Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Влияние ацизола на функции почек и гематологические показатели при экспериментальной нитритной интоксикации

004С.082И2

на правах рукописи

ДЗОЦИЕВА ЛОРА ХАСАНБЕКОВНА

ВЛИЯНИЕ АЦИЗОЛА НА ФУНКЦИИ ПОЧЕК И ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ НИТРИТНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 КЮН 2010

Владикавказ - 2010

004608282

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Осетинская государственная медицинская академии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор медицинских наук

ДЖИОЕВ Инал Германович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

ИВАНОВ Анатолий Беталович

доктор биологических наук, профессор ЧБРНОСИТОВ Александр Владимирович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Московский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 29 июня 2010 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 208.095.01 в ГОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40)

Автореферат разослан 28 мая 2010 года

Ученый секретарь диссертационного сог°"-°

доктор медицинских наук

И.Г. Джиоев

Актуальность темы Современное развитие промышленности, сопровождающее загрязнением окружающей среды различными химическими соединениями, оказывает на здоровье человека многостороннее негативное влияние с появлением новых заболеваний, омоложением существующих, возникновением и накоплением мутаций. Ситуация усложняется тем, что часть веществ, находя применение в повседневной жизни, перестают восприниматься как вредные и их порой начинают использовать в неконтролируемых количествах, другие становятся химически агрессивными в организме человека, некоторые способны аккумулироваться и образовывать прочные соединения, вызывающие длительные нарушения здоровья.

К категории распространённых загрязнителей окружающей среды относятся кислородсодержащие соединения азота нитраты (N03) и нитриты (N02), чьи химические свойства легко образовывают соли, широко применяемые в сельском хозяйстве как минеральные удобрения, с последующим их накоплением в растениях и животных, а затем и в организме человека (Ильницкий А.П., 2000; Гоженко А.И., 2004). Кроме того, нитраты и нитриты используются при приготовлении мясных и рыбных консервов, а также лекарств (Опополь Н.И. и др., 1989; КотлуковаН. П., 2002).

Хотя основную опасность для человека и животных представляют нитриты при попадании в организм, однако нитраты в толстом кишечнике под действием микрофлоры восстанавливаются до нитритов, которые затем, всасываясь и поступая в кровь, где, как сильные окислители, превращают двухвалентное железо гемоглобина в трёхвалентное, с образованием метгемоглобина, не способного поддерживать дыхательную функцию эритроцита, что приводит к развитию гипоксии (Лукьянова Л.Д., 2001; Ткаченко Б.И., 2005; Новицкий В.В., 2006; Blanton A. et al., 2006). Кроме того, нитриты и амины, в присутствии азотистой кислоты способны образовывать нитрозоамины, обладающие высокой канцерогенной активностью (Жукова Г.Ф., Киселева P.M., 1990; Кулинский В.И, 1999; Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П., 2001).

Поиск новых препаратов и лекарственных средств, способных оказать положительное действие при различных отравлениях, и их использование является важным и перспективным направлением современной медицины, особенно если эти средства имеют природное происхождение или близкие к ним. Одним из таких соединения является препарат ацизол, основу которого составляет цинк и 1-винилимидазол (синтезирован Иркутским институтом химии СО РАН), являющийся высокоэффективным антидотом и антигипоксантом, используемый при острых отравлениях большими дозами оксида углерода. Ацизол способен менять сродство гемоглобина к газам крови, что позволяет лучше переносить высокие концентрации в крови карбоксигемоглобина (Бабаниязов Х.Х. и др., 2005, 2006). Кроме того, ацизол оказывает положительное влияние на работу цинк-зависимых метаболических процессов, особенно в условиях нехватки цинка, а также обладает мембрнопротекторным свойством (Домина Е.С. и др., 2005).

Цель исследования Экспериментальное изучение влияния ацизола на

функции почек, гематологические показатели, перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы при интоксикации крыс нитритом натрия разной продолжительности и дозировок введения.

Задачи исследования

1. Выяснить влияние нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг, вводимого ежедневно внутрижелудочно крысам линии Вистар в течение трёх недель в условиях водного и спонтанного диуреза на функции почек (водо- и электролитовы-делительную, степень протеинурии), показатели крови (количество эритроцитов, гематокритное число, содержание в крови гемоглобина и метгемог-лобина, уровень свободного гемоглобина в плазме крови), а также на перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы (содержания малонового диальдегида и гидроперекисей, активность каталазы).

2. Выяснить влияние нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг, вводимого внутрижелудочно крысам линии Вистар в течение трёх дней в условиях водного и спон-

тайного диуреза на все перечисленные функции почек, гематологические показатели, перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной защиты.

3. Выяснить на крысах линии Вистар влияние однократного и курсового в течение трёх недель внутрижелудочного введения ацизола в условиях водного и спонтанного диуреза на функции почек (водо- и электролитовыделитель-ную, степень протеинурии), показатели крови (количество эритроцитов, ге-матокритное число, содержание в крови гемоглобина и метгемоглобина, уровень свободного гемоглобина в плазме крови), а также на перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы (содержания малонового диальдегида и гидроперекисей, активность каталазы).

4. Выяснить на крысах линии Вистар влияние ацизола на фоне острой и хронической нитритной интоксикации на все перечисленные функции почек, гематологические показатели, перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной защиты.

Научная новизна исследования

Впервые показано ослабляющее влияние ацизола на сниженный, вследствие внутрижелудочного введения нитрита натрия, спонтанный и водный диурез, скорость клубочковой фильтрации, на усиленную протеинурию, гипопро-теинемию, а также на электролитовыделительную функцию почек.

Впервые изучены механизмы действия ацизола на гематологические показатели, а также его способности ослаблять негативное влияние нитритной интоксикации на количество эритроцитов и уровень свободного гемоглобина, содержание гемоглобина и метгемоглобина.

Впервые вскрыты механизмы действия ацизола на свободнорадикальное окисление и антиоксидантную защиту в условиях экспериментальной нитритной интоксикации разной продолжительности.

Научно-практическая значимость работы Проведённые исследования носят экспериментальный характер, а полученные на крысах результаты, выяв-

ляющие влияние острой и хронической нитритной интоксикации на функции почек, показатели крови и состояние антиоксидантной защиты, относятся к области фундаментальных знаний, расширяющие наши представления о моделировании токсических поражений, и вносят определённый вклад в проявления и патогенез отравлений нитритными соединениями. А выявленные эффекты лекарственного препарата ацизол дают возможность его лечебного и профилактического применения при нитритной интоксикации для нормализации функционального состояния почек, крови и антиоксидантной защиты организма.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Ежедневное внутрижелудочное введение крысам линии Вистар нитрита натрия в дозах 5,0 мг/кг (в течение трёх недель) и 20,0 мг/кг (в течение трёх дней) снижает водный и спонтанный диурез в результате торможения скорости клубочковой фильтрации, вызывает протеинурию и снижает содержание общего белка в плазме крови. В условиях спонтанного диуреза введение нитрита натрия в течение трёх недель приводит к снижению фильтрационного заряда натрия и его экскреции, а при острой интоксикации вызывает гиперкалиемию. Острое и хроническое введение крысам нитрита натрия снижает количество эритроцитов, содержание гемоглобина и активность каталазы, а уровни метгемоглобина и свободного гемоглобина, содержания гидроперекисей и малонового диальдегида- повышает.

2. Однократное и п течение трёх недель внутрижелудочное введение крысам линии Вистар ацизола в дозе 30,0 мг/кг в первые два часа повышают водный диурез, в результате ускорения клубочковой фильтрации, обусловленной увеличением почечного кровотока, вызывают натрий- и ка-лийурез, вследствие увеличения фильтрационных зарядов. Однократное введение ацизола увеличивает в периферической крови количество эритроцитов, гематокритное число и содержание гемоглобина, усиливает активность каталазы в эритроцитах, снижает содержание гидроперекисей в плазме крови и уровень малонового диальдегида в эритроцитах. Выяв-

ленные изменения сохраняются ещё в течение одной недели продолжения введения ацизола, а затем нормализируются.

3. Ацизол, вводимый крысам линии Вистар через зонд в желудок ежедневно одновременно с нитритной интоксикацией, увеличивает, вызванные введением нитрита натрия, сниженный водный и спонтанный диурез, вследствие ускорения клубочковой фильтрации; уменьшает протеинурию и способствует более позднему проявлению и меньшей выраженности ги-попротеинемии; увеличивает сниженную экскрецию натрия, а способствуя калийурезу, нормализуя гиперкалиемию; предотвращает снижение в крови содержания гемоглобина, повышает количество эритроцитов и снижает увеличенные уровни метгемоглобина и свободного гемоглобина; уменьшая увеличенные содержания гидроперекисей и малонового диаль-дегида и усиливая сниженную активность каталазы, ацизол предотвращает повышение перокисидации и ослабление антиоксидантной защиты.

Личный вклад соискателя Диссертационное исследование выполнено

соискателем самостоятельно, с подготовкой и проведением экспериментов на животных, выполнением биохимических и физиологических методов исследований, статистической обработки и обобщением полученных результатов, их анализа, формулированием выводов и разработкой патофизиологической схемы.

Апробация диссертационной работы Материалы диссертационного

исследования доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Развитие производственной и экологической безопасности в XXI веке. Проблемы и решения» (Владикавказ, 2009); на конференции «Здоровье и образование в XXI веке. Инновационные технологии в биологии и медицине» (Москва, 2009); на совместном заседании сотрудников кафедр и Центральной научно-исследовательской лаборатории Северо-Осетинской государственной медицинской академии (Владикавказ, 2009).

Публикации По теме диссертации опубликовано б работ, три из которых -в журналах, рекомендованных Минобразования РФ.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 217 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и приложения в виде сводных таблиц. Работа содержит 24 таблицы, иллюстрирована 32 рисункам и схемой, отражающей патофизиологические механизмы выявленных изменений. В библиографическом указателе приведено 183 источника, 90 их которых отечественные и 93 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследований Исследования проводились на 140-и половозрелых крысах-самцах линии Wistar, весом от 160 до 240 г, что соответствует массе взрослых особей. Во время экспериментов все животные находились в виварий при лаборатории и всегда имели свободный доступ к воде и пище, состоящей из злаковых, кукурузы, подсолнечника, хлеба и овощей. Освежение вивария был приближён к затемнённому, соответствуя образу жизни крыс.

Модели экспериментальной нитритной интоксикации (хроническую и острую) создавали на крысах путём внутрижелудочного введения раствора нитрита натрия (NaN02), который одним крысам давали ежедневно на протяжении трёх недель в дозе 5 мг/кг веса (в пересчёте на N02, составляя 0,1 ЛД5о), а на другим - в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней (Реутов В.П., 1995; Лазарев Н.В., 1997; Marietta М.А., 1993). В качестве контроля использовались крысы, которые получали раствор натрия в виде NaCl в количестве эквивалентном его содержанию в нитрите натрия, то есть 1,7 мг/кг и 6,8 мг/кг при введении нитрита в дозе 5,0 мг/кг и 20,0 мг/кг, соответственно.

На крысах с острой интоксикацией ставили эксперименты после трёх дней введения нитрита натрия, а с хронической - трижды в конце каждой недели. При этом обязательным условием постановки опытов было постоянное наличие воды в поилках, которые убирались из клеток за 30-40 минут до начала экспериментов. Это позволяло исключить возможность обезвоживания животных и вероятность их гипергидратации. При проведении опытов всех крыс де-

S

лили на две группы и помещали в специальные клетки - одних на шесть часов для сбора мочи (спонтанный диурез), а других на три часа после водной нагрузки водопроводной водой в объёме 5% массы, вводимой через зонд в желудок (водный диурез).

