альбумина на 71% (р<0,05), снижение индекса токсичности на 42% (р<0,05), повышение резерва связывания альбумина на 43% (р<0,05) в сравнении с монотерапией рубомицином (табл 4)

Отрицательные аэроионы кислорода на фоне противоопухолевой химиотерапии повышали активность каталазы в плазме, почках, кишечнике на 144% (р<0,001), 49% (р<0,001) и 53% (р<0,05) соответственно, при этом содержание малонового диальдегида снизилось в эритроцитах на 8% (р<0,05), в плазме - на

52% (р<0,001), в печени - на 37% (р<0,001), что говорит о подавлении активности процессов ПОЛ в этих тканях. На этом фоне отмечалось повышение антиокислительной активности в эритроцитах, плазме, печени и кишечнике на 52% (р<0,05), 106%(р<0,001), 58% (р<0,001) и 77% (р<0,05) соответственно. В эритроцитах, плазме и печени увеличился резерв липидов для перекисного окисления на 50% (р<0,05), 298% (р<0,001) и 319% (р<0,001) соответственно. В сердечной мышце отрицательные аэроионы кислорода способствовали уменьшению кардиотоксичности рубомицина, что выражалось я снижении содержания МДА на 49% (р<0,005) на фоне увеличения РЛПО на 319% (р<0,001), роста АОА на 1 10%(р<0,001), повышения активности катал азы на 71% (р<0,001).

350 300 250 200 150 100 50 О

■ контроль ■ рубомицин

0 рубомицин+мексидол50мг/кг И рубомицин+эмоксипин34мг/кг □ рубомицин+АИТ с 20 суток

Рис. 1. Влияние комбинированного применения рубомицина, мексидола, эмоксипина и отрицательных аэроионов кислорода на некоторые биохимические показатели организма олухоленосителя (в % к уровню интактных животных) V-достоверность различия с данными интактной группы, р<0,05; U -достоверность различия с данными контрольной группы, р<0,05; *- достоверность различия с данными группы, получавшей только рубомицин, р<0,05)

При применении аэроионотерапии на фоне введения рубомицина выявлено снижение массы онухоли, индекса массы опухоли, повышение индекса торможения роста опухоли (табл.З). При этом в ткани опухоли содержание малонового диальдегида увеличилось на 50% (р<0,05), уменьшился резерв липидов для перекисного окисления на 44% (р<0,001) и антиокислительная активность на 18% (р<0,05) на фоне снижения активности каталазы на 60% (р<0,001) по сравнению с монотерапией рубомицином. Использование отрицательных аэроионов кислорода при проведении химиотерапии уменьшало количество крове-

АсТ

АлТ мочевина креатинин глюкоза

носных сосудов в краевой зоне опухоли в сравнении с контролем на 22% (р<0,005) Однако изученный показатель оказался на 82% (р<0,001) выше, а количество патологических митозов на 51% (р<0,001) меньше (табл 3), чем при монотерапии рубомицином

В литературе имеются неполные сведения о применении препаратов с ан-тиоксидантным типом действия в комплексной терапии онкологических больных для повышения эффективности химиотерапевтического лечения, снижения побочных эффектов противоопухолевых средств (Кинзирский А С , Волко-ваО В, 1999)

Таблица4

Влияние комбинированного применения рубомицина и а-токоферола, мексидола, эмоксипина и отрицательных аэроионов кислорода fia

некоторые показатели эндотоксикоза организма опухоленосителя (Mim)

ЭКА г/л ОКА г/л ИТ РСА ИЛИ

Интактные 39,8±7,2 46,5±8,7 0,17±0,02 0,8б±0,02 0,361±0,001

Контроль 6,3±0,4 27,2± 0,9 3,3±0,6 0,24±0,04 1,18±0,11

Рубомицин 4 мг/кг 8,3±1,7 25,4±0,9 2,1±0,3 0,33±0,05 1,33±0,09

Рубомицин4мг/кг + а-токоферол47,5мг/кг 11,2±0,7 29,8±0,5* 1,7 ±0,1 0,38±0,03 0,52±0,03*

Рубомицин 4 мг/кг + мексидол 25мг/кг 23,3±1,8 34,5±3,0* 0,50±0,15* 0,69±0,07* 0,56±0,03*

Рубомицин 4 мг/кг + мексидол 50 мг/кг 19,3±0,2* 38,8±1,9* 1,0±0,1 0,49±0,02* 0,39±0,02*

Рубомицин 4 мг/кг + эмоксипин 17 мг/кг 10,7±2,0 23,3±4,6 1,2±0,3 0,47±0,01* 0,60±0,05*

Рубомицин 4 мг/кг + эмоксипин 34 мг/кг 17,5±1,5* 30,0±3,0 0,7±03* 0,59±0,11* 0,45±0,04*

Рубомицин 4 мг/кг + АИТ с 20 суток 14,2±1,3* 30,1±2,2* 1,2±0,3* 0,47±0,01* 1,10±0,07

Примечание жирным шрифтом выделены данные, достоверность различия которых с показателями контрольной группы р<0,05, *- достоверность различия данных с показателями группы с монотерапией рубомицином р<0,05

Введение а-токоферола в режиме монотерапии способствовало частичной коррекции изменений метаболических показателей, вызванных ростом холан-гиоцеллюлярного рака РС-1 Наиболее эффективной оказалась доза 47,5 мг/кг

При комбинированном применении рубомицина и а-токоферола в дозе 47,5 мг/кг активность АлТ, содержание креатинина, общего белка, а2- и р-глобулинов, общая концентрация альбумина соответствовало данным интакт-ных животных Выявлено снижение ИЛИ (табл 4)

Дополнительное введение а-токоферола на фоне противоопухолевой химиотерапии способствовало повышению активности каталазы в крови и тканях, при этом активность фермента наиболее значительно возросла в эритроцитах и плазме крови, в ткани сердца На этом фоне отмечалось снижение содержания

МДА, повышение антиокислительной активности, увеличение резерва липидов для перекисного окисления

Применение а-токоферола не способствовало повышению противоопухолевой активности рубомицина (табл 3) Однако в опухолевой ткани введение а-токоферола на фоне химиотерапии приводило к снижению активности катала-зы, угнетению активности супероксидцисмутазы, повышению содержания малонового диапьдегида, снижению АОА и РЛПО Количество сосудов в краевой зоне опухоли увеличилось на 152% (р<0,001), количество патологических митозов уменьшилось на 49% (р<0,001) в сравнении с монотерапией рубомици-ном (табл 3)

Таким образом, применение а-токоферола на фоне химиотерапии рубоми-цином способствовало коррекции показателей эндогенной интоксикации, но не повышало противоопухолевой активности химиопрепарата.

На следующем этапе эксперимента изучалось влияние мексидола и эмок-сипина на острую токсичность исследуемого противоопухолевого средства Установлено повышение ЬО50 рубомицина с 5,3±0,2 мг/кг до 7,7±0,3 мг/кг (р<0,001) и 8,0±0,2 мг/кг (р<0,001) при применении мексидола и эмоксипина в дозе 5% от ЬО50, до 10,0±0,2 мг/кг (р<0,001) и 10,7±0,2 мг/кг (р<0,001) при использовании мексидола и эмоксипина в дозе 10% от ЬО50 соответственно

Мексидол на фоне роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 оказывал выраженное нормализующее действие на процессы перекисного окисления в крови и органах животных и не оказывал стимулирующего воздействия на рост опухоли в эксперименте

При комбинированном применении рубомицина и мексидола в дозе 5% от ЬВ50 по сравнению с группой, получавшей антибиотик, наблюдалась нормализация содержания мочевины и креатинина, общего белка, альбуминов, р-глобулинов, снижение активности АлТ, рост уровня глюкозы Повышение дозы мексидола до 10% от 1Л}50 в комбинации с рубомицином нормализовало количество мочевины, содержание общего белка, альбуминов, аг и р-глобулинов, снижало активность маркеров цитолитического синдрома, уменьшало содержание креатинина, вызывало повышение уровня глюкозы в плазме (рис 1) Применение мексидола в дозах 5% и 10% от ЬО50 на фоне введения рубомицина в значительной степени снижало выраженность эндогенной интоксикации выявлено повышение общей концентрации альбумина на 36% (р<0,05) и 53% (р<0,05), резерва связывания альбумина на 109% (р<0,005) и 52% (р<0,005), снижение индекса токсичности на 76% (р<0,005) и 51% (р<0,005), индекса лейкоцитарной интоксикации на 58% (р<0,001) и 70% (р<0,001) соответственно (табл 4)