В собранной моче и плазме крови забитых крыс определяли содержание эндогенного креатинина (по методу Поппера), белка (по Лоури в моче и биуре-товым методом в плазме крови), натрий и калий определяли с помощью пламенной фотометрии. Кроме того, в периферической смешанной артерио-венозной крови определяли количество эритроцитов с использованием счётной камеры Горяева и гематологического анализатора «Nihon Kohden» (Япония), содержания гемоглобина (по Драбкину) и метгемоглобина (по Эвелин и Мэ-лоу), свободного гемоглобина в плазме крови (циангемоглобиновым методом), а гематокритное число - центрифугированием. Активность каталазы в эритроцитах определяли по методу Beutler, содержания малонового диальдегида (по Камышникову) и гидроперекисей (по Гаврилову). Скорость почечного кровотока определяли инвазивным способом с помощью флуометра Transonic НТ 313 (США).

Для расчётов диуреза (мл/час/100г), скорости клубочковой фильтрации (мл/час/100г), канальцевой реабсорбции воды (%), экскреции и фильтрационных зарядов натрия и калия (мкмоль/час/100г), а также относительной канальцевой реабсорбции натрия (%) использовались классические формулы Ю.В.Наточина (1974). Полученные результаты обрабатывались статистически параметрическим методом сравнения средних величин с помощью t-критерия Стьдента. Для расчётов и построения графиков использовалась программа «Prisma 2.01»

Результаты исследований и их обсуждение За время введения крысам

нитрита натрия они стали вялыми, потеряли в весе, у них начала выпадать шерсть, а видимые слизистые приобрели синеватый оттенок. Особенно это было заметно на крысах, получавших нитрит натрия в дозе 20,0 мг/кг и в конце третей недели введения нитрита в дозе 5,0 мг/кг.

Исследования мы начали с изучения влияния внутрижелудочного введения разной продолжительности и дозировок нитрита натрия (вариант I) на функции почек в условиях водного и спонтанного диуреза, на гематологические показатели, перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной защиты. Затем выяснили влияние однократного и в течение трёх недель внутрижелудочного введения ацизола в дозе 30,0 мг/кг (вариант II) на состояние всех исследуемых показателей, и завершили исследования, рассматривая влияние ацизола в условиях нитритной интоксикации (вариант III).

При совместном трёхнедельном введении ацизола и нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг через одну неделю диурез после водной нагрузки за первый час был 1,53±0,12 мл/час/100г, что был на 7,7% больше результатов крыс, получавших нитрит и на 27,4% меньше, чем у тех, которым давали ацизола. Такая же закономерность сохранилась и на втором часе, и за три часа диурез был на 10,9% больше, чем у нитритных крыс (3,56±0,29 мл/3часа/100г) и на 16,7% меньше, чем у тех, которым вводили только ацизол (4,61±0,35 мл/3часа/100г).

К концу второй недели, когда за первые два часа диурез у крыс, получавших ацизол оставался больше нормы, а у тех, которым вводили нитрит продолжал снижаться, у крыс с сочетанной модели количество мочи за первый час стало достоверно (р<0,05) больше нитритных, и в среднем трёхчасовой диурез был увеличен на 22,0% (2,81±0,22 мл/3часа/100г и 3,43±0,28 мл/3час/100г).

Продолжение опытов ещё в течение одной недели способствовало тому, что диурез у крыс, получавших нитрит снижался (2,13±0,23 мл/3часа/100г), а у тех, которые получали ацизол на фоне нитритной интоксикации стал достоверно больше за каждый час водного диуреза и за три часа превосходил данные нитритных крыс на 45,0%, то есть, ацизол ослаблял угнетающего влияния нитрита натрия на водный диурез.

Изучение влияния ацизола на фоне нитритной интоксикации на спонтанный шестичасовой диурез показало (табл.1), что со второй недели экспериментов и далее ацизол достоверно предотвратил снижение диуреза, вызванное введением нитрита, на 29,5% (р<0,02) и 27,8% (р<0,01), соответственно.

Содержание креатинина в плазме крови крыс при введением им нитрита натрия с нормы, равной 78,46±3,78 мкмоль/л, начало повышаться, став достоверно (р<0,02) больше уже в конце второй недели, а к третей недели достиг 112,6±7,35 мкмоль/л (р<0,001). Приём ацизола не оказал влияния на содержание креатинина, а при совместном его введении с нитритом натрия креатинин, хоть и повышалось с каждой неделей, однако только на третей неделе, достигнув 92,36±5,17 мкмоль/л стал достоверное (р<0,05) больше нормы, но это было и на 18,0% меньше результата трёхнедельного введения только нитрита натрия.

Исследования, проведённые после введения в течение трёх дней нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг вместе с ацизолом, показали, что водный диурез в этом случае стал также достоверно больше за каждый час, чем у крыс, получавших нитрит, и в среднем за три часа увеличился на 41,6% (2,45±0,25 мл/3часа/100г и 3,47±0,31 мл/3часа/100г). В условиях же спонтанного диуреза количество мочи также достоверно (р<0,01) увеличилось на 52,1% (табл.1).

Изменения диуреза были связаны с основными процессами мочеобразо-вания. В конце первой недели совместного введения ацизола и нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг кпубочковая фильтрация за каждый час водного диуреза незначительно ускорилась, а канальцевая реабсорбция воды - снижалась. Ещё через неделю кпубочковая фильтрация за первый час, по сравнению с той, какая она была у нитритных крыс (14,18±0,89 мл/час/100г) достоверно (р<0,05) увеличилась до 18,67±1,38 мл/час/100г. Повышенной на 12,2% и 11,2% она оставалась и за второй, и третий часы. Одновременно канальцевая реабсорбция воды незначительно снижалась, то есть оба процесса мочеобразования стимулировали диурез. В конце третей недели, когда скорость клубочковой фильтрации крыс, получавших нитрит натрия продолжала снижаться и за первый час была 12,64±1,45 мл/час/100г, то при совместном введении ацизола и нитрита она была достоверно (р<0,05) больше на 29,1%. Примерно на столько же (на 29,6%, р<0,02 и 27,7%, р<0,05), была ускорена клубочковая фильтрация за второй и третий часы. Параллельно происходило достоверное (р<0,05) снижение объёма канальцевой реабсорбции воды за каждый час водного диуреза и средний трёх-

часовой объём воды обратно всосавшийся в канальцах почек у крыс, получавших нитрит был 94,08±0,49%, а при совместном введение ацизола и нитрита -92,65±0,67 % (р<0,05). Причиной уменьшения канальцевой реабсорбции воды, возможно, могло быть изменение осмолярности слоев ткани почек или изменения чувствительности канальцев почек и собирательных трубочек к действию антидиуретического гормона. А причиной повышения клубочковой фильтрации было ускорение кровотока, который при введении ацизола достоверно (р<0,001) увеличилось с результата средней скорости почечного кровотока ин-тактных крыс в 11,9±0,84 мл/мин до 16,8±0,14 мл/мин.

В условиях спонтанного диуреза (табл.1) менялась только скорость клубочковой фильтрации, которая в конце второй и третей недель превосходила на 34,7% и 44,0% результаты крыс, получавших только нитрит.

При введении ацизола совместно с нитритом натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней клубочковая фильтрация за первые два часа водного диуреза была достоверно (р<0,02 и р<0,05) увеличена, поэтому и суммарная трёхчасовая фильтрация в 53,86±3,51 мл/3часа/100г была на 33,2% больше (р<0,02). Клубочковая фильтрация была увеличена на 39,5% (р<0,01) и в условиях спонтанного диуреза, а канальцевая реабсорбция воды и содержание креатинина в плазме крови как при водном, так и при спонтанном диурезе, не менялись. Таким образом, ацизол, вводимый крысам в течение трёх недель вместе с нитритом натрия в дозе 5,0 мг/кг снижает увеличенное нитритом содержание креатинина в плазме крови и повышает сниженный водный и спонтанный диурез, вследствие ускорения клубочковой фильтрации, а в конце третей недели ещё и снижения канальцевой реабсорбции воды. Ацизол, вводимый в течение трёх дней вместе с нитритом натрия в дозе 20 мг/кг, ускоряя клубочковую фильтрацию, стимулирует сниженный нитритом водный и спонтанный диурез.

Исследование влияния ацизола на степень протеинурии в условиях водного диуреза на фоне введения нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг показало, что в конце первой недели не было отличий. В конце второй недели, когда протеину-рия у крыс, получавших нитрит натрия была достоверно увеличена за каждый

12

Таблица 1.

Спонтанный диурез, скорость клубочковой фильтрации и объём канальцевой реабсорбции воды у крыс, получавших нитрит натрия в дозе 5,0 мг/кг, ацизол в дозе 30,0 мг/кг и ацизол на фоне нитрита натрия в течение трёх недель

н е д Стат. показат. Диурез (мл/час/100г) Клубочковая фильтрация (мл/час/100г) Канальцевая реабсорбция (%)

е л Мнтактные крысы (контроль для крыс, получавших ашпол) |

и М±ш 0,078±0,006 15,38±1,33 99,51±0,07

1 Введение №С1 в дозе 1,7 М1 (контроль для ннтритпых крыс] /кг

М±т 0,084±0,006 16,63±1,12 99,49±0,08

Н Е д Е Л Введение нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг (контроль для крыс, получавших ацизол и нитрит натрия)

М±ш//р 0,079±0,005 15,31±1,04 99,48±0,09

Введение ацизола в дозе 30,0 мг/кг |

М±ш 0,092±0,01 18,08±1,65 99,49±0,09 1

Я Введение ацизола и нитрита натрия |

М±ш//р 0,084±0,00б 18,54±1,62 99,54±0,07 |

Введение 1ЧаС1 в дозе 1,7 мг/кг |

2 М±ш 0,08б±0,008 16,48±0,87 99,47±0,08 1

Н Введение нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг |

Е М±тп//р 0,061 ±0,007//<0,002 12,38±1,17//<0,002 99,5±0,09

д Введение ацизола в дозе 30,0 мг/кг |

Е М±т 0,088±0,007 17,85±1,35 99,5±0,08 |

Л Введение ацизола и нитрита натрия

Я М±ш//р 0,079±0,004 // <0,02 16,68±1,32 // <0,02 99,52±0,07 |

Введение №С1 в дозе 1,7 мг/кг |

3 М±ш 0,092±0,008 | 15,93±1,05 99,42±0,08 I

н | Введение нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг |

Е М±т//р 0,039±0,006 // <0,001 | 10,38±0,94//<0,001 99,62±0,09 |

д Введение ацизола в дозе 30,0 мг/кг |

Е М±ш 0,091±0,009 1 19,21±1,77 1 99,51±0,12 1

Л Введение ацизола и нитрита натрия |

я М±т // р 0,07±0,004 // <0,01 16,15±1,27 // <0,01 99,56±0,06

час, составляя за три часа 5,28±0,42 мг/мп, то содержание белка в моче крыс, которым на фоне нитритной интоксикации вводили и ацизол, стало меньше за первый час на 12,7%, на 17,5% за второй и на 12,4% за третий час и была соответственно равна 1,73±0,13 мг/мл, 1,6±0,13 мг/мл и 1,29±0,1 мг/мл.

Ещё через од^ неделю протеинурия у крыс с сочетанной моделью за первый час уже стала достоверно (р<0,05) меньше результатов нитритных крыс (3,75±0,26 мг/мл и 2,94±0,27 мг/мл). Уменьшилась она за второй и третий часы, и в среднем за три часа была 8,12±0,71, что было на 21,6% меньше результата нитритных крыс.

Параллельно с усилением''протеинурии у крыс, получавших нитрит натрия снижалось содержание общего белка в плазме крови с контрольного уровня в 68,23±1,87 г/л на 4,6% в конце первой недели, на 11,4% (р<0,05) в конце второй и опустившись до 48,93±2,85 г/л (р<0,001) в конце третей недели. В то время как у крыс, получавших ацизол на фоне нитритной интоксикации содержание общего белка в плазме крови в конце третей недели было достоверно (р<0,05) больше - 59,48±3,35 г/л.

В условиях спонтанного диуреза при трёхнедельных опытах (рис.1) в конце первой недели совместного введения ацизола и нитрита натрия протеинурия не менялась. С конца же второй недели она с трёхчасового результата в 5,28±0,42 мг/мл, стала на 14,8% меньше, но достоверное (р<0,05) отличие отмечалось только в конце третей недели, когда протеинурия у нитритных крыс была 8,48±0,64 мг/мл, а у крыс сочетанной модели она была снижена на 21,8%.