В эритроцитах дополнительное применение мексидола в дозах 5% и 10% от ЬО50 на фоне химиотерапии способствовало нормализации активности ката-лазы, снижению содержания МДА В плазме отмечалось угнетение процессов ПОЛ, что выражалось в повышении активности катапазы, антиокислительной активности, снижении содержания малонового диапьдегида, увеличении резерва липидов для перекисного окисления по сравнению с монотерапией рубомицином Аналогичные изменения выявлены в тканях печени, почек, кишечника

В гомогенатах сердца введение мексидола в дозе 5% от 1Х>50 на фоне применения рубомицина способствовало повышению активности каталазы на 165% (р<0,001) Увеличение дозы мексидола до 10% от ЬО50 способствовало повышению АОА на 72% (р<0,001), РЛПО - на 120% (р<0,005), активности каталазы - на 97% (р<0,005), СОД - на 80% (р<0,005)

Комбинированное применение мексидола и рубомицина способствовало более значительному снижению массы опухоли, индекса массы опухоли, повышению индекса торможения роста опухоли, чем при химиотерапии (табл 3) В опухолевой ткани мексидол в дозе 5% от ЬО50 на фоне введения рубомицина вызывал снижение активности каталазы на 75% (р<0,001), уменьшение РЛПО на 73% (р<0,05) Повышение дозы мексидола до 10% от ЬО50 способствовало уменьшению АОА на 29% (р<0,01) Наблюдалось снижение количества патологических митозов (табл 3) При введении мексидола в дозах 5% и 10% от ЬО50 на фоне применения рубомицина количество митозов уменьшилось на 16% (р<0,005) и 35% (р<0,001) соответственно Количество кровеносных сосудов в краевой зоне опухоли не отличалось от контроля и увеличилось на 145% (р<0,001) и 118% (р<0,001) соответственно вводимой дозе в сравнении монотерапией рубомицином

Таким образом, применение мексидола на фоне введения рубомицина способствовало коррекции метаболических показателей и усиливало противоопухолевую активность антрациклинового антибиотика

Полученные в ходе эксперимента данные свидетельствуют о том, что на фоне роста холангиоцеллюлярного рака РС-1, эмоксипин обладал довольно выраженным нормализующим действием на процессы ПОЛ в крови и органах опухоленосителей и не способствовал стимуляции роста опухоли

Комбинированное применение рубомицина и эмоксипина в дозе 5% от ЬО50 способствовало повышению резерва связывания альбумина на 57% (р<0,05), снижению индекса лейкоцитарной интоксикации на 45% (р<0,001). Повышение дозы эмоксипина до 10% от ЬО50 на фоне химиотерапии приводило к более выраженным изменениям показателей эндотоксикоза- выявлена нормализация общей концентрации альбумина, индекса токсичности, повышение эффективной концентрации альбумина на 111% (р<0,005), резерва связывания альбумина на 81% (р<0,05), уменьшение индекса лейкоцитарной интоксикации на 34% (р<0,001) в сравнении с монотерапией противоопухолевым антибиотиком (табл 4) Введение эмоксипина в дозе 5% от ЬО50 на фоне применения рубомицина способствовало снижению активности маркеров цитолитического синдрома, нормализации содержания креатинина и мочевины, коррекции дис-протеинемии При этом при увеличении дозы эмоксипина до 10% от содержание креатинина, общего белка и белковых фракций, активность АлТ не отличались от показателей интактной группы, а активность АсТ уменьшилась на 50% (р<0,001) в сравнении с монотерапией рубомицином (рис 1)

Изменения показателей ПОЛ в эритроцитах частично корригировались комбинированным применением рубомицина с эмоксипином в дозе 5% от ЬП50 активность каталазы не отличалась от интактных данных, содержание МДА снизилось на 21% (р<0,001), Ре-МДА - на 18% (р<0,05) в сравнении с моноте-

рапией противоопухолевым антибиотиком. При введении эмоксипина в дозе 10% от ЬВ50 на фоне применения рубомицина активность каталазы в эритроцитах и содержание малонового диальдегида нормализовалось, отмечалось увеличение резерва липидов для перекисного окисления на 146% (р<0,001), повышение антиокислительной активности на 100% (р<0,001) по сравнению с серией, получавшей только противоопухолевое средство В плазме на фоне применения рубомицина эмоксипин в дозе 5% от ЬО50 увеличивал активность каталазы на 104% (р<0,05), нормализовал содержание МДА, повысил антиокислительную активность на 214% (р<0,001) Активность каталазы в плазме при повышении дозы эмоксипина до 10% от ЬО50 при химиотерапии оказалась на 59% (р<0,005) больше интактных данных, содержание Ре-МДА не отличалось от нормальных показателей, уровень малонового диальдегида оказался на 56% (р<0,001) ниже, а антиокислительная активность выше на 576% (р<0,001) данных в группе, получавшей только рубомицин

В гомогенатах почек при комбинированном применении рубомицина и эмоксипина в дозах 5% и 10% от ЬО50 увеличилась активность каталазы и СОД, повысился РЛПО, АОА Эмоксипин в дозе 10% от ЬБ50 на фоне введения противоопухолевого средства снижал содержание МДА на 24% (р<0,01) по сравнению с группой, получавшей только рубомицин В гомогенатах сердца эмоксипин в дозе 5% от ЬО50 при комбинированном применении с рубомицином нормализовал активность каталазы, повышал активность СОД на 32%, увеличивал резерв липидов для перекисного окисления и антиокислительную активность на 68% и 44% соответственно по сравнению с монотерапией рубомицином Эмоксипин в дозе 10% от Ь05о на фоне введения противоопухолевого средства способствовал повышению активности каталазы на 385%, активность СОД - на 55%, увеличению РЛПО на 429%, АОА - на 147%, снижению содержания МДА на 52% в сравнении с группой, получавшей только рубомицин Аналогичные изменения выявлены в гомогенатах печени и кищечника

Дополнительное введение эмоксипина в дозах 5% и 10% от 1ЛЭ50 повышало противоопухолевую активность рубомицина снизились масса опухоли, индекс массы опухоли, повысился индекс торможения роста опухоли (табл 1) Комбинированное применение рубомицина и эмоксипина в дозе 5% от ЬО50 в опухолевой ткани вызывало угнетение активности каталазы и СОД на 56% (р<0,005) и 76% (р<0,05) соответственно, снижало РЛПО на 15% (р<0,05), при этом содержание МДА, Ре-МДА и АОА не отличались от показателей в группе, получавшей только рубомицин Повышение дозы эмоксипина до 10% от ЬЭ50 еще больше угнетало активность ферментов антиоксидантной защиты, при этом содержание МДА увеличилось на 79% (р<0,05), РЛПО уменьшился на 59% (р<0,001), АОА снизилась на 33% (р<0,01) в сравнении с группой, получавшей только рубомицин

Применение эмоксипина в дозах 5% и 10% от ЬО50 на фоне введения рубомицина способствовало увеличению количества сосудов в краевой зоне опухоли на 165% (р<0,001) и 180% (р<0,001) соответственно в сравнении с группой, получавшей только химиопрепарат, что на 13% и 20% выше, чем в контроле Выявлено снижение количества патологических митозов (табл 3) по

сравнению с монохимиотерапией: при введении эмоксипина в дозе 5% от - на 26% (р<0,005), в дозе ¡0% от ЬО№ - на 34% (р<0,005).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что дополнительное применение эмоксипина на фоне химиотерапии при роете холан-гио целлю ля р но го рака РС-1 способствует коррекции показателей эндогенной интоксикации ПОЛ в крови и тканях и повышает противоопухолевый эффект рубомицина.

Для изучения влияния мексидола и -.эмоксипина на процесс метастазиро-вания была использована модель меланомы В-16 мышей, обладающая способностью спонтанного метастазировання. В контрольной серии частота метзета-зирования составила 100% (рис.2), Рубоминин в дозе 4 мг/кг не снижал частоту метастазировання в группе подопытных животных, но среднее число метастазов на поверхности легких у мышей в серии снизилось до 8,80±0,86 (р<0,05).

частота среднее число Индекс

метаггазнроваинн метастазов ингкбирования

метастаз нр о ва н и я

• контроль Шрубрмицин

врубомиави+мексидол 2% от ЬП50 Ирубомицин+мексидол 10% от 1,050 И рубомицин+эмокснпин 2% от 1Л)50 □ рубочиции+эмоксипин 10% от Ш50

Рис. 2. Влияние комбинированного применения рубомицина с мексидолом и эмоксипином на процессы спонтанного метастазированмя (н % к данным контрольной группы животных-, # - достоверность различим с данными контрольной группы, р<0,05; *- достоверность различия с данными группы, получавшей только рубомицин, р<0,05)

При комбинированном применении рубомицина и ме кс идол а в дозе 2% от ЬО;о частота метастазирования достоверно не отличалась от группы, получавшей только антибиотик, но среднее число метастатических узелков на поверхности легочной ткани снизилось 75% (р<0,005). При увеличении дозы мек-сидола до 10% от частоты метастазирования снизилась до 40% . Среднее число метастазов уменьшилось на 91% (р<0,001) в сравнении с монотерапией рубомицилом (рис.2).