При введении крысам ацизола с нитритом натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней в условиях водного диуреза также отмечалось достоверное (р<0,05) уменьшение степени протеинурии на 21,6% и 23,2% за первый и второй часы, которая за три часа снизилась с 6,62±0,48 мг/мл на 21,1% (р<0,05). При трёхдневном введении ацизола и нитрита натрия протеинурия, по сравнению с результатом нитритных крыс, равной 6,35±0,48 мг/мл также достоверно (р<0,05) уменьшилась до 5,02±0,37 мг/мл.

9.0 7.5 6.0 4.5 3.0 1.5 0.0

Протеинурия при спонтанном диурезе т

I_I ингэткные крысы

(ШИП кошроль для нигритиых крыс

^ введение КаМ02 в дозе 5,0 мг/кг

введение ацизола в дозе 30,0 мг/кг

Е223 введение анизола и ншр ита натрия

1 нед. 2 нед. 3 нед.

Рисунок 1. Протеинурия при спонтанном диурезе у крыс, получавших нитрит натрия, ацизол и ацизол на фоне нитрита натрия в течение трёх недель

Если сравнивать полученные данные степени протеинурии с результатами интактных крыс, то можно отметить, что в условиях водного и спонтанного диуреза введение нитрита в дозе 5,0 мг/кг увеличивает протеинурию в 2,8 и 3,1 раза, а вместе с ацизолом - в 2,2 и 2,45 раза, то есть ацизол снижает нитритную протеинурию на 21,5% и 21,0%. Ацизол также уменьшал на 21,6% и 21,1% проявление протеинурии, когда доза вводимого вместе с ним нитрита натрия была 20,0 мг/кг. То есть, ацизол, доза которого не менялась, независимо от того вводили мы 5,0 мг/кг или 20,0 мг/кг нитрита натрия, оказывал одинаковое влияние на протеинурию. Таким образом, ацизол, вводимый крысам вместе с нитритом натрия в дозах 5,0 мг/кг (в течение трёх недель) и 20,0 мг/кг (в течение трёх дней) ослабляет протеинурию, вызванной введением нитрита, как при водном, так и спонтанном диурезе и, тем самым, способствует более позднему проявлению и меньшей выраженности гипопротеинемии.

Изучение ионовыделительной функции почек в условиях спонтанного диуреза показало, что введения ацизола и нитрита натрия в течение недели не повлияло на содержание натрия в плазме крови и его обработку на уровне почек (экскреция, фильтрационный заряд и канальцевая реабсорбция). Однако уже через одну неделю появилась тенденция к увеличению экскреции натрия (12,18±1,35 мкмоль/час/ЮОг) по сравнению с результатом после введения нитрита

15

(10,24±0,85 мкмоль/час/ЮОг). Такое повышение экскреции (на 18,9%) было обусловлено только соразмерным увеличением (на 19,8%) фильтрационного заряда натрия, так как канальцевая реабсорбция не менялась. В конце третей недели ежедневного введения ацизола на фоне нитрита натрия экскреция натрия, по сравнению с тем, что было у крыс, получавших нитрит натрия (9,18±1,12 мкмоль/час/ЮОг), была достоверно (р<0,05) увеличена на 42,5%, достигая уровня интактных крыс, то есть ацизол в этом случае не увеличил, а лишь только нормализовал сниженную, в результате введения нитрита натрия, экскрецию натрия. Это также было обусловлено повышение фильтрационного заряда натрия. При этом увеличение загрузки клубочков натрием было на 25,9% (1591±173 мкмоль/час/ЮОг и 2004±172 мкмоль/час/ЮОг), а экскреция увеличилась на 42,5% (9,18±1,12 мкмоль/час/ЮОг и 13,09±1,43 мкмоль/час/ЮОг). Расчёт канальцевой ре-абсорбции показал, что процесс обратного всасывания натрия приобрёл тенденцию к снижению, что значительнее усилило экскреции натрия.

При исследовании обмена натрия в условиях, когда ацизол вводился с нитритом натрия в дозе 20,0 мг/кг, ни содержание натрия в плазме крови, ни его фильтрационный заряд и реабсорбция особо не менялись, что соответственно не должно было отразиться на экскреции натрия.

В отношении влияния нитрита натрия в условиях спонтанного диуреза на содержание калия в плазме крови можно отметить, что оно имела направленность к повышению (в результате гемолиза эритроцитов), то при трёхнедельном введении ацизола на фоне нитритной интоксикации это уже не отмечалось. Экскреция калия на протяжении всего времени постановки опытов особо не менялась, кроме наметившейся тенденции к увеличению, соответствующей степени повышения фильтрационного заряда из-за вызываемого ацизолом ускорения клубочковой фильтрации.

Если при острой нитритной интоксикации наблюдалась гиперкапиемия (4,41±0,37 ммоль/д и 5,78±0,49 ммоль/л, р<0,01), которая была вызвана гемолизом эритроцитов с повышением содержания свободного гемоглобина в плазме крови, но повышение содержания калия в крови не сопровождалось усилением его

экскреции, так как снижался фильтрационный заряд (98,93±7,92 мкмоль/час/ЮОг и 74,46±5,88 мкмоль/час/ЮОг, р<0,05), то при сочетанной модели появились тенденции к увеличению фильтрационного заряда калия вследствие ускорения клубочковой фильтрации, сопровождающееся достоверным (р<0,05) увеличением экскреции калия с 10,85±0,94 мкшльЛисЛООг, результата нитритных крыс, до 13,49±1,05 мкмоль/час/ЮОг. Это и способствовало нормализации содержания калия в плазме крови (4,48±0,39 ммоль/л).

Таким образом, ацизол, вводимый крысам вместе с нитритом натрия в дозе 5,0 мг/кг не влияет на содержания натрия и калия в плазме крови, но на сниженную, в результате введения нитрита, экскрецию натрия в условиях спонтанного диуреза оказывает стимулирующее действие. В отношении обмена и обработки калия ацизол увеличивает экскрецию калия и нормализирует гипер-калиемию, создаваемой в результате введения нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг.

Количество эритроцитов в условиях нитритной интоксикации через одну неделю стало больше, чем у интактных крыс (как возможная компенсаторная реакция), а при сочетанном введении ацизола и нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг, оставалось на прежнем уровне (рис.2). Не менялось и гематокритное число. Достоверные же изменения были с гемоглобином (135,64±4,12 г/л и 148,04±3,65 г/л, р<0,05) и метгемоглобином, который с 3,24±0,26% уменьшился на 41,2%, а также со свободным гемоглобином в плазме крови, чей уровень с 1,08±0,09 г/л был на 33,3% снижен. В конце второй недели количество эритроцитов у нитритных крыс стало на 14,2% меньше нормы, у крыс сочетанной модели они оставалось на уровне 6,32±0,52 х10|2/л, что было больше на 15,3% и соответствовало норме. Содержание гемоглобина оставалось достоверно больше (р<0,05), а метгемоглобина - меньше (р<0,001). Более чем в два раза был снижен и уровень свободного гемоглобина, который после введении крысам нитрита увеличился до 1,72±0,14 г/л. При завершении экспериментов в конце третей недели достоверные отличия были по всем изучаемым параметрам, но более значимо отличались уровни метгемоглобина и свободного гемоглобина - они были снижены с 8,56±0,67% и 3,08±0,23 г/л в 2,05 и 1,87 раза, соответственно.

17

I-1 интатккые крысы

ЕПЙЗ контроль для нитритных крыс

введение ЫаЫ02 в дозе 5,0 мг/кг

1=1 введение ацизола в дозе 30,0 мг/кг

введение ацизола и нитрита натрия

Содержание гемоглобина Содержание метгемоглобина

Рисунок 2. Количество эритроцитов, содержание гемоглобина и метгемоглобина в крови крыс, получавших нитрит натрия, ацизол и ацизол на фоне нитрита натрия в течение трёх недель

Исследование при введении нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней показало, что количество эритроцитов и гематокритного числа имели тенденцию к повышению, но достоверно было увеличено содержание гемоглобина (116,54±5,46 г/л и 135,72±4,45 г/л, р<0,02) и снижено в 2,5 и 1,6 раза уровни метгемоглобина (р<0,001) и свободного гемоглобина (р<0,001).

Таким образом, ацизол, вводимый крысам вместе с нитритом натрия, предотвращает снижение в крови, вызванное введением нитрита натрия, содержания гемоглобина, оказывает стимулирующее действие на количество эритроцитов, и снижает увеличенные уровни метгемоглобина и свободного гемоглобина.

4-1 0.4

0.0

1

Количество эритроцитов

1 и ед.

2 нед.

3 нед.

В отношении перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты можно отметить, что одновременное введение ацизола на фоне трёхнедельной нитритной интоксикации способствовало тому, что через одну неделю содержание гидроперекисей в плазме крови, которое у нитритных крыс было 3,54±0,28 мкмоль/л стало в 1,6 раз меньше (р<0,05). Уровень малонового диальдегида в эритроцитах с 39,34±2,96 мкмоль/л также был достоверно (р<0,05) снижен в 1,5 раз, а активность же каталазы в эритроцитах повысилась с 6,64±0,42l0"4 МЕ/гНЬ до 8,46±0,62к 10"4 МЕ/гНЬ (р<0,01). Если сопоставлять соотношений изменений активности каталазы, то можно отметить, что нитрит натрия через одну неделю введение снижает её с нормы на 19,6%, а недельное введение ацизола, наоборот, усиливает на 21,4%, то есть ацизол снимает угнетающее влияние нитрита натрия на активность каталазы. При двухнедельном введении ацизола и нитрита натрия все исследуемые показатели достоверно отличались от результатов нитритных крыс. При завершении же экспериментов в конце третей недели содержание гидроперекисей и мало нового диальдегида бьши в 1,51 и 1,6 раза меньше, а активность каталазы с 5,24±0,47х 10"4 МЕ/г Hb усилилась на 27,8% (р<0,05).

При изучении влияния ацизола на изменённые, вследствие введения нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг было выявлено, что содержание гидроперекисей снизилось с 5,07±0,47 мкмоль/л в 2,16 раз, став ближе к норме (1,94±0,21 мкмоль/л). Уровень малонового диальдегида, который, после введения нитрита натрия увеличился в 2,2 раза, также стал меньше (р<0,001), а активность каталазы достигла 7,27±0,52х10"4 МЕ/г Hb, став в 1,5 раза стала выше, чем у крыс, получавших нитрит (р<0,002).

Таким образом, ацизол, уменьшая у крыс увеличенные, вследствие введения нитрита натрия в дозах 5,0 мг/кг и 20,0 мг/кг, содержания гидроперекисей и малонового диальдегида, и повышая сниженную активность каталазы, предотвращает усиление перокисидации и ослабление антиоксидантной защиты.

На приведённой схеме отражены патофизиологические механизмы выявленных изменений.

ВНУТРИЖЕЛУДОЧНОЕ ВВЕДЕНИЕ НИТРИТА НАТРИЯ

Снижение скорости клубочковой фильтрации

Снижение водного и спонтанного диуреза

Снижение фильтрационного заряда натрия

Уменьшение экскреции Ыа

Гемолиз и увеличение свободного гемоглобина, уменьшение количества эритроцитов и содержания гемоглобина

Повышение содержания метгемоглобина

Усиление пероксидации (повышение содержания малонового диальдегида и гидроперекисей) и ослабление антиокисдантной защиты (снижение активности каталазы1

N02 +

АЦИЗОЛ

Г

и к

ПАЕ

Е Л М

Р И И

Я

1.....