Введение эмоксипина в дозе 2% от ЬО50 на фоне применения противоопухолевого средства приводило к выраженному угнетению метастатического процесса у экспериментальных животных по сравнению с монотерапией рубо-мицином среднее число метастазов снизилось на 82% (р<0,01), частота мета-стазирования составила 20% (р<0,05) Повышение дозы эмоксипина до 10% от ЬЭ5о снижало частоту метастазирования до 20% (р<0,05), среднее число метастазов -на 98%(р<0,001)

Таким образом, в результате проведенных экспериментальных исследований на модели меланомы В-16 при подкожной ее перевивке установлена способность мексидола и эмоксипина в комбинации с противоопухолевым препаратом - рубомицином, активно ингибировать процесс спонтанного метастазирования в присутствии первичного опухолевого узла

ВЫВОДЫ

1 Рубомицин (4 мг/кг) уменьшает массу опухоли, индекс массы опухоли, ингиби-рует процесс неоангиогенеза, снижает количество патологических митозов в опухолевой ткани и подавляет процесс спонтанного метастазирования Рубомицин увеличивает содержание малонового диальдепща в плазме, печени, сердце, кишечнике, снижает антиокислительную акгавность в плазме, сердце, кишечнике, угнетает активность каталазы в сердце и кишечнике на фоне роста хсман-гиоцеллюлярного рака РС-1 у крыс.

2 Применение отрицательных аэроионов кислорода на фоне моделирования противоопухолевой химиотерапии рубомицином холангиоцеллюлярного рака РС-1 способствует снижению выраженности эндотоксикоза, уменьшает содержание малонового диальдегида, повышает антиокислительную активность в эритроцитах, плазме крови, тканях печени и сердца, уменьшает массу опухоли, повышает индекс торможения роста опухоли, способствует снижению количества патологических митозов в ткани опухоли

3 Мексидол (5% и 10% от 1^50) и эмоксипин (5% и 10% от Ь05о) снижают острую токсичность рубомицина.

4 Использование мексидола (5% и 10% от ЬО50) на фоне введения рубомицина в условиях роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 способствует снижению уровня эндогенной интоксикации, подавляет активацию процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях, снижает массу опухоли, индекс массы опухоли, повышает индекс торможения роста опухоли и уменьшает количество патологических митозов в опухолевой ткани по сравнению с группой, получавшей монсггерапию рубомицином

5 Эмоксипин (5% и 10% от ЬЭ5о) при комбинированном применении с рубомицином корригирует изменения метаболических показателей, повышает противоопухолевую активность антрациклинового антибиотика, уменьшает количество патологических митозов в ткани опухоли при росте холангиоцеллюлярного рака РС-1 в эксперименте

6 Мексидол (2% и 10% от ЬО50) и эмоксипин (2% и 10% от ЬО50) на модели меланомы В-16 в присутствии первичного опухолевого узла усиливают антиметастатическую активность рубомицина (4 мг/кг) при их комбинированном приме-

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Целесообразно продолжение дальнейшего доклинического исследования влияния мексидола, эмоксипина и отрицательных аэроионов кислорода на показатели эндотоксикоза и опухолевую прогрессию с использованием других моделей опухолевого роста и расширением арсенала применяемых противоопухолевых препаратов с целью разработки методических рекомендаций для практического внедрения в план комплексной терапии онкологических больных

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Просвирина, О H Исследование влияния мексидола на некоторые биохимические показатели в условиях роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 / О H Просвирина, А В Зорькина // Современные методы диагностики и лечения в медицине проблемы, перспективы сб науч тр - Саранск, 2004 -Вып 3. - С 90-92

2 Просвирина, О H Влияние антрациклинового антибиотика рубомицина на некоторые метаболические и весовые показатели при экспериментальной неоплазии /ОН Просвирина, А В Зорькина // Современные методы диагностики и лечения в медицине проблемы, перспективы сб науч тр - Саранск, 2004 -Вып 3 - С 97-99

3 Просвирина, ОН Влияние комбинированного применения рубомицина и мексидола на некоторые биохимические и весовые показатели в условиях экспериментальной неоплазии /ОН Просвирина, А В Зорькина // Актуальные проблемы регионального здравоохранения материалы Всерос науч -практ конф, 7-8 октября 2004 г - Саранск, 2004 - С 240- 242