О

с л

А Б Л Е

Н И

Е

ВНУТРИЖЕЛУДОЧНОЕ ВВЕДЕНИЕ АЦИЗОЛА

Выброс крови из депо и повышение циркулирующего объёма крови

Увеличение водного и спонтанного диуреза

Ускорение почечного кровотока

Увеличение клубочковой фильтрации

Ослабление пероксидации (снижение содержания малонового диальдегида и гидроперекисей) и усиление антиоксидантной защиты (повышение активности катал азы)

Увеличение в периферической крови количества эритроцитов и содержания гемоглобина

Схема 1. Изменения функции почек, картины крови и состояния антиоксидантной защиты после введения крысам нитрита натрия, ацизола и ацизола на фоне нитрита натрия

выводы

1. Ацизол, вводимый ежедневно внутрижелудочно крысам линии Вистар в дозе 30,0 мг/кг одновременно с нитритом натрия в дозах 5,0 мг/кг (три недели) и 20,0 мг/кг (три дня), увеличивает, сниженный в результате введения нитрита водный и спонтанный диурез, вследствие повышения клу-бочковой фильтрации, обусловленной ускорением почечного кровотока, а также предотвращает увеличение в плазме крови содержания креатинина.

2. Ацизол, как при водном, так и спонтанном диурезе, уменьшает, вызванную введением нитрита натрия, протеинурию и способствует более позднему проявлению и меньшей выраженности гипопротеинемии.

3. Ацизол в условиях спонтанного диуреза увеличивает сниженную, из-за угнетения фильтрационного заряда, экскрецию натрия при введении нитрита в дозе 5,0 мг/кг, и способствует капиурезу, нормализуя гиперкалие-мию, которая вызывается острой нитритной интоксикацией.

4. Ацизол ослабляет гемолиз эритроцитов, вызванный введением нитрита натрия, в результате чего в плазме крови уменьшается содержание свободного гемоглобина, а в периферической крови повышается количество эритроцитов. Ацизол также увеличивает в крови сниженное, в результате нитритной интоксикации, содержание гемоглобина и уменьшает увеличенный уровень метгемоглобина.

5. Ацизол уменьшает, увеличенную введением нитрита натрия, перекисное окисление липидов, снижая содержания гидроперекисей и малонового диальдегида, и усиливает антиоксидантную защиту, увеличивая активность каталазы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Джиоев И.Г., Дзоциева J1.X., Бабаниязов Х.Х., Козаев A.B. Влияние однократного применения антигипоксического препарата ацизола на водовыде-лительную функцию почек у крыс // Вестник международной академии экологии и безопасности жизнедеятельности. -2008. -Т.13, №3. -С.88-90.

2. Дзоциева JI.X., Джиоев И.Г., Енапдиева Д.А., Кабоева Б.Н. Экспериментальное влияние различных дозировок нитрита натрия на функции и морфологию почек // Вестник международной академии экологии и безопасности жизнедеятельности. -2009. -Т. 14, №5. -С.215-8

3. Козаева Э.Г., Дзоциева Л.Х., Джиоев И.Г. Состояние почек крыс при острой интоксикации нитритом натрия // Материалы международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке». -2009. -С.1171-2

4. Дзоциева JI.X, Козаева Э.Г., Джиоев И.Г. Функционально-морфологические особенности почек крыс при трёхнедельной интоксикации нитритом натрия // Владикавказский медико-биологический вестник. -2090-2010. -T.IX, вып.15-16. -С.105-8

5. Дзоциева JI.X, Джиоев И.Г., Кабоева Б.Н., Бабаниязов Х.Х., Пронина Н.В. Влияние ацизола на некоторые гематологические показатели и состояние антиоксидантной системы у крыс в условиях нитритной интоксикации // Вестник международной академии экологии и безопасности жизнедеятельности. -2010. -Т.15, №2. -С.83-5.

6. Дзоциева JI.X., Козаева Э.Г., Хубулов И.Г., Кабоева Б.Н. Экспериментальное изучение влияния нитрита натрия на основные процессы мочеобразова-ния, протеинурию и содержание метгемоглобина II Вестник международной академии экологии и безопасности жизнедеятельности. -2010. -Т.15, №2. -С.80-3

Информационно-технический отдел ГОУ ВПО СОГМА Росздрава Подписано в печать 28.05.10 Тираж 100 экз. Формат издания 60X90 усл.печ.л.1,0 Заказ № 25

Современное развитие промышленности и загрязнение окружающей среды различными химическими соединениями оказывает на человечество многостороннее влияние, с появлением новых заболеваний, омоложением уже существующих, возникновением и накоплением мутаций, способных негативно влиять на здоровье населения. Ситуация усложняется тем, что часть веществ, находя применение в повседневной жизни, перестают восприниматься как вредные и их порой начинают использоваться в неконтролируемых количествах, другие становятся химически агрессивными в организме человека и животных, а некоторые — накапливаются в организме, образуя прочные соединения, способные вызывать длительные нарушения здоровья.

К категории распространённых загрязнителей окружающей среды относятся кислородсодержащие соединения азота: нитраты (NO3) и нитриты (ТчГОг), чьи химические свойства легко образовывают соли, широко применяемые в сельском хозяйстве как минеральные удобрения, с последующим их ( накоплением пока в растениях и животных, а затем с пищей и в организме человека [3,6,14,38,70]. Кроме того, нитраты и нитриты используются при приготовлении мясных и рыбных консервов, а также лекарств [27,28,31,60,72].

Хотя основную опасность для человека и животных представляют нитриты при попадании в организм, однако нитраты в толстом кишечнике под действием микрофлоры восстанавливаются до нитритов, которые затем, всасываясь и поступая в кровь, где, как сильные окислители, превращают двухвалентное железо гема в трёхвалентное, с образованием метгемоглобина, не способного поддерживать дыхательную функцию эритроцита, что приводит У к развитию гипоксии [23,57,66,100]. Кроме того, нитриты, первичные вторичные амины, в присутствии азотистой кислоты способны образовывать нитрозоамины, обладающие высокой канцерогенной активностью [27,63,73].

Поиск новых препаратов и лекарственных средств, способных оказать положительное действие при различных отравлениях, и их использование, является важным и перспективным направлением современной медицины, особенно если эти средства имеют природное происхождение или максимально к ним приближённые. Одним из таких соединения является препарат ацизол, в основе которого комплекс цинка и 1-винилимидазолом. Ацизол был синтезирован Иркутским институтом химии СО РАН, как высокоэффективный антидот и антигипоксант, используемый при острых отравлениях большими дозами СО - оксида углерода, так как он способен менять сродство гемоглобина к газам крови, что позволяет лучше переносить высокие концентрации в крови карбоксигемоглобина [4,5]. Кроме того, ацизол оказывает положительное влияние на работу цинк-зависимых метаболических процессов, особенно в условиях нехватки цинка, а также обладает мембрно-протекторным свойством [29].

Цель исследования

Экспериментальное изучение влияния ацизола на функции почек, гематологические показатели, перекисное окисление липидов и состояние анти-оксидантной системы при интоксикации крыс нитритом натрия разной продолжительности и дозировок введения.

Задачи исследования

1. Выяснить влияние нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг, вводимого ежедневно внутрижелудочно крысам линии Вистар в течение трёх недель в условиях водного и спонтанного диуреза на функции почек (водо- и электролито-выделительную, степень протеинурии), показатели крови (количество эритроцитов, гематокритное число, содержание в крови гемоглобина и метгемоглобина, уровень свободного гемоглобина в плазме крови), а также на перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы (содержания малонового диальдегида и гидроперекисей, активность каталазы).

2. Выяснить влияние нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг, вводимого внутриже-лудочно крысам линии Вистар в течение трёх дней в условиях водного и спонтанного диуреза на все перечисленные функции почек, гематологические показатели, перекисное окисление липидов и состояние антиокси-дантной защиты.

3. Выяснить на крысах линии Вистар влияние однократного и курсового в течение трёх недель внутрижелудочного введения ацизола в условиях водного и спонтанного диуреза на функции почек (водо- и электролито-выделительную, степень протеинурии), показатели крови (количество эритроцитов, гематокритное число, содержание в крови гемоглобина и метгемоглобина, уровень свободного гемоглобина в плазме крови), а также на перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы (содержания малонового диальдегида и гидроперекисей, активность каталазы).

4. Выяснить на крысах линии Вистар влияние ацизола на фоне острой и хронической нитритной интоксикации на все перечисленные функции почек, гематологические показатели, перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной защиты.

Научная новизна исследования

Впервые показано ослабляющее влияние ацизола на сниженный, вследствие внутрижелудочного введения нитрита натрия, спонтанный и водный диурез, скорость клубочковой фильтрации, на усиленную протеинурию, гипопротеинемию, а также на электролитовыделительную функцию почек.

Впервые изучены механизмы действия ацизола на гематологические показатели, а также его способности ослаблять негативное влияние нитритной интоксикации на количество эритроцитов и уровень свободного гемоглобина, содержание гемоглобина и метгемоглобина.

Впервые вскрыты механизмы действия ацизола на свободнорадикаль-ное окисление и антиоксидантную защиту в условиях экспериментальной нитритной интоксикации разной продолжительности.

Научно-практическая значимость работы

Проведённые исследования носят экспериментальный характер, а полученные на крысах результаты, выявляющие влияние острой и хронической нитритной интоксикации на функции почек, показатели крови и состояние анти-оксидантной защиты, относятся к области фундаментальных знаний, расширяющие наши представления о моделировании токсических поражений, и вносят определённый вклад в проявления и патогенез отравлений нитритны-ми соединениями. А выявленные эффекты лекарственного препарата ацизол дают возможность его лечебного и профилактического применения при нитритной интоксикации для нормализации функционального состояния почек, крови и антиоксидантной защиты организма.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Ежедневное внутрижелудочное введение крысам линии Вистар нитрита натрия в дозах 5,0 мг/кг (в течение трёх недель) и 20,0 мг/кг (в течение трёх дней) снижает водный и спонтанный диурез в результате торможения скорости клубочковой фильтрации, вызывает протеинурию и снижает содержание общего белка в плазме крови. В условиях спонтанного диуреза введение нитрита натрия в течение трёх недель приводит к снижению фильтрационного заряда натрия и его экскреции, а при острой интоксикации вызывает гиперкалиемию. Острое и хроническое введение крысам нитрита натрия снижает количество эритроцитов, содержание гемоглобина и активность каталазы, а уровни метгемоглоби-на и свободного гемоглобина, содержания гидроперекисей и малонового диальдегида - повышает.

2. Однократное и в течение трёх недель внутрижелудочное введение крысам линии Вистар ацизола в дозе 30,0 мг/кг в первые два часа повышают водный диурез, в результате ускорения клубочковой фильтрации, обусловленной увеличением почечного кровотока, вызывают натрий- и калийурез, вследствие увеличения фильтрационных зарядов. Однократное введение ацизола увеличивает в периферической крови количество эритроцитов, гематокритное число и содержание гемоглобина, усиливает активность каталазы в эритроцитах, снижает содержание гидроперекисей в плазме крови и уровень малонового диальдегида в эритроцитах. Выявленные изменения сохраняются ещё в течение одной недели продолжения введения ацизола, а затем нормализируются.

3. Ацизол, вводимый крысам линии Вистар через зонд в желудок ежедневно одновременно с нитритной интоксикацией, увеличивает, вызванные введением нитрита натрия, сниженный водный и спонтанный диурез, вследствие ускорения клубочковой фильтрации; уменьшает протеинурию и способствует более позднему проявлению и меньшей выраженности гипопротеинемии; увеличивает сниженную экскрецию натрия, а способствуя калийурезу, нормализуя гиперкалиемию; предотвращает снижение в крови содержания гемоглобина, повышает количество эритроцитов и снижает увеличенные уровни метгемогло-бина и свободного гемоглобина; уменьшая увеличенные содержания гидроперекисей и малонового диальдегида и усиливая сниженную активность каталазы, ацизол предотвращает повышение перокисидации и ослабление антиоксидантной защиты.

Личный вклад соискателя

Диссертационное исследование выполнено соискателем самостоятельно, с подготовкой и проведением экспериментов на животных, выполнением биохимических и физиологических методов исследований, статистической обработки и обобщением полученных результатов, их анализа, формулированием выводов и разработкой патофизиологической схемы.