4 Просвирина, О H Исследование влияния эмоксипина на некоторые биохимические показатели в условиях роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 / О H Просвирина, А В Зорькина // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте Экспериментальная медицина- материалы X науч конф молодых ученых, аспирантов и студентов мед фак Мордов гос ун-та, 18-22 апреля 2005 г - Саранск, 2005 -Вып 3 - С 24-26

5 Просвирина, О Н. Использование антиоксиданта эмоксипина для коррекции эндотоксикоза на фоне введения рубомицина при экспериментальной неоплазии /ОН Просвирина, А В Зорькина // Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте Экспериментальная медицина материалы X науч конф молодых ученых, аспирантов и студентов мед фак Мордов гос ун-та, 18-22 апреля 2005 г -Саранск, 2005 -Вып 3 -С 24-26

6 Просвирина, О H Влияние препаратов с антиоксидантным типом действия на некоторые показатели эндотоксикоза и весовые характеристики опухоли в условиях экспериментальной неоплазии /ОН Просвирина, А В Зорькина, П И Скопин, Ю А Скопина // Новые медицинские технологии в охране здо-

ровья здоровых, в диагностике, лечении и реабилитации больных материалы Междунар науч.-практ конф, 24-25 марта 2005 г. - Пенза, 2005. - С. 8385

7 Просвирина, О Н Влияние комбинированного применения рубомицина и отрицательных аэроионов кислорода на некоторые биохимические показатели при росте холангиоцеллюлярного рака РС-1 /ОН Просвирина // Естественно-научные исследования теория, методы, практика межвузовский сб науч тр - Саранск, 2006 -Вып 4 -С 188-190

8 Просвирина, О Н Влияние рубомицина, мексидола и эмоксипина на некоторые метаболические показатели и процесс спонтанного метастазирова-ния в условиях экспериментальной неоплазии / ОН. Просвирина, А В Зорькина // Эксперимент и клинич фармакология - 2007 - Т 70, №1 - С 57-59. (поступила 05 09 2006, принята к печати 02 10 2006)

9 Просвирина, О Н Влияние отрицательных аэроионов кислорода на некоторые метаболические и весовые показатели при моделировании химиотерапии рубомицином в условиях экспериментальной неоплазии /ОН Просвирина, А В Зорькина // Изв высш учеб заведений Поволж регион Мед науки [Пенза] -2007 -№ 1 -С 63-69

10 Просвирина, О Н Способ коррекции синдрома эндотоксикоза при экспериментальной неоплазии /ОН Просвирина, А В Зорькина, П.И Скопин, Ю А Скопина // Удостоверение на рационализаторское предложение № 1007, приоритет от 24 01 2005

11 Просвирина, О.Н. Средства для ингибирования процесса спонтанного метастазирования / ОН Просвирина, А В Зорькина, ПИ Скопин, ЮА Скопина // Удостоверение на рационализаторское предложение № 1008, приоритет от 24 01 2005

Бумага офсетная Формат 60x84 1/16 ГарннтураТаймс Печать способом ризографии Уел печ л 1,39 Уч - изд л 1,87 Тираж 100 экз Заказ № 471

Отпечатано с оригинала-макета заказчика в ООО «Референт» 430000, г Саранск, пр Ленина, 21 тел (8342) 48-25-33

Одной из наиболее актуальных проблем в современной медицине является проблема заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований. По прогнозам Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ), онкологическая заболеваемость во всем мире возрастет за период с 1999 по 2050 г. с 10 до 24 млн. случаев, а смертность - с 6 до 16 млн. регистрируемых случаев (World Cancer Report, 2003). В России отмечается тенденция к неуклонному росту заболеваемости злокачественными новообразованиями и смертности от них, так за период с 1995 по 2004 г. число больных с впервые установленным диагнозом злокачественного новообразования увеличилось на 13,5% (с 412 500 до 468 000 чел.), т.е. ежегодно регистрировалось в среднем 1282 заболевания. В структуре заболеваемости мужского населения лидировали рак легкого, желудка, кожи и предстательной железы; женского - рак молочной железы, желудка, кожи и ободочной кишки (Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2006). В структуре смертности населения нашей страны злокачественные новообразования занимают второе место после болезней сердечно - сосудистой системы (Лежнин В. Л., Ползик Е. В., 2003). В 2004 году в России от злокачественных новообразований умерли 287 593 человек (Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2006).