Апробация диссертационной работы

Материалы диссертационного исследования доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Развитие производственной и экологической безопасности в XXI веке. Проблемы и решения»

Владикавказ, 2009); на конференции «Здоровье и образование в XXI веке. Инновационные технологии в биологии и медицине» (Москва, 2009); на совместном заседании сотрудников кафедр и Центральной научно-исследовательской лаборатории Северо-Осетинской государственной медицинской академии (Владикавказ, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 работ, три из которых — в журналах, рекомендованных Минобразования РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 207 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и приложения в виде сводных таблиц. Работа содержит 24 таблицы, иллюстрирована 32 рисункам и схемой, отражающей патофизиологические механизмы выявленных изменений. В библиографическом указателе приведено 183 источника, 90 их которых отечественные и 93 зарубежных.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Ацизол, вводимый ежедневно внутрижелудочно крысам линии Вистар в дозе 30,0 мг/кг одновременно с нитритом натрия в дозах 5,0 мг/кг (три недели) и 20,0 мг/кг (три дня), увеличивает, сниженный в результате введения нитрита водный и спонтанный диурез, вследствие повышения клубочковой фильтрации, обусловленной ускорением почечного кровотока, а также предотвращает увеличение в плазме крови содержания креатинина.

2. Ацизол, как при водном, так и спонтанном диурезе, уменьшает, вызванную введением нитрита натрия, протеинурию и способствует более позднему проявлению и меньшей выраженности гипопротеинемии.

3. Ацизол в условиях спонтанного диуреза увеличивает сниженную, из-за угнетения фильтрационного заряда, экскрецию натрия при введении нитрита в дозе 5,0 мг/кг, и способствует калиурезу, нормализуя гиперкалиемию, которая вызывается острой нитритной интоксикацией.

4. Ацизол ослабляет гемолиз эритроцитов, вызванный введением нитрита натрия, в результате чего в плазме крови уменьшается содержание свободного гемоглобина, а в периферической крови повышается количество эритроцитов. Ацизол также увеличивает в крови сниженное, в результате нитритной интоксикации, содержание гемоглобина и уменьшает увеличенный уровень метгемоглобина.

5. Ацизол уменьшает, увеличенную введением нитрита натрия, перекисное окисление липидов, снижая содержания гидроперекисей и малонового диальдегида, и усиливает антиоксидантную защиту, увеличивая активность каталазы.

165

ГЛАВА 6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

I. Создав на крысах линии Вистар экспериментальную модель нитритной интоксикации, ежедневным введением в желудок нитрита натрия в дозах 5,0 мг/кг в течение трёх недель и 20,0 мг/кг в течение трёх дней, мы начали изучать функции почек, состояние картины крови и антиоксидантной защиты, сравнивая полученные результата с данными интактных крыс, которым также внутрижелудочно вводили натрий в виде NaCl в количестве эквивалентном его содержанию в нитрите натрия, то есть 1,7 мг/кг и 6,8 мг/кг в зависимости от дозы нитрита натрия.

При ежедневном введении крысам нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг в течение семи дней отмечалось уменьшение на 10,4% трёхчасового водного диуреза, с максимальным проявлением на втором часу. Продолжение интоксикации привело к тому, что к концу второй недели диурез уменьшился уже более значимо, особенно за первые два часа, а в среднем за три часа количество мочи снизилось на 29,7% (р<0,001). А в конце третей недели введения нитрита водный трёхчасовой диурез стал меньше почти в два раза.

Динамика уменьшения спонтанного диуреза у крыс в условиях хронической нитритной интоксикации была аналогична изменениям водного диуреза, с той лишь разницей, что к концу третьей недели снижение спонтанного диуреза было значительнее, что, скорее всего, связано с тем, что, вводимая трижды водная нагрузка водопроводной водой в объёме 5% массы, способствовала частичному вымыванию нитрита натрия, ослабляя его токсическое действие.

Введение крысам нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней привело к резкому изменению водного диуреза, то, что при хронической интоксикации было только в конце третьей недели. Спонтанный диурез при острой интоксикации снизился в 1,91 раз.

Если сравнивать результаты влияния острой и хронической нитритной интоксикации на угнетение водовыделительной функции почек, то можно отметить, что оно сильнее проявляется при длительном введении нитрита. Водный диурез за три часа при острой интоксикации снизился на 38,5%, а при хронической - на 46,9%, спонтанный, соответственно в 1,91 ив 2,35 раза. При этом падёж среди крыс, получавшие нитрит натрия три недели был меньше, чем при его введении в дозе 20,0 мг/кг. Скорее всего, причиной этого, является то, что при длительном введении успевают срабатывать приспособительно-защитные реакции организма, в частности, возможное усиление синтеза и секреции глюкокортикоидов.

Изучение основных процессов мочеобразования показало, что в конце первой недели в условиях водного диуреза, когда содержание креатинина в плазме крови начало повышаться, скорость клубочковой фильтрации и объём канальцевой реабсорбции воды отдельно по каждому часу сбора мочи незначительно отличались (в пределах среднестатистических отклонений), но в среднем за три часа основные процессы мочеобразования не отличались от данных интактных крыс.

Двухнедельная же ежедневная интоксикация, когда концентрация креатинина в плазме крови достоверно (р<0,002) увеличилась до 98,12±4,82 мкмоль/л, что было больше нормы на 25%, способствовала тому, что основные процессы мочеобразования уже достоверно изменились. Клубочковая фильтрация снижалась на 18,2% за три часа, а канальцевая реабсорбция воды, наоборот, за первый (р<0,01) и второй (р<0,05) часы повышалась.

Продолжение интоксикации ещё в течение одной недели привело к тому, что выявленные изменения основных процессов мочеобразования только усилились. При этом скорость клубочковой фильтрации стала сниженной не только за первый и второй часы, но и за третий тоже, а среднее трёхчасовое значение было меньше на 33,7%. Канальцевая же реабсорбция воды достоверно (р<0,02) усиливалась. Одновременно на 40,2% повысилось в плазме крови содержание креатинина, достигнув величины в 112,6±7,35 мкмоль/л.

Изучение основных процессов мочеобразования у крыс при трёхнедельной нитритной интоксикации в условиях спонтанного диуреза выявило, что изменения и скорости клубочковой фильтрации, и канальцевой реаб-сорбции воды были аналогичны тем, которые наблюдались при водном диурезе. Так, после введения нитрита натрия в течение одной недели скорость клубочковой фильтрации, по сравнению с данными контрольных крыс, особо, не менялась. Не отличалось друг от друга и количество воды, всосавшегося обратно в канальцах почек. Но содержание креатинина в плазме крови стало достоверно (р<0,05) больше нормы (79,25±4,12 мкмоль/л - контроль, 91,76±4,53 мкмоль/л - опыт). При продолжение интоксикации ещё в течение одной недели скорость клубочковой фильтрации стала достоверно (р<0,002) сниженной, канальцевая реабсорбция при этом оставалась без особых изменений, а уровень креатинина увеличился до 102,35±6,18 мкмоль/л. Но наиболее значительно изменились основные процессы мочеобразования были, когда от начала интоксикации прошло три недели и содержание креатинина достигло 11б,94±6,77 мкмоль/л, скорость гломерулярной фильтрации достоверно (р<0,001) снизилась на 34,9%. Канальцевая реабсорбция воды, по-прежнему, имела лишь тенденцию к увеличению.

Введение крысам в течение трёх дней нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг приводило к резкому угнетению скорости клубочковой фильтрации независимо от условий проведения экспериментов (водный или спонтанный диурез), и особо не оказывала влияние на канальцевую реабсорбцию воды.

Таким образом, ежедневное, в течение трёх недель, введение крысам линии Вистар через зонд в желудок нитрита натрия в дозе, равной 5,0 мг/кг повышает содержание креатинина в плазме крови и угнетает водный и спонтанный диурез, при этом уменьшение водного диуреза обусловлено снижением скорости клубочковой фильтрации и повышением канальцевой реаб-сорбции воды, а спонтанного - снижением скорости гломерулярной фильтрации. Внутрижелудочное введение крысам нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней уменьшает как водный, так и спонтанный диурез, но только в результате снижения скорости клубочковой фильтрации.

Изучение влияния нитритной интоксикации на степень протеинурии показало, что через одну неделю после начала введения нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг отмечалась тенденция к повышению в моче содержания белка за все часы. При двухнедельной интоксикации протеинурия, по сравнению с результатами контроля, стала уже достоверно больше за каждый час трёхчасового водного диуреза (на 37,3% за первый, на 41,3% за второй и на 54,2% за третий час). Продолжение введение нитрита натрия привело к тому, что в конце третей недели увеличение протеинурии было уже не в процентах, а в разы, также возрастающих от часа к часу - 2,27 раза за первый час, в 3,1 раз за второй и в 3,4 раза за третий час.

Исследование протеинурии в условиях спонтанного диуреза показало, что через одну неделю содержание белка в моче начало повышаться, но ещё без достоверного отличия, которое появилось в конце второй недели (р<0,001), когда протеинурия увеличилась на 40,9%, а ещё через одну неделю интоксикации - уже в 3,1 раза.

После завершения опытов в конце каждой недели у части забитых крыс в плазме крови определяли содержание общего белка, выявившее, что одновременно с повышением протеинурии происходило снижение общего белка в плазме крови крыс, но медленнее - только в конце второй недели (р<0,05), но наиболее выражено гипопротеинемия, снизившись на 28,3%, по сравнению с нормой, была после введения нитрита в течение трёх недель.

Трёхдневное введение крысам нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг также вызвало протеинурию. В условиях водной нагрузки протеинурия за первый час с контрольного уровня, равного 1,69±0,15 мг/мл достоверно (р<0,001) повысилось на 67,0%, за второй час на 60,7% (р<0,001), а за третий час ещё значительнее - на 86,7%. Одновременно с этим достоверно (р<0,05) снизился уровень общего белка в плазме крови.

Таким образом, ежедневное введение крысам линии Вистар через зонд в желудок нитрита натрия в дозах 5,0 мг/кг (в течение трёх недель) и 20,0 мг/кг (в течение трёх дней) приводит к протеинурии, как при водном, так и спонтанном диурезе и к гипопротеинемии.

Выяснение влияния нитрита натрия на ионовыделительную функцию почек мы ограничили изучением обмена и обработки в почках натрия и калия в условиях только спонтанного диуреза, рассчитывая экскреции и фильтрационные заряды этих электролитов, а для натрия ещё и его реабсорбцию в канальцах почек. Трёхнедельное введение нитрита натрия повлияло на ионовыделительную функцию почек только в конце второй недели, когда выделение натрия с мочой стало снижаться, вследствие уменьшения его фильтрационного заряда из-за торможения скорости клубочковой фильтрации, но при этом содержание натрия в плазме крови и канальцевая его реабсорбция не менялись. Трёхнедельное введение нитрита усилила снижение экскреции натрия, причиной которого также оставалось уменьшение фильтрационной загрузки нефрона натрием из-за клубочковой фильтрации, снижение которого усилилось, что должно было уменьшить гидростатическое давление в клу-бочковом аппарате и снизить прохождение натрия через фильтрационный барьер. Канальцевая реабсорбция натрия и содержание в плазме крови, по-прежнему, не менялись.

Трёхдневная острая нитритная интоксикация не повлияла на содержание натрия в плазме крови и его экскрецию, хотя при этом фильтрационный заряд стал на 26,1% меньше нормы (р<0,02), но это не привело к изменению экскреции, так как одновременно появилась тенденция к снижению каналь-цевой реабсорбция натрия.

Изучение влияния нитрита натрия на обмен калия показало, что через одну неделю отмечалось незначительное повышение его экскреции, без изменений содержания в крови и загрузки в клубочках нефронов. При двухнедельной интоксикации наметилась тенденция к снижению фильтрационного заряда калия, которая в конце третей недели уже имела достоверное (р<0,01) отличие, но при этом экскреция и содержания в плазме крови не менялись.

Если нитрит натрия в дозе 5,0 мг/кг массы тела не вызвал особых изменений обработки калия в почках, то в дозе 20,0 мг/кг, несмотря на кратковременность приёма, отмечалось достоверно (р<0,01) повышение содержания калия в плазме крови, хотя при этом фильтрационный заряд, в результате того, что степень уменьшения скорости клубочковой фильтрации была значительней, был также снижен (р<0,05), но, несмотря на это, наметилась тенденция к калиурезу.