В Республике Мордовия по данным медицинского информационно-аналитического центра МЗ РМ заболеваемость населения злокачественными новообразованиями по обращаемости в лечебно-профилактические учреждения в 2005 году составила 38,8 на 100 000 населения, по г. Саранск - 51,9 на 100 000 населения. Смертность от злокачественных новообразований по республике составила 189,8 на 100 000 населения, в Саранске - 165,7 на 100 000 населения.

Показатели смертности остаются высокими, несмотря на достижения в методах диагностики и лечения злокачественных новообразований. Летальность онкологических больных чаще обусловлена высоким уровнем эндогенной интоксикации, которая имеет смешанную природу и обусловлена иммунодепрессией, интенсивно протекающими биохимическими процессами в опухолевых клетках и с продуктами их жизнедеятельности, поражением или нарушением функции органов детоксикации, повреждающим действием лучевой терапии, применением цитостатических препаратов (Морозкина Т.С., 1989; Чиссов В.И., 2000; Вовчук И.Л. с соавт., 2001; Бородин Ю.И. с соавт., 2004). В лечении злокачественных опухолей используется комбинированная терапия, направленная как на подавление роста опухоли, так и на коррекцию синдрома эндотокси-коза и защиту организма больного. Перспективным направлением в плане повышения эффективности лечения онкологических больных является создание и поиск новых эффективных лекарственных препаратов, предупреждающих развитие синдрома эндогенной интоксикации. Учитывая свободнорадикальную теорию канцерогенеза, есть основания использовать средства, предупреждающие неадекватную активацию процессов перекисного окисления липидов, нормализовать активность ферментов антиоксидантной защиты, повышая устойчивость организма к действию токсических продуктов жизнедеятельности опухолевой клетки (Калинин Н.Н., 1999; Богдашкина О.Н., 2002; Сипров А.В., 2004; Скопин П.И., 2005; Скопина Ю.А., 2005). Однако их комбинированное применение с противоопухолевыми средствами нуждаются в подробном исследовании.

Целью настоящей работы явилось изучение воздействия комбинированного применения рубомицина с мексидолом, эмоксипином и отрицательными аэроионами кислорода на некоторые метаболические показатели и характеристики опухоли в условиях роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 и ме-ланомы В-16.

Задачи исследования:

1. Изучение влияния отрицательных аэроионов кислорода на показатели эндогенной интоксикации в крови и тканях организма и некоторые весовые характеристики в условиях роста штамма холангиоцеллюлярного рака РС-1 на фоне введения рубомицина (4 мг/кг).

2. Исследование влияния мексидола (5% и 10% от LD5o) и эмоксипина (5% и 10% от LD50) на острую токсичность рубомицина.

3. Исследование влияния комбинированного применения рубомицина (4 мг/кг) с мексидолом (5% и 10% от LD50) и рубомицина (4 мг/кг) с эмок-сипином (5% и 10% от LD50) на некоторые показатели эндотоксикоза, выраженность ангиогенеза и количество патологических митозов в опухоли на фоне роста холангиоцеллюлярного рака PC-1.

4. Оценка влияния комбинированного применения рубомицина

4 мг/кг), мексидола (2% и 10% от LD50) и эмоксипина (2% и 10% от LD50) на степень метастазирования перевиваемой опухоли мышей меланомы В-16 в присутствии первичного опухолевого узла.

Научная новизна. Впервые исследовано влияние отрицательных аэроионов кислорода при проведении химиотерапии рубомицином на выраженность эндогенной интоксикации и противоопухолевый эффект антрациклинового антибиотика в условиях роста холангиоцеллюлярного рака PC-1: наблюдалось ограничение активности процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях организма; стимуляция активности процессов перекисного окисления липидов в ткани опухоли, снижение количества патологических митозов, массы опухоли, индекса массы опухоли, увеличение индекса торможения роста опухоли.

Отмечено снижение острой токсичности рубомицина на фоне введения мексидола и эмоксипина.

Показано повышение противоопухолевой активности рубомицина при дополнительном применении мексидола и эмоксипина в виде снижения индекса массы опухоли, увеличения индекса торможения роста опухоли, уменьшение количества патологических митозов в опухоли на фоне ограничения развития эндотоксикоза при росте холангиоцеллюлярного рака РС-1 в эксперименте.