Что могло способствовать повышению калия в плазме крови, и почему в этом случае не достаточно увеличилась его экскреция с мочой? Очевидно, что гиперкалиемию мог вызвать частичный гемолиз эритроцитов, о чём мы судили по наличие свободного гемоглобина в крови. Однако в ответ на это должны были усилиться и синтез, и секреция альдостерона, что бы усилить канальцевую секрецию калия и, тем самым, нормализовать повышенное содержание калия в плазме крови [32,33,45,74]. У нас не было возможности определения содержания альдостерона, однако отсутствие калийуреза при гиперкалиемии, могло быть связано либо с поражением, под токсическим воздействием нитрита натрия, клубочкового слоя надпочечников, либо со снижением чувствительности канальцев почек к действию альдостерона.

Таким образом, трёхнедельное введение крысам нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг в условиях спонтанного диуреза не оказывает влияния на содержание натрия и калия в плазме крови, но, снижая фильтрационный заряды натрия, уменьшает его экскрецию, и не влияет на выделение калия с мочой. А введение нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней вызывает гиперкалиемию и не влияет на уровень натрия в плазме крови, при этом, снижаются их фильтрационные заряды, но не меняется экскреция. нитрит натрия, как сильный окислитель, способен переводить двухвалентное железо тема в трёхвалентное с образованием патологической формы гемоглобина - метгемоглобина или гемиглобин, который не может обратимо присоединять кислород и является для его транспорта неактивным, в результате чего развивается гипоксия [88]. Одновременно с определением метгемоглобина, как основного маркёра степени нитритной интоксикации, мы исследовали в крови содержание гемоглобина, количество эритроцитов и гемато-критное число, а также уровень свободного гемоглобина в плазме крови. Полученные результаты показали, что количество эритроцитов через одну неделю введения нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг стимулировало увеличение количества эритроцитов с 6,58±0,41х1012/л до 7,12±0,38х1012/л. Одновременно, соразмерно повышению количества эритроцитов, увеличился и гематокрит с 46,52±1,34% до 49,35±1,54%. Причиной увеличения количества эритроцитов, скорее всего, было то, что одновременно достоверно (р<0,001) увеличилось содержание метгемоглобина, а гемоглобина начало снижаться и, возможно, компенсаторно произошёл выброс эритроцитов из депо. Не исключено и то, что к этому времени стимулировался эритропоэз [86]. Вместе с тем, мы также наблюдали достоверное (р<0,01) повышение в плазме крови свободного гемоглобина, уровень которого у контрольных крыс был 0,72±0,05 г/л, а у экспериментальных - 1,08±0,09 г/л.

Через две недели введения нитрита количество эритроцитов стало на 11,2% меньше контрольного уровня, а гематокритное число - на 10,3%, то есть процесс снижения этих показателей шёл с одинаковой интенсивностью. Одновременно более значительные изменения произошли с содержанием в крови гемоглобина и метгемоглобина. Уровень метгемоглобина в крови, на фоне снижения содержания гемоглобина, увеличился в 2,4 раза, а содержание свободного гемоглобина в плазме крови - в 2,2 раза. бина достоверно (р<0,001) снизились на 28,3% и 20,0%. Одновременно повысились содержание метгемоглобина (5,1 раз) и свободного гемоглобина (в 3,8 раз).

Определение в условиях трёхдневного введения крысам нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг выявило тенденцию к снижению количества эритроцитов с 6,25±0,66х1012/л до 5,68±0,45х1012/л и гематокритного числа. Изменения, имеющие достоверные отличия, были выявлены при определении остальных исследуемых гематологических показателей. Причём наиболее значительно это касалось метгемоглобина, содержание которого в крови увеличилось в шесть раз. В 2,8 раза увеличился и уровень свободного гемоглобина, а гемоглобина, наоборот, стал (р<0,001) меньше контроля.

Таким образом, ежедневное внутрижелудочное введение крысам линии Вистар нитрита натрия в дозах 5,0 мг/кг (в течение трёх недель) и 20,0 мг/кг (в течение трёх дней) уменьшает количество эритроцитов и содержание гемоглобина, а уровни метгемоглобина и свободного гемоглобина — повышает.

Наблюдаемые после введения крысам нитрита натрия значительные изменения содержания гемоглобина и метгемоглобина, могли привести к разобщению окисления и фосфорилирования, а это, в свою очередь, отразится на активации перекисного окисления липидов и антиоксидантной системе. О первой мы судили по содержанию в плазме крови гидроперекисей и малонового диальдегида в эритроцитах, а о второй - по активности каталазы в эритроцитах. Введение нитрита натрия способствовало тому, что уже через одну неделю содержания гидроперекисей (р<0,001) и малонового диальдегида (р<0,01) увеличились, а активность каталазы снизилась на 19,6%. Спустя две недели выявленные изменения усилилась, то есть активность каталазы стала ниже контрольного значения на 27,3% (р<0,01), а содержание малонового диальдегида превосходило норму на 78,3%, а гидроперекисей - в 2,26 раза. Третья неделя нитритной интоксикации способствовала тому, что процесс перекисного окисления липидов, хотя судить только по содержанию гидроперекисей и малоновому диальдегиду не совсем корректно, но их уровни уже превосходили норму в 2,9 и 2,13 раза, соответственно. Состояние же антиокси-дантной системы становилось всё более угнетённой и активность каталазы снизилась до 5,24±0,47х10"4 МЕ/г НЬ (р<0,002).

Острая нитритная интоксикация крыс также вызывала значительные изменения перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. Так содержание гидроперекисей увеличилось в 2,6 раз, что, по сравнению с результатами, полученными при введении нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг было больше двухнедельной интоксикации. Уровень же малонового диальдегида превосходил контроль в 2,2 раза, а активность каталазы была, такой же как и при трёхнедельной интоксикации.

Таким образом, в результате хронической и острой интоксикации нитритом натрия, у крыс линии Вистар состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности характеризуется достоверным повышением в плазме крови содержания гидроперекисей и малонового диальдегида и эритроцитах, и снижением активности каталазы в эритроцитах.

II. Исследование влияния ацизола, вводимого внутрижелудочно крысам в дозе 30,0 мг/кг на изучаемые показатели мы проводили в условиях водного диуреза при однократном приёме, а при трёхнедельном введении ещё и в условиях спонтанного диуреза.

Однократный приём ацизола способствовал увеличению (р<0,05) водного диуреза за первые два часа на 22,2% и 24,5%, соответственно. За третий час количество мочи было близко к результату интактных крыс контрольной группы, но в среднем за три часа диурез и процент выделения введённой 5% водной нагрузки были достоверно (р<0,05) больше нормы на 21,3%.

Трёхнедельное ежедневное внутрижелудочное введение ацизола показало, что результаты диуреза, полученные в условиях водной нагрузки в конце первой недели, особо не отличались от данных однократного приёма ацизола, то есть отмечалось достоверное повышение диуреза за первый и второй час. Двухнедельное введение ацизола не повлияло на водный диурез, который оставался таким же, как после недельного приёма. При трёхнедельном введение ацизола диурез за три часа особо не отличался от контроля.

При исследовании влиянии ацизола на спонтанный диурез было показано, что через одну неделю он приобрёл тенденцию к увеличению и оставался таким и после двух- и трёхнедельного введения.

Таким образом, если после введения ацизола в условиях водной нагрузки диурез у крыс повысился на 21,3% (при однократном приёме) и в среднем на 21,0% (при трёхнедельном приёме), и это имело достоверное отличие, то изменение спонтанного диуреза после трёхнедельного приёма ацизола, имело тенденциозное отличие, несмотря на то, что в среднем отличалось на 14,8%. То есть ацизол не обладает кумулятивным действием на увеличение диуреза.

Отмеченное повышение водного диуреза на первом и втором часах после однократного введения ацизола было обусловлено только ускорением клубочковой фильтрации, а канальцевая реабсорбция воды, несмотря на её незначительное повышение, что должно было снизить водный диурез, не оказывала регулирующего влияния на конечный объём мочи.

Введение ацизола в течение трёх недель не оказало особого влияния на основные процессы мочеобразования — они во многом были аналогичны тем, которые имелись после однократного приёма. Так, через одну неделю клу-бочковая фильтрация достоверно (р<0,05) увеличилась только за первые два часа - на 33,0% за первый час и на 25,5% за второй.

За вторую и третью недели введения ацизола изменения скорости клубочковой фильтрации, имеющие достоверное отличие от результата интактных крыс, также были только за первый и второй часы сбора мочи, а в среднем за три часа как в конце второй, так и третей недель клубочковая фильтрация превосходила контрольный уровень чуть более 21% (р<0,05). Причиной же ускорение клубочковой фильтрации было достоверное (р<0,001) повышение скорости почечного кровотока с контрольного уровня в 11,9±0,84 мл/мин до 16,8±0,14 мл/мин.

Что касается канальцевой реабсорбции воды, то, она, по-прежнему, имела направленность к повышению, но, очевидно степень её изменения была не достаточной для снижения диуреза.

Изучение основных процессов мочеобразования в условиях спонтанного диуреза после введения ацизола в течение трёх недель показало, что они не менялись. Так, канальцевая реабсорбция воды на протяжении всего эксперимента оставалась такой же, как у крыс контрольной группы. Клубочковая фильтрация, несмотря на то, что она была больше контроля, но не имела достоверного отличия. Поэтому, отмеченная тенденция к увеличению спонтанного диуреза была обусловлена незначительным ускорением скорости клубочковой фильтрации.

При изучении влияния ацизола на содержание креатинина в плазме крови, мы не отметили изменений его уровня после однократного ведения ацизола. При трёхнедельном введении ацизола, хоть и не было достоверного изменения, но наблюдалось незначительное его снижение, усиливающееся к концу экспериментов. Не менялось содержание креатинина и в условиях спонтанного диуреза.

Таким образом, однократное введение крысам через зонд в желудок ацизола в дозе 30,0 мг/кг повышает в первые два часа водный диурез в результате увеличения клубочковой фильтрации вследствие ускорения почечного кровотока. Аналогичный эффект на водный диурез наблюдается и при трёхнедельном введении ацизола, который не оказывает существенного влияния на водовыделительную функцию почек и основные процессы мочеобразования в условиях спонтанного диуреза. Ацизол также не оказывает влияния на содержание в плазме крови креатинина как при однократном, так и при трёхнедельном приёме.

Однократное введение ацизола крысам в условиях водной нагрузки не оказало влияния на содержание общего белка в плазме крови (68,23±2,87 г/л -контроль, 69,65±3,34 г/л — опыт) и степень протеинурии. Результаты трёхнедельного введения ацизола как в условиях водного, так и спонтанного диуреза на содержание общего белка в плазме крови и степень протеинурии не отличались от данных однократного приёма.

Однократное введение ацизола в условиях водного диуреза не оказало влияние на содержания натрия и калия в плазме крови, но вызвало натриурез в первые два часа и его суммарная трёхчасовая экскреция была достоверно (р<0,05) увеличена, одновременно стимулировалось выделение калия с мочой. Обнаруженный натриурез, при неизменившемся содержании в плазме крови могло быть вызвано либо повышением фильтрационного заряда (что вполне логично при ускоренной клубочковой фильтрации) или сниженной относительной канальцевой реабсорбцией и, соответственно, увеличением экскретируемой фракцией натрия. Действительно, повышение экскреции натрия в первые два часа было вызвано только увеличением количества натрия профильтровавшегося в почечных клубочках (на 36,2% за первый час, -на 32,0% за второй, а в среднем за три часа на 29,0%), так как канальцевая реабсорбция не менялась. Изменения фильтрационного заряда для калия были во многом аналогичны натриевым и сопоставимы по степени проявлений (увеличение на 31,4% за первый час, на 27,5% а второй и на 23,9% за три часа), но отсутствие при этом повышение выделения калия с мочой говорит о влиянии ацизола на секрецию.