Впервые показано угнетение процессов спонтанного метастазирования в условиях роста меланомы В-16 при комбинированном применении рубомицина с эмоксипином и мексидолом.

Практическая ценность работы. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием целесообразности продолжения доклинических исследований применения мексидола, эмоксипина и отрицательных аэроионов кислорода в комплексной противоопухолевой химиотерапии для коррекции метаболических нарушений.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Комбинированное применение рубомицина и мексидола подавляет активацию процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях, корригирует метаболические показатели, ограничивает рост опухоли, количество патологических митозов в опухолевой ткани при росте холангиоцеллюлярного рака РС-1, уменьшает количество макрометастазов в легких на фоне роста меланомы В-16 мышей в присутствии первичного опухолевого узла.

2. Применение эмоксипина на фоне противоопухолевой терапии холангиоцеллюлярного рака РС-1 рубомицином вызывает снижение активности процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях, корригирует биохимические показатели и показатели эндотоксикоза, усиливает противоопухолевый эффект антибиотика, снижает количество патологических митозов в опухолевой ткани; уменьшает количество макрометастазов в легких на фоне роста меланомы В-16 мышей в присутствии первичного опухолевого узла.

3. Дополнительное применение отрицательных аэроионов кислорода на фоне введения рубомицина подавляет активацию процессов перекисного окисления в крови и тканях, корригирует метаболические показатели и ограничивает рост холангиоцеллюлярного рака РС-1 в эксперименте.

Апробация работы. Результаты работы и основные положения, полученные в результате собственных исследований, доложены на III Международной научно-практической конференции «Новые медицинские технологии в охране здоровья здоровых, в диагностике, лечении и реабилитации больных» (Пенза, 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы регионального здравоохранения» (Саранск, 2004); научных конференциях Мордовского государственного университета «XXXII-XXXV Огарев-ские чтения» (Саранск, 2003-2006), IX-X научных конференциях молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета Мордовского государственного университета (Саранск, 2004-2006).

По результатам диссертации опубликовано 9 работ, зарегистрировано 2 рационализаторских предложения.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы исследования, трех глав с результатами собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка используемой литературы, включающего 285 источников, из них 191 отечественных и 94 иностранных, приложения, включающего 24 таблицы. Текст изложен на 163 страницах компьютерного набора, документирован 2 таблицами, иллюстрирован 61 рисунком.

ВЫВОДЫ

1. Рубомицин (4 мг/кг) уменьшает массу опухоли, индекс массы опухоли, ингиби-рует процесс неоангиогенеза, снижает количество патологических митозов в опухолевой ткани и подавляет процесс спонтанного метастазирования. Рубомицин увеличивает содержание малонового диальдегида в плазме, печени, сердце, кишечнике, снижает антиокислительную активность в плазме, сердце, кишечнике, угнетает активность каталазы в сердце и кишечнике.

2. Применение отрицательных аэроионов кислорода на фоне моделирования противоопухолевой химиотерапии рубомицином холангиоцеллюлярного рака РС-1 способствует снижению выраженности эндотоксикоза, уменьшает содержание малонового диальдегида, повышает антиокислительную активность в эритроцитах, плазме крови, тканях печени и сердца, уменьшает массу опухоли, повышает индекс торможения роста опухоли, способствует снижению количества патологических митозов в ткани опухоли.

3. Мексидол (5% и 10% от LD50) и эмоксипин (5% и 10% от LD50) снижают острую токсичность рубомицина.

4. Использование мексидола (5% и 10% от LD50) на фоне введения рубомицина в условиях роста холангиоцеллюлярного рака РС-1 способствует снижению уровня эндогенной интоксикации по сравнению с группой, получавшей монотерапию рубомицином, подавляет активацию процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях, снижает массу опухоли, индекс массы опухоли, повышает индекс торможения роста опухоли и уменьшает количество патологических митозов в опухолевой ткани.

5. Эмоксипин (5%) и 10% от LD50) корригирует изменения метаболических показателей, вызванных применением рубомицина, повышает противоопухолевую активность антрациклинового антибиотика, уменьшает количество патологических митозов в ткани холангиоцеллюлярного рака РС-1 в эксперименте.

6. Мексидол (2%) и 10% от LD50) и эмоксипин (2% и 10% от LD50) на модели меланомы В-16 в присутствии первичного опухолевого узла усиливают антиметастатическую активность рубомицина (4 мг/кг) при их комбинированном применении.