Трёхнедельное введение ацизола не повлияло на содержание в плазме крови натрия и калия, несмотря на тенденцию к увеличению их фильтрационных зарядов, экскреции натрия и калия также не менялись.

Таким образом, ацизол не оказывает влияние на содержание общего белка в плазме крови и протеинурию у крыс, как при однократном, так и трёхнедельном внутрижелудочном введении. Ацизола также не оказывает влияние на содержание натрия и калия в плазме крови. Однократный приём ацизола вызывает натриурез и стимулирует выделение калия с мочой в первые два часа трёхчасового водного диуреза, вследствие увеличения их фильтрационных зарядов. При трёхнедельном введении ацизола в условиях спонтанного диуреза не оказывает влияния на обработки натрия и калия в почках.

Ацизол - как фармакологический препарат на основе металлокомплек-сов солей цинка с 1-винилимидазолом, являющийся высокоэффективным антидотом и эффективным антигипоксантом при кислородной недостаточности [5,6], должен оказывать влияние на гематологические параметры, в частности на количество эритроцитов и гемоглобина.

Проведённые исследования показали, что однократное введение ацизола уже через один час резко повышало в крови содержание гемоглобина, количество эритроцитов и гематокритное число, что говорит о том, что обнаруженный эритроцитоз не связан с уменьшением объёма циркулирующей жидкости. Определение содержания метгемоглобина в крови и свободного гемоглобина в плазме крови показало, что на них ацизол не оказывает влияния.

Для решения вопроса о причине столь быстрого повышения количества эритроцитов и гемоглобина (залпа эритроцитов из костного мозга за один час не могло быть) мы одновременно с введением ацизола делали внутрибрю-шинно инъекцию тиопентала и в течение 10 минут перевязали селёзеночную артерию и вену, исходя из того, что именно селезёнка является основным депо эритроцитов. Взятие крови после этого, но с учётом того, чтобы от момента введения ацизола прошёл один час, и определение в нём содержания гемоглобина показало, что он был достоверно (р<0,05) больше нормы на 13,2% и в абсолютных цифрах составлял 152,16±4,35 г/л, хотя просто введение ацизола увеличивало содержание гемоглобина на 32,8%.

Однако при трёхнедельном введении ацизола отмеченные изменения однократного приёма не имели такого проявления. Так, количество эритроцитов через одну неделю введения ацизола оставалось достоверно (р<0,05) выше нормы, но, по сравнению с однократным приёмом, стало меньше, а к концу второй недели их количество, хоть и было ещё на 9,4% больше, чем у интактных крыс, но уже без достоверного отличия, и продолжало снижаться, став к моменту окончания экспериментов даже несколько меньше контрольного уровня. Изменения гематокритного числа, с небольшими колебаниями, шли соразмерно снижению количества эритроцитов, то есть, не отмечалось нарушений соотношения жидкой и форменной части крови, как в сторону сгущения, так и разжижения. Содержание гемоглобина, как наиболее резко изменившегося из всех исследуемых нами гематологических показателей, после недельного введения ацизола, по-прежнему, было достоверно (156,36±5,0 г/л, р<0,002) больше интактного уровня, но к концу второй недели, и особенно к третей, уровень гемоглобина снизился и достоверности отличий уже не было. Что касается содержания в крови метгемоглобина и свободного гемоглобина в плазме крови, то они практически не менялись.

Таким образом, ацизол, независимо от продолжительности введения не оказывает влияния на содержание метгемоглобина и свободного гемоглобина. Однократное введение ацизола, в результате выброса крови из депо, способствует увеличению количества эритроцитов, гематокритного числа и содержания гемоглобина, сохраняющиеся при продолжении введения в течение одной недели, а затем нормализующиеся.

Ацизол, также обладающий мембранопротекторным свойством [5,6], предположительно должен оказать влияние на процесс липопероксидации и антиокислительной защиты клеток. Проведённые исследования показали, что однократное введение ацизола вызывало достоверное (р<0,02) повышение на 25,2% активности каталазы в эритроцитах. Одновременно отмечалось достоверное (р<0,05) снижение содержания в плазме крови гидроперекисей и малонового диальдегида в эритроцитах.

При трёхнедельном введение ацизола активность каталазы, содержание гидроперекисей и малонового диальдегида, по сравнению с нормой, оставались достоверно повышенными. К концу второй недели и, особенно, к моменту завершения экспериментов, несмотря на то, что ацизол продолжал вводиться крысам постоянно, все исследуемые показатели приблизились к исходному уровню, которое было у интактных крыс контрольной группы.

Таким образом, однократное внутрижелудочное введение крысам ацизола усиливает активность каталазы в эритроцитах, снижает содержание гидроперекисей в плазме крови и уровень малонового диальдегида в эритроцитах крови крыс. При продолжении введения ацизола в течение одной недели отмеченные изменения сохраняются, а затем нормализируются.

III. После того как мы по отдельности выявили влияние нит-ритной интоксикации и ацизола на функции почек, показатели крови, пере-кисное окисление липидов и антиоксидантную защиту, то дальше было необходимо выяснить, какие могут быть изменения в условиях сочетанного действия ацизола и нитрита натрия. Такой подход мы сочли вполне логичным, так как ацизол как антигипоксант и антиоксидант должен уменьшить некоторые негативные проявления нитритной интоксикации, а полученные результаты можно будет рекомендовать для дальнейшего изучения в клинике. Вводимые дозы нитрита натрия, ацизола и условия постановки опытов были аналогичны, а в качестве контроля были результаты крысы, получавших нитрит натрия.

Отмеченное влияние введения нитрита в дозе 5,0 мг/кг в течение трёх недель на снижение водного диуреза, а ацизола на его увеличение, при их совместном применении отличалось как от результатов одних, так и других. Так, через одну неделю диурез за первый час был на 7,7% больше, чем у крыс, получавших нитрит и на 27,4% меньше, чем при введении ацизола. Такая же закономерность сохранилась и на втором часе, а суммарно за три часа диурез при введении только нитрита натрия был 3,56±0,29 мл/3часа/100г, только ацизола - 4,61±0,35 мл/3часа/100г, то при совместном их введении - 3,95±0,33 мл/3 часа/1 ООг, то есть, соответственно, больше на 10,9% и меньше на 16,7%.

К концу второй недели, когда диурез нитритных крыс за первые два часа уже достоверно снизился, а у ацизольных оставался больше нормы, при совместном введении ацизола и нитрита натрия диуреза за первый час (1,02±0,08 мл/час/10Ог - нитрит, 1,38±0,05 мл/час/ 100г - нитрит+ацизол) достоверно отличался (р<0,05) и трёхчасовой диурез стал на 22,0% больше. А при продолжении опытов ещё в течение одной недели он стал достоверно больше за все три часа, в результате чего суммарный диурез у крыс, получавших нитрит был 2,13±0,23 мл/3часа/100г, а у крыс с совместным введением — 3,09±0,26 мл/3часа/100г (р<0,05), то есть было больше на 45,0%, что говорит о том, что происходило ослабление угнетающего влияния нитрита натрия на водный диурез.

Исследования, проведённые после введения в течение трёх дней нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг с ацизолом, показали, что водный диурез в этом случае стал достоверно больше за каждый час, чем у крыс, получавших нитрит, и в среднем за три часа был на 41,6% больше.

Исследование спонтанного шестичасового диуреза выявили, что в конце первой недели при совместном введении ацизола и нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг количество выделившейся мочи не менялось, а при двухнедельных экспериментах ацизол достоверно (р<0,02) предотвратил снижение диуреза, вызванное введением нитрита на 29,5%. В конце третей недели введение ацизола повысил (р<0,02) диурез до 0,054±0,004 мл/час/100г, который нитрит натрия к этому времени снизил до 0,039±0,006 мл/час/100г. При введении же нитрита в дозе 20,0 мг/кг и ацизола в течение трёх дней количество спонтанно выделившейся мочи у крыс достоверно (р<0,01) увеличился на 52,1%.

Содержание креатинина в плазме крови крыс при введением им нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг начало повышаться, став достоверно (р<0,02) больше уже в конце второй недели, а к третей недели достигнув уровня в 112,6±7,35 мкмоль/л (р<0,001). В то время как приём ацизола не оказал влияния на содержание креатинина. При совместном введении ацизола и нитрита натрия креатинин, хоть и повышалось с каждой неделей, но достоверное (р<0,05) отличие от уровня интактных крыс (78,46±3,78 мкмоль/л) приобрёл только на третей неделе (92,36±5,17 мкмоль/л), но в то же время это было на 18,0% меньше результата трёхнедельного введения только нитрита натрия.

Основные процессы мочеобразования при совместном введении ацизола и нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг за каждый час водного диуреза через одну неделю имели лишь незначительное ускорение клубочковой фильтрации и снижение канальцевой реабсорбции воды. В дальнейшем скорость клубочковой фильтрации за первый час, по сравнению с той, какая она была у нитритных крыс, достоверно (р<0,05) увеличилась с 14,18±0,89 мл/час/100г до 18,67±1,38 мл/час/100г. Повышенной на 12,2% и 11,2% была фильтрация и за второй, и третий часы, соответственно, и суммарная за три часа фильтрация была больше результата контроля на 18,0%. Вместе с такими изменениями скорости клубочковой фильтрации, стимулирующие диурез, канальцевая реабсорбция воды имела наклонность к снижению, что также должно было увеличивать количество выделившейся мочи.

Продолжение экспериментов у крыс этой модельной группы показало, что скорость клубочковой фильтрации становилась меньше, но не столь интенсивно, как у нитритных, у которых в конце третей недели за первый час она была 12,64±1,45 мл/час/100г, а при совместном введении ацизола и нитрита— 16,32±0,92 мл/час/100г, р<0,05. А за второй и третий часы клубочковая фильтрация была больше на 29,6% (р<0,02) и 21,1% (р<0,05), соответственно. Одновременно с изменением скорости клубочковой фильтрации было и достоверное снижение объёма канальцевой реабсорбции воды за каждый час трёхчасового водного диуреза.

Что могло быть причиной изменения канальцевой реабсорбции воды? Возможно, изменение осмолярности слоев ткани почек или изменения чувствительности канальцевого аппарата к действию вазопрессина.

При введении ацизола совместно с нитритом натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней содержание креатинина в плазме крови не изменилось, а канальцевая реабсорбция воды за каждый час была незначительно снижена, а клубочковая фильтрация за первый и второй часы, наоборот, достоверно (р<0,02 и р<0,05, соответственно) повышена, поэтому суммарная трёхчасовая скорость клубочковой фильтрации была на 33,2% (р<0,02) больше.

В условиях спонтанного диуреза при трёхнедельных опытах изменения касались только скорости клубочковой фильтрации, которая в конце второй и третей недель превосходила на 34,7% и 44,0% результаты крыс, получавших только нитрит. То, что в этом варианте опытов в конце третей недели канальцевая реабсорбция не менялась, говорит о том, что, скорее всего, причиной снижения всасывания воды в канальцах почек в условиях водного диуреза, было не столько изменение осмолярности слоёв ткани почек, сколько изменение чувствительности канальцев и собирательных трубочек к действию антидиуретического гормона.

Канальцевая реабсорбция воды в условиях спонтанного диуреза при трёхдневном введении ацизола и нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг не менялся, а клубочковая фильтрация была на 39,5% (р<0,01) больше контроля.

Таким образом, ацизол, вводимый крысам линии Вистар через зонд в желудок ежедневное, в течение трёх недель, в дозе 30,0 мг/кг одновременно с нитритом натрия в дозе, равной 5,0 мг/кг снижает увеличенное, введением нитрита, содержание креатинина в плазме крови и увеличивает сниженный водный и спонтанный диурез, вследствие ускорения клубочковой фильтрации, а также снижения в конце третей недели и канальцевой реабсорбции воды. Ацизол, вводимый крысам в течение трёх дней вместе с нитритом натрия в дозе 20,0 мг/кг, также, ускоряя клубочковую фильтрацию, стимулирует сниженный водный и спонтанный диурез. что в конце первой недели не было отличий за каждый час. Изменений, имеющих достоверное отличие не отмечалось и в конце второй недели, но, по сравнению с данными крыс, получавших нитрит натрия, протеинурия была меньше за первый час водного диуреза на 12,7%, на 17,5% за второй и на 12,4% за третий час. Через одну неделю протеинурия уже стала достоверно меньше, тех значений, которые были у нитритных крыс (за первый час 3,75±0,26 мг/мл и 2,94±0,27 мг/мл, р<0,05). На 21,9% стало меньше содержаться белка в моче за второй час и на 18,6% за третий. А в среднем за три часа протеинурия у крыс получавших ацизол и нитрит натрия была на 21,6% меньше.

При введении крысам ацизола с нитритом натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней в условиях водного диуреза также отмечалось достоверное (р<0,05) уменьшение степени протеинурии на 21,6% и 23,2% за первый и второй часы, и суммарно за три часа на 21,1% (р<0,05). Соответственно к концу третей недели уменьшилось и содержание общего белка в плазме крови (р<0,05).

В условиях спонтанного диуреза при трёхнедельных опытах в конце первой недели степень протеинурии не менялась как по отношению к нит-ритным крысам, так и интактным. С конца второй недели содержание белка в моче стало на 14,8% меньше, но лишь только в конце третей недели, когда протеинурия у нитритных крыс достигла 8,48±0,64 мг/мл, а у крыс сочетан-ной модели 6,72±0,5 мг/мл отличие стало достоверным (р<0,05).

Трёхдневное введение ацизола и нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг также способствовало достоверному (р<0,05) уменьшению нитритной протеинурии, которая с 6,35±0,48 мг/мл снизилась до 5,02±0,37 мг/мл.

Если сравнивать полученные данные степени протеинурии в условиях водного и спонтанного диуреза с результатами нормы, то можно отметить, что введение нитрита в дозе 5,0 мг/кг в условиях водного диуреза увеличивает протеинурию в 2,8 раза, а с ацизолом - в 2,2 раза, то есть ацизол снижает протеинурию на 21,5%, а в условиях спонтанного диуреза, соответственно, в 3,1 и в 2,45 раза, то есть ацизол в этом случае снижает на 21,0%. Аналогичные изменения степени протеинурии отмечались и при введении нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг, когда в условиях водного диуреза ослабление было протеинурии было на 21,6%, а при спонтанном - на 21,1%. То есть, ацизол, доза которого не менялась, независимо от того вводили мы нитрит натрия в дозе 5,0 мг/кг три недели или три дня по 20,0 мг/кг, на вызываемую нитритом протеинурию оказывает равносильное влияние.

Таким образом, ацизол, ежедневно вводимый внутрижелудочно крысам вместе с нитритом натрия в дозах 5,0 мг/кг (в течение трёх недель) и 20,0 мг/кг (в течение трёх дней) ослабляет в среднем на 21% степень протеинурию, вызванной введением нитрита, как при водном, так и спонтанном диурезе и, тем самым, способствует более позднему проявлению и меньшей выраженности гипопротеинемии.

При проведении исследований в сочетанной модели введения ацизола и нитрита натрия в течение трёх недель мы также не наблюдали изменения содержания натрия в плазме крови — оно не менялось не только по отношению к результатам нитритных крыс, но и нормы. Что касается обработки натрия на уровне почек, то можно отметить, что в конце первой недели экскреция натрия с мочой оставалась такой же как у нитритных крыс, и близкой к интактному уровню, так как не менялись ни фильтрационная загрузка натрием нефронов, ни его реабсорбция в канальцах почек. Продолжение введения ацизола и нитрита натрия ещё в течение одной недели не оказало заметного влияния на обработку натрия в почках, но при этом появилась тенденция к увеличению экскреции натрия с 10,24±0,85 мкмоль/час/100г (нит-ритные крысы) до 12,18±1,35 мкмоль/час/100г, и такое повышение на 18,9%, что было обусловлено соразмерным увеличением на 19,8% фильтрационного заряда натрия. Канальцевая реабсорбция не менялась. Еще одна неделя ежедневного сочетанного введения и экскреция натрия достоверно (р<0,05) уведичилась на 42,5%, по сравнению с тем, что было у крыс, получавших нитрит натрия. Но при этом выведение натрия с мочой достигло только уровня, полученного у интактных крыс, то есть ацизол не увеличил экскрецию натрия, а лишь только нормализовал, что также было обусловлено повышением фильтрационного заряда натрия. При этом следует отметить, что это увеличение загрузки клубочков натрием всего лишь на 25,9%, а ведь экскреция натрия увеличилась на 42,5%. Следовательно, что-то должно было ещё стимулировать выведение натрия с мочой. Расчёт канальцевой реабсорбции показал, что процесс обратного всасывания натрия приобрёл тенденцию к снижению, что дополнительно и способствовало усилению его экскреции.

При исследовании обмена натрия в условиях, когда ацизол вводился с нитритом натрия в дозе 20,0 мг/кг, ни содержание натрия в плазме крови, ни его фильтрационный заряд и реабсорбция особо не менялись, что соответственно не должно было отразиться на экскреции натрия.

Сочетанное введение ацизола и нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг не оказало заметного влияния на содержание калия в плазме крови, кроме того, что, наблюдаемая в условиях нитритной интоксикации направленность к повышению его содержания, в этом случае имела противоположный вектор, в сторону нормализации. Исследуя состояние обмена калия в почках при одновременном введении ацизола и нитрита натрия можно отметить, что экскреция калия на протяжении всего времени постановки опытов особо не менялась, кроме наметившейся тенденции к увеличению, соответствующей степени повышения фильтрационного заряда, которое было в этом случае. Расчет фильтрационного заряд калия показал его незначительное увеличение. Это было вызвано только ускорением, под влиянием ацизола, клубочковой фильтрации, так как содержание калия в плазме крови, как вторая переменная величина фильтрационного заряда, снижалась, то есть не могла повышать заряд калия.

Если при острой нитритной интоксикации наблюдались калиурез и гиперкалиемия, которая была вызвана гемолизом эритроцитов, о чём мы судили по увеличению содержания свободного гемоглобина в плазме крови, то при сочетанной модели появились тенденции к повышению фильтрационного заряда калия вследствие ускорения клубочковой фильтрации, сопровождающееся достоверным (р<0,05) увеличением экскреции электролита. Именно это и способствовало снижению содержания калия в плазме крови.

Таким образом, ацизол, вводимый крысам вместе с нитритом натрия в дозе 5,0 мг/кг не влияет на содержание натрия в плазме крови. В условиях спонтанного диуреза ацизол оказывает на сниженную, в результате введения нитрита натрия, экскрецию натрия стимулирующее действие, а также увеличивает экскрецию калия и нормализирует его повышенное при острой нитритной интоксикации содержание в плазме крови.

Количество эритроцитов в условиях нитритной интоксикации, как возможная компенсаторная реакция, через одну неделю стало больше, чем у интактных крыс, а при сочетанном введении ацизола и нитрита натрия в дозе 5,0 мг/кг, оставалось на прежнем уровне. Не менялось и гематокритное число. Достоверные же изменения в крови были с гемоглобином (135,64±4,12 г/л - контроль, 148,04±3,65 г/л - опыт, р<0,05) и метгемоглобином (был меньше на 41,2%), а также со свободным гемоглобином в плазме крови, чей уровень был на 33,3% снижен. В конце второй недели, когда количество эритроцитов у нитритных крыс стало на 14,2% меньше, чем в норме, у крыс, которым нитрит натрия вводили вместе с ацизолом, их количество оставалось на

I л уровне 6,32±0,52 х10 /л, что было больше на 15,3% и соответствовало норме. Содержание гемоглобина было достоверно больше (р<0,05), а метгемоглобина - меньше (4,45±0,38% и 2,56±0,17%, р<0,001). Более чем в два раза был снижен и уровень свободного гемоглобина, который при введении крысам нитрита был 1,72±0,14 г/л. При завершении экспериментов достоверные отличия были по все изучаемым параметрам, но более значимо отличались уровни метгемоглобина и свободного гемоглобина в 2,05 и 1,87 раз.

Исследование при введении нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг в течение трёх дней показало, что количество эритроцитов и гематокритного числа имели тенденцию к увеличению, а достоверно было увеличено содержание гемоглобина (116,54±5,46 г/л и 135,72±4,45 г/л, р<0,02) и снижено в 2,5 и 1,6 раза уровни метгемоглобина (р<0,001) и свободного гемоглобина (р<0,001).

Таким образом, ацизол, вводимый крысам вместе с нитритом натрия в дозах 5,0 мг/кг (три недели) и 20,0 мг/кг (три дня) предотвращает снижение в крови содержания гемоглобина, в результате введения нитрита натрия, оказывает стимулирующее действие на количество эритроцитов, а также снижает увеличенные, в результате нитритной интоксикации, уровни метгемоглобина и свободного гемоглобина.

Одновременное введение ацизола на фоне трёхнедельной нитритной интоксикации способствовало тому, что через одну неделю содержание гидроперекисей в плазме крови, которое у нитритных крыс было 3,54±0,28 мкмоль/л стало в 1,6 раз меньше (р<0,05). Уровень малонового диальдегида в эритроцитах также был достоверно (р<0,05) снижен в 1,5 раз (39,34±2,96 мкмоль/л и 27,16±2,55 мкмоль/л). Активность же каталазы в эритроцитах повысилась с 6,64±0,42Ю"4 МЕ/г НЬ до 8,46±0,62х10-4 МЕ/г НЬ (р<0,01). Если сопоставлять соотношений изменений активности каталазы, то можно отметить, что нитрит натрия через одну неделю введение снижает её на 19,6%, а недельное введение ацизола, наоборот, усиливает на 21,4%. При совместном введении ацизола с нитритом натрия активность фермента близка к норме, то есть ацизол снимает угнетающее влияние нитрита натрия на активность каталазы, а нитрит натрия не позволяет проявить стимулирующее действие ацизола. При двухнедельном введении ацизола и нитрита натрия все исследуемые показатели достоверно отличались от результатов нитритных крыс. При завершении же экспериментов в конце третей недели содержание гидроперекисей и малонового диальдегида были в 1,51 и 1,6 раза меньше. Увеличенной с 5,24±0,47 х 10'4 МЕ/г НЬ до 6,7±0,42х 10"4 МЕ/г НЬ (р<0,05) стала и активность каталазы.

Введение крысам ацизола оказывает на изменённые, вследствие введения нитрита натрия в дозе 20,0 мг/кг, значительное действие на процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. Так содержание гидроперекисей снизилось в 2,16 раз, став ближе к норме (1,94±0,21 мкмоль/л - интактные крысы, 5,07±0,47 мкмоль/л - нитритные, 2,34±0,19 мкмоль/л -нитритные+ацизол). Уровень малонового диальдегида, который, после введения нитрита натрия увеличился в 2,2 раза, также стал меньше (р<0,001), а активность каталазы в 1,5 раза стала выше, чем у крыс, получавших нитрит (4,86±0,47х10"4 МЕ/г НЬ и 7,27±0,52х10"4 МЕ/г НЬ, р<0,002).

Таким образом, ацизол, усиливая у крыс с острой и хронической нитритной интоксикацией, угнетённую активность каталазы и, снижая увеличенные содержания гидроперекисей и малонового диальдегида, предотвращает усиление перокисидации и ослабление антиоксидантной защиты, вызванные введением нитрита натрия.

Выявленные нами на крысах линии Вистар изменения функции почек в-условиях водного и спонтанного диуреза, показателей крови и антиоксидантной защиты в условиях нитритной интоксикации, создаваемой введением нитрита натрия в дозах 5,0 мг/кг и 20,0 мг/кг (в пересчёте на азот), а таюке ацизола, вводимого в дозе 30,0 мг/кг ежедневно внутрижелудочно и ацизола на фоне нитритной интоксикации нашли отражение в ниже приведённой патофизиологической схеме.

Схема 1. Изменения функции почек, картины крови и состояния антиоксидантной защиты после введения крысам нитрита натрия, ацизола и ацизола на фоне нитрита натрия